JP2868841B2

JP2868841B2 - Ｇｍｐ異常症の検出方法及びキット

Info

Publication number: JP2868841B2
Application number: JP12700290A
Authority: JP
Inventors: 誠半田; 康夫池田; 政彦片山; 文嗣日野; 郁之進加藤
Original assignee: Takara Shuzo Co Ltd
Current assignee: Takara Shuzo Co Ltd
Priority date: 1990-05-18
Filing date: 1990-05-18
Publication date: 1999-03-10
Anticipated expiration: 2014-03-10
Also published as: JPH0422866A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、ヒト血小板減少症、ヒト糖尿病、ヒト腎疾
患、ヒト動脈硬化症、ヒト血栓症に代表される様なGMP
−130産生異常症の検出方法及びその定量用キットに関
する。

〔従来の技術〕

血流が流動性を維持するためには、血管内皮細胞と血
小板の作用が重要な役割を果している。ヒト体内におい
て血管内皮が障害され内皮組織が露出すると血中の血小
板がこの部位に粘着し、種々の血小板刺激物質を放出す
る。これら物質により新たな血小板が活性化された。先
に粘着した血小板に凝集して血栓が形成されると考えら
れている。血栓の形勢は心筋梗塞や脳血栓などの発症や
動脈硬化の進展の原因と考えられている。この様に血管
内皮細胞及び血小板の活性化や、障害を検出することは
臨床的に重要な意義を持つ。

最近、血小板のα−顆粒及び血管内皮細胞のワイベル
−パラデ（Weibel−Palade）体の中に存在するGMP−140
というタンパク質が血小板及び血管内皮細胞の活性化に
伴って膜表面上に出現することが明らかにされた〔ステ
ンベルク（Stenberg）P.E.ら、ジャーナルオブセル
バイオロジー（J.Cell.Biol.）、第101巻、第880頁
（1985）〕。更にGMP140に特異的な抗体を用いてフロー
サイトメトリー法やインビボ（in vivo）イメージン
グ法により、活性化血小板数の測定や血栓部位の測定が
可能であることが記載されている〔ジョンストン（John
ston）G.I.ら、ブラッド（Blood）、第69巻、第1401頁
（1987）、パラブリカ（Palabrica）T.M.ら、プロシー
ディングズオブザナショナルアカデミーオブ
サイエンシーズオブザ USA（Proc.Natl.Acad.Sc
i.USA）、第86巻、第1036頁（1989）〕。一方、GMP−14
0のDNA配列及びアミノ酸配列も報告され、それによると
膜結合型GMP−140だけでなく非結合型すなわち遊離型GM
P−140の存在の可能性が示唆されている〔ジョンストン
（Johnston）G.I.ら、セル（Cell）、第56巻、第1033頁
（1989）〕。

〔発明が解決しようとする課題〕

しかし、これらの報告はあくまでも血小板及び血管内
皮細胞の膜上でのGMP−140の変化について述べているに
すぎない。また、ヒト疾病と血小板膜上のGMP−140の変
化との関連は成人呼吸窮迫症候群（adult respiratory
distress syndrome）についてのみが報告されているに
すぎず〔ジョージ（George）J.N.ら、ジャーナルオブ
クリニカルインベスチゲーション（J.Clin.Inves
t.〕、第78巻、第340頁（1986）〕、その他の報告は、
あくまでも試験管内又は動物実験での結果である。

更に、遊離型GMP−140の存在についても仮説にしかす
ぎなかった。今までに遊離型GMP−140の存在を実証した
報告、更に遊離型GMP−140産生と特定の疾病との関連を
報告した例はない。

なお、今までにGMP−140の測定方法については競合ラ
ジオイムノアッセイ方法〔バーマン（Berman）C.I.ら、
メソッズインエンザイモロジー（Methods in Enzym
ology）、第169巻、第321頁（1989）〕及び２種のモノ
クローナル抗体を用いたサンドイッチエンザイムイムノ
アッセイ方法（特開平３−150465号公報）が報告されて
いるが、これらの報告は血小板膜から抽出精製した膜結
合型GMP−140の測定方法についてのみが記載されてお
り、遊離型GMP−140との反応性、更には疾病との関連に
ついては何ら記載されていない。

本発明の目的は、遊離型GMP−140の産生異常を伴う疾
病を遊離型GMP−140を指標として検出する新規な測定方
法、及び定量用キットを提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明の第１の発明はGMP−130
に関し、下記の理化学的性質を有することを特徴とす
る。

