JP3046369B2

JP3046369B2 - 光学異性体分離剤

Info

Publication number: JP3046369B2
Application number: JP3046537A
Authority: JP
Inventors: 隆梶間; 洋一飯村; 直子鈴木; 直樹浅川; 禎一服部; 八郎杉本
Original assignee: Eisai Co Ltd
Current assignee: Eisai Co Ltd
Priority date: 1990-03-15
Filing date: 1991-03-12
Publication date: 2000-05-29
Anticipated expiration: 2015-05-29
Also published as: JPH04211022A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は光学異性体の分離剤に関
し、詳しくは、コラン酸あるいはコラン酸誘導体を担体
に結合又は被覆した固定相からなる光学異性体の分離剤
に関する。

【０００２】従って、本発明は光学異性体の分離が技術
課題として提起されている化学の分野とりわけ医薬品の
分野において利用される。

【０００３】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】不斉炭
素原子を含むキラルな化合物についてその光学異性体を
分離することが、特に医薬品の分野において強く要求さ
れている。

【０００４】光学異性体の分離法としては、クロマトグ
ラフィーの進歩により、とりわけ高速液体クロマトグラ
フィーにより分離分析する方法が知られている。即ち、
分割しようとする対掌体を担体でも区別可能な形に変換
して分離する、キラル(chiral)誘導体化法、具体的には
光学活性な試薬を目的対掌体のクロマトグラフ分離に先
立って反応させ、いわゆるジアステレオマーとする方
法、また、金属イオンと配位する光学活性配位子とを移
動相に添加し、注入された目的対掌体とカラム内で配位
子交換させ、ジアステレオメックな錯体形成を意図させ
るキラル移動相法がある。

【０００５】一方、クロマトグラフ担体に光学的な立体
配置を持つ化合物を結合させた分離カラムを用いる方
法、即ちキラル固定相法がある。

【０００６】近年、医薬品分野では光学活性化合物をそ
れぞれの薬理作用、毒性を研究するにあたって分離分割
することが要求され、分離手段としてキラル固定相を用
いて分離する研究がなされている。

【０００７】例えば、シクロデキストリンをシリカゲル
に結合した固定相を使用して分離する方法(D. M.Armstr
ong et al., J. Chromatgr. Sci., 22，411(1984) 、米
国特許第4,539,999 号明細書）、(R) −Ｎ−(3,5−ジニ
トロベンゾイル）フェニルグリシンを使用する方法（I.
W. Wainer et al., J. Chromatgr., 284, 117(1984))
、牛血清アルブミンをシリカあるいはアガロースに結
合した固定相を使用して分離する方法(S. Allenmark et
al., J. Chromatgr., 264, 63(1983), S. Alle-nmark
et al., J. Chromatgr., 237, 473(1982))、キラルな血
清蛋白であるα₁−酸性糖蛋白を使用する技術 (Jonger,
Hermansson, J. Chromatgr., 325, 379(1985))、オロ
ソムコイドとその官能類似体等を使用して分離する方法
（特開昭60-41619号公報）等がある。

【０００８】また、本発明者の一人はすでに固定相とし
てオボムコイドを担体に結合せしめた技術を開示してい
る（特開昭64-3130 号公報）。またアビジンを担体に結
合せしめた技術も開示している（特開昭64−3129号公
報）。

【０００９】しかしながら、これらの技術は使用資材に
おいて一般に高価である。本発明の目的は、安価で優れ
た分離力を有する光学異性体分離剤を提供することにあ
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、光学異性
体の分離剤について上記課題を解決すべく鋭意検討した
結果、本発明を完成するに到った。即ち、本発明は、コ
ラン酸あるいはコラン酸誘導体を担体に結合又は被覆し
た固定相からなることを特徴とする光学異性体分離剤を
提供するものである。本発明による光学異性体分離剤
は、安価で光学異性体分離力に優れている。

【００１１】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
用いられるコラン酸あるいはコラン酸誘導体としては、
下記の構造式を有する市販のコラン酸、デヒドロコール
酸、コール酸及びそれらの誘導体であるコール酸トリア
セテート、デオキシコール酸、デオキシコール酸ジベン
ゾエート等が挙げられる。

【００１２】

【化１】

【００１３】本発明に用いられる担体としては、コラン
酸誘導体と結合し固定相を形成し得るものであれば特に
限定されないが、本発明における光学異性体の分離は主
として液体クロマトグラフィーによって行われるので、
担体としては、シリカゲル、セルロース、合成ポリマー
等が好ましく用いられる。

