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JP2023036869A - 抗ｃｄ１２３抗体、ならびにその複合体及び誘導体 - Google Patents

抗ｃｄ１２３抗体、ならびにその複合体及び誘導体 Download PDF

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Kovtun Yelena
タバーレス，ダニエル
Tavares Daniel
ルイ，リンギュン
Lingyun Rui
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Chittenden Thomas
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Abstract

【課題】種々のＣＤ１２３を発現する癌細胞、特に少なくとも１つの陰性予後因子を有する白血病に対して非常に強力である抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【解決手段】抗体またはその抗原結合断片であって、（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３－Ｒα抗原のアミノ酸１０１～３４６内のエピトープを結合し、及び（ｂ）抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３依存性増殖を阻害する、前記抗体またはその抗原結合断片を提供する。
【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条の下で、２０１５年６月２９日出願の米国特許仮出願第６２／１８６，１６１号、２０１６年５月１８日出願の米国特許仮出願第６２／３３８，２０３号、及び２０１６年６月７日出願の米国特許仮出願第６２／３４６，７３０号の出願日の利益を主張する。上述の関連出願のそれぞれの全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は概して、抗体、その抗原結合断片、ポリペプチド、及びＣＤ１２３抗原（インターロイキン３受容体のα鎖またはＩＬ－３Ｒα）に結合する免疫複合体に関する。本発明は、Ｂ細胞悪性腫瘍などの疾患を診断し、治療するためのこのようなＣＤ１２３結合分子を使用する方法にも関する。
ＣＤ１２３（インターロイキン３受容体α、ＩＬ－３Ｒα）は、インターロイキン３受容体（ＩＬ－３Ｒ）複合体の一部である、４０ｋＤａの分子である。サイトカイン、インターロイキン３（ＩＬ－３）は、赤血球性、骨髄球性及びリンパ球性前駆細胞内に多能性幹細胞の初期分化を引き起こす。ＣＤ１２３は、ＣＤ３４＋決定済み前駆細胞に発現するが、通常のＣＤ３４＋／ＣＤ３８－造血幹細胞（ＨＳＣ）によるものではない。ＣＤ１２３は、好塩基球、肥満細胞、形質細胞様樹状細胞によって発現され、単核細胞、マクロファージ及び好酸球によっていくらか発現され、好中球及び巨大核細胞によって低発現される、または発現されない。いくつかの非造血組織（例えば胎盤、精巣のライディッヒ細胞、特定の脳細胞成分及びいくつかの内皮細胞）も、ＣＤ１２３を発現する。しかし、そこでの発現は、ほとんどの場合、細胞質である。
ＣＤ１２３は、白血病性芽細胞（「白血病性芽球」）及び白血病性幹細胞（ＬＳＣ）によって発現されることが報告されている（Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ１４：１７７７－１７８４，２０００、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１１３：６６０３－６６１０，２００９）。ヒトの通常の前駆体細胞集団において、ＣＤ１２３は、通常のＨＳＣではなく、造血前駆細胞（ＨＰＣ）のサブセットによって発現される。ＣＤ１２３は報告によれば、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球によって、またより少ない程度で単球及び好酸球によっても発現される。
ＣＤ１２３は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を含む、広範囲にわたる血液悪性腫瘍の悪性細胞に過剰発現することが報告されている（Ｍｕｎｏｚ ｅｔ ａｌ．，Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ８６（１２）：１２６１－１２６９，２００１）。ＣＤ１２３の過剰発現は、ＡＭＬの不良な予後と関連している（Ｔｅｔｔａｍａｎｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１６１：３８９－４０１，２０１３）。ＡＭＬ及びＭＤＳは、白血病性幹細胞（ＬＳＣ）の小集団に起因し、それによって永続化すると考えられており、ＬＳＣは通常、休眠状態であり（すなわち、急速に分化する細胞でない）、したがって細胞死（アポトーシス）及び従来の化学療法剤に抵抗する。ＬＳＣはＣＤ１２３の過剰発現によって特徴づけられる一方で、ＣＤ１２３は、通常のヒト骨髄中の、対応する通常の造血幹細胞集団に存在しない（Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１１３：６６０３－６６１０，２００９、Ｊｏｒｄａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ１４：１７７７－１７８４，２０００）。ＣＤ１２３発現は、複数の他の悪性腫瘍／前悪性腫瘍、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）前駆細胞（急性転化ＣＭＬを含む）、ホジキンのリードステルンベルグ（ＲＳ）細胞、形質転換非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、
いくつかの慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（ＣＤ１１ｃ＋）、急性Ｔリンパ芽球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）のサブセット（１６％、大部分は未成熟、ほとんどの場合は成人）、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）（ＤＣ２）悪性腫瘍、及びＣＤ３４＋／ＣＤ３８－骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）骨髄細胞悪性腫瘍とも関連している。
ＡＭＬは、骨髄中の形質転換した骨髄球性前駆細胞の増殖及び蓄積によって特徴づけられるクローン性疾患であり、それは最終的に造血不全を引き起こす。ＡＭＬの発現率は年齢と共に増加し、高齢の患者は一般的に、若い患者より悪い治療結果を示す（Ｒｏｂａｋ
ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｔｈｅｒ．２：２３４９－２３７０，２００９）。残念ながら、現在ＡＭＬに罹患した大部分の成人は、その疾患で死亡する。
ＡＭＬの治療は最初に、寛解の導入（導入療法）に焦点に当てる。寛解が得られると、このような種の寛解を保証すること（寛解後療法または地固め療法）、及び場合によっては維持療法に焦点に当てるために、治療を転換する。ＡＭＬのための標準的な寛解の導入方針は、集中治療を忍容する患者の能力、及び化学療法単独による治癒の可能性に応じて、アントラサイクリン／シタラビンの組み合わせによる化学療法、続いて通常導入期またはヒト幹細胞移植中に使用した高用量の同じ薬剤による、いずれかの圧密化学療法である（Ｒｏｂｏｚ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２４：７１１－７１９，２０１２を参照のこと）。
導入療法でしばしば使用される薬剤は、シタラビン及びアントラサイクリンを含む。ＡｒａＣとしても既知のシタラビンは、癌細胞及び他の急速に分化する正常な細胞を、ＤＮＡ合成を阻害することによって死滅させる。ＡｒａＣ処理に付随する副作用は、白血球生成の減少に起因する感染に対する抵抗力の低下、血小板生成の減少に起因する出血、及び赤血球の潜在的減少に起因する貧血を含む。他の副作用は、悪心及び嘔吐を含む。アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、及びイダルビシン）は、ＤＮＡ及びＲＮＡ合成の阻害、ＤＮＡの高次構造の破壊、及び細胞傷害性酸素フリーラジカルの生成を含む、いくつかの作用様式を有する。アントラサイクリンの最も重大な副作用は心臓毒性であり、これは、投与される生涯投与量を制限し、かつそれらの有用性をある程度著しく制限する。
したがって、残念ながら、新規に診断されたＡＭＬ治療の実質的な進展にもかかわらず、患者の２０％～４０％では標準的な導入化学療法による寛解を得られず、最初の完全寛解に入る患者の５０％～７０％では３年以内に再発すると予想される。再発時の、または難治性疾患の患者についての最適な方法は、依然として不明である。幹細胞移植は、最初のまたは次の寛解のＡＭＬ患者において抗白血病治療の最も有効な形態として確立されている（Ｒｏｂｏｚ、２０１２）。
抗体－薬剤複合体（ＡＤＣ）及び他の細胞結合剤－薬物複合体は、様々な癌にも有効性を有する強力な種類の抗腫瘍剤として登場している。細胞結合剤－薬物複合体（例えばＡＤＣ）は、３つの異なる要素：細胞結合剤（例えば、抗体）、リンカー、及び細胞傷害性部分から一般的になる。従来、細胞傷害性薬部分は、抗体上のリジン残基またはシステイン残基に共有結合して、鎖間のジスルフィド結合の減少によって得られ、抗体分子の異なる位置に付着する様々な数の薬物を担持する、不均一混合物であるＡＤＣをもたらす。
本発明の複合体が、種々のＣＤ１２３を発現する癌細胞、特に少なくとも１つの陰性予後因子を有する白血病に対して非常に強力である驚くべき発見に、本発明は基づく。
本発明の一態様は、（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３－Ｒα抗原のアミノ酸１０１～３４
６内のエピトープを結合し、かつ（ｂ）抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３－依存性増殖を阻害する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＤ１２３抗原のアミノ酸１０１～２０４内のエピトープに結合する。別の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＣＤ１２３抗原のアミノ酸２０５～３４６内のエピトープに結合する。
本発明の関連態様は、（ａ）ヒトＣＤ１２３のアミノ酸１～１００内のエピトープを結合し、かつ（ｂ）０．１ｎＭ以下（例えば０．０８ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０３ｎＭ）のＩＣ５０値有する、抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３－依存性増殖を阻害する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、造血幹細胞ではなく、白血病性幹細胞または白血病性芽細胞の増殖を阻害する。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．３ｎＭ以下、例えば０．０１ｎＭ～０．３ｎＭ、０．０１ｎＭ～０．２ｎＭ、０．０１ｎＭ～０．１９ｎＭ、０．０１ｎＭ～０．１８ｎＭ、０．０１ｎＭ～０．１５ｎＭ、または０．０１ｎＭ～０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）で、ヒトＣＤ１２３抗原陽性細胞に結合する。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＣＤ１２３に結合する。特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．０５ｎＭ～０．３ｎＭ、０．０５ｎＭ～０．２ｎＭ、０．０５ｎＭ～０．１９ｎＭ、０．０５ｎＭ～０．１８ｎＭ、０．０５ｎＭ～０．１５ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄで、カニクイザルＣＤ１２３に結合することができる。特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、実質的に類似した結合親和性で、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３両方に結合する。例えば抗体またはその抗原結合断片は、０．０５ｎＭ～０．３ｎＭ、０．０５ｎＭ～０．２ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄで、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３に結合することができる。Ｋｄは、フローサイトメトリー、表面プラズモン共鳴、またはラジオイムノアッセイで測定することができる。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．５ｎＭ以下の濃度で、抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３－依存性増殖の少なくとも５０％を阻害する。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１、５、及び１２からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号２、３、６～１０、１３、及び１４からなる群から選択され、所望によりＣＤＲ３は配列番号４、１１、１５、及び７０からなる群から選択される、少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片、ならびに、ｂ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１６、１９、２０、２３及び７２からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号１７、２１、２４及び７１からなる群から選択され、所望によりＣＤＲ３は配列番号１８、２２、及び２５からなる群から選択される、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片、を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの重
鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１、５、及び１２からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号２、３、６～１０、１３、及び１４からなる群から選択され、所望によりＣＤＲ３は配列番号４、１１及び１５からなる群から選択される、少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片、ならびに、ｂ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１６、１９、２０及び２３からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号１７、２１、及び２４からなる群から選択され、所望によりＣＤＲ３は配列番号１８、２２、及び２５からなる群から選択される、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片、を含むことができる。
特定の実施形態で、保存的アミノ酸置換は、Ａｒｇによる、ＣＤＲ中の少なくとも１つのＬｙｓの置換を含む。
特定の実施形態で、抗体は、マウスＣＤＲ領域を含むＣＤＲ移植ヒト化抗体であり、前記抗体の１つ以上の（例えば１、２、３、４、５、６、７、または８つの）重鎖及び／または軽鎖フレームワーク領域バーニヤゾーン残基は、マウス由来である
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。特定の実施形態で、配列番号３４のＮ末端から２番目の残基であるＸａａは、Ｐｈｅである。他の実施形態で、ＸａａはＶａｌである。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、かつ配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓ（すなわち、ＥＵ／ＯＵナンバリング４４２位のＣｙｓ）であることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、ならびにｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態で、配列番号３８、３４、５６及び５４のＮ末端から２番目の残基であるＸａａは、Ｐｈｅである。他の実施形態で、ＸａａはＶａｌである。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態で、配列番号５４または５６のＮ末端から２番目の残基であるＸａａは、Ｐｈｅである。他の実施形態で、ＸａａはＶａｌである。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２または３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびにｂ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、または１０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに、ｂ）配列番号１９または２０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１３または１４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびにｂ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列
番号２４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含むことができる。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（好ましくは２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）からなる群から選択される参照ＶＨ配列と、少なくとも９５％同一のＶＨ配列、及び／またはｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（好ましくは２７、２９、３１、３５、及び３７）からなる群から選択される参照ＶＬ配列と、少なくとも９５％同一のＶＬ配列を含むことができる。特定の実施形態で、ＶＨ配列は、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（好ましくは２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）のうちの１つと、少なくとも９９％同一であり、かつ／またはＶＬ配列は、配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（好ましくは２７、２９、３１、３５、及び３７）のうちの１つと、少なくとも９９％同一である。特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（好ましくは２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）からなる群から選択されるＶＨ配列、及び／またはｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（好ましくは２７、２９、３１、３５、及び３７）からなる群から選択されるＶＬ配列を含むことができる。特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２６のＶＨ配列と配列番号２７のＶＬ配列、または配列番号２８のＶＨ配列と配列番号２９のＶＬ配列、または配列番号３０のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列、または配列番号３４のＶＨ配列と配列番号３５のＶＬ配列を含むことができる。
特定の実施形態で、抗体はマウス、非ヒト哺乳動物、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体である。例えばヒト化抗体は、ＣＤＲ移植抗体または再表面形成抗体であり得る。特定の実施形態で、抗体は完全長の抗体である。特定の実施形態で、その抗原結合断片とは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、小型抗体、Ｆ（ａｂ’）３、四重特異性抗体、三重特異性抗体、二重特異性抗体、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃである。
本発明の別の態様は、対象抗体またはその抗原結合断片のいずれかのＶＨ及びＶＬ配列を含む、ポリペプチドを提供する。ポリペプチドは、シュードモナス毒素ではないタンパク質との融合であり得る。
本発明の別の態様は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドを生成する、細胞を提供する。
本発明の別の態様は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドを生成する方法を提供し、前記方法は、（ａ）本発明の細胞を培養すること、及び（ｂ）培養細胞から抗体、その抗原結合断片、またはポリペプチドを単離することを含む。特定の実施形態で、細胞は真核細胞である。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000001
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＬ１へリジン残基によって共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗
原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ１は、以下の式：
Figure 2023036869000002
 で表される、
免疫複合体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000003
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌ’は、以下の式：
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、または
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｓ－Ｚｓ１－ （Ｂ３’）、によって表され、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、それぞれ独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
ｍは、１～６の整数であり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000004
 のうちのいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである。
特定の実施形態で、Ｒａ及びＲｂは両方ともＨであり、Ｒ５はＨまたはＭｅである。
特定の実施形態で、Ｐは、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。例えばＰは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択され得る。特定の実施形態で、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌ
ａである。
特定の実施形態で、Ｑは－ＳＯ３Ｍである。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000005
Figure 2023036869000006
Figure 2023036869000007
Figure 2023036869000008
Figure 2023036869000009
Figure 2023036869000010
Figure 2023036869000011
Figure 2023036869000012
Figure 2023036869000013
 もしくは
Figure 2023036869000014
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000015
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。
関連態様は、以下の式：
Figure 2023036869000016
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、へリジン残基によってＣｙＬ２に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ２は、以下の式：
Figure 2023036869000017
 で表される、
免疫複合体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ＮとＣの間の二重線
Figure 2023036869000018
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、及びそれが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｒｘ１及びＲｘ２は、それぞれ（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000019
 のうちのいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、－Ｈ＋またはカチオンである。
特定の実施形態で、Ｒｅは、ＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１及びＲｘ２は、独立して－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、式中、Ｒｆ及びＲｇは、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２、または３である。
特定の実施形態で、Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000020
Figure 2023036869000021
Figure 2023036869000022
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000023
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。
特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000024
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000025
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。特定の実施形態で、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
本発明の別の関連態様は、下記の式：
Figure 2023036869000026
 を有する免疫複合体を提供し、
式中、
ＣＢＡは、Ｌｙｓ残基によってＣｙＬ３に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
式中、ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ３は、以下の式：
Figure 2023036869000027
 によって表され、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000028
 のうちのいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである。
特定の実施形態で、ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨである。特定の実施形態で、ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅである。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000029
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数である。
特定の実施形態で、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000030
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
Ｗｓは、１、２、３または４であり、
ＪＣＢ’は、前記本発明の抗体もしくはその抗原結合断片または前記本発明のポリペプチドのＮ末端の、２－ヒドロキシエチルアミン部分（２－ヒドロキシエチルアミン部分は、セリン、スレオニン、ヒドロキシリジン、４－ヒドロキシオルニチン、または２，４－ジアミノ－５－ヒドロキシ吉草酸残基の一部であり得る）の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ１のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、かつＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000031
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ１に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000032
 で表される、
免疫複合体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000033
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｚｄ１は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－、または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
ｒ及びｒ’は、独立して１～６の整数であり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌは、－ＮＲ９－（ＣＲａＲｂ）ｒ”または不在であり、
ｒ”は、０～６の整数である。
簡単に説明するために、下記の各例でＮ末端残基としてＳｅｒを挙げる際、セリンの一部としての他の２－ヒドロキシエチルアミン部分、トレオニン、ヒドロキシリジン、４－ヒドロキシオルニチンまたは２，４－ジアミノ－５－ヒドロキシ吉草酸残基は、該当する場合、特にＴｈｒに関して企図されることを理解すべきである。
特定の実施形態で、Ｒａ及びＲｂは両方ともＨであり、Ｒ５及びＲ９は両方ともＨまたはＭｅである。
特定の実施形態で、Ｐは、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。例えばＰは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａからなる群から選択され得る。特定の実施形態で、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。特定の実施形態で、Ｑは－ＳＯ３Ｍである。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000034
Figure 2023036869000035
Figure 2023036869000036
Figure 2023036869000037
Figure 2023036869000038
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000039
 は単結合または二重結合を表するが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000040
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
ＪＣＢ’は、前記本発明の抗体もしくはその抗原結合断片または前記本発明のポリペプチドのＮ末端の、２－ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ２のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、ＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000041
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ２に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ２は、以下の式：
Figure 2023036869000042
 で表される、
免疫複合体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000043
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンであり、
Ｒｘ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌ１は、以下の式：
Figure 2023036869000044
 によって表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ２の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚａ２は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は、各出現において、独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～１０の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とする。
特定の実施形態で、－Ｌ１－は、以下の式：
Figure 2023036869000045
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒは、Ｈまたは－ＳＯ３Ｍである。
特定の実施形態で、Ｒｅは、ＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１は、－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｘ２は、－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｆ及びＲｇは、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２また
は３である。特定の実施形態で、Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000046
Figure 2023036869000047
Figure 2023036869000048
Figure 2023036869000049
Figure 2023036869000050
Figure 2023036869000051
Figure 2023036869000052
Figure 2023036869000053
Figure 2023036869000054
Figure 2023036869000055
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000056
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。
特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000057
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。
特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000058
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。特定の実施形態で、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000059
 を有する免疫複合体を提供し、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
ＪＣＢ’は、前記本発明の抗体もしくはその抗原結合断片または前記本発明のポリペプチドのＮ末端の、２－ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ３のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、かつＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000060
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ３に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ３は、以下の式：
Figure 2023036869000061
 で表され、
式中、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｌ１は、以下の式：
Figure 2023036869000062
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ３の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚａ２は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は、各出現において、独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～１０の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とする。
特定の実施形態で、ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨである。特定の実施形態で、ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅである。
特定の実施形態で、－Ｌ１－は、以下の式：
Figure 2023036869000063
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒは、Ｈまたは－ＳＯ３Ｍであり、Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000064
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＤＭは、以下の式：
Figure 2023036869000065
 で表される。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000066
 を有する免疫複合体を提供し、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
ＪＣＢ’は、前記本発明の抗体もしくはその抗原結合断片または前記本発明のポリペプチドのＮ末端の、２－ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ４のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、かつＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000067
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ４に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ４は、以下の式：
Figure 2023036869000068
 で表され、
Ｌ１’は、以下の式：
Figure 2023036869000069
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ４の－ＮＭｅ－基に共有結合される部位であり、
Ｚｂ１及びＺｂ２は両方とも不在であり、またはＺｂ１及びＺｂ２のうちの１つは不在であり、他方は－ＣＨ２－Ｏ－もしくは－Ｏ－ＣＨ２－であり、
Ｚｂ１’及びＺｂ２’は、それぞれ独立して不在であるか、－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－ＣＨ２－、－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－、または－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－であり、
Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｎ１及びｍ１は、それぞれ独立して１～６の整数であり、
Ｅ１及びＥ２のうちの１つは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、他方は、－ＮＲ９－であり、またはＥ１及びＥ２のうちの１つは－Ｃ（＝Ｏ）－もしく－ＮＲ９－であり、他方は不在であり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５及びＲｂ６は、各出現において、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルである。
特定の実施形態で、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５、及びＲｂ６は、すべてＨである。特定の実施形態で、Ｒ９はＨである。
特定の実施形態で、Ｚｂ１’及びＺｂ２’は両方とも不在であるか、またはＺｂ１’は－ＣＨ２－Ｏ－であり、Ｚｂ２’は不在であるか、または、Ｚｂ１’は－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－であり、Ｚｂ２’はＯ－ＣＨ２－であるかもしくは不在である。
特定の実施形態で、Ｐは、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。例えばＰは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択され得る。特定の実施形態で、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａ
ｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、及びＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
特定の実施形態で、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000070
Figure 2023036869000071
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＤＭは、以下の構造式：
Figure 2023036869000072
 で表される。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000073
 で表される免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、システイン残基によってＣｙＣ１に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ１は、以下の式：
Figure 2023036869000074
 で表される、
免疫複合体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000075
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電
置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌｃは、
Figure 2023036869000076
 で表され、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ１の－Ｃ（＝Ｏ）－基に共有結合される部位であり、式中、
Ｒ１９及びＲ２０は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｍ”は、１～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルである。
特定の実施形態で、Ｒａ及びＲｂは両方ともＨであり、Ｒ５はＨまたはＭｅである。
特定の実施形態で、Ｐは、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。例えばＰは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択され得る。特定の実施形態で、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。特定の実施形態で、Ｑは－ＳＯ３Ｍである。
特定の実施形態で、Ｒ１９及びＲ２０は両方ともＨであり、ｍ”は１～６の整数である。
特定の実施形態で、－ＬＣ－は、以下の式：
Figure 2023036869000077
 で表される。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000078
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000079
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000080
 で表される免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、システイン残基によってＣｙＣ２に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ２は、以下の式：
Figure 2023036869000081
 で表される、
免疫複合体またはその薬学的に許容される塩を提供し、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000082
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒｘ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
ＬＣ’は、以下の式：
Figure 2023036869000083
 で表され、
式中、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ２の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｑは、－Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ及びｒは、各出現において、独立して１～１０の整数であり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ’は、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドである。
特定の実施形態で、Ｐ’は、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。例えばＰ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択され得る。特定の実施形態で、Ｐ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
特定の実施形態で、免疫複合体－ＬＣ’－は、以下の式：
Figure 2023036869000084
 で表される。
特定の実施形態で、Ｒｅは、ＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１は、－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｘ２は、－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、式中、Ｒｆ及びＲｇは、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２または３である。特定の実施形態で、Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000085
Figure 2023036869000086
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000087
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。
特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000088
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。
特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000089
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。特定の実施形態で、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
本発明の別の態様は、下記の式：
Figure 2023036869000090
 を有する免疫複合体を提供し、
式中、
ＣＢＡは、システイン残基によってＣｙＣ３に共有結合される、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチドであり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ３は、以下の式：
Figure 2023036869000091
 で表され、
式中、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ＬＣ’は、以下の式：
Figure 2023036869000092
 で表され、
式中、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ３の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基、またはイオン性基であり、
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ及びｒは、各出現において、独立して１～１０の整数であり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ’は、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドである。
特定の実施形態で、Ｐ’は、２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである。例えばＰ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｌｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される。特定の実施形態で、Ｐ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
特定の実施形態で、－ＬＣ’－は、以下の式：
Figure 2023036869000093
 で表され、
式中、Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである。
特定の実施形態で、ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨである。特定の実施形態で、ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅである。
特定の実施形態では、免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000094
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＤＭは、以下の式：
Figure 2023036869000095
 で表される、薬物部分である。
本発明の別の態様は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチド、または本発明の免疫複合体、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物を提供する。
本発明の別の態様は、ＣＤ１２３発現細胞の増殖を阻害する方法を提供し、前記方法は、本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチド、または本発明の免疫複合体、または本発明の医薬組成物と、細胞を接触させることを含む。
特定の実施形態で、細胞は腫瘍細胞である。特定の実施形態で、細胞は白血病細胞またはリンパ腫細胞である。
本発明の別の態様は、癌に罹患した対象を治療する方法を提供し、前記癌の細胞はＣＤ１２３を発現し、前記方法は、治療に有効な量の本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチド、または本発明の免疫複合体、または本発明の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む。
特定の実施形態において、癌または細胞増殖性疾患は、白血病またはリンパ腫である。特定の実施形態において、癌または細胞増殖性疾患は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、Ｂ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）を含む急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞性白血病（Ｈ
ＣＬ）、骨髄異形成症候群、芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）白血病、マントル細胞リンパ腫を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、及びホジキン白血病（ＨＬ）からなる群から選択される。特定の実施形態において、癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である。特定の実施形態において、癌は、Ｂ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）である。
本発明の別の態様は、対象の細胞増殖性疾患を治療する方法を提供し、前記細胞増殖性疾患の細胞はＣＤ１２３を発現し、前記方法は、前記細胞増殖性疾患を治療するのに十分な量で、治療に有効な量の本発明の抗体もしくはその抗原結合断片、または本発明のポリペプチド、または本発明の免疫複合体、または本発明の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む。
本発明の一態様のみで記載される（しかし他では記載されていないか、または他では繰り返されていない）もの及び実施例のみで記載されるものを含む、本明細書に記載のいずれか１つの実施形態は、明確に否定されない限り、または不適当でない限り、本発明のいずれか１つ以上の他の実施形態と組み合わせることができることが企図される。
キメラＣＤ１２３－６抗体（ｃｈＣＤ１２３－６）及びそのＣＤＲ移植ｈｕＣＤ１２３－６抗体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７）による、ＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖の阻害を示す。 ３つのマウス抗ＣＤ１２３抗体（ｍｕＣＤ１２３－３、－６及び－１４）が、７Ｇ３と少なくとも同様にＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害することを示す。ＣＤ１２３結合対照抗体７Ｇ３、６Ｈ６、及び９Ｆ５を含む、種々の抗ＣＤ１２３抗体による、ＩＬ－３（１ｎｇ／ｍＬ）の存在下で培養されるＴＦ－１細胞の阻害を示す。 ３つのマウス抗ＣＤ１２３抗体（ｍｕＣＤ１２３－３、－６及び－１４）が、７Ｇ３と少なくとも同様にＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害することを示す。同じ抗ＣＤ１２３抗体による、ＧＭ－ＣＳＦ（２ｎｇ／ｍＬ）の存在下で培養したＴＦ－１細胞の阻害を示す。 マウス抗ＣＤ１２３抗体ｍｕＣＤ１２３－３、－６、及び－１４が、用量依存的なＴＦ－１細胞のＩＬ－３（１ｎｇ／ｍＬ）依存性増殖を、７Ｇ３抗体より高い程度まで阻害することを示す。ｍｕＣＤ１２３－１６は、ＣＤ１２３に結合するがＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害しない、陰性対照抗ＣＤ１２３抗体である。 マウスｍｕＣＤ１２３－３、－６、及び－１４の抗体が、ＣＤ１２３発現ＴＦ－１細胞の７Ｇ３抗体より高い、ＣＤ１２３陽性ＡＭＬ細胞への結合親和性を有することを示す。 マウスｍｕＣＤ１２３－３、－６、及び－１４の抗体が、ＣＤ１２３発現ＨＮＴ－３４細胞の７Ｇ３抗体より、ＣＤ１２３陽性ＡＭＬ細胞への高結合親和性を有することを示す。 キメラ抗ＣＤ－１２３抗体ｃｈＣＤ１２３－３、－６、及び－１４が、ＨＮＴ－３４細胞を使用して、そのマウス対照物の高い結合親和性を保持することを示す。ＣＤ１２３に結合しないキメラ抗体ｃｈＫＴＩを、陰性対照として含んだ。 キメラ抗ＣＤ－１２３抗体ｃｈＣＤ１２３－３、－６、及び－１４が、ＣＤ１２３陽性急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞株ＭＯＬＭ－１３を使用して、そのマウス対照物の高結合親和性を保持することを示す。ＣＤ１２３に結合しないキメラ抗体ｃｈＫＴＩを、陰性対照として含んだ。 キメラｃｈＣＤ１２３－３、－６及び－１４抗ＣＤ－１２３抗体が、ＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害する能力によって明示されるように、マウス対照物の機能的活性を保持することを示す。ＣＤ１２３に結合するがＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害しない、非機能性キメラ抗ＣＤ１２３抗体（ｃｈＣＤ１２３－１８）を、陰性対照として含んだ。 図７Ａは、マウス（ｍｕＣＤ１２３－６）、キメラ（ｃｈＣＤ１２３－６）、及びＣＤＲ移植ｈｕＣＤ１２３－６抗体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３）すべてが、ＣＤ１２３発現ＨＮＴ－３４細胞に対して７Ｇ３より高い親和性を有することを示す。ＣＤ１２３に結合しないキメラ抗体ｃｈＫＴＩを、陰性対照として含んだ。 図７Ｂ及び図７Ｃは、Ｌｙｓ－、Ｓｅｒ－、またはＣｙｓ結合によるＤ１またはＤ２化合物に対する、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３または－Ｇｖ４．７抗体の共有結合が、これらのＡＤＣ複合体、すなわち、図７ＢのＳｅｒ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１（図１７の構造体を参照）、及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８、及びＬｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ｓＳＰＤＢ－Ｄ１、及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－Ｄ２、ならびに図７ＣのＣｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ４及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の結合親和性に中程度に影響するだけであることを示す。図７Ｃでは、非複合型ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７抗体は、配列番号５４の重鎖配列を有しており、そこでＸａａはＶａｌである。「Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ」を備える複合体は、軽鎖の酸化Ｎ末端Ｓｅｒによる細胞毒（この場合、本明細書では以後インドリノベンゾジアゼピンまたは「ＩＧＮ」化合物）結合を有する。「ＣｙｓＭａｂ」を備える複合体は、重鎖の操作したＣｙｓ（すなわち、配列番号５４の最後から５番目のＣｙｓに相当するＣｙｓ）による細胞毒（この場合、ＩＧＮ化合物）結合を有する。 図７Ｂ及び図７Ｃは、Ｌｙｓ－、Ｓｅｒ－、またはＣｙｓ結合によるＤ１またはＤ２化合物に対する、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３または－Ｇｖ４．７抗体の共有結合が、これらのＡＤＣ複合体、すなわち、図７ＢのＳｅｒ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１（図１７の構造体を参照）、及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８、及びＬｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ｓＳＰＤＢ－Ｄ１、及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－Ｄ２、ならびに図７ＣのＣｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ４及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の結合親和性に中程度に影響するだけであることを示す。図７Ｃでは、非複合型ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７抗体は、配列番号５４の重鎖配列を有しており、そこでＸａａはＶａｌである。「Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ」を備える複合体は、軽鎖の酸化Ｎ末端Ｓｅｒによる細胞毒（この場合、本明細書では以後インドリノベンゾジアゼピンまたは「ＩＧＮ」化合物）結合を有する。「ＣｙｓＭａｂ」を備える複合体は、重鎖の操作したＣｙｓ（すなわち、配列番号５４の最後から５番目のＣｙｓに相当するＣｙｓ）による細胞毒（この場合、ＩＧＮ化合物）結合を有する。 キメラ（ｃｈＣＤ１２３－６）及びＣＤＲ移植（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３）ｈｕＣＤ１２３－６抗体が、７Ｇ３抗体より良好にＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害することを示す。 細胞がＧＭ－ＣＳＦの存在下で増殖するとき、これらの抗体は阻害効果を有しなかったので、阻害はＩＬ－３依存性であることを示す。 ＩＬ－３Ｒα（ＣＤ１２３）細胞外ドメインの発現構成体、ならびにＩＬ－３Ｒα（灰色）及びＧＭＲαドメイン（白）を含むキメラ受容タンパク質を示す。 ＣＤ１２３－６抗体が、主にＩＬ－３ＲαのＣＲＭドメインと結合することを示す（残基１０１～３０６）。 ＣＤ１２３－３抗体が、主にＩＬ－３ＲαのＣＲＭドメインと結合することを示す（残基１０１～３０６）。 ＣＤ１２３－１４抗体が、ＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインにだけ結合することを示す（残基１～１００）。 ７Ｇ３抗体が、ＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインにだけ結合することを示す（残基１～１００）。 ６Ｈ６抗体が、ＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインにだけ結合することを示す（残基１～１００）。 ９Ｆ５抗体が、ＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインにだけ結合することを示す（残基１～１００）。 再表面形成ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１抗体、ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＣＸ１－１－ＤＭ１のマイタンシノイドＤＭ１複合体が、増殖因子非依存性ＣＤ１２３発現ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ４上の用量依存性細胞毒性を呈することを示す。細胞毒性を阻害する過剰な非複合型ｈｕＣＤ１２３－６抗体（５００ｎＭ）の能力によって明示されるように、細胞毒性はＣＤ１２３依存性である。 異なる由来の複数のＣＤ１２３陽性悪性細胞株上の、種々の再表面形成リジン結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を示す。 複数のＣＤ１２３陽性Ｂ－ＡＬＬ細胞株上の、種々のリジンまたはシステイン結合ｈｕＣＤ１２３－６－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を示す。非結合ＫＴＩ抗体系複合体は、陰性対照として含まれる。 各種のＬｙｓまたはＣｙｓ結合ＩＧＮ化合物が、Ｐ－ｇｐ（Ｐ糖タンパク質）陽性ＡＭＬ細胞株Ｋａｓｕｍｉ－３及びＭＯＬＭ－１において高活性であることを示す。白いデータポイントの対照曲線は、過剰な非複合型適合ｈｕＣＤ１２３抗体の存在下で作成される。 本発明の種々のＬｙｓまたはＣｙｓ結合ＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のほとんどすべてが、ｎＭまたはサブｎＭ濃度で９つのＡＭＬ患者試料からのＡＭＬ前駆細胞の９０％を死滅させることを示す。 Ｃｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体が、ＡＭＬ前駆細胞を死滅させるのに必要なものより１００倍超の高い濃度で、正常な血液細胞を死滅させることを示す。一方、マイロターグはこのような優先的死滅効果を示さない。 ＡＭＬ患者から初代細胞の、種々のリジン結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を示す。１つの主要患者試料における通常ＣＦＵアッセイからの結果を示す。 ＡＭＬ患者から初代細胞の、種々のリジン結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性を示す。複合体で処理したすべてのＡＭＬ患者試料におけるＩＣ９０値を示す。 ｈｕＣＤ１２３－６のＣｙｓＭａｂのＩＧＮ複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、中黒の丸）が、ＡＭＬ細胞株ＥＯＬ－１（図１３Ａ）、Ｂ－ＡＬＬ細胞株ＫＯＰＮ－８（図１３Ｂ）、及びＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１（図１３Ｃ）に対して、同じ抗体のリジン結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２、中黒の丸）と少なくとも同程度に活性があることを示す。各図の白いデータポイントにつながる点曲線は、非複合型ｃｈＣＤ１２３－６抗体の阻害濃度（５００ｎＭ）の存在下で、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の白丸及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２の白い四角）の活性を表す。 ｈｕＣＤ１２３－６のＣｙｓＭａｂのＩＧＮ複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、中黒の丸）が、ＡＭＬ細胞株ＥＯＬ－１（図１３Ａ）、Ｂ－ＡＬＬ細胞株ＫＯＰＮ－８（図１３Ｂ）、及びＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１（図１３Ｃ）に対して、同じ抗体のリジン結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２、中黒の丸）と少なくとも同程度に活性があることを示す。各図の白いデータポイントにつながる点曲線は、非複合型ｃｈＣＤ１２３－６抗体の阻害濃度（５００ｎＭ）の存在下で、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の白丸及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２の白い四角）の活性を表す。 ｈｕＣＤ１２３－６のＣｙｓＭａｂのＩＧＮ複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、中黒の丸）が、ＡＭＬ細胞株ＥＯＬ－１（図１３Ａ）、Ｂ－ＡＬＬ細胞株ＫＯＰＮ－８（図１３Ｂ）、及びＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１（図１３Ｃ）に対して、同じ抗体のリジン結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２、中黒の丸）と少なくとも同程度に活性があることを示す。各図の白いデータポイントにつながる点曲線は、非複合型ｃｈＣＤ１２３－６抗体の阻害濃度（５００ｎＭ）の存在下で、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の白丸及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２の白い四角）の活性を表す。 ｈｕＣＤ１２３－６のＳｅｒｉＭａｂ（ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８、中黒の丸）が、ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ－１（図１４Ａ）及びＨＮＴ－３４（図１４Ｂ）ならびにＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１（図１４Ｃ）の同じ抗体のリジン結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２、中黒の下向き三角）と少なくとも同程度に活性があることを示す。各図の白いデータポイントにつながる点曲線は、非複合型ｈｕＣＤ１２３－６抗体の阻害濃度（５００ｎＭ）の存在下で、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８の白丸及びｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２の白い下向き三角）の活性を表す。 ｈｕＣＤ１２３－６のＳｅｒｉＭａｂ（ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８、中黒の丸）が、ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ－１（図１４Ａ）及びＨＮＴ－３４（図１４Ｂ）ならびにＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１（図１４Ｃ）の同じ抗体のリジン結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２、中黒の下向き三角）と少なくとも同程度に活性があることを示す。各図の白いデータポイントにつながる点曲線は、非複合型ｈｕＣＤ１２３－６抗体の阻害濃度（５００ｎＭ）の存在下で、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８の白丸及びｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２の白い下向き三角）の活性を表す。 ｈｕＣＤ１２３－６のＳｅｒｉＭａｂ（ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８、中黒の丸）が、ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ－１（図１４Ａ）及びＨＮＴ－３４（図１４Ｂ）ならびにＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１（図１４Ｃ）の同じ抗体のリジン結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２、中黒の下向き三角）と少なくとも同程度に活性があることを示す。各図の白いデータポイントにつながる点曲線は、非複合型ｈｕＣＤ１２３－６抗体の阻害濃度（５００ｎＭ）の存在下で、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８の白丸及びｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２の白い下向き三角）の活性を表す。 本発明のＳｅｒ結合複合体を合成するために使用できる一般的工程を示す、概略図を示す。 本発明のＳｅｒ結合複合体を合成するために使用できる一般的工程を示す、概略図を示す。 本発明のＳｅｒ結合複合体を合成するために使用できる一般的工程を示す、概略図を示す。 Ｃｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体が、任意抽出したＡＭＬ患者試料のゲムツズマブオゾガミシン（ＧＯ）（別名マイロターグ）より高い活性を有することを示す。 Ｃｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体が、ＡＭＬ前駆細胞を死滅させるのに必要なものより１００倍超の高い濃度で、正常な前駆細胞を死滅させることを示す。一方、マイロターグ及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５’（ＤＮＡ架橋剤Ｄ５’のＡＤＣ）は、このような優先的死滅効果を示さない。 ＭＶ４－１１ＡＭＬ皮下モデルにおける、ＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 Ｃｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体が、予後不良因子を有する種々のＣＤ１２３陽性ＡＭＬ細胞に対して高活性であることを示す。 ２６日目の溶媒及び対照で処置したマウスと比較して、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体で処置したマウスのｉｎ ｖｉｖｏ生物発光画像診断を示す。複合体による処置は、マウスの腫瘍量を著しく減少させる。 ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体による処置が、溶媒及び対照で処置したマウスと比較して、６／６マウスの生存を延長させることを示す。 ＭＶ４－１１細胞とｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体とのインキュベートが、ＤＮＡの損傷、細胞周期のＳ期の停止、及びアポトーシス介在性細胞死を引き起こすことを示す。 Ｍｏｌｍ－１３ＡＭＬ播種性モデルにおける、ＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ＥＯＬ－１皮下モデルにおける、ＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ＥＯＬ－１皮下モデルにおける、種々の投与量でのｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ＥＯＬ－１皮下モデルにおける、有効荷重（ＦＧＮ８４９またはＤ５）、裸の抗体、対照、シタラビン、及びアザシチジンの対応する遊離薬剤形態と比較した、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ＭＶ４－１１ＡＭＬ播種性モデルにおける、ＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ＭＶ４－１１ＡＭＬ皮下モデルにおける、ＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｖｏ有効性を示す。 ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体による処置が、溶媒及び対照で処置したマウスと比較して、マウスの生存を延長させることを示す。 マウスにおける、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５及びｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１のｉｎ ｖｉｖｏ忍容性を示す。 マウスにおけるｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２複合体のｉｎ ｖｉｖｏ忍容性を示す。