（イ）SDS−PAGE法により分析した分子量が130kDaであ
る。

（ロ）トリプシン分解により40kDaのフラグメントが得
られ、そのＮ末アミノ酸シークエンスが、AFQHQSであ
る。

（ハ）V₈プロテアーゼ分解により60kDaのフラグメント
が得られ、そのＮ末アミノ酸シークエンスが、HXLKKKXA
Lである。

また、本発明の第２の発明はGMP−130産生異常を伴う
疾病の検出方法に関し、血漿中の上記第１の発明におけ
る（イ）〜（ハ）の理化学的性質を有するGMP−130量を
正常値と比較測定することを特徴とする。

また、本発明の第３の発明は、前記第１の発明のGMP
−130産生異常を伴う疾病の検出用キットに関し、抗GMP
−130抗体を含有することを特徴とする。

本発明者らは上記現状にかんがみて、鋭意研究を重
ね、血漿試料中に遊離型GMP−140様物質、すなわち、GM
P−130の存在を発見した。次にこのGMP−130量を測定す
ることにより、GMP−130産生異常を伴う疾病が検出でき
ること、及び血漿中のGMP−130量が簡便に定量できるキ
ットを作製し、本発明を完成させた。

以下、本発明を詳細に説明する。

GMP−130産生異常を伴う疾病とは下記（１）、
（２）、（３）のごとき疾病である。

（１）GMP−130含量の比較的多い細胞、臓器自体の破壊
による疾患（２）GMP−130含量の比較的多い細胞、臓器自体の量的
異常による疾患（３）GMP−130含量の比較的多い細胞、臓器自体の質的
異常による疾患。

上記（１）、（２）、（３）を具体的に説明すると、
（１）の例としては血小板減少性紫斑病（thrombocytop
enic purpura）、全身性エリトマトーデス（systemic l
upas erythematosus）、播種性血管内凝固（disseminat
ed intravascular coagulation）等、（２）の例として
は再生不良性貧血、白血病、血小板増多症等、（３）の
例としては糖尿病、動脈硬化症、腎疾患、血栓症等が挙
げられる。

本発明者らは、ヒト血漿中に膜結合型GMP−140（分子
量140kDa）よりも低分子の分子量約130kDaのGMP−130が
遊離、存在していることを発見し、血小板減少症、白血
病、糖尿病、動脈硬化症、脳梗塞、腎疾患患者由来の血
漿中には、健常人よりも多量のGMP−130が存在すること
を確認し、GMP−130量がGMP−130産生異常を伴う疾病の
指標として使用できることを見出した。

本発明において使用可能な試料の例としては例えば血
漿、血尿等が挙げられる。

本発明において、試料中のGMP−130量を測定する方法
としては特に限定はないが、例えば、免疫学的方法が挙
げられる。免疫学的方法においては抗体を用いる方法が
あるが、この場合、１種又は２種以上の抗体を用いた免
疫学的測定方法が使用できる。抗体としてはモノクロー
ナル抗体及びポリクローナル抗体が用いられるが、その
特異性、親和性の点からモノクローナル抗体を使用する
ことが望ましい。一方、免疫学的測定方法によは酵素免
疫測定方法、ラジオイムノアッセイ方法、ラテックス凝
集方法、免疫比濁方法、蛍光・発光免疫測定方法、ウエ
スタンブロッティング方法等があるが、感度、簡便さ、
非放射能という点から酵素免疫測定方法が最も望まし
い。

GMP−130量の測定に用いる抗GMP−130抗体をキットと
しておくことで、試料中のGMP−130量を簡便に測定する
ことができる。キットに用いる試薬は溶液状でも良い
し、凍結乾燥品でも良い。

