JP3018110B2 - モノクローナル抗体 - Google Patents
モノクローナル抗体Info
- Publication number
- JP3018110B2 JP3018110B2 JP3060259A JP6025991A JP3018110B2 JP 3018110 B2 JP3018110 B2 JP 3018110B2 JP 3060259 A JP3060259 A JP 3060259A JP 6025991 A JP6025991 A JP 6025991A JP 3018110 B2 JP3018110 B2 JP 3018110B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lipoprotein
- antibody
- human
- monoclonal antibody
- apoprotein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、免疫比濁法によるヒト
リポタンパク質（ａ）の定量に有用なモノクローナル抗
体に関する。
リポタンパク質（ａ）の定量に有用なモノクローナル抗
体に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】近年、
心筋梗塞をはじめとする動脈硬化性疾患の危険因子とし
て、血清中のコレステロールを高密度に含有し、特異的
なアポタンパク質と結合したリポタンパク質が挙げられ
ているが、その中でも、霊長類にのみ特異的に存在する
リポタンパク質（ａ）は、極めて重要な動脈硬化性疾患
の危険因子として、研究がなされている。このリポタン
パク質（ａ）は、特異的なアポタンパク質としてアポタ
ンパク質（ａ）を含有するが、これは構造内に血液凝固
・線溶系タンパク質に特徴的なタンパク構造を有してお
り、血栓発生時には、その線溶妨害作用を発揮するのみ
ならず、血栓増幅的に作用を発揮することが明らかにさ
れている。従って、リポタンパク質（ａ）の血中濃度を
測定することは、動脈硬化性疾患を予測する上で、臨床
上極めて重要である。
心筋梗塞をはじめとする動脈硬化性疾患の危険因子とし
て、血清中のコレステロールを高密度に含有し、特異的
なアポタンパク質と結合したリポタンパク質が挙げられ
ているが、その中でも、霊長類にのみ特異的に存在する
リポタンパク質（ａ）は、極めて重要な動脈硬化性疾患
の危険因子として、研究がなされている。このリポタン
パク質（ａ）は、特異的なアポタンパク質としてアポタ
ンパク質（ａ）を含有するが、これは構造内に血液凝固
・線溶系タンパク質に特徴的なタンパク構造を有してお
り、血栓発生時には、その線溶妨害作用を発揮するのみ
ならず、血栓増幅的に作用を発揮することが明らかにさ
れている。従って、リポタンパク質（ａ）の血中濃度を
測定することは、動脈硬化性疾患を予測する上で、臨床
上極めて重要である。
【０００３】従来、血液中リポタンパク質の特徴的測定
法としては、免疫学的測定法が知られているが、中でも
免疫比濁定量法は自動分析装置による自動化測定に適し
ており、多数検体処理が可能であることから日常的な分
析に多く用いられる。免疫比濁定量法は、タンパク質内
の複数の抗原決定部位各々に対し反応する多種類の抗体
が、同時に反応して架橋することにより不溶化し、濁度
として観察されるものである。従って免疫比濁定量法に
は一般的にポリクローナル抗体が適することが知られて
いる。しかしながら、ポリクローナル抗体は取得の際、
その都度抗原を精製することが必要であるのみならず、
取得された抗体の反応性も免疫動物の固体が変わること
により変動するため、病態評価のための重要な血液中リ
ポタンパク質の濃度を常に正確に測定することは、困難
であった。
法としては、免疫学的測定法が知られているが、中でも
免疫比濁定量法は自動分析装置による自動化測定に適し
ており、多数検体処理が可能であることから日常的な分
析に多く用いられる。免疫比濁定量法は、タンパク質内
の複数の抗原決定部位各々に対し反応する多種類の抗体
が、同時に反応して架橋することにより不溶化し、濁度
として観察されるものである。従って免疫比濁定量法に
は一般的にポリクローナル抗体が適することが知られて
いる。しかしながら、ポリクローナル抗体は取得の際、
その都度抗原を精製することが必要であるのみならず、
取得された抗体の反応性も免疫動物の固体が変わること
により変動するため、病態評価のための重要な血液中リ
ポタンパク質の濃度を常に正確に測定することは、困難
であった。
【０００４】さらにアポタンパク質（ａ）は、そのアミ
ノ酸構造が、ヒト血液中に比較的高濃度に存在するタン
パク質の１種であるプラスミノーゲンと極めて類似して
いるため、純粋なレベルまで高度に精製したアポリポプ
ロテイン（ａ）を免疫源として、通常良く用いられる実
験動物より抗血清を得たとしても、その抗血清は必ずヒ
トプラスミノーゲンと交叉反応性を示し、そのような抗
血清を用いた測定系では正確なリポタンパク質（ａ）量
を求めることは不可能である。このような交叉反応性を
示す抗血清から望ましい反応性のみを持つ抗血清を得る
方法としては、交叉反応の原因物質をあらかじめ抗血清
と反応させて不要な反応性を抗血清より除去する免疫吸
収法が知られている。しかしながら、リポタンパク質
（ａ）の特徴的なタンパク成分であるアポタンパク質
（ａ）は、あまりにもプラスミノーゲンと構造的に相同
性が高いために、そのような吸収操作を行なった後で
は、本来的に望ましいリポタンパク質（ａ）との反応性
まで減弱してしまい、免疫比濁法のように比較的短時間
の反応にて対象物を測定するために、強い反応性を示す
抗体が要求される方法にては使用できないか、あるいは
使用できたとしても極めて不満足な低い感度しか得られ
ず、正常なヒトの血中濃度といった低いレベルまで正確
に測定することは不可能であった。
ノ酸構造が、ヒト血液中に比較的高濃度に存在するタン
パク質の１種であるプラスミノーゲンと極めて類似して
いるため、純粋なレベルまで高度に精製したアポリポプ
ロテイン（ａ）を免疫源として、通常良く用いられる実
験動物より抗血清を得たとしても、その抗血清は必ずヒ
トプラスミノーゲンと交叉反応性を示し、そのような抗
血清を用いた測定系では正確なリポタンパク質（ａ）量
を求めることは不可能である。このような交叉反応性を
示す抗血清から望ましい反応性のみを持つ抗血清を得る
方法としては、交叉反応の原因物質をあらかじめ抗血清
と反応させて不要な反応性を抗血清より除去する免疫吸
収法が知られている。しかしながら、リポタンパク質
