JP2678993B2 - 新規なアルキル化された成長ホルモン放出ペプチド及びそれにより哺乳動物を処理する方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 過去10年間に、ヒト膵島腫瘍（human pancretic isle
t tumor）起源の成長ホルモン放出因子（GRF）（hpGR
F）が単離され、特徴付けられそして（１）アール・ギ
レミン、ピー・グラゼアウ、ピー・ボーレン、エフ・エ
ッシュ、エヌ・リング及びダブリュ・ビー・ベーレンバ
ーグ［サイエンス、第218巻、585（1982）］［R.Guille
min,P.Grazeau,P.Bohlen,F.Esch,N.Ling,and W.B.Wehre
nberg［Science,218,585（1982）］及び（２）ジェー・
スピース、ジェー・リビエル、エム・トーナー及びダブ
リュ・ベイル［バイオケミストリー、第21巻、6037（19
82）］［J.Spiess,J.Rivier,M.Thorner,and W.Vale［Bi
ochemistry,21,6037（1982）］によって生体外及び生体
内でラット下垂体前葉（rat anterior pituitary）にお
ける成長ホルモン（GR）放出活性を有することが示され
た。天然hpGRFのアミド化断片である合成hpGRF（１−2
9）−NH₂も製造されそして文献（２）のスピース等によ
り完全な内在性の（full intrinsic）生物学的活性を有
することが報告された。

更に、動物における成長ホルモン（GH）放出の増加
は、天然hpGRFの、特に２及び３位置のＬ−アミノ酸を
Ｄ−アミノ酸に替えることにより達成されうることが見
出された［ランツ等、バイオケミカル・アンド・バイオ
フィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、第119
巻、第１号、1984、265−272頁（Lantz et al.,Biochem
ical and Biophysical Reseach Communications,Vol.11
9,No.1,1984,pp 265−272）；ベイル、ジュニアー（Val
e,Jr.）等、米国特許第4,528,190号］。同様に、ベイ
ル、ジュニアー等は、hpGRFの１及び２位置にＮ^α−メ
チル（またはＣ^α−メチル）置換アミノ酸を挿入するこ
とによりGH放出の増加が得られることを上記特許で開示
している。しかしながら、これらの研究者は、hpGRFペ
プチドのＮ−末端でメチルを越える長さのアルキル基で
塩してもいなければ、このような延長がhpGRFペプチド
の活性を高めるであろうということをなんら示唆しても
いない。

本発明は、新規な成長ホルモン放出ペプチド及び哺乳
動物においてその放出を高め及び成長ホルモンレベルを
増加させるためのその使用に関する。

意外にも、ペプチド鎖のＮ−末端におけるアルキル鎖
の伸長及び12及び21位置のリシンの如きペプチド鎖内の
塩基性アミノ酸の付随するアルキル化は、天然のhpGRF
（１−29）−NH₂、hpGRF（１−44）NH₂又は［Ｎ^α−Me
−Tyr¹］hpGRF（１−29）−NH₂により刺激されるGH放出
を越えるGH放出誘発の効能の実質的増加をもたらすこと
が今回見だされた。

故に本発明は、ナトリウムシアノボロハイドライド及
びアルデヒド類及びケトン類の使用によるGH放出ペプチ
ドの還元アルキル化により誘導される新規なモノアルキ
ル化及びパーアルキル化ペプチドを提供する。本発明の
これらのペプチドはヒトを含めて温血動物のGH放出を刺
激するのに非常に効果がある。これらの新規なペプチド
は、下記式Ｉ及びII、 式中、R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−
R₁₈−Phe、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His、
又はＮ^α−R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp、Ｄ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr、Ｄ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブ
チリック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、A
sn又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₉はSer又はArgであり、 R₁₀はArg又はGlnであり、 R₁₁はArg又はGlyであり、 R₁₂はAla又はSerであり、 R₁₃はArg又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₁₄はPhe、Val又はAlaであり、 R₁₅はAsn又はArgであり、 R₁₆はOH、NH₂、OR₁₈、Gly又はLeuであり、 R₁₇はOH、OR₁₈、NH₂、Glyであるか又はなにも置換基
がないことを示し、 R₁₈は、C₂−C₉アルキル（直鎖状又は分岐鎖状）、C₃
−C₆シクロアルキル、ベンジル、ナフチル、メチルナフ
チル又はモノ置換ベンジル、ここにこの置換基はハロゲ
ン、メトキシ、ニトロ又はシアノである、であり； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
合には、官能基は酸OHであるものとする、 を有するペプチド及びそれらの製薬学的に許容しうる塩
として定義される。

本発明の好ましいGRFペプチドは、 ［Ｎ^α−エチル−Tyr¹,Nle²⁷］GRF（１−29）NH₂、即
ち、 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,Nle²⁷］GRF（１−29）N
H₂、即ち、 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂、即
ち、 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,Ｄ−Ala²］GRF（１−29）
NH₂、即ち、 ［Ｎ^α−シクロヘキシル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂、即
ち ［Ｎ^α−ベンジル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂、即ち ［Ｎ^α−ノニル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂、即ち ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,N^ε−イソプロピル−Lyr
^12,21］GRF（１−29）NH₂、即ち ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,N^ε−イソプロピル−Lyr
^12,21］GRF（１−29）OH、即ち ［Ｎ^α−ペンチル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂、即ち 及び ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,N^ε−イソプロピル−Lyr
^12,21］GRF（１−29）OH、即ち を包含する。