〔実施例〕

以下に本発明を実施例をもって説明するが、本発明が
以下の実施例の範囲のみに限定されるものではない。

実施例１抗GMP−130抗体の作製（１）血小板免疫法によるGMP−130に対するモノクロー
ナル抗体の作製新鮮な洗浄血小板２×10⁸個を生理食塩水0.1mlに溶解
し等量の完全フロイント・アジュバントを加え乳化さ
せ、Balb/cマウスの腹腔内に注射した。４週間後に洗浄
血小板２×10⁸個のみを同マウスの腹腔内に注射した。
その３日後にマウスより摘出した脾臓より脾臓細胞を
得、マウスミエローマ細胞（SP2/0）と細胞数10:1の比
で混合し、50％ポリエチレングリコール及び20％ジメチ
ルスルホキシドの存在下で１分間報知し、細胞融合を行
った。無血清DME〔ダルベッコの改変イーグル（Dulbecc
o′s Medified Eagle′ｓ）〕培地を加え希釈した後、
遠心分離によりその上清を除き、10％ウシ胎児血清含有
DME培地にて細胞を懸濁し、96穴マイクロタイタープレ
ートに１穴当り２×10⁴細胞となるように分注した。そ
の後１〜３日ごとに培地の半分量をHAT培地で交換し、1
0〜20日後に融合細胞（ハイブリドーマ）の生育してき
たウェルの培養上清を採取し、抗体産生の有無をELISA
法等により調べ、まずGMP−140に対する抗体を産生して
いるハイブリドーマを３株選択した。

これらハイブリドーマについて限界希釈法により２回
クローニングを行い、これらのハイブリドーマが産生す
るモノクローナル抗体のGMP−130との反応性をウエスタ
ンブロッティングにより確かめた。その結果、GMP−130
にも反応する抗GMP−130抗体を産生するハイブリドーマ
のクローンとして、クローン株PL7−６の１株を取得し
た。このモノクローナル抗体を大量に得るために、Balb
/cマウス腹腔内に約２×10⁷個のハイブリドーマを注射
し、腹水腫瘍を作らせ、10日後に腹水を採取し、この腹
水より、常法により、硫安塩析を行い、DEAEセルロース
カラムクロマトグラフィー処理により抗GMP−130モノク
ローナル抗体、すなわちPL7−６モノクローナル抗体を
精製した。EIAによりPL7−６モノクローナル抗体がIgG
1クラスであることを確認した。本クローン株はハイブ
リドーマPL7−６と命名し、Hybridoma PL7−６と表示
し、微工研菌寄第11073号（FERM P−1073）として、工
業技術院微生物工業技術研究所に寄託されている。

（２）可溶性抗原免疫法によるGMP−130に対するモノク
ローナル抗体の調製（２）−（１）洗浄血小板の調製正常人よりクエン酸添加採血した血液より700g15分間
遠心分離処理にて、血小板画分を得た後、RCD溶液（36m
M クエン酸、5mM グルコース、1mM MgCl₂、103mM NaC
l、20ng/mlプロスタグランジンE1）で２回遠心洗浄した
血小板を、更にアルブミンデンシティグラジェント
（albumin density gradient）法で洗浄し、Ca²⁺を含ま
ないヘペス−タイロード（HEPES−Tyrode）緩衝液で再
浮遊して洗浄血小板として調製した。

（２）−（２）GMP−140抗原の粗精製（２）−（１）で得られた洗浄血小板に終濃度１％と
なるようにトリトンＸ−100（ロームアンドハース
社）界面活性剤を添加し、その可溶性画家分を小麦胚凝
集素（Wheat germ agglutinin）固定化アガロースカラ
ムに通じて、カラムに吸着した画分を0.1Mグリシン−HC
l緩衝液（pH2.2）にて溶出させ、粗精製GMP−140抗原を
得た。

（２）−（３） GMP−140粗精製抗原を上記PL7−６を固定化した抗体
カラムに通じて、カラムに吸着した画分を0.1Mグリシン
−HCl緩衝液（pH2.2）にて溶出させ、精製GMP−140抗原
として回収した。

（２）−（４）実施例１−（２）−（３）で得られたGMP−140抗原50
μｇを生理食塩水0.1mlに溶解し等量の完全フロイント
・アジュバントを加え乳化させ、Balb/cマウスの腹腔内
に注射した。４週間後に抗原50μｇのみを同マウスの腹
腔内に注射した。その３日後にマウスより摘出した脾臓
より、脾臓細胞を得、マウスミエローマ細胞SP2/0と細
胞数10:1で混合し、50％ポリエチレングリコール及び20
％ジメチルスルホキシドの存在下で１分間報知し、細胞
融合を行った。無血清DME培地を加え希釈したのち、遠
心分離によりその上清を除き、10％ウシ胎児血清含有DM
E培地にて細胞を懸濁し、96穴マイクロタイタープレー
トに１穴当り２×10⁴細胞となるように分注した。その
後１〜３日ごとに培地の半分量をHAT培地で交換し、10
〜20日後にハイブリドーマの生育してきたウェルの培養
上清を採取し、抗体産生能の有無をELISA法等により調
べ、まずGMP−140に対する抗体を産生しているハイブリ
ドーマを３株選抜した。

