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JP2018526369A - バイオ医薬組成物 - Google Patents

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Abstract

本開示は、インターロイキン５（ＩＬ−５）により媒介される疾患を処置するための組成物、および関連の方法に関する。

Description

本開示は、インターロイキン５（ＩＬ−５）により媒介される疾患を処置するための組成物、および関連の方法に関する。
ＩＬ−５は、喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎などのいくつかの異なる疾患において役割を果たす。これらの重篤な疾患は、世界で何億という人を侵している。
メポリズマブは、可溶性ＩＬ−５に結合し、可溶性ＩＬ−５のその受容体への結合を遮断するモノクローナル抗体である。ＩＬ−５の構造は分泌タンパク質を示し、いずれの細胞種にも膜結合型のＩＬ−５の証拠はない。よって、Ｆｃエフェクター機能は、メポリズマブの作用機序の一部ではない。メポリズマブの作用機序および薬物動態特性に基づけば、このモノクローナル抗体の生物活性に関与する２つの機能的ドメインが存在する。これらは、ａ）相補性決定領域（ＣＤＲ）においてＩＬ−５と結合して作用機序を提供し；かつｂ）Ｆｃ領域において新生児型Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）と結合して半減期を決定する。製品の開発を通じて行われた詳細にわたる特性評価研究を通じて、脱アミド化、酸化、および凝集がメポリズマブの重要な品質特性であることが決定付けられた。重要なこととして、適当な生物機能を確保するためにはこれらの変異体の特定のレベルが維持されなければならないことが見出された。
よって、メポリズマブの生物機能を維持するため、また、ＩＬ−５により媒介される疾患を処置するための組成物の必要がある。このような組成物および関連の方法が本開示により提供される。
本開示の一つの態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦８０％の酸性抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦８０％の酸性抗体変異体および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦５５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；≦５５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４、重鎖アミノ酸配列のＭ２５４、重鎖アミノ酸配列のＭ４３０で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であり、前記組成物は６．８〜７．２のｐＨであり、前記緩衝剤は、ヒスチジン、リン酸塩、クエン酸、クエン酸塩またはその塩であり、前記精製調製物は、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ、前記抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される。
本開示の別の態様は、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であり、前記組成物は６．８〜７．２のｐＨであり、前記緩衝剤はリン酸塩またはその塩であり、前記精製調製物は、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ、前記抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体と；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態とを含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびにｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびにｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態；ならびにｄ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびにｃ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の酸化形態；ならびにｃ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびにｃ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