JP2948161B2 - ジアセチルレインからなる関節炎治療剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、２０ｐｐｍ未満の
好ましくないアロエエモジン誘導体を有するジアセチル
レインからなる関節炎治療剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】式：

【０００３】

【化１】

【０００４】で示されるジアセチルレインは、抗関節
性、抗炎症性、抗発熱性および抗鎮痛性の活性を有する
薬理的作用物質である。従って、ジアセチルレインは関
節炎疾患の治療に使用される。たとえばドイツ連邦共和
国特許出願公開第２７１１４９３号明細書および米国特
許第４２４４９６８号明細書を参照されたい。

【０００５】ジアセチルレインは、たとえばバルバロイ
ンのアセチル化および得られたペルアセチル化されたバ
ルバロインの三酸化クロムを用いた酸化により製造する
ことができる。更に、ジアセチルレインは、たとえばセ
ンナ薬から得られるレインのアセチル化により製造する
ことができる。

【０００６】該方法により得られるジアセチルレイン
は、好ましくない随伴物質として、三酸化クロムを用い
た不完全な酸化に起因するかまたはセンナ薬の抽出の際
にいっしょに抽出されるアロエエモジン誘導体を含有す
る。この随伴物質は比較的少量で含有され、従って、典
型的な浄化操作により分離することがきわめて困難であ
る。更に、上記の最初に述べた方法においてはクロム残
留物が生じ、これを適当な方法で除去しなければならな
い。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の課題
は、全部で２０ｐｐｍ未満の好ましくないアロエエモジ
ン誘導体を有するジアセチルレインからなる関節炎治療
剤を提供することであった。

【０００８】

【課題を解決するための手段】前記課題は、本発明によ
る方法により、 Ａ）アロエエモジン成分（すなわちアロエエモジンおよ
び／またはその誘導体）を含有するレイン−９−アント
ロン−８−グルコシドを、ごく一部分水と混和可能な極
性の有機溶剤と水相との液−液分配にかけ、 Ｂ）水相に分配後に含有するレイン−９−アントロン−
８−グルコシドを酸化し、レイン−８−グルコシドを生
成し、 Ｃ）レイン−８−グルコシドの８位のグルコース基を酸
性媒体中で分離し、かつ Ｄ）得られたレインをアセチル化し、再結晶し、ジアセ
チルレインを収得することにより解決される。

【０００９】レイン−９−アントロン−８−グルコシド
の主な源泉はセンナ薬中に含まれるセンノシドである。
従って、本発明の有利な実施態様は、アロエエモジン誘
導体を実質的に含まないジアセチルレインからなる関節
炎治療剤を製造する方法であり、該方法は、 Ａ）センノシド混合物を還元し、相当するレイン−９−
アントロン−８−グルコシドおよびアロエエモジン−９
−アントロン−８−グルコシド化合物を生成し、 Ｂ）得られた化合物の、ごく一部分水と混和可能な極性
の有機溶剤と水相との液−液分配を実施し、 Ｃ）水相に分配後に含有するレイン−９−アントロン−
８−グルコシド化合物を酸化し、相当するアントラキノ
ン化合物を生成し、 Ｄ）アントラキノン化合物の８位のグルコース基を酸性
媒体中で分離し、かつ Ｅ）得られた１，８−ジヒドロキシアントラキノン化合
物をアセチル化し、再結晶し、ジアセチルレインを収得
することよりなる。

【００１０】本発明による方法の個々の工程を以下詳細
に説明する： センノシドの還元 出発物質として使用されるセンノシド混合物はたとえば
センナ薬から得られる。

【００１１】センナ薬はセンナ、たとえばインド産セン
ナ（Cassia angustifolia）およびエジプト産センナ（C
assia acutifolia）の乾燥した葉および実からなる。該
センナ薬はレインおよびアロエエモジンのジアントロン
グルコシドを含有する。最も重要なものはセンノシド
Ａ，Ｂ，Ａ１，Ｃ，ＤおよびＤ１である。該センノシド
は以下の式に相当する：

【００１２】

【化２】

【００１３】センノシドＡ，ＢおよびＡ１において、Ｒ
はＣＯＯＨを表し、センノシドＣ，ＤおよびＤ１におい
てＲはＣＨ₂ＯＨを表す。センノシドＡ，ＢおよびＡ１
またはＣ，ＤおよびＤ１は立体異性体であり、かつＣ原
子１０および１０′の立体配置により互いに異なる。

【００１４】センナ薬からのセンノシドの収得はたとえ
ばドイツ連邦共和国特許出願公開第３２００１３１号明
細書に記載されており、全面的にこれを参照することが
できる。それにより、まずセンナ薬を水性のメタノール
で抽出する。メタノールを完全に除去した後で残留する
濃縮液はカリウム塩の形のセンノシドを含有する。この
濃縮液は、本発明による方法のための出発物質として適
している。該濃縮液は、水に部分的に溶解するアルコー
ルまたはケトン（たとえばブタノール−２，２−ブタノ
ン）（ラフィネート）を用いた液状抽出によりなお浄化
することができる。該ラフィネートは約１．５〜２．０
のｐＨに酸性化し、かつセンノシドを接種下で結晶化す
る。得られた粗製センノシド混合物は同様に本発明によ
る方法のための出発物質として使用可能である。所望の
場合は粗製センノシド混合物をなお再結晶させることも
できる。