これらのハイブリドーマについて限界希釈法により２
回クローニングを行い、これらのハイブリドーマが産生
するモノクローナル抗体のGMP−130との反応性をウエス
タンブロッティングにより確かめた。その結果GMP−130
にも反応する抗GMP−130抗体を産生するハイブリドーマ
のクローンとして、クローンかぶWGA−１の１株を取得
した。このモノクローナル抗体を大量に得るために、Ba
lb/cマウス腹腔内に約２×10⁷個のハイブリドーマを注
射し、腹水腫瘍を作らせ、10日後に腹水を採取し、常法
により硫安塩析を行い、DEAEセルロースカラムクロマト
グラフィーにより抗GMP−130モノクローナル抗体、すな
わちWGA−１モノクローナル抗体を精製した。

EIA法によりWGA−１モノクローナル抗体がIgG 1クラ
スであることを確認した。本クローン株はハイブリドー
マWGA−１と命名し、Hybridoma WGA−１と表示し、微工
研菌寄第11072号（FERM P−11072）として、工業技術院
微生物工業技術研究所に寄託されている。

また、WGA−１モノクローナル抗体と、実施例１のPL7
−６モノクローナル抗体がGMP−130に対して抗原認識部
位を異にすることは競合EIA法により確認した。

（３）GMP−130に対するポリクローナル抗体の作製実施例１−（２）−（３）で得られた精製GMP−140抗
原0.5mgを生理食塩水0.5mlに溶解し、これに等量の完全
フロイント・アジュバントを加え、乳化させた後ウサギ
皮下に注射した。２週間置きに、同量の抗原を不完全フ
ロイント・アジュバントと乳化させたものを４回皮下注
射し、最終免疫より10日後にその全血を採取し、60分間
室温で放置した後、遠心分離することにより抗GMP−140
抗体を含有する抗血清を得た。本抗血清から常法により
プロテイン（Protein）Ａカラムにより抗GMP−140ポリ
クローナル抗体を精製した。

この抗体の特異性と力価の当業者によりよく知られた
方法、すなわちELISA法、ウエスタンブロッティング法
により確かめ、該ポリクローナル抗体が、GMP−130をも
充分に認識することを確認し、抗GMP−130ポリクローナ
ル抗体として以下使用した。

実施例２ GMP−130の単離と一部アミノ酸配列からの同定ヒト正常血漿5lをWGGA−１抗体カラムに通し、吸着画
分を0.1Mグリシン−HCl（pH2.2）緩衝液で溶出した。本
画分をSDS−PAGEにより分析した結果、分子量130kDaに
単一なバンドを認めた。なお、同時に分析した血小板由
来GMP−140は分子量140kDaを示し、明らかに分子量は異
なっていた。この血漿より精製された分子量130kDaを示
すタンパク質、すなわちGMP−130は実施例１で作為した
GMP−140にも反応性を示す抗GMP−130抗体（WGA1、PL7
−６、ポリクローナル抗体）とウエスタンブロッティン
グ方法により強い反応性を示し、GMP−130とGMP−140の
抗原性は極めて近似していた。

次に本130kDaタンパク質をトリプシン分解して得られ
る40kDaフラグメント、及びV₈プロテアーゼ分解して得
られる60kDaフラグメントのＮ末アミノ酸シークエンス
分析を行った。その結果、各々のＮ末アミノ酸シークエ
ンスは、AFQHQS及びHXLKKKXALであった。これらはGMP−
140のアミノ酸シークエンス240−245及び118−126〔ジ
ョンストン（Johnston）G.I.ら、セル、第56巻、第1033
頁（1989）〕と同一であり、GMP−140とGMP−130の２ケ
所のアミノ酸シークエンスが一致したこと、その抗原性
が極めて近似していることにより、GMP−130はGMP−140
の血中遊離型と同定された。

実施例３２種のモノクローナル抗体を用いたサンドイッチEIA法
によるGMP−130量の測定（１）モノクローナル抗体結合ビーズの作製上記実施例１で得た個GMP−130モノクローナル抗体WG
A−１の1mgを含有する0.1Mりん酸緩衝液（pH8.0）50ml
にポリスチレンボール（積水化学社製、粒径6.35mm）10
0個を加え、５℃で16時間反応させ抗体をビーズに固定
化させた。ビーズを生理食塩水で洗浄後、１％ウシ血清
アルブミン（BSA）を含むリン酸緩衝生理食塩水に浸
し、５℃で一晩放置し、抗GMP−130モノクローナル抗体
結合ビーズを得た。