本発明の他の成長ホルモンペプチドには、ヒト、豚
（swine）、畜牛（cattle）、ヤギ（goats）、ヒツジ及
びラットのパーアルキル化された、特にパーイソプロピ
ル化されたペプチドが包含される。これらのペプチドは
下記の如く特徴付けられる： ヒト ［Ｎ−イソプロピル−Tyr;N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21］GRF（１−44）NH₂、即ち、 豚（PORCINE） ［Ｎ−イソプロピル−Tyr¹;N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21］GRF（１−42）NH₂、即ち、 ウシ（BOVINE） ［Ｎ−イソプロピル−Tyr¹;N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21,39］GRF（１−42）NH₂、即ち、 やぎ（CAPRINE） ［Ｎ−イソプロピル−Tyr¹;N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21,41］GRF（１−44）NH₂、即ち、 羊（OVINE） ［Ｎ−イソプロピル−Tyr;N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21,41］GRF（１−44）NH₂、即ち、 ラツト ［Ｎ−イソプロピル−His;N^ε−イソプロピル−Lys¹²］
GRF（１−43）OH、即ち、 ウシ ［Ｎ−イソプロピル−Tyr−,N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21］GRF（１−29）NH₂、即ち、 羊 ［Ｎ−イソプロピル−Tyr,N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21］GRF（１−29）NH₂、即ち、 ラツト ［Ｎ−イソプロピル−His,N−イソプロピル−Lys¹²］GR
F（１−29）NH₂、即ち、 やぎ ［Ｎ−イソプロピル−Tyr¹,N^ε−イソプロピル−Lys−
^12,21］GRF（１−30）OH、即ち、 標準命名法に従って、キラルアミノ酸残基について前記
に使用されそして本明細書全体にわたり使用される略号
は下記のとおりである。

国際純正及び応用化学連合と国際生化学連合の生化学
命名委員会（IUPAC−IUB Commission on Biochemical N
omenclature）によるＬ−アミノ酸及びＤ−アミノ酸の
コード：バイオケミストリー、第11巻、1726−1732（19
72）。

His＝ヒスチシジン Val＝バリン Ser＝セリン Phe＝フェニルアラニン Asp＝アスパラギン酸 Thr＝トレオニン Ala＝アラニン Asn＝アスパラギン Tyr＝チロシン Gln＝グルタミン Arg＝アルギニン Met＝メチオニン Leu＝ロイシン Ile＝イソロイシン Lys＝リシン Glu＝グルタミン酸 Nle＝ノルロイシン NorVal＝ノルバリンＤ −Ala＝Ｄ−アラニンＤ −Asp＝Ｄ−アスパラギン酸Ｄ −Ser＝Ｄ−セリンＤ −Tyr＝Ｄ−チロシンＤ −His＝Ｄ−ヒスチシジンＤ −Phe＝Ｄ−フェニルアラニン Ｎ−Me−Ｄ−Ala＝Ｎ−メチル−Ｄ−アラニンＤ −Asp＝Ｄ−アスパラギン 更に、添字Ｌなしで本明細書で命名されているアミノ
酸残基は、特記しない限り、実際には天然に存在する絶
対配置Ｌを指すことに留意されるべきである。

本明細書で使用される他の略号は、 Fmoc＝フルオレニルメチルオキシカルボニル Boc＝ｔ−ブチルオキシカルボニル Tos＝ｐ−トルエンスルホニル hplc＝高速液体クロマトグラフィー tlc＝薄層クロマトグラフィー TFA＝トリフルオロ酢酸 Ac＝アセチル Ｚ＝ベンジルオキシカルボニル である。

本明細書で使用した“製薬学的に許容しうる塩”と
は、製薬工業で普通に使用される無毒性のアルカリ金属
塩、アルカリ土金属塩、アンモニウム塩、有機アンモニ
ウム及び金属塩を指す。これらの塩には、周知の方法に
より製造されるナトリウム塩、カリウム塩、リチウム
塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、亜鉛塩、アンモニ
ウム塩及びトリメチルアンモニウム塩が包含されるが、
これらに限定するものではない。上記用語は、塩酸塩、
臭化水素酸塩、酢酸塩、リン酸塩、硫酸塩、クエン酸
塩、ラウリン酸塩、ステアリン酸塩、パルミチン酸塩
（palmoate）及びオレイン酸塩の如き無毒性酸付加塩も
包含するが、これらに限定するものではない。これらの
酸付加塩も又周知の方法により製造される。

更に“有機アンモニウム”という用語は、各々１個乃
至20個の炭素原子を含む１個乃至４個の脂肪族基に結合
した正の電荷の窒素原子から成る基として定義される。
本発明の脂肪族アンモニウム塩の製造のために例示され
る有機アンモニウム基としては、モノアルキルアンモニ
ウム、ジアルキルアンモニウム、トリアルキルアンモニ
ウム、テトラアルキルアンモニウム、モノアルケニルア
ンモニウム、ジアルケニルアンモニウム、トリアルケニ
ルアンモニウム、モノアルキニルアンモニウム、ジアル
キニルアンモニウム、トリアルカノ−アンモニウム、C₅
−C₆シクロアルキルアンモニウム、ピペリジニウム、モ
ルホリニウム、ピロリジニウム、ベンジルアンモニウ
ム、及びその均等物が挙げられる。

本発明の前記した式（Ｉ）及び式（II）のペプチドの
固相合成は、ベックマン990自動ペプチド合成器で行う
ことができる。プレパラティプHPLCは、フルイッド・メ
ータリング・カンパニー（Fluid Metering Company）製
のポンプ及び脈動減衰装置（pulse damper）でポンピン
グされたホワットマンLRP−１逆相パッキング（C₁₈シリ
カ13−22μｍ）が入っている肉厚ガラスカラム（2.5×4
5cm）で行うことができる。アミノ酸分析は、ベックマ
ン119CL分析器で行うことができそしてシステムAA計算
積分器（System AA computing integrator）で行うこと
ができる。

本発明の化合物の製造に使用されるアミノ酸誘導体
は、バチェム・インコーポレーテッド（Bachem,Inc）、
カリフォルニア州、トーランス及びケミカル・ダイナミ
ックス・インコーポレーテッド（Chemical Dynamics.In
c）、ニュージャーシー州、ブラニフィールド、を含む
幾つかの化学品供給会社から入社可能である。

式（Ｉ）又は式（II）、配置、を有するペプチドは標
準固相法により都合良く製造することができる。例え
ば、Ｃ−末端保護されたアミノ酸は、クロロメチル樹
脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン（BH
A）樹脂又はｐ−メチルベンジルヒドリルアミン（ｐ−M
e−BHA）樹脂に結合させることができる。１つのこのよ
うなクロロメチル樹脂は、カリフォルニア州、リッチモ
ンドのバイオ・ラド・ラボラトリーズ（Bio Rad Labora
tories）により商品名バイオ−ビーズSX−１（Bio−Bea
ds SX−１）の下に販売されている。ヒドロキシメチル
樹脂の製造は、ボダンスキー等、ケミカル・インダスト
リーズ・（ロンドン）第38巻、1597（1966）［Bodansky
et al.,Chem．Ind．（London）38,1597（1966）］によ
り記載されている。BHA樹脂はピエッタ及びマーシャ
ル、ケミカル・コミュニケーションズ・650（1970））
［Pietta and Marshall,Chem．Commun.650（1970）］に
より記載されておりそしてカリフォルニア州、トーラン
スのバチェム・インコーポレーテッドから商業的に入手
可能である。