（ａ）の特徴的なタンパク成分であるアポタンパク質
（ａ）は、あまりにもプラスミノーゲンと構造的に相同
性が高いために、そのような吸収操作を行なった後で
は、本来的に望ましいリポタンパク質（ａ）との反応性
まで減弱してしまい、免疫比濁法のように比較的短時間
の反応にて対象物を測定するために、強い反応性を示す
抗体が要求される方法にては使用できないか、あるいは
使用できたとしても極めて不満足な低い感度しか得られ
ず、正常なヒトの血中濃度といった低いレベルまで正確
に測定することは不可能であった。
【０００５】従って、リポタンパク質（ａ）の測定系に
おいてはプラスミノーゲンと交叉反応性を示さない、特
異性の高いモノクローナル抗体を使用した、正確でかつ
一定の測定値を与え得る再現性の高い方法が望まれてき
た。しかしながら、一般的にいって、モノクローナル抗
体は、反応の相手となる抗原の１種類の抗原決定部位を
特異的に認識するために、反応の結果生じる抗原−抗体
結合物は完全に反応を完結させたとしても、抗体１分子
と抗原２分子の結合物であり、様々な抗原決定部位を認
識する抗体の集合体であるポリクローナル抗体によって
形成され得る複数分子の抗体とそれに対応する抗原の結
合物の大きさに較べて著しく小さく、従って通常の比濁
法によっては、モノクローナル抗体と抗原の結合物は検
出され得ず、１種類のモノクローナル抗体にて免疫比濁
法を行なうことは困難であった。そのために、モノクロ
ーナル抗体を用いて免疫比濁法を行なうためには、少な
くとも２種以上の異なる抗原決定部位を認識する抗体を
混合して使用する必要があるが、前述の如く、アポタン
パク質（ａ）はプラスミノーゲンと構造的に極めて似通
っているために、特異的な抗原決定部位は極めて限定さ
れるものと考えられ、分子量的に大きな抗原−抗体結合
物を形成するために協同して作用する複数個の特異的な
モノクローナル抗体を得ることは極めて困難である。従
って、従来の技術によっては、モノクローナル抗体を使
用するヒトリポタンパク質（ａ）の免疫比濁法による測
定は困難とされており、そのような方法に使用できる抗
体の存在も全く知られていなかった。
おいてはプラスミノーゲンと交叉反応性を示さない、特
異性の高いモノクローナル抗体を使用した、正確でかつ
一定の測定値を与え得る再現性の高い方法が望まれてき
た。しかしながら、一般的にいって、モノクローナル抗
体は、反応の相手となる抗原の１種類の抗原決定部位を
特異的に認識するために、反応の結果生じる抗原−抗体
結合物は完全に反応を完結させたとしても、抗体１分子
と抗原２分子の結合物であり、様々な抗原決定部位を認
識する抗体の集合体であるポリクローナル抗体によって
形成され得る複数分子の抗体とそれに対応する抗原の結
合物の大きさに較べて著しく小さく、従って通常の比濁
法によっては、モノクローナル抗体と抗原の結合物は検
出され得ず、１種類のモノクローナル抗体にて免疫比濁
法を行なうことは困難であった。そのために、モノクロ
ーナル抗体を用いて免疫比濁法を行なうためには、少な
くとも２種以上の異なる抗原決定部位を認識する抗体を
混合して使用する必要があるが、前述の如く、アポタン
パク質（ａ）はプラスミノーゲンと構造的に極めて似通
っているために、特異的な抗原決定部位は極めて限定さ
れるものと考えられ、分子量的に大きな抗原−抗体結合
物を形成するために協同して作用する複数個の特異的な
モノクローナル抗体を得ることは極めて困難である。従
って、従来の技術によっては、モノクローナル抗体を使
用するヒトリポタンパク質（ａ）の免疫比濁法による測
定は困難とされており、そのような方法に使用できる抗
体の存在も全く知られていなかった。
【０００６】
【課題を解決するための手段】斯かる実情において、本
発明者は、ヒトリポタンパク質（ａ）に対する多くのモ
ノクローナル抗体を作成し、その性質を、通常よく用い
られる酵素免疫法の他に、免疫比濁法を用いて鋭意検討
した結果、その中の数種のモノクローナル抗体が、それ
ぞれ単独でも、血清中のヒトリポタンパク質（ａ）と特
異的に反応し、一般の分光光度計で充分検出可能な濁度
を呈する結合物を与えることを見出し、本発明を完成し
た。
発明者は、ヒトリポタンパク質（ａ）に対する多くのモ
ノクローナル抗体を作成し、その性質を、通常よく用い
られる酵素免疫法の他に、免疫比濁法を用いて鋭意検討
した結果、その中の数種のモノクローナル抗体が、それ
ぞれ単独でも、血清中のヒトリポタンパク質（ａ）と特
異的に反応し、一般の分光光度計で充分検出可能な濁度
を呈する結合物を与えることを見出し、本発明を完成し
た。
【０００７】すなわち、本発明は、 微工研菌寄第１２
１１４として寄託されたハイブリドーマから調製され、
以下の（Ａ）〜（Ｃ）の性質を有するモノクローナル抗
体を提供するものである。 （Ａ）ＩｇＧクラスに属する。 （Ｂ）ヒトリポタンパク質（ａ）と反応し、ヒトプラス
ミノーゲン及びアポタンパク質Ｂに免疫交差反応性を有
さない。 （Ｃ）単独でヒトリポタンパク質（ａ）の免疫比濁定量
法に使用可能である。
１１４として寄託されたハイブリドーマから調製され、
以下の（Ａ）〜（Ｃ）の性質を有するモノクローナル抗
体を提供するものである。 （Ａ）ＩｇＧクラスに属する。 （Ｂ）ヒトリポタンパク質（ａ）と反応し、ヒトプラス
ミノーゲン及びアポタンパク質Ｂに免疫交差反応性を有
さない。 （Ｃ）単独でヒトリポタンパク質（ａ）の免疫比濁定量
法に使用可能である。
【０００８】本発明のモノクローナル抗体は、ヒトリポ
タンパク質（ａ）に特異的な反応性を有する、すなわち
アポタンパク質Ｂ及びヒトプラスミノーゲンに交叉反応
性を示さず、ヒトリポタンパク質（ａ）に特異的な結合
を有することを最大の特徴とし、かかる抗体には、１種
類以上でヒトリポタンパク質（ａ）と沈降ないしは比濁
を呈するタイプの抗体が包含される。
タンパク質（ａ）に特異的な反応性を有する、すなわち
アポタンパク質Ｂ及びヒトプラスミノーゲンに交叉反応
性を示さず、ヒトリポタンパク質（ａ）に特異的な結合
を有することを最大の特徴とし、かかる抗体には、１種
類以上でヒトリポタンパク質（ａ）と沈降ないしは比濁
を呈するタイプの抗体が包含される。
【０００９】以下、本発明抗体の製造法につき詳述す
る。本発明抗体は、ヒトリポタンパク質（ａ）を免疫抗
原として使用して、通常の製造法に準じて製造すること
ができる。上記方法において用いられる免疫抗原として
のヒトリポタンパク質（ａ）は、本発明者らによりヒト
血清から分離精製されたリポタンパク質である。本発明
抗体の製造においては、必ずしもリポタンパク質（ａ）