）アミノ酸残基１のアミノ末端ピログルタミン酸残基、アミノ酸残基４４８のカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基、２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基、３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）アミノ酸残基３１の脱アミド化アスパラギン残基、４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システインからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基、３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニン、および４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）アミノ酸残基３１の脱アミド化アスパラギン残基、４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システインからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基および３８６番の脱アミド化アスパラギン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）アミノ酸残基３１の脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニン、および４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システインから選択される少なくとも１つを含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびにｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の最大約８０％を占める前記抗体の酸性形態を含んでなる組成物である。
メポリズマブを含んでなる参照標準（ＲＳ）組成物の代表的なキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）電気泳動図。 メポリズマブを含んでなる参照標準組成物（対照）および３日間のｐＨ９．０強制分解を受けたメポリズマブを含んでなる組成物の異なるバッチの代表的なｃＩＥＦ電気泳動図。 メポリズマブを含んでなるＲＳ組成物の代表的な全像サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）クロマトグラム。 メポリズマブを含んでなるＲＳ組成物の代表的な拡大図ＳＥＣクロマトグラム。 メポリズマブを含んでなるＲＳ組成物の代表的なＳＥＣ多角度光散乱（ＭＡＬＳ）クロマトグラム。 メポリズマブを含んでなる組成物のあるバッチの代表的なＳＥＣ−ＭＡＬＳクロマトグラム。 メポリズマブを含んでなるＲＳ組成物およびメポリズマブを含んでなる７日目のｐＨ３．５ストレス組成物の異なるバッチの代表的なＳＥＣクロマトグラム。
発明の具体的説明
本開示は、インターロイキン５（ＩＬ−５）により媒介される疾患を処置するための組成物、および関連の主題を提供する。
用語「喘息」は、本明細書で使用する場合、可逆的気道閉塞および気管支痙攣を特徴とする気道の炎症性疾患を意味する。一般症状には、喘鳴音、咳、胸部圧迫感、および息切れが含まれる。
本開示の方法では、「喘息」は、「重症好酸球性喘息」であり得る。重症好酸球性喘息を有する被験体は、過去１２か月に喘息および血液１μＬ当たり３００個以上の血中好酸球を有し得る。重症好酸球性喘息を有する被験体は、表１に記載の判定基準のうち１以上を満たし得る。
重要なこととして、これらの判定基準に従う重症好酸球性喘息を有する被験体は、処置の開始時に血液１μＬ当たりの好酸球が１５０個未満であり得る。メポリズマブは、配列番号１で示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２で示される軽鎖アミノ酸配列を含んでなるモノクローナル抗体である。メポリズマブ、およびメポリズマブの重鎖ＣＤＲおよび軽鎖ＣＤＲを含んでなる抗原結合タンパク質、特に、抗体分子は、本開示の方法に従って重症好酸球性喘息を処置するために使用可能である。例えば、メポリズマブ、または関連の抗原結合タンパク質は、患者において、過去１２か月に３００細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ未満の血中好酸球により特定されるような重症好酸球性喘息のアドオン維持療法のために指示され得る。