１．定義
本発明の理解を容易にするため、いくつかの用語及び語句を以下に定義する。
本明細書で同じ意味で用いられる場合「（ヒト）ＩＬ－３Ｒα」「インターロイキン－３受容体α」または「ＣＤ１２３」という用語は、他に指示がない限り、任意の天然型（ヒト）ＩＬ－３ＲαまたはＣＤ１２３を意味する。ＣＤ１２３タンパク質は、ヘテロ二量体サイトカイン受容体のインターロイキン３特異的サブユニット（ＩＬ－３受容体またはＩＬ－３Ｒ）である。ＩＬ－３Ｒは、リガンド特異的αサブユニット、ならびにインターロイキン３（ＩＬ３）、コロニー刺激因子２（ＣＳＦ２／ＧＭ－ＣＳＦ）、及びインターロイキン５（ＩＬ５）の受容体に共通するシグナル伝達共通βサブユニット（ＣＤ１３１とも呼ばれる）からなる。ＣＤ１２３／ＩＬ－３ＲαのＩＬ３への結合することは、βサブユニットに依存する。βサブユニットはリガンド結合によって活性化し、ＩＬ３の生物活性に必要とされる。
ＣＤ１２３に関するこのような上述のすべての用語は、本明細書に示されるタンパク質または核酸配列のいずれかを意味する。「ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα」という用語は、「完全長」、未処理のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα、及び細胞内の処理から生じるＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの任意の形態を含む。前記用語は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαタンパク質または核酸の天然起源の変異体（例えばスプライス変異体、対立遺伝子変異体及びアイソフォーム）も包含する。本明細書に記載のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαポリペプチド及びポリヌクレオチドは、様々な源から（例えばヒト組織型から、もしくは別の源から）分離することができるか、または組換えまたは合成法によって調製することができる。ＣＤ１２
３／ＩＬ－３Ｒα配列の例としては、ＮＣＢＩ参照番号ＮＰ＿００２１７４及びＮＭ＿００２１８３（ヒトＣＤ１２３変異体１のタンパク質及び核酸配列）、ならびにＮＰ＿００１２５４６４２及びＮＭ＿００１２６７７１３（ヒトＣＤ１２３変異体２のタンパク質及び核酸配列）が挙げられるが、これらに限定されない。
「抗体」という用語は、特に標的（例えばタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質またはこれらの組み合わせ）を認識し、ならびにそれらと免疫グロブリン分子の可変領域内の少なくとも１つの抗原認識部位で特異的に結合する、免疫グロブリン分子を意味する。本明細書で使用する場合「抗体」という用語は、無傷のポリクローナル抗体、無傷のモノクローナル抗体、抗体断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片）、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、抗体の抗原判定部分を含む融合タンパク質、及び、抗体が所望の生物活性を示すのであれば、抗原認識部位を含む他の任意の改変免疫グロブリン分子を包含する。抗体は、免疫グロブリンの５つの主要なクラス、すなわちα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる、その重鎖定常ドメインの同一性に基づく、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、またはそのサブクラス（アイソタイプ）（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）のいずれかのものであり得る。免疫グロブリンの異なるクラスは、異なる周知のサブユニット構造及び３次元形状を有する。抗体は裸であり得るか、または他の分子（例えば毒素、放射性同位体など）に共役結合し得る。
いくつかの実施形態で、抗体は非天然起源抗体である。いくつかの実施形態で、抗体は天然成分から精製される。いくつかの実施形態で、抗体は組換えで作成される。いくつかの実施形態で、抗体はハイブリドーマにより作成される。
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原（例えばＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα）の生物活性を阻害する、または低減させるものである。特定の実施形態において、遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害する。望ましくは生物活性は、１０％、２０％、３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％減少する。
「抗ＣＤ１２３抗体」、「抗ＩＬ－３Ｒα抗体」または「ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαと（特異的に）結合する抗体」という用語は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαを標的とする際の診断薬及び／または治療薬として抗体が有用であるように、十分な親和性でＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαと結合可能な抗体を指す。特に指示がない限り、関連性のない非ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαタンパク質に抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体を結合する程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定したＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαへの抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態で、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαと結合する抗体は、０．５ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０５ｎＭ以下、または０．０１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有する。一実施形態において、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、共通β鎖ＣＤ１３１に結合しない。一実施形態において、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、周知の市販のＣＤ１２３抗体（例えば７Ｇ３（マウスＩｇＧ２ａ）、６Ｈ６（マウスＩｇＧ１）及び９Ｆ５（マウスＩｇＧ１））によって結合されるＣＤ１２３の同じエピトープと結合しない（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ８７（１）：８３－９２，１９９６）。
本発明の抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片の配列を、下記の表１－６に示す。本発明の種々の抗体及び免疫複合体のための命名法は、下記で別途提供する。
「抗体断片」という用語は無傷な抗体の一部を指し、及び無傷な抗体の抗原判定可変領域を意味する。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、直鎖状抗体、単鎖抗体、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。「抗体の抗原結合断片」という用語は、抗原と特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つ以上の断片を意味する。抗体の抗原結合機能が、完全長抗体の特定の断片によって実施可能であることが示されている。抗体の「抗原結合断片」という用語に含まれる結合断片の例は、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価の断片（例えば、パパインによって消化される抗体は、３つの断片：２つの抗原結合Ｆａｂ断片、及び抗原に結合しない１つのＦｃ断片を得る）、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋で結合した２つのＦａｂ断片を含む二価の断片（例えば、ペプシンによって消化される抗体は、２つの断片：二価抗原結合Ｆ（ａｂ’）２、断片及び抗原に結合しないｐＦｃ’断片を得る）、ならびにその関連するＦ（ａｂ’）一価単位、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片（すなわち、Ｆａｂに含まれる重鎖の部分）、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、ならびに関連するジスルフィド結合Ｆｖ、（ｖ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂ（ドメイン抗体）またはｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４－５４６，１９８９）、ならびに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む（これに限定されるものではない）。
「モノクローナル抗体」とは、特異性の高い認識及び単一の抗原決定基またはエピトープの結合に関与する、均一な抗体集団を意味する。これは、異なる抗原決定基に対する異なる抗体を通常含有する、ポリクローナル抗体とは対照的である。本明細書で使用する場合「モノクローナル抗体」という用語は、無傷のモノクローナル抗体及び完全長の両方のモノクローナル抗体及び抗体断片（例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ）、単鎖（ｓｃＦｖ）変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、ならびに抗原認識部位を含む他の改変免疫グロブリン分子を包含する。更に「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、及び遺伝子導入動物を含むがこれらに限定されない、任意の数の方法で作成した、このような抗体を指す。
「ヒト化抗体」という用語は、最小の非ヒト（例えばマウス）配列を含む特異的な免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはその断片である、非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。一般的にヒト化抗体はヒト免疫グロブリンであり、そこで相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えばマウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲからの残基によって置換される（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２７，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４－１５３６，１９８８）。
場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種由来の抗体中の対応する残基により置き換えられる。ヒト化抗体を、Ｆｖフレームワーク領域中及び／または置換された非ヒト残基内の追加の残基の置換によって更に改変して、抗体の特異性、親和性、及び／または能力を改良して最適化することができる。一般的にヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてもしくはほぼすべてを含有する、少なくとも１つ、通常は２つまたは３つの可変ドメインのほぼすべてを含み、一方でＦＲ領域のすべてまたはほぼすべては、ヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（ＦＣ）の少なくとも一部分、通常はヒト免疫グロブリンのものを含むことができる。ヒト化抗体を生成するために使用する方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９及び同第５，６３９，６４１号、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１（３）：９６９－９７３，１９９４及びＲｏｇｕ
ｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５－９０４，１９９６に記載されている（すべて参照により本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態で、「ヒト化抗体」は再表面形成抗体を含む。いくつかの実施形態で、「ヒト化抗体」はＣＤＲ移植抗体である。
抗体の「可変領域」は、単独あるいは組み合わせて、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を指す。重鎖及び軽鎖の可変領域はそれぞれ、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）（超可変領域としても既知）によって結合される、４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からなる。各鎖のＣＤＲは、ＦＲによって他の鎖からのＣＤＲと共にごく近接して保持されて、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するための少なくとも２つの技術：（１）異種間配列可変性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄ．，１９９１，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ Ｍｄ．）及び（２）抗原－抗体複合体の結晶学的試験に基づくアプローチ（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－９４８，１９９７）がある。更にこれらの２つのアプローチの組み合わせが、ＣＤＲを決定するために当該技術分野において用いられることもある。
Ｋａｂａｔナンバリングシステムは、可変ドメインの残基（おおよそ軽鎖の残基１～１０７及び重鎖の残基１～１１３）について言及する場合、一般的に用いられる（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。
Ｋａｂａｔのようなアミノ酸位置のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）（参照により本明細書に組み込まれる）の抗体のコンピレーションの重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指す。このナンバリングシステムを使用すると、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲもしくはＣＤＲの短縮もしくはその内部への挿入に対応する、少しまたは追加のアミノ酸を含むことができる。例えば重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後の単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、ならびに重鎖ＦＲ残基８２の後の挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含むことができる。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列を有する抗体の配列の相同性の領域での、配列比較によって所定の抗体について決定されることができる。Ｃｈｏｔｈｉａはその代わり、構造ループの位置に関連する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，１９８７）。Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ－Ｈ１ループの端部は、Ｋａｂａｔナンバリングの慣例を使用してナンバリングした場合、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４との間で変化する。これは、Ｋａｂａｔナンバリング方式がＨ３５Ａ及びＨ３５Ｂに挿入を配置するからであり、３５Ａも３５Ｂも存在しない場合ループは３２で終了し、３５Ａのみが存在する場合ループは３３で終了し、３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合ループは３４で終了する。ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の折衷を表し、Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ’ｓ ＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。
Figure 2023036869000096
「ヒト抗体」という用語は、ヒトによって産生された抗体、または当該技術分野において周知の任意の技術を用いて作製された、ヒトによって産生された抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体を意味する。特定の実施形態で、ヒト抗体は非ヒト配列を有しない。ヒト抗体のこの定義は、無傷の抗体もしくは完全長の抗体、またはその抗原結合断片を含む。
「キメラ抗体」という用語は、免疫グロブリン分子のアミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体を指す。一般的に、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する１つの哺乳動物種（例えばマウス、ラット、ウサギなど）由来の抗体の可変領域に対応し、一方で定常領域は、別の種（通常ヒト）に由来する抗体中の配列と相同であり、その種（例えばヒト）において免疫反応を誘発する可能性を回避する、または低減する。特定の実施形態で、キメラ抗体は、少なくとも１つのヒト重鎖及び／または軽鎖ポリペプチド（例えばマウス軽鎖及びヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体）を含む、抗体またはその抗原結合断片を含むことができる。
「エピトープ」または「抗原決定基」という用語は、本明細書では同じ意味で用いられ、特定の抗体により認識され、かつ特異的に結合されることが可能な抗原の一部を指す。抗原がポリペプチドである場合、エピトープは、連続的アミノ酸、及びタンパク質の三次折り畳みによって並置された非連続的アミノ酸の両方から形成され得る。連続的アミノ酸から形成されたエピトープは、タンパク質が変性した場合にも通常保持されるが、三次折り畳みによって形成されたエピトープは、タンパク質が変性すると通常失われる。エピトープは通常、特有の空間配置中に少なくとも３つ、より一般的には少なくとも５つまたは８～１０のアミノ酸を含む。
「結合親和性」とは一般的に、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の総計の強さを意味する。特に指示がない限り、本明細書で使用する場合「結合親和性」とは、結合ペア（例えば、抗体と抗原）の要素の間の１：１の相互作用を示す、固有の結合親和性を指す。パートナーＹについての分子Ｘの親和性は一般的に、解離定数（Ｋｄ）または半数効果濃度（ＥＣ５０）により表されることができる。親和性は、本明細書に記載のものを含む、当該技術分野において周知の一般的な方法で測定され得る。低親和性抗体は一般的にゆっくりと抗原に結合して、速やかに解離する傾向があるが、高親和性抗体は一般的に速く抗原に結合して、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性を測定する種々の方法は当技術分野において周知であり、そのいずれかを本発明で使用可能である。特定の例示的実施形態を、本明細書に記載する。
本明細書で使用する場合「またはより高い」とは、分子とその結合パートナーの間のより強い結合を指す、結合親和性を意味する。本明細書で使用する場合「またはより高い」とは、より小さい数値のＫｄ値で表される、より強い結合を指す。例えば「０．３ｎＭまたはそれより高い」抗原に対する親和性を有する抗体は、抗原に対する抗体の親和性が、０．３ｎＭ以下、例えば０．２９ｎＭ、０．２８ｎＭ、０．２７ｎＭなど、または０．３ｎＭ以下の任意の値である。一実施形態において、Ｋｄにより決定される抗体の親和性は、約１０－３～約１０－１２Ｍ、約１０－６～約１０－１１Ｍ、約１０－６～約１０－１０Ｍ、約１０－６～約１０－９Ｍ、約１０－６～約１０－８Ｍ、または約１０－６～約１０－７Ｍである。
「特異的に結合する」とは一般的に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、及び前記結合が抗原結合ドメインとエピトープとの間にいくらかの相補性を必要とすることを意味する。この定義に従うと、抗体は、ランダムな無関係なエピトープに結合するよりも容易に、その抗原結合ドメインを介してエピトープに結合する場合、エピトープに「特異的に結合する」と言われる。「特異性」という用語は、特定の抗体が特定のエピトープに結合する、相対的親和性を限定するために本明細書で使用する。例えば、抗体「Ａ」は、抗体「Ｂ」よりも所与のエピトープに対してより高い特異性を有するとみなすことができるか、または抗体「Ａ」は、それが関連エピトープ「Ｄ」に対して有するよりも高い特異性で、エピトープ「Ｃ」に結合するということができる。
特定の実施形態で、それが非ＣＤ１２３抗原に対する結合特異性よりもＣＤ１２３抗原（任意の種由来の）に高い結合特異性を有するという点で、本発明の抗体または抗原結合断片はＣＤ１２３抗原に「特異的に結合する」。特定の実施形態で、それが非ヒトＣＤ１２３抗原（例えば、マウスまたはラットＣＤ１２３）に対する結合特異性よりも、ヒトＣＤ１２３抗原に高い結合特異性を有するという点で、本発明の抗体または抗原結合断片は、ヒトＣＤ１２３抗原に「特異的に結合する」。
「優先的に結合する」とは、抗体が、関連する、同様の、相同の、または類似のエピトープに結合するよりも容易にエピトープに特異的に結合することを意味する。したがって所与のエピトープに「優先的に結合する」抗体は、そのような抗体が関連エピトープと交差反応できるものの、関連エピトープよりも所与のエピトープに結合する可能性が高い。例えば特定の実施形態で、本発明の抗体または抗原結合断片は、マウスＣＤ１２３上のヒトＣＤ１２３抗原に「優先的に結合する」。
抗体がエピトープに対する参照抗体の結合をある程度まで阻害する程度までエピトープと優先的に結合する場合、抗体は、所与のエピトープに対する参照抗体の結合を「競合的に阻害する」と言われる。競合的阻害は、当該技術分野において周知の任意の方法、例えば競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定されることができる。抗体は、所与のエピトープに対する参照抗体の結合を少なくとも９０％、少なくとも８０％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％競合的に阻害すると言われ得る。
本明細書で使用する場合「実質的に類似した」または「実質的に同一の」という語句は、当業者が、２つの値の差が、前記値（例えば、Ｋｄ値）で測定した生物学的特性の文脈内で、ほとんどもしくはまったく、生物学的及び／または統計的有意性はないとみなすように、２つの数値（一般的に一方は本発明の抗体と関連するもの、もう一方は参照／比較抗体と関連するもの）の間の十分高度な類似性を意味する。前記２つの値の差は、参照／比較抗体の値に応じて約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、または約１０％未満である。
「単離した」ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、天然では見られない形態のポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物である。単離ポリペプチド、抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞または組成物は、それらが天然で見いだされる形態ではない程度まで精製されたものを含む。いくつかの実施形態において、単離した抗体、ポリヌクレオチド、ベクター、細胞、または組成物は、実質的に純粋である。
本明細書で使用する場合「実質的に純粋である」とは、材料が少なくとも５０％純粋（すなわち、混入物を含まない）、少なくとも９０％純粋、少なくとも９５％純粋、少なくとも９８％純粋、または少なくとも９９％純粋であることを意味する。
本明細書で使用する場合「免疫複合体」、「複合体」、または「ＡＤＣ」という用語は、細胞結合剤（すなわち、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体またはその断片）に結合する化合物またはその誘導体を指し、一般式：Ａ－Ｌ－Ｃによって定義され、式中、Ｃ＝細胞毒、Ｌ＝リンカー、及びＡ＝細胞結合剤（ＣＢＡ）（例えば抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体または抗体断片）である。免疫複合体は、逆の順序の一般式：Ｃ－Ｌ－Ａによって定義することもできる。
「リンカー」とは、化合物、通常は薬剤、例えば、本明細書に記載の細胞毒性剤（例えば、マイタンシノイドまたはＩＧＮ（インドリノベンゾジアゼピン）化合物）を、細胞結合剤（例えば抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体またはその断片）に安定的な共有結合方法で結合することが可能な任意の化学部位である。リンカーは、化合物または抗体が活性を維持する条件下で、酸誘発開裂、光誘発開裂、ペプチダーゼ誘発開裂、エステラーゼ誘発開裂、及びジスルフィド結合開裂に対して感受性または実質的に耐性であり得る。好適なリンカーは当該技術分野において周知であり、例えばジスルフィド基、チオエーテル基、酸不安定基、感光性基、ペプチダーゼ不安定基及びエステラーゼ不安的基を含む。リンカーは、本明細書に記載されかつ当該技術分野において周知の荷電リンカー及びその親水性形態も含む。
「増加した」ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの「増加した発現」及びＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの「過剰発現」という用語は、高レベルのＣＤ１２３発現を含有する試料を指す。ＣＤ１２３は、対照値と比較して上昇、増加、または過剰発現し得る（例えば、癌のない対象からの生体試料、組織もしくは細胞、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαを発現しないかその発現量が低いことが周知の試料もしくは癌、上昇したＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα値を有さない正常試料もしくは癌における、発現レベル）。例えば発現が増加した試料（例えば、白血病及びリンパ腫などの血液癌からのもの）は、対照／正常値と比較して少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、２５倍、３０倍、または少なくとも５０倍の増加を含むことができる。
「参照試料」は、試験試料から本発明の方法で得た結果を相関かつ比較するために使用できる。参照試料は、細胞（例えば、細胞株、細胞ペレット）または組織であり得る。「参照試料」のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαレベルは、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの絶対量または相対量、量の範囲、最小量及び／または最大量、平均量、及び／または中央量であり得る。「参照試料」は、試験試料が比較されるＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα発現のベースラインとしても機能できる。「参照試料」は、同じ患者からの先行試料またはベースライン試料、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα発現の周知のレベルを有する正常参照、またはＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα発現の周知のレベルを有する関連する患者集団からの参照を含むことができる。ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαレベルは、標準曲線の値としても表され得る。標準曲線は、試料のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα濃度を測定するために、アッセイデータをプロットする定量検査法である。一実施形態において、参照試料は、精製したＣＤ１２３／ＩＬ
－３Ｒαを含む抗原標準である。本発明の診断法は、試験試料のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの発現レベルと「参照値」との比較を含むことができる。いくつかの実施形態で、参照値は、参照試料のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの発現レベルである。参照値は所定の値であり得て、試験試料と共に試験した参照試料（例えば、対照生体試料または参照試料）から測定され得る。参照値は、中央値もしくは平均値などの単一のカットオフ値、または信頼区間などの値の範囲であり得る。参照値は、個々の種々のサブグループについて設定することができる。
本明細書で「一次抗体」という用語は、試料の標的タンパク質抗原に特異的に結合する抗体を指す。一次抗体は一般的に、ＥＬＩＳＡアッセイまたはＩＨＣ手順で使用する第１の抗体である。一実施形態において、一次抗体はＩＨＣ手順で使用する唯一の抗体である。
本明細書で「二次抗体」という用語は、一次抗体に特異的に結合し、それによって、もしあれば、一次抗体と後の試薬との間の架橋または結合を形成する抗体を指す。二次抗体は一般的に、免疫組織化学手順で使用する第２の抗体である。
本発明の「試料」または「生体試料」は、生体由来、特定の実施形態では例えば真核生物由来である。いくつかの実施形態では、試料はヒト試料であるが、動物試料も使用され得る。本発明で使用するための試料の非限定的な供給源は、例えば固形組織、生検吸引液、腹水、流体抽出物、血液、血しょう、血清、髄液、リンパ液、皮膚、呼吸器、腸及び尿生殖路の外切片、涙、唾液、母乳、腫瘍、器官、細胞培養及び／または細胞培養成分を含む。「癌性試料」は、癌細胞を含む試料である。前記方法は、これらに限定されないが、異なる種類の細胞または組織を比較すること、異なる発達段階を比較すること、ならびに疾患もしくは異常の存在及び／または種類を検出または判定することを含む、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの発現の態様または試料の状態を試験するために使用することができる。
本明細書で使用する場合「捕捉試薬」という用語は、適切な条件下で捕捉試薬－標的分子複合体が試料の残部から分離され得るように、試料の標的分子を結合して捕捉できる試薬を指す。一実施形態では、捕捉試薬は固定化される。一実施形態において、サンドイッチ免疫測定法の捕捉試薬は、標的抗原に対する抗体または異なる抗体の混合物である。
本明細書で使用する場合「検出可能な抗体」という用語は、検出手段により増幅される標識によって直接的に、または例えば標識した別の抗体によって間接的に、検出可能な抗体を指す。直接標識において、抗体は通常、何らかの手段によって検出可能な部分に共役結合される。一実施形態において、検出可能な抗体はビオチン化抗体である。
本明細書で使用する場合「検出手段」という用語は、検出可能な抗体の存在を検出するために使用される部分または技術を指し、固定化された標識（例えばマイクロタイタープレート上に捕捉した標識）を増幅する検出剤を含む。一実施形態において、検出手段は蛍光定量的な検出剤（例えばアビディンまたはストレプトアビジン）である。
一般に「サンドイッチＥＬＩＳＡ」は、次の工程を使用する。（１）マイクロタイタープレートを捕捉抗体でコーティングする、（２）試料を添加して、存在する任意の抗原を捕捉抗体と結合させる、（３）検出用抗体を添加して、抗原と結合させる、（４）酵素結合二次抗体を添加して、検出用抗体と結合させる、及び（５）基質を添加して、酵素によって検出可能な形態に変える。
本明細書で使用する場合「標識」という語句は、「標識した」抗体を作成するために、抗体に直接的にまたは間接的に共役結合した検出可能な化合物または組成物を指す。標識
自体が検出可能であり得るか（例えば、放射性同位体標識もしくは蛍光標識）、または酵素標識の場合、検出可能である基質化合物もしくは組成物の化学変化を触媒し得る。
「相関する」または「相関すること」とは、いかなる場合であっても、第１の分析の性能及び／または結果を第２の分析の性能及び／または結果と比較することを意味する。例えば、第２の分析の実施において第１の分析の結果を使用できる、かつ／または第２の分析を実行しなければならないか判断するために第１の分析の結果を使用できる、かつ／または第１の分析の結果を第２の分析の結果と比較できる。一実施形態において、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの発現の増加は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα標的療法が有効である可能性の増加と相関する。
「癌」及び「癌性」という用語は哺乳類の生理学的状態を意味するかまたは表し、この場合、細胞集団は無秩序な細胞増殖によって特徴づけられる。「腫瘍」及び「新生物」は、良好な（非癌性）もしくは前癌性病変を含む悪性（癌性）のいずれかの、過剰な細胞の成長または増殖から生じる１つ以上の細胞を指す。
癌の例としては、リンパ腫及び白血病が挙げられる。本発明の方法及び試薬（例えば、抗ＣＤ１２３抗体、その抗原結合断片、またはその免疫複合体）によって治療され得るかつ／または予防され得る癌または腫瘍形成性疾患の例としては、ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＡＬＬ（例えば、Ｂ－ＡＬＬ）、ＣＬＬ、骨髄異形成症候群、芽球性形質細胞様ＤＣ腫瘍（ＢＰＤＣＮ）白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病／リンパ腫及び成熟Ｂ細胞腫瘍（例えばＢ細胞慢性リンパ性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病）を含むＢ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、低悪性、中悪性及び高悪性ＦＬを含む濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、皮膚濾胞中心リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞性リンパ腫（ＭＡＬＴ型、節性及び脾臓辺縁帯）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、バーキットリンパ腫、形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、移植後リンパ増殖性疾患、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、未分化大細胞型リンパ腫（ＡＬＣＬ）、ならびにホジキン白血病（ＨＬ）が挙げられる。
癌は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα発現レベルが増加した細胞を含有する癌も含む。このようなＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαが増加した癌は、ＡＭＬ、ＣＭＬ、ＡＬＬ（例えば、Ｂ－ＡＬＬ）、及びＣＬＬを含むが、これらに限定されない。
「癌細胞」、「腫瘍細胞」という用語及び文法的に同等の用語は、腫瘍、または非腫瘍形成性細胞（それは多くの腫瘍細胞集団を含む）及び腫瘍形成性幹細胞（癌幹細胞）を含む前癌性病変に由来する、全細胞集団を指す。本明細書で使用する場合「腫瘍細胞」という用語は、癌幹細胞から腫瘍細胞を識別するために再生かつ分化する能力を欠いている腫瘍細胞を単に指すとき、「非腫瘍形成性」という用語によって修飾される。
「対象」という用語は、それは特定の治療のレシピエントである、ヒト、非ヒト霊長類、げっ歯動物などを含むがこれらに限定されない任意の動物（例えば、哺乳動物）を指す。通常「対象」及び「患者」という用語は、ヒト対象への言及では本明細書では同じ意味で用いられる。
１つ以上の更なる治療薬「と組み合わせた」投与とは、同時の（併用の）及び任意の順番での連続の投与を含む。
「医薬製剤」という用語は、活性成分の生物活性をもたらすような形態であり、及び製剤が投与される対象に容認できないほど有毒性である追加の成分を含有しない、製剤を指
す。このような製剤は無菌であり得る。
本明細書にて開示する抗体または免疫複合体の「有効量」は、記載した特定の目的を実施するのに十分な量である。「有効量」は、記載した目的に関して経験的にかつ常套的な方法で確定し得る。
「治療に有効な量」という用語は、対象または哺乳動物の疾患または障害を「治療する」のに効果的な抗体または他の薬物の量を指す。癌の場合、薬物の治療に有効な量は、癌細胞の数を減らす；腫瘍サイズを低減する；末梢器官内への癌細胞浸潤を阻害する（すなわちある程度減速させ、特定の実施形態で停止させる）；腫瘍転移を阻害する（すなわちある程度減速させ、特定の実施形態で停止させる）；腫瘍増殖をある程度阻害する；癌に関連する１つ以上の症状をある程度軽減する、かつ／または好ましい反応（例えば、増大した無憎悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）もしくは全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、もしくは場合によっては安定疾患（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、減少した無増悪期間（ＴＴＰ）、またはこれらの任意の組み合わせ）をもたらすことができる。本明細書の「治療する」の定義を参照のこと。薬物が増殖を防ぐかつ／または既存の癌細胞を死滅することができる範囲で、それは細胞増殖抑制性及び／または細胞障害性であり得る。
「予防的に有効な量」とは、所望の予防的結果を得るのに必要な投与量及び必要な期間における、効果的な量を指す。一般的だが必然的にではなく、予防的投与量が疾患の前または初期において対象に使用されるので、予防的に有効な量は治療に有効な量より少ない。
「好ましい反応をする」という用語は一般的に、対象の好ましい状態が生じることを指す。癌治療に関して、前記用語は対象に治療効果を提供することを指す。癌の陽性治療効果は、種々の方法で測定されることができる（Ｗ．Ａ．Ｗｅｂｅｒ，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．５０：１Ｓ－１０Ｓ（２００９）参照）。例えば、腫瘍増殖抑制、分子マーカー発現、血清マーカー発現、及び分子画像診断技術はすべて、抗癌治療の治療有効性を評価するために使用することができる。腫瘍増殖抑制に関して、ＮＣＩ標準に従ってＴ／Ｃ＜４２％は抗腫瘍活性の最低レベルである。Ｔ／Ｃ（％）＝処理済み腫瘍体積の中央値／対照腫瘍体積の中央値×１００において、Ｔ／Ｃ＜１０％は高抗腫瘍活性レベルとみなされる。好ましい反応は、例えば、無憎悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、もしくは全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、もしくは場合によっては安定疾患（ＳＤ）の増大、進行性疾患（ＰＤ）の減少、無増悪期間（ＴＴＰ）の減少、またはこれらの任意の組み合わせによって評価され得る。
ＰＦＳ、ＤＦＳ、及びＯＳは、新薬承認のための米国国立癌研究所及び米国食品医薬品局で定めた基準によって測定できる。Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２１（７）：１４０４－１４１１を参照。
「無増悪生存期間」（ＰＦＳ）とは、組み入れから疾患の進行または死亡までの時間を指す。ＰＦＳは一般的に、カプラン－マイヤー法及び固形癌の治療効果判定規準（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｉｎ Ｓｏｌｉｄ Ｔｕｍｏｒｓ）（ＲＥＣＩＳＴ）１．１を用いて測定される。一般的に無増悪生存期間とは、癌が更に悪化せずに、患者が生存している状況を指す。
「完全奏効」または「完全寛解」または「ＣＲ」とは、治療に反応した腫瘍または癌のすべての徴候の消失を示す。これは、癌が治癒したことを必ずしも意味しない。
「部分奏効」または「ＰＲ」とは、治療に反応した１つ以上の腫瘍もしくは病変の大きさもしくは体積、または身体の癌の範囲の減少を指す。
「安定疾患」とは、進行または再発のない疾患を意味する。安定疾患において、部分奏効と認定されるのに十分な腫瘍縮小も、進行性疾患とみなすのに十分な腫瘍増加もない。
「進行性疾患」とは、もう１つの新しい病変または腫瘍の外見及び／または既存の非標的の病変の明確な進行を意味する。進行性疾患は、腫瘍の重量の増加または腫瘍の拡散の増加のいずれかによる、治療開始から２０％超の腫瘍増殖を指すこともできる。
「無病生存期間」（ＤＦＳ）は、患者が無病である治療中と治療後の期間を意味する。
「全生存期間」（ＯＳ）は、患者の組み入れから死亡まで、または判明している最後の生存の日付で打ち切った期間を指す。ＯＳは、ナイーブもしくは未治療の個人または患者と比較した余命の延長を含む。全生存期間は、患者が、例えば診断時または治療時から一定の期間（例えば１年、５年など）生存している状況を指す。
「化学療法薬」は、作用機序に関係なく、癌治療に有用な化学化合物である。「治療する」もしくは「治療」もしくは「治療すること」または「軽減する」もしくは「軽減すること」という用語は、診断された病態もしくは障害の進行を治療し、低下させ、その症状を軽減するかつ／または停止させる治療的手段を指す。したがって治療を必要とするものは、疾患とすでに診断されたものを含み、微小残存病変、または耐性病変、または置換病変を有するものも含むことができる。特定の実施形態で、患者が以下のうちの１つ以上を示す場合：癌細胞の数の減少またはそれがまったく存在しない；腫瘍サイズの低減；例えば軟組織及び骨内への癌の拡散を含む、末梢器官内への癌細胞浸潤の阻害またはその不在；腫瘍転移の阻害またはその不在；腫瘍増殖の阻害またはその不在；特定の癌に関連する１つ以上の症状の軽減；罹患率及び死亡率の減少；生活の質の改善；腫瘍の腫瘍原性、腫瘍形成頻度または腫瘍形成能力の低減；腫瘍の癌幹細胞の数または発現頻度の低減；非腫瘍形成状態に対する腫瘍形成細胞の分化；無憎悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、または全生存期間（ＯＳ）、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、安定疾患（ＳＤ）の増大、進行性疾患（ＰＤ）の減少、無増悪期間（ＴＴＰ）の減少、またはこれらの任意の組み合わせ、対象は本発明の方法によって首尾よく癌を「治療されている」。
予防的手段または予防手段は、標的病態または疾患の発現を防止するかつ／または遅延させる手段を意味する。したがって予防的手段または予防手段を必要とするものは、疾患に罹患しやすいもの及び疾患を予防しなければならないものを含む。
予防的手段または予防手段は、標的病態または疾患の発現を防止するかつ／または遅延させる治療的手段を意味する。したがって予防的手段または予防手段を必要とするものは、疾患に罹患しやすいもの及び疾患を予防しなければならないものを含む。
本明細書で使用する場合「医療従事者」という用語は、生存対象（例えば、ヒト患者）と直接接して、それを救援する個人または機関を指す。医療従事者の実施例を非限定例としては、医師、看護師、技師、療法士、薬剤師、カウンセラー、代替医療専門家、医療施設、診療所、病院、救急室、クリニック、緊急治療センター、代替医療クリニック／施設、ならびに、一般医療、専門医療、外科的及び／または任意の他の種類の治療、評価、維持、セラピー、薬物療法及び／または助言を含むがこれらに限定されない、患者の状態のすべてまたはその任意の部分に対する一般療法及び／または専門療法、評価、維持、セラピー、薬物療法、及び／または助言を提供する他の任意の団体を含む。
いくつかの態様において、医療従事者は、癌を治療するために治療を施す別の医療従事者を管理できるまたは指示できる。本明細書で使用する場合、治療の「適用」とは、治療を対象に処方すること、及び治療を対象に加える、適用する、または与えることを含む。医療従事者は、以下の処置：試料を得る、試料を処理する、試料を提出する、試料を受領する、試料を移送する、試料を分析または測定する、試料を定量化する、試料を分析／測定／定量化した後に得られた結果を提供する、試料を分析／測定／定量化した後に得られた結果を受領する、１つ以上の試料を分析／測定／定量化した後に得られた結果を比較／スコア化する、１つ以上の試料からの比較／スコアを提供する、１つ以上の試料からの比較／スコアを得る、治療または治療薬（例えば、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤）を適用する、治療の適用を開始する、治療の適用を止める、治療の適用を継続する、治療の適用を一時的に中断する、治療薬の投与量を増加する、治療薬の投与量を減少させる、治療薬の量の投与を継続する、治療薬の投与頻度を増加する、治療薬の投与頻度を減少させる、治療薬の同じ投与量頻度を維持する、治療もしくは治療薬を少なくとも少なくとも別の治療もしくは治療薬によって置き換える、または治療もしくは治療薬を少なくとも他の治療もしくは追加の治療薬と組み合わせることを実行する、または別の医療従事者または患者に実施させるもしくは指示することができる。これらの処置は、コンピュータで実行される方法（例えば、ウェブサービスまたは独立型コンピュータシステムを介して）を使用して、医療従事者によって自動的に実施可能である。
本明細書で同じ意味で用いられる「ポリヌクレオチド」または「核酸」は任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドまたは塩基、及び／またはその類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマーに組み込まれることができる任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、修飾ヌクレオチド（例えば、メチル化ヌクレオチド及びその類似体）を含むことができる。存在する場合、ヌクレオチド構造に対する修飾は、ポリマーのアセンブリの前後において付与され得る。ヌクレオチド配列は、非ヌクレオチド成分によって中断され得る。ポリヌクレオチドは、重合の後に、例えば標識化成分との共役結合によって、更に修飾され得る。他の種類の修飾は、例えば、１つ以上の天然起源のヌクレオチドの類似体による置換「キャップ」、ヌクレオチド間修飾（例えば、無荷電結合（例えば、メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カバメートなど）及び荷電結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）による修飾、例えばタンパク質（例えば、ヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ－Ｌリジンなど）などのペンダント部分を含有する修飾、挿入剤（例えば、アクリジン、ソラレンなど）による修飾、キレート化剤（例えば、金属、放射性金属、ホウ素、酸化金属など）を含有する修飾、アルキル化剤を含有する修飾、修飾結合（例えば、αアノマー核酸など）による修飾、ならびにポリヌクレオチド（複数可）の修飾されていない形態など）を含む。更に、通常糖に存在するヒドロキシル基のいずれかは、例えばホスホネート基、ホスフェート基で置換され得るか、標準的な保護基によって保護され得るか、もしくは追加のヌクレオチドへの追加の結合を提供するために活性化され得るか、または固体支持体に共役結合され得る。５’及び３’末端のＯＨはリン酸化され得る、またはアミンもしくは１～２０の炭素原子の有機キャッピング基部分によって置換され得る。他のヒドロキシルは、標準的な保護基に誘導体化され得る。ポリヌクレオチドは、当該技術分野において周知のリボースまたはデオキシリボース糖の類似形態も含有することができ、これらには例えば２’－ ０－メチル－、２’－ ０－アリル、２’－フルオロまたは２’－アジド－リボース、炭素環式糖の類似体、αアノマー糖、エピマー糖（例えばアラビノース、キシロースまたはリキソース）、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式類似体、及び非塩基性ヌクレオシド類似体（例えばメチルリボシド）が含まれる。１つ以上のホスホジエステル結合は、代替の連結基で置換され得る。これらの代替の連結基には、限定されるものではないが、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミダート」）、Ｐ
（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ＊、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）と置換された実施態様のものが含まれ、ここで各Ｒ及びＲは独立してＨ、または所望によりエーテル（－Ｏ－）結合を含有する置換もしくは非置換のアルキル（１～２０Ｃ）、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、またはアラルキルである。ポリヌクレオチド中のすべての結合が、同一である必要はない。上記の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む本明細書で言及されるすべてのポリヌクレオチドに適用される。
「ベクター」という用語は構造体を意味し、それは宿主細胞中の目的の１つ以上の遺伝子（複数可）または配列（複数可）を送達かつ発現できる。ベクターの例としては、ウイルスベクター、裸のＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、カチオン性縮合剤と関連するＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームにカプセル封止されたＤＮＡまたはＲＮＡ発現ベクター、及び特定の真核細胞（例えば産生細胞）を含むが、これに限定されない。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指すために本明細書で同じ意味で用いられる。ポリマーは直鎖または分枝鎖であり得て、それは修飾アミノ酸を含むことができ、非アミノ酸により介在されることができる。前記用語は、自然にまたは介在により修飾されたアミノ酸ポリマー（例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または他の任意の操作もしくは修飾（例えば標識化成分との共有結合）も含む。更に、例えばアミノ酸（例えば非天然アミノ酸などを含む）の１つ以上の類似体を含有するポリペプチド、及び当該技術分野において周知の他の修飾も、前記定義内に含まれる。本発明のポリペプチドは抗体に基づくので、特定の実施形態でポリペプチドは単鎖または付随鎖として生じ得ると理解されている。いくつかの実施形態では、ポリペプチド、ペプチド、またはタンパク質は非天然起源である。いくつかの実施形態では、ポリペプチド、ペプチド、またはタンパク質は他の天然起源の成分から精製される。いくつかの実施形態では、ポリペプチド、ペプチド、またはタンパク質は組換えで作製される。
２つ以上の核酸またはポリペプチドに関して「同一の」または「同一性」％とは、配列同一性の一部としていかなる保存的アミノ酸置換も考慮せずに、最大一致について比較かつ整列した（必要に応じて間隙を導入する）とき、それは同一であるか、もしくは特定の割合の同一であるヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する、２つ以上の配列またはサブ配列を指す。同一性％は、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを用いて、または目視検査によって測定されることができる。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用可能な種々のアルゴリズム及びソフトウェアは、当技術分野において周知である。配列アライメントアルゴリズムの１つのそのような非限定例は、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８７：２２６４－２２６８，１９９０中で記載され、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：５８７３－５８７７，１９９３中で修正され、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれたアルゴリズムである（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２，１９９１）。特定の実施形態で、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２，１９９７、ＢＬＡＳＴ－２，ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ２６６：４６０－４８０，１９９６），ＡＬＩＧＮ，ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）に記載のとおり使用することができるか、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列を整列させるために使用することができる追加の公開されているソフトウェアプログラムである。特定の実施形態で、２つのヌクレオチド配列間の同一性％は、ＧＣＧソフトウェアのＧＡＰプログラムを使用して（例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭ
Ｐマトリックス、ならびに４０、５０、６０、７０、または９０のギャップ重量及び１、２、３、４、５、または６の長さ重量を使用）測定される。特定の代替的実施形態において、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズムを組み込む、ＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラム（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３、１９７０）は、２つのアミノ酸配列間の同一性％を測定するために使用することができる（例えば、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２ｍａｔｒｉｘまたはＰＡＭ２５０ｍａｔｒｉｘのいずれか、ならびに１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重量及び１、２、３、４、５の長さ重量を使用）。あるいは特定の実施形態で、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列間の同一性％は、Ｍｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズムを使用して測定される（ＣＡＢＩＯＳ、４：１１－１７、１９８９）。例えば同一性％は、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用して、及びギャップ長ペナルティが１２であり、ギャップペナルティが４である残基表とＰＡＭ１２０を使用して測定することができる。特定の配列ソフトウェアによる最大限の配列の適切なパラメータは、当業者により決定され得る。特定の実施形態で、配列ソフトウェアのデフォルトのパラメータを使用する。特定の実施形態で、第１のアミノ酸配列の第２のアミノ酸配列に対する同一性％「Ｘ」は、１００×（Ｙ／Ｚ）として計算され、式中、Ｙは第１及び第２の配列のアラインメントの完全な一致として記録されるアミノ酸残基の数であり（目視検査または特定の配列アライメントプログラムによって整列させる）、Ｚは第２の配列の残基の総数である。第１の配列の長さが第２の配列より長い場合、第１の配列の第２の配列に対する同一性％は、第２の配列の第１の配列に対する同一性％を超える。
非限定的な例として、特定のポリヌクレオチドが参照配列に対して特定の配列同一性％（例えば、少なくとも８０％同一、少なくとも８５％同一、少なくとも９０％同一であり、いくつかの実施形態では少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一である）を有するかどうかは、特定の実施形態で、Ｂｅｓｔｆｉｔプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｋ，５７５Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ５３７１１）を使用して決定されることができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、２つの配列間の相同性の最善のセグメントを見つけるために、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎの局所相同アルゴリズム（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ２：４８２－４８９、１９８１）を使用する。特定の配列が本発明に従って例えば参照配列と９５％同一かどうか測定するために、Ｂｅｓｔｆｉｔまたは任意の他の配列アライメントプログラムを使用するとき、同一性のパーセンテージが参照ヌクレオチド配列の全長にわたって計算されるように、かつ参照配列のヌクレオチドの総数の最高５％の相同性のギャップが許容されるように、パラメータは設定される。
いくつかの実施形態で、本発明の２つの核酸またはポリペプチドは実質的に同一であるが、これは、配列比較のアルゴリズムを用いて、または目視検査により測定する場合、最大一致について比較かつ整列したとき、それらが少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、及びいくつかの実施形態において、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％のヌクレオチドまたはアミノ酸残基の同一性を有することを意味する。特定の実施形態で、同一性は、長さが少なくとも約１０、約２０、約４０～６０の残基もしくはそれらの間の任意の整数値である配列の範囲にわたって、もしくは６０～８０残基より長い領域、少なくとも約９０～１００の残基にわたって存在するか、または配列は、比較されている配列の完全長（例えばヌクレオチド配列のコード領域）にわたって実質的に同一である。
「保存的アミノ酸置換」は、１つのアミノ酸残基が類似の側鎖を有する別のアミノ酸残基によって置き換えられたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基の一群は、当該
技術分野において定義されており、これらには、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、無荷電極性側鎖（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β分枝状側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。例えば、チロシンに対するフェニルアラニンの置換は、保存的置換である。特定の実施形態で、本発明のポリペプチド及び抗体の配列における保存的置換は、抗原（複数可）に対する、すなわちポリペプチドまたは抗体が結合するＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに対する、アミノ酸配列を含有するポリペプチドまたは抗体の結合を抑制しない。抗原結合を排除しないヌクレオチド及びアミノ酸の保存的置換を確認する方法は、当該技術分野で周知である（例えばＢｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１１８７，１９９３、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４，１９９９及びＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４：４１２－４１７，１９９７を参照のこと）。
本明細書で使用する場合、「透過性グリコプロテイン」「Ｐ－ｇｐまたはＰｇｐ」「多剤耐性タンパク質１（ＭＤＲ１）」「ＡＴＰ結合カセットサブファミリーＢメンバー１（ＡＢＣＢ１）」または「分化抗原群２４３（ＣＤ２４３）」）としても既知の「Ｐ糖タンパク質１」は、細胞外及び細胞内膜にわたって多種多様な基質を輸送するＭＤＲ／ＴＡＰサブファミリーのＡＢＣ輸送体である。それは、広範な基質特異性を有するＡＴＰ依存性排出ポンプである。Ｐ－ｇｐは広範囲に分配されて、生体異物（例えば毒素または薬物）を腸管腔内に送り返す腸上皮にて、胆管内に送る肝細胞にて、尿導管内に送る腎臓の近位尿細管の細胞にて、また毛細管内に送り返す、血液脳関門及び血液精巣関門を含む毛細管内皮細胞にて発現される。いくつかの癌細胞は大量のＰ－ｇｐも発現し、それはこれらの癌に多剤耐性を与える。
本明細書で使用する場合「アルキル」とは、１～２０の炭素原子の飽和直鎖または分枝鎖一価炭化水素基を意味する。アルキルの例としては、メチル、エチル、１－プロピル、２－プロピル、１－ブチル、２－メチル－１－プロピル、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、２－ブチル、２－メチル－２－プロピル、１－ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、２－メチル－２－ブチル、３－メチル－２－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－１－ブチル、１－ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、３－メチル－３－ペンチル、２－メチル－３－ペンチル、２，３－ジメチル－２－ブチル、３，３－ジメチル－２－ブチル、１－ヘプチル、１－オクチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくはアルキルは、１～１０の炭素原子を有する。より好ましくはアルキルは、１～４つの炭素原子を有する。
基の炭素原子数は、接頭語「Ｃｘ－ｘｘ」によって本明細書で指定することができ、この場合、ｘ及びｘｘは整数である。例えば「Ｃ１－４アルキル」は、１～４つの炭素原子を有するアルキル基である。
「化合物」または「細胞毒性化合物」という用語は、同じ意味で用いられる。構造体もしくは式、もしくはその任意の誘導体が本発明にて開示されている、または構造体もしくは式、もしくはその誘導体が参照により組み込まれる化合物を含むことを、それらは目的とする。前記用語は、本発明にて開示されるすべての式の化合物の立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、及び塩（例えば、薬学的に許容される塩）も含む。前記用語は、前述のいずれかの任意の溶媒和物、水和物及び多形体も含む。本出願に記
載されている本発明の特定の態様の「立体異性体」、「幾何異性体」、「互変異性体」「溶媒和物」、「代謝産物」、「塩」、「複合体」、「水和物」、または「多形体」の特定の詳細説明は、「化合物」という用語がこれらの他の形態の詳細説明なしで使用される、本発明の別の態様のこれらの形態の意図的な省略として解釈してはならない。
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合わせることができない特性を有する分子を指し、一方で「アキラル」という用語は、その鏡像パートナーと重ね合わせることができる分子を指す。
「立体異性体」という用語は、同一の化学構造及び結合性を有するが、単結合のまわりで回転することによって相互転換できない、空間における原子の配置が異なる化合物を指す。
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラリティー中心を有する立体異性体を指し、その分子は互いの鏡像ではない。ジアステレオマーは、異なる物理的性質、例えば融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、結晶化、電気泳動及びクロマトグラフィーなどの高解像度分析技法で、分離することができる。