の精製標品を用いる必要はなく、これを含む粗製品を使
用することも可能である。本発明抗体の製造方法として
は、より具体的には、例えば上記免疫抗原としてのリポ
タンパク質（ａ）で免疫した哺乳動物の形質細胞を、哺
乳動物の形質細胞腫細胞と融合させてハイブリドーマ
（hybridoma）を作成し、これより上記リポタンパク質
（ａ）を認識する抗体を産生するクローンを選択し、該
クローンより目的とする抗体（モノクローナル抗体）を
得る方法を好ましい方法として例示することができる。
上記方法において、免疫抗原、すなわちリポタンパク質
（ａ）で免疫される哺乳動物としては、特に限定されな
いが、細胞融合しようとする形質細胞腫細胞との適合性
を考慮して選択されるのが好ましく、一般には、マウ
ス、ラット等が有利に使用される。
る。本発明抗体は、ヒトリポタンパク質（ａ）を免疫抗
原として使用して、通常の製造法に準じて製造すること
ができる。上記方法において用いられる免疫抗原として
のヒトリポタンパク質（ａ）は、本発明者らによりヒト
血清から分離精製されたリポタンパク質である。本発明
抗体の製造においては、必ずしもリポタンパク質（ａ）
の精製標品を用いる必要はなく、これを含む粗製品を使
用することも可能である。本発明抗体の製造方法として
は、より具体的には、例えば上記免疫抗原としてのリポ
タンパク質（ａ）で免疫した哺乳動物の形質細胞を、哺
乳動物の形質細胞腫細胞と融合させてハイブリドーマ
（hybridoma）を作成し、これより上記リポタンパク質
（ａ）を認識する抗体を産生するクローンを選択し、該
クローンより目的とする抗体（モノクローナル抗体）を
得る方法を好ましい方法として例示することができる。
上記方法において、免疫抗原、すなわちリポタンパク質
（ａ）で免疫される哺乳動物としては、特に限定されな
いが、細胞融合しようとする形質細胞腫細胞との適合性
を考慮して選択されるのが好ましく、一般には、マウ
ス、ラット等が有利に使用される。
【００１０】免疫は一般的方法により、例えば上記リポ
タンパク質（ａ）を、哺乳動物に静脈内投与もしくは腹
腔内注射等により投与することにより行なわれる。より
具体的には、リポタンパク質（ａ）をPBSや生理食塩等
で適当な濃度に希釈し、これを所望により通常のアジュ
バンドを併用して、動物に２〜21日毎に数回投与し、総
投与量が１〜100μｇ／動物程度になるようにするのが
好ましい。また、上記投与に際しては通常の担体（シュ
レッバー）を採用することもできる。免疫細胞として
は、上記リポタンパク質（ａ）の最終投与の約３日後に
摘出した脾細胞を使用するのが好ましい。
タンパク質（ａ）を、哺乳動物に静脈内投与もしくは腹
腔内注射等により投与することにより行なわれる。より
具体的には、リポタンパク質（ａ）をPBSや生理食塩等
で適当な濃度に希釈し、これを所望により通常のアジュ
バンドを併用して、動物に２〜21日毎に数回投与し、総
投与量が１〜100μｇ／動物程度になるようにするのが
好ましい。また、上記投与に際しては通常の担体（シュ
レッバー）を採用することもできる。免疫細胞として
は、上記リポタンパク質（ａ）の最終投与の約３日後に
摘出した脾細胞を使用するのが好ましい。
【００１１】上記細胞と融合される他方の親細胞として
の哺乳動物の形質細胞腫細胞としては、すでに公知の種
々の細胞株、例えばｐ３（ｐ３／ｘ63−Ag８）[Nature,
256, 495-497(1975)]、ｐ３−Ｕ１[Current Topics in
Microbiology and Immunology, 81，１−７(1987)]、N
S−１[Eur. J. Immunol.,６，511-519(1976)]、MPC-11
[Cell,８，405-415(1976)]、SP２／０[Nature, 276，26
9-270(1978)]、FO[J. Immunol., Meth., 35,１−21(198
0)]、ｘ63. ６．５．３．[J. Immunol., 123, 1548-155
0(1979)]、S194[J. Exp. Med., 148, 313-323(1978)]等
や、ラットにおけるR210[Nature, 277, 131-133(1979)]
等の骨髄腫細胞等が使用される。
の哺乳動物の形質細胞腫細胞としては、すでに公知の種
々の細胞株、例えばｐ３（ｐ３／ｘ63−Ag８）[Nature,
256, 495-497(1975)]、ｐ３−Ｕ１[Current Topics in
Microbiology and Immunology, 81，１−７(1987)]、N
S−１[Eur. J. Immunol.,６，511-519(1976)]、MPC-11
[Cell,８，405-415(1976)]、SP２／０[Nature, 276，26
9-270(1978)]、FO[J. Immunol., Meth., 35,１−21(198
0)]、ｘ63. ６．５．３．[J. Immunol., 123, 1548-155
0(1979)]、S194[J. Exp. Med., 148, 313-323(1978)]等
や、ラットにおけるR210[Nature, 277, 131-133(1979)]
等の骨髄腫細胞等が使用される。
【００１２】上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との融合反
応は、基本的には公知の方法、例えばマイルスタイン等
（Milstein et al.）の方法[Methods Enzymeol., 73, 3
-46(1981)]等に準じて行ない得る。より具体的には上記
融合反応は、例えば融合促進剤の存在下に通常の栄養培
地中で行なわれる。融合促進剤としては通常用いられる
もの、例えばポリエチレングリコール（PEG）、センダ
イウィルス（HVJ）等が使用され、さらに所望により融
合効率を高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤
を添加使用することもできる。免疫細胞と形質腫細胞と
の使用比は、通常の方法と変わりがなく、例えば形質細
胞腫細胞に対し、免疫細胞を約１〜10倍程度用いれば良
い。上記融合時の培地としては、例えば上記形質細胞腫
細胞株の増殖に使用されるRPMI 1640 培地、MEM培地、
その他この種の細胞培養に使用される通常の各種培地を
利用でき、通常は牛胎児血清（FCS）等の血清補液を除
いておくのが好ましい。融合は、上記免疫細胞と形質細
胞腫細胞との所定量を上記培地内でよく融合し、予め37