【００１５】選択的に、水に部分的に溶解するアルコー
ルまたはケトン、特にブタノール−２を加えた濃縮液を
出発物質として使用することができる。

【００１６】センナ薬の抽出の場合に薬剤と抽出剤との
比は有利には１：４〜１：１５、特に１：４〜１：１０
である。

【００１７】抽出は、有利には緩衝液、たとえばクエン
酸三ナトリウム、グリシン、重炭酸ナトリウムまたはサ
ッカロースの存在下で実施する。

【００１８】本発明による方法により、これらの出発物
質を完全に還元し、式：

【００１９】

【化３】

【００２０】で示される、相当するレイン−９−アント
ロン−８−グルコシド（Ｒ＝ＣＯＯＨ）および相当する
アロエ−エモジン−９−アントロン−８−グルコシド
（Ｒ＝ＣＨ₂ＯＨ）を生成する。

【００２１】適当な還元電位を有する還元剤は、たとえ
ば塩化亜鉛（ＩＩ）、二酸化硫黄、アルカリ金属硼化水
素および有利にはアルカリ金属ジチオニット、特に亜ジ
チオン酸ナトリウムである。

【００２２】還元を実施するために、出発物質を水溶液
または懸濁液に装入し、かつ還元剤を固体でまたは水に
溶解して加える。水と部分的に混和可能な極性の有機溶
剤、特に２−ブタノールまたはアセトンを加えることに
より２相混合物中で行うこともできる。

【００２３】周囲温度またはそれより高い温度で還元す
ることができる。還元は、有利には４０〜６０℃、特に
５０〜５５℃で実施する。還元は弱酸性から弱アルカリ
性までの、出発センノシド溶液または懸濁液のｐＨ値
で、有利にはｐＨ７〜９で実施する。所望の場合は、還
元を数回、特に２〜１０回実施することができる。

【００２４】形成された９−アントロン−８−グルコシ
ドはｐＨ４〜４．５まで酸、たとえば硫酸を加えること
により沈殿する。その際、温度は有利には４０℃未満で
あるべきである。該化合物の制御されない酸化を回避す
るために、９−アントロン−８−グルコシドの析出およ
び単離（たとえば濾過による）の際に窒素下で行うのが
有利である。

【００２５】還元が完全に進行することが重要である。
従って、有利には大過剰の還元剤を使用する。亜ジチオ
ン酸ナトリウムを使用する場合は、出発物質のセンノシ
ド含量に対して一般に１〜４倍の重量の亜ジチオン酸ナ
トリウムを使用する。更に、還元剤を少なくとも２時
間、有利には少なくとも３時間作用させる。一般に還元
は１０時間より長く行わない。有利には、上記条件下で
後還元を実施する。

【００２６】得られた生成物は、次の工程に投入する前
に、水溶液中でｐＨ約６〜７まで塩基（ＮａＯＨ，ＫＯ
Ｈ）を加えることにより溶解させ、水溶液を２−ブタノ
ール、アセトンまたは２−ブタノンで抽出し、かつ生成
物をｐＨ約２〜４まで酸を加えることにより再び析出さ
せることにより、有利に再沈殿する。

【００２７】液−液分配 該工程では、アロエエモジン成分、特にアロエエモジン
−９−アントロン−８−グルコシドを除去する。このた
めに、得られた生成物を、水とごく一部分混和可能な極
性の有機溶剤および水相中で液−液分配させる。適当な
極性の有機溶剤は、Ｃ₄〜Ｃ₅−アルカノールおよびジ−
Ｃ₁〜Ｃ₃−アルキルケトン、たとえばアセトン、１−ブ
タノール、２−ブタノールおよび２−ブタノンである。
２−ブタノールまたはアセトンを使用するのが有利であ
る。

【００２８】全部の液−液分配の間に水相に−２１０ｍ
Ｖまたはそれより低いレドックス電位を付与するため
に、水相に還元剤を加えるのが有利である。工程Ａにお
けると同様の、同じ還元剤を使用するのが有利である。
還元剤としてアルカリ金属ジチオニットを使用する場合
に、前記電位条件を維持するためには、一般に、７〜１
１のｐＨ値においては２〜４重量％溶液で十分である。

【００２９】水相（重い方の相）と有機相（軽い方の
相）との体積比は、一般に１：５〜１：４０の範囲内で
ある。

【００３０】液−液抽出は向流で行うのが有利である。
その際、アントロン化合物の混合物を、還元後に得られ
た溶液の形で、またはアントロン化合物を単離する場合
は３〜１５重量％溶液の形で供給する。

【００３１】分配後に、所望のレイン−９−アントロン
−８−グルコシドが水相中に存在する。ｐＨ約２〜４ま
で酸を加えることにより沈殿し、通常の方法で収得す
る。

【００３２】レイン−９−アントロン−８−グルコシド
の酸化 ところで、得られたレイン−９−アントロン−８−グル
コシドを酸化し、式：

【００３３】

【化４】

【００３４】で示されるレイン−８−グルコシドを生成
する。この目的のために適当な酸化剤は、たとえば酸
素、ペルオキシド化合物（過酸化水素）、高い酸化段階
のマンガン化合物、クロム化合物または鉄化合物であ
る。鉄（ＩＩＩ）塩、特に硫酸鉄（ＩＩＩ）を使用する
のが有利である。高められた温度で実施するのが有利で
あるが、６０℃未満で実施する。それにより好ましくな
いかつ不明確な酸化生成物が生じることが回避される。
酸化終了後、形成されるレイン−８−グルコシドを通常
の方法で単離する。

