JP2671693B2 - バイオセンサおよびその製造法 - Google Patents
バイオセンサおよびその製造法Info
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- JP2671693B2 JP2671693B2 JP4004592A JP459292A JP2671693B2 JP 2671693 B2 JP2671693 B2 JP 2671693B2 JP 4004592 A JP4004592 A JP 4004592A JP 459292 A JP459292 A JP 459292A JP 2671693 B2 JP2671693 B2 JP 2671693B2
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
- C12Q1/004—Enzyme electrodes mediator-assisted
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、試料中の特定成分につ
いて、迅速かつ高精度な定量を簡便に実施することので
きるバイオセンサおよびその製造法に関する。
いて、迅速かつ高精度な定量を簡便に実施することので
きるバイオセンサおよびその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、試料中の特定成分について、試料
液の希釈や撹拌などを行なう事なく簡易に定量しうる方
式として、つぎのようなバイオセンサが提案されている
（特開平１−１１４７４７号公報）。
液の希釈や撹拌などを行なう事なく簡易に定量しうる方
式として、つぎのようなバイオセンサが提案されている
（特開平１−１１４７４７号公報）。
【０００３】図７は従来のバイオセンサの断面図であ
り、以下に従来のバイオセンサとしてグルコースセンサ
の動作について説明する。
り、以下に従来のバイオセンサとしてグルコースセンサ
の動作について説明する。
【０００４】展開層３１上に滴下された試料液は緩衝性
塩担持層３０において緩衝性塩の緩衝作用により最も安
定的に酵素活性の得られるｐＨに調製された後、酵素担
持層２９においてグルコースオキシダーゼと試料液中の
グルコースとが特異的に反応する。同時に、電子受容体
担持層２８においてフェリシアン化カリウムが還元され
てフェロシアン化カリウムが生成する。このフェロシア
ン化カリウムの量は試料液中のグルコース濃度に比例す
る。つぎに、電極での反応を妨害するタンパク質などの
分子量の大きな物質が濾過層２６で濾過された後、試料
液は電極系２２、２３上に到達する。電極系２２、２３
によって試料液中のフェロシアン化カリウムの酸化電流
値を測定することにより、グルコース濃度を検知するこ
とができる。
塩担持層３０において緩衝性塩の緩衝作用により最も安
定的に酵素活性の得られるｐＨに調製された後、酵素担
持層２９においてグルコースオキシダーゼと試料液中の
グルコースとが特異的に反応する。同時に、電子受容体
担持層２８においてフェリシアン化カリウムが還元され
てフェロシアン化カリウムが生成する。このフェロシア
ン化カリウムの量は試料液中のグルコース濃度に比例す
る。つぎに、電極での反応を妨害するタンパク質などの
分子量の大きな物質が濾過層２６で濾過された後、試料
液は電極系２２、２３上に到達する。電極系２２、２３
によって試料液中のフェロシアン化カリウムの酸化電流
値を測定することにより、グルコース濃度を検知するこ
とができる。
【０００５】濾過層２６はポリカーボネート多孔体膜で
あり、電子受容体担持層２８、酵素担持層２９、緩衝性
塩担持層３０はそれぞれセルロース多孔体を担体として
用いている。
あり、電子受容体担持層２８、酵素担持層２９、緩衝性
塩担持層３０はそれぞれセルロース多孔体を担体として
用いている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】このような従来の構成
においては、電極系を含む基板面の濡れが必ずしも一様
とならないなどの点から、濾過層２６と絶縁性の基板２
１との間に気泡が残留し、応答に影響を与える場合があ
った。
においては、電極系を含む基板面の濡れが必ずしも一様
とならないなどの点から、濾過層２６と絶縁性の基板２
１との間に気泡が残留し、応答に影響を与える場合があ
った。
【０００７】また、緩衝性塩担持層３０と酵素担持層２
９とが接触しているため、バイオセンサが吸湿すると前
記２層の接触面において緩衝性塩と酵素が部分的に混合
され、化学的相互作用によって酵素活性が低下し、バイ
オセンサ保存性の劣化がみられる場合があった。
９とが接触しているため、バイオセンサが吸湿すると前
記２層の接触面において緩衝性塩と酵素が部分的に混合
され、化学的相互作用によって酵素活性が低下し、バイ
オセンサ保存性の劣化がみられる場合があった。
【０００８】さらに、従来構成では濾過層および各担持
層の担体として不溶性の多孔体を有しており、試料液が
バイオセンサに供給されてから電極上に達するまでに多
孔体中を通過する必要があった。そのため、センサ応答
を得るまでの時間が長くなり、また、時間的なばらつき
による応答値のばらつきがみられた。
層の担体として不溶性の多孔体を有しており、試料液が
バイオセンサに供給されてから電極上に達するまでに多
孔体中を通過する必要があった。そのため、センサ応答
を得るまでの時間が長くなり、また、時間的なばらつき
による応答値のばらつきがみられた。
【０００９】さらに、上記の従来構成では製造上きわめ
て工数が多いため、低コスト化が難しく、複数の多孔体
を組み立てるといった複雑な工程を有しているといった
課題があった。
て工数が多いため、低コスト化が難しく、複数の多孔体
を組み立てるといった複雑な工程を有しているといった
課題があった。
【００１０】本発明はこのような課題を解決するもの
で、高精度で保存安定性の高いバイオセンサとその製造
方法を提供するものである。
で、高精度で保存安定性の高いバイオセンサとその製造
方法を提供するものである。
【００１１】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に本発明は、絶縁性の基板上に少なくとも測定極と対極
からなる電極系を設け、前記電極系上に接して反応層を