℃程度に加温したPEG溶液、例えば平均分子量1000〜600
0程度のものを、通常培地に30〜60％（W/V）の程度で混
ぜ合わせることにより行なわれる。該HAT培地での培養
は、目的とするハイブリドーマ以外の細胞（未融合細胞
等）が死滅するのに充分な時間、通常数日〜数週間行な
えば良い。かくして得られるハイブリドーマは、通常の
限界希釈法に従い、目的とする抗体の産生株の検索及び
単一クローン化が行なわれる。
応は、基本的には公知の方法、例えばマイルスタイン等
（Milstein et al.）の方法[Methods Enzymeol., 73, 3
-46(1981)]等に準じて行ない得る。より具体的には上記
融合反応は、例えば融合促進剤の存在下に通常の栄養培
地中で行なわれる。融合促進剤としては通常用いられる
もの、例えばポリエチレングリコール（PEG）、センダ
イウィルス（HVJ）等が使用され、さらに所望により融
合効率を高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤
を添加使用することもできる。免疫細胞と形質腫細胞と
の使用比は、通常の方法と変わりがなく、例えば形質細
胞腫細胞に対し、免疫細胞を約１〜10倍程度用いれば良
い。上記融合時の培地としては、例えば上記形質細胞腫
細胞株の増殖に使用されるRPMI 1640 培地、MEM培地、
その他この種の細胞培養に使用される通常の各種培地を
利用でき、通常は牛胎児血清（FCS）等の血清補液を除
いておくのが好ましい。融合は、上記免疫細胞と形質細
胞腫細胞との所定量を上記培地内でよく融合し、予め37
℃程度に加温したPEG溶液、例えば平均分子量1000〜600
0程度のものを、通常培地に30〜60％（W/V）の程度で混
ぜ合わせることにより行なわれる。該HAT培地での培養
は、目的とするハイブリドーマ以外の細胞（未融合細胞
等）が死滅するのに充分な時間、通常数日〜数週間行な
えば良い。かくして得られるハイブリドーマは、通常の
限界希釈法に従い、目的とする抗体の産生株の検索及び
単一クローン化が行なわれる。
【００１３】該産生株の検索は、例えばELISA法[Engval
l,E., Methods Enzymol., 70, 419-439(1980)]、プラー
ク法、スポット法、凝集反応法、オクタロニー（Ouchte
rlony）法、ラジオイムノアッセイ（RIA）法等の一般に
抗体の検出に用いられている種々の方法[「ハイブリド
ーマ法とモノクローナル抗体」、（株）Ｒ＆Ｄプランニ
ング発行、pp30〜53、昭和57年３月５日]に従って行な
われる。尚、上記検索における抗原としては前記リポタ
ンパク質（ａ）を使用するのが好ましい。かくして得ら
れる所望のモノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マは、通常の培地で継代培養でき、また液体窒素中で長
期間保存可能である。
l,E., Methods Enzymol., 70, 419-439(1980)]、プラー
ク法、スポット法、凝集反応法、オクタロニー（Ouchte
rlony）法、ラジオイムノアッセイ（RIA）法等の一般に
抗体の検出に用いられている種々の方法[「ハイブリド
ーマ法とモノクローナル抗体」、（株）Ｒ＆Ｄプランニ
ング発行、pp30〜53、昭和57年３月５日]に従って行な
われる。尚、上記検索における抗原としては前記リポタ
ンパク質（ａ）を使用するのが好ましい。かくして得ら
れる所望のモノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マは、通常の培地で継代培養でき、また液体窒素中で長
期間保存可能である。
【００１４】該ハイブリドーマからの本発明モノクロー
ナル抗体の採取は、該ハイブリドーマを常法に従って培
養し、その培養上清として、あるいはハイブリドーマを
これと適合性のある哺乳動物に投与して増殖させ、その
腹水として得る方法等が採用される。前者の方法は、高
純度の抗体を得るのに適しており、後者の方法は、抗体
の大量生産に適している。
ナル抗体の採取は、該ハイブリドーマを常法に従って培
養し、その培養上清として、あるいはハイブリドーマを
これと適合性のある哺乳動物に投与して増殖させ、その
腹水として得る方法等が採用される。前者の方法は、高
純度の抗体を得るのに適しており、後者の方法は、抗体
の大量生産に適している。
【００１５】さらに、上記により得られる抗体は、これ
を利用して塩折法、ゲル濾過法、アフィニティークロマ
トグラフィー等の通常の精製手段により精製することも
できる。
を利用して塩折法、ゲル濾過法、アフィニティークロマ
トグラフィー等の通常の精製手段により精製することも
できる。
【００１６】斯くして得られるモノクローナル抗体は、
酵素免疫測定法（EIA）、ロケット法、免疫比濁定量法
等の通常の免疫学的手段により、高感度、高精度にかつ
高い特異性を持ってヒトリポタンパク質（ａ）を簡易に
測定することができる。かかる本発明抗体を利用した測
定系の設定、並びにその改変ないし応用は、当業者にと
り自明である。
酵素免疫測定法（EIA）、ロケット法、免疫比濁定量法
等の通常の免疫学的手段により、高感度、高精度にかつ
高い特異性を持ってヒトリポタンパク質（ａ）を簡易に
測定することができる。かかる本発明抗体を利用した測
定系の設定、並びにその改変ないし応用は、当業者にと
り自明である。
【００１７】
【発明の効果】本発明のモノクローナル抗体は、ヒトリ
ポタンパク質（ａ）と特異的に反応し、ヒトプラスミノ
ーゲン及びアポタンパク質Ｂに免疫交叉反応性を有さな
いので、これを用いる免疫学的測定手段、就中免疫比濁
定量法によって臨床サンプル中のヒトリポタンパク質
（ａ）を測定し、各種心疾患のスクリーニング、診断及
び病態把握を行なうことができる。
ポタンパク質（ａ）と特異的に反応し、ヒトプラスミノ
ーゲン及びアポタンパク質Ｂに免疫交叉反応性を有さな
いので、これを用いる免疫学的測定手段、就中免疫比濁
定量法によって臨床サンプル中のヒトリポタンパク質
（ａ）を測定し、各種心疾患のスクリーニング、診断及
び病態把握を行なうことができる。
【００１８】
【実施例】次に実施例を挙げて説明する。
【００１９】実施例１ 抗原の調製 実験に供されるまで−20℃以下に保存された凍血血清を
室温にて溶解し、リポタンパク質（ａ）を多く含む分画
（密度1.06-1.12kg/ｌ）を超遠心法にて分離した。つい
で、この分画を４℃において寸法が100×2.6cmのセファ
ロースCL-6Bカラムにアプライし、トリス0.1M, NaCl 0.