あるいは、メポリズマブ、または関連の抗原結合タンパク質は、患者において、過去１２か月に３００細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ以上の血中好酸球により特定されるような重症好酸球性喘息のアドオン維持療法のために指示され得る。メポリズマブ、または関連の抗原結合タンパク質は、過去１２か月に３００細胞／μＬ以上の血中好酸球および／または処置の開始時に１５０細胞／μＬ未満の血中好酸球により特定されるような重症好酸球性喘息のアドオン維持療法のために指示され得る。このような患者は１２歳以上であり得る。メポリズマブ処置は、患者（例えば、増悪の既往歴を有する患者）において喘息の増悪を軽減し得る。本開示の方法は、メポリズマブ処置が指示される際に使用され得る（すなわち、このようなメポリズマブによる処置は、本開示の方法と併用され得る）。メポリズマブによる処置は：
ａ）増悪頻度の低減をもたらす。プラセボに比べ、メポリズマブによる処置、例えば、皮下投与される被験体当たり１００ｍｇまたは静脈投与される被験体当たり７５ｍｇは、１）臨床上有意な増悪、２）入院またはＥＤ受診を要する増悪、および３）入院を要する増悪の割合を低減し得る。この利益は潜在的に罹患および喘息による致命的イベントの低減につながり得る。
ｂ）一日ＯＣＳ用量の低減をもたらす：メポリズマブによる処置、例えば、皮下投与される被験体当たり１００ｍｇまたは静脈投与される被験体当たり７５ｍｇは、被験体が喘息管理の欠如を受けることなく並行コルチコステロイドの一日用量を低減することを可能とし得る。メポリズマブで処置された被験体は、プラセボで処置された被験体での０％に対して、一日経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）用量においてベースラインから５０％の中央値パーセンテージの低減を達成し得る。加えて、プラセボで処置された被験体の３２％に比べ（ｐ＝０．０２５）、メポリズマブで処置された被験体の５４％が、ＯＣＳ用量の５．０ｍｇへの低減を達成し得る。
ｃ）肺機能に改善をもたらす：プラセボに比べ、メポリズマブ処置、例えば、皮下投与される被験体当たり１００ｍｇまたは静脈投与される被験体当たり７５ｍｇで、気管支拡張薬前および後のＦＥＶ１における臨床上関連する変化が証明され得る。いずれの肺機能の改善もこの被験体集団において、ほとんどは高用量ＩＣＳ（吸入コルチコステロイド）および／またはＯＣＳ＋管理投薬を含む最大喘息療法にあるので、特に重要なものである。
ｄ）喘息管理に改善をもたらす対照：皮下投与される被験体当たり１００ｍｇまたは静脈投与される被験体当たり７５ｍｇなどのメポリズマブでは、プラセボに比べ、ＡＣＱ−５に統計的に有意かつ臨床上関連する改善が見られ得、このことは、被験体が既存の喘息処置にメポリズマブを付加することで喘息管理を達成し得ることを示す。
ｅ）生活の質に改善をもたらす：皮下投与される被験体当たり１００ｍｇまたは静脈投与される被験体当たり７５ｍｇなどのメポリズマブでは、プラセボに比べ、ＳＧＲＱスコアに統計的に有意かつ臨床上関連する変化が実証され得る。被験体は喘息管理および日常活動の遂行能に顕著な改善を経験し得る。
ｆ）有効性および薬力学的効果の持続性をもたらす：３２週および／または５２週の処置持続期間に、耐性の発達を伴わずに、喘息増悪および血中好酸球における持続的低減、ならびに肺機能、喘息管理、および生活の質における改善が見られ得る。
ならびにｇ）血中好酸球に低減をもたらす。皮下投与される被験体当たり１００ｍｇまたは静脈投与される被験体当たり７５ｍｇのメポリズマブなど、メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、血中好酸球の急速な低減をもたらし得る（最初の処置後４週での最初の評価によりおよそ８０％；例えば、２５０〜２９０細胞／μＬから４０〜６０細胞／μＬなど）。
本開示の方法では、「喘息」は、「重症喘息」であり得る。重症喘息を有する被験体は、重症喘息に関する欧州呼吸器学会(European Respiratory Society)／米国胸部学会(American Thoracic Society)（ＥＲＳ／ＡＴＳ）ガイドラインに記載されている重症喘息の定義を満たす。よって、重症喘息は、過去１年に喘息に関する国際指針(Global Initiative for Asthma)（ＧＩＮＡ）段階４−５喘息に対してガイドラインにより示唆されている薬剤（高用量吸入コルチコステロイド［ＩＣＳ］＋長期作用型β２−アゴニスト［ＬＡＢＡ］またはロイコトリエン修飾剤／テオフィリン）、または過去１年の≧５０％に被験体の喘息の管理を維持するために全身コルチコステロイド（ＣＳ）による処置を要する喘息である。メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従って重症喘息を処置するために使用され得る。
本開示の方法では、「喘息」は、「コントロール不良好酸球性喘息」であり得る。コントロール不良好酸球性喘息を有する被験体は、表２に記載される判定基準を満たす。
メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってコントロール不良好酸球性喘息を処置するために使用され得る。
本開示の方法では、「喘息」は、「好酸球性喘息」であり得る。コントロール不良好酸球性喘息を有する被験体は、表３に記載されている判定基準を満たす。
本開示の方法では、「喘息」は、「亜好酸球性喘息」であり得る。コントロール不良好酸球性喘息を有する被験体は、表４に記載されている判定基準を満たす。
メポリズマブを含んでなる組成物による処置は亜好酸球性喘息を処置するために使用可能であり、また、本開示の方法に従って亜好酸球性喘息を処置するためにも使用可能である。
用語「水疱性類天疱瘡(bullous pemphigoid)」（ＢＰ）は、本明細書で使用する場合、皮膚層の表皮と真皮の間の空間におけるより適切には水疱として知られる疱疹の形成を含む、急性または慢性自己免疫性皮膚疾患を意味する。ＢＰは、最も多い自己免疫性疱疹性皮膚疾患である。ＢＰは、特徴的には１００万人に５〜３５人の年間罹患率で高齢者（＞７０歳）を侵す。ＢＰの罹患率は年に平均１７％で劇的に増えている。ＢＰは多くの場合、小胞および疱疹が生じる前に、湿疹または蕁麻疹に似た極めて起痒性の皮膚病変で始まる。患者の１０〜３０％では、ＢＰは口腔粘膜も巻き込む。疾病の重篤度は、関連領域ならびに疾患の活動を評価する自己免疫性水疱性皮膚障害強度スコア(autoimmune bullous skin disorder intensity score)（ＡＢＳＩＳ）の手段により決定することができる。この疾患は接合部接着複合体の構造成分に対する自己免疫応答によるものであり、表皮下の疱疹形成を伴う真皮−表皮接合の損傷をもたらす。具体的には、半接着斑抗原ＢＰ１８０およびＢＰ２３０に対する自己反応性Ｂ細胞およびＴ細胞応答が確認されている。ＢＰ１８０に対する自己抗体の血清レベルは、この疾患の重篤度および活動を反映する。Ｔ細胞は、Ｔｈ１およびＴｈ２の両サイトカイン、主としてＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３を産生する記憶ＣＤ４＋細胞である。ＩＬ−５ならびにエオタキシンは、疱疹流体中に豊富に見られる。ＩＬ−５の生産は、実際に血中好酸球増加症およびＢＰ患者の皮膚における顕著な好酸球浸潤に関連する。好酸球は毒性の顆粒タンパク質（ＥＳＰ、ＭＢＰ）およびタンパク質分解酵素を放出することにより疱疹形成に臨床上関連すると思われる。
用語「好酸球性食道炎(eosinophilic esophagitis)」（ＥｏＥ）は、本明細書で使用する場合、好酸球を含む食道のアレルギー性炎症病態を意味する。症状は、嚥下困難、食塊閉塞、および胸やけである。ＥｏＥは、食道の上皮内腔中の好酸球種の白血球を含む濃厚な浸潤物を特徴とする。ＥｏＥは、アレルギー反応において好酸球が果たす重要な役割に基づけば、摂取した食物に対するアレルギー反応であると考えられる。ＥｏＥを診断するためにはＥｏＥ診断パネルを使用することができる。ＥｏＥはまた、胃食道逆流が１日２回高用量プロトンポンプ阻害剤(proton-pump inhibitor)（ＰＰＩ）の６週治験に奏効しない場合、または陰極携行式ｐＨ試験(negative ambulatory pH study)が胃食道逆流疾患(gastroesophageal reflux disease)（ＧＥＲＤ）を除外しない場合に診断され得る。内視鏡的には、食道壁に隆起、溝、または輪が見られ得る。場合により食道に複数の輪が見られることがあり、「波形食道(corrugated esophagus)」またはそれらの輪のネコの食道との類似性のために「猫食道(feline esophagus)」という言葉につながる。食道に白色浸出物が存在することも診断の指標となる。内視鏡検査時に採取された生検で、一般に表層上皮に多数の好酸球が見出せる。診断を行うためには、高倍率の一視野当たり最低１５個の好酸球が必要である。好酸球性炎症は食道だけに限定されず、消化管全体に及ぶ。重要には、微小膿瘍および基底層の膨張と同様に、脱顆粒好酸球も存在し得る。放射線学的には、用語「環状食道(ringed esophagus)」は、食道逆流で見られることのある一過性の横ひだ（「猫食道」と呼ばれる）の外観とは対照的に、バリウム嚥下検査時の好酸球性食道炎の外観に対して使用されている。
メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってＣＯＰＤを処置するために使用され得る。