設け、さらに、水素イオン濃度制御層を設けたものであ
る。
に本発明は、絶縁性の基板上に少なくとも測定極と対極
からなる電極系を設け、前記電極系上に接して反応層を
設け、さらに、水素イオン濃度制御層を設けたものであ
る。
【００１２】
【作用】上記手段により、バイオセンサの保存時におい
ては酵素を安定な条件下に保つことができる。また、試
料液のｐＨと最も高い酵素活性が得られるｐＨとは必ず
しも一致しないが、本発明によるとセンサに供給された
試料液が水素イオン濃度制御層に達することによって、
試料液のｐＨを高い酵素活性の得られる値に近づけるこ
とができる。試料液を予め緩衝液などでｐＨ調製する必
要がなく、簡易操作が可能となる。
ては酵素を安定な条件下に保つことができる。また、試
料液のｐＨと最も高い酵素活性が得られるｐＨとは必ず
しも一致しないが、本発明によるとセンサに供給された
試料液が水素イオン濃度制御層に達することによって、
試料液のｐＨを高い酵素活性の得られる値に近づけるこ
とができる。試料液を予め緩衝液などでｐＨ調製する必
要がなく、簡易操作が可能となる。
【００１３】さらに、酵素は一般に温度数十℃以上で取
り扱うとその活性が著しく低下するものが多いが、本発
明の製造法によると電子受容体を含む水素イオン濃度制
御層の形成を、酵素を含む反応層の形成工程以前に実施
するため、目的に応じた加温条件を自由に設定すること
が可能となる。すなわち、電子受容体を含む水素イオン
濃度制御層を加温して短時間に作製することや、温度制
御によって電子受容体などの結晶粒径や乾燥状態を最適
に制御することができる。
り扱うとその活性が著しく低下するものが多いが、本発
明の製造法によると電子受容体を含む水素イオン濃度制
御層の形成を、酵素を含む反応層の形成工程以前に実施
するため、目的に応じた加温条件を自由に設定すること
が可能となる。すなわち、電子受容体を含む水素イオン
濃度制御層を加温して短時間に作製することや、温度制
御によって電子受容体などの結晶粒径や乾燥状態を最適
に制御することができる。
【００１４】
【実施例】以下、本発明を実施例により説明する。
【００１５】（実施例１）バイオセンサの一例として、
フルクトースセンサについて説明する。図１は本発明の
バイオセンサの一実施例として作製したフルクトースセ
ンサのうちカバーおよびスペーサを除いた断面図であ
り、図２は、反応層および水素イオン濃度制御層を除い
たフルクトースセンサの分解斜視図、図３はフルクトー
スセンサの分解斜視図である。
フルクトースセンサについて説明する。図１は本発明の
バイオセンサの一実施例として作製したフルクトースセ
ンサのうちカバーおよびスペーサを除いた断面図であ
り、図２は、反応層および水素イオン濃度制御層を除い
たフルクトースセンサの分解斜視図、図３はフルクトー
スセンサの分解斜視図である。
【００１６】ポリエチレンテレフタレートからなる絶縁
性の基板１に、スクリーン印刷により銀ペーストを印刷
しリード２、３を形成した。さらに印刷法により、樹脂
バインダーを含む導電性カーボンペーストからなる電極
系（測定極４、対極５）および絶縁性ペーストからなる
絶縁層６を形成した。
性の基板１に、スクリーン印刷により銀ペーストを印刷
しリード２、３を形成した。さらに印刷法により、樹脂
バインダーを含む導電性カーボンペーストからなる電極
系（測定極４、対極５）および絶縁性ペーストからなる
絶縁層６を形成した。
【００１７】絶縁層６は測定極４および対極５の露出部
分の面積を一定とし、かつリ−ドを部分的に覆ってい
る。
分の面積を一定とし、かつリ−ドを部分的に覆ってい
る。
【００１８】このようにして電極部分を作製した後、親
水性高分子として、カルボキシメチルセルロ−ス（以下
ＣＭＣと略す）の０．５wt％水溶液を電極系上へ滴下、
乾燥させてＣＭＣ層を形成した。次に、このＣＭＣ層を
覆うように、酵素としてフルクトースデヒドロゲナーゼ
（ＥＣ１．１．９９．１１；以下ＦＤＨと略す）の水溶
液を展開し、乾燥させてＣＭＣ−ＦＤＨ層７（第１層）
を形成した。この場合、ＣＭＣとＦＤＨは部分的に混合
された状態で厚さ数ミクロンの薄膜状となっている。
水性高分子として、カルボキシメチルセルロ−ス（以下
ＣＭＣと略す）の０．５wt％水溶液を電極系上へ滴下、
乾燥させてＣＭＣ層を形成した。次に、このＣＭＣ層を
覆うように、酵素としてフルクトースデヒドロゲナーゼ
（ＥＣ１．１．９９．１１；以下ＦＤＨと略す）の水溶
液を展開し、乾燥させてＣＭＣ−ＦＤＨ層７（第１層）
を形成した。この場合、ＣＭＣとＦＤＨは部分的に混合
された状態で厚さ数ミクロンの薄膜状となっている。
【００１９】さらに、このＣＭＣ−ＦＤＨ層７上を完全
に覆うようにして、親水性高分子としてポリビニルピロ
リドン（以下ＰＶＰと略す）の０．５wt％エタノール溶
液を滴下し、乾燥させ、ＰＶＰ層８（第２層）を形成し
た。
に覆うようにして、親水性高分子としてポリビニルピロ
リドン（以下ＰＶＰと略す）の０．５wt％エタノール溶
液を滴下し、乾燥させ、ＰＶＰ層８（第２層）を形成し
た。
【００２０】ＰＶＰ層８を設けることによって、果肉な
どの固形成分を含む果汁などの液体を試料液とした場合
には、前記固形成分がＰＶＰ層８によって濾過され、電
極表面への吸着などを妨げることができ、その結果セン
サ応答の低下を防ぐことができる。さらに、酵素とフェ
リシアン化カリウムを分離することで、センサの保存特
性を著しく向上させることができる。
どの固形成分を含む果汁などの液体を試料液とした場合
には、前記固形成分がＰＶＰ層８によって濾過され、電
極表面への吸着などを妨げることができ、その結果セン
サ応答の低下を防ぐことができる。さらに、酵素とフェ
リシアン化カリウムを分離することで、センサの保存特
性を著しく向上させることができる。
【００２１】このＰＶＰ層８上へ、分散剤としてレシチ
ンの０．５wt％トルエン溶液中に電子受容体であるフェ
リシアン化カリウムの結晶を分散させたものを滴下、乾
燥させることによってフェリシアン化カリウム−レシチ
ン層９（第３層）を形成した。以上のようにしてフルク
トースセンサの反応層１５を形成した。この第１、第
２、第３の層間に介在物が存在しても本質的な機能には
影響ない。
ンの０．５wt％トルエン溶液中に電子受容体であるフェ
リシアン化カリウムの結晶を分散させたものを滴下、乾
燥させることによってフェリシアン化カリウム−レシチ