15M, pH7.4のバッファーにて溶出した。溶出の条件は１
時間当り８mlとし、回収は５mlの分画毎に行なった。溶
出は、高分子量の物質から行なわれるために、本条件下
では280nmの溶出液の吸光度を観察すると、リポタンパ
ク質（ａ）、LDL（低比重リポタンパク質）、HDL（高比
重リポタンパク質）の順にピークが観察された。そのた
め、リポタンパク質（ａ）に相当する最初のピークの溶
出液を分画毎にポリアクリルアミド電気泳動法を用いて
その組成を調べ、LDLの混入が認められない分画を回収
し、抗原溶液とした。
室温にて溶解し、リポタンパク質（ａ）を多く含む分画
（密度1.06-1.12kg/ｌ）を超遠心法にて分離した。つい
で、この分画を４℃において寸法が100×2.6cmのセファ
ロースCL-6Bカラムにアプライし、トリス0.1M, NaCl 0.
15M, pH7.4のバッファーにて溶出した。溶出の条件は１
時間当り８mlとし、回収は５mlの分画毎に行なった。溶
出は、高分子量の物質から行なわれるために、本条件下
では280nmの溶出液の吸光度を観察すると、リポタンパ
ク質（ａ）、LDL（低比重リポタンパク質）、HDL（高比
重リポタンパク質）の順にピークが観察された。そのた
め、リポタンパク質（ａ）に相当する最初のピークの溶
出液を分画毎にポリアクリルアミド電気泳動法を用いて
その組成を調べ、LDLの混入が認められない分画を回収
し、抗原溶液とした。
【００２０】実施例２ 抗ヒトリポタンパク質（ａ）
モノクローナル抗体の調製 実施例１に示した方法で得られた抗原溶液のタンパク質
濃度をウシアルブミン溶液をスタンダードとしてローリ
ー法にて測定し、タンパク質濃度として10μｇに相当す
る溶液を100μｌの完全フロイントアジュバンドとよく
混和後、BALB/cマウスの腹腔に注射した。ブースター免
疫としては、同じく10μｇに相当する溶液を100μｌの
不完全フロイントアジュバンドとよく混和後、最初の免
疫から２週間間隔で２回、腹腔内に投与した。最終免疫
から１週間後に同じく10μｌに相当する抗原溶液を生理
食塩水に混ぜ、尾静脈に注射し、３日後脾臓を摘出し、
よくほぐした後、培地（RPMI 1640）でよく洗浄した。
この洗浄した脾細胞2.5×10 8個と、同様に培地でよく洗
浄したマウスSP２／０ Ag14系のミエローマ細胞2.5×10
7個とを混合し、培地に対し50 w/v％PEGを0.25ml徐々に
滴下し、１分間混和した。その後GKN培地８mlを徐々に
加えてPEGを希釈し、反応を停止した。1500rpmで５分間
遠心し、細胞を集め、培地２mlで１回洗浄した。30mlの
HAT培地に細胞を懸濁し、96穴マイクロプレートの各ウ
エルに0.1mlずつ分注し、８％CO2の存在下、37℃でイン
キュベートした。10日間インキュベートした後、各ウエ
ルの培養上清をHT培地（HAT培地からアミノプテリンを
除いたもの）0.2mlで置換した。この操作を３回繰り返
し、最終的な培養上清について、上清に含まれる抗体の
性質を解析した。かかる解析においては、免疫に用いた
ヒトリポタンパク質（ａ）を含む抗原溶液を適宜希釈し
てマイクロプレートに分注し、ウエルの表面に吸着さ
せ、培養上清を加えてインキュベートした後にペルオキ
シダーゼ標識をした抗マウスIgGを加えて、ウエル内に
残存するペルオキシダーゼ活性を指標として抗体活性を
評価した。さらに、プラスミノーゲン及びヒト血清から
常法にて得られたLDLをマイクロプレートに分注してウ
エルの表面に吸着させ、前述のヒトリポタンパク質
（ａ）に対する抗体活性の評価方法と同じ要領にてそれ
ぞれの成分に対する抗体活性を評価した。評価の結果か
ら、ヒトリポタンパク質（ａ）とのみ反応するウエルを
選択し、そのウェルの培養液について、さらに２度限界
希釈法と抗体活性の評価によってクローニングを繰り返
し、最終的にヒトリポタンパク質（ａ）に対する特異抗
体を産する６クローンを得た。次に、これらのクローン
を、プリスタンで処理したBALB/cマウスの腹腔内に注入
し、10〜20日後に数度に恒って腹水を採取した。得られ
た抗体について、そのクラス及びサブクラスを決定し、
表１に示した。採取した腹水から、硫安分画法及びDEAE
セファロースによるイオンクロマトグラフィー法によっ
て粗精製IgG分画を得、それぞれのIgGについて、免疫比
濁法の可否を調べた。具体的には、50mg／dl相当のヒト
リポタンパク質（ａ）を含む血清20μｌを、３％PEG,
0.15M NaCl,３％デキストランを含むpH7.0の10mMリン酸
緩衝液300μｌと混和後５分間インキュベートを行ない3
40nmにおける吸光度を測定した後に、１mg／mlに調整し
た粗精製IgG分画150μｌを加えて、さらに５分間インキ
ュベーションを行ない、同じく340nmにてその吸光度を
測定した。この最終的な吸光度より、反応液量にて補正
したIgG分画添加前の吸光度を差し引き、ヒトリポタン
パク質（ａ）と抗体の反応によって生じる吸光度の増加
を算出した。得られた結果を表２に示すが、上記の実験
系においてヒトリポタンパク質（ａ）を含む血清試料と
の反応により、特徴的な吸光度の増加を示した数種のク
ローンを選択した。この中のクローンNo.28205のモノク
ローナル抗体は、工業技術院微生物工業技術研究所に、
微工研菌寄第 12114（FERM P-12114）として寄託されて
いる。
モノクローナル抗体の調製 実施例１に示した方法で得られた抗原溶液のタンパク質
濃度をウシアルブミン溶液をスタンダードとしてローリ
ー法にて測定し、タンパク質濃度として10μｇに相当す
る溶液を100μｌの完全フロイントアジュバンドとよく
混和後、BALB/cマウスの腹腔に注射した。ブースター免
疫としては、同じく10μｇに相当する溶液を100μｌの
不完全フロイントアジュバンドとよく混和後、最初の免
疫から２週間間隔で２回、腹腔内に投与した。最終免疫
から１週間後に同じく10μｌに相当する抗原溶液を生理
食塩水に混ぜ、尾静脈に注射し、３日後脾臓を摘出し、
よくほぐした後、培地（RPMI 1640）でよく洗浄した。
この洗浄した脾細胞2.5×10 8個と、同様に培地でよく洗
浄したマウスSP２／０ Ag14系のミエローマ細胞2.5×10
7個とを混合し、培地に対し50 w/v％PEGを0.25ml徐々に
滴下し、１分間混和した。その後GKN培地８mlを徐々に
加えてPEGを希釈し、反応を停止した。1500rpmで５分間
遠心し、細胞を集め、培地２mlで１回洗浄した。30mlの
HAT培地に細胞を懸濁し、96穴マイクロプレートの各ウ
エルに0.1mlずつ分注し、８％CO2の存在下、37℃でイン
キュベートした。10日間インキュベートした後、各ウエ
ルの培養上清をHT培地（HAT培地からアミノプテリンを
除いたもの）0.2mlで置換した。この操作を３回繰り返
し、最終的な培養上清について、上清に含まれる抗体の
性質を解析した。かかる解析においては、免疫に用いた
ヒトリポタンパク質（ａ）を含む抗原溶液を適宜希釈し
てマイクロプレートに分注し、ウエルの表面に吸着さ
せ、培養上清を加えてインキュベートした後にペルオキ
シダーゼ標識をした抗マウスIgGを加えて、ウエル内に
残存するペルオキシダーゼ活性を指標として抗体活性を
評価した。さらに、プラスミノーゲン及びヒト血清から
常法にて得られたLDLをマイクロプレートに分注してウ
エルの表面に吸着させ、前述のヒトリポタンパク質