（２）酵素標識モノクローナル抗体の作製上記実施例１で得たGMP−130モノクローナル抗体PL7
−６にペルオキシダーゼ（ベーリンガー−マンハイム社
製）をナカネ（Nakane）らの方法〔ジャーナルオブ
ヒストケミストリーアンドシトケミストリー（J.Hi
stochem.Cytochem.）第22巻、第1084頁（1987）〕によ
って結合させ、標識抗体を得た。すなわち10mgのペルオ
キシダーゼを2mlの精製水に溶かし、0.1M過ヨウ素酸カ
リウムを0.2ml加える。室温で20分間反応させた後1mM酢
酸緩衝液（pH9.0）に対し４℃で一晩透析する。一方、P
L7−６抗体2mgを1.5mlのリン酸緩衝生理食塩水（pH7.
4）に溶かし、10mM炭酸緩衝液（pH9.5）に対し一晩４℃
で透析しておき、これを上記の過ヨウ素酸処理したペル
オキシダーゼと混合し、室温で２時間反応させた後、水
素化ホウ素ナトリウム（4mg/ml）を0.1ml添加し、４℃
で２時間反応後、リン酸緩衝生理食塩水（pH7.4）で平
衡化したウルトロゲルAcA22（LKB社製）を用いゲルろ過
により分画し、ペルオキシダーゼ活性と抗体活性の一致
する画分を集め、メルチオレートナトリウムを終濃度0.
01％となるように添加し、４℃で保存した。

（３）GMP−130の測定 EIA法は以下のようにして行った。試料300μｌをチュ
ーブに入れ、固相化抗体ビーズをチューブの中に１個ず
つ入れ37℃で20分間第一インキュベーションを行う。次
に、ビーズを3mlの生理食塩水で３回洗い、標識抗体液
（300倍希釈）300μｌをビーズの入ったチューブに入
れ、37℃で20分間第二インキュベーションを行う。

次に、ビーズを3mlの生理食塩水で３回洗いビーズを
別のチューブに移し、これに発色試薬（ｏ−フェニレン
ジアミン1mg/ml、H₂O₂の0.01％を含む0.1Mクエン酸緩衝
液pH5.0）を加え、室温で15分間反応させ、1NのH₂SO₄を
1ml加え反応を停止させた。波長492nmの吸光度を測定し
た。

GMP−130濃度の増加に伴って発色の吸光度は増加し、
本測定方法によりGMP−130の測定が可能であることが明
らかとなった。

実施例４ポリクローナル抗体を用いた競合RIA法によるGMP−130
量の測定（１）¹²⁵I標識GMP−130の調製バイオ−ラッド（Bio−Rad）社製のエンザイモビーズ
を用いて〔コストリー（Costrini）N.Y.らの方法、プロ
シーディングズオブザナショナルアカデミー
オブサイエンシーズオブザUSA、第76巻、第3242
頁（1979）〕により調製した。

（２）GMP−130の測定試料0.1mlを試験管に入れ、これに¹²⁵I標識抗原液0.1
mlを加え、更に第一抗体液（抗GMP−130ポリクローナル
抗体を含有する0.1％BSA/TBS）0.1mlを加え室温で２時
間反応させる。これに第二抗体液（３％やぎ抗ウサギIg
G抗体、2.5％PEG−6000を含有する0.1％BSA/TBS）1mlを
加え室温で10分間反応させ、1000gで20分間遠心分離し
上清を捨て、沈殿中の放射能活性を測定した。抗原GMP
−130の濃度が増加するに従って放射能活性は減少し、
本測定方法によってGMP−130の測定が可能であることが
示された。