ン層９（第３層）を形成した。以上のようにしてフルク
トースセンサの反応層１５を形成した。この第１、第
２、第３の層間に介在物が存在しても本質的な機能には
影響ない。
【００２２】次に、図１あるいは図３に示すように、こ
の反応層１５と試料供給孔１３に相当する基板先端部の
間にリン酸緩衝液（ｐＨ＝４．５）を滴下、乾燥して水
素イオン濃度制御層１０を形成した。
の反応層１５と試料供給孔１３に相当する基板先端部の
間にリン酸緩衝液（ｐＨ＝４．５）を滴下、乾燥して水
素イオン濃度制御層１０を形成した。
【００２３】本フルクトースセンサに用いた酵素はｐＨ
＝４．５で酵素活性がほぼ最大値を示す（３７℃）。フ
ルクトース標準液はほぼ中性であるから、試料液が水素
イオン濃度制御層１０に達し、試料液のｐＨが４．５に
なることで、酵素活性を最大限に引き出すことが可能と
なる。また、試料液が酸またはアルカリ性の場合には、
試料液のｐＨをＦＤＨが最大活性を示す値に近くするこ
とができる。
＝４．５で酵素活性がほぼ最大値を示す（３７℃）。フ
ルクトース標準液はほぼ中性であるから、試料液が水素
イオン濃度制御層１０に達し、試料液のｐＨが４．５に
なることで、酵素活性を最大限に引き出すことが可能と
なる。また、試料液が酸またはアルカリ性の場合には、
試料液のｐＨをＦＤＨが最大活性を示す値に近くするこ
とができる。
【００２４】さらに、水素イオン濃度制御層１０と酵素
を分離することでセンサの保存特性を向上させることが
できる。上記のようにして反応層１５および水素イオン
濃度制御層１０を形成した後、カバー１２およびスペー
サー１１を図２あるいは図３中、一点鎖線で示すような
位置関係をもって接着した。
を分離することでセンサの保存特性を向上させることが
できる。上記のようにして反応層１５および水素イオン
濃度制御層１０を形成した後、カバー１２およびスペー
サー１１を図２あるいは図３中、一点鎖線で示すような
位置関係をもって接着した。
【００２５】カバーに透明な高分子材料を用いると、反
応層の状態や試料液の導入状況を外部から極めて容易に
判断することも可能である。カバーを装着することによ
って、試料液はセンサ先端の試料供給孔１３に接触させ
るだけの簡易操作で容易に反応層部分へ導入される。試
料液の供給量はカバーとスペーサーによって生じる空間
容積に依存するため、予め定量する必要もない。さら
に、測定中の試料液の蒸発を最小限に抑えることがで
き、精度の高い測定が可能となる。
応層の状態や試料液の導入状況を外部から極めて容易に
判断することも可能である。カバーを装着することによ
って、試料液はセンサ先端の試料供給孔１３に接触させ
るだけの簡易操作で容易に反応層部分へ導入される。試
料液の供給量はカバーとスペーサーによって生じる空間
容積に依存するため、予め定量する必要もない。さら
に、測定中の試料液の蒸発を最小限に抑えることがで
き、精度の高い測定が可能となる。
【００２６】こうして作製したフルクトースセンサに試
料液としてフルクトース標準液３μｌを試料供給孔より
供給し、２分後に対極を基準にして測定極にアノード方
向へ＋０．５Ｖのパルス電圧を印加し、５秒後の電流値
を測定した。
料液としてフルクトース標準液３μｌを試料供給孔より
供給し、２分後に対極を基準にして測定極にアノード方
向へ＋０．５Ｖのパルス電圧を印加し、５秒後の電流値
を測定した。
【００２７】水素イオン濃度制御層１０を通過して、望
ましいｐＨになった試料液が反応層１５へ到達すると、
フェリシアン化カリウム−レシチン層９、ＰＶＰ層８、
ＣＭＣ−ＦＤＨ層７が順次試料液に溶解する。試料液中
のフルクトースはＦＤＨによって酸化され、そこで移動
した電子によってフェリシアン化カリウムがフェロシア
ン化カリウムに還元される。次に、上記のパルス電圧の
印加により、生成したフェロシアン化カリウムの酸化電
流が得られ、この電流値は基質であるフルクトースの濃
度に対応する。
ましいｐＨになった試料液が反応層１５へ到達すると、
フェリシアン化カリウム−レシチン層９、ＰＶＰ層８、
ＣＭＣ−ＦＤＨ層７が順次試料液に溶解する。試料液中
のフルクトースはＦＤＨによって酸化され、そこで移動
した電子によってフェリシアン化カリウムがフェロシア
ン化カリウムに還元される。次に、上記のパルス電圧の
印加により、生成したフェロシアン化カリウムの酸化電
流が得られ、この電流値は基質であるフルクトースの濃
度に対応する。
【００２８】上記本発明のフルクトースセンサと上記フ
ルクトースセンサのうち水素イオン濃度制御層１０を除
いて作製したフルクトースセンサについて、測定時間２
分後の応答特性を図４に示す。図４中、ａは本発明のフ
ルクトースセンサ、ｂは本発明のうち水素イオン濃度制
御層１０を除いたフルクトースセンサの応答である。
ルクトースセンサのうち水素イオン濃度制御層１０を除
いて作製したフルクトースセンサについて、測定時間２
分後の応答特性を図４に示す。図４中、ａは本発明のフ
ルクトースセンサ、ｂは本発明のうち水素イオン濃度制
御層１０を除いたフルクトースセンサの応答である。
【００２９】本発明のフルクトースセンサ（ａ）は、基
質であるフルクトース２５ミリモル／ｌまで良好な直線
関係が得られた。一方、水素イオン濃度制御層１０を除
いたフルクトースセンサ（ｂ）については１０ミリモル
／ｌまでの直線性しか得られなかった。ａ，ｂともに直
線性の得られた範囲内において、本発明のフルクトース
センサによる応答（ａ）は水素イオン濃度制御層１０を
除いたフルクトースセンサの応答（ｂ）に比べて約２０
％の電流増加が認められた。
質であるフルクトース２５ミリモル／ｌまで良好な直線
関係が得られた。一方、水素イオン濃度制御層１０を除
いたフルクトースセンサ（ｂ）については１０ミリモル
／ｌまでの直線性しか得られなかった。ａ，ｂともに直
線性の得られた範囲内において、本発明のフルクトース
センサによる応答（ａ）は水素イオン濃度制御層１０を
除いたフルクトースセンサの応答（ｂ）に比べて約２０
％の電流増加が認められた。
【００３０】この結果より、本実施例の水素イオン濃度
制御層１０を設けることにより高感度で、測定範囲の広
いバイオセンサが得られることがわかる。
制御層１０を設けることにより高感度で、測定範囲の広
いバイオセンサが得られることがわかる。
【００３１】さらに、測定時間を１分にしたところ、本