本発明の１つの態様に従えば、式（Ｉ）及び（II）の
ペプチドは、標準方法により固相ペプチド合成によって
製造されるが、ペプチド−樹脂をアンモニアで処理して
所望の側鎖保護されたアミドを得るか又はアルキルアミ
ンで処理して側鎖保護されたアルキルアミド又はジアル
キルアミドを得ることにより製造することもできる。

α−アミノ保護基は位置１のアミノ酸のためにはFmoc
でありそして側鎖保護基は、クロロメチル又はヒドロキ
シメチル樹脂が使用される場合には、適当な先行するア
ミノ酸のためにはＺの代わりにBocである。

次いで側鎖保護基は、HFで処理することによる通常の
方法で除去して遊離ペプチドアミド、アルキルアミド又
はジアルキルアミドを得ることができる。

本発明のエステル類を製造するに際しては、式（Ｉ）
及び式（II）（ＪがCOOHであるか又はR₁₆もしくはR₁₇が
OHである場合）の酸を製造するのに使用される樹脂を使
用することができそして側鎖保護されたペプチドは塩基
及び適当なアルコール、例えばメタノールで開裂するこ
とができる。次いで側鎖保護基は、HFで処理することに
よる通常の方法で除去してして所望のエステルを得るこ
とができる。Ｎ末端のアルキル化及び位置12、21及び41
のリシンの如きペプチド鎖内の塩基性アミノ酸の付随す
るアルキル化は、Ｎ末端及び樹脂内の塩基性アミノ酸か
ら保護基を除去し、このようにして製造されたペプチド
樹脂をDMF及び酢酸の存在下にアルカリ金属シアノボロ
ハイドライドによる還元に付しそしてこのようにして製
造された樹脂を適当なアルデヒド又はケトンでアルキル
化して所望のアルキル化されたGRF樹脂を得、次いでこ
のものをHFで開裂させてアルキル化GRFアミンを得るこ
とにより達成することができる 本発明のペプチドは、成長ホルモン欠乏症に関連した
症状の処置に有用である。それらは、羊毛成長を増加さ
せるため、肉生産性動物の成長の速度を増加させるた
め、肉生産性動物の肉品質（carcass quality）（即
ち、より多くのタンパク質及びより少ない脂肪）を改良
するため、肉生産性動物及び酪農場の乳牛における飼料
効率を改善するため及び酪農家畜群（dairy herds）の
ミルク生産を増加させるためにも有用である。

示された如く、本発明の化合物は、ヒトを含めて哺乳
動物の成長ホルモンの放出を増加させるのに有効であ
る。実際には、本発明の該化合物は、本発明の式（Ｉ）
又はIIの化合物0.000001乃至0.1mg/kg哺乳動物体重／日
を処理される哺乳動物に与えるのに十分な量で哺乳動物
に投与されると有効であることが見出された。

本発明を更に理解するために、主として更に特定的に
詳細に説明する目的で下記の実施例を挙げる。本発明は
特許請求の範囲に記載された以外は実施例により限定さ
れるものとみなすべきではない。

実施例１ Nle²⁷−GRF（11−29）−メチルベンズヒドリルアミン樹
脂 塩化物イオン形態にあるメチルベンズヒドリルアミン
−ポリスチレン樹脂［ベガ・バイオケミカルズ・インコ
ーポレーテッド（Vega Biochemicals,Inc）］（3.80g、
2.0モリモル）を、下記の反応サイクルを遂行するよう
にプログラムされたベックマン990Bペプチド合成器の反
応容器に入れる：（ａ）塩化メチレン、（ｂ）塩化メチ
レン中33％トリフルオロ酢酸（各１分及び25分２回）、
（ｃ）塩化メチレン、（ｄ）エタノール、（ｅ）塩化メ
チレン、（ｆ）クロロホルム中10％トリエチルアミン。

中和された樹脂を塩化メチレン中でBoc−N^G−トシル
−Arg（６ミリモル）及びジイソプロピルカルボジイミ
ド（６ミリモル）と共に１時間攪拌し、次いで得られる
アミノ酸樹脂を上記洗浄プログラムにおける工程（ａ）
乃至（ｇ）のサイクルに付す。次いで下記のアミノ酸
（６ミリモル）を同じ手順により引き続いてカップリン
グさせる（Gln及びAsnは等モルの１−ヒドロキシベンゾ
トリアゾールの存在下に）:Boc−Ｏ−ベンジル−Ser、B
oc−Nle、Boc−Ile、Boc−ベンジル−Asp−、Boc−Gl
n、Boc−Leu、Boc−Leu、Boc−Ｎ^ε−２−クロロカルボ
ベンゾキシ−Lys、Boc−トシル−Arg、Boc−Ala、Boc−
ベンジル−Ser、Boc−Leu、Boc−Gln、Boc−Gly、Boc−
Leu、Boc−Val、Boc−Cl−Ｚ−Lys、Boc−トシル−Ar
g。

乾燥の後、樹脂は7.4gの重量である。

実施例２ ［Ｎ^α−エチル−Tyr¹、Nle²⁷］GRF（１−29）−メチル
ベンズヒドリルアミン樹脂 実施例１に記載の樹脂（2.0g、0.5ミリモル）を、Boc
−２−BrZ−Tyr、Boc−ベンジル−Ser、Boc−Asn、Boc
−Ｏ−ベンジル−Thr、Boc−Phe、Boc−Ile−Boc−Al
a、Boc−ベンジル−Asp、Boc−Ala、及びBoc−Tyrと引
き続いてカップリングさせる。次いで最後のBoc基を除
去しそして樹脂を乾燥して2.65gの物質を得る。

DMF/1％酢酸に樹脂（1.23g、0.25ミリモル）を懸濁さ
せ、NaBH₃CN（３ミリモル）を加え、続いてアセトアル
デヒド（1ml）を加える。１時間の後、樹脂はカイザー
ニンヒドリン試験（Kaiser ninhydrin test）に対して
完全に負であった。