【００３５】グルコース基の分離 ８位のグルコース基を酸性溶液中で分離する。約８５〜
９５℃で実施するのが有利である。得られた生成物は通
常の方法で単離する。

【００３６】センノシドを酸による加水分解後に塩化鉄
（ＩＩＩ）と反応させることにより直接レインに移行す
ることは公知である。たとえばドイツ連邦共和国特許出
願公開第２７１１４９３号明細書を参照されたい。しか
しながら、この場合に収率は約１０％にすぎず、更に形
成されるレインは分離が困難である。

【００３７】本発明による方法においては、センノシド
の還元による分離、形成されるアントロン化合物の酸化
による相当するアントラキノン化合物の生成およびアン
トラキノン化合物の８位のグルコース基の分離をそれぞ
れ分離された工程で実施する。還元による分離に続い
て、アロエエモジンまたはその誘導体を形成する別の工
程に導かれることがあるすべての化合物を液−液分配に
より定量的に除去する。更に、酸化を保護された温度で
実施することが可能であり、従って、好ましくないかつ
不明確な酸化生成物の形成が回避される。更に、この反
応工程において使用される鉄塩はほぼ定量的に再び回収
することができ、かつ逆の酸化により再び使用する。酸
化工程および加水分解工程の分離は、該当するアグリコ
ンに比較してより高い水溶性のアントロングルコシドに
より、６０℃未満の室温で温和で酸化を実施することを
可能にし、それにより不明確な副生成物のなお回避され
ない形成を回避する。

【００３８】１，８−ジヒドロキシアントラキノン化合
物のアセチル化 得られた１，８−ジヒドロキシアントラキノン化合物の
アセチル化は通常の方法で実施する。たとえば酢酸ナト
リウムの存在下で無水酢酸を用いてアセチル化すること
ができ、たとえばＡｒｃｈ．Ｐｈａｒｍ．２４１，６０
７（１９０３）に記載されている。しかしながら、アセ
チル化は、別の当業者に公知の方法で、たとえば塩化ア
セチルとの反応等により行うこともできる。

【００３９】このようにして得られたジアセチルレイン
は実質的にアロエエモジンおよびその誘導体を含まな
い。この場合に、この汚染物質の含量はなお約５０ｐｐ
ｍである（実施例に記載の分析方法により測定した）。
この汚染物質の含量は、得られたジアセチルレインを以
下の方法で再結晶する場合に、更に低下することができ
る。適当な塩基で処理することにより、ジアセチルレイ
ンをアルカリ金属塩に移行する。適当な塩基は、たとえ
ばアルカリ金属酢酸塩、有利には酢酸カリウムである。
反応媒体として、当量の塩基および水性のＣ₁〜Ｃ₃−ア
ルコール、たとえば８０〜９０％のエタノールを使用す
るのが有利である。ジアセチルレインのアルカリ金属塩
を冷気中で沈殿させ、水性のＣ₁〜Ｃ₃−アルコールに収
容し、かつｐＨ値約３まで酸を加えることにより沈殿さ
せる。その後、沈殿したジアセチルレインを通常の方法
で単離し、かつ後処理する。

【００４０】そのようにして得られた生成物は２０ｐｐ
ｍ未満の上記汚染物質を含有する。更に生成物は針状の
結晶の形で存在し、該結晶は製薬的製剤に好適である。

【００４１】生成物は、通常の方法で乾燥することがで
きる。有利には、まず乾燥を真空で、比較的低い温度
で、たとえば４０℃未満で、生成物の水含量が約３％ま
たはそれより低くなるまで長く実施する。引続き温度を
７０〜１１０℃に高めることができる。

【００４２】本発明はまた、本発明により得られた、実
質的に純粋なジアセチルレインおよび該化合物を含有す
る製薬的製剤に関する。投与すべき量および適当な投与
形態に関して公知の使用範囲については、米国特許第４
２４４９６８号明細書、同第４３４６１０３号明細書、
同第４９５０６８７号明細書、ドイツ連邦共和国特許出
願公開第２７１１４９３号明細書およびＤｒｕｇｓ Ｅ
ｘｐｔｌ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．６（１）５３〜６４（１
９８０）を参照されたい。

【００４３】

【実施例】本発明を以下の実施例により詳細に説明す
る。

【００４４】例１ 出発物質として使用されるセンノシド混合物の収得：セ
ンナ薬それぞれ４０ｋｇ（センノシド含量約１．５％）
を２つの１列に接続された、容積２５０ｌを有するパー
コレータに装入し、かつ穿孔されたスチール板で覆っ
た。抽出するための溶剤として７０％メタノールを使用
し、これを第１のパーコレータの薬剤に導入した。第１
のパーコレータ内で形成される溶液を第２のパーコレー
タ内に存在する薬剤に導入した。その際、溶剤は自由に
第１のパーコレータを通り流動することができた。