「慢性閉塞性肺疾患(chronic obstructive pulmonary disease)」（ＣＯＰＤ）を有する被験体は、１以上の以下の判定基準を満たし得る：ａ）過去のＣＯＰＤ診断：米国胸部学会／欧州呼吸器学会による定義に従って少なくとも１年間、臨床上記録されたＣＯＰＤの既往歴を有する被験体；ｂ）ＣＯＰＤの重篤度：被験体が以下：ＣＯＰＤの診断を確定するためには、１秒間サルブタモール前および後の努力呼気肺活量／努力肺活量（ＦＥＶ１／ＦＶＣ）測定値の比が＜０．７０；サルブタモール後ＦＥＶ１測定値＞２０パーセントおよび国民健康栄養調査(National Health and Nutrition Examination Survey)（ＮＨＡＮＥＳ）ＩＩＩ参照式を用いて計算した予測正常値の＜＝８０パーセントを呈し得る；ｃ）増悪歴：１２か月内の少なくとも２回の中等度ＣＯＰＤ増悪の十分に記録された既往歴（医療記録の確認など）。中等度は、全身性コルチコステロイド（ＩＭ、静脈内、または経口）の使用および／または抗生物質による処置、または少なくとも１回の重症ＣＯＰＤ増悪と定義される。重度は、入院を必要としたことと定義される。注：少なくとも１回の増悪は、被験体が吸入コルチコステロイド（ＩＣＳ）＋長期作用型β２−アゴニスト（ＬＡＢＡ）＋長期作用型ムスカリン性アンタゴニスト（ＬＡＭＡ）を服用していた場合に起こったはずである。注：抗生物質単独の先使用は、その使用が特にＣＯＰＤの症状増悪の処置のためでなかったならば、中等度増悪として適格でない；およびｄ）並行ＣＯＰＤ療法：十分に記録された、過去１２か月間のＩＣＳ＋２回の追加ＣＯＰＤ投薬（すなわち、三重療法）を含む最適化標準治療（ＳｏＣ）バックグラウンド療法の必要および以下の判定基準を満たす：医療提供者への受診直前に、最低３か月の吸入コルチコステロイド（用量＞＝５００マイクログラム（ｍｃｇ）／日のプロピオン酸フルチカゾン 同等用量追加）；またはＬＡＢＡおよびＬＡＭＡの使用。
メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってＣＯＰＤを処置するために使用され得る。
用語「好酸球性多発血管炎性肉芽腫症(eosinophilic granulomatosis with polyangiitis)」（ＥＧＰＡ）は、本明細書で使用する場合、気道アレルギー性過敏症（アトピー）の既往歴者における小サイズおよび中サイズの血管の炎症（血管炎）を引き起こす自己免疫性病態を意味する。ＥＧＰＡはまた、チャーグ−ストラウス症候群（ＣＳＳ）またはアレルギー肉芽腫症とも呼ばれることがある。ＥＧＰＡは通常、３つのステージで発現する。初期（前駆）ステージは気道炎症を特徴とし、ほとんど総ての患者が喘息および／またはアレルギー性鼻炎を経験する。第２ステージは、異常に多数の好酸球（過好酸球増加症）を特徴とし、これが最も多くは肺および消化管の組織損傷を引き起こす。第３ステージは血管炎からなり、これはやがて細胞死に至り、致命的となり得る。
ＥＧＰＡを有する被験体は、１以上の以下の判定基準を満たし得る：ａ）喘息；ｂ）白血球百分率１０％を超える血中好酸球レベル；ｃ）単神経障害または多発神経障害の存在；ｄ）不確定肺浸潤物；ｅ）副鼻腔異常の存在；およびｅ）管外好酸球の組織学的証拠。分類目的では、患者は、先の６つの判定基準のうち少なくとも４つが陽性であれば、ＥＧＰＡを有するとされるべきである。
メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従ってＥＧＰＡを処置するために使用され得る。本開示の組成物は、ＥＧＰＡ患者に、４週間ごとに１回、３００ｍｇの量で投与され得る。
用語「好酸球増加症候群」（ＨＥＳ）は、本明細書で使用する場合、心臓、神経系、または骨髄いずれかの関与を伴い、認知可能な原因無く、少なくとも６か月、持続的に高い血中好酸球総数（≧１５００好酸球／ｍｍ３）を特徴とする疾患を意味する。
好酸球増加症候群を有する被験体は、１以上の以下の判定基準を満たし得る：ａ）記録された好酸球増加症候群の既往歴；ｂ）６か月間、１５００細胞を超える血中好酸球総数；ｃ）臓器系関与の徴候および症状；およびｄ）総合評価後に寄生虫、アレルギーまたはその他の好酸球増加の原因の証拠がない。
メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従って好酸球増加症候群を処置するために使用され得る。本開示の組成物は、好酸球増加症候群患者に、４週間ごとに１回、３００ｍｇの量で投与され得る。
用語「鼻ポリープ」は、本明細書で使用する場合、鼻腔ポリープの存在を特徴とする疾患を意味する。このようなポリープは鼻腔上部内にあってもよいし、かつ／または中鼻道自然口ルート(ostiomeatal complex)内に起源してもよい。
鼻ポリープを有する被験体は、１以上の以下の判定基準を満たし得る：ａ）記録された鼻ポリープの既往歴；またはｂ）検査（例えば、内視鏡検査）時に明確な鼻腔ポリープ。
メポリズマブを含んでなる組成物による処置は、本開示の方法に従って鼻ポリープを処置するために使用され得る。本開示の組成物は、鼻ポリープ患者に、４週間ごとに１回、７５０ｍｇの量で投与され得る。