実施例３ ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹、Nle²⁷］GRF（１−29）メ
チルベンズヒドリルアミン樹脂 実施例１に記載の樹脂（2.0g、0.5ミリモル）を、Boc
−２−BrZ−Tyr、Boc−ベンジル−Ser、Boc−Asn、Boc
−Ｏ−ベンジル−Thr、Boc−Phe、Boc−Ile−Boc−Al
a、Boc−ベンジル−Asp、Boc−Ala及びBoc−Tyrと引き
続いてカップリングさせる。次いでこの最後のBoc基を
除去しそして樹脂を乾燥して2.65gの物質を得る。

DMF/1％酢酸に樹脂（1.23g、0.25ミリモル）を懸濁さ
せ、NaBH₃CN（３ミリモル）を加え、続いてアセトン（1
ml）を加える。１時間の後、樹脂はカイザーニンヒドリ
ン試験（Kaiser ninhydrin test）に対して完全に負で
あった。

実施例４ GRF（３−29）−メチルベンズヒドリルアミン樹脂 塩化物イオン形態にあるメチルベンズヒドリルアミノ
−ポリスチレン樹脂［ベガ・バイオケミカルズ・インコ
ーポレーテッド（Vega Biochemicals,Inc）］（5.80g、
3.0ミリモル）を、下記の反応サイクルを遂行するよう
にプログラムされたベックマン990Bペプチド合成器の反
応容器に入れる：（ａ）塩化メチレン、（ｂ）塩化メチ
レン中33％トリフルオロ酢酸（各１分及び25分２回）、
（ｃ）塩化メチレン、（ｄ）エタノール、（ｅ）塩化メ
チレン、（ｆ）クロロホルム中10％トリエチルアミン。

中和された樹脂を塩化メチレン中でBoc−N^G−トシル
−Arg（９ミリモル）及びジイソプロピルカルボジイミ
ド（９ミリモル）と共に１時間攪拌し、次いで得られる
アミノ酸樹脂を上記洗浄プログラムにおける工程（ａ）
乃至（ｇ）のサイクルに付す。次いで下記のアミノ酸
（９ミリモル）を同じ手順により引き続いてカップリン
グさせる（Gln及びAsnは等モルの１−ヒドロキシベンゾ
トリアゾールの存在下に）： Boc−Ｏ−ベンジル−Ser、Boc−Met、boc−Ile、Boc
−ベンジル−Asp、Boc−Gln、Boc−Leu、Boc−Leu、Boc
−Ｎ^ε−２−クロロカルボベンゾキシ−Lys、Boc−トシ
ル−Arg、Boc−Ala、Boc−ベンジル−Ser、Boc−Leu、B
oc−Gln、Boc−Gly、Boc−Leu、Boc−Val、Boc−Cl−Ｚ
−Lys、Boc−トシル−Arg、Boc−２−BrZ−Tyr、Boc−
ベンジル−Ser、Boc−Asn、Boc−Ｏ−ベンジル−Thr、B
oc−Phe、Boc−Ile−Boc−Ala、Boc−ベンジル−Asp。

乾燥した樹脂は18.5gの重量であった。

実施例５ ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹、Ｄ−Ala²］GRF（１−2
9）−メチルベンズヒドリルアミン樹脂 実施例４に記載の樹脂（1.5g、0.5ミリモル）をBoc−
Ｄ−Ala及びBoc−Tyrと引き続いてカップリングさせ
る。次いで最後のBoc基を除去しそして、樹脂をDMF/1％
酢酸に懸濁させ、これにNaBH₃CN（３ミリモル）を加
え、続いてアセトン（３ミリモル）を加える。18時間の
後、樹脂はカイザーニンヒドリン試験に対して完全に負
であった。

実施例６ ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹］GRF（１−29）−メチル
ベンズヒドリルアミン樹脂 実施例４に記載の樹脂（1.5g、0.5ミリモル）をBoc−
Ｄ−Ala及びBoc−Tyrと引き続いてカップリングさせ
る。次いで最後のBoc基を除去しそして、樹脂をDMF/1％
酢酸に懸濁させ、これにNaBH₃CN（３ミリモル）を加
え、続いてアセトン（３ミリモル）を加える。18時間の
後、樹脂はカイザーニンヒドリン試験に対して完全に負
であった。

実施例７ ［Ｎ^α−シクロヘキシル−Tyr¹］GRF（１−29）−メチ
ルベンズヒドリルアミン樹脂 実施例４に記載の樹脂（1.5g、0.5ミリモル）をBoc−
Ala及びBoc−Tyrと引き続いてカップリングさせる。次
いで最後のBoc基を除去しそして、樹脂をDMF/1％酢酸に
懸濁させ、NaBH₃CN（３ミリモル）を加え、続いてシク
ロヘキサノン（3ml）を加える。18時間の後、樹脂はカ
イザーニンヒドリン試験に対して完全に負であった。

実施例８ ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹］GRF（１−29）−メチル
ベンズヒドリルアミン樹脂 実施例４に記載の樹脂（1.6g、0.5ミリモル）をBoc−
Ala及びBoc−Tyrと引き続いてカップリングさせる。次
いで最後のBoc基を除去しそして、樹脂をDMF/1％酢酸に
懸濁させ、これにNaBH₃CN（３ミリモル）を加え、続い
てベンズアルデヒド（3ml）を加える。２時間の後、樹
脂はカイザーニンヒドリン試験に対して完全に負であっ
た。

実施例９ ［Ｎ^α−５−ノニル−Tyr¹］GRF（１−29）−メチルベ
ンズヒドリルアミン樹脂 実施例４に記載の樹脂（1.5g、0.5ミリモル）をBoc−
Ala及びBoc−Tyrと引き続いてカップリングさせる。次
いで最後のBoc基を除去しそして、樹脂をDMF/1％酢酸に
懸濁させ、これにNaBH₃CN（３ミリモル）を加え、続い
て５−ノナノン（3ml）を加える。３日の後、樹脂はカ
イザーニンヒドリン試験に対して全く正でありそして50
℃で一夜攪拌し、そうすると負の試験が得られる。