【００４５】センナ薬４０ｋｇを抽出するために全部で
１６０ｌの溶剤を使用した。この量の７０％メタノール
を２つのパーコレータを貫通させ、かつ相当する量の浸
出液を集めた後で、パーコレータの空になった管を後浸
出液容器と結合し、かつなお付加的な７０％メタノール
６０ｌをパーコレータを貫通させた。その後、残りの自
由な溶剤を第１のパーコレータから第２のパーコレータ
の上側部分に導入し、かつ全部で１２０ｌになるまで後
浸出液を収集した。その後、第１のパーコレータを空洞
化し、再びセンナ薬４０ｋｇを充填し、かつ後浸出液を
薬剤に供給した。その際、パーコレータ内の薬剤を覆う
ためには１２０ｌの後浸出液で十分であった。引続き、
溶液の温度を＋３０℃にした。

【００４６】このパーコレータを予め抽出したパーコレ
ータと結合し、かつ上記の抽出を実施した。

【００４７】薬剤それぞれ４０ｋｇのために浸出液１６
０ｌを収集し、該液からメタノールを、充填体カラムを
装備した真空回転蒸発機内で除去した。底部生成物約３
０ｌが得られた。この濃縮液を同じ体積の水で飽和した
ブタノール−２で抽出した。

【００４８】工程Ａ： センノシドの還元によるレイン−９−アントロン−８−
グルコシドの生成 抽出した濃縮液１．０ｌを４８％水酸化ナトリウム溶液
でｐＨ７．５にした。６０℃に加熱し、かつ撹拌下で３
０分間かけて、固形の亜ジチオン酸ナトリウム９０ｇを
溶かした。添加終了後更に１時間撹拌した。引続き撹拌
下で濃硫酸をｐＨ２になるまで加えた。２時間かけて周
囲温度に冷却し、生じた結晶状の沈殿物を濾過し、かつ
二酸化硫黄含有の水で洗浄した。

【００４９】所望の場合は粗製のレイン−９−アントロ
ン−８−グルコシドを再び沈殿させた。なお湿ったフィ
ルタケーキを、ｐＨ７まで４８％水酸化ナトリウム溶液
を添加することにより１０％溶液（Ｇ／Ｖ）が得られる
ようにして、２−ブタノール１５容量部およびピロ亜硫
酸ナトリウム０．５重量部を含有する水８５容量部の混
合物に溶かした。溶液を濃塩酸でｐＨ２．８またはそれ
未満に酸性化し、かつ２時間放置した。生じた沈殿物を
濾過し、二酸化硫黄またはピロ亜硫酸ナトリウム含有の
水で洗浄し、かつ乾燥させた。

【００５０】収率：９０％。

【００５１】このようにして得られた生成物を以下のよ
うに再び還元（後還元）した：粗製の、乾燥したレイン
−９−アントロン−８−グルコシドまたは相当する量の
湿った生成物３．０ｇを亜ジチオン酸ナトリウム１．４
ｇおよび５Ｎ ＮａＯＨ２．３ｍｌといっしょに水１５
ｍｌに溶かした。引続き水２４ｍｌを満たし、かつ該溶
液を２０分間で５５℃に加温した。その後更に亜ジチオ
ン酸ナトリウム１．５ｇを溶液に加え、かつ２０分間で
５５℃に加温した。引続き、５Ｎ ＮａＯＨ０．９ｍｌ
および亜ジチオン酸ナトリウム１．５ｇを溶液に加え
た。２０分間で５５℃に加温した後、もう一度５Ｎ Ｎ
ａＯＨ０．９ｍｌを加えた。得られた溶液を直接後続の
液−液抽出に供給した。

【００５２】工程Ｂ： アロエエモジン成分の分離 アロエエモジン成分の分離を、混合−分離ユニット６０
からなる装置（混合−沈降装置）を用いて、向流での９
−アントロン−８−グルコシドの液−液分配により実施
した。重い方の水性の相として、５Ｎ ＮａＯＨ３．５
ｍｌおよび水９６ｍｌ中の亜ジチオン酸ナトリウム３．
０ｇの溶液を使用した。軽い方の有機相として、（水で
飽和した）２−ブタノールまたはアセトンを使用した。
両方の相を、重い方の相と軽い方の相の体積比が１：１
０になるようにして、該装置に供給した。

【００５３】生じるべき混合物を、新鮮な還元された溶
液の形でまたは、工程Ａから得られた９−アントロン−
８−グルコシドを含有する相当するｐＨ値および相当す
る濃度の溶液の形で、すなわち、生じるべき混合物１容
量部当り有機相３０容量部を使用するようにして、該装
置に供給した。

【００５４】混合物を含有する溶液のｐＨ値をグリシン
緩衝液を用いて９〜９．５に維持した。７．５％グリシ
ン溶液３容量部および１Ｎ ＮａＯＨ１容量部からなる
緩衝液を粗製のレイン−９−アントロン−８−グルコシ
ド１５０ｇ当り緩衝溶液２４０ｍｌの量で加えた。好ま
しくないアロエエモジン化合物は有機相に富化し、一
方、レイン−９−アントロン−８−グルコシドは水相に
残留した。水相を硫酸でｐＨ２．８まで酸性化し、形成
された沈殿物を濾過し、かつ水およびアセトンで洗浄
し、周囲温度で空気に接触させて乾燥させた。このよう
にして、本明細書の最後に記載の方法によりアロエエモ
ジンとして同定されたアロエエモジン成分含量４１ｐｐ
ｍを有するレイン−９−アントロン−８−グルコシドが
得られた。