【００１４】本発明において、コラン酸あるいはコラン
酸誘導体を担体に結合する方法は、固定相を形成するた
めに通常に行われる方法に従って行えばよい。即ち、ア
ミノ基を有するシランカップリング剤、例えば３−アミ
ノ−プロピルトリエトキシシランを用いてトルエン中で
シリカゲルと反応させアミノプロピル化シリカゲルを
得、これを担体とし、次に活性 N−アシルを導入できる
試薬である 1,1−カルボニルジイミダゾールを架橋剤と
して、コラン酸あるいはコラン酸誘導体を結合させる方
法などがある。この反応に用いる、1,1−カルボニルジ
イミダゾールの使用量はアミノプロピル化シリカゲルに
対してモル比で１〜４倍が好ましく、更に好ましくは２
〜３倍である。モル比が１倍未満では分離効率が悪く、
また４倍を越えるとアミノプロピル化シリカゲルに結合
する量より過剰となり経済的ではない。シリカゲルにア
ミノプロピル基を結合した市販のアミノプロピルシリカ
たとえば、Nucleosil(登録商標）NH₂を使用してもよ
い。

【００１５】その他の結合方法として、コラン酸あるい
はコラン酸誘導体を、シリカゲルを担体とし、３−グリ
シドキシプロピルトリメトキシシランを架橋剤として結
合したり、あるいはセルロースを担体としブロムシアン
で活性化してから結合したり、陽イオン交換合成ポリマ
ーに結合したりする方法が挙げられる。

【００１６】本発明の分離剤は前記したごとく、コラン
酸あるいはコラン酸誘導体を担体に結合し又は被覆して
得られた固定相からなることを特徴とする。従って、本
発明の分離剤には、当該固定相が必須の構成成分として
含まれるが、同時に分離剤中に他の成分、例えばシリカ
ゲルやセルロースが任意に選択されて加えられることは
自由であり分離効率の向上のために適宜行うことができ
る。

【００１７】本発明において光学異性体とは分子内に不
斉炭素原子を有するキラル化合物をいい、多くの医薬品
にその例をみることができる。

【００１８】本発明の分離剤は主として液体クロマトグ
ラフィーにおいて使用される。従ってその使用方法は液
体クロマトグラフィーにおける通常の操作によって行え
ばよく、例えば本発明の分離剤をカラムに充填し、光学
異性体に係るラセミ体をチャージ(charge)し、次に、リ
ン酸緩衝液、エタノール水溶液、イソプロパノール等の
移動相を用い、保持時間の差により、光学異性体を単離
することができる。

【００１９】

【実施例】以下実施例により本発明を更に詳細に説明す
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。

【００２０】実施例１ (1) デオキシコール酸ジベンゾエートの合成ベンジルデオキシコレート(Benzyl deoxycholate) の合
成デオキシコール酸 25.0gをアセトニトリル500 mlに
溶解し、1,8 −ジアザビシクロ〔5.4.0 〕−７−ウンデ
セン(DBU) 19.0mlと臭化ベンジル 18.9 mlを加えた。15
時間加熱還流した後室温まで放冷し、減圧濃縮した。得
られた残渣を酢酸エチルにて希釈した後、0.1 Ｎ塩酸、
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水
溶液にて洗浄した。硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧
濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラム（塩化メチレ
ン−メタノール）にて精製し、標題化合物24.4g(収率79
％）を得た。

【００２１】分子式 C₃₁H₄₆O₄ ¹H−NMR(CDCl₃) δ： 0.64（3H，s)、0.90（3H，s)、0.93（3H，d)、0.95〜2.
43（28H, m）、3.35〜3.70(1H, m) 、3.90(1H, bs)、5.
06（2H，s)、7.28（5H，s)ヘ゛ンシ゛ル 3,12−ジ−O −ベンゾイルデオキシコレート (Ben
zyl 3, 12-di-O- benzoyldeoxycholate)の合成ベンジルデオキシコレート 4.30gをピリジン50ml
に溶解し、塩化ベンゾイル 4.14 mlを加えた。室温にて
２日間撹拌した後減圧濃縮し、得られた残渣を酢酸エチ
ルにて希釈し、水、飽和塩化ナトリウム水溶液にて洗浄
した。硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧濃縮し、得ら
れた残渣をシリカゲルカラム（ヘキサン−酢酸エチル）
にて精製し、標題化合物6.00g(収率97％）を得た。