発明のフルクトースセンサではフルクトース１５ミリモ
ル／ｌまで直線関係が得られ、同一試料についてセンサ
３０個を用いたときの変動係数も７％以下という再現性
のよい応答が得られた。
発明のフルクトースセンサではフルクトース１５ミリモ
ル／ｌまで直線関係が得られ、同一試料についてセンサ
３０個を用いたときの変動係数も７％以下という再現性
のよい応答が得られた。
【００３２】（実施例２）ポリエチレンテレフタレート
からなる絶縁性基板上に、実施例１と同様にしてスクリ
ーン印刷により図２に示した電極部分と同じ電極系を形
成した。この電極系上にＦＤＨおよびフェリシアン化カ
リウムをＣＭＣ０．５wt％に溶解させた混合水溶液を滴
下し、４０℃の温風乾燥器中で１０分間乾燥させて反応
層を形成した。
からなる絶縁性基板上に、実施例１と同様にしてスクリ
ーン印刷により図２に示した電極部分と同じ電極系を形
成した。この電極系上にＦＤＨおよびフェリシアン化カ
リウムをＣＭＣ０．５wt％に溶解させた混合水溶液を滴
下し、４０℃の温風乾燥器中で１０分間乾燥させて反応
層を形成した。
【００３３】このように親水性高分子、酵素および電子
受容体の混合溶液を一度に滴下、乾燥させることによっ
て製造工程を簡略化させることができる。また、乾燥時
の温度範囲としては、酵素の失活がみられず、かつ短時
間で乾燥可能な温度ということで２０℃から８０℃まで
が適している。
受容体の混合溶液を一度に滴下、乾燥させることによっ
て製造工程を簡略化させることができる。また、乾燥時
の温度範囲としては、酵素の失活がみられず、かつ短時
間で乾燥可能な温度ということで２０℃から８０℃まで
が適している。
【００３４】つぎに、実施例１と同様に反応層１５と試
料供給孔１３に相当する基板先端部の間にＭｃＩｌｖａ
ｉｎｅ緩衝液（０．１Ｍクエン酸−０．２Ｍリン酸二ナ
トリウム：ｐＨ＝４．５）を滴下、乾燥して水素イオン
濃度制御層１０を形成し、カバーと共に一体化してフル
クトースセンサを構成した。
料供給孔１３に相当する基板先端部の間にＭｃＩｌｖａ
ｉｎｅ緩衝液（０．１Ｍクエン酸−０．２Ｍリン酸二ナ
トリウム：ｐＨ＝４．５）を滴下、乾燥して水素イオン
濃度制御層１０を形成し、カバーと共に一体化してフル
クトースセンサを構成した。
【００３５】上記フルクトースセンサに、フルクトース
標準液３μｌを試料供給孔１３より供給し、２分後に対
極５を基準にして測定極４にアノード方向へ＋０．５Ｖ
のパルス電圧を印加し、５秒後の電流を測定すると試料
液中のフルクトース濃度に対応した応答電流値が得られ
た。また、同様に試料液を供給して９０秒後に電圧を印
加したところ、２分後とほぼ同じ応答電流が得られた。
さらに、同一試料についてセンサ３０個を用いたときの
変動係数も５％以下と非常に再現性のよい応答が得られ
た。
標準液３μｌを試料供給孔１３より供給し、２分後に対
極５を基準にして測定極４にアノード方向へ＋０．５Ｖ
のパルス電圧を印加し、５秒後の電流を測定すると試料
液中のフルクトース濃度に対応した応答電流値が得られ
た。また、同様に試料液を供給して９０秒後に電圧を印
加したところ、２分後とほぼ同じ応答電流が得られた。
さらに、同一試料についてセンサ３０個を用いたときの
変動係数も５％以下と非常に再現性のよい応答が得られ
た。
【００３６】これらは反応層がＦＤＨとフェリシアン化
カリウムの混在した状態にあるため、試料液に溶解後速
やかに均一な溶液中で反応が進行し、その結果測定に要
する時間が短縮され、かつセンサ応答電流のばらつきも
減少したものと推定される。
カリウムの混在した状態にあるため、試料液に溶解後速
やかに均一な溶液中で反応が進行し、その結果測定に要
する時間が短縮され、かつセンサ応答電流のばらつきも
減少したものと推定される。
【００３７】センサ応答電流値は上記フルクトースセン
サのうち水素イオン濃度制御層１０を除いて作製したフ
ルクトースセンサに比べて実施例１同様に、約２０％の
向上が認められた。
サのうち水素イオン濃度制御層１０を除いて作製したフ
ルクトースセンサに比べて実施例１同様に、約２０％の
向上が認められた。
【００３８】（実施例３）ポリエチレンテレフタレート
からなる絶縁性基板上に、実施例１および実施例２と同
様にしてスクリーン印刷により図２に示した電極部分と
同じものを形成した。つぎに、図１または図３に示すよ
うに、電極系と試料供給孔１３である基板先端部の間に
フェリシアン化カリウムをリン酸緩衝液（ｐＨ＝４．
５）に溶かした溶液を滴下、加熱乾燥してフェリシアン
化カリウムを含む水素イオン濃度制御層１０を形成し
た。
からなる絶縁性基板上に、実施例１および実施例２と同
様にしてスクリーン印刷により図２に示した電極部分と
同じものを形成した。つぎに、図１または図３に示すよ
うに、電極系と試料供給孔１３である基板先端部の間に
フェリシアン化カリウムをリン酸緩衝液（ｐＨ＝４．
５）に溶かした溶液を滴下、加熱乾燥してフェリシアン
化カリウムを含む水素イオン濃度制御層１０を形成し
た。
【００３９】この加熱温度によって乾燥に要する時間が
変化し、、その結果フェリシアン化カリウムの結晶粒径
をコントロールすることができる。乾燥時間を短くする
と結晶粒径は小さくなり、試料液への溶解速度が高めら
れる。よってセンサ応答速度を速くすることが可能であ
る。フェリシアン化カリウムが反応層中で酵素と共存し
ている場合には、加熱によって酵素の活性が低下するた
め、加熱乾燥の際の温度を自由に設定することはできな
い。
変化し、、その結果フェリシアン化カリウムの結晶粒径
をコントロールすることができる。乾燥時間を短くする
と結晶粒径は小さくなり、試料液への溶解速度が高めら
れる。よってセンサ応答速度を速くすることが可能であ
る。フェリシアン化カリウムが反応層中で酵素と共存し
ている場合には、加熱によって酵素の活性が低下するた
め、加熱乾燥の際の温度を自由に設定することはできな
い。
【００４０】さらに、水素イオン濃度制御層にフェリシ
アン化カリウムを含ませることは、酵素とフェリシアン
化カリウムを分離することになり、センサの保存特性を
著しく向上させることができる。
アン化カリウムを含ませることは、酵素とフェリシアン
化カリウムを分離することになり、センサの保存特性を
著しく向上させることができる。
【００４１】つぎに、電極系上にＦＤＨをＣＭＣ０．５
wt％に溶解させた混合水溶液を滴下し、４０℃の温風乾