【００５５】収率：９７％、レイン−９−アントロン−
８−グルコシドに対して。

【００５６】工程Ｃ： 酸化によるレイン−８−グルコシドの生成 工程Ｂからの生成物（センノシドＡ、Ａ_１およびＢ３．
０ｋｇの含量に関する）を、脱イオン水１８４１および
硫酸鉄（ＩＩＩ）水和物７５．５ｋｇ（Ｆｅ^３＋２２
％）からなる溶液中で懸濁させた。懸濁液を５５〜６２
℃に加熱し、かつ高速分散機を使用して１４時間酸化し
た。酸化が終了すると形成されたレイン−８−グルコシ
ドを濾過し、かつ硫酸でｐＨ２に調整された脱イオン水
５０１で洗浄した。

【００５７】工程Ｄ： 加水分解によるレインの生成 工程Ｂからの湿ったフィルタ残留物を２０重量％硫酸２
００ｋｇ中で懸濁させ、かつ８８〜９２℃で８時間撹拌
した。形成されたレインを濾過し、かつ保存するために
真空１ミリバールで４０℃で４８時間乾燥させるかまた
は湿った状態ですぐにアセチル化するために工程Ｄで使
用することができた。

【００５８】工程Ａ〜Ｄの全収率は、工程Ａで使用され
たセンノシドＡ，Ａ₁およびＢに対して７９％であっ
た。

【００５９】工程Ｅ： アセチル化によるジアセチルレインの生成 工程Ｃからのレイン６．５ｋｇを無水酢酸１００ｌ中で
１０分間懸濁させ、酢酸カリウム２ｋｇを加え、撹拌下
で９５℃に加熱し、活性炭０．６５ｋｇを加え、かつ９
０〜９５℃で１／２時間撹拌した。活性炭を熱い溶液か
ら濾別し、かつ濾液に９０℃で９６〜９８重量％硫酸
２．１ｋｇを加えた。引続き、撹拌下でできるだけ速く
２０℃に冷却した。生じた懸濁液を濾過した。残留物を
脱イオン水で硫酸塩不含に洗浄した。

【００６０】収率：８３％。

【００６１】工程Ｆ： 再結晶、乾燥、粉砕 急激に撹拌しながら、工程Ｅからのジアセチルレイン
７．５ｋｇ（乾燥した物質に対して）を９０容量％エタ
ノール３７５ｌ中で懸濁させた。懸濁液を７０℃に加熱
し、その後酢酸カリウム３．７５ｋｇを加えた。０〜２
℃に冷却して、その間に生じた、透明な溶液から純粋な
ジアセチルレインのカリウム塩を晶出した。

【００６２】カリウム塩を濾過し、かつ４０容量％エタ
ノール３００ｌにクエン酸カリウム３ｋｇを加えながら
２０〜３０℃で溶かした。透明な溶液を１０重量％硫酸
でｐＨ３．０に調整した。晶出したジアセチルレインを
濾過し、かつ脱イオン水で硫酸塩不含に洗浄した。

【００６３】生成物の乾燥は、まず真空中で１ミリバー
ルおよび４０℃で２４時間以内で行った。残留水含量が
３％未満に低下すると、該物質を粗に粉砕し、かつ真空
１ミリバールおよび７０℃で２４時間後乾燥した。

【００６４】引続き、０．５ｍｍの濾過装置で粉砕し、
かつ溶剤残留物を除去するために真空１ミリバールおよ
び７０℃で後乾燥した。

【００６５】収率：９５％。

【００６６】例２ 例１に記載のセンナ薬の抽出およびセンノシドの還元を
繰り返した。その後、後還元を以下のように実施した：
サッカロース１４．０ｇ、亜ジチオン酸ナトリウム（８
５％）４．５ｇおよび酢酸カリウム１３．３ｇを水１３
３ｍｌに溶かし、４８％水酸化ナトリウム溶液１．３ｍ
ｌおよび炭酸カリウム１７．３ｇを加えた。引き続き、
アセトン２９３ｍｌおよび水５０ｍｌを加えた。混合物
を分液漏斗に注ぎ、相を分離し、その際、上側の相３７
５ｍｌ（アセトン相）および下側の相１３０ｍｌが得ら
れた。

【００６７】下側の相９８ｍｌに４８％水酸化ナトリウ
ム溶液１．４ｍｌおよび粗製のレイン−９−アントロン
−８−グルコシド１０ｇを溶かした。４５〜５０℃に加
熱し、かつ２０〜３０分間該温度に維持した。引き続
き、４８％水酸化ナトリウム溶液１．０ｍｌおよび亜ジ
チオン酸ナトリウム３．４ｇを加え、更に２０〜３０分
かけて４５〜５０℃に加熱した。引き続き、４８％水酸
化ナトリウム溶液１．０ｍｌおよび亜ジチオン酸ナトリ
ウム３．４ｇを再び加え、２０〜３０分かけて４５〜５
０℃に加熱した。