「エナンチオマー」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である化合物の２つの立体異性体を指す。
本明細書で使用する立体化学の定義及び慣例は一般的に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ及びＥｌｉｅｌ，Ｅ． ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４に従う。本発明の化合物は、不斉中心またはキラル中心を含むことができ、したがって種々の立体異性体として存在し得る。限定されないが、ジアステレオマー、エナンチオマー及びアトロプ異性体を含む本発明の化合物のすべての立体異性体、ならびにラセミ混合物などのその混合物は、本発明の一部を形成することが意図されている。多くの有機化合物は光学的に活性な形態で存在する。すなわち、それらは平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を記載する場合、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳを用いて、そのキラル中心（複数可）に関して分子の絶対的な立体配置を示す。接頭辞ｄ及びＩ、または（＋）及び（－）は、化合物による平面偏光の回転の記号を示すために用いられ、（－）またはｌは化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄという接頭辞がついた化合物は、右旋性である。所定の化学構造において、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除き、同一である。特定の立体異性体はエナンチオマーと呼ばれることもあり、そのような異性体の混合物はしばしばエナンチオマー混合物と呼ばれる。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物またはラセミ化合物と呼ばれ、これは、化学反応または化学プロセスにおいて、立体選択性または立体特異性が存在しない場合に起こる可能性がある。「ラセミ混合物」及び「ラセミ化合物」という用語は、光学活性を欠く２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指す。
「互変異性体」または「互変異性型」という用語は、低エネルギー障壁を介して相互転換可能である異なるエネルギーの構造異性体を意味する。例えばプロトン互変異性体（別名プロトトロピー互変異性体）は、プロトン（例えばケト－エノール及びイミン－エナミン異性化）の移動を介する相互転換を含む。原子価互変異性体は、いくつかの結合性電子の再編成による相互転換を含む。
「イミン反応性試薬」という用語は、イミン基によって反応可能な試薬を指す。イミン反応性試薬の例としては、亜硫酸塩（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２、またはカチオンで形成されるＨＳＯ３ －、ＳＯ３ ２－もしくはＨＳＯ２ －の塩）、メタ重亜硫酸塩（Ｈ２Ｓ２Ｏ５、またはカチオンで形成されるＳ２Ｏ５ ２－の塩）、モノ、ジ、トリ及びテトラ－チオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３、またカチオンで形成されたＰＯ３Ｓ３－、ＰＯ２Ｓ２ ３－、ＰＯＳ３ ３－もしくはＰＳ４ ３－の塩）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ、種々のアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ－Ｒｉ、Ｒｉ’、ＮＨ－Ｒｉ、ＮＨ２－Ｒｉ）、ＮＨ２－ＣＯ－ＮＨ２、ＮＨ２－Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ２’チオ硫酸塩（Ｈ２Ｓ２Ｏ３、またはカチオンで形成されるＳ２Ｏ３ ２－の塩）、亜ジチオン酸塩（Ｈ２Ｓ２Ｏ４、またはカチオンで形成されるＳ２Ｏ４ ２－の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）、またはカチオンで形成される塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＨＯＨ、またはカチオンで形成された塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、またはＨＯＣＨ２ＳＯ２ －Ｎａ＋などのカチオンで形成されるＨＯＣＨ２ＳＯ２ －の塩）、糖化ヌクレオチド（例えばＧＤＰ－マンノース）、フルダラビン、またはこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されず、ここでＲｉ及びＲｉ’は、それぞれ独立して１～１０の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキルであり、－Ｎ（ＲＪ）２、－ＣＯ２Ｈ、－ＳＯ３Ｈ、及び－ＰＯ３Ｈから選択される、少なくとも１つの置換基により置換されており；Ｒｉ及びＲｉ’は更に、本明細書に記載のアルキルの置換基にて任意で置換されることができ；Ｒｊは、１～６つの炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキルであり；Ｒｋは、１～１０の炭素原子を有する線状、分枝状もしくは環状アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールである（好ましくはＲｋは、１～４つの炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキルであり、より好ましくはＲｋはメチル、エチルまたはプロピルである）。好ましくはカチオンは、Ｎａ＋またはＫ＋などの一価のカチオンである。好ましくはイミン反応性試薬は、亜硫酸塩、ヒドロキシルアミン、尿素及びヒドラジンから選択される。より好ましくはイミン反応性試薬は、ＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３である。
本明細書で使用する場合「薬学的に許容される塩」という語句は、本発明の化合物の薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。塩の例には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物塩、臭化物塩、ヨウ化物塩、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチアニン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、ショ糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、「メシル酸塩」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））塩、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、及びアンモニウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される塩には、例えば酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの別の分子の包含を伴い得る。対イオンは、親化合物にて電荷を安定させる有機または無機の部分であり得る。更に薬学的に許容される塩は、その構造に２つ以上の電荷を帯びた原子を有し得る。複数の電荷を帯びた原子が薬学的に許容される塩の一部である例は、複数の対イオンを有することができる。したがって薬学的に許容される塩は、１つ以上の電荷を帯びた原子及び／または１つ以上の対イオンを有することができる。
本発明の化合物が塩基である場合、所望の薬学的に許容される塩は、当該技術分野において利用可能な任意の好適な方法、例えば、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝
酸、メタンスルホン酸、リン酸など）、または有機酸（例えば、酢酸、マレイン酸、コハク酸、吉草酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サルチル酸）、ピラノシジル酸（例えば、グルクロン酸もしくはガラクツロン酸）、αヒドロキシ酸（例えば、クエン酸もしくは酒石酸）、アミノ酸（例えば、アスパラギン酸もしくはグルタミン酸）、芳香族酸（例えば、安息香酸もしくはケイ皮酸）、スルホン酸（例えばｐ－トルエンスルホン酸もしくはエタンスルホン酸）などによる遊離塩基の処理によって調製され得る。
本発明の化合物が酸の場合、所望の薬学的に許容される塩は、任意の好適な方法、例えばアミン（一級、二級または三級）、アルカリ金属水酸化物もしくはアルカリ土類金属水酸化物などの無機または有機の塩基による遊離酸の処理によって調製され得る。好適な塩の実例としては、アミノ酸（グリシン及びアルギニン）、アンモニア、一級、二級、及び三級アミンならびに環状アミン（例えばピペリジン、モルホリン及びピペラジン）に由来する有機塩、ならびにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム及びリチウムに由来する無機塩が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する場合「溶媒和物」という用語は、非共有結合性の分子間力によって結合した、化学量論的または不定比的量の溶媒（例えば水、イソプロパノール、アセトン、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸及びエタノールアミンジクロロメタン、２－プロパノールなど）を更に含む、化合物を意味する。化合物の溶媒和物または水和物は、ヒドロキシル溶媒（例えばメタノール、エタノール、１－プロパノール、２－プロパノールまたは水）の少なくとも１モル当量を化合物に添加することによって直ちに調製されて、イミン部分の溶媒和または水和をもたらす。
「代謝産物」または「異化産物」は、特定の化合物、その誘導体、もしくはその複合体、もしくはその塩の身体内の代謝または異化によって作成される生成物である。化合物、その誘導体、またはその複合体の代謝産物は、当該技術分野において既知の日常的な技術を用いて同定されて、その作用は、本明細書に記載するような試験を使用して測定されることができる。このような生成物は、例えば投与された化合物の酸化、ヒドロキシル化、還元、加水分解、アミド化、アミド分解、エステル化、エステル分解、酵素的切断などから生成され得る。したがって本発明は、その代謝産物を得るのに十分な期間、本発明の化合物、その誘導体、もしくはその複合体を哺乳動物に接触させることを含む、方法によって作成される、化合物、その誘導体、もしくはその複合体を含む、本発明の化合物、その誘導体、またはその複合体の代謝産物を含む。
「薬学的に許容される」という用語は、物質または組成物が製剤を含む他の成分及び／またはそれで治療される哺乳動物と化学的にかつ／または毒性学的に適合性でなければならないことを示す。
「保護基」または「保護部分」という用語は、化合物、その誘導体またはその複合体上の他の官能基を反応させると共に、特定の官能基を遮断するまたは保護するために一般的に使用される置換基を指す。例えば「アミン保護基」または「アミノ保護部分」は、化合物のアミノ官能基を遮断するまたは保護するアミノ基に結合した置換基である。このような基は、当該技術分野において周知であり（例えばＰ．Ｗｕｔｓ ａｎｄ Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅ，２００７，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ７，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＪを参照）、例としてはカルバメート（例えばメチル及びエチルカルバメート、ＦＭＯＣ、置換エチルカルバメート、１，６－β脱離（「自壊型」とも称される）、尿素、アミド、ペプチド、アルキル及びアリール誘導体によって切断されるカルバメート）が挙げられる。好適なアミノ保護
基は、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ－ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）及び９－フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を含む。保護基及びその使用の一般的な説明については、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ＆Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００７を参照のこと。
「アミノ酸」という用語は、天然起源のアミノ酸または非天然起源のアミノ酸を指す。一実施形態において、アミノ酸は、ＮＨ２－Ｃ（Ｒａａ’Ｒａａ）－Ｃ（＝Ｏ）ＯＨで表され、ここでＲａａ及びＲａａ’は、それぞれ独立してＨ、１～１０の炭素原子を有する任意で置換した線状、分枝状もしくは環状アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルであるか、あるいはＲａａ及びＮ末端窒素原子は複素環を一緒に形成できる（例えば、プロリンの場合）。「アミノ酸残基」という用語は、１つの水素原子がアミノ酸（例えば－ＮＨＣ（Ｒａａ’Ｒａａ）－Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－）のアミン及び／またはカルボキシ末端から除去される場合、対応する残基を指す。
「カチオン」という用語は、正電荷を持つイオンを指す。カチオンは一価（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋、ＮＨ４ ＋など）、二価（例えば、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋など）、または多価（例えば、Ａｌ３＋など）であり得る。好ましくは、カチオンは一価である。
「反応性エステル基」という用語は、アミン基と直ちに反応してアミド結合を形成できる、エステル基を指す。代表的な反応性エステル基は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ－ヒドロキシフタルイミドエステル、Ｎ－ヒドロキシスルホ－スクシンイミドエステル、パラ－ニトロフェニルエステル、ジニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル及びこれらの誘導体を含むが、これらに限定されず、前記誘導体はアミド結合形成を促進する。特定の実施形態で、反応性エステル基は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、またはＮ－ヒドロキシスルホ－スクシンイミドエステルである。
「アミン反応性基」という用語は、アミン基と反応して共有結合を形成できる基を指す。代表的なアミン反応性基は、反応性エステル基、ハロゲン化アシル、ハロゲン化スルホニル、イミドエステル、または反応性チオエステル基を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態で、アミン反応性基は反応性エステル基である。一実施形態において、アミン反応性基は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、またはＮ－ヒドロキシスルホ－スクシンイミドエステルである。
「チオール反応性基」という用語は、チオール（－ＳＨ）基と反応して共有結合を形成できる基を指す。代表的なチオール反応性基は、マレイミド、ハロアセチル、ハロアセトアミド、ビニルスルホン、ビニルスルホンアミド、またはビニルピリジンを含むが、これらに限定されない。一実施形態では、チオール反応性基はマレイミドである。
本開示及び本特許請求の範囲で使用される場合、内容が明らかにそうではないことを記載する場合を除いて、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は複数形を含む。
実施形態が本明細書において「含む」という言葉で記載されている場合はいつでも、「からなる」及び／または「から本質的になる」という言葉で記載される別の類似の実施形態も提供されると理解される。
本明細書で「Ａ及び／またはＢ」などの語句で使用する「及び／または」という用語は、「Ａ及びＢ」、「ＡまたはＢ」の両方、「Ａ」、及び「Ｂ」を含むことを意図とする。
同様に、例えば「Ａ、Ｂ、及び／またはＣ」などの語句で使用する「及び／または」という用語は、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、及びＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）のそれぞれを包含することを意図する。
抗体、化合物、及び免疫複合体の名称
本明細書で使用する場合、抗ＣＤ１２３抗体、細胞毒性化合物、及びそれらの免疫複合体に使用される名称は、以下の意味を一般的に採用する。
ＣＤ１２３－３、－６及び－１４（またはＣＤ１２３Ｍｕ－３、－６及び－１４；またはｍｕＣＤ１２３－３、－６、及び１４）は、３つのマウス抗ＣＤ１２３モノクローナル抗体である。重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１～３配列（ＶＨ－ＣＤＲ１－３及びＶＬ－ＣＤＲ１－３）を、関連する配列番号１～２５と共に表１及び表２に提供する。重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列を、関連する配列番号２６、２８、及び３０と共に表３Ａに提供する。それらの軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を、関連する配列番号２７、２９、及び３１と共に表４Ａに提供する。マウス抗体の完全長重鎖（ＨＣ）配列を表５（配列番号４２、４４、及び４６）に提供し、ネズミ抗体の完全長軽鎖（ＬＣ）配列を表６（配列番号４３、４５、及び４７）に提供する。
ｃｈＣＤ１２３－３、－６、及び－１４は、マウス重鎖及び軽鎖可変領域ならびにヒト定常領域配列を有する、対応するマウス－ヒトキメラ抗体である。例えばキメラ抗体ｃｈＣＤ１２３－６は、それぞれ重鎖及び軽鎖においてそれぞれヒトＩｇＧ１及びκ定常配列と共に、配列番号２８及び２９のマウスＨＣＶＲ及びＬＣＶＲからなる。実施例３を参照。
ｈｕＣＤ１２３－３、－６、及び－１４は、対応するヒト化抗体である。ヒト化が６つの対応するマウスＣＤＲ領域（ＨＣ及びＬＣ ＣＤＲ１－３）のＣＤＲ移植による場合、「Ｇ」という文字はクローン表記の直後に続き、その後にヒト軽鎖及び重鎖可変領域配列の起源を示すバージョン数が続く。したがってｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６は、対応するｍｕＣＤＲ１２３－６抗体から、ヒト軽鎖可変領域Ｇｖ４及び重鎖可変領域Ｇｖ６上へ、６つのＣＤＲ領域を移植する（「Ｇ」）ことに基づく、ヒト化ＣＤ１２３抗体を意味する。同様に－Ｇｖ４．７は、ヒト軽鎖可変領域Ｇｖ４及び重鎖可変領域Ｇｖ７を含み、－Ｇｖ１．１は、ヒト軽鎖可変領域Ｇｖ１及び重鎖可変領域Ｇｖ１を含む。
３つのＨＣＶＲ配列、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１、－Ｇｖ６、及び－Ｇｖ７は、表３Ａに提供されており（配列番号３２及び３４であり、ここで配列番号３４は、２番目の残基Ｘａａのみで異なるので、－Ｇｖ６及び－Ｇｖ７を表す）、そのＤＮＡコード配列は表３Ｂ（配列番号６２、６４及び６６）に提供されている。３つの完全長ＨＣ配列、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１、－Ｇｖ６、及び－Ｇｖ７は、表５に提供されている（配列番号４８及び５０、ここで配列番号５０は、２番目の残基Ｘａａのみで異なるので、完全長－Ｇｖ６及び－Ｇｖ７を表す）。
２つのＬＣＶＲ配列、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１及び－Ｇｖ４は、表４Ａ（配列番号３３及び３５）に提供されており、そのＤＮＡコード配列は表４Ｂ（配列番号６３及び６５）に提供されている。２つの完全長ＬＣ配列（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１及び－Ｇｖ４）は、表６に提供される（配列番号４９及び５１）。
ヒト化が再表面形成による場合、再表面形成された重鎖配列は、マウスＣＤ１２３抗体クローン番号の直後の「ｒｈ」によって表記されており、再表面形成された配列、ｖ１．０またはｖ１．１の２つのバージョンのうちの１つによって更に表記される。したがって
ｈｕＣＤ１２３－６ｒｈｖ１．０及び－ｒｈｖ１．１は、それぞれ１．０及び１．１のバージョン表記と共に、ｍｕＣＤ１２３－６抗体に対応するＣＤＲ領域を有する再表面形成された重鎖配列である。表３ＡのＨＣＶＲ配列番号３９及び４０、ならびに表３Ｂの配列番号６８及び６９を参照のこと。また、表５の完全長ＨＣ配列番号５９及び６０を参照のこと。
同様に、再表面形成された軽鎖配列、ｈｕＣＤ１２３－６ｒｌｖ１．０の唯一のバージョンは、表４ＡのＬＣＶＲ配列番号４１及び表６の完全長ＬＣ配列番号６１を有する。
ｈｕＣＤ１２３－６ｒｈｖ１．０及びｈｕＣＤ１２３－６ｒｌｖ１．０を有する再表面形成抗体はｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．０であり、ｈｕＣＤ１２３－６ｒｈｖ１．１及びｈｕＣＤ１２３－６ｒｌｖ１．０を有する再表面形成抗体はｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１である。
ＮＴＳ２または略して「Ｓ２」は、重鎖のＮ末端に操作されたＳｅｒを有する抗体を指す。ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ６／７のＳ２変異型は、表３ＡのＨＣＶＲ配列、配列番号３８、及び表５の完全長ＨＣタンパク質配列、配列番号５３を有する。
同様にＮＴＳ３または略して「Ｓ３」は、軽鎖のＮ末端に操作されたＳｅｒを有する抗体を指す。ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４のＳ３変異型は、表４ＡのＬＣＶＲ配列、配列番号３７、及び表６の完全長ＬＣタンパク質配列、配列番号５８を有する。
操作されたＮ末端Ｓｅｒ（Ｓ２またはＳ３）を含む抗体は、酸化Ｎ末端Ｓｅｒによる、または「従来の」Ｌｙｓ結合による細胞傷害性薬／剤により共有結合され得る。薬物結合が酸化Ｎ末端Ｓｅｒによる場合、複合体の名称は「ＳｅｒｉＭａｂ」表記を含む。薬物結合がＬｙｓによる場合、複合体の名称はＳｅｒｉＭａｂを含まない（Ｎ末端で操作されたＳｅｒの存在を示すＳ２またはＳ３表記があるという事実にもかかわらず）。特定の結合の種類は、細胞毒反応性基を基準にしても明らかである。例えばｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８とは、軽鎖の酸化Ｎ末端Ｓｅｒによる、Ｄ８とヒト化ＣＤ１２３抗体ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３との間の複合体を指す。ヒト化ＣＤ１２３抗体は移植されたマウスＣＤ１２３－６ＣＤＲ領域、ヒトＬＣ Ｇｖ４及び重鎖Ｇｖ７を有しており、軽鎖のＮ末端は操作されたＳｅｒ（Ｓ３）を有する。それに対し、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－ｓＳＰＤＢ－Ｄ１は、スルホン化ＳＰＤＢリンカーを介したＬｙｓ結合による、Ｄ１と同じヒト化ＣＤ１２３抗体ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３との間の複合体を指す。
特定の実施形態で、軽鎖及び重鎖Ｎ末端の両方が操作されたＳｅｒを含む場合、「Ｓ２Ｓ３」または「Ｓ２Ｓ３－ＳｅｒｉＭａｂ」は抗体名で現れ得る。
本発明の特定の抗体は、配列番号５４の最後から５番目のＣｙｓの同じＫａｂａｔ位に相当する位置で、重鎖ＣＨ３ドメインの操作したＣｙｓを有する。このようなＨＣ、またはこのようなＨＣを含む抗体は、表記ＣｙｓＭａｂを含む。したがってｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂは、ｍｕＣＤ１２３－６ＣＤＲ領域を移植したヒト化ＣＤ１２３抗体であり、ヒト軽鎖Ｇｖ４及び重鎖Ｇｖ６配列に基づき、ここで操作されたＣｙｓは、配列番号５４の最後から５番目のＣｙｓに対応する位置で、ＨＣ ＣＨ３領域に位置している。同様に、その重鎖配列は、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ６－ＣｙｓＭａｂである。更にｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６Ｓ２－ＣｙｓＭａｂは、それ以外は同一であるが、重鎖のＮ末端で操作されたＳｅｒを有し、その重鎖配列はｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ６Ｓ２－ＣｙｓＭａｂである。
上述の再表面形成抗体は更に、軽鎖（再表面形成抗体のＳ３変異型）または重鎖（再表面形成抗体のＳ２変異型）または両方（下記を参照）のいずれかのＮ末端Ｓｅｒを含有するように操作され得る。あるいはまたは加えて、再表面形成抗体は、配列番号５４の最後から５番目のＣｙｓの同じＫａｂａｔ位に相当する位置で、重鎖ＣＨ３ドメインの操作したＣｙｓを有する。（再表面形成抗体のＣｙｓＭａｂバージョン）。再表面形成抗体は、操作されたＣｙｓ及びＮ末端Ｓｅｒの両方を有することができる。
しかし、このようなＣｙｓＭａｂと細胞毒との間に形成される複合体において、少なくとも理論的には、細胞毒は、Ｃｙｓによりまたは従来のＬｙｓにより、ＣｙｓＭａｂに結合されることができる。しかし本明細書で使用する場合、特定の表示がない場合、ＣｙｓＭａｂ表記のある複合体は、Ｃｙｓ結合としても（Ｌｙｓ結合ではない）、ＣｙｓＭａｂと細胞毒との間の複合体を指す。特定の結合の種類は、細胞毒反応性基に基づいても明らかである。
上述の一般的な命名法の他のバリエーションまたは組み合わせも企図されており、当業者には容易に明らかになるであろう。例えばｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＣｙｓＭａｂは、配列番号５４の最後から５番目のＣｙｓに対応する位置で、ＨＣ ＣＨ３領域に位置している操作されたＣｙｓを有する、ｈｕＣＤ１２３－６（ｖ１．１）の再表面形成されたバージョンである。
本発明の抗体またはその抗原結合断片は、Ｌｙｓ側鎖アミノ基、Ｃｙｓ側鎖チオール基、または酸化Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒとの結合のいずれかにより、特定の細胞毒性剤に共役結合され得る。本明細書（実施例を含む）に記載されている特定の代表的な（非限定的な）細胞毒性剤は、例示目的のために以下に記載される。大部分の合成物（例えばＤ１、Ｄ２、Ｄ４、ＤＧＮ４６２、Ｄ３、Ｄ６など）が、特定の実施例のインドリノベンゾジアゼピンモノマーの１つでスルホン化され得る（ここで図示しないが、図１７の化合物ｓＤ１、図１５の化合物ｓＤＧＮ４６２、及び図１６の化合物ｓＤ８を参照）ことに留意されたい。化合物Ｄ５’において、両方のインドリノベンゾジアゼピンモノマーはスルホン化され得る。
Figure 2023036869000097
Figure 2023036869000098
細胞毒素を異なる抗体側鎖に結合するために必要とされる異なる結合化学により（すなわち、Ｌｙｓ結合、Ｃｙｓ結合、酸化Ｎ末端Ｓｅｒ結合）、複数の薬剤は、わずかに異なるだけであることに留意されたい。それにもかかわらず、これらの関連する細胞毒は、異なる「Ｄ」表記を付与される。Ｄ１及びＤ４、ならびにＤ２、Ｄ５、及びＤ８を参照。
対象抗体と細胞毒性剤の複合体は一般的に、上述のとおり抗体及び細胞毒性剤の名称に従う。
例えばｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－スルホ－ＳＰＤＢ－Ｄ１は、抗体の１つ以上のＬｙｓ残基で、スルホン化されたＳＰＤＢリンカーによる、化合物Ｄ１に対するｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６抗体の複合体である。ｈｕＣＤ１２３－６－ＣＸ１－１－ＤＭ１は
、抗体のＬｙｓ残基の１つ以上で、「ＣＸ１－１リンカー」という名称のトリグリシルリンカーを介して細胞毒性剤ＤＭ１により共役結合されるｈｕＣＤ１２３－６抗体の複合体である。実施例９ｅ参照のこと。
１つの明らかな例外は、図７Ｂ及び図１７に示される複合体ｈｕＣＤ１２３－６－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１であり、そこでｈｕＣＤ１２３－６－ＳｅｒｉＭａｂとｓＤ１細胞毒との間の短いリンカー配列は、複合体名で明確に示されない。同様に、図１５の複合体ｈｕＣＤ１２３－６－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤＧＮ４６２も、上述の一般原則の対する例外である。
２．ＣＤ１２３結合剤
第１の態様で、本発明は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα（例えばヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα）に特異的に結合する薬剤を提供する。これらの薬剤は一般的に「ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤」と本明細書では称される。特定の実施形態で、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤は、抗体もしくはその抗原結合断片（または簡単に「抗体」）、その免疫複合体、またはそのポリペプチドある。
ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαのヒト及び他の種におけるアミノ酸及びヌクレオチド配列は、従来技術分野において周知である。例えば、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ＮＰ＿００２１７４に示すように、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαスプライシング変異体１タンパク質配列は、以下のとおり複製される。
Figure 2023036869000099
上述の配列は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα前駆体鎖タンパク質を示し、これは、細胞外ドメイン（１８残基Ｎ末端シグナルペプチドを含む、残基１～３０６）、２０のアミノ酸膜貫通ドメイン、及び５２のアミノ酸の短い細胞質尾部を含有する、３７８のアミノ酸によって構成される。
ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ ＮＭ＿００２１８３に示すように、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαスプライシング変異体１核酸配列は、以下のとおり複製される。
Figure 2023036869000100
Figure 2023036869000101
他の非ヒト種からのＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαのタンパク質及び核酸配列は、当該技術分野において周知の配列検索ツール（例えばＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴｐまたはＢＬＡＳＴｎ）、ならびに問い合わせ配列として上述のタンパク質及び核酸配列をそれぞれ使用して、ＧｅｎＢａｎｋなどの公共データベースから容易に引き出すことができる。
非ヒト種からのこのような配列は、多くの当該技術分野において承認されている配列アライメントツール（例えば本明細書及び上述に記載のもの）のいずれかを使用して、ヒト配列と並べることが可能であり、その結果、任意の所与のヒト配列もしくは配列の領域に「対応する」任意のアミノ酸残基またはヌクレオチドを、容易に得ることが可能である。
したがって本発明の一態様は、（ａ）ヒトＣＤ１２３抗原のアミノ酸１０１～３４６内のエピトープを結合し、かつ（ｂ）抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３－依存性増殖を阻害する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３６のエピトープに特異的に結合することができる。特定の実施形態で、エピトープは、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの残基１０１～３４６に対応する領域内にある。特定の実施形態で、エピトープは、配列番号３６の残基１０１～２０４に対応する領域内にある。特定の他の実施形態で、エピトープは、配列番号３６の残基２０５～３４６に対応する領域内にある。特定の実施形態で、エピトープは、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの残基１～１００に対応する領域内にない。
特定の実施形態で、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば、抗体）は、ＩＬ３依存性シグナル伝達（例えばＣＤ１２３陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖）を阻害する。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、本発明のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば、抗体）は、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの残基１０１～３４６（例えば、残基１０１～２０４、または２０５～３４６）に対応するＣＤ１２３領域内などのＣＤ１２３と結合し、かつＣＤ１２３とＩＬ－３リガンドとの間の生産的結合及び／また
はＩＬ－３依存性シグナル伝達の減少もしくは消滅をもたらす、ＣＤ１２３と共通β鎖ＣＤ１３１との間の生産的結合を防ぐ、減少させる、減弱させる、または阻害する。
関連態様において、本発明は、（ａ）ヒトＣＤ１２３抗原のアミノ酸１～１００内のエピトープを結合し、かつ（ｂ）０．１ｎＭ以下（例えば０．０８ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０３ｎＭ）のＩＣ５０値を有する、抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３依存性増殖を阻害する、抗体またはその抗原結合断片を提供する。
特定の実施形態で、本発明のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば、抗体）による結合は、白血病性幹細胞（ＬＳＣ）、白血病前駆細胞（ＬＰ）、または白血病性芽球の増殖を阻害する（例えば、優先的に阻害する）が、正常な造血幹細胞（ＨＳＣ）の増殖を実質的には阻害しない。
細胞増殖の阻害は、フローサイトメトリーを含むがこれに限定されない、当該技術分野において周知の任意の標準アッセイを使用して実施することができる。例えば正常なＨＳＣ、ＬＳＣ、ＬＰ、及び白血病性芽球は、細胞表面マーカーの発現の違いに基づき、フローサイトメトリーを使用して分離されることができ、生存するまたは残留する細胞の相対数は、試験剤でインキュベートした後、量的に測定され、比較され得る。
正常なＨＳＣと比較してＬＳＣ、ＬＰ、または白血病性芽球の細胞増殖の阻害は、原発性癌細胞（例えば原発性ＡＭＬ細胞）のｉｎ ｖｉｔｒｏ効力アッセイを使用して測定することもできる。例えばＡＭＬ細胞（または正常なＨＳＣを含有する正常なヒト骨髄試料）は、種々の濃度の対象抗ＣＤ１２３抗体、その抗原結合断片、その免疫複合体、または抗体もしくは抗原結合断片を含むポリペプチドに２４時間曝露することができる。非標的化（アイソタイプ適合）抗体または免疫複合体（ＡＤＣ）対照も、アッセイで使用することができる。試料を短期液体培養（ＳＴＬＣ）アッセイ内に分割して、ＬＳＣ、ＬＰ、または白血病性芽球に対する細胞毒性を測定し、長期液体培養（ＬＴＬＣ）アッセイに分割して、ＬＳＣ及び正常なＨＳＣへの影響を測定できる。ＳＴＬＣを用いて、例えば半固形のＭｅｔｈｏＣｕｌｔ Ｈ４２３０培地（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に播種した後の細胞で１０～１４日間コロニー形成単位を測定できる。ＬＴＬＣアッセイを、５～７週間の長期培養の間に増殖因子を加えて、同様に実施可能である。両アッセイにおいて、コロニーを数えて、最初に播種した細胞の数当たりのコロニー形成単位を測定することができる。ＬＴＬＣのコロニーを、癌（例えばＡＭＬ）の分子マーカーの存在について、ＰＣＲまたはＦＩＳＨまたは両方を用いて更に解析した。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．３ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）でヒトＣＤ１２３抗原陽性細胞に結合する。特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．０５ｎＭ～０．３ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．２ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．１ｎＭ、または０．０１ｎＭ～０．３ｎＭ、または０．０１ｎＭ～０．２ｎＭ、または０．０１ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄで、ヒトＣＤ１２３に結合する。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、カニクイザルＣＤ１２３に結合する。特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．０５ｎＭ～０．３ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．２ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄで、カニクイザルＣＤ１２３に結合する。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、実質的に類似した結合親和性で、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３両方に結合する。特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．０５ｎＭ～０．３ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．２ｎＭ、または０．０５ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄで、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３両方に結合する。
特定の実施形態で、Ｋｄ値は、細胞ベース結合アッセイに基づく。特定の実施形態で、Ｋｄ値は、フローサイトメトリーによって測定される。特定の実施形態で、Ｋｄ値は、表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＯＣＯＲＥ（商標）表面プラズモン共鳴システムを使用）で測定される。特定の実施形態で、Ｋｄ値は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。特定の実施形態で、Ｋｄは、他の任意の当該技術分野において承認されている方法によって測定される。
特定の実施形態で、抗体またはその抗原結合断片は、０．５ｎＭ以下の濃度で、抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３－依存性増殖の少なくとも５０％を阻害する。
特定の実施形態で、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａ抗体またはその抗原結合断片であり、それぞれは３つのＣＤＲ領域（例えば、ＨＣＶＲにおいてＣＤＲ１～ＣＤＲ３及びＬＣＶＲにおいてＣＤＲ１～ＣＤＲ３）を含み、ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲにおける複合体ＣＤＲは、下記の表１及び表２に示される配列のいずれかである。
Figure 2023036869000102
Figure 2023036869000103
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１、５、及び１２からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号２～３、６～１０、及び１３～１４からなる群から選択され、任意にＣＤＲ３は配列番号４、１１、１５及び７０からなる群から選択される、少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片、ならびに、ｂ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１６、１９～２０、２３及び７２からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号１７、２１、２４及び７１からなる群から選択され、任意にＣＤＲ３は配列番号１８、２２、及び２５からなる群から選択される、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片、を含む、
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１、５、及び１２からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号２～３、６～１０、及び１３～１４からなる群から選択され、任意にＣＤＲ３は配列番号４、１１、及び１５からなる群から選択される、前記少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片、ならびに、ｂ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１６、１９～２０、及び２３からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号１７、２１、及び２４からなる群から選択され、任意にＣＤＲ３は配列番号１８、２２、及び２５からなる群から選択される、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片、を含む、
特定の実施形態で、保存的アミノ酸置換は、Ａｒｇによる、ＣＤＲ中の少なくとも１つのＬｙｓの置換を含む（配列番号６と７、８と９、及び１９と２０のＬｙｓ対Ａｒｇ置換など）。特定の実施形態で、抗体は、マウスＣＤＲ領域を含むＣＤＲ移植ヒト化抗体を含み、抗体の１つ以上の（例えば１、２、３、４、５、６、７、または８つの）重鎖及び／
または軽鎖フレームワーク領域バーニヤゾーン残基は、マウス由来である。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２または３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び任意に配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３、を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに２）配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び任意に配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号２である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号３である。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９、または１０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び任意に配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに、２）配列番号１９または２０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び任意に配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号６であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号１９である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号７であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号１９である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号８であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号１９である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号９であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号１９である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号１０であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号１９である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号６であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号２０である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号７であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号２０である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号８であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号２０である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号９であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号２０である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号１０であり、軽鎖可変領域のＣＤＲ１は配列番号２０である。上述の重鎖可変領域ＣＤＲ２と軽鎖可変領域ＣＤＲ１のそれぞれ対の組み合わせにおいて、重鎖可変領域ＣＤＲ１及び３はそれぞれ配列番号５及び１１であり、軽鎖可変領域ＣＤＲ２及び３はそれぞれ配列番号２１及び２２である。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１３または１４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び任意に配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３、を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに２）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び任意に配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号１３である。特定の実施形態で、重鎖可変領域のＣＤＲ２は配列番号１４である。
特定の実施形態で、１つの抗体の軽鎖及び重鎖からのＣＤＲ１配列（例えば配列番号５及び１９）は、別の抗体の軽鎖及び重鎖からのＣＤＲ２配列（例えば配列番号２及び１７）と組み合わせることができ、任意に、同じ（例えば配列番号４及び１８、または１１及び２２）または更に別の抗体（例えば配列番号１５及び２５）の軽鎖及び重鎖からＣＤＲ３配列と組み合わせることができる。表１の配列番号１～２５に基づく、特に同じ抗体番号に関連するすべての想定される組み合わせ（例えば６つの軽鎖及び重鎖ＣＤＲのすべて
は、ＣＤ１２３－３、またはＣＤ１２３－６、またはＣＤ１２３－１４に由来する）は、すべての特定の組み合わせを網羅的に列挙することなしに、本明細書で企図される。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、上記の任意の１つ以上のＣＤＲ配列の１、２、または３つの連続する残基上のアミノ酸置換を保存する。すなわち、いくつかの実施形態において、対象抗体及びその抗原結合断片は、任意の１つ以上の配列番号１～２５で、１、２、または３つの連続する残基上のアミノ酸置換を保存し得る。
特定の実施形態で、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）及び軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒａ抗体またはその抗原結合断片であり、この場合、ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲは、下記の表３Ａ及び表４Ａに示される配列のいずれかである。ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲをコードする選択された対応する核酸配列は、表３Ｂ及び表４Ｂにある。
Figure 2023036869000104
Figure 2023036869000105
Figure 2023036869000106
Figure 2023036869000107
Figure 2023036869000108
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、（ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（または配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＨ配列と、少なくとも９５％同一のＶＨ配列、及び／または（ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＬ配列と、少なくとも９５％同一のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、（ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（または配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される
参照ＶＨ配列と、少なくとも９６％同一のＶＨ配列、及び／または（ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＬ配列と、少なくとも９６％同一のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、（ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（または配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＨ配列と、少なくとも９７％同一のＶＨ配列、及び／または（ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＬ配列と、少なくとも９７％同一のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、（ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（または配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＨ配列と、少なくとも９８％同一のＶＨ配列、及び／または（ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＬ配列と、少なくとも９８％同一のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３抗体及びその抗原結合断片は、（ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（または配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＨ配列と、少なくとも９９％同一のＶＨ配列、及び／または（ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＬ配列と、少なくとも９９％同一のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（好ましくは配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）及び／または配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）に対して特定のパーセンテージの配列同一性を有する、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体／その抗原結合断片は、保存的アミノ酸置換（例えば１、２、または３つの保存的アミノ酸置換）のみが配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（または配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）及び／または配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）とは異なる。特定の実施形態で、保存的アミノ酸置換は、重鎖及び／または軽鎖の１つ以上のＣＤＲ領域における１、２、または３つの保存的アミノ酸の置換である。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、（ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９、及び４０（または配列番号２６、２８、３０、３２、３４、及び３８）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＨ配列と同一のＶＨ配列、及び／または（ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７、及び４１（または配列番号２７、２９、３１、３５、及び３７）で表されるアミノ酸配列を有する群から選択される参照ＶＬ配列と同一のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、配列番号２６に記載のＶＨ配列、及び／または配列番号２７に記載のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、配列番号２８に記載のＶＨ配列、及び／または配列番号２９に記載のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、配列番号３０に記載のＶＨ配列、及び／または配列番号３１に記載のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、配列番号３４に記載のＶＨ配列、及び／または配列番号３５に記載のＶＬ配列を含む。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、３２／３３、３４／３３、３８／３３、３９／３３、４０／３３、３２／３５、３４／３５、３８／３５、３９／３５、４０／３５、３２／３７、３４／３７、３８／３７、３９／３７、４０／３７、３９／３３、３９／３５、３９／３７、３９／４１、４０／３３、４０／３５、４０／３７、及び４０／４１からなる群から選択される配列番号と組み合わせた、ＶＨ配列ならびにＶＬ配列を含む。
例えば一実施形態において、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、ＶＨ配列は配列番号３９に記載されており、ＶＬ配列は配列番号４１に記載されている。特定の実施形態で、ＶＨ配列は配列番号４０に記載されており、ＶＬ配列は配列番号４１に記載されている。
関連する形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号３４のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号３４のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）第１残基がＳｅｒ（Ｓ）で置換されることを除いて、配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）第１残基がＳｅｒ（Ｓ）で置換されることを除いて、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、かつ配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、ならびにｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グ
ロブリン軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号３８のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号３８のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及びｂ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号３４のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号３４のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号５６のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号５６のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号５４のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号５４のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号５４のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号５４のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号５６のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号５６のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
別の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ａ）配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態で、配列番号５４のＸａａはＰｈｅ（Ｆ）である。特定の実施形態で、配列番号５４のＸａａはＶａｌ（Ｖ）である。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及びその抗原結合断片は、ＣＤ１
２３／ＩＬ－３Ｒαに特異的に結合する。特定の実施形態で、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに特異的に結合するマウス、キメラ、ヒト化、または非ヒト抗体またはその抗原結合断片である。特定の実施形態で、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ＣＤＲ移植もしくは再表面形成抗体またはその抗原結合断片である。
特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、完全長の抗体である。完全長の抗体は、１～４つのＣＤＲ（例えば、重鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１及びＣＤＲ２）、１～６つのＣＤＲ配列（例えば、重鎖のＣＤＲ１～ＣＤＲ３、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１～ＣＤＲ３）により定義される上述の抗体いずれか、またはＬＣＶＲ及び／またはＨＣＶＲにより定義される上述の抗体いずれか、または表５の重鎖配列を有する完全長の抗体のいずれか、または表６の軽鎖配列を有する完全長の抗体のいずれか、または表５の重鎖配列及び表６の軽鎖配列を有する完全長の抗体のいずれかを含むことができる。
Figure 2023036869000109
Figure 2023036869000110
Figure 2023036869000111
Figure 2023036869000112
特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、（ａ）上述の完全長重鎖配列のいずれか（例えば表５の完全長重鎖配列のいずれか）に少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する重鎖、及び／または（ｂ）上述の完全長軽鎖配列のいずれか（例えば表６の完全長軽鎖配列のいずれか）に少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する軽鎖を含む、完全長の抗体である。特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、配列番号４２／４３、４４／４５、４６／４７、４８／４９、５０／４９、５３／４
９、５４／４９、５６／４９、５９／４９、６０／４９、４８／５１、５０／５１、５３／５１、５４／５１、５６／５１、５９／５１、６０／５１、４８／５８、５０／５８、５３／５８、５４／５８、５６／５８、５９／５８、６０／５８、５９／４９、５９／５１、５９／５８、５９／６１、６０／４９、６０／５１、６０／５８、及び６０／６１からなる群から選択される完全長重鎖配列及び完全長軽鎖配列の組み合わせを含む、完全長の抗体、またはその完全長重鎖配列及び／または軽鎖配列のいずれかに少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する抗体である。
特定の実施形態では、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、配列番号５９／６１、及び６０／６１からなる群から選択される完全長重鎖配列及び完全長軽鎖配列の組み合わせを含む、完全長の抗体、またはその完全長重鎖配列及び／または軽鎖配列のいずれかに少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有する抗体である。このような抗体は、軽鎖、重鎖、または両方に操作されたＮ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒを更に含むことができる。このような抗体は、配列番号５４の最後から５番目のＣｙｓに対応する位置で、重鎖ＣＨ３ドメインの操作したＣｙｓを更に含むことができる。
特定の実施形態で、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに特異的に結合するマウス、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体である。特定の実施形態で、完全長の配列番号のいずれかに対して配列同一性の特定のパーセンテージを有する、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体は、保存的アミノ酸置換だけが（例えば１、２、３、４、または５つの連続する保存的アミノ酸置換だけ）このような配列番号とは異なる。特定の実施形態で、保存的アミノ酸置換はＣＤＲ外である。
特定の実施形態で、その抗原結合断片とは、上述の抗体のいずれかのＦａｂ、Ｆｄ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、小型抗体、Ｆ（ａｂ’）３、四重特異性抗体、三重特異性抗体、二重特異性抗体、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２、またはｓｃＦｖ－Ｆｃであるか、またはそれらを含む。
関連態様において、本発明は、抗体またはその抗原結合断片のいずれか、上述のＶＨ及び／もしくはＶＬ配列のいずれか、上述のＨＣＶＲ及び／もしくはＬＣＶＲのいずれか、または上述のＨＣＶＲ及び／もしくはＬＣＶＲのＣＤＲ配列（複数可）のいずれかを含む、ポリペプチドも提供する。ポリペプチドは、例えば非抗体タンパク質またはドメインとの融合であり得る。特定の実施形態で、融合タンパク質はシュードモナス毒素との融合ではない。
抗原について、抗体の親和性または結合活性は、当該技術分野において周知の任意の好適な方法（例えば、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、もしくはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、またはキネティックス（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析））を使用して、実験的に測定することができる。直接結合アッセイ及び競合的結合アッセイのフォーマットは、容易に使用することができる。例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）、Ｋｕｂｙ，Ｊａｎｉｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）、及び本明細書記載の方法を参照のこと。
特定の抗体抗原相互作用の測定される親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ、温度）下で測定される場合、異なり得る。したがって親和性及び他の抗原結合パラメータ
（例えば、ＫＤ、またはＫｄ、Ｋｏｎ、Ｋｏｆｆ）の測定は、抗体及び抗原の標準化溶液、ならびに本明細書に記載の緩衝液など当該技術分野において周知の標準化緩衝液を用いて行われる。
一態様で結合アッセイは、表面にＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗原を発現する細胞のフローサイトメトリーを使用して実行できる。例えばＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα陽性細胞は、１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（例えば、２％の正常なヤギ血清を補充したＲＰＭＩ－１６４０培地）中の試料当たり１×１０５細胞を使用して、抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体の種々の濃度でインキュベートすることができる。次に細胞はペレット化され、洗浄され、１００μＬのＦＩＴＣ共役ヤギ抗マウスまたはヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（例えばＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製のＦＡＣＳ緩衝液中６μｇ／ｍＬ）で１時間インキュベートされ得る。それから細胞は再びペレット化されて、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄され、２００μＬのＰＢＳ含有１％ホルムアルデヒド中に再懸濁される。試料は、例えばＨＴＳマルチウェルサンプラーを備えたＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーターを用いて得ることができ、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ Ｐｒｏを使用して分析されることができる（すべてＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＵＳ）製）。各試料について、ＦＬ１（ＭＦＩ）の平均蛍光強度をエクスポートして、結合曲線を作成するためにセミログプロットの抗体濃度に対してプロットされることができる。シグモイド用量反応曲線は結合曲線に適合し、ＥＣ５０値はプログラム（例えばデフォルトパラメータを備えたＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ４（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ））を使用して計算される。ＥＣ５０値は、各抗体について見かけの解離定数「Ｋｄ」または「ＫＤ」のための基準として使用することができる。
モノクローナル抗体を、ハイブリドーマ法（例えばＫｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５に記載）を使用して調製できる。ハイブリドーマ法を用いて、マウス、ハムスター、または他の適切な宿主動物は免疫化されて、免疫抗原と特異的に結合する抗体のリンパ球による産生を誘発する。リンパ球は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでも免疫化され得る。免疫化の後、リンパ球は、次に非融合リンパ球及び骨髄腫細胞から離れて選択されることができるハイブリドーマ細胞を形成するために、単離されて、例えばポリエチレングリコールを使用して好適な骨髄腫細胞株と融合する。免疫沈降、免疫ブロット法によって、またはｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ））によって測定されるように、選択された抗原に対して特異的に指向されたモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、次いで標準方法（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９８６）を使用するｉｎ ｖｉｔｒｏ培養で、または動物の腹水腫瘍としてｉｎ ｖｉｖｏで伝播されることができる。モノクローナル抗体は、ポリクローナル抗体において記載されているように、次いで培養液または腹水から精製されることができる。
あるいはモノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載のとおり、組換えＤＮＡ法を使用して作製することもできる。モノクローナル抗体コードするポリヌクレオチドは、成熟Ｂ細胞またはハイブリドーマ細胞から、例えば抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子を特異的に増幅するオリゴヌクレオチドプライマを使用するＲＴ－ＰＣＲによって単離されて、その配列は従来の手順を使用して決定される。重鎖及び軽鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドは、次いで好適な発現ベクター内でクローン化されて、宿主細胞（例えばＥ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または免疫グロブリンタンパク質を生成しない骨髄腫細胞）にトランスフェクトされるとき、モノクローナル抗体は宿主細胞によって生成される。更に所望の種の組換えモノクローナル抗体またはその断片を、記載されているように所望の種のＣＤＲを発現するファージディスプレイライブラリーから単離できる（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３４８：５５２－５５４，１９９０、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８，１９９１、及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７，１９９１）。
単クローン抗体をコードするポリヌクレオチド（複数可）は、組換えＤＮＡ技術を用いた多くの異なる方法で更に修飾されて、代替の抗体を生成できる。いくつかの実施形態で、例えばマウスモノクローナル抗体の軽鎖及び重鎖の定常ドメインは、１）例えばキメラ抗体を生成するヒト抗体のその領域、または２）融合抗体を生成する非免疫グロブリンポリペプチドに置換され得る。いくつかの実施形態で、定常領域は、モノクローナル抗体の所望の抗体断片を生成するために、切頭または除去される。可変領域の部位指向性または高密度突然変異誘発は、モノクローナル抗体の特異性、親和性などを最適化するために使用することができる。
いくつかの実施形態で、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに対するモノクローナル抗体は、ヒト化抗体である。特定の実施形態で、このような抗体は治療的に使用されて、ヒト対象に投与される場合、抗原性及びＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）反応を低減させる。
非ヒトもしくはヒト抗体を操作する、ヒト化する、または再表面形成するための方法も使用可能であり、それは当該技術分野において周知である。ヒト化、再表面形成または同様に操作された抗体は、非ヒト、例えば限定されないがマウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類または他の哺乳動物である、供給元からの１つ以上のアミノ酸残基を有することができる。これらの非ヒトのアミノ酸残基は、多くの場合「移入」残基と称させる残基によってと置換され、これは通常、周知のヒト配列の「移入」可変、定常または他のドメインから取られる。
このような移入配列を使用して、当該技術分野において周知のとおり、免疫原性を低減させる、または結合、親和性、結合速度、解離速度、結合活性、特異性、半減期、もしくは任意の他の好適な特性を低減、増強、もしくは変化させることができる。一般的にＣＤＲ残基は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合に影響することに直接的にかつほぼ実質的に関与している。したがって非ヒトまたはヒトＣＤＲ配列の一部または全部は維持され、一方で可変及び定常領域の非ヒト配列は、ヒトまたは他のアミノ酸で置換され得る。
抗体は、任意に、抗原ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに対する高親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持して、ヒト化される、再表面形成される、操作される、またはヒト抗体操作されることもできる。この目的を達成するため、任意に、ヒト化（もしくはヒト）または操作された抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体及び再表面形成された抗体を、親配列、操作された配列、及びヒト化配列の３次元モデルを使用して、親配列ならびに種々の概念的ヒト化生成物及び操作された生成物の分析プロセスによって調製することが可能である。３次元免疫グロブリンモデルは一般的に利用可能であり、当業者に周知である。選択された候補の免疫グロブリン配列について、可能性の高い３次元立体構造を図示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらの表示を調べることにより、候補の免疫グロブリン配列の機能に及ぼす可能性がある残基の役割の分析、すなわち候補の免疫グロブリンがその抗原（例えばＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα）に結合する能力に影響を及ぼす残基の分析が可能となる。このように、標的抗原（複数可）に対する親和性の増大など望ましい抗体特性が達成されるように、共通配列及び移入配列からフレームワーク（ＦＲ）残基を選択して組み合わせることができる。
本発明の抗体のヒト化、再表面形成または操作は、限定されないがＷｉｎｔｅｒ（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．），Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ
ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３，１９８８、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ
ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４，１９８８，Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６，１９９３、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１，１９８７，Ｃａｒｔｅｒｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４２８５，１９９２、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３，１９９３、Ｒａｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９１（３）：９６９－９７３，１９９４、米国特許第５，６３９，６４１号，同第５，７２３，３２３号、同第５，９７６，８６２号、同第５，８２４，５１４号、同第５，８１７，４８３号、同第５，８１４，４７６号、同第５，７６３，１９２号、同第５，７２３，３２３号、同第５，７６６，８８６号、同第５，７１４，３５２号、同第６，２０４，０２３号、同第６，１８０，３７０号、同第５，６９３，７６２号、同第５，５３０，１０１号、同第５，５８５，０８９号、同第５，２２５，５３９号、同第４，８１６，５６７号、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６２８０号、ＰＣＴ／ＵＳ９６／１８９７８号、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０９６３０号、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０５９３９号、ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１２３４号、ＰＣＴ／ＧＢ８９／０１３３４号、ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４号、ＰＣＴ／ＧＢ９２／０１７５５号、ＷＯ９０／１４４４３号、ＷＯ９０／１４４２４号、ＷＯ９０／１４４３０号、欧州特許第２２９２４６号、同第７，５５７，１８９号、同第７，５３８，１９５号及び同第７，３４２，１１０号に記載されるものなど周知の方法を使用して実施可能であり、これらのそれぞれは、その引用文献を含み、参照によりその全体を本明細書に組み込む。
特定の代替的実施形態で、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに対する抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の種々の技術を使用して直接的に調製できる。ｉｎ ｖｉｔｒｏ免疫した、または標的抗原に対して抗体を生成する免疫した個体から単離した、不死化ヒトＢリンパ球を生成することができる（例えばＣｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１４７（l）：８６－９５及び米国特許第５，７５０，３
７３号を参照のこと）。更にヒト抗体はファージライブラリーから選択することができ、ファージライブラリーは、例えばＶａｕｇｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１４：３０９－３１４，１９９６，Ｓｈｅｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５：６１５７－６１６２，１９９８，Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ
ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１，１９９１及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１，１９９１に記載されているようにヒト抗体を発現する。抗体ファージライブラリーの生成及び使用の技術は、米国特許第５，９６９，１０８号、同第６，１７２，１９７号、同第５，８８５，７９３号、同第６，５２１，４０４号、同第６，５４４，７３１号、同第６，５５５，３１３号、同第６，５８２，９１５号、同第６，５９３，０８１号、同第６，３００，０６４号、同第６，６５３，０６８号、同第６，７０６，４８４号及び同第７，２６４，９６３号、ならびにＲｏｔｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｍｂ．２００７．１２．０１８，２００７にも記載されている（これらのそれぞれは、参照によりその全体を本明細書に組み込む）。親和性成熟法及び鎖シャッフル法（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０：７７９－７８３，１９９２、参照によりその全体を組み込む）は、当技術分野において周知であり、高親和性ヒト抗体を生成するために使用することができる。
ヒト化抗体は、内因性免疫グロブリンの産生がない状態で、免疫化の際にヒト抗体の完全なレパートリーを生成することが可能な、ヒト免疫グロブリン座を含有するトランスジェニックマウスでも作成することができる。この方法は、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号及び同第５，６６１，０１６号に記載されている。
特定の実施形態で、例えば腫瘍浸潤を増加させる抗体断片を提供する。抗体断片の生成に関する種々の技術は、周知である。従来、これらの断片は、完全抗体のタンパク質分解を介して得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ２４：１０７－１１７，１９９３、Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１，１９８５）。特定の実施形態で、抗体断片は組換えで生じる。Ｆａｂ、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ抗体断片はすべて、Ｅ．ｃｏｌｉまたは他の宿主細胞で発現かつそれから分泌されることができ、したがって大量のこれらの断片の生成を可能にする。このような抗体断片は、抗体ファージライブラリーからも単離されることができる。抗体断片は更に、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載のとおり直鎖状抗体であり得て、単一特異性または二重特異性であり得る。抗体断片の生成の他の技術は、当業者には明らかである。
本発明では、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαのポリペプチドを有する抗体の会合を提供する、任意の種類の可変領域を、修飾抗体が含むことができることを理解すべきである。この点において、可変領域は、液性応答を増加させて、所望の腫瘍関連抗原に対する免疫グロブリンを生成するように誘発されることができる、任意の種類の哺乳動物を含むか、またはそれに由来することができる。したがって修飾抗体の可変領域は、例えばヒト、マウス、非ヒト霊長類（例えばカニクイザル、マカクなど）またはハウチワマメ由来であり得る。いくつかの実施形態において、改変免疫グロブリンの可変及び定常領域は、ヒトである。他の実施形態において、適合性抗体（通常非ヒト供給元に由来する）の可変領域は、分子の結合特性を改善するように、またはその免疫原性を低減するように操作され得るか、または特に調整され得る。この点において、本発明において有用な可変領域はヒト化されることができるか、さもなければ移入アミノ酸配列の含有により変えることもできる。
特定の実施形態で、重鎖及び軽鎖の両方の可変ドメインは、１つ以上のＣＤＲの少なくとも部分置換によって、かつ必要に応じて部分的フレームワーク領域置換及び配列交換によって変えられる。ＣＤＲは、フレームワーク領域が由来する抗体と同じクラスまたはサブクラスの抗体に由来し得るが、ＣＤＲは、異なるクラスの抗体、特定の実施形態では異なる種に由来する抗体から得られると想定される。１つの可変ドメインの抗原結合能を別のものに移すために、すべてのＣＤＲを、ドナー可変領域に由来する完全なＣＤＲで置換する必要がない場合がある。むしろ、抗原結合部位の活性を維持するために必要である、これらの残基を移行することのみが必要であり得る。米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号及び同第５，６９３，７６２号に記載される説明を考慮すると、一般的な実験の実施または試行錯誤による試験のいずれかによって、低下した免疫原性を備える機能性抗体を得ることは、十分に当業者の能力内である。
可変領域への変更にもかかわらず、当業者であれば、本発明の修飾抗体は、抗体（例えば、完全長の抗体またはその免疫反応性断片）を含み、そこで、天然型または未変化の定常領域を含むほぼ同じ免疫原性の抗体と比較したとき、増大した腫瘍局在化または減少した血清半減期などの望ましい生化学的特性を提供するように、少なくとも定常領域ドメインの１つ以上の画分は欠失されているか、さもなければ変えられていることを理解するだろう。いくつかの実施形態では、修飾抗体の定常領域はヒト定常領域を含む。本発明と適合する定常領域への改変は、１つ以上のドメインにおける１つ以上のアミノ酸の付加、欠失または置換を含む。すなわち、本明細書にて開示した修飾抗体は、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３）の１つ以上及び／または軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）への変更または改変を含むことができる。いくつかの実施形態では、１つ以上のドメインが部分的または完全に欠失される、改変された定常領域が企図される。いくつかの実施形態では、修飾抗体は、すべてのＣＨ２領域が除去されたドメイン欠失構造物または変異体
（ＡＣＨ２構造物）を含む。いくつかの実施形態で、除外された定常領域ドメインは、不在の定常領域によって通常付与される分子柔軟性の一部をもたらす短いアミノ酸スペーサ（例えば１０の残基）で置換される。
特定の実施形態で、修飾抗体は、それぞれの修飾抗体のヒンジ領域にＣＨ３ドメインを直接的に融合させるために操作され得ることに留意されたい。他の構造物において、ヒンジ領域と改変されたＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインとの間にペプチドスペーサを提供することが望ましい場合がある。例えば、適合性のある構造物は発現されることができ、その場合ＣＨ２ドメインは欠失されており、残存するＣＨ３ドメイン（改変または非改変）は５～２０のアミノ酸スペーサを有するヒンジ領域に接合される。例えば定常ドメインの制御エレメントが遊離かつアクセス可能なままする、またはヒンジ領域をフレキシブルなままにすることを確実にするために、このようなスペーサを加えることができる。しかしアミノ酸スペーサが場合によっては免疫原性であり、構造物に対して不必要な免疫反応を誘発すると判明できる点に留意する必要がある。したがって特定の実施形態で、構造物に加えられる任意のスペーサは、修飾抗体の所望の生化学特性を維持するために、比較的非免疫原性であるか、またはすべて除外される。
定常領域ドメイン全体の欠失の他に、本発明の抗体が、いくつかもしくは単一のアミノ酸の部分的な欠失または置換によって提供され得ることを理解されたい。例えばＣＨ２ドメインの選択された領域の単一のアミノ酸の突然変異は、実質的にＦｃ結合を低減し、それによって腫瘍局在化を増加させるのに十分であり得る。同様に、エフェクター機能（例えば、Ｃ１Ｑ結合を補完する）の調整を制御する、１つ以上の定常領域ドメインの一部を単純に欠失させることが望ましい場合がある。このような定常領域の部分的欠失は、対象定常領域ドメインと関連する他の望ましい機能をインタクトなままで残しつつ、抗体の選択された特性（血清半減期）を改善できる。更に上述のように、開示された抗体の定常領域は、例えば１つ以上のアミノ酸の突然変異または置換により改変されることができ、これは得られた構造物の特性を強化できる。この点において、修飾抗体の構成及び免疫原性特性を実質的に維持しつつ、保存結合部位（例えば、Ｆｃ結合）により提供される活性を阻害することが可能であり得る。特定の実施形態は、望ましい特徴（例えば、エフェクター機能を減少もしくは増加させる）を強化する、またはより多くの細胞毒もしくは炭水化物付着を提供するために、１つ以上のアミノ酸の定常領域への追加を含むことができる。このような実施形態で、選択された定常領域ドメインに由来する特定の配列を挿入するまたは複製することが、望ましい場合がある。
本発明は、本明細書に記載のキメラ、ヒト化及びヒト抗体、またはその抗体断片に実質的に相同である、変異体及び等価物を更に包含する。これらは、例えば保存的置換突然変異、すなわち類似のアミノ酸による１つ以上のアミノ酸の置換を含むことができる。例えば保存的置換とは、同じ一般的クラス内のアミノ酸を別のもので（例えば１つの酸性アミノ酸を別の酸性アミノ酸で、１つの塩基性アミノ酸を別の塩基性アミノ酸で、または１つの中性アミノ酸を別の中性アミノ酸で）置換することを意味する。保存的アミノ酸置換により意図されることは、当該技術分野において周知である（例えば、上で本明細書中に定義されたとおり）。
本発明のポリペプチドは、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに対する抗体またはその断片を含む、組換えポリペプチド、天然ポリペプチド、または合成ポリペプチドであり得る。本発明のいくつかのアミノ酸配列が、タンパク質の構造または機能の著しい影響がなくても変化できることは、当該技術分野において認識される。したがって本発明は、ＣＤ１２３抗原（例えばヒトＣＤ１２３）に対して、相当な活性を示すか、または抗体またはその断片の領域を含む、ポリペプチドの変異体を更に含む。このような変異体は、欠失、挿入、逆位、反復、及びタイプ置換を含む。
ポリペプチド及び類似体は、通常タンパク質の一部ではない追加の化学的部分を含むために、更に修飾されることができる。このような誘導体化された部分は、タンパク質の溶解度、生物学的半減期または吸収を改善できる。前記部分は、タンパク質などの任意の望ましい副作用も低減または除去することができる。前記部分の概要は、ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（２０００）中に見いだすことができる。
本明細書に記載の単離ポリペプチドは、当該技術分野において周知の任意の好適な方法によって生成することができる。そのような方法は、直接タンパク質合成法から、単離ポリペプチド配列をコードし、かつ好適な形質転換宿主でその配列を発現するＤＮＡ配列の構築まで、様々である。いくつかの実施形態において、ＤＮＡ配列は、目的の野生型タンパク質をコードするＤＮＡ配列を単離または合成することによる組換え技術を使用して、構築される。任意に配列は、部位特異的突然変異誘発によって突然変異誘発して、その機能的類似体を提供することができる。例えばＺｏｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：５６６２－５０６６，１９８４及び米国特許第４，５８８，５８５号を参照のこと。
いくつかの実施形態において、目的のポリペプチド（例えば本発明の抗体、抗原結合断片、またはポリペプチド）をコードするＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成機を用いる化学合成によって完全にまたは部分的に構築される。このようなオリゴヌクレオチドは、所望のポリペプチドのアミノ酸配列に基づき、目的の組換えポリペプチドを産生する宿主細胞中で好まれるコドンを選択して、設計することができる。標準的方法を適用して、目的の単離ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド配列を合成することができる。例えば完全なアミノ酸配列を用いて、逆翻訳された遺伝子を構築することができる。更に特定の単離ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡオリゴマーを、合成することができる。例えば、所望のポリペプチドの一部をコードするいくつかの小さなオリゴヌクレオチドを合成して、次に連結することができる。個々のオリゴヌクレオチドは通常、相補的集合体のために、５’または３’オーバーハングを含む。
（合成、部位指向性変異誘発、または別の方法により）組み立てられると、目的の特定の単離ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を、発現ベクターへ挿入し、所望の宿主中でのタンパク質発現に適した発現制御配列に作動可能に連結する。ヌクレオチド配列決定、制限酵素マッピング、及び適切な宿主中における生物学的活性ポリペプチドの発現により、適切な集合体を確認することができる。当技術分野において周知のように、宿主中でトランスフェクト遺伝子の高発現レベルを得るために、遺伝子を、選択された発現宿主中で機能する転写及び翻訳の発現制御配列に作動可能に連結する。
特定の実施形態で、組換え発現ベクターを使用して、ヒトＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαに対する抗体またはその断片をコードするＤＮＡを増幅かつ発現させる。組換え発現ベクターは複製可能なＤＮＡ構造体であり、これは抗ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα抗体もしくはその断片のポリペプチド鎖をコードする合成またはｃＤＮＡ由来ＤＮＡ断片を有し、哺乳動物、微生物、ウイルスもしくは昆虫の遺伝子に由来する適切な転写または翻訳制御エレメントに作動可能に連結される。転写ユニットは一般的に、（１）遺伝子発現で制御的役割を有する遺伝要素（複数可）（例えば、転写プロモーターまたはエンハンサー）、（２）ｍＲＮＡに転写されて、タンパク質に翻訳される構造またはコード配列、ならびに（３）適切な転写及び翻訳開始ならびに終止配列の集合体を含む。このような制御エレメントはオペレーター配列を含んで、転写を制御できる。複製起点によって通常付与される、宿主における複製する能力、及び形質転換体の認識を容易にする選択遺伝子は、追加として組
み込まれ得る。ＤＮＡ領域は、それらが互いに機能的に関連するとき、作動可能に連結される。例えばシグナルペプチド（分泌リーダー）のＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与する前駆体として発現される場合、ポリペプチドのＤＮＡに作動可能に連結される、プロモーターは、それが配列の転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結されるか、またはリボソーム結合部位は、それが翻訳を可能にするように配置される場合、コード配列に作動可能に連結される。酵母発現系に使用するため意図される構造要素は、宿主細胞による翻訳タンパク質の細胞外分泌を可能にするリーダー配列を含む。あるいは、組換えタンパク質がリーダーまたは輸送配列なしに発現する際、それはＮ末端メチオニン残基を含むことができる。この残基は任意に、発現した組換えタンパク質からその後切断されて、最終生成物を提供できる。
発現制御配列及び発現ベクターの選択は、宿主の選択に依存する。多種多様な発現宿主／ベクターの組み合わせを用いることができる。真核生物宿主において有用な発現ベクターは、例えば、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウイルス、アデノウイルス及びサイトメガロウイルスからの発現制御配列を含むベクターを含有する。細菌宿主において有用な発現ベクターは、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９及びこれらの誘導体を含む周知の細菌プラスミド（例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉからのプラスミド）、広宿主域プラスミド（Ｍ１３及び繊維状単鎖ＤＮＡファージ）を含む。
ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合性ポリペプチドまたは抗体（または抗原として使用するＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαタンパク質）発現に好適な宿主細胞は、適切なプロモーターの制御下で、原核生物、酵母、昆虫または高等真核細胞を含む。原核生物は、グラム陰性またはグラム陽性生物（例えばＥ．ｃｏｌｉまたは桿菌）を含む。高等真核細胞は、哺乳動物起源の株化細胞系（例えばＣＨＯ細胞）を含む。無細胞翻訳系も使用可能である。細菌、真菌、酵母、及び哺乳動物細胞宿主と共に使用するのに適切なクローニング及び発現ベクターは、Ｐｏｕｗｅｌｓ ｅｔ ａｌ．（Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８５）に記載されており、その関連する開示は参照により本明細書に組み込まれる。抗体産生を含む、タンパク質生成の方法に関する追加情報は、例えば、米国特許公開第２００８／０１８７９５４号、米国特許第６，４１３，７４６号及び同第６，６６０，５０１号、ならびに国際特許公開第ＷＯ０４００９８２３号に見いだすことができ、そのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
種々の哺乳動物または昆虫細胞培養系も、組換えタンパク質を発現させるために、有利に使用される。このようなタンパク質は一般的に、正しく折り畳まれ、適切に修飾され、かつ完全に機能的であるので、哺乳動物細胞の組換えタンパク質の発現を実施できる。適切な哺乳動物宿主細胞系の例は、ＨＥＫ－２９３Ｔ、Ｇｌｕｚｍａｎ（Ｃｅｌｌ２３：１７５、１９８１）に記載のサル腎細胞のＣＯＳ－７株、ならびに例えばＬ細胞、ＣＩ２７、３Ｔ３、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＨｅＬａ及びＢＨＫ細胞系を含む他の細胞系を含む。哺乳類発現ベクターは、非転写要素（例えば複製開始点、発現する遺伝子に連結する適切なプロモーター及びエンハンサー）、及び他の５’または３’に隣接する非転写配列、及び５’または３’の非翻訳配列（例えば必須のリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプライスドナー及びアクセプター部位）、及び転写終止配列を含むことができる。昆虫細胞の異種タンパク質を生成するためのバキュロウイルス系は、Ｌｕｃｋｏｗ及びＳｕｍｍｅｒｓ、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６：４７、１９８８で概説されている。
したがって本発明の一態様は、対象抗体もしくはその抗原結合断片のいずれか１つ、または対象ポリペプチドのいずれか１つを生成する細胞も提供する。特定の実施形態で、細胞は哺乳動物細胞である。特定の実施形態で、細胞は、ＨＥＫ－２９３またはＨＥＫ－２
９３Ｔ細胞、ＣＯＳ－７細胞、Ｌ細胞、ＣＩ２７細胞、３Ｔ３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞またはＢＨＫ細胞である。特定の実施形態で、細胞はＣＨＯ細胞である。
形質転換宿主によって作成されるタンパク質は、任意の好適な方法に従って精製されることができる。このような標準的方法は、クロマトグラフィー（例えばイオン交換、アフィニティ及びサイジングカラムクロマトグラフィー）、遠心分離、示差溶解度、またはタンパク質精製のための他の任意の標準的技術を含む。親和性標識（例えばヘキサヒスチジン、マルトース結合ドメイン、インフルエンザ被覆配列及びグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ）は、タンパク質に結合されて、適切な親和性カラム上の通過による簡単な精製を可能にする。単離タンパク質は、タンパク質分解、核磁気共鳴及びＸ線結晶学などの技術を使用して物理的に特性決定することもできる。
例えば培地内に組換えタンパク質を分泌する系からの上澄みは、市販のタンパク質濃度フィルター（例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過装置）を使用して、最初に濃縮することができる。濃縮工程後に、濃縮物を適切な精製マトリックスに適用することができる。あるいはアニオン交換樹脂（例えば、ペンダントジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックスまたは基質）を使用できる。このマトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロース、またはタンパク質精製で一般に用いられる他の種類であり得る。あるいは、カチオン交換工程を使用できる。好適なカチオン交換体には、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を含む種々の不溶性マトリックスが含まれる。最後に、疎水性ＲＰ－ＨＰＬＣ培地（例えば、ペンダントメチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲル）を用いた１つ以上の逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ－ＨＰＬＣ）工程を使用して、更にＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を精製することができる。前述の精製工程の一部もしくはすべては、種々の組み合わせで、均一な組換えタンパク質を形成するためにも使用され得る。
細菌培養物に作成した組換えタンパク質は、例えば細胞ペレットからの最初の抽出、続く１つ以上の濃縮、塩析、水性イオン交換またはサイズ排除クロマトグラフィー工程により単離することができる。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、最終の精製工程で使用されることができる。組換えタンパク質の発現で使用される微生物細胞は、凍結融解サイクル、超音波処理、機械的破砕、または細胞溶解剤の使用を含む、任意の簡便な方法によって破砕することができる。
抗体及び他のタンパク質を精製するために当該技術分野において周知の方法は、例えば、米国特許公開第２００８／０３１２４２５号、同第２００８／０１７７０４８号及び同第２００９／０１８７００５号に記載されているものを含み、そのそれぞれは参照によりその全体を本明細書に組み込む。
特定の実施形態で、本発明のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤は、Ｎ末端セリンを有し、それは酸化剤で酸化して、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を形成できる。
任意の好適な酸化剤を、上述の方法の工程（ａ）で使用可能である。特定の実施形態で、酸化剤は過ヨウ素酸塩である。更に具体的には酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。
ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤に対して過剰なモル当量の酸化剤を使用することができる。特定の実施形態で、酸化剤の約２～１００、５～８０、１０～５０、１～１０または５～１０モル当量を使用することができる。特定の実施形態で、酸化剤の約１０または
約５０当量を使用できる。大量の酸化剤を使用するとき、短い反応時間は過剰酸化を避けるために用いる。例えば酸化剤の５０当量を用いるとき、酸化反応は約５～約６０分間実施される。あるいは酸化剤の１０当量を用いるとき、反応は約３０分～約２４時間実施される。一実施形態において、５～１０モル当量の酸化剤を使用して、酸化反応で約５～約６０分（例えば、約１０～約３０分、約２０～約３０分）実施される。
特定の実施形態で、酸化反応は著しい非標的酸化をもたらさない。例えば、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を生成するために、Ｎ末端セリンの酸化工程中、メチオニン及び／またはグリカンの有意範囲（例えば、２０％未満、１０％未満、５％未満、３％未満、２％未満または１％未満）の酸化はない。
特定の実施形態で、本発明のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤は、組換えで操作されたＣｙｓ残基（例えば配列番号５４または５６の最後から５番目に相当するＣｙｓ残基）（すなわち、ＥＵ／ＯＵナンバリング４４２位のＣｙｓ残基）を有する。したがって「システイン操作抗体」という用語は、抗体軽鎖または重鎖の所与の残基に通常存在しない、少なくとも１つのＣｙｓを有する抗体を含む。「操作されたＣｙｓ」とも称させる、このようなＣｙｓは、任意の従来の分子生物学または組換えＤＮＡ技術（例えば、非Ｃｙｓ残基のコード配列を標的残基にてＣｙｓのコード配列で置換することによって）を使用して操作されることができる。例えば、オリジナル残基が５’－ＵＧＵ－３’のコード配列を有するＳｅｒである場合、コード配列は、Ｃｙｓをコードする５’－ＵＧＵ－３’に（例えば、部位指向性突然変異誘発によって）変異できる。特定の実施形態で、本発明のＣｙｓ操作抗体は、重鎖に操作されたＣｙｓを有する。特定の実施形態で、操作されたＣｙｓは、重鎖のＣＨ３ドメインにまたはその近くにある。特定の実施形態で、操作されたＣｙｓは、例えば配列番号５４または５６の最後から５番目に相当するＣｙｓである。操作抗体重鎖（または軽鎖）配列は、好適な組換え発現ベクターに挿入されて、オリジナルＳｅｒ残基の代わりに操作されたＣｙｓ残基を有する操作抗体を産生できる。
３．免疫複合体
第２の態様において、本発明は、本明細書に記載の細胞毒性剤の１つ以上の分子に共有結合した、本明細書に記載のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を含む免疫複合体も提供する。
第１の実施形態において、本発明の免疫複合体は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤に存在する１つ以上のリジン残基のε－アミノ基によって、本明細書に記載の細胞毒性剤に共有結合されるＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（抗体、その抗原結合断片、または抗体もしくはその抗原結合断片を含むポリペプチドを含む）を含む。
第１の実施形態の第１の特定の実施形態において、本発明の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000113
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＬ１へリジン残基によって共有結合される、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば上記の対象抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象ポリペプチド）であり、
ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ１は、以下の式：
Figure 2023036869000114
 で表される細胞毒性化合物、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000115
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌ’は、以下の式：
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、または
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｓ－Ｚｓ１－ （Ｂ２’）、によって表され、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、それぞれ独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
ｍは、１～６の整数であり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000116
 のうちのいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである。
第２の特定の実施形態において、式（Ｌ１）の複合体について、ＣｙＬ１は式（Ｌ１ａ）または（Ｌ１ａ１）で表され、残りの可変要素は第１の特定の実施形態で上述したとおりである。
第３の特定の実施形態において、式（Ｌ１）の複合体について、ＣｙＬ１は式（Ｌ１ｂ）または（Ｌ１ｂ１）で表され、残りの可変要素は第１の特定の実施形態で上述したとおりである。更に具体的には、Ｒｘ３は（Ｃ２～Ｃ４）アルキルである。
第４の特定の実施形態において、式（Ｌ１）の複合体について、ＣｙＬ１は式（Ｌ１ａ）で表され、Ｒａ及びＲｂは両方ともＨであり、Ｒ５はＨまたはＭｅであり、残りの可変要素は第１の特定の実施形態で上述したとおりである。
第５の特定の実施形態で、Ｐは２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの可変要素は第１、第２、または第４の特定の実施形態で上述したとおりである。更なる特定の実施形態において、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－
Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａからなる群から選択される。更に具体的には、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
第６の実施形態で、Ｑは－ＳＯ３Ｍであり、残りの可変要素は第１、第２、第４、もしくは第５の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第７の特定の実施形態において、第１の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000117
Figure 2023036869000118
Figure 2023036869000119
Figure 2023036869000120
Figure 2023036869000121
Figure 2023036869000122
Figure 2023036869000123
Figure 2023036869000124
Figure 2023036869000125
 もしくは
Figure 2023036869000126
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数であり、ＮとＣと
の間の二重線
Figure 2023036869000127
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000128
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。別の更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000129
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。
第８の特定の実施形態において、第１の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000130
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＬ２へリジン残基によって共有結合される、本発明の第１の態様に記載のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば上記の対象抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象ポリペプチド）であり、
ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ２は、以下の式：
Figure 2023036869000131
 で表される細胞毒性化合物、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000132
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｒｘ１及びＲｘ２は、それぞれ（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000133
 のうちのいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、－Ｈ＋またはカチオンである。
第９の特定の実施形態において、式（Ｌ２）の免疫複合体について、ＣｙＬ２は式（Ｌ２ａ）または（Ｌ２ａ１）で表され、残りの可変要素は第８の特定の実施形態で上述したとおりである。
第１０の特定の実施形態において、式（Ｌ２）の免疫複合体について、ＣｙＬ２は式（Ｌ２ｂ）または（Ｌ２ｂ１）で表され、残りの可変要素は第８の特定の実施形態で上述したとおりである。
第１１の特定の実施形態において、式（Ｌ２）の免疫複合体について、Ｒｅは、ＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１及びＲｘ２は、独立して－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｆ及びＲｇは、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２または３であり、残りの可変要素は第８、第９または第１０の特定の実施形態で上述したとおりである。更に具体的には、Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される。
第１２の特定の実施形態において、第１の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000134
Figure 2023036869000135
 もしくは
Figure 2023036869000136
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000137
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000138
 は二重結合を表す。別の更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000139
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。
第１３の特定の実施形態において、第１の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000140
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＬ３へＬｙｓ残基によって共有結合される、本発明の第１の態様に記載のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば上記の対象抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象ポリペプチド）であり、
ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ３は、以下の式：
Figure 2023036869000141
 で表され、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000142
 のうちのいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである。
第１４の特定の実施形態において、式（Ｌ３）の免疫複合体について、ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨであり、残りの可変要素は第１３の特定の実施形態で上述したとおりである。
第１５の特定の実施形態において、式（Ｌ３）の免疫複合体について、ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅであり、残りの可変要素は第１３の特定の実施形態で上述したとおりである。
第１６の特定の実施形態において、第１の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000143
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数である。
第１７の特定の実施形態において、第１の実施形態の免疫複合体について、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、残りの可変要素は第１～第１６の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
上述の第１～第１７の特定の実施形態のいずれかにおいて、対象抗体またはその抗原結
合断片は、（もしあれば）Ａｒｇで置換された６つの軽鎖及び重鎖ＣＤＲ領域いずれかのＬｙｓ残基（例えば、ほぼすべてのまたは１００％の）のうちの１つ以上を有し得る。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、及び配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むことができる。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＨＣＶＲ、及び配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＬＣＶＲも含むことができる。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２、３４、３８、３９、または４０に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＨＣＶＲ、及び配列番号３３、３５、３７、または４１に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＬＣＶＲも含むことができる。特定の実施形態で、配列番号３４のＮ末端から２番目の残基はＰｈｅであり、特定の他の実施形態で、配列番号３４のＮ末端から２番目の残基はＶａｌである。
第１の実施形態に記載のまたはその任意の特定の実施形態に記載の免疫複合体は、当該技術分野において周知の任意の方法に従って調製されることができる。例えば国際特許第ＷＯ２０１２／１２８８６８号及び同第ＷＯ２０１２／１１２６８７号を参照のこと。それらは参照により本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態で、第１実施形態の免疫複合体は、アミン反応基を有する細胞毒性剤とＣＢＡを反応させる工程を含む、第１の方法によって調製できる。
一実施形態において、上述の第１の方法について、反応はＮａＨＳＯ３などのイミン反応性試薬の存在下にて実施される。
一実施形態において、上述の第１の方法について、アミン反応性試薬を有する細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000144
 で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｌｃ’は、以下の式：
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）Ｅ （Ｂ１）または
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｓ－Ｚｓ （Ｂ２）で表され、
Ｃ（＝Ｏ）Ｅは、反応性エステル基、例えばＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、ニトロフェニル（例えば、２または４－ニトロフェニル）エステル、ジニトロフェニル（例えば、２，４－ジニトロフェニル）エステル、スルホ－テトラフルオロフェニル（例えば、４－スルホ－２，３，５，６－テトラフルオロフェニル）エステルまたはペンタフルオロフェニルエステル、好ましくはＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステルであり、
Ｚｓは、以下の式：
Figure 2023036869000145
 で表され、
式中、
ｑは１～５の整数であり、
Ｕは、－ＨまたはＳＯ３Ｍであり、
残りの可変要素は第１～第７及び第１７の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
特定の実施形態で、第１の実施形態の免疫複合体は、
（ａ）細胞毒性剤をアミン反応性基及びチオール反応性基を有するリンカー化合物と反応させて、そこへ結合するアミン反応性基を有する細胞毒性剤－リンカー化合物を形成する工程、及び
（ｂ）ＣＢＡを細胞毒性剤－リンカー化合物と反応させる工程を含む、第２の方法によっ
て調製できる。
一実施形態において、上述の第２の方法について、工程（ａ）の反応はイミン反応性試薬の存在下にて実施される。
一実施形態において、上述の第２の方法について、細胞毒性剤－リンカー化合物は、精製せずにＣＢＡと反応させる。あるいは細胞毒性剤－リンカー化合物は、ＣＢＡと反応させる前に、最初に精製する。
特定の実施形態で、第１の実施形態の免疫複合体は、
（ａ）ＣＢＡをアミン反応性基及びチオール反応性基を有するリンカー化合物と反応させて、そこへ結合するチオール反応性基を有する修飾ＣＢＡを形成する工程、及び
（ｂ）修飾ＣＢＡを細胞毒性剤と反応させる工程を含む、第３の方法によって調製できる。
一実施形態において、上述の第３の方法について、工程（ｂ）の反応はイミン反応性試薬の存在下にて実施される。
特定の実施形態で、第１の実施形態の免疫複合体は、ＣＢＡ、細胞毒性化合物、ならびにアミン反応基及びチオール反応性基を有するリンカー化合物を反応させる工程を含む、第４の方法によって調製できる。
一実施形態において、第４の方法について、反応はイミン反応性剤の存在下にて実施される。
特定の実施形態で、上述の第２、第３または第４の実施形態について、アミン反応性基及びチオール反応性基を有するリンカー化合物は、以下の式：
Figure 2023036869000146
 で表され、
式中、Ｘはハロゲンであり、ＪＤは、－ＳＨ、－ＳＳＲｄまたは－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒｇであり、Ｒｄは、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジルまたはニトロピリジルであり、Ｒｇはアルキルであり；残りの可変要素は、式（ａ１）～（ａ１０）について上述したとおりであり、細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000147
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、可変要素は第８～第１２、及び第１７の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであり、かつ本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
特定の実施形態で、上述の第２、第３または第４の方法について、アミン反応性基及びチオール反応性基を有するリンカー化合物は、式（ａ１Ｌ）～（ａ１０Ｌ）のいずれか１つで表され、細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000148
 で表され、
式中、可変要素は第１３～第１７の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであ
り、かつ本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第２の実施形態において、本発明の免疫複合体は、酸化ＣＤ１２３結合剤に存在する１つ以上のアルデヒド基によって、本明細書に記載の本発明の第１の態様に記載されている本明細書に記載の細胞毒性剤に共有結合される酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（抗体、その抗原結合断片、または抗体もしくはその抗原結合断片を含むポリペプチドを含む）（例えば、酸化抗体もしくはその抗原結合断片、またはそのポリペプチド）を含む。酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤に存在するアルデヒド基は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤の１つ以上の２－ヒドロキシエチルアミン部分を酸化することによって生成することができ、２－ヒドロキシエチルアミン部分は、セリン、トレオニン、ヒドロキシリジン、４－ヒドロキシオルニチン、または２，４－ジアミノ－５－ヒドロキシ吉草酸残基の一部である。一実施形態において、アルデヒド基は、ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤に存在する１つ以上のＮ末端セリン残基（複数可）（例えば、軽鎖及び／または重鎖のＮ末端の１、２、３、または最高４つのＳｅｒ残基）の２－ヒドロキシエチルアミン部分を酸化させることによって生成できる。
第２の実施形態の第１の特定の実施形態において、本発明の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000149
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、本発明の第１の態様に記載の酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば、上記の対象酸化抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象酸化ポリペプチド）であり、
Ｗｓは、１、２、３、または４であり、
ＪＣＢ’は、ＣＢＡのアルデヒド基をＣｙｓ１のアルデヒド反応性基で反応させることにより形成される部分であり、以下の式：
Figure 2023036869000150
 で表され、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ１に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000151
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000152
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｚｄ１は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－、または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
ｒ及びｒ’は、独立して１～６の整数であり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌは、－ＮＲ９－（ＣＲａＲｂ）ｒ”または不在であり、
ｒ”は、０～６の整数である。
第２の特定の実施形態において、式（Ｓ１）の免疫複合体について、Ｃｙｓ１は式（Ｓ１ａ）または（Ｓ１ａ１）で表され、残りの可変要素は第１の特定の実施形態で上述したとおりである。
第３の特定の実施形態において、式（Ｓ１）の免疫複合体について、Ｃｙｓ１は式（Ｓ１ｂ）または（Ｓ１ｂ１）で表され、残りの可変要素は第１の特定の実施形態で上述したとおりである。更に具体的には、Ｒｘ３は（Ｃ２～Ｃ４）アルキルである。
第４の特定の実施形態において、式（Ｓ１）の免疫複合体について、Ｒａ及びＲｂは両方ともＨであり、Ｒ５及びＲ９は両方ともＨまたはＭｅであり、残りの可変要素は第１または第２の特定の実施形態で上述したとおりである。
第５の特定の実施形態で、式（Ｓ１）の免疫複合体について、Ｐは２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの可変要素は第１、第２または第４の特定の実施形態で上述したとおりである。更なる特定の実施形態において、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａからなる群から選択される。更により具体的には、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
第６の特定の実施形態において、式（Ｓ１）の免疫複合体について、Ｑは－ＳＯ３Ｍであり、残りの可変要素は第１、第２、第４、もしくは第５の特定の実施形態で上述したとおりであるか、本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第７の特定の実施形態において、第２の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000153
Figure 2023036869000154
Figure 2023036869000155
Figure 2023036869000156
Figure 2023036869000157
Figure 2023036869000158
 もしくは
Figure 2023036869000159
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000160
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000161
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。別の更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000162
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。
第８の特定の実施形態において、本発明の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000163
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、本発明の第１の態様に記載の酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば、上記の対象酸化抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象酸化ポリペプチド）であり、
ＪＣＢ’は、ＣＢＡのアルデヒド基とＣｙｓ２のアルデヒド反応性基を反応させることにより形成される部分であり、それは以下の式：
Figure 2023036869000164
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ２に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ２は、以下の式：
Figure 2023036869000165
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000166
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンであり、
Ｒｘ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌ１は、以下の式：
Figure 2023036869000167
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ２の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚａ２は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は、各出現において、独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～１０の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とする。
更なる特定の実施形態で、Ｚａ２は不在であり、ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～３の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とし、残りの可変要素は第８の特定の実施形態で上述したとおりである。更により具体的には、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４はすべて－Ｈである。
別の更なる特定の実施形態で、Ｚａ２は、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－または－ＮＨ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して１～６の整数であり、残りの可変要素は第８の特定の実施形態で上述したとおりである。更により具体的には、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４はすべて－Ｈである。
第９の特定の実施形態において、式（Ｓ２）の免疫複合体について、Ｃｙｓ２は式（Ｓ２ａ）または（Ｓ２ａ１）で表され、残りの可変要素は第８の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第１０の特定の実施形態において、式（Ｓ２）の免疫複合体について、Ｃｙｓ２は式（Ｓ２ｂ）または（Ｓ２ｂ１）で表され、残りの可変要素は第８の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第１１の特定の実施形態において、式（Ｓ２）の免疫複合体について、－Ｌ１－は、以下の式：
Figure 2023036869000168
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒは、Ｈまたは－ＳＯ３Ｍであり、残りの可変要素は第８、第９もしくは第１０の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第１２の特定の実施形態において、式（Ｓ２）の免疫複合体について、ＲｅはＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１は（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｘ２は（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｆ及びＲｇはそれぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは０、１、２または３である。更に具体的には、Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される。
第１３の特定の実施形態において、第２の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000169
Figure 2023036869000170
Figure 2023036869000171
Figure 2023036869000172
Figure 2023036869000173
Figure 2023036869000174
Figure 2023036869000175
Figure 2023036869000176
Figure 2023036869000177
Figure 2023036869000178
Figure 2023036869000179
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000180
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000181
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。別の更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000182
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。
第１４の特定の実施形態において、第２の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000183
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、本発明の第１の態様に記載の酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば、上記の対象酸化抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象酸化ポリペプチド）であり、
ＪＣＢ’は、ＣＢＡのアルデヒド基とＣｙｓ３のアルデヒド反応性基を反応させることにより形成される部分であり、以下の式：
Figure 2023036869000184
 で表され、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ３に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ３は、以下の式：
Figure 2023036869000185
 で表され、
式中、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｌ１は、以下の式：
Figure 2023036869000186
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ３の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚａ２は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は、各出現において、独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～１０の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とする。
更なる特定の実施形態で、Ｚａ２は不在であり、ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～３の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とし、残りの可変要素は第１４の特定の実施形態で上述したとおりである。更により具体的には、Ｒａ
１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４はすべて－Ｈである。
別の更なる特定の実施形態で、Ｚａ２は、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－または－ＮＨ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して１～６の整数であり、残りの可変要素は第１４の特定の実施形態で上述したとおりである。更により具体的には、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４はすべて－Ｈである。
第１５の特定の実施形態において、式（Ｓ３）の免疫複合体について、ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨであり、残りの可変要素は第１４の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第１６の特定の実施形態において、式（Ｓ３）の免疫複合体について、ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅであり、残りの可変要素は第１４の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第１７の特定の実施形態において、式（Ｓ３）の免疫複合体について、－Ｌ１－は、以下の式：
Figure 2023036869000187
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＲはＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンである。
第１８の特定の実施形態において、第２の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000188
Figure 2023036869000189
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中ＤＭは、以下の式：
Figure 2023036869000190
 で表される。
第１９の特定の実施形態において、第２の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000191
 で表され、式中、
ＣＢＡは、本発明の第１の態様に記載の酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば、上記の対象酸化抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象酸化ポリペプチド）であり、
ＪＣＢ’は、ＣＢＡのアルデヒド基とＣｙｓ４のアルデヒド反応性基を反応させることにより形成される部分であり、以下の式：
Figure 2023036869000192
 で表され、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ４に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ４は、以下の式：
Figure 2023036869000193
 で表され、
Ｌ１’は、以下の式：
Figure 2023036869000194
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ４の－ＮＭｅ－基に共有結合される部位であり、
Ｚｂ１及びＺｂ２は両方とも不在であるか、またはＺｂ１及びＺｂ２のうちの１つは不在であり、他方は－ＣＨ２－Ｏ－もしくは－Ｏ－ＣＨ２－であり、