（ａ）に対する抗体活性の評価方法と同じ要領にてそれ
ぞれの成分に対する抗体活性を評価した。評価の結果か
ら、ヒトリポタンパク質（ａ）とのみ反応するウエルを
選択し、そのウェルの培養液について、さらに２度限界
希釈法と抗体活性の評価によってクローニングを繰り返
し、最終的にヒトリポタンパク質（ａ）に対する特異抗
体を産する６クローンを得た。次に、これらのクローン
を、プリスタンで処理したBALB/cマウスの腹腔内に注入
し、10〜20日後に数度に恒って腹水を採取した。得られ
た抗体について、そのクラス及びサブクラスを決定し、
表１に示した。採取した腹水から、硫安分画法及びDEAE
セファロースによるイオンクロマトグラフィー法によっ
て粗精製IgG分画を得、それぞれのIgGについて、免疫比
濁法の可否を調べた。具体的には、50mg／dl相当のヒト
リポタンパク質（ａ）を含む血清20μｌを、３％PEG,
0.15M NaCl,３％デキストランを含むpH7.0の10mMリン酸
緩衝液300μｌと混和後５分間インキュベートを行ない3
40nmにおける吸光度を測定した後に、１mg／mlに調整し
た粗精製IgG分画150μｌを加えて、さらに５分間インキ
ュベーションを行ない、同じく340nmにてその吸光度を
測定した。この最終的な吸光度より、反応液量にて補正
したIgG分画添加前の吸光度を差し引き、ヒトリポタン
パク質（ａ）と抗体の反応によって生じる吸光度の増加
を算出した。得られた結果を表２に示すが、上記の実験
系においてヒトリポタンパク質（ａ）を含む血清試料と
の反応により、特徴的な吸光度の増加を示した数種のク
ローンを選択した。この中のクローンNo.28205のモノク
ローナル抗体は、工業技術院微生物工業技術研究所に、
微工研菌寄第 12114（FERM P-12114）として寄託されて
いる。
【００２１】
【表１】
【００２２】
【表２】
【００２３】実施例３ モノクローナル抗体のアポタ
ンパク質（ａ）に対する特異性の確認 スクリーニングの結果得られたモノクローナル抗体のア
ポタンパク質（ａ）に対する特異的な反応性を確認する
ために、ウエスタンブロッティング法にてアポタンパク
質（ａ）、アポタンパク質Ｂ及びヒトプラスミノーゲン
に対する反応性を検討した。１mMメルカプトエタノール
の存在下SDS化したヒトリポタンパク質（ａ）を含む血
清、SDS化した精製LDL及びSDS化した市販のプラスミノ
ーゲンをそれぞれアポタンパク質（ａ）、アポタンパク
質Ｂ及びプラスミノーゲンの検討用試料とし、４〜20％
SDS-グラジエントポリアクリルアミド電気泳動に供し
た。泳動終了後、転写装置を用いてゲル中のタンパク質
をニトロセルロース膜に、20Ｖ８時間の条件にて転写し
た。１％スキムミルクに浸して膜のブロッキングを行な
った後に、膜の洗浄を行ない約14.2mg／dlに調整した抗
体溶液に膜を浸し抗原−抗体反応を行なった。次いで、
膜をよく洗浄した後に２次抗体としてペルオキシダーゼ
標識をした抗マウスIgG抗体溶液を注ぎ、反応を行な
い、３，３′−ジアミノベンチジンを基質として発色さ
せた。結果を図１に示すが、No. 28205はヒトリポタン
パク質（ａ）を含む血清を流したレーン上のアポタンパ
ク質（ａ）の分子量に相当するタンパク質のみと反応
し、LDL及びプラスミノーゲンを流したレーンにては全
く染色されたバンドは観察されなかった。この結果よ
り、No.28205の抗体がアポタンパク質（ａ）に対して特
異的な抗体活性を示すことが明らかとなった。
ンパク質（ａ）に対する特異性の確認 スクリーニングの結果得られたモノクローナル抗体のア
ポタンパク質（ａ）に対する特異的な反応性を確認する
ために、ウエスタンブロッティング法にてアポタンパク
質（ａ）、アポタンパク質Ｂ及びヒトプラスミノーゲン
に対する反応性を検討した。１mMメルカプトエタノール
の存在下SDS化したヒトリポタンパク質（ａ）を含む血
清、SDS化した精製LDL及びSDS化した市販のプラスミノ
ーゲンをそれぞれアポタンパク質（ａ）、アポタンパク
質Ｂ及びプラスミノーゲンの検討用試料とし、４〜20％
SDS-グラジエントポリアクリルアミド電気泳動に供し
た。泳動終了後、転写装置を用いてゲル中のタンパク質
をニトロセルロース膜に、20Ｖ８時間の条件にて転写し
た。１％スキムミルクに浸して膜のブロッキングを行な
った後に、膜の洗浄を行ない約14.2mg／dlに調整した抗
体溶液に膜を浸し抗原−抗体反応を行なった。次いで、
膜をよく洗浄した後に２次抗体としてペルオキシダーゼ
標識をした抗マウスIgG抗体溶液を注ぎ、反応を行な
い、３，３′−ジアミノベンチジンを基質として発色さ
せた。結果を図１に示すが、No. 28205はヒトリポタン
パク質（ａ）を含む血清を流したレーン上のアポタンパ
ク質（ａ）の分子量に相当するタンパク質のみと反応
し、LDL及びプラスミノーゲンを流したレーンにては全
く染色されたバンドは観察されなかった。この結果よ
り、No.28205の抗体がアポタンパク質（ａ）に対して特
異的な抗体活性を示すことが明らかとなった。
【００２４】実施例４ 定量性の確認 ヒトリポタンパク質（ａ）が上昇した被検血清を生理食
塩水で希釈し、希釈系列を作成した。この各々の希釈系
列の被検試料20μｌを３％PEG, 0.15M NaCl,３％デキス
トランを含むpH7.0の10mMリン酸緩衝液350μｌと混和後
５分間インキュベートを行ない、340nmにおける吸光度
を測定した後に0.6mg/dlに調整した粗精製IgG溶液50μ
ｌを加えて、さらに５分間インキュベートし、吸光度を
測定した。この最終的な吸光度より、反応液量にて補正
したIgG溶液添加前の吸光度を差し引き、ヒトリポタン
パク質（ａ）濃度に対応する吸光度を求め、理論的な試
料のヒトリポタンパク質（ａ）濃度に対してその吸光度
をプロットしたところ、良好な検量線が得られた。検量
線は図２のとおりであり、この結果より、本発明による
特異抗体が、ヒトリポタンパク質（ａ）の免疫比濁法に
おいて、単独にて使用でき得ることが明らかである。
塩水で希釈し、希釈系列を作成した。この各々の希釈系
列の被検試料20μｌを３％PEG, 0.15M NaCl,３％デキス
トランを含むpH7.0の10mMリン酸緩衝液350μｌと混和後
５分間インキュベートを行ない、340nmにおける吸光度
を測定した後に0.6mg/dlに調整した粗精製IgG溶液50μ
ｌを加えて、さらに５分間インキュベートし、吸光度を
測定した。この最終的な吸光度より、反応液量にて補正
したIgG溶液添加前の吸光度を差し引き、ヒトリポタン
パク質（ａ）濃度に対応する吸光度を求め、理論的な試
料のヒトリポタンパク質（ａ）濃度に対してその吸光度
をプロットしたところ、良好な検量線が得られた。検量
線は図２のとおりであり、この結果より、本発明による
特異抗体が、ヒトリポタンパク質（ａ）の免疫比濁法に
おいて、単独にて使用でき得ることが明らかである。
【００２５】
【図１】 No. 28205のモノクローナル抗体のウエスタ
ンブロッティング法によるアポタンパク質（ａ）、アポ
タンパク質Ｂ及びヒトプラスミノーゲンに対する反応性
を示す。
ンブロッティング法によるアポタンパク質（ａ）、アポ
タンパク質Ｂ及びヒトプラスミノーゲンに対する反応性
を示す。
【図２】 No. 28205のモノクローナル抗体を用いてヒ
トリポタンパク質（ａ）を測定するときの検量線を示
す。
トリポタンパク質（ａ）を測定するときの検量線を示