【００６８】アロエエモジン成分の分離は、上記の上側
の相（アセトン相）に対して向流で還元した溶液を液−
液分配することにより実施した。流出する、レイン−９
−アントロン−８−グルコシド含有のラフィネート相を
４００ｍｌに蒸発させ、ブタノール−２ ２０ｍｌを加
えた。塩酸および硫酸をｐＨ４．０〜４．２まで加え
た。形成された沈殿物を濾過し、水４０ｍｌおよびアセ
トン３０ｍｌで洗浄し、引き続き乾燥させた。引き続く
酸化は例１に記載のように実施した。

【００６９】例３ センナ薬の抽出により得られた濃縮液にブタノール−２
約２ｌを加えた。その後、センナ実濃縮液／ブタノール
−２混合物の還元を、保護ガスとして窒素下で７工程で
実施した。還元工程Ｉの後に粗製のレイン−９−アント
ロン−８−グルコシドの沈殿を実施した。

【００７０】還元工程Ｉ：センノシド約４ｋｇを含有す
るセンナ実濃縮液／ブタノール−２混合物１００ｌを撹
拌容器に装入し、窒素で覆った。撹拌下で２０重量％水
酸化ナトリウム溶液６ｌ、その後水で飽和したブタノー
ル−２（たとえば工程ＩＩから）３５０ｌを順次加え、
１５分間撹拌した。バッチを４２〜５０℃に加熱し、亜
ジチオン酸ナトリウム７ｋｇを加えた。なお４５分間撹
拌した。２０重量％水酸化ナトリウム溶液を加えてｐＨ
値を７．５〜８に維持した。必要な場合は還元電位（Ａ
ｇ／ＡｇＣｌ電極に対する）を亜ジチオン酸ナトリウム
添加により−６３０ｍＶ未満に維持した。３０〜３５℃
に冷却後、１．５時間以内で１０重量％硫酸をｐＨ＜４
まで加えて沈殿させた。生じた懸濁液を低い撹拌速度で
＜２５℃で約１０時間撹拌した。生じた沈殿物を濾過し
た。沈殿物を１５重量％ブタノール−２ ６０ｌ中で懸
濁させ、５０〜６０℃で３０分間撹拌し、引き続き濾過
した。残留物を脱イオン水１００ｌで洗浄した。レイン
−９−アントロン−８−グルコシドの粗収量は使用され
るセンノシドに対して８２％より多かった。

【００７１】還元工程ＩＩ 工程Ｉからの粗製のレイン−９−アントロン−８−グル
コシド３．３ｋｇを脱イオン水４２ｌおよびブタノール
−２ ７．４ｌからなる混合物中で懸濁させた。２０重
量％水酸化ナトリウム溶液２ｌおよびクエン酸三ナトリ
ウム９．９ｋｇを加えて懸濁液を溶解し、その後、亜ジ
チオン酸ナトリウム３．３ｋｇおよび水で飽和したブタ
ノール２（たとえば工程ＩＩＩから）３５０ｌを加え
た。バッチを４２〜４５℃に加熱した。２０重量％水酸
化ナトリウム溶液を加えてｐＨ値を８．５〜９に維持し
た。必要な場合は、還元電位（Ａｇ／ＡｇＣｌ電極に対
する）を亜ジチオン酸ナトリウム添加により−７５０ｍ
Ｖ未満に維持した。

【００７２】放置時間３０分後上側の相を取り出し、下
側の相を工程ＩＩＩで更に処理した。

【００７３】工程ＩＩＩ 工程ＩＩからの下側の相を使用して以下の化学製品を加
えながら工程ＩＩに記載の還元方法／抽出方法を繰り返
した： 亜ジチオン酸ナトリウム １．６５ｋｇ、 ２０％水酸化ナトリウム溶液 ０．８ｌおよび 水で飽和したブタノール−２ ３５０ｌ （たとえば工程ＩＶから）。

【００７４】還元工程ＩＶ〜ＶＩＩ それぞれ先行の工程からの下側の相を使用して以下の化
学製品を加えながら工程ＩＩに記載の還元方法／抽出方
法を繰り返した： 亜ジチオン酸ナトリウム ０．８２５ｋｇ ２０％水酸化ナトリウム溶液 ０．４ｌおよび 水で飽和したブタノール−２ ３５０ｌ （たとえばそれぞれ後続の工程ＩＶから、向流原理によ
り）。

【００７５】工程ＶＩＩで分離した下側の相を３０〜３
５℃に冷却し、レイン−９−アントロン−８−グルコシ
ドを工程Ｉに記載のように沈殿した。得られた沈殿物を
濾過し、かつ脱イオン水１００ｌで洗浄した。引き続
き、硫酸鉄（ＩＩＩ）溶液（製造は例１、工程Ｂを参
照）１０ｌで覆った。

【００７６】その後、レイン−９−アントロン−８−グ
ルコシドを例１または２に記載のようにセンノシドに移
行した。

【００７７】薬理的検査 ジアセチルレインの有効性を経口投与後の慢性的炎症モ
デルで測定した。以下の実施モデルを使用した：ラット
におけるコットン−ペレット肉芽腫およびウサギにおけ
るビタミンＡの関節内の投与により引き起こされる関節
症。