Ｚｂ１’及びＺｂ２’は、それぞれ独立して不在であるか、－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－ＣＨ２－、－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－または－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－であり、Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｎ１及びｍ１は、それぞれ独立して１～６の整数であり、
Ｅ１及びＥ２のうちの１つは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、他方は、－ＮＲ９－であるか、またはＥ１及びＥ２のうちの１つは－Ｃ（＝Ｏ）－もしく－ＮＲ９－であり、他方は不在であり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５及びＲｂ６は、各出現において、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルである。
第２０の特定の実施形態において、式（Ｓ４）の免疫抱合体について、Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５、及びＲｂ６はすべてＨであり、残りの可変要素は第１９の特定の実施形態で上述したとおりである。
第２１の特定の実施形態において、式（Ｓ４）の免疫抱合体について、Ｒ９はＨであり、残りの可変要素は第１９または第２０の特定の実施形態で上述したとおりである。
第２２の特定の実施形態において、式（Ｓ４）の免疫抱合体について、Ｚｂ１’及びＺｂ２’は両方とも不在であるか、またはＺｂ１’は－ＣＨ２－Ｏ－であり、Ｚｂ２’は不在であるか、または、Ｚｂ１’は－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－であり、Ｚｂ２’はＯ－ＣＨ２－であるかもしくは不在であり、残りの可変要素は第１９、第２０または第２１の特定の実施形態で上述したとおりである。
第２３の特定の実施形態で、式（Ｓ４）の免疫複合体について、Ｐは２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの可変要素は第１９、第２０、第２１または第２２の特定の実施形態で上述したとおりである。更なる特定の実施形態において、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番
号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａからなる群から選択されており、残りの可変要素は第２３の特定の実施形態で上述したとおりである。更により具体的には、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
第２４の特定の実施形態において、第２の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000195
Figure 2023036869000196
Figure 2023036869000197
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、ＤＭは、以下の構造式：
Figure 2023036869000198
 で表される。
第２５の特定の実施形態において、第２の実施形態の免疫複合体について、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、残りの可変要素は第１～第２４の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
上述の第１～第２５の特定の実施形態のいずれかにおいて、対象酸化抗体またはその抗原結合断片は、本明細書に記載の細胞毒性剤と共有結合するために、アルデヒド基（複数可）に酸化した１、２、３、または最高４つのＮ末端２－ヒドロキシエチルアミン部分を有し得る。Ｎ末端２－ヒドロキシエチルアミン部分は、セリン、トレオニン、ヒドロキシリジン、４－ヒドロキシオルニチン、または２，４－ジアミノ－５－ヒドロキシ吉草酸残基、好ましくはＳｅｒまたはＴｈｒの一部であり得る。簡略化のために、酸化反応及びリンカーまたは細胞毒性剤との任意の次の共有結合を含む、以下の説明は、このようなＮ末端２－ヒドロキシエチルアミン部分の具体例としてＳｅｒを指すことができるが、通常、すべてのＮ末端２－ヒドロキシエチルアミン部分に関連するものとして解釈されなければならない。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３８に記載されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、及び配列番号３３、３５、３７、または４１（好ましくは配列番号３５または３７）に記載されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むことができる。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３２、３４、３８、３９、または４０（好ましくは配列番号３４）に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＨＣＶＲ、及び配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＬＣＶＲも含むことができる。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５３または５６に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ重鎖（ＨＣ）領域、及び配列番号３３
、３５、３７、または４１（好ましくは配列番号３５または３７）に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＬＣＶＲも含むことができる。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４８、５０、５３、５４、５６、５９、または６０（好ましくは配列番号５３）に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＨＣ領域、及び配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＬＣＶＲも含むことができる。特定の実施形態で、配列番号３４、３８、５０、５３、５４、または５６のＮ末端から２番目の残基はＰｈｅであり、特定の他の実施形態で、配列番号３４、３８、５０、５３、５４、または５６のＮ末端から２番目の残基はＶａｌである。
特定の実施形態で、第２の実施形態の免疫複合体は、本発明の第１の態様に記載されているＮ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を、アルデヒド反応性基を有する細胞毒性剤と反応させることを含む、第１の方法によって調製できる。
特定の実施形態で、第２の実施形態の免疫複合体は、本発明の第１の態様に記載されているＮ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を、アルデヒド反応性基を有するリンカー化合物と反応させて、そこへ結合するリンカーを有する修飾ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を形成し、続いて修飾ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を細胞毒性剤と反応させることを含む、第２の方法によって調製できる。
特定の実施形態で、第２の実施形態の免疫複合体は、本発明の第１の態様に記載されているＮ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を、細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒド反応性基を有するリンカー化合物胞を加えることを含む、第３の方法によって調製できる。
特定の実施形態で、第２の実施形態の免疫複合体は、
（ａ）Ｎ末端２－ヒドロキシエチルアミン部分（例えばＳｅｒ／Ｔｈｒ）を有するＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を酸化剤で酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を形成する工程、及び
（ｂ）Ｎ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を、アルデヒド反応性基を有する細胞毒性剤と反応させる工程を含む、第４の方法によって調製できる。
特定の実施形態で、第２の実施形態の免疫複合体は、
（ａ）Ｎ末端２－ヒドロキシエチルアミン部分（例えばＳｅｒ／Ｔｈｒ）を有するＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を酸化剤で酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を形成する工程、
（ｂ）Ｎ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を、アルデヒド反応性基を有するリンカー化合物と反応させて、そこへ結合するリンカーを有する修飾ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を形成して、続いて修飾ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を細胞毒性剤と反応させる工程を含む、第５の方法によって調製できる。
特定の実施形態で、第２の実施形態の免疫複合体は、
（ａ）Ｎ末端２－ヒドロキシエチルアミン部分（例えばＳｅｒ／Ｔｈｒ）を有するＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を酸化剤で酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を形成する工程、
（ｂ）Ｎ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤を、細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒド反応性基を有するリンカー化合物胞を加える工程を含む、第６の方法によって調製できる。
一実施形態において、上述の第１または第４の方法について、アルデヒド反応性基を有する細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000199
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中ＪＣＢは、以下の式：
Figure 2023036869000200
 で表され、
残りの可変要素は第１～第７及び第２５の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであり、かつ本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
別の実施形態では、上述の第１または第４の方法について、アルデヒド反応性基を有する細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000201
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＪＣＢは上述のとおりであり、残りの可変要素は第１９～第２５の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであり、かつ本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
一実施形態において、上述の第２、第３、第５または第６の方法について、リンカー化合物は、以下の式：
Figure 2023036869000202
 で表され、
式中、ＪＤは、－ＳＨ、－ＳＳＲｄ、または－ＳＣ（＝Ｏ）Ｒｇであり、Ｒｄは、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジルまたはニトロピリジルであり、Ｒｇは、アルキルであり、ＪＣＢは、上述のとおりであり、細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000203
 で表され、
残りの可変要素は第８～第１３及び第２５の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであり、かつ本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
別の実施形態において、上述の第２、第３、第５または第６の方法について、リンカー化合物は、上述の式（Ｌｓａ）で表され、細胞毒性化合物は、以下の式：
Figure 2023036869000204
 で表され、
残りの可変要素は第１４～第１８及び第２５の特定の実施形態のいずれか１つに記載したとおりであり、かつ本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
一実施形態において、上述の第１または第４の方法について、細胞毒性剤は、Ｎ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤と反応させる前に、ＮａＨＳＯ３などのイミン反応性試薬と反応させて修飾細胞毒性剤を形成する。一実施形態において、修飾細胞毒性剤は、Ｎ末端アルデヒドを有する酸化ＣＢＡと反応させる前に、精製されない。あるいは、修飾細胞毒性剤は、Ｎ末端アルデヒドを有する酸化ＣＢＡと反応させる前に、精製される。
別の実施形態において、上述の第２または第５の方法について、細胞毒性剤は、ＮａＨＳＯ３などのイミン反応性試薬と反応させて修飾細胞毒性剤を形成した後に、そこへ結合するリンカーを有する修飾ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤と反応させる。一実施形態において、修飾細胞毒性剤は、精製した後に、そこへ結合するリンカーを有する修飾ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤と反応させる。あるいは、修飾細胞毒性剤は、Ｎ末端アルデヒドを有する酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤と反応させる前に、精製されない。
更に別の実施形態においては、上述の第３または第６の方法について、酸化ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤と、細胞毒性剤とリンカー化合物との反応は、ＮａＨＳＯ３などのイミン反応性試薬の存在下にて実施される。
任意の好適な酸化剤を、上述の第４、第５または第６方法の工程（ａ）で使用可能である。特定の実施形態で、酸化剤は過ヨウ素酸塩である。更に具体的には酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。
ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤に対して過剰なモル当量の酸化剤を使用することができる。特定の実施形態で、酸化剤の約２～１００、５～８０、１０～５０、１～１０または５～１０モル当量を使用することができる。特定の実施形態で、酸化剤の約１０または約５０当量を使用できる。大量の酸化剤を使用するとき、短い反応時間は過剰酸化を避けるために用いる。例えば酸化剤の５０当量を用いるとき、酸化反応は約５～約６０分間実施される。あるいは酸化剤の１０当量を用いるとき、反応は約３０分～約２４時間実施される。一実施形態において、５～１０モル当量の酸化剤を使用して、酸化反応で約５～約６０分（例えば、約１０～約３０分、約２０～約３０分）実施される。
特定の実施形態で、触媒は、上述の第１、第２または第３の方法の反応に、または上述の第４、第５または第６の方法の工程（ｂ）の反応に存在する。当該技術分野において任意の好適な触媒を使用できる。一実施形態では、触媒はアニリンまたは置換アニリンである。代表的なアニリン触媒は、アニリン、ｏ－フェニレンジアミン、ｍ－フェニレンジアミン、３，５－ジアミノ安息香酸、ｐ－フェニレンジアミン、２－メチル－ｐ－フェニレンジアミン、Ｎ－メチル－ｐ－フェニレンジアミン、ｏ－アミノフェノール、ｍ－アミノフェノール、ｐ－アミノフェノール、ｐ－メトキシアニリン、５－メトキシ－アントラニル酸、ｏ－アミノ安息香酸，及び４－アミノフェネチルアルコールを含むが、これらに限定されない。一実施形態において、触媒は４－アミノフェネチルアルコールである。特定の実施形態で、工程（ｂ）の反応は、ｐＨ約５．０～約６．５で実施される。特定の実施形態で、工程（ｂ）の反応は、ｐＨ約５．０で実施される。
特定の実施形態で、上述の第１、第２または第３の方法の反応、または上述の第４、第５または第６の方法の工程（ｂ）の反応について、アルデヒド反応性基（例えば、細胞毒性剤または本明細書に記載のリンカー化合物）を有する化合物は、酸化細胞結合剤（例えば、酸化抗体または酸化抗原結合部分）に対してモル過剰で使用する。特定の実施形態で、酸化細胞結合剤に対するアルデヒド反応性基を有する化合物の比率は、約１０：１～約１．１：１、約５：１～約２：１である。一実施形態において、比率は約４：１である。
第３の実施形態において、本発明の免疫複合体は、ＣＤ１２３結合剤に存在する１つ以上のシステイン残基のチオール基（－ＳＨ）によって、本明細書に記載の細胞毒性剤に共有結合される、本発明の第１の態様に記載されているＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（抗体、その抗原結合断片、または抗体もしくはその抗原結合断片を含むポリペプチドを含む）を含む。
第１の特定の実施形態において、第３の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000205
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＣ１へシステイン残基によって共有結合される、本発明の第１の態様に記載のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば上記の対象抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象ポリペプチド）であり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ１は、以下の式：
Figure 2023036869000206
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000207
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌｃは、
Figure 2023036869000208
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、及びｓ２は、ＣｙＣ１の－Ｃ（＝Ｏ）－基に共有結合される部位であり、
Ｒ１９及びＲ２０は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｍ”は、１～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルである。
第２の特定の実施形態において、式（Ｃ１）の免疫複合体について、ＣｙＣ１は式（Ｃ１ａ）または（Ｃ１ａ１）で表され、残りの可変要素は第１の特定の実施形態で上述したとおりである。
第３の特定の実施形態において、式（Ｃ１）の免疫複合体について、ＣｙＣ１は式（Ｃ１ｂ）または（Ｃ１ｂ１）で表され、残りの可変要素は第１の特定の実施形態で上述したとおりである。
第４の特定の実施形態において、式（Ｃ１）の免疫複合体について、ＣｙＣ１は式（Ｃ１ａ）または（Ｃ１ａ１）で表され、Ｒａ及びＲｂは両方ともＨであり、Ｒ５はＨまたはＭｅであり、残りの可変要素は第１または第２の特定の実施形態で上述したとおりである。
第５の特定の実施形態で、式（Ｃ１）の免疫複合体について、Ｐは２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの可変要素は第１、第２または第４の特定の実施形態で上述したとおりである。更なる特定の実施形態において、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌ
ｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される。別の更なる特定の実施形態で、Ｐは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
第６の特定の実施形態において、式（Ｃ１）の免疫複合体について、Ｑは－ＳＯ３Ｍであり、残りの可変要素は第１、第２、第４もしくは第５の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第７の特定の実施形態において、式（Ｃ１）の免疫複合体について、Ｒ１９及びＲ２０は両方ともＨであり、ｍ”は１～６の整数であり、残りの可変要素は第１、第２、第３、第４、第５もしくは第６の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第８の特定の実施形態において、式（Ｃ１）の免疫複合体について、－Ｌ－ＬＣ－は、以下の式：
Figure 2023036869000209
 で表され、
残りの可変要素は第１、第２、第３、第４、第５、第６もしくは第７の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第９の特定の実施形態において、第３の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000210
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000211
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙ
は－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000212
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。別の更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000213
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。
第１０の特定の実施形態において、第３の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000214
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＣ２へシステイン残基によって共有結合される、本発明の第１の態様に記載のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば上記の対象抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象ポリペプチド）であり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ２は、以下の式：
Figure 2023036869000215
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000216
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒｘ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌｃ’は、以下の式：
Figure 2023036869000217
 で表され、
式中、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ２の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｑは、－Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ及びｒは、各出現において、独立して０～１０の整数であり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ’は、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドである。
更なる特定の実施形態において、ｑ及びｒはそれぞれ独立して１～６の整数、更に具体的には１～３の整数である。更により具体的には、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３はすべてＨである。
別の更なる特定の実施形態において、ｍ及びｎはそれぞれ独立して１～６の整数、更に具体的には１～３の整数である。更により具体的には、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２はすべてＨである。
第１１の特定の実施形態において、式（Ｃ２）の免疫複合体について、ＣｙＣ２は式（Ｃ２ａ）または（Ｃ２ａ１）で表され、残りの可変要素は第１０の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第１２の特定の実施形態において、式（Ｃ２）の免疫複合体について、ＣｙＣ２は式（Ｃ２ｂ）または（Ｃ２ｂ１）で表され、残りの可変要素は第１０の特定の実施形態で上述したとおりである。
第１３の特定の実施形態で、式（Ｃ２）の免疫複合体について、Ｐ’は２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの可変要素は第１０、第１１または第１２の特定の実施形態に記載したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。更なる特定の実施形態において、Ｐ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａ
ｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される。別の更なる特定の実施形態で、Ｐ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
第１４の特定の実施形態において、式（Ｃ２）の免疫複合体について、－ＬＣ’－は、以下の式：
Figure 2023036869000218
 で表される。
第１５の特定の実施形態において、式（Ｃ２）の免疫複合体について、Ｒｅは、ＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１は（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｘ２は（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｆ及びＲｇは、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２または３であり、残りの可変要素は第１０、第１１、第１２、第１３、または第１４の特定の実施形態で上述したとおりである。更に具体的には、Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される。
第１６の特定の実施形態において、第３の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000219
Figure 2023036869000220
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000221
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする。更なる特定の実施形態で、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000222
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである。別の特定の実施形態で、ＮとＣと
の間の二重線
Figure 2023036869000223
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである。
第１７の特定の実施形態において、第３の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000224
 で表され、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＣ３へシステイン残基によって共有結合される、本発明の第１の態様に記載のＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒα結合剤（例えば上記の対象抗体もしくはその抗原結合断片、または上述のその対象ポリペプチド）であり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ３は、以下の式：
Figure 2023036869000225
 で表され、
式中、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｌｃ’は、以下の式：
Figure 2023036869000226
 で表され、
式中、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ３の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ及びｒは、各出現において、それぞれ０～１０の整数であり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ’は、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドである。
更なる特定の実施形態において、ｑ及びｒはそれぞれ独立して１～６の整数、更に具体的には１～３の整数である。更により具体的には、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３はすべてＨである。
別の更なる特定の実施形態において、ｍ及びｎはそれぞれ独立して１と６の整数、更に具体的には１～３の整数である。更により具体的には、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２はすべてＨである。
第１８の特定の実施形態で、式（Ｃ３）の免疫複合体について、Ｐ’は２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残りの可変要素は第１７の特定の実施形態に上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。更なる特定の実施形態において、Ｐ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される。別の更なる特定の実施形態で、Ｐ’は、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである。
第１９の特定の実施形態において、式（Ｃ３）の免疫複合体について、－ＬＣ’－は、以下の式：
Figure 2023036869000227
 で表され、
式中、Ｍは、Ｈ＋またはカチオンであり、残りの可変要素は第１７もしくは第１８の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第２０の特定の実施形態において、式（Ｃ３）の免疫複合体について、ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨであり、残りの可変要素は第１７、第１８もしくは第１９の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第２１の特定の実施形態において、式（Ｃ３）の免疫複合体について、ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅであり、残りの可変要素は第１７、第１８もしくは第１９の特定の実施形態で上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
第２２の特定の実施形態において、第３の実施形態の免疫複合体は、以下の式：
Figure 2023036869000228
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中ＤＭは、以下の式：
Figure 2023036869000229
 で表される。
第２３の特定の実施形態において、第３の実施形態の免疫複合体について、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、残りの可変要素は第１～第２２の特定の実施形態のいずれか１つに記載したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
上の第１～第２３の特定の実施形態のいずれかにおいて、対象抗体もしくはその抗原結合断片、または対象抗体もしくはその抗原結合断片を含むポリペプチドは、配列番号５４または５６の重鎖ＣＨ３ドメイン（すなわち最後から５番目の残基）の操作されたＣｙｓに対応する位置で、Ｃｙｓ残基を有する。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５４に記載されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域（ＨＣ）、及び配列番号３３、３５、３７、または４１（好ましくは配列番号３５または３７）に記載されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含むことができる。対象抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ重鎖領域、及び配列番号３３、３５、３７、または４１（好ましくは配列番号３５または３７）に記載のアミノ酸配列を有するＩｇ ＬＣＶＲも含むことができる。特定の実施形態で、配列番号５４及び５６のＮ末端から２番目の残基はＰｈｅであり、特定の他の実施形態で、配列番号５４及び５６のＮ末端から２番目の残基はＶａｌである。
上述の第３の実施形態の免疫複合体（例えば、第１～第２３の特定の実施形態のいずれか１つ、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態の免疫複合体）は、１つ以上の遊離システインを有するＣＢＡを、本明細書に記載のチオール反応性基を有する細胞毒性剤と反応させることにより調製することができる。
一実施形態において、チオール反応性基を有する細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000230
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中－ＬＣ Ｃは、以下の式：
Figure 2023036869000231
 で表され、
式中、可変要素は第１～第９及び第２３の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
別の実施形態においてに、チオール反応性基を有する細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000232
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中ＬＣ Ｃ’は、以下の式：
Figure 2023036869000233
 で表され、
式中、可変要素は第１０～第１６及び第２３の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
更に別の実施形態においてに、チオール反応性基を有する細胞毒性剤は、以下の式：
Figure 2023036869000234
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、ＬＣ Ｃ’は上述のとおりであり、残りの可変要素は第１７～第２３の特定の実施形態のいずれか１つで上述したとおりであるか、または本明細書に記載の任意の更なる特定の実施形態のとおりである。
特定の実施形態で、有機溶媒は、ＣＢＡと細胞毒性剤との反応で使用されて、細胞毒性剤を可溶化する。代表的な有機溶媒は、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、プロピレングリコールなどを含むが、これらに限定されない。一実施形態において、ＣＢＡと細胞毒性剤との反応は、ＤＭＡ及びプロピレングリコールの存在下にて実施される。
４．組成物及び使用方法
本発明は、本明細書に記載の対象抗体もしくはその抗原結合断片、またはその免疫複合体（例えば、式（Ｌ１）、（Ｌ２）、（Ｌ３）、（Ｓ１）、（Ｓ２）、（Ｓ３）、（Ｓ４）、（Ｃ１）、（Ｃ２）、及び（Ｃ３）の複合体）、及び担体（薬学的に許容される担体）を含む、組成物（例えば医薬組成物）を含む。本発明は更に、対象抗体もしくはその抗原結合断片、または式（Ｌ１）、（Ｌ２）、（Ｌ３）、（Ｓ１）、（Ｓ２）、（Ｓ３）、（Ｓ４）、（Ｃ１）、（Ｃ２）、及び（Ｃ３）の複合体、ならびに担体（薬学的に許容される担体）を含み、第２の治療薬を更に含む、組成物（例えば医薬組成物）を含む。本組成物は、哺乳動物（例えばヒト）の異常細胞増殖を阻害すること、または血液癌、白血病、もしくはリンパ腫を含む、その増殖性疾患を治療することにとって有用である。
特に本発明は、本明細書に記載のＣＤ１２３結合剤またはその免疫複合体のうちの１つ以上を含む、医薬組成物を提供する。特定の実施形態で、医薬品組成物は、薬学的に許容される溶媒を更に含む。これらの医薬組成物は、腫瘍増殖を阻害すること、及び血液癌、白血病、またはリンパ腫を含むヒト患者の癌を治療することに用途を見いだす。
特定の実施形態で、製剤は、本発明の精製された抗体またはその免疫複合体と、薬学的に許容される溶媒（例えば担体、賦形剤）を組み合わせることによって保管及び使用のために調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０００）。好適な薬学的に許容される溶媒には、非毒性緩衝液（例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸）；塩（例えば、塩化ナトリウム）；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルルまたはベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えばメチルまたはプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；ならびにｍ－クレゾール）；低分子量ポリペプチド（例えば、約１０未満のアミノ酸残基）；タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えばグリシン、グルタ
ミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリジン）；炭水化物（例えば単糖、二糖、グルコース、マンノース、またはデキストリン）；キレート剤（例えばＥＤＴＡ）；糖（例えばスクロース、マンニトール、トレハロース、またはソルビトール）；塩形成対イオン（例えばナトリウム）；金属錯体（例えばＺｎ－タンパク質錯体）；ならびに非イオン性界面活性剤（例えばＴＷＥＥＮまたはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の医薬組成物は、局部または全身性治療のため任意の数の方法で投与されることができる。投与は、局所（膣及び直腸送達を含む粘膜に対するものなど）（例えば経皮パッチ、軟膏、ローション、クリーム、ゲル、点眼剤、坐剤、スプレイ、液剤及び散剤）；肺（例えば噴霧器を含む、散剤もしくはエアロゾルの吸入または送気；気管内、鼻腔内、表皮、及び経皮）；経口；または静脈内、動脈内、皮下、腹腔内もしくは筋肉注射もしくは注入を含む非経口；または頭蓋内（例えばくも膜下腔内または脳室内）投与であり得る。いくつかの特定の実施形態で、投与は静脈内投与である。本明細書に記載の医薬組成物は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏでも更に使用することができる。
本発明の抗体または免疫複合体は、医薬併用製剤または併用療法としての投与レジメンにおいて、第２の化合物（例えば、目的の疾患または障害を治療するのに効果的であることが周知のもの）と組み合わせることができる。いくつかの実施形態では、第２の化合物は抗癌剤である。いくつかの実施形態では、方法は、免疫複合体単独での投与と比較してより良好な効果をもたらす、本発明の第２の化合物及び免疫複合体の投与を包含する。第２の化合物は、例えば局在、肺、経口、非経口、または頭蓋内投与を含む、任意の数の方法を介して投与されることができる。いくつかの実施形態では、投与は経口投与である。いくつかの実施形態では、投与は静脈内投与である。いくつかの実施形態では、投与は経口投与及び静脈内投与の両方である。
抗体または免疫複合体は、医薬併用製剤または併用療法としての投与レジメンにおいて、鎮痛剤または他の薬物と組み合わせることもできる。
抗体または免疫複合体は、医薬併用製剤または併用療法としての投与レジメンにおいて、抗癌特性を有する第２の化合物と組み合わせることができる。医薬併用製剤または投与レジメンの第２の化合物は、それらが互いに悪影響を及ぼさないように、組み合わせのＡＤＣに対して相補的活性を有することができる。ＣＤ１２３結合剤及び第２の抗癌剤を含む医薬組成物も提供される。
本発明は、哺乳動物（例えばヒト）の異常な細胞増殖を阻害する、またはその増殖性疾患を治療する方法であって、前記哺乳動物に、治療に有効な量の本明細書に記載の対象抗体もしくはその抗原結合断片、もしくは免疫複合体（例えば、式（Ｌ１）、（Ｌ２）、（Ｌ３）、（Ｓ１）、（Ｓ２）、（Ｓ３）、（Ｓ４）、（Ｃ１）、（Ｃ２）、及び（Ｃ３）の複合体）、もしくはその組成物を単独でもしくは第２の治療薬と組み合わせて投与することを含む、方法を含む。
特定の実施形態で、哺乳動物の異常細胞増殖または増殖性疾患は、血液学癌、白血病、またはリンパ腫を含有するＣＤ１２３の発現（例えば癌）と関連するか、またはそれによって特徴づけられる疾患または状態である。特定の実施形態で、増殖性疾患は、リンパ器官の癌または血液系腫瘍である。
例えば、癌は、急性骨髄性白血病（ＣＤ３３低ＡＭＬ、Ｐ糖タンパク質陽性ＡＭＬ、再発性ＡＭＬまたは難治性ＡＭＬを含むＡＭＬ）、ＣＭＬ及びＣＭＬに関連したアベルソン癌遺伝子の急性転化（Ｂｃｒ‐ＡＢＬ転座）を含む慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異
形成症候群（ＭＤＳ）、急性Ｂリンパ芽球性白血病またはＢ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、リヒター症候群またはＣＬＬのリヒター転化を含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、Ｂ細胞性慢性リンパ増殖性疾患（Ｂ－ＣＬＰＤ）、非定型的慢性リンパ球性白血病（好ましくは著しいＣＤ１１ｃ発現を伴う）、芽形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、マントル細胞白血病（ＭＣＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、全身性肥満細胞症、ならびにバーキットリンパ腫からなる群から選択されることができる。
特定の実施形態では、Ｂ－ＡＬＬは、ＣＤ１９陽性Ｂ－ＡＬＬである。特定の他の実施形態において、Ｂ－ＡＬＬは、ＣＤ１９陰性Ｂ－ＡＬＬである。
特定の実施形態で、癌は、少なくとも１つの陰性予後因子（例えば、Ｐ糖タンパク質の過剰発現、ＥＶＩ１の過剰発現、ｐ５３変質、ＤＮＭＴ３Ａ突然変異、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複）を有する。
特定の実施形態で、本明細書に記載の対象抗体もしくはその抗原結合断片、もしくは免疫複合体（例えば、式（Ｌ１）、（Ｌ２）、（Ｌ３）、（Ｓ１）、（Ｓ２）、（Ｓ３）、（Ｓ４）、（Ｃ１）、（Ｃ２）及び（Ｃ３）の複合体）、またはその組成物の、単独でまたは第２の治療薬と組み合わせた治療に有効な量は、白血病性幹細胞（ＬＳＣ）、白血病前駆細胞（ＬＰ）、及び／または白血病性芽球の増殖、正常な造血幹細胞（ＨＳＣ）を超える増殖を選択的に阻害する。特定の実施形態で、白血病性幹細胞（ＬＳＣ）、白血病前駆細胞（ＬＰ）、及び／または白血病性芽球の増殖を阻害する上述の対象薬剤のＩＣ５０値または半最大濃度は、正常な造血幹細胞（ＨＳＣ）の少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、３００、５００分の１またはそれ以下である。
特定の実施形態で、本発明の抗白血病治療は、白血病性芽球を標的として死滅させるだけでなく、好ましくは白血病前駆細胞（ＬＰ）及び白血病性幹細胞（ＬＳＣ）も標的として死滅させる。特定の実施形態で、治療は更に、正常なＨＳＣに対して選択性が低い。特定の実施形態で、ＬＳＣ、ＬＰ及び白血病性芽球のＣＤ１２３発現は、正常なリンパ球（ほぼ陰性であり得る）と比較して、はるかに高い（例えばＬＳＣ、ＡＭＬ前駆細胞、及びＡＭＬ芽球において少なくとも２０～２５倍高い）。特定の実施形態で、ＬＰ及びＬＳＣのＣＤ１２３発現レベルは、少なくとも白血病性芽球と同じ程度である。
同様に本発明は、標的細胞または標的細胞を含有する組織に、有効量の本発明の対象抗体もしくはその抗原結合断片または免疫複合体を接触させることを含む、選択された細胞集団の細胞死を誘発する方法を提供する。標的細胞は、複合体の細胞結合剤が結合できる細胞である。
必要に応じて、他の活性剤（例えば他の抗腫瘍剤）は、複合体と共に投与されることができる。
癌治療及びその投与量、投与経路及び推奨使用法は、当技術分野において周知であり、米国医師用卓上参考書（ＰＤＲ）などの文献に記載されている。ＰＤＲは、種々の癌治療で使用されてきた薬剤の投与量を開示している。治療的に有効なこの上述の化学療法薬物の投薬レジメン及び投与量は、治療される特定の癌、疾患の範囲及び当該技術分野の医師によく知られている他の要因に依存し、医師によって決定されることができる。ＰＤＲの内容は、参照によりその全体が明示的に本明細書に組み込まれる。当業者は、本発明の教示に従って使用可能な化学療法薬物及び複合体の投与レジメン及び投与量を決定するため
に、以下のパラメータのうちの１つ以上を使用して、ＰＤＲを検討できる。これらのパラメータは、総合索引、製造業者、製品（会社のまたは商標登録された薬名による）、分類索引、一般的／化学的索引（非商標の通常薬品名）、薬物のカラー画像、ＦＤＡ表示と一致する製品情報、化学的情報、機能／作用、効能及び禁忌、治験、副作用、警告を含む。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ用途の例は、疾患または悪性細胞を死滅するために同じ患者への移植前の自家骨髄の治療；適格なＴ細胞を死滅して、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を防止するためにその移植前の骨髄の治療；目標抗原を発現しない所望の変異体を除くすべての細胞を死滅する、または望ましくない抗原を発現する変異体を死滅するための細胞培養の処置を含む。
非臨床的ｉｎ ｖｉｔｒｏ使用の条件は、当業者により容易に決定される。
臨床的ｅｘ ｖｉｖｏ使用の例は、癌治療のもしくは自己免疫疾患の治療の自家移植の前に骨髄から腫瘍細胞またはリンパ球系細胞を除去する、またはＧＶＨＤを予防するために移植の前に自家もしくは同種異系骨髄もしくは組織からのＴ細胞及び他のリンパ球系様細胞を除去することである。治療は、以下のとおり実施することができる。骨髄は患者または他の個体から収集されて、本発明の細胞毒性剤を加えた血清含有培地で、濃度は約１０μＭ～１ｐＭの範囲で約３７℃にて約３０分～約４８時間インキュベートされる。インキュベーションの濃度及び時間の正確な条件（すなわち、投与量）は、当業者により容易に決定される。インキュベーションの後、骨髄細胞は血清含有培地で洗浄され、周知の方法に従って静脈内に患者に戻される。患者が骨髄の採取時と処理済み細胞の再注入時との間に、一連の除去化学療法または全身照射法など他の治療を受ける状況下で、処理済み骨髄細胞は、標準的な医療機器を使用して液体窒素に凍結して保存される。
臨床的ｉｎ ｖｉｖｏ使用において、本発明の細胞毒性化合物または複合体は、無菌性及びエンドトキシン濃度を試験する溶液または凍結乾燥粉末として供給される。
好適な薬学的に許容される担体、希釈剤、及び賦形剤は周知であり、臨床状態の保証として当業者により決定され得る。好適な担体、希釈剤及び／または賦形剤の例としては、（１）約１ｍｇ／ｍＬ～２５ｍｇ／ｍＬのヒト血清アルブミンを含有する、またはそれを含有しないｐＨ約７．４のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、（２）０．９％生理食塩水（０．９％ｗ／ｖのＮａＣｌ）、及び（３）５％（ｗ／ｖ）デキストロースが挙げられ、トリプタミンなどの酸化防止剤及びＴｗｅｅｎ２０などの安定化剤も含有し得る。
選択された細胞集団の細胞死を誘発する、細胞増殖を阻害する、かつ／または癌を治療するための本発明の方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで実施され得る。
実施例１ ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３抗原に対するマウスモノクローナル抗体の生成
マウス抗ＣＤ１２３の抗体（野生型ＢＡＬＢ／ｃ雌マウス）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）を作成するために、ＰＢＳ中のヒトＣＤ１２３発現安定３００－１９細胞株（ＢＡＬＢ／ｃ由来Ｂ前駆細胞株（Ｍ．Ｇ．Ｒｅｔｈ ｅｔ ａｌ．１９８５、Ｎａｔｕｒｅ、３１７：３５３－３５５）である）を２週毎に５回、投与量５×１０６細胞／マウスの用量で皮下注入した。ハイブリドーマ生成のため屠殺する３日前に、免疫処置したマウスは、抗原の別の投与量の腹腔内注入を受けた。マウスからの脾臓は標準的な動物プロトコルに従って採取されて、２つの無菌性フロスト加工顕微鏡スライドガラスの間ですり砕かれて、ＲＰＭＩ－１６４０培地中の
単細胞懸濁液を得た。赤血球がＡＣＫ溶解緩衝剤で溶解した後、脾臓細胞は、マウス骨髄腫Ｐ３Ｘ６３Ａｇ８．６５３細胞（Ｐ３細胞）（Ｊ．Ｆ．Ｋｅａｒｎｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１２３：１５４８－１５５０）とＰ３細胞：脾臓細胞＝１：３の比率で混合した。脾臓細胞とＰ３細胞との混合物を洗浄し、室温にて３分間、融合培地（０．３Ｍのマンニトール／Ｄ－ソルビトール、０．１ｍＭのＣａＣｌ２、０．５ｍＭのＭｇＣｌ２及び１ｍｇ／ｍＬのＢＳＡ）中のプロナーゼで処理した。反応は、ウシ胎児血清（ＦＢＳ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加することにより停止して、次いで細胞は洗浄され、２ｍＬの低温融合培地に再懸濁されて、ＢＴＸ ＥＣＭ ２００１電気融合機（Ｈａｒｖｅｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ）で融合した。融合細胞を、ヒポキサンチン－アミノプテリン－チミジン（ＨＡＴ）含有ＲＰＭＩ－１６４０選択培地（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）に緩徐に加えて、３７℃で２０分間インキュベートし、それから平底９６ウェルプレート内に２００μＬ／ウェルで播種した。それからプレートは、ハイブリドーマクローンが抗体スクリーニングに使えるまで、３７℃で５％のＣＯ２インキュベーターでインキュベートされた。Ｊ．Ｌａｎｇｏｎｅ及びＨ．Ｖｕｎａｋｉｓ（Ｅｄｓ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１２１，Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｐａｒｔ Ｉ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｆｌｏｒｉｄａ）、ならびにＥ．Ｈａｒｌｏｗ及びＤ．Ｌａｎｅ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ）に記載されものを含む、免疫化及びハイブリドーマ作成の他の技術も使用することができる。
ハイブリドーマスクリーニング及び選択
ハイブリドーマスクリーニングは、ヒトＣＤ１２３発現安定３００－１９細胞株及び野生型３００－１９細胞による、フローサイトメトリー結合アッセイを使用して行われた。簡潔に述べると、野生型３００－１９細胞は最初にＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）遠赤色ＤＤＡＯ－ＳＥ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識されて、１：１の比率で未処理の細胞と混合して、氷上で２時間ハイブリドーマ上清でインキュベートした。それから細胞を洗浄し、ＰＥ標識抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）でインキュベートして、洗浄し、ホルマリンで固定して、ＦＡＣＳ配列（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて分析した。ヒトＣＤ１２３抗原に対する特異的反応性を有するハイブリドーマを増殖させて、上清を３つの独立の細胞株：ヒトＣＤ１２３発現安定３００－１９細胞株、カニクイザルＣＤ１２３発現安定３００－１９細胞株及び野生型３００－１９細胞株を使用して、フローサイトメトリー結合アッセイで再スクリーニングした。ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３抗原へ陽性結合を有するが、野生型３００－１９細胞で陰性のハイブリドーマは、希釈を制限することによって更にサブクローニングした。ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３抗原に対して特異的結合を示した各ハイブリドーマからの１つのサブクローンを、次の分析のために選択した。
合計６つの融合をこの試験中に実施した。約６，０００のハイブリドーマをスクリーニングして、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３抗原に特異的な３３のハイブリドーマを作成して、１８のハイブリドーマをサブクローニングした。安定的なサブクローンを培養して、モノクローナル抗体のアイソタイプは市販のマウスＩｇＧアイソタイピング試薬（例えばＲｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＧｍｂＨ（Ｇｅｒｍａｎｙ）製ＩｓｏＳｔｒｉｐ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｓｏｔｙｐｉｎｇ Ｋｉｔ、製品番号１１４９３０２７００１）を使用して同定した。
抗体の精製
抗体は、例えばタンパク質ＡまたはＧクロマトグラフィー（ＨｉＴｒａｐタンパク質ＡまたはＧ ＨＰ、１ｍＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）などの標準方法を用いたハイブリドーマサブクローン上清から精製された。簡潔に述べると、上清は、１
Ｍのトリス／ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）の１／１０量を加えて、クロマトグラフィー用に調製した。ｐＨ調整済み上清は、０．２２μｍフィルター膜に通して濾過し、結合緩衝液（ＰＢＳ、ｐＨ７．３）で平衡化したカラムに負荷した。カラムを、２８０ｎｍで吸収度がなくなる安定的なベースラインが得られるまで、結合緩衝液で洗浄した。抗体を、０．５ｍＬ／分の流量を使用して、０．１５ＭのＮａＣｌ（ｐＨ２．８）を含有する０．１Ｍの酢酸緩衝液で溶出した。約０．２５ｍＬの画分を収集して、１Ｍのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ８．０）の１／１０の量を加えることによって中和した。ピーク画分（複数可）を１×ＰＢＳに対して一晩２度透析し、０．２μｍのフィルター膜を通して濾過することで殺菌した。精製抗体を、吸光度Ａ２８０で定量化した。
タンパク質Ａの精製画分は、マウス抗体用の第四アンモニウム（Ｑ）クロマトグラフィーを備えたイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）を使用して更にポリッシングした。簡潔には、タンパク質Ａ精製からの試料は、結合緩衝液（１０ｍＭのトリス、１０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ８．０）へ緩衝液交換されて、０．２２μｍのフィルターを通して濾過した。それから調製した試料を、１２０ｃｍ／時間の流速で、結合緩衝液で平衡化したＱ ｆａｓｔ ｆｌｏｗ樹脂（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）に負荷した。カラムのサイズは、試料のすべてのＭａｂを結合するのに十分な容量を有するように選択された。それからカラムを、２８０ｎｍで吸収度がなくなる安定的なベースラインが得られるまで、結合緩衝液で洗浄した。抗体は、２０カラム容量（ＣＶ）の１０ｍＭ～５００ｍＭの塩化ナトリウムの勾配を開始することによって溶出された。ピーク分画は、２８０ｎｍ（Ａ２８０）吸収度測定に基づいて収集した。モノマーの割合は、Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ１１００システム（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ）を使用する、ＳＷＸＬガードカラム、６．０×４０ｍｍ（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＰＡ）を備える、ＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ、７．８×３００ｍｍのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で評価した。９５％超のモノマー含有量の分画はプールされて、ＴＦＦシステムを使用してＰＢＳ（ｐＨ７．４）に緩衝液交換されて、０．２μｍのフィルター膜を通して濾過することにより殺菌された。精製抗体のＩｇＧ濃度は、減衰係数１．４７を使用してＡ２８０で測定された。セラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ）などの代替的な方法は、良好な選択性で抗体をポリッシングするためにも使用した。粒径４０μｍのＩＩ型ＣＨＴ樹脂（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、ＩＥＸクロマトグラフィーについて記載されているような類似のプロトコルと共に使用した。２０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）に対応するＣＨＴの結合緩衝液及び抗体は、２０ＣＶ上の２０～１６０ｍＭのリン酸ナトリウムの勾配により溶出された。
実施例２ 抗ＣＤ１２３抗体のＶＬ及びＶＨ領域のクローニングならびに配列決定
ＶＬ及びＶＨ領域のクローニング
全細胞ＲＮＡは、製造業者のプロトコルに従い、ＲＮｅａｓｙキット（ＱＩＡｇｅｎ）を使用して、ＣＤ１２３ハイブリドーマの５×１０６細胞から調製した。その後、ｃＤＮＡは、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ｃＤＮＡ合成キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、全ＲＮＡから合成した。
ハイブリドーマ細胞に由来する抗体可変領域ｃＤＮＡを増幅するためのＰＣＲ手順は、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（（２０００）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２３３：１６７－７７）及びＣｏ ｅｔ ａｌ．（（１９９２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９－５４）に記載されている方法に基づいた。ＶＬ及びＶＨ配列は、５’末端の縮重プライマー、及び３’末端のそれぞれマウスκまたはＩｇＧ１定常領域特異的プライマーのいずれかにより増幅された。精製アンプリコンは、配列決定のためＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎｏｍｉｃｓに送った。
ＶＬ及びＶＨ ｃＤＮＡ配列のクローン化のために使用する縮重プライマーが５’末端を変更するので、追加の配列決定の試みは、完全なｃＤＮＡ配列を検証するために必要だった。予備配列をＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔサイトの検索クエリに入力して、抗体配列が由来するマウス生殖系配列を同定した。それからＰＣＲプライマーは、この新しいＰＣＲ反応がＰＣＲプライマーによって変化しない完全可変領域ｃＤＮＡ配列を得るように、マウス抗体の生殖系列結合リーダー配列にアニーリングされるように設計された。
配列確認のための質量測定
抗ＣＤ１２３抗体のそれぞれについて得られた可変領域ｃＤＮＡ配列は、生殖系列定常領域配列と合わされて、完全長抗体ｃＤＮＡ配列を得た。それから重鎖及び軽鎖の分子量は、ｃＤＮＡ配列の翻訳から計算されて、精製マウス抗ＣＤ１２３抗体のＬＣ／ＭＳ分析によって得られた分子量と比較した。軽鎖及び重鎖のそれぞれについて観察した分子量は、期待値と一致した。
実施例３ 抗体のヒト化
組換え抗体の発現
マウスＣＤ１２３抗体について確認した可変領域アミノ酸配列は、ＣＤ１２３抗体のキメラバージョンを構築するために、Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによるヒト抗体定常領域を有するインフレームで、コドン最適化され、合成されて、クローン化された。キメラＣＤ１２３抗体のために使用するベクター、定常領域、及びクローニング方法は、以下に述べるヒトＣＤ１２３抗体のために使用するものと同一であった。キメラ抗体ｃｈＣＤ１２３－６は、それぞれ重鎖及び軽鎖においてそれぞれヒトＩｇＧ１及びκ定常配列と共に、それぞれ配列番号２８及び２９のマウス可変領域配列からなる。軽鎖可変領域はｐＡｂＫＺｅｏプラスミドのＥｃｏＲＩ及びＢｓｉＷＩ部位にクローン化されて、重鎖可変領域はｐＡｂＧ１ＮｅｏプラスミドのＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｐａ１部位にクローン化された。これらの発現構成体は、振とうフラスコの修飾ＰＥＩ手順を使用する懸濁適応性ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を使用した、いずれかの付着ＨＥＫ－２９３Ｔ細胞で一過性に生成された。ＰＥＩ一過性トランスフェクションは上述したように実施されるが（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３０（２）：Ｅ９（２００２））、ただしＨＥＫ－２９３Ｔ細胞はＦｒｅｅｓｔｙｌｅ２９３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖しており、培養液量は、ＰＥＩ－ＤＮＡ複合体の添加後、未希釈のままだった。トランスフェクションは１週間インキュベートされて、次いで透明な上清は、標準的なタンパク質Ａクロマトグラフィー、続いてポリッシングクロマトグラフィー手順によって精製された。
抗体のヒト化
マウスＣＤ１２３－６抗体は、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：６０４－６０８，１９８６、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４－１５３６，１９８８、米国特許第５，２２５，５３９号、及び米国特許第５，５８５，０８９号に記載のとおり、相補性決定領域（ＣＤＲ）移植手順を実質的に使用してヒト化した。ＣＤＲ移植は一般的に、マウス抗体のＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）をヒト抗体Ｆｖフレームワーク領域と置換することと共に、親抗体の特異的抗原結合特性に重要なマウスＣＤＲ残基を保存することからなる。Ｋａｂａｔナンバリング方法及びＫａｂａｔＣＤＲ定義後の、ＣＤ１２３－６抗体の代表的なＣＤＲは下記の表Ａに示すとおりである。
Figure 2023036869000235
ＣＤＲ移植工程は、好適なヒトアクセプターフレームワーク、通常母マウス抗体に対して最も高い配列相同性を共有するヒト抗体遺伝子に由来するものを選択することから始める。マウスＣＤ１２３－６抗体に対して最も高い相同性を有するヒト免疫グロブリン生殖系列軽鎖及び重鎖配列は、Ｅｈｒｅｎｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３８：Ｄ３０１－３０７（２０１０）に記載のとおり、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ情報システム（登録商標）（ＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／）の対話型ツール（ＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎ）を利用して同定された。ＣＤ１２３－６抗体のＶＬ及びＶＨドメインに対するアクセプターフレームワークとして選択されたヒト生殖系配列は、それぞれＩＧＫＶ１－１６＊０１及びＩＧＨＶｌ－４６＊０３であった。
最初のｍｕＣＤ１２３－６ＶＬ配列、対応するヒト生殖系配列ＩＧＫＶ１－１６＊０１ならびに対応するｈｕＣＤ１２３－６ＶＬＧｖ１及びｈｕＣＤ１２３－６ＶＬＧｖ４配列の関連部分中の配列アライメントを以下に示す。
Figure 2023036869000236
最初のｍｕＣＤ１２３－６ＶＨ配列、対応するヒト生殖系配列ＩＧＨＶ１－４６＊０３、ならびに対応するｈｕＣＤ１２３－６ＶＨＧｖ１、ｈｕＣＤ１２３－６ＶＨＧｖ６、及びｈｕＣＤ１２３－６ＶＨＧｖ７配列の関連部分中の配列アライメントを以下に示す。
Figure 2023036869000237
ヒト化ＤＮＡ構造体は合成され、発現されて、親抗体と比較して、その後のＣＤ１２３結合分析について上述したように組換え抗体は精製された。
フレームワーク残基が抗原結合へ構造的に寄与することもでき、復帰突然変異として再導入されて、抗原結合親和性を最大限に保存し得ることは、十分に確立されている。Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７－４９９（１９９２）。バーニヤゾーン残基と称されるＣＤＲの真下の残基のプラットフォームは、抗体の特異性及び親和性を導くＣＤＲループの配座を保存するのを助けることができる。したがってバーニヤゾーン残基の１つ以上の復帰突然変異を含有する変異体が作成されて、その後、機能的ＩＬ３阻害活性と同様に抗原結合について評価された。試験したバーニヤゾーン残基復帰突然変異は、ＶＬの３つの残基（ＦＷ－Ｌ２の４６位及びＦＷ－Ｌ３の６９、７１位）及びＶＨの８つの残基（ＦＷ－Ｈ１の２、２８位、ＦＷ－Ｈ２の４８位、及びＦＷ－Ｈ３の６７、６９、７１、７３、７８位）を含む。バーニヤゾーン復帰突然変異を有する複数のＣＤＲ移植ＣＤ１２３－６抗体は、バージョン４．６または本明細書で「Ｇｖ４．６」（ＶＬＧＶ４及びＶＨＧＶ６）と称されるもの、及びバージョン４．７、または本明細書で「Ｇｖ４．７」（ＶＬＧＶ４及びＶＨＧＶ７）と称されるものにより例示されるような、ＴＦ－１細胞のＩＬ３阻害活性を示した（図１）。
記載したＣＤＲ移植ＣＤ１２３－６抗体の特異的フレームワーク残基の利用は、以下の表Ｂ及び表Ｃに示す。
Figure 2023036869000238
Figure 2023036869000239
そのうえ、ＣＤＲに入るリジンを複合することの影響に対する懸念を最小化するために、マウスＣＤ１２３－６抗体ＣＤＲ－Ｌ１のリジン２４は、ＣＤＲ移植でアルギニンと置換された（上の表Ａを参照）。
ＣＤ１２３－６の抗体は、上述の方法に続いて、再表面形成する可変ドメインによってもヒト化された（Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９－９７３，１９９４及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ
．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５－９０４，１９９６）。再表面形成は一般的に、軽鎖及び重鎖の両方の可変領域フレームワーク表面残基を同定すること、ならびにそれらをヒト等価物で置き換えることを含有する。マウスＣＤＲ及び埋もれたフレームワーク残基は、再表面形成抗体において保持される。ＣＤ１２３－６抗体の代表的なＣＤＲは、表Ｄに示すように定義される。
Figure 2023036869000240
ＣＤＲ内に入るリジンを複合することの影響に対する懸念を最小化するために、マウスＣＤ１２３－６抗体軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１のリジン２４は、アルギニンと置換された。同様に、マウスＣＤ１２３－６抗体重鎖ＣＤＲ－Ｈ２のリジン５２及び５９は、再表面形成したバージョン１．０のアルギニンと置換された。ＡｂＭ重鎖ＣＤＲ－Ｈ２定義は再表面決定のために使用されて、表は、それを、代表的なＫａｂａｔ定義の重鎖ＣＤＲ－Ｈ２配列と同様にＣＤ１２３－６抗体のマウス及びヒトバージョンに提供する。
表面残基位置は、３０％以上の相対的な接触性を有する任意の位置として定義された（Ｐｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３５：９５９－９７３，１９９４）。それから計算した表面残基は、ヒト生殖系表面配列と合わされて、最も相同のヒト表面配列を確認した。ＣＤ１２３－６抗体の軽鎖可変ドメインにおいて置換表面として使用されたヒト生殖系配列は、ＩＧＫＶ１－１６＊０１であり、同様にＩＧＨＶ１－６９＊１０は、重鎖可変ドメインにおいて置換表面として使用される。特異的フレームワーク表面残基の変更は、下記の表Ｅ及び表Ｆに示す。
Figure 2023036869000241
Figure 2023036869000242
Figure 2023036869000243
下記の配列アライメントは、そのマウス対応物を有する軽鎖（ＶＬ）及び重鎖（ＶＨ）両方のＣＤ１２３－６抗体可変ドメインにおける、再表面形成配列を示す。再表面形成したｈｕＣＤ１２３－６ＶＬ配列については配列番号４１、ならびに再表面形成したｈｕＣＤ１２３－６ＶＨ配列については配列番号３９及び４０を参照のこと。
Figure 2023036869000244
実施例４ ＩＬ３介在性シグナル伝達及び増殖を阻害する、抗ＣＤ１２３抗体のためのスクリーニング