す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91） (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 21/00 - 21/08 A61K 39/395 C12N 5/00 - 5/28 C12N 15/00 - 15/90 G01N 33/53 G01N 33/577 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】 微工研菌寄第１２１１４として寄託され
たハイブリドーマから調製され、以下の（Ａ）〜（Ｃ）
の性質を有するモノクローナル抗体。 （Ａ）ＩｇＧクラスに属する。 （Ｂ）ヒトリポタンパク質（ａ）と反応し、ヒトプラス
ミノーゲン及びアポタンパク質Ｂに免疫交差反応性を有
さない。 （Ｃ）単独でヒトリポタンパク質（ａ）の免疫比濁定量
法に使用可能である。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3060259A JP3018110B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | モノクローナル抗体 |
| KR1019920004388A KR100222232B1 (ko) | 1991-03-25 | 1992-03-18 | 사람 리포단백질과 반응하는 모노클로날 항체 ferm bp-3755 |
| EP19920400738 EP0506523A3 (en) | 1991-03-25 | 1992-03-19 | Monoclonal antibodies |
| TW081102180A TW258737B (ja) | 1991-03-25 | 1992-03-23 | |
| CN92102038A CN1065729A (zh) | 1991-03-25 | 1992-03-25 | 单克隆抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3060259A JP3018110B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | モノクローナル抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04293496A JPH04293496A (ja) | 1992-10-19 |
| JP3018110B2 true JP3018110B2 (ja) | 2000-03-13 |
Family
ID=13136990
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3060259A Expired - Lifetime JP3018110B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | モノクローナル抗体 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0506523A3 (ja) |
| JP (1) | JP3018110B2 (ja) |
| KR (1) | KR100222232B1 (ja) |
| CN (1) | CN1065729A (ja) |
| TW (1) | TW258737B (ja) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5783400A (en) * | 1990-04-27 | 1998-07-21 | Genzyme Corporation | Method for the isolation of lipoprotein allowing for the subsequent quantification of its mass and cholesterol content |
| EP0621284A4 (en) * | 1992-08-14 | 1996-06-12 | Shino Test Corp | PEPTIDES CONTAINING SELECTED RESPECTIVE AMINO ACID SELECTED FROM LIPOPROTEIN (a) AND APOLIPOPROTEIN (a), ANTIBODIES RECOGNIZING THESE AMINO ACID SEQUENCES AND ANALYSIS METHOD USING THE SAME. |
| AU7707294A (en) * | 1993-09-29 | 1995-04-18 | Yamasa Corporation | Method of assaying oxidized lipoprotein and application thereof |
| EP0659765A3 (en) * | 1993-12-21 | 1995-09-27 | Akzo Nobel Nv | Immunorealitive Apo (a) peptides. |
| JP4179988B2 (ja) * | 2001-07-12 | 2008-11-12 | 協和メデックス株式会社 | 変性リポ蛋白質の定量法、変性リポ蛋白質の定量用試薬、循環器疾患の検出方法および循環器疾患の検出試薬 |
| CN101451993B (zh) * | 2009-01-09 | 2013-07-17 | 王贤俊 | 抗Lp(a)抗体制备及检测Lp(a)的诊断试剂盒 |
| CN102749459A (zh) * | 2012-07-27 | 2012-10-24 | 北京恩济和生物科技有限公司 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法 |
| CN102818903A (zh) * | 2012-08-23 | 2012-12-12 | 上海睿康生物科技有限公司 | 一种双粒子复合的Lp-a检测试剂盒 |
| CN103454193A (zh) * | 2013-09-05 | 2013-12-18 | 苏州照康生物技术有限公司 | 检测脂蛋白（a）的免疫比浊试剂盒及其制备方法 |
| CN103604930B (zh) * | 2013-11-07 | 2015-11-18 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 一种脂蛋白(a)检测试剂盒 |
| CN103627677B (zh) * | 2013-11-26 | 2016-08-17 | 北京利德曼生化股份有限公司 | 抗Lp(a)单克隆抗体及Lp(a)胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 |
-
1991
- 1991-03-25 JP JP3060259A patent/JP3018110B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-03-18 KR KR1019920004388A patent/KR100222232B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1992-03-19 EP EP19920400738 patent/EP0506523A3/en not_active Withdrawn