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、免疫グロブリン様ドメイン（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ）を有する分子を意味し、この種のモノクローナル、組換え、ポリクローナル、モノクローナル、組換え、ポリクローナル、キメラ、ヒト、およびヒト化分子が含まれる。モノクローナル抗体は、抗体を発現する真核細胞クローンにより生産され得る。モノクローナル抗体はまた、細胞に導入されたこれらをコードする核酸配列を有するために抗体の重鎖および軽鎖を組換え発現することができる真核細胞株によっても生産され得る。チャイニーズハムスター卵巣細胞、ハイブリドーマまたは動物（例えば、ヒト）由来の不死化抗体細胞などの種々の真核細胞株から抗体を生産するための方法は周知である。
抗体は、ラット、マウス、霊長類（例えば、カニクイザル、旧世界ザルまたは大型類人猿）、ヒト、または抗体分子をコードする分子生物学の技術を使用して作出された核酸などの他の供給源に由来し得る。
抗体は、いずれのアイソタイプまたはサブクラスのものであってもよい定常領域を含んでなり得る。定常領域は、ＩｇＧアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４またはその変異体のものであり得る。抗原結合タンパク質定常領域はＩｇＧ１であり得る。
抗原結合タンパク質は、抗体が増強されたエフェクター機能／ＡＤＣＣおよび／または補体活性化を有するように変異型定常ドメインから選択される１以上の修飾を含んでなり得る。
抗体は、標的抗原に対して結合能があり得る。このような標的抗原の例としては、配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトＩＬ−５が含まれる。
配列番号１で示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２で示される軽鎖アミノ酸配列を含んでなるメポリズマブは抗体の一例である。メポリズマブは、ヒトＩＬ−５に結合し、その活性に拮抗する。
メポリズマブは、組換えヒト化モノクローナル抗体（ＩｇＧ１、κ）である。メポリズマブは、２本の軽鎖と２本の重鎖を有する。
メポリズマブ重鎖は、配列番号１３で示される核酸配列によりコードされている。メポリズマブ重鎖は、４４９個のアミノ酸を含み、およそ４９ｋＤａの推定分子量を有する。メポリズマブの予測成熟重鎖アミノ酸配列は下記である。
上記の重鎖アミノ酸配列では、Ｋａｂａｔ定義に従う重鎖フレームワークおよびＣＤＲは、示されている配列のアミノ近位部分からカルボキシ末端部分へと順に、ジグザグ下線のフレームワーク１、実線下線のＣＤＲ１、ジグザグ下線のフレームワーク２、実線下線のＣＤＲ２、ジグザグ下線のフレームワーク３、実線下線のＣＤＲ３およびジグザグのフレームワーク４として識別される。上記の重鎖アミノ酸配列では、１文字アミノ酸コードの文字の右にあるアスタリスクは、左にあるアミノ酸残基がＮ−グリコシル化部位であり得ることを示す。
メポリズマブ軽鎖は、配列番号１４で示される核酸配列によりコードされている。メポリズマブ軽鎖は２２０個のアミノ酸残基を含み、およそ２４ｋＤａの推定分子量を有する。成熟軽鎖アミノ酸配列は下記である。
上記の軽鎖アミノ酸配列では、Ｋａｂａｔ定義に従う軽鎖フレームワークおよびＣＤＲは、示されている配列のアミノ近位部分からカルボキシ末端部分へと順に、ジグザグ下線のフレームワーク１、実線下線のＣＤＲ１、ジグザグ下線のフレームワーク２、実線下線のＣＤＲ２、ジグザグ下線のフレームワーク３、実線下線のＣＤＲ３およびジグザグのフレームワーク４として識別される。
メポリズマブ重鎖と軽鎖は単一のジスルフィド結合により共有結合され、重鎖は２つのジスルフィド結合により互いに連結され、典型的なＩｇＧ分子となる。両重鎖は、アスパラギン２９９において複合二分岐オリゴ糖でグリコシル化され得る。予測ポリペプチド分子量は約１４６ｋＤａであり、予測炭水化物分子量はおよそ３ｋＤａであり、メポリズマブの推定総分子量は１４９．２ｋＤａとなる。コードされているメポリズマブは１３３８個のアミノ酸残基（軽鎖１本当たり２２０個のアミノ酸残基、重鎖１本当たり４４９個のアミノ酸残基）を有する。メポリズマブの主要ｐＩは約８．７〜９．１である。標準的な表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定した際のメポリズマブとヒトＩＬ−５の分子相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）は２．２９×１０−１１Ｍ未満である。
メポリズマブは、薬学的に許容可能な担体（例えば、無菌水）で再構成され得る、抗体および賦形剤を含有する凍結乾燥粉末として提供することができる。この再構成医薬組成物を、次に、皮下または静脈内のいずれかで（例えば、さらに希釈して）投与することができる。メポリズマブはまた、抗体、賦形剤および薬学的に許容可能な担体を含有する液体処方物として提供することもできる。この液体医薬組成物を、次に、皮下または静脈内のいずれかで（例えば、さらに希釈して）投与することができる。