【００７８】ａ）ラットにおけるコットン−ペレット肉
芽腫 若い、成熟したラット（ｎ＝１０）に、ジアセチルレイ
ン２５ｍｇ／ｋｇ，５０ｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋ
ｇまたはインドメサシン５ｍｇ／ｋｇまたはアセチルサ
リチル酸１００ｍｇ／ｋｇを５日間毎日投与した。水の
みを与えた調整群も同様に使用した。ペレットの移植は
最初の治療日に行った。実験終了の際に用意された肉芽
腫の含水重量および乾燥重量は、調整群と比較して著し
いかつ明らかに投与に依存した減少を示した。その際、
ジアセチルレイン１００ｍｇ／ｋｇの効果は、ほぼイン
ドメサシン５ｍｇまたはアセチルサリチル酸１００ｍｇ
の効果に相当した。胸腺および副腎重量は治療の間に変
化しなかった。

【００７９】ｂ）ビタミンＡ関節症 ９日間に３回のビタミンＡ３００００ＩＥの関節内の注
入により、それぞれ１０匹のウサギ（白いニュージーラ
ンド産）の２つの群において関節症類似の関節変化が引
き起こされた。５６日後に１０匹のウサギにジアセチル
レイン３ｍｇ／ｋｇ／日を８週間投与した。調整群と比
較して投与群における肉眼および顕微鏡で認められる関
節変化は著しく減少した。

【００８０】更に、ジアセチルレインの治療効果を、３
回のビタミンＡ１００００ＩＥを与えた６日間の前治療
および２６日間の治療しない間隔後に、８週間にわた
り、ジアセチルレイン５ｍｇ／ｋｇ／日（実験群）を投
与した、アセチルサリチル酸１５ｍｇ／ｋｇ／日（肯定
的調整群）を投与した、または投与されないままでいた
（否定的調整群）、それぞれ７匹のウサギにおけるアセ
チルサリチル酸の治療効果と比較した。３つのすべての
群に、最後にビタミンＡを注入して２４日後に後足をひ
きずる形の比較可能な運動障害が生じた。否定的調整群
では、次の８週間に明らかな関節症の臨床的兆候が強く
なった。

【００８１】実験群および肯定的調整群では、この兆候
は８週間の治療の間に著しく改良された。

【００８２】胃の粘膜の変化 ラットにおいてジアセチルレイン４００ｍｇ／ｋｇまた
は溶剤の１回の投与により胃の粘膜の損傷は引き起こさ
れなかったが、イブプロフェン（２００ｍｇ／ｋｇ）ま
たはインドメサシン（２０ｍｇ／ｋｇ）の投与後に、点
状（直径１ｍｍ）から大きな（直径３ｍｍ）部分までの
侵食の形の明らかな粘膜の損傷が認められた。３日にわ
たるジアセチルレイン１００ｍｇ／ｋｇの毎日２回の投
与により粘膜の損傷は生じなかったが、インドメサシン
１０ｍｇ／ｋｇの相当する使用により損傷が生じた。こ
の場合は直径１〜３ｍｍの侵食であった。

【００８３】毒性 急性中毒量ＬＤ₅₀は検査される種類（ラット、マウス、
ネコ）に応じて経口投与で１．９〜７．９ｇ／ｋｇであ
った。その際、ラットは最も感応しないことが判明し
た。腸管外投与（ｉ．ｖ．ｉ．ｐ．）によりＬＤ₅₀値は
これらの種類では１１９〜３３９ｍｇ／ｋｇであった。

【００８４】臨床的研究 １．ナプロクサンおよび引き続く偽薬後投与に対する二
重盲式検査において、９５（４９／４６）人の患者の股
関節炎および膝関節炎についてのジアセチルレインの効
果を検査した。投与量はジアセチルレイン毎日２回５０
ｍｇまたはナプロクサン毎日７５０ｍｇであった。治療
期間は７日の洗浄段階後６０日であった。引き続く偽薬
投与は６０日にわたった。

【００８５】試験因子は、点数段階、機能制限および融
和性による沈痛性および運動性兆候であった。

【００８６】２つの投与群（ジアセチルレイン／ナプロ
クサン）において、すべての試験パラメータに関して出
発値に比較して統計的に著しい改良値（Ｐ＜０．０１お
よびＰ＜０．０５）が確認された。しかしながら、投与
を中断し、引き続き偽薬を投与した９０および１２０日
後に、ジアセチルレイン／偽薬群では、自発性沈痛、肯
定的および否定的運動性沈痛のパラメータに関して、ナ
プロクサン／偽薬調整群に比較して統計的に著しい優越
性（Ｐ＜０．０１）が示された。この相違値はジアセチ
ルレインを中断して３０日後の、夜の沈痛および圧痛の
変数に対しても５％の水準に保証された。

【００８７】２．調整を伴った自由な歩行検査におい
て、７０（３５／３５）人の患者で脊髄および膝の骨関
節症に対するジアセチルレインの効果を検査した。投与
量は１日当りジアセチルレイン１００ｍｇであった。治
療期間は６０日、観察期間は７５日であった。試験因子
は沈痛および運動の制限であった。量は点数システムに
より評価した。

【００８８】調整群は３５人の患者からなり、この場合
に専ら理学療法を実施した。ジアセチルレイン処理群に
も同様に理学療法を実施した。

【００８９】結果の評価から、すべてのパラメータに関
して調整群と比較して投与群の統計的に著しい優越性が
示された。投与を中断した後も、ジアセチルレイン群に
関しては、持続する治療効果（後作用）を確認すること
ができた。