【００２２】分子式 C₄₅H₅₄O₆ ¹H−NMR(CDCl₃) δ： 0.80（3H，s)、0.93（3H，d)、0.97（3H，s)、1.00〜2.
45（26H, m) 、4.60〜5.00 (1H，m)、5.02（2H，s)、
5.32（1H，bs) 、7.10〜8.12(10H, m)、7.28（5H，s)デオキシコール酸ジベンゾエート(Deoxycholic acid di
benzoate )の合成ベンジル 3,12−ジ−O −ベンゾイルデオキシコレ
ート6.00 ｇをテトラヒドロフラン(THF)120mlに溶解
し、10％パラジウム−炭素１g を加えた。常温常圧にて
４時間水素添加した後、触媒を濾別し、濾液を減圧濃縮
した。得られた残渣をシリカゲルカラム（塩化メチレン
−メタノール）にて精製し、さらにアセトニトリルから
再結晶化し、標題化合物4.60ｇ（収率88％) を白色結晶
として得た。

【００２３】融点（℃）； 169〜170 比旋光度；〔α〕²⁴ _D ＋108°(ｃ＝1.00, CHCl₃) 元素分析結果；C₃₈H₄₈O₆として（２）固定化およびカラム調整上記方法により得たデオキシコール酸ジベンゾエート0.
5g (0.83mmol) をテトラヒドロフラン(THF) ４mlに溶か
し、氷冷した。氷冷下、1,1 −カルボニルジイミダゾー
ル (1,1 −Carbonyldiimidasole) 0.135g(0.83 mmol)／
２ml THF溶液を添加し、３時間ゆっくりと撹拌した。そ
の後、ヌクレオジル５NH₂(Nu-cleosil(登録商標）５NH
₂：アミノプロピルシリカゲル）2.0gを加え、室温で５
時間反応させた。反応液を濾過後、残渣をテトラヒドロ
フラン、メタノールの順に洗浄後、減圧乾燥した。

【００２４】元素分析結果 C：15.77 ％, H：2.14％, N：1.02％上記方法により得たデオキシコール酸ジベンゾエート固
定化シリカゲルをスラリー法により、ステンレススチー
ルカラム（4.6 mmI.D.×150 mm) に充填し、高速液体ク
ロマトグラフィー(HPLC)分析用カラムとした。

【００２５】実施例２ Kuramotoらの方法(T. Kuramoto, K. Kihira, N. Matsum
oto and T. Hoshita,Chem. Pharm. Bull., 29, 1136(19
81)) により得たコール酸トリアセテート 0.5ｇ（0.94m
mol）をテトラヒドロフラン(THF) ５mlに溶かし、氷冷
した。氷冷下、1,1 −カルボニルジイミダゾール（1,1
−Carbonyldiimidazole) 0.15 ｇ（0.94mmol) ／４ml
THF 溶液を添加し、３時間ゆっくりと撹拌した。その
後、ヌクレオジル５NH₂(Nucleosil（登録商標）５N
H₂：アミノプロピルシリカゲル）2.0ｇを加え、室温で
５時間反応させた。反応液を濾過後、残渣をテトラヒド
ロフラン、メタノール、ｎ−ヘキサンの順に洗浄後、減
圧乾燥した。

【００２６】元素分析結果 C：8.32％, H：1.57％, N：1.74％上記方法により得たコール酸トリアセテート固定化シリ
カゲルをスラリー法により、ステンレススチールカラム
（4.6 mmI.D.×150 mm）に充填し、HPLC分析用カラムと
した。

【００２７】実施例３粒径10μ、孔径100 Å、表面積350m²/gのシリカゲル５g
を無水トルエン70ml中で90℃, 24時間、３−アミノプ
ロピルトリエトキシシラン５g と反応させてアミノプロ
ピル化シリカゲルを合成した。次に市販のコール酸0.5g
(1.2mmol)をテトラヒドロフラン12mlに溶かし、Ｎ−ヒ
ドロキシコハク酸イミド0.14ｇ(1.2mmol) 、アミノプロ
ピル化シリカゲル2.0g、さらに1,3 −ジシクロヘキシル
カルボジイミド0.25g(1.2mmol)を加え、室温にて24時間
ゆっくり撹拌した。反応終了後、反応液を濾過、残渣を
テトラヒドロフラン、メタノールの順に洗浄後、減圧乾
燥した。