実施例10 ［Ｎ^α−３−ペンチル−Tyr¹］GRF（１−29）−メチル
ベンズヒドリルアミン樹脂 実施例４に記載の樹脂（1.6g、0.5ミリモル）をBoc−
Ala及びBoc−Tyrと引き続いてカップリングさせる。次
いで最後のBoc基を除去しそして、樹脂をDMF/1％酢酸に
懸濁させ、これにNaBH₃CN（３ミリモル）を加え、続い
て３−ペンタノン（3ml）を加える。18時間の後、樹脂
はカイザーニンヒドリン試験に対して全く正でありそし
て50℃で３時間攪拌し、そうすると負の試験が得られ
る。

実施例11 ［Ｎ^α−エチル−Tyr¹、Nle²⁷］GRF（１−29）−NH₂ 実施例２からのペプチド樹脂をアニソール（5ml）及
び無水フッ化水素（35ml）と０℃で混合しそして45分間
攪拌する。過剰のフッ化水素を乾燥窒素の流れの下に素
早く蒸発させそして遊離ペプチドを沈澱させ、エーテル
で洗浄する。次いでこの粗製ペプチドを小容量の2MAcOH
に溶解しそしてセファデックスＧ−５のカラム（2.5×1
00mm）で同じ緩衝液中で溶離する。紫外線吸収及び薄層
クロマトグラフィーにより主成分を含有する画分を次い
でプールし、小容量になるまで蒸発させてビダック（Vi
dac）オクタデシルシラン（15um）のカラム（1.5×45c
m）に加える。

これを、水中0.1％トリフルオロ酢酸中の15−45％ア
セトニトリルの線形勾配で溶離する。画分を薄層クロマ
トグラフィー及び分析溶高速液体クロマトグラフィーに
より検査しそしてプールして最大純度を得る。溶液を水
から繰り返し凍結乾燥すると、生成物34mgが白色をふわ
ふわした（fluffy）粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出だ
される。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突
質量スペクトル分析（fast atom bombardment mass spe
ctrometry）はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例12 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹、Nle²⁷］GRF（１−29）NH
₂ 実施例３からのペプチド樹脂をHFで開裂させそして実
施例11に記載の条件下に精製して生成物82mgが白色のふ
わふわした粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出さ
れる。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突質
量スペクトル分析はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例13 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹、Ｄ−Ala²］GRF（１−2
9）NH₂ 実施例５からのペプチド樹脂をHFで開裂させそして実
施例11に記載の条件下に精製して生成物80mgが白色のふ
わふわした粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出さ
れる。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突質
量スペクトル分析はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例14 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂ 実施例６からのペプチド樹脂をHFで開裂させそして実
施例11に記載の条件下に精製して生成物170mgが白色の
ふわふわした粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出さ
れる。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突質
量スペクトル分析はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例15 ［Ｎ^α−シクロヘキシル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂ 実施例７からのペプチド樹脂をHFで開裂させそして実
施例11に記載の条件下に精製して生成物132mgが白色の
ふわふわした粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出さ
れる。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突質
量スペクトル分析はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例16 ［Ｎ^α−ベンジル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂ 実施例８からのペプチド樹脂をHFで開裂させそして実
施例11に記載の条件下に精製して生成物82mgが白色のふ
わふわした粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出さ
れる。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突質
量スペクトル分析はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例17 ［Ｎ^α−５−ノニル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂ 実施例９からのペプチド樹脂をHFで開裂させそして実
施例11に記載の条件下に精製して生成物68mgが白色のふ
わふわした粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出さ
れる。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突質
量スペクトル分析はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例18 ［Ｎ^α−３−ぺンチル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂ 実施例10からのペプチド樹脂をHFで開裂させそして実
施例11に記載の条件下に精製して生成物143mgが白色の
ふわふわした粉末として得られる。

生成物はhplc及びtlcにより均一であることが見出さ
れる。酸加水分解物のアミノ酸分析及び高速原子衝突質
量スペクトル分析はヘプタペプチドの組成を確証する。

実施例19 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹、Ｎ^ε−イソプロピル−Ly
s¹²，²¹］GRF（１−29）NH₂ GRF（１−29）NH₂（35mg、１マイクロモル（μmo
l））をDMF/1％AcOH（3ml）及びアセトン（0.5ml）に溶
解する。次いでNaBH₃CN（4mg）を加えそして混合物を４
時間攪拌する。揮発成分を除去した後、ペプチドを実施
例11の条件下に精製して生成物25mgが白色のふわふわし
た粉末として得られる。生成物はhplc及びtlcにより均
一であることが見出される。酸加水分解物のアミノ酸分
析及び高速原子衝突質量スペクトル分析はヘプタペプチ
ドの組成を確証する。

実施例20 ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹、Ｎ^ε−イソプロピル−Ly
s^12,21］GRF（１−29）OH GRF（１−29）OH（35mg、１マイクロモル（μmol））
をDMF/1％AcOH（3ml）及びアセトン（0.5ml）に溶解す
る。次いでNaBH₃CN（4mg）を加えそして混合物を４時間
攪拌する。揮発成分を除去した後、ペプチドを実施例11
に記載の条件下に精製して生成物28mgが白色のふわふわ
した粉末として得られる。生成物はhplc及びtlcにより
均一であることが見出される。酸加水分解物のアミノ酸
分析及び高速原子衝突質量スペクトル分析はヘプタペプ
チドの組成を確証する。

実施例21 試験種としてラットを使用する哺乳動物における成長ホ
ルモン放出に対するペプチドの効果の評価 この評価においては、ダブリュ・マーフィー等、エン
ドクリノロジー第109巻、491|495（1980）［W.A.Murphy
et al.,Endocrinology 109:491−495（1980）］に記載
の方法を使用した。

成長ホルモン（GH）実験においては、雄ラット［チャ
ールスリバース（Charles Rivers）］を、刺激された血
漿GHレベルを維持する作用もするネムブタル （NEMBUT
AL ）（6mg/100g体重）で麻酔した。ラットに麻酔をか
けてから正確に30分の後、生理的食塩水又は生理的食塩
水中の試験ペプチド0.5mlをSCボラス（SC bolus）とし
て投与した。生理的食塩水中のペプチドの注入の15分後
頚静脈から1mlの血液試料を抜き取った。GHレベルはNIA
DDKDラットGH RIA成分（NIADDKD rat GH RIA componen
ts）を使用して決定された。