用語「抗体変異体」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１つの重鎖、軽鎖、またはこれらの組合せにおける少なくとも１つのアミノ酸修飾（例えば、異なるアミノ酸側鎖を有することによる）、翻訳後修飾または他の修飾のために親抗体とは異なり、その結果、親抗体に対して構造変化（例えば、異なるアミノ酸側鎖、異なる翻訳後修飾または他の修飾）を生じる抗体を意味する。メポリズマブは、このような親抗体の一例である。構造変化は、直接的には、ＬＣ−ＭＳ、直接配列決定などの当技術分野で周知の様々な方法によって、または間接的には等電点電気泳動などの方法を介して決定することができる。このような方法は当業者に周知である。
用語「ＩＬ−５」は、本明細書で使用する場合、配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトＩＬ−５を意味する。
用語「特異的に結合する」は、抗原結合タンパク質に関して本明細書で使用する場合、抗原結合タンパク質が他の（例えば、無関連の）タンパク質と全く結合せずにまたは有意な結合をせずに標的抗原ならびに標的抗原内の不連続ドメイン、または不連続アミノ酸配列と結合することを意味する。しかしながら、この用語は、抗原結合タンパク質が近縁の分子（例えば、高度の配列同一性を有するものまたは別の属もしくは種に由来するもの）とも交差反応し得るということを排除するものではない。本明細書に記載の抗原結合タンパク質は、それらが近縁分子と結合するよりも少なくとも２、５、１０、５０、１００、または１０００倍高い親和性でヒトＩＬ−５またはヒトＩＬ−５受容体と結合し得る。
抗原結合タンパク質−標的抗原相互作用の結合親和性（ＫＤ）は、１ｍＭ以下、１００ ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、２ｎＭ以下または１ｎＭ以下であり得る。あるいは、ＫＤは、５〜１０ｎＭの間；または１〜２ｎＭの間であり得る。ＫＤは、１ｐＭ〜５００ｐＭの間；または５００ｐＭ〜１ｎＭの間であり得る。抗原結合タンパク質の結合親和性は、会合定数（Ｋａ）および解離定数（Ｋｄ）（ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ）により決定される。結合親和性は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により、例えば、試験抗体をプロテインＡコーティングセンサー表面に捕捉させ、この表面に標的抗原を流すことにより測定され得る。あるいは、結合親和性は、ＦＯＲＴＥＢＩＯにより、例えば、プロテインＡコーティングニードルに試験抗体受容体を捕捉させ、この表面に標的抗原を流すことで測定することができる。
Ｋｄは、１×１０−３Ｍｓ−１以下、１×１０−４Ｍｓ−１以下、または１×１０−５Ｍｓ−１以下であり得る。Ｋｄは、１×１０−５Ｍｓ−１〜１×１０−４Ｍｓ−１の間；または１×１０−４Ｍｓ−１〜１×１０−３Ｍｓ−１の間であり得る。緩慢なＫｄは抗原結合タンパク質−標的抗原複合体の緩慢な解離と標的抗原の中和の向上をもたらし得る。
用語「特異的抗原結合活性」は、本明細書で使用する場合、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定される抗原結合活性を意味する。ＩＬ−５特異的結合活性は、例えば結合モードで実施されるＢＩＡＣＯＲＥ（商標）装置を用いてＳＰＲにより決定され得る。それは結合活性をサンプル中の総タンパク質（例えば、メポリズマブ）含量で割った商である。
用語「ＦｃＲｎ結合活性」は、本明細書で使用する場合、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定される新生児Ｆｃ（ＦｃＲｎ）受容体結合活性を意味する。ＦｃＲｎ結合は、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）装置を用いて決定され得る。それはＦｃＲｎ受容体の結合活性をサンプルの総タンパク質濃度で割った商である。
特異的抗原結合およびＦｃＲｎ結合に関するＳＰＲ法では、メポリズマブの参照標準を使用する。メポリズマブ参照標準は、方法が適切に実施されることを保証することを目的に、アッセイにおいてシステムの適合性およびサンプル比較可能性データ得るために使用することができる。参照標準は検量線の確立を可能とし、サンプルの濃度はこの曲線から外挿される。