【００９０】３．ナプロクサンに対する単純盲検の交換
式検査において、患者２０人の局所的関節炎におけるジ
アセチルレインの効果を検査した。患者を２つの群に分
け、その際、第１群にまずジアセチルレイン５０ｍｇを
２０日にわたり毎日２回投与した。引き続き、３日間洗
浄段階を実施し、更に２０日間毎日２回ナプロクサン２
５０ｍｌを更に投与した。第２の群には反対の順序を維
持した。治療期間は全部で４３日であった。試験因子は
点数システムによる鎮痛、圧痛、受動的運動性鎮痛、機
能制限および腫張であった。

【００９１】結果の評価から、ナプロクサンの投与に比
較してジアセチルレインの投与の優越性が示された。記
載すべき副作用が認められず、臨床的実験パラメータの
変化も認められなかった。

【００９２】４．ナプロクサンに対する二重偽薬検査を
使用した無作為の二重盲検査では、骨関節症の２３（１
２／１１）人の患者でジアセチルレインの効果を検査し
た（融和性の検査）。投与量はジアセチルレイン毎日２
回５０ｍｇおよびナプロクサン毎日３回２５０ｍｇであ
った。治療期間は４週間であった。試験因子は治療前後
の食道胃十二指腸検査法であった。通常の粘膜検査また
は軽い粘膜障害（程度１）を有する患者のみを検査し
た。

【００９３】４週間後、内視鏡検査によりジアセチルレ
イン群（１０％）において、程度２の粘膜障害が認めら
れたが、一方ナプロクサン投与群では５人の患者（５０
％）が程度２，３および４の粘膜障害を生じた。すべて
の場合に通常の検査結果であった。

【００９４】アロエエモジンの分析検査 分液漏斗内で０．５ＭＮａＯＨ２５．３ｍｌ中にジアセ
チルレイン５０ｍｇを溶かし、１０分間振動させた。引
続き、０．５Ｍグリシンおよび０．５ＭＮａＣｌを含有
する溶液７４．６ｍｌを加えた。その際、ｐＨ９．５を
生じた。

【００９５】該溶液をクロロホルム２５ｍｌで３回抽出
した。合わせた有機相をｐＨ９．５の０．５Ｍ緩衝液
（グリシン、ＮａＯＨ、ＮａＣｌ）１０ｍｌで１回およ
び０．０１Ｍ硫酸１０ｍｌで１回抽出した。有機相から
溶剤を除去し、かつ残留物をメタノール１ｍｌ中に溶か
した。

【００９６】標準溶液のためにアロエエモジン２ｍｇを
Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド２０ｍｌ中に溶かし、か
つメタノールで濃度２μｇ／ｍｌ（４０ｐｐｍに相当）
になるまで希釈した。

【００９７】溶液の含量をＨＰＬＣを用いて検査した。
ＨＰＬＣ法の線形性を、０．１１μｇ／ｍｌ（２．２ｐ
ｐｍに相当）〜５３．６μｇ／ｍｌ（１０７２ｐｐｍに
相当）の範囲内のアロエエモジン標準溶液で検出した。
含量測定は、Ｌｉ−Ｃｈｒｏｓｐｈｅｒ−１００ ＲＰ
−１８ ５μｍを充填したＭｅｒｋ ＨＰＬＣカラム、
Ｌｉｃｈｒｏｃａｔ２５０−４で、４０℃でメタノール
中１％酢酸（ｖ／ｖ）、水中１％酢酸（ｖ／ｖ）および
アセトニトリル、４９：４６：５の割合からなる移動相
を用いて行った。

【００９８】工程Ｂの生成物、詳しくは所定のアロエエ
モジンとして、４１ｐｐｍのアロエエモジン成分含量を
有するレイン−９−アントロン−８−グルコシドの分析
検査 検査すべき物質を塩化鉄（ＩＩＩ）を用いた酸化により
同時に水溶液および四塩化炭素からなる２相混合物中で
塩酸で加水分解してレインおよびアロエエモジンに移行
した。レインを塩に移行し、それにより液−液分配によ
りアロエエモジンを分離することができた。有機相中に
存在するアロエエモジンをＨＰＬＣにより測定した。

フロントページの続き (72)発明者 ヴォルフ グリミンガー ドイツ連邦共和国 Ｄ−5060 ベルギッ シュ−グラートバッハ １ フリードリ ッヒ−ローゼンガルト−シュトラーセ 31 (72)発明者 ペンティ ヒータラ フィンランド国 ＳＦ−00660 ヘルシ ンキ 66 アルクテイ ５ (72)発明者 ヘルガ ツェースケ ドイツ連邦共和国 Ｄ−5063 オーヴェ ラート ３ プラターネンヴェーク 20 (72)発明者 クラウス ヴィトホーン ドイツ連邦共和国 Ｄ−5063 オーヴェ ラート ３ ヘーエンシュトラーセ 26 (56)参考文献 特開 昭63−146816（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−225015（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A61K 31/22 A61K 35/78 ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ２０ｐｐｍ未満のアロエエモジン誘導体
   を有するジアセチルレインからなる関節炎治療剤。