試験の結果を第１図及び下記の表に示す。

＃RIAのために２つの異なる参照調製物を使用した。
高い対照値を持つアッセイにはNIADDK−rGH−RP−１を
そしてより低い対照値を示すアッセイにはNIADDK−rGH
−RP−２を使用した。

＊プールされたGRF（１−29）NH₂標準又は同じバイオア
ッセイにおける標準実験に対する比較によって４点アッ
セイ（括弧内に示された95％CI限界）により標準として
GRF（１−29）NH₂を使用して薬効（potency）を計算す
る。95％のCI′ｓなしの薬効はプールされた標準応答に
対する１つの投与量の比較により評価する。

実施例22 実施例19の方法を使用して、下記のパーイソプロピル
化されたペプチドを製造する。

１）（Ｎ−イソプロピル）Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−
（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Met−Ser−Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−Arg−Asn−Gln
−Glu−Gln−Ala−Arg−Val−Arg−Leu−NH₂. ２）（Ｎ−イソプロピル）Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−
（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Met−Ser−Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−Arg−Asn−Gln
−Gly−Ala−Arg−Val−Arg−Leu−NH₂. ３）（Ｎ−イソプロピル）Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−
（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Met−Asn−Arg−Gln−Gly−Glu−Arg−Asn−Gln−Gly
−Ala−（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Val−Arg−Leu−N
H₂. ４）（Ｎ−イソプロピル）Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−
（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Met−Asn−Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−Arg−Asn−Gln
−Glu−Gln−Gly−Ala−（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−V
al−Arg−Leu−NH₂. ５）（Ｎ−イソプロピル）Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−
（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Met−Asn−Arg−Gln−Gln−Gly−Glu−Arg−Asn−Gln
−Glu−Gln−Gly−Ala−（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−V
al−Arg−Leu−NH₂. ６）（Ｎ−イソプロピル）His−Ala−Asp−Ile−Phe−T
hr−Ser−Ser−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−Gly−Gln−L
eu−Tyr−Ala−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu
−Leu−His−Glu−Ile−Met−Asn−Arg−Gln−Gln−Gly
−Glu−Arg−Asn−Gln−Glu−Gln−Arg−Ser−Arg−Phe
−Asn−OH. ７）（Ｎ−イソプロピル）Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−
（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Met−Asn−Arg−NH₂. ８）（Ｎ−イソプロピル）His−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Ile−Leu−Gly−Gln−Leu−Ala−Arg−（Ｎ−
イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile−Met−A
sn−Arg−NH₂. ９）（Ｎ−イソプロピル）His−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Ser−Tyr−Arg−Arg−Ile−Leu−G
ly−Gln−Leu−Tyr−Ala−Arg−（Ｎ−イソプロピル）L
ys−Leu−Leu−His−Glu−Ile−Met−Asn−Arg−NH₂. 10）（Ｎ−イソプロピル）Tyr−Ala−Asp−Ala−Ile−P
he−Thr−Asn−Ser−Tyr−Arg−（Ｎ^ε−イソプロピ
ル）Lys−Val−Leu−Gly−Gln−Leu−Ser−Ala−Arg−
（Ｎ^ε−イソプロピル）Lys−Leu−Leu−Gln−Asp−Ile
−Met−Ser−Arg−Gln−OH. 実施例23 HpGRF（１−29）−Gly−OH ケー・ホリキ等（K.Horiki et al）によりケミストリ
ー・レターズ（Chemistry Letters）、165−168（197
8）に記載の方法を使用して、メリーフィールドノクロ
ロメチル化樹脂（Merrifield chloromethylated resi
n）にBoc−GlyをDMF中のKFを使用して約60℃で24時間攪
拌しながらカップリングさせる。

脱ブロッキング（deblocking）及び中和の後、ペプチ
ド鎖を樹脂上に一つずつ組み立てる。各アミノ酸の脱ブ
ロッキング、中和及び付加は、一般に、リビエル・ジュ
ニア・ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサ
イエティー、第96巻、2986−2992（1974）［Rivier,J.
Ｊ．Amer．Chem．Soc.,96,2986−2992（1987）］に詳細
に記載されている方法に従って行なわれる。使用される
すべての溶媒は、不活性ガス例えばヘリウム又は窒素を
スパージングすることにより注意深く脱ガスして、Met
残基の硫黄を望ましくなく酸化するかもしれない酸素が
存在しないことを確実にする。

脱ブロッキングは好ましくは下記のスケジュールＡに
従って行なわれる： カップリングは好ましくは下記のスケジュールＢに従
って行なわれる： 簡単に言うと、樹脂1g当たり塩化メチレン中の１乃至
２ミリモルのBoc保護アミノ酸＋塩化メチレン中の1.0モ
ルのDOCI1当量を２時間使用する。

Boc−Arg（Tos）がカップリングされる場合には、50
％DMF及び塩化メチレンの混合物が使用される。Ser及び
Thrのヒドロキシル側鎖保護基としてはBzlエーテルが使
用される。Asn又はGlnのカルボキシル末端を活性化する
のにＰ−ニトロフェニルエステル（ONp）を使用するこ
ともできそして、例えば、Boc−Asn（ONp）はDMFと塩化
メチレンとの50％混合物中の１当量のHOBtを使用して一
夜カップリングさせることができ、この場合にはDOCは
添加されない。２−クロロ−ベンジルオキシカルボニル
（Cl−Ｚ）はLys側鎖の保護基として使用される。Argの
グアニジノ基及びHisのイミダゾール窒素を保護するの
にTosが使用されそしてGlu又はAsp側鎖カルボキシル基
はOBzlで保護される。次いで下記のブロックされたアミ
ノ酸を引き続いてカップリングさせる： Boc−N^G−トシル−Arg、Boc−Ｏ−Bzl−Ser、Boc−Me
t、Boc−Ile、Boc−ベンジル−Asp、Boc−Gln、Boc−Le
u、Boc−Leu、Boc−Ｎ^ε−２−クロロカルボベンゾキシ
（Cl−Ｚ）−Lys、Boc−トシル−Arg、Boc−Ala、Boc−
Ｏ−Bzl−Ser、Boc−Gln、Goc−Gly、Boc−Leu、Boc−V
al、Boc−Cl−Ｚ−Lys、Boc−トシル−Arg、Boc−Ｚ−B
r−Ｚ−Tyr、Box−Ｏ−Bzl−Ser、Boc−Asn、Boc−Ｏ−
Bzl−Thr、Boc−Phe、Boc−Ile、Boc−Ala、Boc−Bzl−
Asp、Boc−Ala及びBoc−Tyr。