- 1992-03-23 TW TW081102180A patent/TW258737B/zh not_active IP Right Cessation
- 1992-03-25 CN CN92102038A patent/CN1065729A/zh active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．３２，（１９９１），ｐ．２７７−２９２ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR920017670A (ko) | 1992-10-21 |
| JPH04293496A (ja) | 1992-10-19 |
| KR100222232B1 (ko) | 1999-10-01 |
| CN1065729A (zh) | 1992-10-28 |
| EP0506523A3 (en) | 1993-10-20 |
| EP0506523A2 (en) | 1992-09-30 |
| TW258737B (ja) | 1995-10-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0267611B1 (en) | Antibody against interleukin-1 | |
| Ikeda et al. | A sandwich-enzyme immunoassay for the quantification of lipoprotein lipase and hepatic triglyceride lipase in human postheparin plasma using monoclonal antibodies to the corresponding enzymes | |
| EP0741144B1 (en) | Antiannexin-v monoclonal antibody, process for producing the same, and use therof | |
| JP3517754B2 (ja) | 抗ヒト可溶性フィブリン抗体，ハイブリドーマ及び免疫学的測定法 | |
| JP3018110B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| WO1997008335A1 (fr) | Anticorps monoclonal permettant de reconnaitre l'amyloïde a serique | |
| JP2665503B2 (ja) | インシュリン様成長因子の免疫分析を可能にするインシュリン様成長因子に対するモノクローナル抗体対 | |
| JP4163764B2 (ja) | 免疫学的粒子凝集反応方法 | |
| JP4413179B2 (ja) | 免疫学的粒子凝集反応方法 | |
| US5316914A (en) | Method for determining human collagen peptides by way of enzyme immunoassay | |
| KR910008637B1 (ko) | 심근 미오신 중사슬에 대한 단일클론항체 | |
| PT90369B (pt) | Processo para a preparacao de anticorpos monoclonais para a determinacao imunologica selectiva de peptido do procolagenio intacto (tipo iii) e de procolagenio (tipo iii) em fluidos corporais e processo de determinacao usando esses anticorpos | |
| KR960002740B1 (ko) | 안티-트롬빈-결합물질 모노클로날 항체, 이를 생산하는 하이브리도마 및 모노클로날 항체를 이용한 트롬빈-결합물질의 정제법 및 측정법 | |
| CA2281262C (en) | Anti-human medullasin monoclonal antibody, process for producing the same and immunoassay using the same | |
| EP0345811B1 (en) | Monoclonal abtibodies specific for human fibrinopeptide A | |
| IE881290L (en) | Monoclonal antibodies for the selective immunological¹determination of intact procollagen peptide (Type III) and¹procollagen (Type III) in body fluids | |
| JP3142786B2 (ja) | 動脈硬化症の測定用キット及びこれに用いる抗体 | |
| JP2515533B2 (ja) | 蛋白の定量方法 | |
| CA2355893C (en) | Antiuracil monoclonal antibody | |
| US20030003515A1 (en) | Monocloral antibody-based diagnostic assay for gamma fibrinogen | |
| JPS63258595A (ja) | インターロイキン−１に対する抗体 | |
| JP3504676B2 (ja) | αカテニンに対するモノクローナル抗体 | |
| CA2115171C (en) | Monoclonal antibodies to human pulmonary surfactant apoprotein d and use thereof | |
| JPH0453516B2 (ja) | ||
| JPH0977798A (ja) | 抗コレステリルエステル転送蛋白抗体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080107 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090107 Year of fee payment: 9 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100107 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100107 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110107 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110107 Year of fee payment: 11 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120107 Year of fee payment: 12 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120107 Year of fee payment: 12 |