ＩＬ３介在性シグナル伝達及び増殖を阻害する抗ＣＤ１２３抗体の能力は、以下の成長因子、ＩＬ－３またはＧＭ－ＣＳＦいずれか１つの存在下でのみ増殖できる赤白血病細胞株ＴＦ－１を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで試験される。ＴＦ－１細胞は、ＧＭ－ＣＳＦ（２ｎｇ／ｍＬ）を補充した、完全ＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ－１６４０、１０％ウシ胎児血清及び５０μｇ／ｍＬの硫酸ゲンタマイシン、すべての試薬はＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）で培養した。増殖アッセイを設定する前に、細胞を洗浄して、それから一晩成長因子を枯渇させた。細胞表面上のＦｃ受容体を遮断するために、培養液は、１００ｎＭのｃｈＫＴＩ抗体（同じアイソタイプの非結合抗体）を補充した。ＴＦ－１細胞は、抗ＣＤ１２３抗体の１０μｇ／ｍＬの存在下または不存下のいずれかで、完全ＲＰＭＩ媒地のウェル当たり６，０００細胞で播種した。成長因子、ＩＬ－３（１ｎｇ／ｍＬ）またはＧＭ－ＣＳＦ（２ｎｇ／ｍＬ）のいずれかを細胞に添加して、細胞増殖を開始した。細胞は、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターで３日間、３７℃でインキュベートした。各ウェルの生細胞の相対数は、比色ＷＳＴ－８アッセイで測定した（Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳ）。ＷＳＴ－８は、生細胞のデヒドロゲナーゼによって、組織培養液に溶解するオレンジ色のホルマザン生成物に低減する。生成したホルマザンの量は、生細胞の数に正比例する。ＷＳＴ－８
を最終的な量の１０％でウェルに加えて、プレートを更に２～６時間５％のＣＯ２の加湿インキュベーターにて、３７℃でインキュベートした。それから吸光度を、二波長モード４５０ｎｍ／６５０ｎｍのプレートリーダー分光光度計で測定して、６５０ｎｍの吸光度（細胞による非特異的光散乱）は４５０ｎｍのものから除去した。各ウェルの相対細胞数は、培溶液のバックグラウンド吸光度を最初に補正して、それから抗体で処理した各試料の値を、未処理の細胞（対照）入りのウェルの平均値で割ることによって計算される。
通常アッセイからの結果を、図２Ａ及び図２Ｂに示す。以前に報告されたデータ（Ｓｕｎら、１９９６）と一致して、７Ｇ３だが６Ｈ６または９Ｆ５ではない抗体は、ＩＬ－３依存性増殖を実質的に阻害した。予想外に、本試験で生成したいくつかの抗ＣＤ１２３抗体は、７Ｇ３より著しくＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害することが可能であった（図２Ａ）。例えば抗体３、６及び１４は、対照（抗体の不存在下で増殖するＴＦ－１細胞）の５％未満にＴＦ－１細胞の数を低減したが、７Ｇ３抗体は対照の１５％まで細胞数を低減した。対照的に、他の抗ＣＤ１２３抗体（例えば、抗体２、５、７、８、９、１２、１３、１６、１８、２０、２１及び２２）による処理は、細胞増殖に対して最小限の影響のみを与えたか、またはまったく影響がなかった。
抗体３、６、１４及び７Ｇ３によるＴＦ－１細胞増殖の阻害は、細胞が別の成長因子ＧＭ－ＣＳＦの存在下で成長する場合これらの抗体が阻害効果を有さなかったので、ＩＬ－３依存性であった（図２Ｂ）。
次に、ＩＬ３依存性増殖を阻害するために必要な抗体３、６、１４（それぞれｍｕＣＤ１２３－３、ｍｕＣＤ１２３－６、ｍｕＣＤ１２３－１４と新たに命名）及び７Ｇ３の濃度を測定した。ＴＦ－１細胞は、１００μＬ培養液のウェル当たり６，０００細胞で播種された。抗体を６倍の希釈系を使用して培養液に希釈し、希釈した材料の５０μＬを各ウェルに加えた。それからＩＬ３を、最終濃度１ｎｇ／ｍＬで細胞に加えた。最終的な抗体濃度は通常、６×１０－８Ｍ～８×１０－１２Ｍの範囲である。細胞は、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターで３日間、３７℃でインキュベートした。各ウェルの相対細胞数は、上述のとおりＷＳＴ－８アッセイで測定した。相対細胞数値を、抗体濃度に対してプロットして、図３に示した。ｍｕＣＤ１２３－３、ｍｕＣＤ１２３－６、ｍｕＣＤ１２３－１４、及び７Ｇ３は、実質的にかつ用量依存的方法でＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害する一方で、対照非機能性抗ＣＤ１２３抗体はこのような効果を有さなかったことは明らかである。例えば７Ｇ３による処理は、０．３３ｎＭのＩＣ５０値の場合、試験した最大抗体濃度で相対細胞数を１８％に低減した。ｍｕＣＤ１２３－３による処理は、０．２６ｎＭのＩＣ５０値の場合、試験した最大抗体濃度で相対細胞数を２％に低減した。同様にｍｕＣＤ１２３－１４またはｍｕＣＤ１２３－６による処理は、それぞれ０．０８ｎＭまたは０．０５ｎＭのＩＣ５０値の場合、試験した最大抗体濃度で相対細胞数を１％未満に低減した。したがってｍｕＣＤ１２３－３、ｍｕＣＤ１２３－６、及びｍｕＣＤ１２３－１４は、７Ｇ３抗体より著しく高い程度までＴＦ－１細胞のＩＬ－３依存性増殖を阻害する。
実施例５ マウス抗ＣＤ１２３抗体の結合親和性
結合親和性を、精製抗体を使用したフローサイトメトリーで試験した。ｍｕＣＤ１２３－３、ｍｕＣＤ１２３－６、ｍｕＣＤ１２３－１４、及び７Ｇ３の、ＣＤ１２３発現ＴＦ－１及びＨＮＴ－３４細胞への結合を示すＦＡＣＳヒストグラムは、それぞれ図４Ａ及び図４Ｂに示す。ＴＦ－１細胞（試料当たりの５×ｌ０４細胞）は、２００μＬのＦＡＣＳ緩衝液（２％の正常なヤギ血清を補充したＤＭＥＭ培地）中の種々の濃度のマウス抗体でインキュベートした。それから細胞をペレット化して、２度洗浄し、１００μＬのフィリコエリトリン（ＰＥ）共役結合ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）で１時間インキュベートした。細胞は再びペレット化されて、ＦＡＣＳ緩衝液
で洗浄され、２００μＬのＰＢＳ含有１％ホルムアルデヒド中に再懸濁された。試料は、ＨＴＳマルチウェルサンプラーを備えたＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター、またはＦＡＣＳ配列フローサイトメーターを用いて得ることができ、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ
Ｐｒｏを使用して分析することができる（すべてＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＵＳ）製）。各試料について、ＦＬ２の相乗平均蛍光強度を計算して、セミログプロットの抗体濃度に対してプロットすることができる。用量反応曲線は非線形回帰によって生成されて、各抗体の見かけの解離定数（Ｋｄ）に対応する各曲線のＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ４（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して計算された。強力な結合は試験したすべての抗体で観察されて、Ｋｄ値は、ｍｕＣＤ１２３－３、ｍｕＣＤ１２３－６、ｍｕＣＤ１２３－１４、及び７Ｇ３抗体についてそれぞれ、０．３ｎＭ、０．１ｎＭ、０．３ｎＭ、及び０．９ｎＭに対応する（図４Ａ）。したがってこの試験で、対象マウスＣＤ１２３抗体による結合は、７Ｇ３抗体によるものより少なくとも３～９倍良好である。
同様に強力な結合は、別のＣＤ１２３陽性急性骨髄性白血病細胞株ＨＮＴ－３４が上述の同じフローサイトメトリーアッセイに使用されたとき、観察された。上述のように計算されたＫｄ値は、ｍｕＣＤ１２３－３、ｍｕＣＤ１２３－６、ｍｕＣＤ１２３－１４、及び７Ｇ３について、それぞれ０．２ｎＭ、０．０７ｎＭ、０．５ｎＭ、及び２ｎＭであった（図４Ｂ）。したがってこの試験で、対象マウスＣＤ１２３抗体による結合は、７Ｇ３抗体によるものより少なくとも４～２８倍良好である。
ｍｕＣＤ１２３－３、ｍｕＣＤ１２３－６、及びｍｕＣＤ１２３－１４がＣＤ１２３陽性ＡＭＬ細胞に対して７Ｇ３抗体より低いＫｄ（良好な高親和性を表す）を有することを、これらのデータは実証する。
実施例６ キメラ抗ＣＤ１２３抗体の結合親和性
キメラ抗体ｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４を、キメラアイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃｈＫＴＩ）と比較したＨＮＴ－３４細胞への結合親和性について分析した。フローサイトメトリー結合アッセイは、二次ＰＥ共役ヤギ抗ヒト抗体を使用して、実施例５に記載のとおり実施して分析した。図５Ａは、各抗体の用量反応曲線を示す。各抗体の見かけの解離定数（Ｋｄ）についての値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ４（ＧｒａｐｈＰａｄ ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して計算された。キメラ化がこれらの抗体の結合親和性に中程度に影響を及ぼすだけであることを、データは示す。ｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４のＫｄ値は、それぞれ０．１ｎＭ、０．０４ｎＭ、及び０．２ｎＭであった。これらの値は、実施例５に報告されているそのマウス対応物に対するものとは最大で２．５倍異なった。予想どおり、ｃｈＫＴＩ抗体は試験した濃度で細胞と結合しなかった（図５Ａ）。
ＡＭＬ細胞に対するｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４の高親和性は、別のＣＤ１２３陽性急性骨髄性白血病細胞株（ＭＯＬＭ－１３）を使用して確認した。フローサイトメトリー結合アッセイは、上述のように実施して分析した。図５Ｂは、各抗体の用量反応曲線を示す。ｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４の見かけの解離定数（Ｋｄ）値は、それぞれ０．２ｎＭ、０．０８ｎＭ、及び０．２ｎＭであった。周辺結合のみ、試験した最大濃度（１０ｎＭ）でキメラアイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃｈＫＴＩ抗体）において観測された。
したがってｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４は、そのマウス対応物の高親和性を保持する。
キメラ抗体の機能的活性
ｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４、ならびに陰性対照として使用した非機能性抗ＣＤ１２３抗体は、ＴＦ－１細胞のＩＬ３依存性増殖を阻害するその能力について分析された。アッセイは実施例４に記載のとおり実施して分析した。ｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４による処理は、それぞれ０．１ｎＭ、０．０３、及び０．０５ｎＭのＩＣ５０値で用量依存的に相対細胞数を低減した（図６）。対照非機能性抗体は、細胞増殖に影響を及ぼさなかった。したがってｃｈＣＤ１２３－３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｃｈＣＤ１２３－１４は、そのマウス対応物の機能的活性を保持した。
実施例７ ヒト化抗ＣＤ１２３抗体の結合親和性
ＨＮＴ－３４細胞に対する代表的なヒト化抗ＣＤ１２３抗体、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３の結合親和性を、それぞれそのマウス及びキメラ対応物、ｍｕＣＤ１２３－６及びｃｈＣＤ１２３－６と比較した。７Ｇ３抗体及びキメラアイソタイプ対照ＩｇＧ（ｃｈＫＴＩ）は、平行して試験した。フローサイトメトリー結合アッセイは、実施例５に記載のとおり実施して分析した。図７Ａは、各抗体の用量反応曲線を示す。ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３、ｃｈＣＤ１２３－６、及びｍｕＣＤ１２３－６のＫｄが約０．０６ｎＭであるので、ヒト化が抗体の結合親和性に影響を及ぼさなかったことを、これらのデータは示す。７Ｇ３抗体の見かけのＫｄは、著しく高く、約２ｎＭだった。ｃｈＫＴＩ抗体は試験した濃度で細胞と結合しなかった。したがって両方のｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７クローンは、マウス及びキメラ対応物の高親和性を保持して、ＣＤ１２３発現細胞に対して７Ｇ３抗体より高い親和性（例えば、少なくとも約３０倍高い）を有する。
同様に代表的なヒト化ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７抗体のＡＤＣ複合体の結合親和性は、非複合型ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７と比較して、ＨＮＴ－３４細胞を使用して分析した。フローサイトメトリー結合アッセイは、二次ＰＥ共役ヤギ抗ヒト抗体を使用して、実施例５に記載のとおり実施して分析した。図７Ｂ及び図７Ｃは、各抗体の用量反応曲線及び対応する複合体を示す。共役結合がこれらの抗体の結合親和性に中程度に影響を及ぼすだけであることを、データは示す。
ヒト化抗ＣＤ１２３抗体の機能的活性
代表的なヒト化抗ＣＤ１２３抗体、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３の機能的活性（ＴＦ－１細胞のＩＬ３依存性増殖を阻害する能力）を、そのキメラ対応物ｃｈＣＤ１２３－６抗体と比較した。７Ｇ３抗体を、平行して試験した。アッセイは実施例４に記載のとおり実施して分析した。
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３、及びｃｈＣＤ１２３－６による処理は、同様にＩＬ－３依存性増殖を阻害し、増殖は、０．０２ｎＭのＩＣ５０の場合１ｎＭで完全に阻害された（図８Ａ）。しかし７Ｇ３による処理は、細胞増殖にこのような重大な影響を及ぼさず、抗体ＩＣ５０は０．２ｎＭであり、それは細胞増殖を完全に阻害することはできず、最大濃度（１０ｎＭ）で細胞数を１８％に低減するだけだった。
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３、ｃｈＣＤ１２３－６、及び７Ｇ３によるＴＦ－１細胞増殖の阻害は、細胞が別の成長因子ＧＭ－ＣＳＦの存在下で成長する場合これらの抗体が阻害効果を有さなかったので、ＩＬ－３依存性であった（図８Ｂ）。
したがってｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７は、そのマウス及びキメラ対応物の機能的活
性を保持して、ＩＬ－３依存性増殖を阻害する際、７Ｇ３抗体より著しく活性である。
実施例８ エピトープマッピング
ＣＤ１２３抗原、ＩＬ－３受容体鎖α（ＩＬ－３Ｒα）は３７８のアミノ酸からなり、ＩＬ－３結合に関与する３０６のアミノ酸細胞外ドメイン、２０のアミノ酸膜貫通ドメイン、及び５２のアミノ酸の短い細胞質尾部を含有する。細胞外ドメインは更に、成熟タンパク質（例えば、シグナルペプチド切断後）である１９位のトレオニンから１００位のセリンの領域を含むＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）、ならびに２つの別個の折り畳みドメイン：ドメイン２（アミノ酸１０１～２０４）及びドメイン３（アミノ酸２０５～３０６）からなるサイトカイン認識モチーフ（ＣＲＭ）に分けることができる。本明細書に記載の特定の抗ＣＤ１２３抗体のエピトープは、ＩＬ－３Ｒαの細胞外ドメインと顆粒球マクロファージコロニー刺激因子受容体α鎖（ＧＭＲα）との組み合わせを利用してキメラタンパク質を操作することによりマッピングされて、これはＩＬ－３Ｒαトポロジを保存して、シグナル伝達に必須な共通βサブユニットを共有する。
ＩＬ－３Ｒα変異体クローニング及び発現
ＣＤ１２３／ＩＬ－３Ｒαの細胞外ドメイン（残基１～３０６）は、ヒスチジンタグタンパク質として表された。タンパク質配列はＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによってコドン最適化かつ合成されて、ＥｃｏＲＩ及びＨｉｎｄＩＩＩ制限部位を利用するｐＡＢＬＴ哺乳動物発現ベクターの１０ヒスチジンタグを有するインフレームでクローン化した。成熟タンパク質の２５位のセリンから１１４位のセリンのＮ末端ドメイン及び１１５位のグリシンから３２５位のバリンを含むＣＲＭドメインを更に含む、対照ＧＭＲαタンパク質の細胞外ドメイン（残基１～３２５）は、同じように合成して、クローン化した。次にＩＬ３Ｒα／ＧＭＲαキメラ受容体タンパク質発現ベクターは、ＩＬ３Ｒα分子のＮ末端ドメイン（残基１～１００）またはＣＲＭ領域（残基１０１～３０６）を、ＧＭＲα分子の対応する配列と置換する、制限酵素消化によって構築された。図９Ａに示すように、ＩＬ３Ｒα（１～１００）は、ＧＭＲα残基１１５～３２５に融合するＩＬ３Ｒα残基１～１００をコードして、ＩＬ３Ｒα（１０１～３０６）は、ＩＬ３Ｒα残基１０１～３０６に融合するＧＭＲα残基１～１１４をコードする。
ＩＬ３Ｒα、ＧＭＲα、ならびに２つのキメラＩＬ－３Ｒα Ｈｉｓタグタンパク質、ＩＬ３－Ｒα（１～１００）及びＩＬ３－Ｒα（１０１～３０６）は、ＨＥＫ ２９３Ｔ細胞の一過性トランスフェクションを介して発現して、製造業者の指示に従ってＮｉセファロースセクセルクロマトグラフィー（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、トランスフェクト細胞の上清から精製された。
種々のＩＬ３Ｒａ構造体に結合する抗体
キメラ及びヒト化抗ＩＬ３Ｒα抗体は、上記のＩＬ－３Ｒαタンパク質と結合することについて酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）形式で試験した。簡潔には、Ｎｉセファロースエクセルクロマトグラフィーにより精製される各ＨｉｓタグＩＬ－３Ｒαタンパク質は、５０ｍＭの重炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中１ｎｇ／ｍＬに希釈して、１００μＬを各ウェルに加えた。４℃にて１６時間のインキュベート後、プレートを０．１％のＴｗｅｅｎ２０含有トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ）で洗浄して、それから２００μＬのブロッキング緩衝液（１％ＢＳＡ含有ＴＢＳ）でブロックした。次にブロッキング緩衝液に連続希釈した一次抗体１００μＬをＥＬＩＳＡウェルに２度加えて、室温にて１時間インキュベートした。それからプレートをＴＢＳＴで３度洗浄し、その後１００μＬの抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）－ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を各ウェルに加えた。もう１度、プレートを室温にて１時間インキュベートし、続いてＴＢＳＴで３度洗浄した。最後にＴＭＢ ｏｎｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ＨＲＰ ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ）１００μＬを各ウェルに加え
て、５分間インキュベートした。反応を１００μＬの停止液（Ｓｕｒｍｏｄｉｃｓ）を添加することによって止めて、吸光度を４５０ｎｍで読み取った。
ＣＤ１２３抗体をキメラＩＬ－３Ｒαタンパク質に結合することは、野生型ＩＬ－３Ｒαと比較して評価した。ｈｕＣＤ１２３－６抗体がＩＬ－３Ｒα及び類似のサブナノモル親和性を有するＩＬ－３Ｒα（１０１～３０６）に結合することを、図９Ｂは示す。逆にｈｕＣＤ１２３－６抗体はＧＭＲα構造体に結合せず、結合は、キメラタンパク質ＩＬ－３Ｒα（１～１００）構造体においてほとんど除去される。これらの結果は、おそらくＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインからの最小限の寄与のみによって、ｈｕＣＤ１２３－６抗体が主にＣＲＭドメインと結合することを示す。同様にｃｈＣＤ１２３－３抗体は、野生型ＩＬ－３Ｒαと比較して結合親和性が減少しているにもかかわらず、主にＩＬ－３Ｒα ＣＲＭドメインと結合する（図９Ｃ）。キメラ受容体タンパク質ＩＬ－３Ｒα（１０１～３０６）に対する結合親和性の低減は、ＣＤ１２３－３抗体結合におけるＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインの関与の可能性を示唆する。しかしｃｈＣＤ１２３－１４抗体は、キメラ受容体ＩＬ－３Ｒα（１０１～３０６）を認識せず（図９Ｄ）、むしろそれは、ＩＬ－３Ｒα及び同等の親和性を有するＩＬ－３Ｒα（１～１０１）と結合する。ｃｈＣＤ１２３－１４抗体がＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインにだけ結合することを、これらの結果は実証する。一方、２つの他の市販の抗体６Ｈ６及び９Ｆ５と共に７Ｇ３抗体は、ＩＬ－３ＲαＮ末端ドメイン及び野生型ＩＬ－３Ｒα構造体と結合するが、ＩＬ３ＲαのＣＲＭドメインを認識しない（それぞれ図９Ｅ、図９Ｆ、及び図９Ｇ）。要約すると、ＣＤ１２３－６及びＣＤ１２３－３抗体のエピトープが、ＩＬ－３ＲαのＣＲＭドメイン内に主に位置して、７Ｇ３抗体エピトープとは異なっており、それはＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメインに限定されることを、これらのデータは実証する。ＣＤ１２３－１４抗体は、ＩＬ－３ＲαのＮ末端ドメイン内に限定されるエピトープにも結合する。
実施例９ ｈｕＣＤ１２３－６抗体のリジン結合ＤＭ１及びＩＧＮ複合体の調製
ａ．ｈｕＣＤ１２３Ｇｖ４．７Ｓ３－スルホ－ＳＰＤＢ－Ｄ１の調製
１５ｍＭのＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液と１５ｖ／ｖ％のＤＭＡ（Ｎ，Ｎジメチルアセトアミド）の共溶媒中のリンカーによる、２．０ｍｇ／ｍＬのＣＤ１２３－６Ｇ４．７Ｓ３抗体と３．５モル当量のスルホ－ＳＰＤＢ－Ｄ１のｉｎ ｓｉｔｕ混合物を含有する反応物を、２５℃にて３～４時間共有結合させた。ｉｎ ｓｉｔｕ混合物を、３．０ｍＭのスルホＳＰＤＢリンカーと３．９ｍＭのスルホン化化合物Ｄ１のＤＭＡを、２０ｍＭのＮ，Ｎジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）の存在下で２５℃にて５時間反応させて調製した。
反応後、複合体を精製して、緩衝液を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、２０ｍＭのヒスチジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、８．５％ｗ／ｖショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ６．２製剤緩衝液に交換した。透析を、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ １０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、室温にて４時間、それから４℃にて一晩同じ緩衝液で実施した。
精製複合体は、１．２ｍｇ／ｍｌの最終のタンパク質濃度、及び抗体当たり２．９の結合した化合物Ｄ１分子の平均（化合物Ｄ１についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ－１Ｍ－１及びε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ－１Ｍ－１、ならびにｈｕＣＤ１２３－６Ｇ４．７Ｓ３抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，３６０ｃｍ－１Ｍ－１のモル吸光係数を用いた紫外可視分光法によって）、９４．３％のモノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによって）、及び非複合型化合物Ｄ１＜２％（ＵＰＬＣデュアルカラム、逆相ＨＰＬＣ分析）を有することがわかった。
ｂ．ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３－Ｄ２の調製
１５ｍＭのＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液と１０ｖ／ｖ％のＤＭＡ（Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）の共溶媒中の、２．０ｍｇ／ｍＬのｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３抗体と５．０モル当量の化合物Ｄ２（９０：１０のＤＭＡ：５０ｍＭのコハク酸ｐＨ５．５中の５倍過剰な亜硫酸水素ナトリウムで２５℃にて４時間前処理した）を含有する反応物を、２５℃にて４時間インキュベートした。
反応後、複合体を精製して、緩衝液を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、２０ｍＭのヒスチジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、８．５ｗ／ｖ％ショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ６．２製剤緩衝液に換えた。透析を、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ
１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、室温にて４時間、それから４℃にて一晩同じ緩衝液で実施した。
精製複合体は、１．２ｍｇ／ｍｌの最終のタンパク質濃度、及び抗体当たり２．９の結合した化合物Ｄ２分子の平均（化合物Ｄ２についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ－１Ｍ－１及びε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ－１Ｍ－１、ならびにｈｕＣＤ１２３－６Ｇ４．７Ｓ３抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，３６０ｃｍ－１Ｍ－１のモル吸光係数を用いた紫外可視分光法によって）、９９．３％のモノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによって）、非複合型化合物Ｄ２＜２％（ＵＰＬＣデュアルカラム、逆相ＨＰＬＣ分析）を有することがわかった。
ｃ．ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－スルホ－ＳＰＤＢ－ＤＧＮ４６２の調製
ＮＨＳ－スルホ－ＳＰＤＢ－ｓＤＧＮ４６２を、１０ｍＭのＤＩＰＥＡ（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン）を含有するＤＭＡ中の１．５ｍＭのスルホＳＰＤＢリンカー、１．９５ｍＭのスルホン化ＤＧＮ４６２（ｓＤＧＮ４６２）を２０分間インキュベートして、その後０．９ｍＭのＭＰＡ（３－マレイミドプロピオン酸）を加えて、２５℃にて１５分間の未反応ＩＧＮチオールをクエンチして、ｉｎ ｓｉｔｕ形成した。１５ｍＭのＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液と１５ｖ／ｖ％のＤＭＡの共溶媒中の、２．５ｍｇ／ｍＬのｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１抗体と７．５モル当量の得られたＮＨＳ－スルホ－ＳＰＤＢ－ＤＧＮ４６２を含有する反応物を、２５℃にて一晩インキュベートした。
反応後、複合体を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した、２０ｍＭのヒスチジン、５０ｍＭのＮａＣｌ、８．５％ｗ／ｖショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ６．２製剤緩衝液内で精製した。透析を、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、４℃にて一晩同じ緩衝液で実施した。
精製複合体は、０．９５ｍｇ／ｍＬの最終の抗体濃度、及び抗体当たり２．８の結合したＤＧＮ４６２分子の平均（ＤＧＮ４６２についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ－１Ｍ－１及びε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ－１Ｍ－１、ならびにｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，３６０ｃｍ－１Ｍ－１のモル吸光係数を用いた紫外可視分光法によって）、９９．５％のモノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによって）、０．６％の非複合型化合物ＤＧＮ４６２（アセトン沈殿による、逆相ＨＰＬＣ分析）を有することがわかった。
ｄ．ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－Ｄ３の調製
１５ｍＭのＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液と１０ｖ／ｖ％のＤＭＡ（Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）の共溶媒中の、２．０ｍｇ／ｍＬのｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１抗体と３．５モル当量のＤ３（９０：１０のＤＭＡ：５０ｍＭのコハク酸ｐＨ５．５中の５倍過剰な亜硫酸水素ナトリウムで２５℃にて４時間前処理した）を含有する反応物を、２５℃にて４時間インキュベートした。反応後、複合体を精製して、緩衝液を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、２０ｍＭのヒスチジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、８．５％ｗ／ｖショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ６．２製剤緩衝液に換えた。透析を、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、室温にて４時間、それから４℃にて一晩同じ緩衝液で実施した。
精製複合体は、０．９ｍｇ／ｍＬの最終のタンパク質濃度、及び抗体当たり３．４の結合したＤ３分子の平均（Ｄ３についてε３３０ｎｍ＝１５，４８４ｃｍ－１Ｍ－１及びε２８０ｎｍ＝３０，１１５ｃｍ－１Ｍ－１、ならびにｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７，３６０ｃｍ－１Ｍ－１のモル吸光係数を用いた紫外可視分光法によって）、９６％のモノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによって）、及び非複合型化合物Ｄ３＜１％（デュアルカラム、逆相ＨＰＬＣ分析）を有することがわかった。
Figure 2023036869000245
ｅ．ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＣＸ１－１－マイタンシノイド複合体の調製
ヒト化抗ＣＤ１２３抗体（再表面形成ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１）は、トリグリシル、ＣＸ１－１リンカーを介してマイタンシノイド有効荷重によりリジン残基で共役結合された。２０ｍＭのＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）を含有するＮ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）中の、５ｍＭのトリグリシル、ＣＸ１－１ヘテロ二機能性リンカー（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド及びマレイミドを含有）及び６．５ｍＭのＤＭ１マイタンシノイドを含有する混合物を、室温にて約２０分間インキュベートした。未反応のＤＭ１を、室温にて約２０分間、２ｍＭのマレイミドプロピオン酸（ＭＰＡ）でクエンチして、その後、抗体上の約７．６×または１５×の過剰なＣＸ１－１－ＤＭ１付加物で、約８％のＤＭＡを含有する、１４０ｍＭのＥＰＰＳ緩衝液（ｐＨ８）中の４ｍｇ／ｍＬで反応混合物をヒト化抗ＣＤ１２３抗体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１）に添加した。共役結合反応混合物を２５℃にて一晩インキュベートして、その後、複合体を精製して、緩衝液を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した、２５０ｍＭのグリシン、０．５％のショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０を含有する、１０ｍＭのコハク酸緩衝液（ｐＨ５．５）に換えた。透析は、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｓｅｒ透析カセット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔ
ｉｆｉｃ、１０，０００分子量カットオフ膜）を利用して、４℃にて一晩、上述のコハク酸緩衝液で実施した。
精製複合体は、抗体当たり４．３及び６．７の結合したマイタンシノイド分子の平均（ＤＭ１についてε２５２ｎｍ＝２６３５０ｃｍ－１Ｍ－１及びε２８０ｎｍ＝５４５６ｃｍ－１Ｍ－１、ならびにｈｕＣＤ１２３抗体についてε２８０ｎｍ＝２０７０７６ｃｍ－１Ｍ－１のモル吸光係数を使用する、紫外可視分光法及びサイズ排除ＨＰＬＣによって）、９８％のモノマー（サイズ排除クロマトグラフィーによって）、及びそれぞれ２．１ｍｇ／ｍＬ及び１．２ｍｇ／ｍＬの最終のタンパク質濃度を含有することがわかった。精製複合体の非複合型マイタンシノイドのレベルは、ＨＰＬＣによって低い（＜１％）と推定された。脱グリコシル化複合体の質量分析は、結合マイタンシノイド種を示した。
実施例１０ ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイ
細胞表面でＣＤ１２３を発現する細胞を死滅させるｈｕＣＤ１２３－６の抗体－薬物複合体（ＡＤＣ）の能力は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを使用して測定された。細胞供給元（ＡＴＣＣまたはＤＳＭＺ）により推奨されるように、細胞株を培養液で培養した。細胞（培養液１００μＬ中の２，０００～１０，０００）を平底９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。細胞表面上のＦｃ受容体を遮断するために、培養液に、１００ｎＭのｃｈＫＴＩ抗体（同じアイソタイプの抗体）を補充した。複合体を３倍の希釈系を使用して培養液に希釈し、１００μＬを各ウェルに加えた。ＣＤ１２３非依存性細胞毒性の寄与を測定するために、ＣＤ１２３遮断（例えば、１００ｎＭのｃｈＣＤ１２３－６抗体）を共役結合の前にいくつかのウェルに加えた。細胞及び培地を含有するが、複合体を欠く対照ウェル、ならびに培地だけを含有するウェルを、各アッセイプレートに含んだ。アッセイを、それぞれのデータポイントで３回実施した。プレートを、６％ＣＯ２の加湿インキュベーターで４～７日間、３７℃でインキュベートした。それから各ウェルの生細胞の相対数を、実施例４に記載のとおり、ＷＳＴ－８ベースＣｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ，ＵＳ）を使用して測定した。各ウェルの細胞の見かけの生存率は、培溶液のバックグラウンド吸光度を最初に補正して、それから各値を、対照ウェル（未処理の細胞）の値の平均で割ることによって計算した。細胞の生存率は、セミログプロットの複合体濃度に対してプロットした。
通常の細胞毒性アッセイの結果を図１０に示す。ＡＭＬ細胞株ＯＣＩ－ＡＭＬ４は、培養液の成長因子なしで増殖できる。細胞は、マイタンシノイド複合体ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＣＸ１－１－ＤＭ１で処理した。処理は、０．０７ｎＭのＩＣ５０値で用量依存的に細胞死滅をもたらした。死滅がＣＤ１２３発現に起因するものかどうかを評価するために、抗原を過剰な非複合型ｃｈＣＤ１２３－６抗体（５００ｎＭ）によって遮断して、複合体の効力を細胞で試験した。その後の処理は、３ｎＭより低い濃度で細胞の生存度に影響を及ぼさず、１０ｎＭ（試験した最大濃度）で細胞生存度に中程度の影響のみを及ぼした。したがってｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－ＣＸ１－１－ＤＭ１複合体は、ＯＣＩ－ＡＭＬ４細胞で高いＣＤ１２３依存性細胞毒性を示す。
リジンを介して他の細胞毒性剤（ＤＧＮ４６２、Ｄ３、Ｄ１、及びＤ２）と結合するｈｕＣＤ１２３－６抗体の複合体の細胞毒性も、ｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。異なる由来（ＡＭＬ、Ｂ－ＡＬＬ、ＣＭＬ及びＮＨＬ）の１５のＣＤ１２３陽性細胞株を、試験で使用した（直下の表）。少なくとも１つの陰性予後因子（例えば、Ｐ糖タンパク質の過剰発現、ＥＶＩ１の過剰発現、ｐ５３変質、ＤＮＭＴ３Ａ突然変異、ＦＬＴ３遺伝子内縦列重複）を有する悪性腫瘍に罹患している患者に、大部分の細胞株は由来した。複合体は、サブｐＭ～低ｎＭの範囲のＩＣ５０値でこれらの細胞株で高い効力を示した（すぐ下の表、図１１Ａ）。
Figure 2023036869000246
上述のデータは、Ｂ－ＡＬＬ細胞株（ＫＯＰＮ８及びＪＭ－１）がＩＧＮ化合物に対して非常に敏感であることを示唆するように見える。更にこの発見を検証するために、リジンまたはシステインを介してＤ１またはＤ２と結合したｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７抗体の複合体の細胞毒性は、追加のＢ－ＡＬＬ細胞株「３８０細胞」に加えて、同じＢ－ＡＬＬ細胞株、ＫＯＰＮ８及びＪＭ－１を使用して試験した。これらのＢ－ＡＬＬ細胞株と結合しない抗体－ＫＴＩ－を有する複合体を使用している陰性対照を、分析に含んだ。図１１Ｂの結果は上述の発見を確認した。
上述の表は、ｈｕＣＤ１２３－ＩＧＮ化合物が種々のＡＭＬ細胞株に対して高活性であることも示す。Ｌｙｓ及びＣｙｓ結合ＩＧＮ化合物を使用している代表的なデータを、図１１Ｃに示す。図１１Ｃに示されるデータと一致して、Ｃｙｓ結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５）の細胞毒性に関する追加のデータ（下表及び図２１に示される）は、複合体が、予後不良因子を有するものを含む、種々のＣＤ１２３陽性ＡＭＬ細胞に対して極めて強力であることを実証する。
Figure 2023036869000247
興味深いことに、Ｌｙｓ結合Ｄ２またはＬｙｓ結合Ｄ１の強力な複合体と比較したときでも、Ｃｙｓ結合Ｄ５複合体が特にＡＭＬ前駆細胞に強力であるように見えることを、予備データは示唆する。図１１Ｄを参照のこと。ここで９つのＡＭＬ患者試料は、本発明の種々のＩＧＮ複合体の効力を試験するために使用した。
追加のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性試験は、Ｃｙｓ結合Ｄ５複合体が、任意抽出したＡＭＬ患者試料のマイロターグより７４倍高い活性を有することを示す。図１８を参照のこと。
更に図１１Ｅ及び図１９は、Ｃｙｓ結合ｈｕＣＤ１２３ Ｄ５複合体が、ＡＭＬ前駆細胞を死滅させるのに必要なものの１００倍超の高い濃度で、正常な血液細胞を死滅させることを示す。一方、正常な前駆細胞とＡＭＬ前駆細胞との間の細胞毒性の差がわずかに１０倍である場合、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）はこのような優先的死滅効果を示さない。図１９で、追加のＡＭＬ患者試料を試験した。更にＤ５’のｈｕＣＤ１２３複合体（ＤＮＡ架橋剤）も試験して、それは、正常な前駆細胞とＡＭＬ前駆細胞との間で６倍の細胞毒性の差を示すだけである（図１９を参照）。
実施例１１ 一次ＡＭＬ患者試料に対するリジン結合ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ効力
一次ＡＭＬ細胞を死滅させる種々のリジン結合ｈｕＣＤ１２３－６－ＩＧＮ複合体の能力は、コロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイを使用して測定された。ＡＭＬ患者からの凍結末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及び骨髄単核球細胞（ＢＭＭＣ）は、Ｃｏｎｖｅｒｓａｎｔ
Ｂｉｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ）及びＡｌｌＣｅｌｌｓ、ＬＬＣ（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）から購入した。細胞は供給元から推奨されるように解凍して、洗浄し、ＲＰＭＩ培養液（ＲＰＭＩ－１６４０、１０％のウシ胎児血清、５０ｎｇ／ｍＬのＳＣＦ及び５０ｎｇ／ｍＬのＦＬＴ３Ｌ）中に再懸濁した。細胞表面上のＦｃ受容体を遮断するために、培養液は、１００ｎＭのｃｈＫＴＩ抗体（同じアイソタイプの抗体）を補充した。細胞（培養液１５０μＬ中の２００，０００）を平底９６ウェルプレートの各ウェルに加えた。複合体を１０倍の希釈系を使用して培地に希釈し、５０μＬを
各ウェルに加えた。対照ウェルは、細胞及び培地を含有するが複合体を欠いた。プレートを、６％ＣＯ２の加湿インキュベーターで１８時間、３７℃でインキュベートした。それから細胞を、ＥＰＯのない２．２ｍＬのＭＥＴＨＯＣＵＬＴ（商標）Ｈ４５３４（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ）を入れた管へ移して、混合し、混合物は６ウェルプレートに移した。コロニー形成まで、プレートを６％ＣＯ２の加湿インキュベーターで３７℃でインキュベートし（通常１０～１６日）、計測した。コロニー形成の阻害率は、複合体処理した試料と無処理対照とを比較することによって決定した。コロニー阻害率は複合体濃度に対してプロットされて、コロニー形成の９０％を阻害する（ＩＣ９０）複合体濃度を曲線から決定した。
１つの主要患者試料における通常ＣＦＵアッセイからの結果を、図１２Ａに示す。ｈｕＣＤ１２３－６－ＩＧＮ複合体は用量依存的に細胞毒性を示し、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－ｓＳＰＤＢ－ＤＧＮ４６２、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－Ｄ３、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－ｓＳＰＤＢ－Ｄ１及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－Ｄ２について、ＩＣ９０値はそれぞれ０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．０３ｎＭ、及び０．０１２ｎＭであった。図１２Ｂは、複合体で処理したすべてのＡＭＬ患者試料におけるＩＣ９０値を示す。各複合体における中央ＩＣ９０値は実線で示され、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－ｓＳＰＤＢ－ＤＧＮ４６２、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－Ｄ３、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－ｓＳＰＤＢ－Ｄ１及びｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１－Ｄ２それぞれについて、２ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０３ｎＭ、及び０．０２ｎＭに等しい。したがってリジン結合ｈｕＣＤ１２３－６－ＩＧＮ複合体は、ＡＭＬ患者からの試料で高い効力を示した。
実施例１２ ｈｕＣＤ１２３－６抗体のＳｅｒ部位特異的複合体の調製
ａ）Ｎ末端抗体共役結合－２工程方法
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６／７Ｓ３抗体（操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有する、ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４ ＬＣＶＲ（配列番号３７）及びＨＣＶＲ Ｇｖ６／７（配列番号：３４）を有する）（図１５に示すスキーム１中の［１］、ＰＢＳ中の３ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ７．４））を、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液で処理した（５０当量、２５℃、３０分）。それから混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に緩衝液交換した。
得られた溶液を、４－アミノフェネチルアルコール（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド］中の１００ｍＭ）で処理して１０ｖ／ｖ％共溶媒にした。ヘテロ二機能性リンカー１（スキーム１の［３］、５当量）をその後に添加し、反応容器を封止して、２４時間３７℃にてインキュベートした。
それから混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により、ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液に緩衝液交換した。それから溶液をＤＭＡ（Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）共溶媒（１０ｖ／ｖ％）で調整して、６時間２５℃にてスルホン化ＤＧＮ４６２（ｓＤＧＮ４６２）（スキーム１の［５］、遊離チオール、５当量）で処理した。
得られた複合体を、ＮＡＰ濾過カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、ｐＨ６．２の２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム製剤緩衝液に緩衝液交換した。透析を、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１０，０００ＭＷＣＯ）
を利用して、２５℃にて４時間同じ緩衝液で実施した。
精製複合体（スキーム１の［６］）は、抗体当たり２の結合したＤＧＮ４６２分子の均一な平均（Ｑ－ＴｏＦ質量分析を介して）、モノマー＞９８％（サイズ排除クロマトグラフィーを介して）、遊離薬剤＜２％（アセトン沈殿逆相ＨＰＬＣ分析を介して）、及び最終のタンパク質濃度０．１８ｍｇ／ｍＬ（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６／７Ｓ３抗体についてモル吸光係数ε２８０＝２１３３２０Ｍ－１ｃｍ－１を用いた紫外可視分光法を介して）を有することがわかった。
ｂ）Ｎ－端末抗体共役結合－ＩＧＮ直接結合
重鎖のＮ末端セリンで操作した、操作されたＮ末端Ｓｅｒ含有ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２抗体（ＸａａがＶａｌである重鎖配列番号５３及び軽鎖配列番号５１を含むｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２）（スキーム２の［１］（図１６）、ＰＢＳ中の３ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ７．４））を、２５℃にて３０分間、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（５０モル当量）で処理した。それから混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ
Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に緩衝液交換した。
得られた溶液を、ｐ－フェニレンジアミン（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド］中の１００ｍＭ）で処理して１０ｖ／ｖ％共溶媒にした。次にｉｎ ｓｉｔｕスルホン化Ｄ８（またはｓＤ８）（スキーム２の［３］、５モル当量）を、その後に添加し、反応容器を封止して、２４時間３７℃にてインキュベートした。
それから混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のショ糖緩衝液（ｐＨ６．２）に緩衝液交換した。透析を、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、２５℃にて４時間同じ緩衝液で実施した。
精製複合体（スキーム２の［４］）は、抗体当たり２の結合したＤ８分子の均一な平均（Ｑ－ＴｏＦ質量分析を介して）、モノマー＞９６％（サイズ排除クロマトグラフィーを介して）、遊離薬剤＜３％（ＨＩＳＥＰ逆相ＨＰＬＣ分析を介して）、及び最終のタンパク質濃度１．４ｍｇ／ｍＬ（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ２抗体についてモル吸光係数ε２８０＝２１３３２０Ｍ－１ｃｍ－１を用いた紫外可視分光法を介して）を有することがわかった。
上述のｉｎ ｓｉｔｕスルホン化Ｄ８（またはｓＤ８）を以下のように調製した。Ｄ８試薬は、凍結乾燥した白色固体として、ＤＭＡ（Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）中に溶解させて、１０～２０ｍＭの標準濃度溶液にした。新たに調製した亜硫酸水素ナトリウム（５００ｍＭ水溶液、５モル当量）を加えて、得られた溶液を、２５℃にて４～６時間、その後４℃で１５時間の保持工程で反応させた。新たに調製した亜硫酸水素ナトリウム（５００ｍＭ水溶液、２モル当量）の更なるアリコートを導入して、２５℃にて４時間反応させて、その後更に使用するまで－８０℃にて保存した。
ｃ）Ｎ末端抗体共役結合－ＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７における２工程プロトコル
軽鎖のＮ末端セリンで操作したｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３抗体（上を参照のこと）（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３）（スキーム３の［１］（図１７）、ＰＢＳ中の３ｍｇ／ｍＬ（ｐＨ７．４））を、２５℃にて３０分間、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（５０モル当量）で処理した。それから混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａ
ｒｅ）により酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．０）に緩衝液交換した。
得られた溶液を、４－アミノフェネチルアルコール（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド］中の１００ｍＭ）で処理して１０ｖ／ｖ％共溶媒にした。ヘテロ二機能性リンカー１（スキーム３の［３］、５モル当量）をその後に添加し、反応容器を封止して、２４時間３７℃にてインキュベートした。
それから混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）により、ＨＥＰＥＳ（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）ｐＨ８．５緩衝液に緩衝液交換した。それから溶液をＤＭＡ（Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド）共溶媒（１０ｖ／ｖ％）で調整して、６時間２５℃にてスルホン化Ｄ１（またはｓＤ１）（スキーム３の［５］、遊離チオール、５当量）で処理した。
得られた複合体を、ＮＡＰ濾過カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５ ＤＮＡ Ｇｒａｄｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム製剤緩衝液（ｐＨ ６．２）に緩衝液交換した。透析を、Ｓｌｉｄｅ－ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、２５℃にて４時間同じ緩衝液で実施した。
精製複合体（スキーム３の［６］）は、抗体当たり２．０の結合したＤ１分子の平均（Ｑ－ＴｏＦ質量分析を介して）、モノマー＞９６％（サイズ排除クロマトグラフィーを介して）、遊離薬剤＜３％（アセトン沈殿逆相ＨＰＬＣ分析を介して）、及び最終のタンパク質濃度０．４ｍｇ／ｍＬ（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７Ｓ３抗体についてモル吸光係数ε２８０＝２１３３２０Ｍ－１ｃｍ－１を用いた紫外可視分光法を介して）を有することがわかった。
実施例１３ ｈｕＣＤ１２３－６抗体の部位特異的複合体のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性
種々のＩＧＮ化合物を有するｈｕＣＤ１２３－６の部位特異的複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５及びｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８）の、細胞表面にＣＤ１２３を発現する細胞を死滅させる能力を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞毒性アッセイを用いて、一致する抗体及び有効荷重を含有するリジン結合複合体（ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２及びｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２）と比較した。細胞毒性アッセイは、実施例１０に記載のとおりに実行して分析した。
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体（そこでｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－ＣｙｓＭａｂは、配列番号５４のＩｇ重鎖配列と配列番号５１の軽鎖配列を有する）は、複数の細胞株で、少なくともリジン結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６－Ｄ２複合体（そこでｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．６抗体は、配列番号５０のＩｇ重鎖配列と配列番号５１の軽鎖配列を有する）と同程度に活性であった。ＡＭＬ細胞株ＥＯＬ－１、Ｂ－ＡＬＬ細胞株ＫＯＰＮ－８及びＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１を用いた細胞毒性アッセイのいくつかの例を、それぞれ図１３Ａ～１３Ｃに示す。両方の複合体は、ＥＯＬ－１細胞、ＫＯＰＮ－８細胞、及びＭＯＬＭ－１細胞について、それぞれ約０．００２ｎＭ、０．００５ｎＭ、及び０．０３ｎＭのＩＣ５０値で用量依存的に細胞を死滅させた。ＣＤ１２３抗原が非複合型ｃｈＣＤ１２３－６抗体によって遮断される場合、複合体は細胞に対して多くても１００分の１の低毒性であるから、死滅はＣＤ１２３依存性であった。
ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２－ＳｅｒｉＭａｂ－Ｄ８複合体（そこで、再表面形成ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１Ｓ２抗体は、Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、
配列番号６０のＩｇ重鎖配列及び配列番号６１の軽鎖配列を有する）は、標的（ＣＤ１２３）結合を維持して、複数の細胞株に対して、リジン結合ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１－Ｄ２複合体（そこで再表面形成ｈｕＣＤ１２３－６Ｒｖ１．１抗体は、配列番号６０のＩｇ重鎖配列と配列番号６１の軽鎖配列を有する）と少なくとも同程度に活性であった。ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ－１及びＨＮＴ－３４、ならびにＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ－１を用いた細胞毒性アッセイのいくつかの例を、それぞれ図１４Ａ～１４Ｃに示す。両方の複合体は、ＳＨＩ－１、ＨＮＴ－３４、及びＭＯＬＭ－１細胞について、それぞれ約０．０１ｎＭ、０．００２ｎＭ、及び０．０３ｎＭのＩＣ５０値で用量依存的に細胞を死滅させた。ＣＤ１２３抗原が非複合型ｈｕＣＤ１２３－６抗体によって遮断される場合、複合体は細胞に対して多くても１００分の１の低毒性であるから、死滅はＣＤ１２３依存性であった。
別の試験において、ｈｕＣＤ１２３抗体を有するＳｅｒ結合ＤＧＮ４６２化合物が、より高いＤＡＲを有するリジン結合バージョンより３倍高い抗原特異的効力を有する（データを図示せず）ことがわかった。
実施例１４ ＭＶ４－１１ＡＭＬ皮下マウスモデルのＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体を使用したｉｎ ｖｉｖｏ有効性試験
皮下に移植した腫瘍細胞は、新規の有望な抗癌剤をｉｎ ｖｉｖｏ試験する便利な手段となる。広範囲の腫瘍遺伝子型及び表現型を含む固形腫瘍及び白血病の両方に由来する多種多様なヒト及びマウス細胞株は、マウス宿主で成長するのに適しており、したがって好適な腫瘍モデルの対象治療薬の試験を可能にする。
下記のプロトコルで概説するように、皮下の急性骨髄性白血病モデル（ＡＭＬ）は、ｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍量を減少させるその能力について、対象ＣＤ１２３抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の有効性を試験するために使用する。具体的には、雌ＳＣＩＤマウスは、約１×１０７のＭＶ４－１１細胞、ヒトＡＭＬ細胞株を右脇腹にそれぞれ皮下接種した。接種後１４日目、マウスは腫瘍体積に基づいてランダムにグループに分けられて、腹腔内注入により４００ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧで処理して、ＭＶ４－１１細胞のＦｃ受容体を遮断する。対象抗Ｄ１２３ ＡＤＣまたは非標的化抗体対照（ｃｈＫＴＩ－リジン結合Ｄ１、ｃｈＫＴＩ－リジン結合－Ｄ２、及びｈｕＫＴＩ抗体が配列番号５４の最後から５番目の残基に対応する位置で操作されたＣｙｓを有する、ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ結合－Ｄ２）は、接種後１５日目に１または３μｇ／ｋｇの投与量で、１度静脈内投与される。マウスを、接種後２０日目に再び１００ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧで処理する。動物は毎日監視されて、腫瘍体積を週２回測定する。処理群及び対照群を、対応する投与量と共に以下に記載する。
Figure 2023036869000248
本試験で使用するｈｕＣＤ１２３抗体は、ヒト化ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７抗体であり、それは、本明細書で上述したように、Ｌｙｓ結合でもしくは操作されたＣｙｓ結合でＤ１またはＤ２に結合する。Ｌｙｓ結合キメラＫＴｉ抗体ベースＩＧＮ複合体及びＣｙｓ結合ヒトＫＴｉ抗体ベースＩＧＮ複合体も、対照としても含まれる。後者のＫＴｉ ＣｙｓＭａｂ抗体は、配列番号５４の最後から５番目の残基に対応する位置で、重鎖ＣＨ３ドメインの操作したＣｙｓを有する。
Ｌｙｓ及びＣｙｓ結合ＩＧＮ化合物が、ｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルのＭＶ４－１１異種移植腫瘍に対して高活性であることを、予備データは示す（図２０を参照）。
実施例１５ ｈｕＣＤ１２３－６抗体のＣｙｓ部位特異的複合体の調製
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１Ｓ２－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ７
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ１．１Ｓ２－ＣｙｓＭａｂは、配列番号３３のＬＣＶＲ配列及び配列番号４８のＨＣ配列（第１残基がＳｅｒであることを除いて）を有するＣＤＲ移植ヒト化抗体であり、配列番号５４または５６の最後から５番目の残基に相当する操作されたＣｙｓを含む。
還元状態の２つの不対システイン残基を含有するこのｈｕＣＤ１２３抗体は、標準的な手順を使用して調製された。この中間体を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、５ｍＭのＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）（ｐＨ６．０）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、プロピレングリコール、及びＤＭＡ中の原液として１０モル当量のＤ７を加えて、２ｖ／ｖ％のＤＭＡ及び３８ｖ／ｖ％のプロピレングリコールを含むＰＢＳ ５ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ６．０）の最終溶媒組成物を有する反
応混合物を得た。反応を放置して、２５℃にて２４時間進行させた。
複合体を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５脱塩カラムを使用して、２０ｍＭのヒスチジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、８．５％ショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ６．２製剤緩衝液内で精製して、１０ｋＤａの分画分子量を有する膜による限外濾過によって濃縮して、０．２２μｍの注射器フィルターに通して濾過した。それから複合体を、１０ｋＤａの分画分子量を有する膜を使用して同じ緩衝液に対して透析した。
複合体は、紫外可視分光法によって２モルのＤ７／ｍｏｌ抗体、ＳＥＣによって９７．２％のモノマー、及びＳＥＣ／逆相ＨＰＬＣによって１．９％の非抱合型Ｄ７を有することがわかった。脱グリコシル化複合体のＬＣ－ＭＳは示さない。
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂは、配列番号３４のＬＣＶＲ配列（そこでＸａａはＶａｌである）及び配列番号３５のＨＣＶＲ配列を有するＣＤＲ移植ヒト化抗体であり、配列番号５４または５６の最後から５番目の残基に相当する操作されたＣｙｓを含む。
還元状態の２つの不対システイン残基を含有するこのｈｕＣＤ１２３抗体は、標準的な手順を使用して調製された。この中間体を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、５ｍＭのＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）（ｐＨ６．０）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、プロピレングリコール、及びＤＭＡ中の原液として１０モル当量のＤ５を加えて、２ｖ／ｖ％のＤＭＡ及び３８ｖ／ｖ％のプロピレングリコールを含むＰＢＳ ５ｍＭのＥＤＴＡ（ｐＨ６．０）の最終溶媒組成物を有する反応混合物を得た。反応を放置して、２５℃にて２４時間進行させた。
複合体を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５脱塩カラムを使用して、２０ｍＭのヒスチジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、８．５％ショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ６．２製剤緩衝液内で精製して、１０ｋＤａの分画分子量を有する膜による限外濾過によって濃縮して、０．２２μｍの注射器フィルターに通して濾過した。それから複合体を、１０ｋＤａの分画分子量を有する膜を使用して同じ緩衝液に対して透析した。
複合体は、紫外可視分光法によって２モルのＤ５／ｍｏｌ抗体、ＳＥＣによって９４．８％のモノマーを有することがわかった。脱グリコシル化複合体のＬＣ－ＭＳは示さない。
ｈｕＣＤ１２３－６Ｇｖ４．７－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ４
還元状態の２つの不対システイン残基を含有する、上述のｈｕＣＤ１２３抗体は、標準的な手順を使用して調製された。この中間体を含むリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、５ｍＭのＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）（ｐＨ６．０）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、プロピレングリコール、及びＤＭＡ中の原液として５モル当量のＤ４を加えて、２ｖ／ｖ％のＤＭＡ及び３８ｖ／ｖ％のプロピレングリコールを含むＰＢＳ ５ｍＭのＥＤＴ（ｐＨ６．０）の最終溶媒組成物を有する反応混合物を得た。反応を放置して、２５℃にて６時間進行させた。
複合体を、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５脱塩カラムを使用して、２０ｍＭのヒスチジン、５０ｍＭの塩化ナトリウム、８．５％ショ糖、０．０１％のＴｗｅｅｎ２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムｐＨ６．２製剤緩衝液内で精製して、１０ｋＤａの分画分子量を有
する膜による限外濾過によって濃縮して、０．２２μｍの注射器フィルターに通して濾過した。それから複合体を、１０ｋＤａの分画分子量を有する膜を使用して同じ緩衝液に対して透析した。
複合体は、紫外可視分光法によって１．８モルのＤ４／ｍｏｌ抗体、ＳＥＣによって９７．４％のモノマーを有することがわかった。脱グリコシル化複合体のＬＣ－ＭＳは示さない。
実施例１６ 化合物Ｄ１の合成
Figure 2023036869000249
 化合物１ａ：
（５－アミノ－１，３－フェニレン）ジメタノール（１．０１ｇ、６．５９ｍｍｏｌ）を含む無水ジメチルホルムアミド（１６．４８ｍＬ）及び無水テトラヒドロフラン（１６．４８ｍｌ）の撹拌溶液に、４－メチル－４－（メチルジスルファニル）ペンタン酸（１．２８１ｇ、６．５９ｍｍｏｌ）、Ｎ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（２．５３ｇ、１３．１９ｍｍｏｌ）及び４－ジメチルアミノピリジン（０．０８１ｇ、０．６５９ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を１８時間室温にて撹拌した。反応物を、飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチして、酢酸エチルで抽出した（３×５０ｍＬ）。有機抽出物を水及び食塩水で洗浄して、それから無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶液は濾過されて、減圧下で濃縮され、得られた残留物はシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン）で精製されて、化合物１ａを白色固体（０．７０ｇ、収率３２％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６：δ９．９０（ｓ，１Ｈ），７．４３（ｓ，２Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），５．１６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），４．４４（ｄ，４Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），２．４３（ｓ，３Ｈ），２．４１－２．３８（ｍ，２Ｈ），１．９２－１．８８（ｍ，２Ｈ），１．２９（ｓ，６Ｈ）。ＭＳ（ｍ／ｚ），実測値３３０．０（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000250
 化合物１ｂ：
化合物１ａ（２１９ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（６．６５ｍＬ）の冷却した（－１０℃）溶液に、トリエチルアミン（４６３μｌ、３．３２ｍｍｏｌ）を加えて、続いてメタンスルホン酸無水物（２９８ｍｇ、１．６６２ｍｍｏｌ）を滴下添加した。混合物を－１０℃にて２時間撹拌して、混合物を氷水でクエンチして、冷酢酸エチル（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を冷水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮して、粗ジメシレートを得た。
粗ジメシラート（２２７ｍｇ、０．４６７ｍｍｏｌ）及びＩＧＮ（またはインドリノベ
ンゾジアゼピン）モノマーＡ（３０３ｍｇ、１．０２８ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（３．１１ｍＬ）中に溶解させた。炭酸カリウム（１６１ｍｇ、１．１６９ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を室温にて１８時間撹拌した。脱イオン水を加えて、得られた沈殿物を濾過し、水ですすいだ。固体をジクロロメタン中に再度溶解させて、水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して、濃縮した。粗残留物をシリカゲルクロマトグラフィー（メタノール／ジクロロメタン）で精製して、化合物１ｂを得た（２２７ｍｇ、収率３６％）。ＭＳ（ｍ／ｚ），実測値８８２．５（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000251
 化合物１ｃ：
化合物１ｂ（２２７ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）を含む無水１，２－ジクロロエタン（３．３４６ｍＬ）の懸濁液に、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３７．３ｍｇ、０．１６７ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて１時間撹拌して、その際、それを飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチした。混合物をジクロロメタンで抽出し、食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して、濃縮した。粗残留物をＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、水／アセトニトリル）で精製した。所望の生成物を含有する分画をジクロロメタンで抽出して、無水硫酸マグネシウムで乾燥して、濾過し、濃縮して、化合物１ｃ（３５ｍｇ、収率１９％）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ），実測値８８４．３（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000252