【００２８】元素分析結果 C：11.63 ％、 H：1.93％、 N：1.00％上記方法により得たコール酸固定化シリカゲルをステン
レススチールカラム（4.6 mmφ×150 mm）にテトラブロ
ムエタン、メタノール、四塩化炭素からなる平衡スラリ
ー法により充填した。

【００２９】実施例４市販デヒドロコール酸 1.0ｇ(2.5mmol) をジメチルホル
ムアミド(DMF)30 mlに溶かし、氷冷した。氷冷下、1,1
−カルボニルジイミダゾール (1,1−Carbonyl-diimidaz
ole) 0.4ｇ(2.5mmol) ／１ml DMF溶液を添加し、３時
間ゆっくりと撹拌した。その後、ヌクレオジル５NH₂(N
ucleosil（登録商標）５NH₂：アミノプロピルシリカゲ
ル）2.0gを加え、室温で５時間反応させた。反応液を濾
過後、残渣をDMF 、テトラヒドロフラン、メタノールの
順に洗浄後、減圧乾燥した。

【００３０】元素分析結果 C：10.13 ％, H：1.67％, N：1.19％上記方法により得たデヒドロコール酸固定化シリカゲル
をスラリー法により、ステンレススチールカラム（4.6
mmI.D.×150 mm）に充填し、HPLC分析用カラムとした。

【００３１】実施例５デオキシコール酸 1.0ｇをアセトニトリル30 ml に溶か
し、氷冷した。氷冷下、1,1 −カルボニルジイミダゾー
ル 0.4ｇ／mlアセトニトリル溶液を添加し、３時間ゆっ
くりと撹拌した。その後、ヌクレオジル５NH₂(Nucleos
il（登録商標）５NH₂：アミノプロピルシリカゲル）2.
0gを加え、室温で５時間反応させた。反応液を濾過後、
残渣をアセトニトリル、テトラヒドロフラン、メタノー
ルの順に洗浄後、減圧乾燥した。

【００３２】上記方法により得たデオキシコール酸固定
化シリカゲルをスラリー法により、ステンレススチール
カラム（4.6 mmI.D.×160 mm）に充填し、HPLC分析用カ
ラムとした。

【００３３】

【発明の効果】以下の実験例によって本発明の効果を示
す。

【００３４】実験例１実施例１で用意されたデオキシコール酸ジベンゾエート
固定化カラムを用いて、HPLCにより1,1'−ビ−2 −ナフ
トール(1,1'-bi-2-naphthol)のエナンチオマーにおける
分離を行った。溶出液はｎ−ヘキサン：エタノール＝9
0：10、流出速度は0.5 ml／min とした。結果を図１に
示す。

【００３５】尚、図１において、(a) はHPLCの流出曲
線、(b) は各フラクションにおける(+)-体と(-)-体の割
合を示す図である。

【００３６】実験例２実施例５で用意されたデオキシコール酸固定化カラムを
用いて、HPLCにより1,1'−ビ−2 −ナフトール(1,1'-bi
-2-naphthol)のエナンチオマーにおける分離を行った。
溶出液はアセトニトリル：水＝35：65、流出速度は１ml
／min とした。結果を図２に示す。

【００３７】図２より、1,1'−ビ−2 −ナフトールのエ
ナンチオマーが分離されていることがわかる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実験例１の結果を示す図であり、(a) はHPLCの
流出曲線、(b) は各フラクションにおける(+)-体と(-)-
体の割合を示す図である。

【図２】実験例２の結果を示す図であり、デオキシコー
ル酸固定化カラムを用いて、1,1'−ビ−2 −ナフトール
エナンチオマーの分析を行った場合のクロマトグラフで
ある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者服部禎一茨城県つくば市梅園２−28−36 (72)発明者杉本八郎茨城県牛久市柏田町3073−13 (56)参考文献特開昭64−3130（ＪＰ，Ａ) 特開昭64−3129（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07B 57/00 C07J 9/00 G01N 30/48

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】コラン酸あるいはコラン酸誘導体を担体
に結合又は被覆した固定相からなることを特徴とする光
学異性体分離剤。
【請求項２】コラン酸誘導体がコール酸、コール酸ト
リアセテート、デオキシコール酸ジベンゾエート、デオ
キシコール酸又はデヒドロコール酸である請求項１記載
の光学異性体分離剤。
【請求項３】担体がシリカゲル、セルロース又は合成
ポリマーである請求項１又は２記載の光学異性体分離
剤。