燥器中で１０分間乾燥させて反応層を形成し、カバーと
共に一体化してフルクトースセンサを構成した。
wt％に溶解させた混合水溶液を滴下し、４０℃の温風乾
燥器中で１０分間乾燥させて反応層を形成し、カバーと
共に一体化してフルクトースセンサを構成した。
【００４２】このようにして作製したフルクトースセン
サに、フルクトース標準液３μｌを試料供給孔１３より
供給し、実施例１および実施例２と同様にして２分後の
センサ応答を測定すると試料液中のフルクトース濃度に
対応した応答電流値が得られた。また、同様に試料液を
供給して９０秒後に電圧を印加したところ、２分後とほ
ぼ同じ応答電流が得られた。これはフェリシアン化カリ
ウムの結晶粒径を小さくしたため、試料液への溶解が速
やかに進行したためである。
サに、フルクトース標準液３μｌを試料供給孔１３より
供給し、実施例１および実施例２と同様にして２分後の
センサ応答を測定すると試料液中のフルクトース濃度に
対応した応答電流値が得られた。また、同様に試料液を
供給して９０秒後に電圧を印加したところ、２分後とほ
ぼ同じ応答電流が得られた。これはフェリシアン化カリ
ウムの結晶粒径を小さくしたため、試料液への溶解が速
やかに進行したためである。
【００４３】（実施例４）バイオセンサの一例として、
スクロースセンサについて説明する。
スクロースセンサについて説明する。
【００４４】ポリエチレンテレフタレートからなる絶縁
性基板上に、実施例１、実施例２および実施例３と同様
にしてスクリーン印刷により図２に示した電極部分と同
じ電極系を形成した。この電極系上にＣＭＣの０．５wt
％水溶液を滴下、乾燥させてＣＭＣ層を形成した。つぎ
に、このＣＭＣ層上へインベルターゼ（ＥＣ３．２．
１．２６）、ムタロターゼ（ＥＣ５．１．３．３）、グ
ルコースオキシダーゼおよびフェリシアン化カリウムを
ＣＭＣ０．５wt％に溶解させた混合水溶液を滴下し、４
０℃の温風乾燥器中で１０分間乾燥させて反応層１５を
形成した。
性基板上に、実施例１、実施例２および実施例３と同様
にしてスクリーン印刷により図２に示した電極部分と同
じ電極系を形成した。この電極系上にＣＭＣの０．５wt
％水溶液を滴下、乾燥させてＣＭＣ層を形成した。つぎ
に、このＣＭＣ層上へインベルターゼ（ＥＣ３．２．
１．２６）、ムタロターゼ（ＥＣ５．１．３．３）、グ
ルコースオキシダーゼおよびフェリシアン化カリウムを
ＣＭＣ０．５wt％に溶解させた混合水溶液を滴下し、４
０℃の温風乾燥器中で１０分間乾燥させて反応層１５を
形成した。
【００４５】つぎに、実施例１と同様に反応層１５と試
料供給孔１３に相当する基板先端部の間にリン酸緩衝液
（ｐＨ＝７．４）を滴下、乾燥して水素イオン濃度制御
層１０を形成し、カバーと共に一体化してスクロースセ
ンサを構成した。
料供給孔１３に相当する基板先端部の間にリン酸緩衝液
（ｐＨ＝７．４）を滴下、乾燥して水素イオン濃度制御
層１０を形成し、カバーと共に一体化してスクロースセ
ンサを構成した。
【００４６】上記スクロースセンサに、スクロース標準
液３μｌを試料供給孔１３より供給し、２分後に対極５
を基準にして測定極４にアノード方向へ＋０．５Ｖのパ
ルス電圧を印加し、５秒後の電流を測定すると試料液中
のスクロース濃度に対応した応答電流値が得られた。
液３μｌを試料供給孔１３より供給し、２分後に対極５
を基準にして測定極４にアノード方向へ＋０．５Ｖのパ
ルス電圧を印加し、５秒後の電流を測定すると試料液中
のスクロース濃度に対応した応答電流値が得られた。
【００４７】（実施例５）バイオセンサの一例として、
フルクトースセンサについて説明する。
フルクトースセンサについて説明する。
【００４８】図５は本発明のバイオセンサの一実施例と
して作製したフルクトースセンサのうちカバー及びスペ
ーサを除いた断面図であり、図６は、反応層を除いたフ
ルクトースセンサの分解斜視図である。
して作製したフルクトースセンサのうちカバー及びスペ
ーサを除いた断面図であり、図６は、反応層を除いたフ
ルクトースセンサの分解斜視図である。
【００４９】ポリエチレンテレフタレートからなる絶縁
性基板１上に、上記実施例と同様にしてスクリーン印刷
により図６に示した電極部分と同じ電極系を形成した。
この電極系上にＦＤＨおよびフェリシアン化カリウムを
ＣＭＣ０．５wt％に溶解させた混合水溶液を滴下し、４
０℃の温風乾燥器中で１０分間乾燥させてＣＭＣ−ＦＤ
Ｈ−フェリシアン化カリウム層１６を形成した。
性基板１上に、上記実施例と同様にしてスクリーン印刷
により図６に示した電極部分と同じ電極系を形成した。
この電極系上にＦＤＨおよびフェリシアン化カリウムを
ＣＭＣ０．５wt％に溶解させた混合水溶液を滴下し、４
０℃の温風乾燥器中で１０分間乾燥させてＣＭＣ−ＦＤ
Ｈ−フェリシアン化カリウム層１６を形成した。
【００５０】次に、このＣＭＣ−ＦＤＨ−フェリシアン
化カリウム層１６を完全に覆うようにして、ＰＶＰの
０．５wt％エタノール溶液を滴下、乾燥させてＰＶＰ層
８を形成した。このＰＶＰ層８の上へリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝４．５）を滴下、乾燥させて水素イオン濃度制御層
１０を形成した。
化カリウム層１６を完全に覆うようにして、ＰＶＰの
０．５wt％エタノール溶液を滴下、乾燥させてＰＶＰ層
８を形成した。このＰＶＰ層８の上へリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝４．５）を滴下、乾燥させて水素イオン濃度制御層
１０を形成した。
【００５１】この場合、ＰＶＰが親水性高分子であるた
めに水素イオン濃度制御層１０は部分的にＰＶＰ層８と
混合された状態で薄膜状となっているが、撹拌等を伴わ
ないため完全には混合されず、巨視的には分離した層と
してみることができる。
めに水素イオン濃度制御層１０は部分的にＰＶＰ層８と
混合された状態で薄膜状となっているが、撹拌等を伴わ
ないため完全には混合されず、巨視的には分離した層と
してみることができる。
【００５２】このように、反応層上に接して水素イオン
濃度制御層を形成すると、水素イオン濃度制御層が試料
液に溶解してから反応層が溶解するまでの時間が短くな
り、その結果センサ応答に要する時間を短縮することが
できる。また、試料供給孔１２と空気孔１３を必ずしも