 化合物１ｄ：
化合物１ｃ（１８ｍｇ、０．０１７ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル（９２１μＬ）及びメタノール（６５８μＬ）の溶液に、トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩（１７．５１ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）（飽和重炭酸ナトリウム溶液（０．２ｍＬ）で中和）を含むリン酸ナトリウム緩衝液（１３２μＬ、０．７５Ｍ、ｐＨ６．５）を加えた。混合物を室温にて３．５時間撹拌し、それからジクロロメタン及び脱イオン水で希釈した。有機層を分離して、食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して、減圧下で濃縮して、粗チオールを得た。ＭＳ（ｍ／ｚ），実測値８３８．３（Ｍ＋１）＋。
粗チオール（１５．５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）を、２－プロパノール（１．２３ｍＬ）中に溶解させた。脱イオン水（６１７μＬ）及び亜硫酸水素ナトリウム（５．７７ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を室温にて５時間撹拌した。反応物をアセトン／ドライアイス浴にて凍結させて、凍結乾燥して、ＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、脱イオン水／アセトニトリル）により精製した。所望の生成物を含有する分画を凍結させて、凍結乾燥し、化合物（１２Ｓ、１２ａＳ）－９－（（３－（４－メルカプト－４－メチルペン
タンアミド）－５－（（（（Ｒ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［ｌ，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）ベンジル）オキシ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－１２－スルホン酸（化合物スルホン化Ｄ１（ｓＤ１））（６．６ｍｇ、収率３９％）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ），実測値９１８．２（Ｍ－１）－。
実施例１７ ２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｒ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－ｌ－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－６－オキソヘキサノエート、化合物Ｄ２の合成
Figure 2023036869000253
 工程１：（Ｓ）－２－（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（５ｇ、２２．４０ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－アミノプロパン酸塩酸塩（４．４８ｇ、２４．６４ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（４４．８ｍＬ）中に溶解させた。ＥＤＣ ＨＣｌ（４．７２ｇ、２４．６４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．４３ｇ、２２．４０ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（９．７５ｍＬ、５６．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を、アルゴン雰囲気下で室温にて一晩、撹拌した。反応混合物をジクロロメタンで希釈して、それから飽和塩化アンモニウム、飽和重炭酸ナトリウム、水、及び食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥して、濃縮した。粗油状物はシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）を介して精製されて、化合物２ａ（６．７ｇ、収率８５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．３８－７．３１（ｍ，５Ｈ），６．５３－６．４２（ｍ，１Ｈ），５．４２－５．３３（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．４８－４．４１（ｍ，１Ｈ），４．３２－４．２０（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．３８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
Figure 2023036869000254
 工程２：化合物２ａ（６．７ｇ、１９．１２ｍｍｏｌ）を、メタノール（６０．７ｍＬ）及び水（３．０３ｍＬ）中に溶解させた。溶液をアルゴンで５分間パージした。パラジウム炭素（湿潤、１０％）（１．０１７ｇ、０．９５６ｍｍｏｌ）を、ゆっくり加えた。反応物を水素雰囲気下にて一晩撹拌した。溶液をセライトに通して濾過し、メタノールですすいで、濃縮した。それをメタノール及びアセトニトリルで共沸混合して、得られた油状物を直接高真空下に置いて、化合物２ｂ（４．０２ｇ、収率９７％）を得て、これを次の工程で直接使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．７８－７．６３（ｍ，１Ｈ），４．４９－４．４２（ｍ，１Ｈ），３．５５－３．５０（ｍ，１Ｈ），１．７３（ｓ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．３６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
Figure 2023036869000255
 工程３：化合物２ｂ（４．０２ｇ、１８．５９ｍｍｏｌ）及びアジピン酸モノメチル（３．０３ｍＬ、２０．４５ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（６２．０ｍＬ）中に溶解させた。ＥＤＣ ＨＣｌ（３．９２ｇ、２０．４５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．８５ｇ、１８．５９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（６．４９ｍＬ、３７．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて一晩撹拌した。反応物を、ジクロロメタン／メタノール（１５０ｍＬ、５：１）で希釈して、飽和塩化アンモニウム、飽和重炭酸ナトリウム、及び食塩水で洗浄した。それを硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を除去した。化合物をアセトニトリル（５×）で共沸混合し、それから３５℃にて高真空下でポンプ吸引して、化合物２ｃ（６．６６ｇ、収率１００％）を得た。粗製物質を、精製せずに次の工程で使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ６．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．５２－４．４４（ｍ，１Ｈ），４．４３－４．３６（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），２．３５－２．２９（ｍ，２Ｈ），２．２５－２．１８（ｍ，２Ｈ），１．７１－１．６０（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．３６（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）。
Figure 2023036869000256
 工程４：化合物２ｃ（５．９１ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）を、３時間の室温にてＴＦＡ（２８．６ｍＬ、３７２ｍｍｏｌ）及び脱イオン水（１．５ｍＬ）中で撹拌した。反応混合物をアセトニトリルで濃縮して、高真空下に置いて、粗化合物２ｄを粘着性の固体（５．８８ｇ、収率１００％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），４．６９－４．６０（ｍ，１Ｈ），４．５９－４．５１（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．４０－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．３１－２．２４（ｍ，２Ｈ），１．７２－１．６３（ｍ，４Ｈ），１．５１－１．４５（ｍ，３Ｈ），１．４２－１．３７（ｍ，３Ｈ）。
Figure 2023036869000257
 工程５：化合物２ｄ（５．６ｇ、１８．５２ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１１８ｍＬ）及び無水メタノール（５８．８ｍＬ）中に溶解させた。（５－アミノ－１，３－フェニレン）ジメタノール（２．７０ｇ、１７．６４ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（８．７２ｇ、３５．３ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温にて一晩撹拌した。溶媒を除去して、酢酸エチルを加えた。得られたスラリーを濾過して、酢酸エチルで洗浄し、真空／Ｎ２下で乾燥して、化合物２ｅ（２．７９ｇ、収率３６％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ９．８２（ｓ，１Ｈ），８．０５，（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．４６（ｓ，２Ｈ），６．９５（３，１Ｈ
），５．２１－５．１２（ｍ，２Ｈ），４．４７－４．４２（ｍ，４Ｈ），４．４０－４．３３（ｍ，１Ｈ），４．３３－４．２４（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），２．３３－２．２６（ｍ，２Ｈ），２．１６－２．０９（ｍ，２Ｈ），１．５４－１．４６（ｍ，４Ｈ），１．３０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．２２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ）。
Figure 2023036869000258
 工程６：化合物２ｅ（０．５２ｇ、１．１８９ｍｍｏｌ）及び四臭化炭素（１．１８３ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１１．８９ｍＬ）中に溶解させた。トリフェニルホスフィン（０．９３５ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を４時間のアルゴン雰囲気下で撹拌した。反応混合物を、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）で希釈して、水及び食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥して、濾過し、濃縮した。粗製物質はシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって精製されて、化合物２ｆ（２６２ｍｇ、収率３９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ１０．０１（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），８．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．６７（ｓ，２Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），４．７０－４．６４（ｍ，４Ｈ），４．４０－４．３２（ｍ，１Ｈ），４．３１－４．２３（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），２．３４－２．２６（ｍ，２Ｈ），２．１８－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．４５（ｍ，４Ｈ），１．３１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
Figure 2023036869000259
 工程７：ジブロミド化合物２ｆ及びＩＧＮモノマー化合物Ｉ－１を、ＤＭＦ中に溶解させた。炭酸カリウムを加えて、室温にて一晩撹拌した。水を反応混合物に加えて、生成物を沈殿させた。スラリーを室温にて５分間撹拌して、それから濾過し、１時間真空／Ｎ２下で乾燥した。粗製物質はシリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）により精製され、化合物２ｇ（３３６ｍｇ、収率７４％）を得た。ＬＣＭＳ＝５．９１分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９９０．６（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000260
 工程８：ジイミン化合物２ｇを、１，２‐ジクロロエタン中に溶解させた。ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３を反応混合物に加えて、室温にて１時間撹拌した。反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希
釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチした。相を分離し、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥して、濃縮した。粗製物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）を介して精製して、化合物２ｈ（８５．５ｍｇ、収率２５％）を得た。ＬＣＭＳ＝６．６４分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９９２．６（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000261
 工程９：メチルエステル化合物２ｈを、１，２‐ジクロロエタン中に溶解させた。トリメチルスタンナンオールを反応混合物に加えて、８０℃にて一晩加熱した。反応混合物を室温まで冷却して、水で希釈した。水層を、１ＭのＨＣｌでｐＨ約４まで酸性化した。混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１０：１、３×２０ｍＬ）で抽出した。混合有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮した。粗製物質をシリカプラグを通過させて、化合物２ｉ（４８．８ｍｇ、収率８０％）を得た。ＬＣＭＳ＝５．８９分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９７８．６（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000262
 工程１０：ＥＤＯ ＨＣｌを、室温にて酸化合物２ｉ及びＮ－ヒドロキシスクシンイミドＣＨ２Ｃｌ２の撹拌溶液に加えた。反応混合物を２時間撹拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、水（１×１５ｍＬ）及び食塩水（１×１５ｍＬ）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）を介して精製して、２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－ｌ－（（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｒ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－６－オキソヘキサノエート、化合物Ｄ２（８．２ｍｇ、収率３０％）を得た。ＬＣＭＳ＝６．６４分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０７５．４（Ｍ＋１）＋。
実施例１８ Ｎ－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－ｌＨ－ピロール－１－イル）エチル）－１１－（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［ｌ，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）－１３，１３－ジメチル－２，５，８－トリオキサ－１４，１５－ジチア－１１－アザノナデカン－１９－アミド、化合物Ｄ６の合成
Figure 2023036869000263
 工程１：遊離チオールＤＧＮ４６２（４０ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）及びＮＨＳ４－（２－ピリジルジチオ）ブタネート（３５ｍｇ、純度８０％、０．０８５ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（０．５ｍＬ）の溶液に、無水ジイソプロピルエチルアミン（０．０１５ｍＬ、０．０８５ｍｍｏｌ）を加えて、室温にて１６時間で撹拌した。反応混合物を飽和塩化アンモニウムでクエンチし、ジクロロメタンで希釈した。得られた混合物を分液漏斗で分離した。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。残留物を、半分取逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）で精製した。純生成物を含有する分画を混合して、凍結させて、凍結乾燥し、所望のＮＨＳエステル、化合物６ａ（２９．７ｍｇ、収率６０％）を得た。ＬＣＭＳ＝９．１分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１５７．３（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000264
 工程２：ＮＨＳエステル、化合物６ａ（１２．３ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）及びＮ－（２－アミノエチル）マレイミド塩酸塩（２．０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（０．３ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（０．００２２ｍＬ、０．０１３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、それから減圧下で溶媒を除去した。残留物を、半分取逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）で精製した。純生成物を含有する分画を混合して、凍結させて、凍結乾燥し、所望のマレイミド、化合物Ｄ６（１０ｍｇ、収率８０％）を得た。ＬＣＭＳ＝８．３分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１８１．８（Ｍ＋１）＋。
実施例１９ Ｎ１－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）－Ｎ６－（（Ｓ）－１－（（（Ｓ）－１－（（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アミノ）－１－オキソプロパン－２－イル）アジポアミド、化合物Ｄ５の合成
Figure 2023036869000265
 ＮＨＳエステル、化合物５ａ（８．２ｍｇ、７．６μｍｏｌ）及び１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（２．２ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ）を、室温にて無水ジクロロメタン（３０５μＬ）中に溶解させた。ＤＩＰＥＡ（２．６６μＬ、０．０１５ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を３．５時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、ＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、勾配３５％～５５％）によって精製した。所望の生成物分画を凍結して、凍結乾燥し、マレイミド、化合物Ｄ５を白色固体粉末（５．３ｍｇ、収率５８％）として得た。ＬＣＭＳ＝５．１１分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１００．６（Ｍ＋１）＋。
実施例２０ １－（（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）アミノ）－４－（（５－（（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ｄジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－２－メチル－５－オキソプロパン－２－イル）ジスルファニル）－１－オキソブタン－２－スルホン酸、化合物Ｄ４の合成
Figure 2023036869000266
 遊離チオールＤ１（８８ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）及び１－（（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）オキシ）－１－オキソ－４－（ピリジン－２－イルジスルファニル）ブタン－２スルホン酸（スルホＳＰＤＢ）（６４．０ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（２．１０ｍＬ）の懸濁液に、は、窒素雰囲気下で室温にてＤＩＰＥＡ（５５．０μＬ、０．３１５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１６時間撹拌し、それから１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（５５．６ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）、無水ジクロロメタン（１．０ｍＬ）及びＤＩＰＥＡ（０．０５５ｍＬ、０．３１５ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温にて更に５時間撹拌し、その後反応物を減圧下で濃縮した。得られた残留物をＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）で精製した。所望の生成物を含有する分画を、凍結して、凍結乾燥させ、マレイミドＤ４（２０ｍｇ、収率１６％）を白色個体として得た。ＬＣＭＳ＝４．９２分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１５８．６（Ｍ＋１）＋。
実施例２１ Ｎ－（２－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）エチル）－１１－（３－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１１，１２，１２ａ，１３－テトラヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）－５－（（（（Ｓ）－８－メトキシ－６－オキソ－１２ａ，１３－ジヒドロ－６Ｈ－ベンゾ［５，６］［１，４］ジアゼピノ［１，２－ａ］インドール－９－イル）オキシ）メチル）フェニル）－２，５，８－トリオキサ－１１－アザペンタデカン－１５－アミド、化合物Ｄ７の合成
Figure 2023036869000267
 ＮＨＳエステル７ａ（５ｍｇ、４．８２μｍｏｌ）及び１－（２－アミノエチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン塩酸塩（１．７ｍｇ、９．６４μｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（２００μＬ）の溶液に、窒素雰囲気下でＤＩＰＥＡ（１．５１２μＬ，８．６８μｍｏｌ）を添加した。混合物を室温にて４時間撹拌し、それから減圧下で濃縮した。得られた残留物をＲＰ－ＨＰＬＣ（Ｃ１８、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ）で精製した。所望の生成物を含有する分画を、凍結して、凍結乾燥させ、マレイミドＤ７（３．５ｍｇ、収率６８％）を得た。ＬＣＭＳ＝４．６１分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０６２．８（Ｍ＋１）＋。
実施例２２ 化合物Ｄ８の合成
Figure 2023036869000268
 工程１：Ｔｅｒｔ－ブチルヒドロキシカルバミン酸塩（１．４９０ｇ、１１．１９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２２．３８ｍＬ）中に溶解させた。２－（３－ブロモプロピル）イソインドリン－１，３－ジオン（３ｇ、１１．１９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（３．０９ｇ、２２．３８ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温して一晩撹拌した。それを冷水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機物を食塩水で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥し、粗残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ、勾配０％～４５％）で精製して、化合物８ａを粘着性の固体（２．４１ｇ、収率６７％）として得た。ＬＣＭＳ＝４．９９分（８分法）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８６－７．８３（ｍ，２Ｈ），７．７３－７．７７（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｂｓ，１Ｈ），３．９２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．８２（ｔ，２Ｈ，６．９Ｈｚ），２．０５－１．９８（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）。
Figure 2023036869000269
 工程２：化合物８ａ（２．４１ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（１８．８１ｍＬ）中に溶解させ、氷浴にて０℃まで冷却した。ＤＣＭ（９．４０ｍｌ）及びＴＦＡ（９．４０ｍｌ）の新たに調製した混合溶液を加えて、氷浴を取り除いた。反応物を室温にて１時間撹拌し、ＤＣＭで希釈して、飽和重炭酸ナトリウムで洗浄した。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥して、濾過し、濃縮して、化合物８ｂ（１．３２ｇ、収率８０％）を得た。粗製物質を、更に精製することなく使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８５－７．８２（ｍ，２Ｈ），７．７２－７．６９（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．７２（ｔ，２Ｈ，６．０Ｈｚ），１．９９－１．９３（ｍ，２Ｈ）。
Figure 2023036869000270
 工程３：化合物８ｂ（１００ｍｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（４．５ｍＬ）中溶解させて、ＴＥＡ（１２７μＬ、０．９０８ｍｍｏｌ）及び２，５－ジオキソピロリジン－１－イル（２－（トリメチルシリル）エチル）炭酸塩（１７７ｍｇ、０．６８１ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を室温にて一晩撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈して、食塩水で洗浄し、乾燥し、濾過して、蒸発させた。粗残留物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ、勾配０％～４０％）で精製して、化合物８ｃ（１４８ｇ、収率８９％）を得た。ＬＣＭＳ＝５．９１分（８分法）。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ７．８６－７．８３（ｍ，２Ｈ），７．７３－７．６９（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｂｓ，１Ｈ），４．２６－４．２０（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．８３（ｔ，２Ｈ，６．９Ｈｚ），２．０６－１．９８（ｍ，２Ｈ），１．０５－０．９８（ｍ，２Ｈ），０．０４（ｓ，９Ｈ）。
Figure 2023036869000271
 工程４：化合物８ｃ（１４８ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）をエタノール（２．７ｍＬ）中に溶解させて、完全に可溶するまで撹拌した。ヒドラジン（６３．７μｌ、２．０３０ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を、白色沈殿物が急速に形成するまで、室温にて１時間撹拌した。反応をセライトに通して濾過し、追加のエタノールですすいだ。濾液を蒸発させて、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ａ＝ＭｅＯＨ、Ｂ＝ＥｔＯＡｃ勾配、１００％～１０％）で精製した。生成物分画を質量で検出し、蒸発させて、化合物８ｄを粘着性の固体（６７．５ｍｇ、収率７１％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ４．２７－４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），２．９２－２．８７（ｍ，２Ｈ），１．８５－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．０６－０．９９（ｍ，２Ｈ），０．０４（ｓ，９Ｈ）。
Figure 2023036869000272
 工程５：上述の実施例１７の化合物２ｉ（３０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（６１３μｌ）に懸濁させた。溶液が透明になるまで、無水ＤＭＦを滴下添加した。化合物８ｄ（２１．５７ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ×ＨＣ１（２９．４ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（０．７４９ｍｇ、６．１３μｍｏｌ）を加えて、反応物を室温にて１時間撹拌した。それをＤＣＭ／ＭｅＯＨ １０：１で希釈して、それから水で洗浄した。水層をＤＣＭ／ＭｅＯＨ１０：１で抽出し、混合有機物を乾燥し、濃
縮して、化合物８ｅ（４９ｍｇ）を得て、それを更に精製することなく使用した。ＬＣＭＳ＝５．９４分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１９４．４（Ｍ＋１）＋。
Figure 2023036869000273
 工程６：化合物８ｅ（４９ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８２０μｌ）中に溶解させて、反応物を氷浴にて０℃で冷却した。ＴＢＡＦ（２０５μｌ、０．２０５ｍｍｏｌ）を加えて、反応物を１５分間撹拌してから、氷浴を取り除いた。それを、完了するまで室温にて撹拌した。反応物を０℃まで冷却して、飽和塩化アンモニウムでクエンチし、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ１０：１で抽出した。有機物を食塩水で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥して、蒸発させた。粗製物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）を介して精製して、化合物Ｄ８（１７．６ｍｇ、２工程で収率５４％）を得た。ＬＣＭＳ＝５．１分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０５０．４（Ｍ＋１）＋。
実施例２３ 化合物Ｄ９の合成
Figure 2023036869000274
 工程１：合成９ａ（１７ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（３２８μｌ）中に溶解させた。化合物８ｄ（５．７６ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５．７１μｌ、０．０３３ｍｍｏｌ）を室温にて加えて、反応物を完了まで撹拌した。それを１０：１のＤＣＭ：ＭｅＯＨで希釈して、食塩水で洗浄した。有機物を乾燥し、濃縮して、化合物９ｂを得て、これを直接使用した。
工程２：化合物Ｄ９は、実施例２３の化合物Ｄ８と同様に調製した。粗製物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）を介して精製し、化合物Ｄ９（５ｍｇ、２工程で収率３１％）を得た。ＬＣＭＳ＝５．６８分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０１２．５（Ｍ＋１）＋。
実施例２４ Ｋａｓｕｍｉ－３－Ｌｕｃ－ｍＣｈ－Ｐｕｒｏ播種性モデルにおけるｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
播種性腫瘍量をｉｎ ｖｉｖｏ減少させる能力についてｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の有効性を試験するために、ルシフェラーゼ発現播種性腫瘍モデルは、下のプロトコルに記載のとおり、生きている動物の画像診断と組み合わせて使用した。
雌のＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）はそれぞれ、尾部静脈に、５×ｌ０６のＫａｓｕｍｉ－３－Ｌｕｃ－ｍＣｈ－Ｐｕｒｏ細胞、ルシフェラーゼ及びｍＣｈｅｒｒｙを発現するために操作されたヒトＡＭＬ細胞株（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を静脈内（ＩＶ）注射された。Ｋａｓｕｍｉ－３細胞によるルシフェラーゼ発現により、生きた動物の画像を使用して腫瘍量が定量化され、それは、注入したルシフェラーゼ基質、Ｄ－ルシフェリンにｉｎ ｖｉｖｏ曝露する際ルシフェラーゼによって生成される生物発光シグナルを検出する。接種後６日目に、マウスを撮像
して、生物発光の画像（ＢＬＩ）に基づいて試験群にランダム化した。複合体の各投与２４時間前に、マウスは、複合体の非特異的取り込みを阻害する、Ｋａｓｕｍｉ－３ＡＭＬ細胞のＦｃ受容体を遮断するために、４００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体を腹腔内に（ＩＰ）注入された。Ｋａｓｕｍｉ－３の接種後７日目及び４１日目に、マウスは、側尾部静脈にいずれかのビヒクル、１０μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．８０ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．２４０ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、または非標的ＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体１０μｇ／ｋｇの単回ＩＶ注入を受けた。複合体投与後５日目及び１０日目に、マウスは、ＡＭＬ腫瘍細胞上のＦｃ受容体の継続した遮断を確実にするために、１００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体のＩＰ注入を受けた。
マウスは、Ｋａｓｕｍｉ－３の接種後１１、１３、１７、２０、２４、２７、３１、３８、４１、４５、５２、５９、６６、７３及び８０日目に撮像した。ｉｎ ｖｉｖｏ生物発光画像診断は、ＩＶＩＳ５０光学撮像（Ｘｅｎｏｇｅｎ、Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）を用いて、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｉｎｇ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）で実施した。動物を、約１～２％のイソフルランガス麻酔下で１度に３回撮像した。各マウスは１５０ｍｇ／ｋｇのＤ－ルシフェリン（ルシフェラーゼ基質）をＩＰ注入されて、注入の１０分後にうつ伏せで、次に仰向きで撮像された。ＣＣＤチップの大～小ビニングを使用して、露出時間を調整し（２秒～２分）、画像の各マウスで観察可能な腫瘍から少なくとも数百の数を得て、ＣＣＤチップの飽和を回避した。画像を、Ｍａｔｌａｂ Ｒ２０１５ａを用いて解析した。カスタムスクリプトは、個々の動物についてうつ伏せの及び仰向きの画像に全身固定量ＲＯＩを配置して、動物識別に基づいて標識した。全光束（光子／秒）を計算して、群間の解析を容易にするためにすべてのＲＯＩをエクスポートした。うつ伏せの及び仰向きのＲＯＩは、全身腫瘍量を推定するために一緒に合計した。
Ｔ／Ｃ％＝［（Ｔ、処理群のＢＬＩ中央値）／（Ｃ、対照群のＢＬＩ中央値）］×１００％として計算した。ＮＣＩ標準に従って、Ｔ／Ｃ＜４２％は抗腫瘍活性の下限値であり、一方でＴ／Ｃ値＞４２％は不活性であり、Ｔ／Ｃ値＜１０％は高活性とみなされる。
腫瘍量の遅延％（ＴＢＤ％）を以下のとおりに計算した：ＴＢＤ％＝（Ｔ－Ｃ／Ｃ×１００％（式中、Ｔ－Ｃで、Ｔは、所定のＢＬＩシグナルを得るための処理群における時間（日単位）であり、Ｃは対照群における時間（日単位）である）。ＩＬＳ％に同じ測定基準に適応させて、ＴＢＤ％＞２５を最小限に活性、ＴＢＤ％＞４０を活性、ＴＢＤ％＞５０を高活性とみなす。
マウスは週２度計量して、試験の存続期間を通して臨床的徴候を監視した。屠殺基準に達したマウスは、屠殺した。自然死は発見された際に記録した。試験は、腫瘍細胞接種後１１５日目に終了した。
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５のいずれかの投与による処理は、腫瘍量の初期退縮を経時的に引き起こして、退縮は２７日目に最下点に達した。一方でビヒクル及びＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５で処理した群は腫瘍量がこの期間中に徐々に増加したことを、予備実験は示す。例えば図２２を参照のこと。これらの予備試験で計算した腫瘍増殖抑制（Ｔ／Ｃ値）は、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１０μｇ／ｋｇ及び３μｇ／ｋｇは、それぞれＴ／Ｃ％値０．２０及び０．２５で、２７日目に高活性であることを示した。腫瘍量の遅延％（ＴＢＤ％）は、所定のＢＬＩとしてビヒクル処理群の４５日目のＢＬＩシグナルを使用して、計算した。この測定基準に従って、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の両方の投与では高活性であり、ＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体１０μｇ／ｋｇで見られた０％のＴＢＤとは対照的に、ＴＢＤ％＞７５％（１０μｇ／ｋｇのｈ
ｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５）及びＴＢＤ％＞６５％（３μｇ／ｋｇのｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５）の結果が得られた。更に３μｇ／ｋｇ及び１０μｇ／ｋｇの投与量のｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５による処理は、対照と比較して、Ｐ５３突然変異及び多剤耐性ＡＭＬであるマウスの６／６の生存率を上昇させた（図２３を参照）。
試験終了時の４つの試験群それぞれの生存率を図３１に示し、下表にまとめた。ビヒクルで処理したマウスは、７０日の生存期間中央値を有した。それに対し、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１０μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３による０．８０ｍｇ／ｋｇによって）で処理したマウスは、１１５日の生存期間中央値を有し、６４％のＩＬＳ（高活性）をもたらした。同様に、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３による０．２４０ｍｇ／ｋｇによって）で処理したマウスは、１０５日の生存期間中央値を有し、５０％のＩＬＳ（高活性）をもたらした。ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５非標的対照複合体の１０μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）で処理したマウスは、６５．５日の生存期間中央値を有し、それは０％のＩＬＳ（不活性）をもたらして、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５によって得られた高活性はＣＤ１２３依存性であることを示した。
Figure 2023036869000275
 Ｎ＝６の場合、生存期間の中央値（日）は、３番目及び４番目のマウスが失われる日の平均値である。生存期間の中央値を用いて、ＩＬＳ％（増加した生存期間）を次のように計算する：ＩＬＳ％＝（Ｔ－Ｃ）／Ｃ×１００％（式中、Ｔは処理群の生存期間の中央値（日単位）であり、Ｃは対照群の生存期間の中央値（日単位）である）。播種性モデルにおけるＮＣＩ基準は次のとおりである：ＩＬＳ≧２５％は最小限の活性、ＩＬＳ＞４０％は活性、ＩＬＳ≧５０％は高活性である。
実施例２５ ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体は、Ｓ期の細胞周期停止、及びＭＶ４－１１細胞のアポトーシス介在性細胞死をもたらすＤＮＡの損傷を誘発する
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５介在性細胞死の機序を評価するために、ＣＤ１２３を発現するＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞を１０ｎＭのｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５で１時間処理し、続いて３７℃にて４８時間、複合体のない培養液で更にインキュベートした。未処理ＭＶ４－１１細胞を対照として使用した。細胞を採取し、種々の試薬で染色して、細胞周期の異なる段階の細胞数（ヨウ化プロピジウム）、ＤＮＡの損傷を有する細胞（ｐＨ２ＡＸ）、アポトーシス（アネキシン－Ｖ及び切断カスパーゼ－３）及び穿孔原形質膜（ＴＯ－ＰＲＯ－３）を定量化した。図２４に示したように、ＭＶ４－１１細胞とｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５とのインキュベートが、ＤＮＡの損傷、細胞周期のＳ期の停止、アポトーシス介在性細胞死を引き起こす。
実施例２６ Ｍｏｌｍ－１３播種性モデルのｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
すべての播種性モデルためのデータ収集及び分析：マウスは週２度計量して、試験の存続期間を通して臨床的徴候を監視した。測定終点は、生存であった。後脚麻痺が存在する、体重が処理前の重量の２０％超減少した、目に見える腫瘍が現れた、または何らかの苦痛の徴候が見られたとき、動物を屠殺した。自然死は、発見されたときに記録した。播種性モデルにおいて、腫瘍増殖の遅延はＴ－Ｃとして算出され、この場合、Ｔは処理群の生存期間の中央値（日単位）であり、Ｃはビヒクル対照群の生存期間の中央値（日単位）である。播種性モデルにおいて、増加した生存期間％（ＩＬＳ％）は、以下の式：ＩＬＳ％＝（Ｔ－Ｃ）／Ｃ×１００％を使用した計算した。抗腫瘍活性は、播種性モデルにおけるＮＣＩ基準に従って評価され、ＩＬＳ≧２５％は最小活性、ＩＬＳ＞４０％は活性、及びＩＬＳ≧５０％は高活性である。
播種性腫瘍量をｉｎ ｖｉｖｏ減少させる能力についてｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の有効性を試験するために、播種性腫瘍モデルは、下のプロトコルに記載のとおり使用した。
雌の胸腺欠損ヌードマウスは、１００μｌの無血清培地中の１０×１０６のＭｏｌｍ－１３細胞、ヒトＡＭＬ細胞株を、側尾部静脈にそれぞれ静脈内注入した。接種後７日目に、マウスを試験群にランダム化した。複合体投与の２４時間前に、マウスは、複合体の非特異的取り込みを阻害する、Ｍｏｌｍ－１３ＡＭＬ細胞のＦｃ受容体を遮断するために、４００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体を腹腔内に注入された。Ｍｏｌｍ－１３接種後７日目に、マウスは、側尾部静脈にビヒクル０．１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．００８ｍｇ／ｋｇ）のｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、０．３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体、０．１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．００５９ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２、０．３μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０１８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２、１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０５９ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２、または１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｃｈＫＴＩによって０．０５９ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－リジン結合－Ｄ２対照複合体の単回静脈注入を受けた。複合体投与後４日目及び９日目に、マウスは、ＡＭＬ腫瘍細胞上のＦｃ受容体の継続した遮断を確実にするために、１００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体の腹腔内注入を受けた。結果を下記の表及び図２５にまとめる。
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５複合体は、試験した３つの投与量すべてで高活性であり、それぞれＩＬＳ％＞２６２．５日をもたらした。それに対し、非標的ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体の１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量では不活性であり、０％のＩＬＳをもたらした。これは、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５のＣＤ１２３依存性活性を実証する。同様に、ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２は、試験した３つの投与量すべてで高活性であり、それぞれＩＬＳ％＞５９をもたらした。しかし、更にｃｈＫＴＩ－リジン結合－Ｄ２の非標的対照複合体の１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって）の投与量では不活性であり、１１％のＩＬＳをもたらし、ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２のＣＤ１２３依存性活性を実証した。各ＣＤ１２３標的複合体の試験した最低投与量、０．１μｇ／ｋｇ投与量で得られたＩＬＳ％を比較するとき、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５とｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２との１つの明白な違いを見ることができる。ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の０．１μｇ／ｋｇで得たＩＬＳ％は２６２．５日であり、一方でｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２の０．１μｇ／ｋｇの投与量で得たのは５９日であり、このモデルにおけるｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の優位性
を示した。
Figure 2023036869000276
実施例２７。ＥＯＬ－１皮下モデルのｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
すべての皮下モデルのデータ収集及び分析。マウスは週２度計量して、試験の存続期間を通して臨床的徴候を監視した。後脚麻痺が存在する、体重が処理前の重量の２０％超減少した、腫瘍の潰瘍化が生じた、または何らかの苦痛の徴候が見られたとき、動物を屠殺した。腫瘍体積は、キャリパーを使用して３次元で毎週１～２回測定した。腫瘍体積は、式Ｖ＝長さ×幅×高さ×１／２を使用して、ｍｍ３で表した（Ｔｏｍａｙｋｏ及びＲｅｙｎｏｌｄｓ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２４：１４８－５４（１９８９））。活性は、Ｂｉｓｓｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：４８４５－５２（１９９１）に記載のとおり、評価した。腫瘍増殖抑制（Ｔ／Ｃ値）は、以下の式：Ｔ／Ｃ（％）＝処理済み腫瘍体積の中央値／対照腫瘍体積の中央値×１００％も使用して評価した。腫瘍体積は、ビヒクル対照の腫瘍体積が所定サイズに達したとき、処理済み（Ｔ）及びビヒクル対照（Ｃ）群について同時に測定した（Ｂｉｓｓｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：４８４５－５２（１９９１））。腫瘍のないマウス（０ｍｍ３）を含む、各処理群の毎日の腫瘍の中央値を測定した。ＮＣＩ標準に従って、Ｔ／Ｃ≦４２％を抗腫瘍活性の最低レベルとする。Ｔ／Ｃ＜１０％は、高い抗腫瘍活性のレベルであるとみなされる。
腫瘍量をｉｎ ｖｉｖｏ減少させる能力についてｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の有効性を試験するために、皮下腫瘍モデルの３つの試験を、下のプロトコルに記載のとおり使用した。
第１の試験において、雌の胸腺欠損ヌードマウスは、１００μｌの無血清培地／マトリゲル中の１０×１０６のＥＯＬ－１細胞、ヒトＡＭＬ細胞株を右脇腹にそれぞれ皮下接種した。ＥＯＬ－１接種後６日目に、マウスを試験群にランダム化した。複合体の投与２４時間前に、マウスは、複合体の非特異的取り込みを阻害する、ＥＯＬ－１ＡＭＬ細胞のＦｃ受容体を遮断するために、４００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体を腹腔内に注入さ
れた。ＥＯＬ－１接種後７日目に、マウスは、側尾部静脈にビヒクル、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０５０ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２、３μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．１５１ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体、３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体、１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｃｈＫＴＩによって０．０５０ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－リジン結合－Ｄ２または３μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｃｈＫＴＩによって０．１５１ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－リジン結合－Ｄ２対照複合体の単回静脈注入を受けた。複合体投与後４日目及び９日目に、マウスは、ＡＭＬ腫瘍細胞上のＦｃ受容体の継続した遮断を確実にするために、１００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体の腹腔内注入を受けた。結果を下記の表及び図２６に示す。
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）及び３μｇ／ｋｇの投与量では、それぞれ活性及び高活性であり、それぞれ１３％（３／６ＣＲ）及び２％のＴ／Ｃ（５／６ＣＲ）をもたらした。それに対しｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５非標的対照複合体の１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）及び３μｇ／ｋｇの投与量は、Ｔ／Ｃ＞７３％で不活性であり、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５活性がＣＤ１２３依存性であったことを実証した。ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２の１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって）及び３μｇ／ｋｇの投与量は、それぞれ活性及び高活性であり、それぞれ３０％（１／６ＣＲ）及び１％（６／６ＣＲ）をもたらした。それに対しｃｈＫＴＩ－リジン結合－Ｄ２非標的対照複合体の１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって）及び３μｇ／ｋｇの投与量では、両方とも不活性であり、それぞれＴ／Ｃ７５％（０／６ＣＲ）及びＴ／Ｃ８１％（０／６ＣＲ）をもたらした。これは、ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２の活性がＣＤ１２３依存性であることを実証する。２つのＣＤ１２３標的化複合体の間の差は、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）とｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２の１μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって）と比較するとき、明らかになり、前者が１３％Ｔ／Ｃ及び３／６ＣＲになり、後者が３０％Ｔ／Ｃ及び１／６ＣＲだけになるという点で、このモデルにおけるｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の明らかな優位性を実証した。
Figure 2023036869000277
第２の試験において、雌の胸腺欠損ヌードマウスは、１００μｌの無血清培地／マトリゲル中の１０×１０６のＥＯＬ－１細胞、ヒトＡＭＬ細胞株を右脇腹にそれぞれ皮下接種した。ＥＯＬ－１接種後６日目に、マウスを試験群にランダム化した。複合体の投与２４時間前に、マウスは、複合体の非特異的取り込みを阻害する、ＥＯＬ－１ＡＭＬ細胞のＦｃ受容体を遮断するために、４００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体を腹腔内に注入された。ＥＯＬ－１接種後７日目に、マウスは、側尾部静脈にビヒクル０．５μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、または１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の単回静脈注入を受けた。複合体投与後４日目及び９日目に、マウスは、ＡＭＬ腫瘍細胞上のＦｃ受容体の継続した遮断を確実にするために、１００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体の腹腔内注入を受けた。結果を下記の表及び図２７に示す。
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の０．５μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量では活性であり、１１％Ｔ／Ｃ及び３／６ＣＲをもたらした。同様に、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１μｇ／ｋｇの投与量では高活性であり、３％Ｔ／Ｃ％及び６／６ＣＲを生成した。
Figure 2023036869000278
第３の試験において、雌の胸腺欠損ヌードマウスは、１００μｌの無血清培地／マトリゲル中の１０×１０６のＥＯＬ－１細胞、ヒトＡＭＬ細胞株を右脇腹にそれぞれ皮下接種
した。ＥＯＬ－１接種後６日目に、マウスを試験群にランダム化した。複合体の投与２４時間前に、マウスは、複合体の非特異的取り込みを阻害する、ＥＯＬ－１ＡＭＬ細胞のＦｃ受容体を遮断するために、４００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体を腹腔内に注入された。ＥＯＬ－１接種後７日目に、マウスは、側尾部静脈にビヒクル３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）ＦＧＮ８４９（有効荷重の遊離薬剤形態）、０．２４ｍｇ／ｋｇ非複合型（裸の）ｈｕＣＤ１２３抗体、または３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体の単回静脈注入を受けた。シタラビンで処理したマウスは、ＥＯＬ－１接種後７、８、９、１０及び１１日目に単回腹腔内注入を受けて、アザシチジンで処理したマウスは、ＥＯＬ－１接種後７、１０、１３、１６及び１９日目に単回腹腔内注入を受けた。複合体投与後４日目及び９日目に、マウスは、ＡＭＬ腫瘍細胞上のＦｃ受容体の継続した遮断を確実にするために、１００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体の腹腔内注入を受けた。結果を下記の表及び図２８に示す。
試験したすべての項目の中で、６９％Ｔ／Ｃ及び０／８ＣＲをもたらした、ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５非標的化対照複合体の３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量とは対照的に、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量のみで高活性であり、高活性な１％Ｔ／Ｃ及び８／８ＣＲをもたらした。非複合型遊離薬剤、ＦＧＮ８４９の３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量でも、９２％Ｔ／Ｃ及び０／８ＣＲで不活性であった。同様に、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の抗体投与量に一致する、非複合型（「裸の」）ｈｕＣＤ１２３抗体の０．２４ｍｇ／ｋｇの投与量では、６０％Ｔ／Ｃ及び０／８ＣＲで不活性であった。シタラビンは、７５ｍｇ／ｋｇの投与量で５日間毎日投与したところ、８４％Ｔ／Ｃ及び０／８ＣＲで不活性であった。アザシチジンは、３．７５ｍｇ／ｋｇの投与量で３日毎に１回の間隔で５回投与したところ、５９Ｔ／Ｃ％及び０／８ＣＲで不活性であった。
Figure 2023036869000279
実施例２８ ＭＶ４－１１播種性モデルにおけるｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５及びｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
腫瘍量をｉｎ ｖｉｖｏ減少させる能力についてｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５及びｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の有効性を試験するために、播種性腫瘍モデルは、下のプロトコルに記載のとおり使用した。
雌のＮＯＤ ＳＣＩＤマウスを、１５０ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドで前処理して、ＭＶ４－１１細胞の移植を改善するために、骨髄を部分的に切除した。シクロホスファ
ミド（Ｂａｘｔｅｒ、ロット番号４Ｅ０１１、期限０５．２０１７）を０．９％のＮａＣｌで再構成し、０日目のＭＶ４－１１細胞接種の前、－３日目及び－２日目にマウスに腹腔内投与した。上述のとおりシクロホスファミド処理の後、マウスは１００μｌの無血清培地中の３×１０６のＭＶ４－１１細胞、ヒトＡＭＬ細胞株を、側尾部静脈にそれぞれ静脈内注入した。後ＭＶ４－１１接種後７日目に、マウスを試験群にランダム化した。複合体の投与２４時間前に、マウスは、複合体の非特異的取り込みを阻害する、ＭＶ４－１１ＡＭＬ細胞のＦｃ受容体を遮断するために、４００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体を腹腔内に注入された。ＭＶ４－１１接種後７日目に、マウスは、側尾部静脈にビヒクル、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、１μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０５４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１、 ３μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．１６３ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体、３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体、１μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｃｈＫＴＩによって０．０７ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体、または３μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｃｈＫＴＩによって０．２１ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体の単回静脈注入を受けた。結果を下記の表及び図２９にまとめる。
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１μｇ／ｋｇ及び３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量の両方では高活性であり、それぞれＩＬＳ％≧７０をもたらした。それに対し、ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５非標的対照複合体の１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量では最小限に活性であり、２８％Ｔ／Ｃをもたらした。ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の３μｇ／ｋｇの投与量では、０％ＩＬＳで不活性であり、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５のＣＤ１２３依存性活性を実証した。ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の１μｇ／ｋｇ及び３μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量の両方では高活性であり、それぞれＩＬＳ％≧１０１をもたらした。しかし非標的ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体の活性を試験したとき、高度の非特異的非ＣＤ１２３標的活性は、３μｇ／ｋｇの投与量（ｓＤ１によって）から明らかであり、それは６５％ＩＬＳ（高活性）をもたらした。ＣＤ１２３標的化ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の３μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量での高活性の一部は、ＣＤ１２３を標的化することに関与しない非特異的薬物取り込みメカニズムに起因すると思われることを、これは示す。それに対し、ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体の１μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量では１５％のＩＬＳで不活性であり、ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の３μｇ／ｋｇの投与量の非特異的活性が用量依存性であり、及びｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の１μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量の高活性が実際にＣＤ１２３依存性であることを実証する。
Figure 2023036869000280
実施例２９。ＭＶ４－１１皮下モデルにおけるｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５及びｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１のｉｎ ｖｉｖｏ有効性
播種性腫瘍量をｉｎ ｖｉｖｏ減少させる能力についてｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５及びｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の有効性を試験するために、皮下の腫瘍モデルは、下のプロトコルに記載のとおり使用した。
雌のＣＢ．１７ ＳＣＩＤマウスは、１００μｌの無血清培地／マトリゲル中の１０×１０６のＭＶ４－１１細胞、ヒトＡＭＬ細胞株を右脇腹にそれぞれ皮下接種した。ＭＶ４－１１接種後１４日目に、マウスを試験群にランダム化した。複合体の投与２４時間前に、マウスは、複合体の非特異的取り込みを阻害する、ＭＶ４－１１ＡＭＬ細胞のＦｃ受容体を遮断するために、４００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体を腹腔内に注入された。ＭＶ４－１１接種後１５日目に、マウスは、側尾部静脈にビヒクル、０．３μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０１６ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１、１μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０５４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１、３μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．１６ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１、０．３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって０．２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５、０．３μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｃｈＫＴＩによって０．０２１ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体、１μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｃｈＫＴＩによって０．０７ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体、３μｇ／ｋｇ（Ｄ１によって、ｃｈＫＴＩによって０．２１ｍｇ／ｋｇ）ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体、０．３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．０２４ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体、１μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．０８ｍｇ／ｋｇ）ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体、または３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＫＴＩによって０．２４ｍｇ／ｋｇ）
ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５対照複合体の単回静脈注入を受けた。ＭＶ４－１１接種後２０日目に、マウスは、ＡＭＬ腫瘍細胞上のＦｃ受容体の継続した遮断を確実にするために、１００ｍｇ／ｋｇの非標的ｃｈＫＴＩ抗体の腹腔内注入を受けた。結果を下記の表及び図３０に示す。
ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の１μｇ／ｋｇ及び３μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量では両方とも高活性であり、それぞれ０％Ｔ／Ｃ及び６／６ＣＲをもたらした。最低のｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１投与量を試験して、４３％Ｔ／Ｃ及び０／６ＣＲで、０．３μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）は不活性だった。しかし非標的ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体の活性を試験したとき、高度の非特異的非ＣＤ１２３標的活性は、３μｇ／ｋｇの投与量（ｓＤ１によって）から明らかであり、それは６％Ｔ／Ｃ（高活性）及び３／６ＣＲをもたらした。ＣＤ１２３標的化ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の３μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量の高活性の一部は、ＣＤ１２３を標的化することに関与しない非特異的薬物取り込みメカニズムに起因する可能性があることを、これは示す。それに対し、ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１対照複合体の１μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）及び０．３μｇ／ｋｇの投与量は不活性であり、それぞれ７３％Ｔ／Ｃ及び８３％Ｔ／Ｃをもたらし、ｃｈＫＴＩ－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の３μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量の非特異的高活性が用量依存性であり、かつｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の１μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって）の投与量の高活性が実際にＣＤ１２３依存性であることを実証する。
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１μｇ／ｋｇ及び３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量の両方では高活性であり、それぞれ０％Ｔ／Ｃ、ならびに５／６及び６／６ＣＲをもたらした。ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の０．３μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって）の投与量、すなわち試験した最低投与量では不活性であり、６９％Ｔ／Ｃ及び０／６ＣＲをもたらした。それに対し、ｈｕＫＴＩ－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５非標的対照複合体のすべての３つの投与量（Ｄ５によって）では不活性であり、Ｔ／Ｃ％≧４３及び０／６ＣＲをもたらし、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５のＣＤ１２３依存性活性を実証した。
Figure 2023036869000281
実施例３０ マウスにおけるｈｕＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｖｏ忍容性
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５及び他のｈｕＣＤ１２３－ＩＧＮ複合体のｉｎ ｖｉｖｏ忍容性を試験するために、マウスモデルは下のプロトコルに記載のとおり使用した。
雌のＣＤ－１マウスは、側尾部静脈内にビヒクル、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１５０μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって１２ｍｇ／ｋｇ）、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１２５μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって１０ｍｇ／ｋｇ）、ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５の１００μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって８ｍｇ／ｋｇ）、ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の１５０μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって１４．３ｍｇ／ｋｇ）、またはｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１の１２５μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって１１．９ｍｇ／ｋｇ）の単回静脈注入を受けた、ｈｕＣＤ１２３抗体はマウスＣＤ１２３と交差反応せず、それはこのｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルを非特異的毒性のみの指標にする。マウスは３３日間毎日観察して、体重を測定した。動物が２０％超の体重喪失を示すか、または瀕死になる場合、動物は屠殺した。体重喪失以外の他の臨床所見は、処理のいずれかの試験期間中に認められなかった。
雌のＣＤ－１マウスは、側尾部静脈内にビヒクル、ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２の７５μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって４．４ｍｇ／ｋｇ）、ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２の１００μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって５．９ｍｇ／ｋｇ）、またはｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２の１２５μｇ／ｋｇ（
Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって７．４ｍｇ／ｋｇ）の単回静脈注入を受けた。ｈｕＣＤ１２３抗体はマウスＣＤ１２３と交差反応せず、それはこのｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルを非特異的毒性のみの指標にする。マウスは２２日間毎日観察して、体重を測定した。動物が２０％超の体重喪失を示す、または瀕死になる場合、動物は屠殺した。
結果を下記の表、ならびに図３２及び図３３にまとめる。
ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５は、１５０μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって１２ｍｇ／ｋｇ）で忍容性がなかった。体重の平均変化量の最低値は、１２日目に生じ、１１％の減少であった。８匹のマウスのうちの１匹は、体重喪失＞２０％のため１２日目に屠殺した。ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５は、１２５μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって１０ｍｇ／ｋｇ）で忍容性は良好ではなかった。体重の平均変化量の最低値は１０日目に生じ、８．６％の減少であった。８匹のマウスのうちの１匹は、体重喪失のため９日目に屠殺した。ｈｕＣＤ１２３－ＣｙｓＭａｂ－Ｄ５は、１００μｇ／ｋｇ（Ｄ５によって、ｈｕＣＤ１２３によって８ｍｇ／ｋｇ）で忍容性があった。体重の平均変化量の最低値は６日目に生じ、７％の減少であった。この処理群のマウスのいずれも、体重喪失によって屠殺しなかった。
ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１は、１５０μｇ／ｋｇ（ｈｕＣＤ１２３によって１４．３ｍｇ／ｋｇ）で忍容性がなかった。体重の平均変化量の最低値は１０日目に生じ、１７．３％の減少であった。８匹のマウスのうちの２匹は、体重喪失のため１０日目に屠殺した。ｈｕＣＤ１２３－ＳｅｒｉＭａｂ－ｓＤ１は、１２５μｇ／ｋｇ（ｓＤ１によって、ｈｕＣＤ１２３によって１１．９ｍｇ／ｋｇ）で忍容性が良好ではなかった。体重の平均変化量の最低値は１０日目に生じ、６．７％の減少であった。８匹のマウスのうちの１匹は、体重喪失のため１２日目に屠殺した。
ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２は、７５μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって４．４ｍｇ／ｋｇ）で忍容性があった。体重の平均変化量の最低値は５日目に生じ、６％の減少であった。この処理群のマウスはいずれも、体重喪失によって屠殺しなかった。ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２は、１００μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって５．９ｍｇ／ｋｇ）で忍容性があった。体重の平均変化量の最低値は７日目に生じ、８％の減少であった。この処理群のマウスはいずれも、体重喪失によって屠殺しなかった。ｈｕＣＤ１２３－リジン結合－Ｄ２は、１２５μｇ／ｋｇ（Ｄ２によって、ｈｕＣＤ１２３によって７．４ｍｇ／ｋｇ）で忍容性がなかった。体重の平均変化量の最低値は９日目（Ｎ＝６のとき）に生じ、１７％の減少であった。最初の８匹のうち以下に示す数のマウスは、体重喪失＞２０％が原因で、示した日に屠殺した。８日目に１匹
、９日目に１匹、１０日目に２匹、１１日目に１匹、及び１３日目に１匹。
Figure 2023036869000282
Figure 2023036869000283
 一態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］
抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３－Ｒα抗原のアミノ酸１０１～３４６内のエピトープを結合し、及び
（ｂ）抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３依存性増殖を阻害する、前記抗体またはその抗原結合断片。
［態様２］
ヒトＣＤ１２３抗原のアミノ酸１０１～２０４内のエピトープに結合する、態様１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３］
ヒトＣＤ１２３抗原のアミノ酸２０５～３４６内のエピトープに結合する、態様１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４］
抗体またはその抗原結合断片であって、
（ａ）ヒトＣＤ１２３のアミノ酸１～１００内のエピトープを結合し、かつ
（ｂ）０．１ｎＭ以下（例えば０．０８ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０３ｎＭ）のＩＣ５０値を有する、抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３依存性増殖を阻害する、前記抗体またはその抗原結合断片。
［態様５］
造血幹細胞ではなく、白血病性幹細胞または白血病性芽細胞の増殖を阻害する、態様１～４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様６］
０．３ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）でヒトＣＤ１２３抗原陽性細胞に結合する、態様１～５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様７］
０．０１ｎＭ～０．３ｎＭのＫｄでヒトＣＤ１２３抗原陽性細胞に結合する、態様６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様８］
０．０１ｎＭ～０．２ｎＭのＫｄでヒトＣＤ１２３抗原陽性細胞に結合する、態様７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様９］
０．０１ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄでヒトＣＤ１２３抗原陽性細胞に結合する、態様８に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１０］
カニクイザルＣＤ１２３に結合する、態様１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１１］
０．０５ｎＭ～０．３ｎＭのＫｄでカニクイザルＣＤ１２３に結合する、態様１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１２］
０．０５ｎＭ～０．２ｎＭのＫｄでカニクイザルＣＤ１２３に結合する、態様１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１３］
０．０５ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄでカニクイザルＣＤ１２３に結合する、態様１～９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１４］
実質的に類似した結合親和性で、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３両方に結合する、態様１～１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１５］
０．０５ｎＭ～０．３ｎＭのＫｄで、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３に結合する、態様１４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１６］
０．０５ｎＭ～０．２ｎＭのＫｄで、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３に結合する、態様１４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１７］
０．０５ｎＭ～０．１ｎＭのＫｄで、ヒト及びカニクイザルＣＤ１２３に結合する、態様１４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１８］
前記Ｋｄがフローサイトメトリー、表面プラズモン共鳴、またはラジオイムノアッセイで測定される、態様６～１７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様１９］
０．５ｎＭ以下の濃度で、抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３－依存性増殖の少なくとも５０％を阻害する、態様１～１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２０］
ａ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１、５、及び１２からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号２、３、６～１０、１３、及び１４からなる群から選択され、所望によりＣＤＲ３は配列番号４、１１、及び１５からなる群から選択される、前記少なくとも１つの重鎖可変領域またはその断片、ならびに、
ｂ）それぞれ３つの連続する相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む、少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片であって、１、２、または３つの保存的アミノ酸置換を除いて、ＣＤＲ１は配列番号１６、１９、２０、及び２３からなる群から選択され、ＣＤＲ２は配列番号１７、２１、及び２４からなる群から選択され、所望によりＣＤＲ３は配列番号１８、２２、及び２５からなる群から選択される、前記少なくとも１つの軽鎖可変領域またはその断片、を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２１］
前記保存的アミノ酸置換が、Ａｒｇによる、ＣＤＲ中の少なくとも１つのＬｙｓの置換を含む、態様２０に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２２］
前記抗体が、マウスＣＤＲ領域を含むＣＤＲ移植ヒト化抗体であり、前記抗体の１つ以上の（例えば１、２、３、４、５、６、７または８つの）重鎖及び／または軽鎖フレームワーク領域バーニヤゾーン残基は、マウス由来である、態様２０または２１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２３］
ａ）配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及び
ｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２４］
ａ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及び
ｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２５］
配列番号３４のＮ末端から２番目の残基であるＸａａが、Ｐｈｅである、態様２４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２６］
配列番号３４のＮ末端から２番目の残基であるＸａａが、Ｖａｌである、態様２４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２７］
ａ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及び
ｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２８］
ａ）配列番号３９または４０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及び
ｂ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様２９］
ａ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、かつ配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ
酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、ならびに
ｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３０］
ａ）配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）Ｎ末端残基がＳｅｒであることを除いて、配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３１］
ａ）配列番号３８に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及び
ｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３２］
ａ）配列番号３４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、及び
ｂ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３３］
ａ）配列番号５６に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及び
ｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３４］
ａ）配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及び
ｂ）配列番号３７に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３５］
配列番号３８、３４、５６及び５４のＮ末端から２番目の残基であるＸａａが、Ｐｈｅである、態様３１～３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３６］
配列番号３８、３４、５６及び５４のＮ末端から２番目の残基であるＸａａが、Ｖａｌである、態様３１～３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３７］
ａ）配列番号５４の最後から５番目の残基に相当する残基がＣｙｓであることを除いて、配列番号５９または６０に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及びｂ）配列番号４１に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３８］
ａ）配列番号５４に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及び
ｂ）配列番号３５に記載のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様３９］
配列番号５４または５６のＮ末端から２番目の残基であるＸａａが、Ｐｈｅである、態様３８、３３、または３４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４０］
配列番号５４または５６のＮ末端から２番目の残基であるＸａａが、Ｖａｌである、態様３８、３３、または３４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４１］
ａ）配列番号１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２または３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに
ｂ）配列番号１６に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１７に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～３及び５～２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４２］
ａ）配列番号５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号６、７、８、９または１０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに、
ｂ）配列番号１９または２０に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２１に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様１～３及び５～２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４３］
ａ）配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号１３または１４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号１５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン重鎖可変領域、ならびに
ｂ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ１、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ２、及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を有するＣＤＲ３を含む、免疫グロブリン軽鎖可変領域を含む、態様４～２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４４］
ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９及び４０（好ましくは２６、２８、３０、３２、３４及び３８）からなる群から選択される参照ＶＨ配列と、少なくとも９５％同一のＶＨ配列、及び／または
ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７及び４１（好ましくは２７、２９、３１、３５及び３７）からなる群から選択される参照ＶＬ配列と、少なくとも９５％同一のＶＬ配列を含む、態様１～４３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４５］
前記ＶＨ配列が、配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９及び４０（好ましくは２６、２８、３０、３２、３４及び３８）のうちの１つと、少なくとも９９％同一であり、かつ／または前記ＶＬ配列が、配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７及び４１（好ましくは２７、２９、３１、３５及び３７）のうちの１つと、少なくとも９９％同一である、態様４４に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４６］
ａ）配列番号２６、２８、３０、３２、３４、３８、３９及び４０（好ましくは２６、２８、３０、３２、３４及び３８）からなる群から選択されるＶＨ配列、及び／または
ｂ）配列番号２７、２９、３１、３３、３５、３７及び４１（好ましくは２７、２９、３１、３５及び３７）からなる群から選択されるＶＬ配列を含む、態様４５に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４７］
配列番号２６のＶＨ配列と配列番号２７のＶＬ配列とを含む、態様４６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４８］
配列番号２８のＶＨ配列と配列番号２９のＶＬ配列とを含む、態様４６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様４９］
配列番号３０のＶＨ配列と配列番号３１のＶＬ配列とを含む、態様４６に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様５０］
配列番号３４のＶＨ配列と配列番号３５のＶＬ配列とを含む、態様４６に記載の抗体ま
たはその抗原結合断片。
［態様５１］
前記抗体が、マウス、非ヒト哺乳動物、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である、態様１～４９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様５２］
前記ヒト化抗体が、ＣＤＲ移植抗体または再表面形成抗体である、態様５１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様５３］
前記抗体が完全長の抗体である、態様１～５２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様５４］
前記抗体の抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、Ｖ－ＮＡＲドメイン、ＩｇＮａｒ、細胞内抗体、ＩｇＧΔＣＨ２、小型抗体、Ｆ（ａｂ’）３、四重特異性抗体、三重特異性抗体、二重特異性抗体、単一ドメイン抗体、ＤＶＤ－Ｉｇ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、（ｓｃＦｖ）２またはｓｃＦｖ－Ｆｃである、態様１～５２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
［態様５５］
態様１～５４のいずれか一項に記載のＶＨ及びＶＬ配列を含む、ポリペプチド。
［態様５６］
シュードモナス毒素ではないタンパク質との融合である、態様５５に記載のポリペプチド。
［態様５７］
態様１～５４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドを生成する、細胞。
［態様５８］
態様１～５４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドを生成する方法であって、
（ａ）態様５７に記載の細胞を培養すること、及び
（ｂ）前記培養細胞から前記抗体、その抗原結合断片、またはポリペプチドを単離すること、を含む、前記方法。
［態様５９］
前記細胞が真核細胞である、態様５８に記載の方法。
［態様６０］
下記の式
Figure 2023036869000284
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＬ１へリジン残基によって共有結合される、態様２３～２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ１は、以下の式：
Figure 2023036869000285
 で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000286
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌ’は、以下の式：
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｃ（＝Ｏ）－ （Ｂ１’）、または
－ＮＲ５－Ｐ－Ｃ（＝Ｏ）－（ＣＲａＲｂ）ｍ－Ｓ－Ｚｓ１－ （Ｂ３’）で表され、Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、それぞれ独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
ｍは、１～６の整数であり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000287
 のいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである、前記免疫複合体。
［態様６１］
Ｒａ及びＲｂが両方ともＨであり、Ｒ５がＨまたはＭｅである、態様６０に記載の免疫複合体。
［態様６２］
Ｐが２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである、態様６０または６１に記載の免疫複合体。
［態様６３］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される、態様６０～６２のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様６４］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである、態様６３に記載の免疫
複合体。
［態様６５］
Ｑが－ＳＯ３Ｍである、態様６０～６４のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様６６］
以下の式：
Figure 2023036869000288
Figure 2023036869000289
Figure 2023036869000290
Figure 2023036869000291
Figure 2023036869000292
 で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000293
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする、態様６０に記載の免疫複合体。
［態様６７］
式：
Figure 2023036869000294
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＬ２へリジン残基によって共有結合される、態様２３～２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペ
プチドであり、
ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ２は、以下の式：
Figure 2023036869000295
 で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000296
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｒｘ１及びＲｘ２は、独立して（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000297
 のいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、－Ｈ＋またはカチオンである、前記免疫複合体。
［態様６８］
Ｒｅは、ＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１及びＲｘ２は、それぞれ－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｆ及びＲｇは、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２または３である、態様６７に記載の免疫複合体。
［態様６９］
Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される、態様６８に記載の免疫複合体。
［態様７０］
以下の式：
Figure 2023036869000298
 もしくは
Figure 2023036869000299
 で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数であり、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000300
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする、態様６７に記載の免疫複合体。
［態様７１］
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000301
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである、態様６０～７０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様７２］
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000302
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである、態様６０～７０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様７３］
Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である、態様７２に記載の免疫複合体。
［態様７４］
式：
Figure 2023036869000303
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＬ３へＬｙｓ残基によって共有結合される、態様２３～２６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
式中、ＷＬは１～２０の整数であり、
ＣｙＬ３は、以下の式：
Figure 2023036869000304
 で表され、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｚｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000305
 のうちのいずれか１つから選択されており、
式中、
ｑは、１～５の整数であり、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである、前記免疫複合体。
［態様７５］
ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨである、態様７４に記載の免疫複合体。
［態様７６］
ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅである、態様７４に記載の免疫複合体。［態様７７］
以下の式：
Figure 2023036869000306
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＷＬは１～１０の整数である、態様７４に記載の免疫複合体。
［態様７８］
Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である、態様７７に記載の免疫複合体。
［態様７９］
下記の式：
Figure 2023036869000307
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基へ共有結合される、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
Ｗｓは、１、２、３または４であり、
ＪＣＢ’は、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドのＮ末端の２－ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ１のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、かつＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000308
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、及びｓ２は、Ｃｙｓ１に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ１は、以下の式：
Figure 2023036869000309
 で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000310
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｚｄ１は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－、または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、独立して－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
ｒ及びｒ’は、独立して１～６の整数であり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌは、－ＮＲ９－（ＣＲａＲｂ）ｒ”または不在であり、
ｒ”は、０～６の整数である、前記免疫複合体。
［態様８０］
Ｒａ及びＲｂが両方ともＨであり、Ｒ５及びＲ９が両方ともＨまたはＭｅである、態様７９に記載の免疫複合体。
［態様８１］
Ｐが２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである、態様７９または８０に記載の免疫複合体。
［態様８２］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａからなる群から選択される、態様７９～８１のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様８３］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである、態様８２に記載の免疫複合体。
［態様８４］
Ｑが－ＳＯ３Ｍである、態様７９～８３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様８５］
以下の式：
Figure 2023036869000311
Figure 2023036869000312
Figure 2023036869000313
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000314
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする、態様８０に記載の免疫複合体。
［態様８６］
下記の式：
Figure 2023036869000315
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基へ共有結合される、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
ＪＣＢ’は、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドのＮ末端の、２－ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ２のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、かつＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000316
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ２に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ２は、以下の式：
Figure 2023036869000317
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000318
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とし、
Ｍは、Ｈ＋またはカチオンであり、
Ｒｘ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌ１は、以下の式：
Figure 2023036869000319
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ２の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚａ２は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－、または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は、各出現において、独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～１０の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とする、前記免疫複合体。
［態様８７］
－Ｌ１－は、以下の式：
Figure 2023036869000320
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｒは、Ｈまたは－ＳＯ３Ｍである、態様８６に記載の免疫複合体。
［態様８８］
ＲｅはＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１は－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｘ２は－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、Ｒｆ及びＲｇはそれぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは０、１、２または３である、態様８６または８７に記載の免疫複合体。
［態様８９］
Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される、態様８８に記載の免疫複合体。
［態様９０］
以下の式：
Figure 2023036869000321
Figure 2023036869000322
Figure 2023036869000323
Figure 2023036869000324
Figure 2023036869000325
Figure 2023036869000326
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000327
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする、態様８６に記載の免疫複合体。
［態様９１］
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000328
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである、態様７０～９０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様９２］
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000329
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである、態様７９～９０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様９３］
Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である、態様９２に記載の免疫複合体。
［態様９４］
下記の式：
Figure 2023036869000330
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基へ共有結合される、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
ＪＣＢ’は、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドのＮ末端の、２－ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ３のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、かつＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000331
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、Ｃｙｓ３に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ３は、以下の式：
Figure 2023036869000332
 で表され、
式中、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｌ１は、以下の式：
Figure 2023036869000333
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ３の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚａ２は、不在であるか、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－、または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｒ９は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は、各出現において、独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ１及びｒ１は、それぞれ独立して０～１０の整数であるが、ただしｑ１及びｒ１が両方とも０ではないことを条件とする、前記免疫複合体。
［態様９５］
ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨである、態様９４に記載の免疫複合体。
［態様９６］
ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅである、態様９４に記載の免疫複合体。［態様９７］
－Ｌ１－は、以下の式：
Figure 2023036869000334
 で表されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＲはＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンである、態様９４～９６のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様９８］
以下の式：
Figure 2023036869000335
Figure 2023036869000336
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中ＤＭは、以下の式：
Figure 2023036869000337
 で表される、態様９４に記載の免疫複合体。
［態様９９］
以下の式：
Figure 2023036869000338
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＪＣＢ’基へ共有結合される、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様６６もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
ＪＣＢ’は、態様２７～３６のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドのＮ末端の、２－ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基と、Ｃｙｓ４のアルデヒド反応基を反応させることにより形成される部分であり、かつＪＣＢ’は、以下の式：
Figure 2023036869000339
 で表され、
式中、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、及びｓ２は、Ｃｙｓ４に共有結合される部位であり、
Ｃｙｓ４は、以下の式：
Figure 2023036869000340
 で表され、
Ｌ１’は、以下の式：
Figure 2023036869000341
 で表され、
式中、
ｓ３は、ＪＣＢ’基に共有結合される部位であり、
ｓ４は、Ｃｙｓ４の－ＮＭｅ－基に共有結合される部位であり、
Ｚｂ１及びＺｂ２は両方とも不在であるか、またはＺｂ１及びＺｂ２のうちの１つは不在であり、他方は－ＣＨ２－Ｏ－もしくは－Ｏ－ＣＨ２－であり、
Ｚｂ１’及びＺｂ２’は、それぞれ独立して不在であるか、－ＣＨ２－Ｏ－、－Ｏ－ＣＨ２－、－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－、または－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－であり、
Ｒ９は、Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｎ１及びｍ１は、それぞれ独立して１～６の整数であり、
Ｅ１及びＥ２のうちの１つは－Ｃ（＝Ｏ）－であり、他方は、－ＮＲ９－であるか、またはＥ１及びＥ２のうちの１つは－Ｃ（＝Ｏ）－もしく－ＮＲ９－であり、他方は不在であり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０の間のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５及びＲｂ６は、各出現において、それぞれ独立してＨまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルである、前記免疫複合体。
［態様１００］
Ｒｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５、及びＲｂ６はすべてＨである、態様９９に記載の免疫複合体。
［態様１０１］
Ｒ９はＨである、態様１００に記載の免疫複合体。
［態様１０２］
Ｚｂ１’及びＺｂ２’は両方とも不在であるか、またはＺｂ１’は－ＣＨ２－Ｏ－であり、Ｚｂ２’は不在であるか、または、Ｚｂ１’は－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－であり、Ｚｂ２’は－Ｏ－ＣＨ２－もしくは不在である、態様９９～１０１のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１０３］
Ｐが２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである、態様９９～１０２のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１０４］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される、態様９９～１０３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１０５］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、及びＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである、態様１０４に記載の免疫複合体。
［態様１０６］
前記免疫複合体が、以下の式：
Figure 2023036869000342
Figure 2023036869000343
Figure 2023036869000344
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＤＭは、以下の構造式：
Figure 2023036869000345
 で表される、態様９９に記載の免疫複合体。
［態様１０７］
以下の式：
Figure 2023036869000346
 で表される免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＣ１へシステイン残基によって共有結合される、態様３７、２９、３０、３８、３３及び３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ１は、以下の式：
Figure 2023036869000347
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000348
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒ５は、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐは、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
Ｒａ及びＲｂは、各出現において、それぞれ－Ｈ、（Ｃ１～Ｃ３）アルキル、または荷電置換基もしくはイオン性基Ｑであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ３は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌｃは、
Figure 2023036869000349
 で表され、ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ１の－Ｃ（＝Ｏ）－基に共有結合される部位であり、
Ｒ１９及びＲ２０は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｍ”は、１～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルである、前記免疫複合体。
［態様１０８］
Ｒａ及びＲｂが両方ともＨであり、Ｒ５がＨまたはＭｅである、態様１０７に記載の免疫複合体。
［態様１０９］
Ｐが２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである、態様１０７または１０８に記載の免疫複合体。
［態様１１０］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される、態様１０７～１０９のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１１１］
Ｐが、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである、態様１１０に記載の免疫複合体。
［態様１１２］
Ｑが－ＳＯ３Ｍである、態様１０７～１１１のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１１３］
Ｒ１９及びＲ２０は両方ともＨであり、ｍ”は１～６の整数である、態様１０７～１１２のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１１４］
－Ｌｃ－が、以下の式：
Figure 2023036869000350
 で表される、態様１１３に記載の免疫複合体。
［態様１１５］
以下の式：
Figure 2023036869000351
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000352
は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする、態様１０７に記載の免疫複合体。
［態様１１６］
以下の式：
Figure 2023036869000353
 で表される免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＣ２へシステイン残基によって共有結合される、態様３７、２９、３０、３８、３３、及び３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ２は、以下の式：
Figure 2023036869000354
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000355
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈまたはアミン保護部分であり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンであることを条件とし、
Ｒｘ１は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｒｅは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｗ’は、－ＮＲｅ’であり、
Ｒｅ’は、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｎ－Ｒｋであり、
ｎは、２～６の整数であり、
Ｒｋは、－Ｈまたは－Ｍｅであり、
Ｒｘ２は、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルであり、
Ｌｃ’は、以下の式：
Figure 2023036869000356
 で表され、
式中、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、及びｓ２は、ＣｙＣ２の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｑは、－Ｈ、荷電置換基、またはイオン性基であり、
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ及びｒは、各出現において、独立して１～１０の整数であり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ’は、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドである、前記免疫複合体。
［態様１１７］
Ｐ’が２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである、態様１１６に記載の免疫複合体。
［態様１１８］
Ｐ’が、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される、態様１１６または１１７に記載の免疫複合体。
［態様１１９］
Ｐ’が、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである、態様１１８に記載の免疫複合体。
［態様１２０］
－Ｌｃ’－は、以下の式：
Figure 2023036869000357
 で表される、態様１１６に記載の免疫複合体。
［態様１２１］
Ｒｅは、ＨまたはＭｅであり、Ｒｘ１は、－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、
Ｒｘ２は、－（ＣＨ２）ｐ－（ＣＲｆＲｇ）－であり、式中、Ｒｆ及びＲｇは、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ４）アルキルであり、ｐは、０、１、２または３である、態様１１６～１２０のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１２２］
Ｒｆ及びＲｇは同一であるかまたは異なっており、－Ｈ及び－Ｍｅから選択される、態様１２１に記載の免疫複合体。
［態様１２３］
以下の式：
Figure 2023036869000358
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000359
 は単結合または二重結合を表すが、ただし、それが二重結合のとき、Ｘは不在であり、Ｙ
は－Ｈであり、それが単結合のとき、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＯＨまたは－ＳＯ３Ｍであることを条件とする、態様１１６に記載の免疫複合体。
［態様１２４］
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000360
 は二重結合を表し、Ｘは不在であり、Ｙは－Ｈである、態様１１６～１２３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１２５］
ＮとＣとの間の二重線
Figure 2023036869000361
 は単結合を表し、Ｘは－Ｈであり、Ｙは－ＳＯ３Ｍである、態様１１６～１２３のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１２６］
Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である、態様１２５に記載の免疫複合体。
［態様１２７］
下記の式：
Figure 2023036869000362
 を有する免疫複合体であって、
式中、
ＣＢＡは、ＣｙＣ３へシステイン残基によって共有結合される、態様３７、２９、３０、３８、３３、及び３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチドであり、
Ｗｃは、１または２であり、
ＣｙＣ３は、以下の式：
Figure 2023036869000363
 で表され、
式中、
ｍ’は１または２であり、
Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｌｃ’は、以下の式：
Figure 2023036869000364
 で表され、
式中、
ｓ１は、ＣＢＡに共有結合される部位であり、ｓ２は、ＣｙＣ３の－Ｓ－基に共有結合される部位であり、
Ｚは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＲ９－または－ＮＲ９－Ｃ（＝Ｏ）－であり、
Ｑは、Ｈ、荷電置換基またはイオン性基であり、
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１及びＲ２２は、各出現において、独立して－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
ｑ及びｒは、各出現において、独立して０～１０の整数であり、
ｍ及びｎは、それぞれ独立して０～１０の整数であり、
Ｒｈは、－Ｈまたは（Ｃ１～Ｃ３）アルキルであり、
Ｐ’は、アミノ酸残基、または２～２０のアミノ酸残基を含有するペプチドである、前記免疫複合体。
［態様１２８］
Ｐ’が２～５つのアミノ酸残基を含有するペプチドである、態様１２７に記載の免疫複合体。
［態様１２９］
Ｐ’が、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｌｙｓ、Ａｌａ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ、Ｌｅｕ－Ｃｉｔ、Ｉｌｅ－Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－Ｎ９－トシル－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｎ９－ニトロ－Ａｒｇ、Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｉｌｅ－Ａｌａ－Ｌｅｕ、Ｖａｌ－Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５５）、β－Ａｌａ－Ｌｅｕ－Ａｌａ－Ｌｅｕ（配列番号５７）、Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｌｅｕ－Ｇｌｙ（配列番号７３）、Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ａｒｇ－Ｖａｌ、Ａｒｇ－Ａｒｇ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ａｒｇ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｃｉｔ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ｌｙｓ、Ｄ－Ｖａｌ－Ｄ－Ａｒｇ、Ｄ－Ａｒｇ－Ｄ－Ａｒｇ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｍｅｔ、及びＭｅｔ－Ａｌａから選択される、態様１２７または１２８に記載の免疫複合体。
［態様１３０］
Ｐ’が、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ、Ａｌａ－Ｖａｌ、Ａｌａ－Ａｌａ、Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａ、Ｄ－Ａｌａ－Ａｌａ、またはＤ－Ａｌａ－Ｄ－Ａｌａである、態様１２９に記載の免疫複合体。
［態様１３１］
－Ｌｃ’－は、以下の式：
Figure 2023036869000365
 で表され、
式中、Ｍは、Ｈ＋またはカチオンである、態様１２７に記載の免疫複合体。
［態様１３２］
ｍ’は１であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＨである、態様１２７～１３１のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１３３］
ｍ’は２であり、Ｒ１及びＲ２は両方ともＭｅである、態様１２７～１３１のいずれか一項に記載の免疫複合体。
［態様１３４］
以下の式：
Figure 2023036869000366
 で表されるか、
またはその薬学的に許容される塩であり、式中ＤＭは、以下の式：
Figure 2023036869000367
 で表される薬物部分である、態様１２７に記載の免疫複合体。
［態様１３５］
態様１～５４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチド、または態様６０～１３４のいずれか一項に記載の免疫複合体を含む、医薬組成物ならびに薬学的に許容される担体。
［態様１３６］
ＣＤ１２３発現細胞の増殖を阻害するための方法であって、態様１～５４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載のポリペプチド、または態様６０～１３４のいずれか一項に記載の免疫複合体、または態様１３５に記載の薬学的に許容される担体と、前記細胞を接触させることを含む、前記方法。
［態様１３７］
前記細胞が腫瘍細胞である、態様１３６に記載の方法。
［態様１３８］
前記細胞が白血病細胞またはリンパ腫細胞である、態様１３７に記載の方法。
［態様１３９］
癌を有する対象を治療する方法であって、前記癌の細胞はＣＤ１２３を発現し、前記方法が、治療に有効な量の態様１～５４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載の本発明のポリペプチド、または態様６０～１３４のいずれか一項に記載の免疫抱合体、または態様１３５に記載の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
［態様１４０］
前記癌が白血病またはリンパ腫である、態様１３９に記載の方法。
［態様１４１］
前記癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される、態様１３９に記載の方法。
［態様１４２］
前記癌が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、態様１４１に記載の方法。
［態様１４３］
前記癌がＢ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）である、態様１４１に記載の方法。
［態様１４４］
対象の細胞増殖性疾患を治療する方法であって、前記細胞増殖性疾患の細胞はＣＤ１２３を発現し、前記方法は、前記細胞増殖性疾患を治療するのに十分な量で、治療に有効な量の態様１～５４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または態様５５もしくは５６に記載の本発明のポリペプチド、または態様６０～１３４のいずれか一項に記載の免疫複合体、または態様１３５に記載の医薬組成物を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
［態様１４５］
前記癌または細胞増殖性疾患が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（Ｃ
ＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、Ｂ細胞性急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞性白血病（ＨＣＬ）、骨髄異形成症候群、芽球性形質細胞様ＤＣ腫瘍（ＢＰＤＣＮ）白血病、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫、及びホジキン白血病（ＨＬ）からなる群から選択される、態様１４４に記載の方法。

Claims (1)

  1. 抗体またはその抗原結合断片であって、
    （ａ）ヒトＣＤ１２３／ＩＬ３－Ｒα抗原のアミノ酸１０１～３４６内のエピトープを結合し、及び
    （ｂ）抗原陽性ＴＦ－１細胞のＩＬ３依存性増殖を阻害する、前記抗体またはその抗原結合断片。
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