保護されたペプチド−樹脂を開裂及び保護基除去する
ために、ペプチド−樹脂1g当たり1.5mlのアニソール、
0.5mlのメチルエチルスルフィド及び15mlのフッ化水素
（HF）で、一20℃で1/2時間および０℃で1/2時間ペプチ
ド−樹脂を処理する。高真空下にHFの除去の後、樹脂−
ペプチドの残りを乾燥ジエチルエーテル及びクロロホル
ムで交互に洗浄し、次いでペプチドを脱ガスした2N水性
酢酸で抽出しそしてろ過により樹脂から分離させる。

開裂及び保護基除去されたペプチドを次いで０−５％
酢酸に溶解しそして精製に付す。この精製はセファデッ
クスＧ−50微細ゲルろ過を含むことができる。

次いで、リビエル等、ペプチド：構造及び生物学的機
能、（1979）125−８頁及びマルキ等、ジャーナル・オ
ブ・アメリカン・ケミカル・ソサイエティー・第103
巻、3178（1981）［Rivier et al.,Peptide：Structure
and Biological Function，（1979）pp 125−8 and Ma
rki et al Ｊ．Am．Chem．Soc.103,3178（1981）］に記
載の如きプレパラティブ又は半プレパラティブHPLCによ
り上記ペプチドを更に精製する。ウオーター・アソシエ
ート プレプLC−500（Waters Associates prep LC−50
0）に適合するカートリッジにビダック（Vidac）からの
15−20μC₁₈シリカ（300A）を充填する。TEAP中のCH₃CN
の勾配を、リビエル.,ジュニア、ジャーナル・オブ・リ
クイッド・クロマトグラフィー、第１巻、343−367（19
78）［Rivier,J.,Ｊ．Liq．Chromatography １,343−3
67（1978）］に記載の如き低圧エルデツクス勾配メーカ
ー（Eldex gradient maker）により発生させる。クロマ
トグラフィー画分を注意深くHPLCにより監視しそして実
質的純度を示す画分のみをプールする。純度について独
立にチェックされた精製した画分の脱塩は、0.1％TFA中
のCH₃CNの勾配を使用して達成される。次いで中心カッ
トを凍結乾燥して、98％より高い純度の所望のペプチド
を得る。

本発明の主なる特徴及び態様は以下のとおりである。

1.式 式中、R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−
R₁₈−Phe、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His、
又はＮ^α−R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp、Ｄ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr、Ｄ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブ
チリック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、A
sn又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₉はSer又はArgであり、 R₁₀はArg又はGlnであり、 R₁₁はArg又はGlyであり、 R₁₂はAla又はSerであり、 R₁₃はArg又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₁₄はPhe、Val又はAlaであり、 R₁₅はAsn又はArgであり、 R₁₆はOH、NH₂、OR₁₈、Gly又はLeuであり、 R₁₇はOH、OR₁₈、NH₂、Glyであるか又はなにも置換基
がないことを示し、 R₁₈は、C₂−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖
状）、C₃−C₆シクロアルキル、ベンジル、ナフチル、メ
チルナフチル又はモノ置換ベンジル、ここにこの置換基
はハロゲン、メトキシ、ニトロ又はシアノである、であ
り； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
合には、官能基は酸OHであるものとする、 を有するペプチド及びそれらの製薬学的に許容しうる
塩。

2.構造： 式中、R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−
R₁₈−Phe、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His、
又はＮ^α−R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp、Ｄ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr、Ｄ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブ
チリック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、A
sn又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₁₈は、C₁−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖
状）、C₃−C₆シクロアルキル、ベンジル、ナフチル、メ
チルナフチル又はモノ置換ベンジル、ここにこの置換基
はハロゲン、メトキシ、ニトロ又はシアノである、であ
り； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
合には、官能基は酸OHであるものとする、 を有する上記１に記載のペプチド及びその製薬学的に許
容しうる塩。

3.構造： 式中、R₁、Ａ、Ｂ、R₂、Ｅ、Ｒ、R₄、R₃、R₅、R₆、
R₇、Ｉ及びR₈−R₁₇は上記１に記載のとおりである、 を有する上記１に記載のペプチド。

22.下記式： 式中、R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−
R₁₈−Phe、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His、
又はＮ^α−R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp、Ｄ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr、Ｄ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブ
チリック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、A
sn又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₉はSer又はArgであり、 R₁₀はArg又はGlnであり、 R₁₁はArg又はGlyであり、 R₁₂はAla又はSerであり、 R₁₃はArg又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₁₄はPhe、Val又はAlaであり、 R₁₅はAsn又はArgであり、 R₁₆はOH、NH₂、OR₁₈、Gly又はLeuであり、 R₁₇はOH、OR₁₈、NH₂、Glyであるか又は置換基がない
ことを示し、 R₁₈は、C₁−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖
状）、C₃−C₆シクロアルキル、ベンジル、ナフチル、メ
チルナフチル又はモノ置換ベンジル、ここにこの置換基
はハロゲン、メトキシ、ニトロ又はシアノである、であ
り； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
合には、官能基は酸OHであるものとする、 を有するペプチド及びそれらの製薬学的に許容しうる塩
0.000001乃至0.1mg/kg哺乳動物の体重／日の哺乳動物に
投与することを特徴とする、哺乳動物の成長ホルモンの
放出を増加させる方法。

23.前記ペプチドが、構造： 式中、R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−
R₁₈−Phe、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His、
又はＮ^α−R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp、Ｄ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr、Ｄ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブ
チリック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、A
sn又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₁₈は、C₁−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖
状）、C₃−C₆シクロアルキル、ベンジル、ナフチル、メ
チルナフチル又はモノ置換ベンジル、ここにこの置換基
はハロゲン、メトキシ、ニトロ又はシアノである、であ
り； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
合には、官能基は酸OHであるものとする、 を有する式１のペプチド及び及びその製薬学的に許容し
うる塩である上記22に記載の方法。