区別する必要がなくなり、試料供給孔１２を空気孔とし
て空気孔１３より試料液を供給することも可能である。
濃度制御層を形成すると、水素イオン濃度制御層が試料
液に溶解してから反応層が溶解するまでの時間が短くな
り、その結果センサ応答に要する時間を短縮することが
できる。また、試料供給孔１２と空気孔１３を必ずしも
区別する必要がなくなり、試料供給孔１２を空気孔とし
て空気孔１３より試料液を供給することも可能である。
【００５３】上記のようにして反応層および水素イオン
濃度制御層を形成した後、カバー１２およびスペーサー
１１を図６中、一点鎖線で示すような位置関係をもって
接着した。
濃度制御層を形成した後、カバー１２およびスペーサー
１１を図６中、一点鎖線で示すような位置関係をもって
接着した。
【００５４】上記のフルクトースセンサに試料液として
フルクトース標準液を試料供給孔１３より供給し、実施
例１と同様にしてセンサ応答を測定したところ、フルク
トース２５ミリモル／ｌまで良好な直線関係が得られ
た。さらに、同一試料についてセンサ３０個を用いたと
きの変動係数も６％以下という再現性のよい応答が得ら
れた。
フルクトース標準液を試料供給孔１３より供給し、実施
例１と同様にしてセンサ応答を測定したところ、フルク
トース２５ミリモル／ｌまで良好な直線関係が得られ
た。さらに、同一試料についてセンサ３０個を用いたと
きの変動係数も６％以下という再現性のよい応答が得ら
れた。
【００５５】（実施例６）ポリエチレンテレフタレート
からなる絶縁性基板１上に、実施例１と同様にしてスク
リーン印刷により図６に示した電極部分と同じものを形
成した。この電極系上にフェリシアン化カリウムおよび
ＣＭＣの水溶液を滴下、加熱乾燥してＣＭＣ−フェリシ
アン化カリウム層を形成した。
からなる絶縁性基板１上に、実施例１と同様にしてスク
リーン印刷により図６に示した電極部分と同じものを形
成した。この電極系上にフェリシアン化カリウムおよび
ＣＭＣの水溶液を滴下、加熱乾燥してＣＭＣ−フェリシ
アン化カリウム層を形成した。
【００５６】この際の加熱温度によって乾燥に要する時
間が変化し、その結果フェリシアン化カリウムの結晶粒
径をコントロールすることができる。乾燥時間を短くす
ると結晶粒径は小さくなり、試料液への溶解速度が高め
られる。よってセンサ応答速度を速くすることが可能で
ある。フェリシアン化カリウムが反応層中で酵素と共存
している場合には、高温加熱によって酵素の活性が低下
する場合が多いため、自由に加熱乾燥することはできな
い。
間が変化し、その結果フェリシアン化カリウムの結晶粒
径をコントロールすることができる。乾燥時間を短くす
ると結晶粒径は小さくなり、試料液への溶解速度が高め
られる。よってセンサ応答速度を速くすることが可能で
ある。フェリシアン化カリウムが反応層中で酵素と共存
している場合には、高温加熱によって酵素の活性が低下
する場合が多いため、自由に加熱乾燥することはできな
い。
【００５７】次に、このＣＭＣ−フェリシアン化カリウ
ム層を完全に覆うようにして、ＰＶＰの０．５wt％エタ
ノール溶液を滴下、乾燥させてＰＶＰ層を形成した。さ
らに、ＦＤＨ水溶液をＰＶＰ層上へ展開、乾燥させてＦ
ＤＨ層を形成した。
ム層を完全に覆うようにして、ＰＶＰの０．５wt％エタ
ノール溶液を滴下、乾燥させてＰＶＰ層を形成した。さ
らに、ＦＤＨ水溶液をＰＶＰ層上へ展開、乾燥させてＦ
ＤＨ層を形成した。
【００５８】次に、このＦＤＨ層を完全に覆うようにし
て、ヒドロキシエチルセルロース（以下、ＨＥＣと略
す）の０．５wt％エタノール溶液を展開、乾燥させてＨ
ＥＣ層を形成した。さらに、このＨＥＣ層上へリン酸緩
衝液（ｐＨ＝４．５）を滴下、乾燥させて水素イオン濃
度制御層を形成し、カバー、スペーサーと共に一体化し
てフルクトースセンサを作製した。
て、ヒドロキシエチルセルロース（以下、ＨＥＣと略
す）の０．５wt％エタノール溶液を展開、乾燥させてＨ
ＥＣ層を形成した。さらに、このＨＥＣ層上へリン酸緩
衝液（ｐＨ＝４．５）を滴下、乾燥させて水素イオン濃
度制御層を形成し、カバー、スペーサーと共に一体化し
てフルクトースセンサを作製した。
【００５９】この場合、ＰＶＰおよびＨＥＣは親水性高
分子であるために各層上に水溶液を滴下した際には各層
間は部分的に混合された状態で薄膜状となっているが、
撹拌等を伴わないため完全には混合されていない。した
がって、ＦＤＨ層および水素イオン濃度制御層と親水性
高分子層はそれぞれ分離した層としてみることができ
る。
分子であるために各層上に水溶液を滴下した際には各層
間は部分的に混合された状態で薄膜状となっているが、
撹拌等を伴わないため完全には混合されていない。した
がって、ＦＤＨ層および水素イオン濃度制御層と親水性
高分子層はそれぞれ分離した層としてみることができ
る。
【００６０】上記のように作製したフルクトースセンサ
に、フルクトース標準液を試料供給孔より供給し、実施
例１と同様にして２分後のセンサ応答をみると試料液中
のフルクトース濃度に対応した応答電流値が得られた。
また、同様に試料液を供給して９０秒後に電圧を印加し
たところ、２分後とほぼ同じ応答電流が得られた。これ
はフェリシアン化カリウムの結晶粒径がより小さくなっ
たため、試料液への溶解が速やかに進行したためであ
る。
に、フルクトース標準液を試料供給孔より供給し、実施
例１と同様にして２分後のセンサ応答をみると試料液中
のフルクトース濃度に対応した応答電流値が得られた。
また、同様に試料液を供給して９０秒後に電圧を印加し
たところ、２分後とほぼ同じ応答電流が得られた。これ
はフェリシアン化カリウムの結晶粒径がより小さくなっ
たため、試料液への溶解が速やかに進行したためであ
る。
【００６１】なお、上記実施例ではフルクトースセンサ
およびスクロースセンサについて示したが、本発明はグ
ルコースセンサやアルコールセンサ、乳酸センサ、コレ
ステロールセンサなど酵素の関与する反応系に広く用い
ることができる。
およびスクロースセンサについて示したが、本発明はグ
ルコースセンサやアルコールセンサ、乳酸センサ、コレ
ステロールセンサなど酵素の関与する反応系に広く用い
ることができる。
【００６２】上記実施例では酵素としてＦＤＨ、インベ
ルターゼ、ムタロターゼ、グルコースオキシダーゼを用
いたが、これ以外に、アルコールオキシダーゼ、乳酸オ
キシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、キサンチン
オキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ等も用いることが
できる。
ルターゼ、ムタロターゼ、グルコースオキシダーゼを用
いたが、これ以外に、アルコールオキシダーゼ、乳酸オ
キシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、キサンチン
オキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ等も用いることが
できる。
【００６３】さらに、上記実施例では親水性高分子とし
てＣＭＣ、ＰＶＰおよびＨＥＣを用いたが、これらに限
定されることはなく、ビニルアルコール系、セルロース
系、ビニルピロリドン系、ゼラチン系、アクリル酸塩
系、デンプン系、無水マレイン酸系、アクリルアミド
系、メタクリレート樹脂などをそれぞれ用いても同様の
効果が得られた。
てＣＭＣ、ＰＶＰおよびＨＥＣを用いたが、これらに限
定されることはなく、ビニルアルコール系、セルロース
系、ビニルピロリドン系、ゼラチン系、アクリル酸塩
系、デンプン系、無水マレイン酸系、アクリルアミド
系、メタクリレート樹脂などをそれぞれ用いても同様の
効果が得られた。
【００６４】また、上記実施例では、測定極と対極のみ
の二極電極系について述べたが、参照極を加えた三電極
方式にすれば、より正確な測定が可能である。
の二極電極系について述べたが、参照極を加えた三電極
方式にすれば、より正確な測定が可能である。
【００６５】さらに、電子受容体としては、上記実施例
に示したフェリシアン化カリウム以外に、ｐ−ベンゾキ
ノン、フェナジンメトサルフェート、フェロセンなども
使用できる。
に示したフェリシアン化カリウム以外に、ｐ−ベンゾキ
ノン、フェナジンメトサルフェート、フェロセンなども
使用できる。
【００６６】一方、水素イオン濃度制御層の形成にはに
はリン酸緩衝液、ＭｃＩｌｖａｉｎ緩衝液を用いたが、
これらに限定されることはなく、酵素の最大活性が得ら
れるｐＨを得る緩衝液を自由に用いることができる。酢
酸−酢酸ナトリウム緩衝液のような常温で液体のもので
あっても、保液性の高い高分子と共に用いることによっ
て水素イオン濃度制御層を構成することができる。
はリン酸緩衝液、ＭｃＩｌｖａｉｎ緩衝液を用いたが、
これらに限定されることはなく、酵素の最大活性が得ら
れるｐＨを得る緩衝液を自由に用いることができる。酢
酸−酢酸ナトリウム緩衝液のような常温で液体のもので
あっても、保液性の高い高分子と共に用いることによっ
て水素イオン濃度制御層を構成することができる。
【００６７】
【発明の効果】以上のように、本発明によれば試料液の
水素イオン濃度を予め調整することなく、酵素の特性に
応じた最適な水素イオン濃度を設定することができる。
その結果、より短い時間で高精度な測定のできるバイオ
センサが得られる。さらに、本発明の製造法によると電
子受容体を含む水素イオン濃度制御層を加温して短時間
に作製することや、温度制御によって電子受容体の状態
をコントロールすることができ、製造上大きな効果が得
られる。
水素イオン濃度を予め調整することなく、酵素の特性に
応じた最適な水素イオン濃度を設定することができる。
その結果、より短い時間で高精度な測定のできるバイオ
センサが得られる。さらに、本発明の製造法によると電
子受容体を含む水素イオン濃度制御層を加温して短時間
に作製することや、温度制御によって電子受容体の状態
をコントロールすることができ、製造上大きな効果が得
られる。
【図１】本発明のバイオセンサの一実施例のフルクトー
スセンサのカバーおよびスペーサを除いた断面図
スセンサのカバーおよびスペーサを除いた断面図
【図２】本発明のバイオセンサの一実施例のフルクトー
スセンサの反応層および水素イオン濃度制御層を除いた
分解斜視図
スセンサの反応層および水素イオン濃度制御層を除いた
分解斜視図
【図３】本発明のバイオセンサの一実施例のフルクトー
スセンサの分解斜視図
スセンサの分解斜視図
【図４】本発明のバイオセンサの実施例のフルクトース
センサの応答例を示した図
センサの応答例を示した図
【図５】本発明のバイオセンサの一実施例のフルクトー
スセンサのカバーおよびスペーサを除いた断面図
スセンサのカバーおよびスペーサを除いた断面図
【図６】本発明のバイオセンサの一実施例のフルクトー
スセンサの反応層および水素イオン濃度制御層を除いた
分解斜視図
スセンサの反応層および水素イオン濃度制御層を除いた
分解斜視図
【図７】従来例におけるバイオセンサの断面図
１ 絶縁性の基板 ２，３ リード ４ 測定極 ５ 対極 ６ 絶縁層 ７ ＣＭＣ−ＦＤＨ層 ８ ＰＶＰ層 ９ フェリシアン化カリウムーレシチン層 １０ 水素イオン濃度制御層 １１ スペーサー １２ カバー １３ 試料供給孔 １４ 空気孔 １５ 反応層 １６ ＣＭＣ−ＦＤＨ−フェリシアン化カリウム層 ２１ 絶縁性の基板 ２２ 測定極 ２３ 対極 ２４ 絶縁層 ２５ 粘着性構造体 ２６ 濾過層 ２７ 保持枠 ２８ 電子受容体担持層 ２９ 酵素担持層 ３０ 緩衝性塩担持層 ３１ 展開層
Claims (8)
- 【請求項１】 絶縁性の基板と、前記絶縁性の基板上に
形成された少なくとも測定極と対極からなる電極系と、
前記電極系上に接して位置する反応層と、前記絶縁性の
基板上に位置する電子受容体と、水素イオン濃度制御層
からなり、前記水素イオン濃度制御層が前記絶縁性の基
板上に直接形成されたかあるいは前記反応層上に直接形
成されたことを特徴とするバイオセンサ。 - 【請求項２】反応層が親水性高分子と酵素と電子受容体
を主体とする構成要素からなることを特徴とする請求項
１に記載のバイオセンサ。 - 【請求項３】絶縁性の基板上に、反応層が少なくとも親
水性高分子と酵素を含む第１の層、親水性高分子からな
る第２の層および少なくとも電子受容体を含む第３の層
の３層を形成したことを特徴とする請求項２に記載のバ
イオセンサ。 - 【請求項４】反応層が少なくとも親水性高分子と酵素を
含み、水素イオン濃度制御層に電子受容体が含まれるこ
とを特徴とする請求項１に記載のバイオセンサ。 - 【請求項５】水素イオン濃度制御層が電極系上に配置さ
れたことを特徴とする請求項１に記載のバイオセンサ。 - 【請求項６】反応層が少なくとも親水性高分子と酵素と