実施例５ GMP−130測定EIAキットの製造と各種患者血漿中GMP−13
0量の測定（１）EIAキットの製造 EIAキット（１回分）の組成を以下に示す。

1.抗体固相化ビーズ１個〔工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されているハ
イブリドーマ微工研菌寄第11072号（FERM P−11072）が
産生するモノクローナル抗体WGA−１が固相化されたビ
ーズ〕 2.ペルオキシダーゼ標識抗体 0.3ml 〔工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されているハ
イブリドーマ微工研菌寄第11073号（FERM P−11073）が
産生するモノクローナル抗体PL7−６をペルオキシダー
ゼにより標識した〕 3.発色試薬 0.3ml （ｏ−フェニレンジアミンHClの10mg/ml、過酸化水素0.
01％を含むクエン酸緩衝液pH5.0） 4.反応停止液（1N硫酸） 1.0ml 5.標準品（GMP−130を４、２、１、0.5μg/ml含む１％B
SA/TBS）（２）患者血漿中GMP−130の測定上記EIAキットを用い健常人20例、糖尿病患者30例、
白血病患者５例、動脈硬化症７例、血小板減少症３例、
脳梗塞患者12例、腎疾患患者３例の血漿を用いて、実施
例３に基づいてGMP−130量を測定した。標準品を用いて
検量線を求めた結果第１図に示すような検量線が得られ
た。第１図のグラフにおいて、横軸はGMP−130濃度（mg
/l）、縦軸は吸光度（A₄₉₂nm）を示している。試料を測
定して得られた吸光度からこの検量線を用いてGMP−130
量を求めた。

血漿中GMP−130の測定結果を第２図に示す。すなわ
ち、第２図は本発明により測定した血漿中GMP−130量を
症例別にプロットしたグラフである。

第２図に示すように、健常人と糖尿病患者、白血病患
者、動脈硬化症、血小板減少症、脳梗塞、腎疾患患者の
血漿中のGMP−130量の分布に違いが見られた。すなわち
上記疾患患者において血漿中GMP−130量が健常人よりも
多いということが見出された。

なお、上記患者由来の血漿試料を超遠心分離処理（10
5,000g、60分）した後の上清を試料として測定したとこ
ろ、第２図とほぼ同様の値が得られ、上記患者血漿中に
は膜結合型GMP−140ではなくGMP−130が増加しているこ
とが確認された。

実施例６ GMP−130測定RIAキットの製造と各種患者血漿中GMP−13
0量の測定（１）RIAキットの製造 RIAキット（１回分）の組成を以下に示す。

1.¹²⁵I標識抗原液 0.1ml （20000cpmの¹²⁵I標識のGMP−130を含有する0.1％BSA/T
BS） 2.第一抗体液 0.1ml （ウサギ抗GMP−130抗体を含有する0.1％BSA/TBS） 3.第二抗体液 1ml （３％ヤギ抗ウサギIgG抗体、2.5％PEG−6000を含有す
る0.1％BSA/TBS） 4.標準液 0.1ml （GMP−130抗原を４、２、１、0.5μg/ml含有する１％B
SA/TBS）（２）患者血漿中GMP−130の測定上記RIAキットを用い、実施例４の方法で実施例５と
同一の試料を測定した結果、各試料中のGMP−130量は実
施例５とほぼ同一の値が得られた。

〔発明の効果〕

以上詳細に説明したように、本発明により、血漿中の
GMP−130量が血小板減少症、糖尿病、白血病、動脈硬化
症等に代表される様なGMP−130産生異常を伴う疾病のマ
ーカーとなることが見出され、上記疾病の新たな検出方
法及び定量用キットが提供された。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の実施例５におけるGMP−130検出用キッ
トで使用する検量線を示すグラフ、第２図は該キットを
用いて測定した血漿中のGMP−130濃度の測定結果を示す
図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者加藤郁之進滋賀県大津市瀬田３丁目４番１号寳酒造株式会社中央研究所内 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) G01N 33/53 G01N 33/68 G01N 33/50

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の理化学的性質を有するGMP−130。（イ）SDS−PAGE法により分析した分子量が130kDaであ
る。（ロ）トリプシン分解により40kDaのフラグメントが得
られ、そのＮ末アミノ酸シークエンスが、AFQHQSであ
る。（ハ）V₈プロテアーゼ分解により60kDaのフラグメント
が得られ、そのＮ末アミノ酸シークエンスが、HXLKKKXA
Lである。
【請求項２】血漿中の、請求項１に記載の（イ）〜
（ハ）の理化学的性質を有するGMP−130量を正常値と比
較測定することを特徴とするGMP−130産生異常を伴う疾
病の検出方法。
【請求項３】請求項１に記載の（イ）〜（ハ）の理化学
的性質を有するGMP−130産生異常を伴う疾病の検出用キ
ットであって、抗GMP−130抗体を含有することを特徴と
するGMP−130産生異常を伴う疾病の検出用キット