24.前記ペプチドが、 ［Ｎ^α−５−ノニル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂; ［Ｎ^α−エチル−Tyr¹,Nle²⁷］GRF（１−29）NH₂; ［Ｎ^α−３−ペンチル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂; ［Ｎ^α−ベンジル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂; ［Ｎ^α−シクロヘキシル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂; ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹］GRF（１−29）NH₂; ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,D−Ala²］GRF（１−29）N
H₂; ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,Nle²⁷］GRF（１−29）N
H₂; ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹−Ｎ^ε−イソプロピルLys
^12,21］GRF（１−29）NH₂;又は ［Ｎ^α−イソプロピル−Tyr¹,N^ε−イソプロピ
ル^12,21］GRF（１−29）OHである上記22に記載の方法。

28.下記構造： 式中、R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−
R₁₈−Phe、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His、
又はＮ^α−R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp、Ｄ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr、Ｄ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブ
チリック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、A
sn又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₉はSer又はArgであり、 R₁₀はArg又はGlnであり、 R₁₁はArg又はGlyであり、 R₁₂はAla又はSerであり、 R₁₃はArg又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₁₄はPhe、Val又はAlaであり、 R₁₅はAsn又はArgであり、 R₁₆はOH、NH₂、OR₁₈、Gly又はLeuであり、 R₁₇はOH、OR₁₈、NH₂、Glyであるか又はなにも置換基
がないことを示し、 R₁₈は、C₂−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖
状）、C₃−C₆シクロアルキル、ベンジル、ナフチル、メ
チルナフチル又はモノ置換ベンジル、ここにこの置換基
はハロゲン、メトキシ、ニトロ又はシアノである、であ
り； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
合には、官能基は酸OHであるものとする、 を有する合成ペプチド又はその無毒性塩を有効量動物に
投与することを特徴とする、動物の成長ホルモンの放出
を刺激する方法。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例21に記載の試験の結果を示すグラフであ
る。

フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭62−51698（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−260595（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−100596（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−174999（ＪＰ，Ａ) 米国特許4659693（ＵＳ，Ａ)

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式Ｉ又はII 式中、 R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−R₁₈−Ph
   e、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His又はＮ^α
   −R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp又はＤ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr又はＤ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブチ
   リック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、Asn
   又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₉はSer又はArgであり、 R₁₀はArg又はGlnであり、 R₁₁はArg又はGlyであり、 R₁₂はAla又はSerであり、 R₁₃はArg又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₁₄はPhe、Val又はAlaであり、 R₁₅はAsn又はArgであり、 R₁₆はOH、NH₂、OR₁₈、Gly又はLeuであり、 R₁₇はOH、OR₁₈、NH₂、Glyであるか又は置換基がないこ
   とを示し、 R₁₈はC₂−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖状）、C₃
   −C₆シクロアルキル又はベンジルであり； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
   であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
   ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
   合には、官能基は酸OHであるものとする、 からなるペプチド及びそれらの製薬学的に許容しうる
   塩。
2. 【請求項２】下記式Ｉ又はII 式中、 R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−R₁₈−Ph
   e、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His又はＮ^α
   −R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp又はＤ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr又はＤ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブチ
   リック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、Asn
   又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₉はSer又はArgであり、 R₁₀はArg又はGlnであり、 R₁₁はArg又はGlyであり、 R₁₂はAla又はSerであり、 R₁₃はArg又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₁₄はPhe、Val又はAlaであり、 R₁₅はAsn又はArgであり、 R₁₆はOH、NH₂、OR₁₈、Gly又はLeuであり、 R₁₇はOH、OR₁₈、NH₂、Glyであるか又は置換基がないこ
   とを示し、 R₁₈はC₂−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖状）、C₃
   −C₆シクロアルキル又はベンジルであり； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
   であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
   ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
   合には、官能基は酸OHであるものとする、 からなるペプチド及びそれらの製薬学的に許容しうる塩
   0.000001乃至0.1mg/kg哺乳動物の体重／日をヒト以外の
   哺乳動物に投与することを特徴とする、ヒト以外の哺乳
   動物の成長ホルモンの放出を増加させる方法。
3. 【請求項３】下記式Ｉ又はII 式中、 R₁はＮ^α−R₁₈−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−His、Ｎ^α−R₁₈−Ph
   e、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−Tyr、Ｎ^α−R₁₈−Ｄ−His又はＮ^α
   −R₁₈−Ｄ−Pheであり、 ＡはAla、Ｄ−Ala又はＮ−Me−Ｄ−Alaであり、 ＢはAsp又はＤ−Aspであり、 R₂はAsn、Ｄ−Asn又はSerであり、 ＥはTyr又はＤ−Tyrであり、 ＲはArg、Lys又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₄はIle又はValであり、 R₃はGly、α−アミノイソブチリック、α−アミノブチ
   リック、Ala、Gln、Asn、Leu、Ile又はValであり、 R₅はSer又はTyrであり、 R₆はHis又はGlnであり、 R₇はGlu又はAspであり、 ＩはMet、Leu、Nle、Ile、Val、norVal、Ser、Thr、Asn
   又はGlnであり、 ＪはNH₂又はCOOHであり、 R₈はSer又はAsnであり、 R₉はSer又はArgであり、 R₁₀はArg又はGlnであり、 R₁₁はArg又はGlyであり、 R₁₂はAla又はSerであり、 R₁₃はArg又はＮ^ε−R₁₈−Lysであり、 R₁₄はPhe、Val又はAlaであり、 R₁₅はAsn又はArgであり、 R₁₆はOH、NH₂、OR₁₈、Gly又はLeuであり、 R₁₇はOH、OR₁₈、NH₂、Glyであるか又は置換基がないこ
   とを示し、 R₁₈はC₂−C₉アルキル（直鎖状もしくは分岐鎖状）、C₃
   −C₆シクロアルキル又はベンジルであり； 但し、ペプチドがラットGRFである場合には、R₁₅はAsn
   であり且つR₁₆はOH、NH₂、OR₁₈又はGlyのみであること
   ができ；そしてGlyがカルボキシ末端アミノ酸である場
   合には、官能基は酸OHであるものとする、 からなる合成ペプチド又はその無毒性塩の有効量をヒト
   以外の動物に投与することを特徴とする、ヒト以外の動
   物の成長ホルモンの放出を刺激する方法。