電子受容体を含み、反応層と水素イオン濃度制御層との
層間に親水性高分子層を配したことを特徴とする請求項
５に記載のバイオセンサ。 - 【請求項７】反応層が少なくとも親水性高分子と電子受
容体を含む第１の層と、少なくとも酵素を含む第２の層
からなり、水素イオン濃度制御層が前記第２の層上に位
置することを特徴とする請求項６に記載のバイオセン
サ。 - 【請求項８】 絶縁性の基板上に、少くとも測定極と対
極からなる電極系を設けた後、少なくとも電子受容体を
含む水素イオン濃度制御層を前記絶縁性の基板上の電極
系を除く位置に形成し、次に前記電極系上に少なくとも
親水性高分子と酵素を含む反応層を順次形成することを
特徴とするバイオセンサの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/845,073 US5192415A (en) | 1991-03-04 | 1992-03-02 | Biosensor utilizing enzyme and a method for producing the same |
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3-37261 | 1991-03-04 | ||
| JP3-221402 | 1991-03-04 | ||
| JP3-37259 | 1991-03-04 | ||
| JP3725991 | 1991-03-04 | ||
| JP3726191 | 1991-03-04 | ||
| JP22140291 | 1991-09-02 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05119013A JPH05119013A (ja) | 1993-05-14 |
| JP2671693B2 true JP2671693B2 (ja) | 1997-10-29 |
Family
ID=27289397
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4004592A Expired - Lifetime JP2671693B2 (ja) | 1991-03-04 | 1992-01-14 | バイオセンサおよびその製造法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0502504B1 (ja) |
| JP (1) | JP2671693B2 (ja) |
| DE (1) | DE69220591T2 (ja) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5264103A (en) * | 1991-10-18 | 1993-11-23 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biosensor and a method for measuring a concentration of a substrate in a sample |
| US5658443A (en) * | 1993-07-23 | 1997-08-19 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biosensor and method for producing the same |
| JP3061351B2 (ja) * | 1994-04-25 | 2000-07-10 | 松下電器産業株式会社 | 特定化合物の定量法およびその装置 |
| US5650062A (en) * | 1995-03-17 | 1997-07-22 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biosensor, and a method and a device for quantifying a substrate in a sample liquid using the same |
| US5582697A (en) * | 1995-03-17 | 1996-12-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biosensor, and a method and a device for quantifying a substrate in a sample liquid using the same |
| JP3498105B2 (ja) * | 1995-04-07 | 2004-02-16 | アークレイ株式会社 | センサ、その製造方法およびセンサを使用する測定方法 |
| US6059946A (en) * | 1997-04-14 | 2000-05-09 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Biosensor |
| US6344476B1 (en) | 1997-05-23 | 2002-02-05 | Bayer Corporation | Inhibition of p38 kinase activity by aryl ureas |
| US7329670B1 (en) | 1997-12-22 | 2008-02-12 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Inhibition of RAF kinase using aryl and heteroaryl substituted heterocyclic ureas |
| ES2157717B1 (es) * | 1998-03-26 | 2002-03-16 | Univ Valencia Estudi General | Procedimiento para preparar sensores de ph y membranas polimericas del tipo poli-fenacinicas sensibles a la concentracion de ion hidrogeno. |
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