例えば、参照標準は、配列番号１および配列番号２を含んでなる組成物である。別の実施態様では、参照標準は、配列番号１および配列番号２、ならびに９８％以上のＨＣ Ｃ末端リシン欠失変異体、および９５％以上のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでなる組成物である。さらなる実施態様では、参照標準は、配列番号１および配列番号２、ならびに９８％以上のＨＣ Ｃ末端リシン欠失変異体、９５％以上のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体、および６％以下の脱アミド化変異体を含んでなる組成物である。別の実施態様では、参照標準は、配列番号１および配列番号２、ならびに９８％以上のＨＣ Ｃ末端リシン欠失変異体、９５％以上のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体、６％以下の脱アミド化変異体、４％以下のメチオニンまたはシステイン酸化変異体、および０．１％のトリプトファン酸化変異体を含んでなる組成物である。さらなる実施態様では、参照標準は、配列番号１および配列番号２、ならびに９８％以上のＨＣ Ｃ末端リシン欠失変異体、９５％以上のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体、６％以下の脱アミド化変異体、４％以下のメチオニンまたはシステイン酸化変異体、０．１％以下のトリプトファン酸化変異体、および０．４％以下の凝集変異体を含んでなる組成物である。別の実施態様では、参照標準は、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなる組成物である。一つの実施態様では、参照標準は、配列番号１および配列番号２、約６２．９％の主要ピーク、約３５．９％の酸性ピーク、約１．２％の塩基性ピーク、約９９．６％の単量体、約０．４％の凝集物、約０％の断片、約０．８％のＨＣ脱アミド化Ｎ３１７、約５．５％のＨＣ脱アミド化Ｎ３８６、約５．２％のＨＣ脱アミド化Ｎ３１、約０．２％のＨＣ脱アミド化Ｎ２９９、約０．９％のＨＣ酸化Ｍ６４、約３．５％のＨＣ酸化Ｍ２５４、約０．５％のＨＣ酸化Ｍ３６０、約０．５％のＨＣ酸化Ｍ４３０、約０．３％のＨＣ酸化Ｍ８２およびＭ８５、約０．２％のＬＣ酸化Ｍ４、約０．０％のＬＣ酸化Ｃ２２０、約０．１％のＨＣ 酸化Ｗ５２、９８％以上のＨＣ Ｃ末端リシン欠失変異体、および９５％以上のＨＣ Ｎ末端ピログルタミン酸変異体を含んでなる組成物である。
一つの実施態様では、組成物は、≧０．７０の特異的ＩＬ−５結合活性；および≧７０％のＦｃＲｎ結合活性を有する。例えば、１．０の特異的ＩＬ−５結合活性、および１００％のＦｃＲｎ結合活性とされる参照標準に比べて、特異的抗原結合は０．７０〜１．３０の範囲であり；かつ／またはＦｃＲｎ結合は７０％〜１３０％の範囲である。
ＩＬ−５中和ＥＤ５０比は、参照抗体標準（例えば、配列番号１および配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるメポリズマブ抗体標準）のＥＤ５０を抗体サンプル（例えば、メポリズマブ変異体サンプルまたは配列番号１および配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるメポリズマブ抗体を含んでなる組成物の製造バッチのサンプル）のＥＤ５０で割った商である。
「単離された」とは、抗原結合タンパク質または核酸などの分子が、それが本来見られ得る環境から取り出されることが意図される。例えば、この分子は、本来、それが通常一緒に存在する物質から精製されていてもよい。例えば、サンプル中のその分子の質量は、総質量の９５％であり得る。
用語「ＶＨ」および「ＶＬ」は、抗原結合タンパク質のそれぞれ重鎖可変領域および軽鎖可変領域を意味して本明細書で使用される。
「ＣＤＲ」は、抗原結合タンパク質の相補性決定領域アミノ酸配列と定義される。これらは、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である。免疫グロブリンの可変部分には、３つのＣＤＲ重鎖と３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。よって、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、３つ総ての重鎖ＣＤＲ、３つ総ての軽鎖ＣＤＲ、総ての重鎖および軽鎖ＣＤＲ、または少なくとも１つのＣＤＲを意味し、少なくとも１つのＣＤＲはＣＤＲＨ３である。フレームワーク領域は、これらのＣＤＲ領域のそれぞれの次にくる。許容可能な重鎖可変領域および軽鎖可変領域フレームワーク１、フレームワーク ２およびフレームワーク３領域は、当業者により容易に認識される。許容可能な重鎖定常領域（ヒンジ領域を含む）および軽鎖定常領域も同様に、当業者により容易に認識される。許容可能な抗体アイソタイプも同様に、当業者により容易に認識される。
本明細書を通して、可変ドメイン配列および全長抗体配列のアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従ってナンバリングされる。同様に、本明細書で使用される用語「ＣＤＲ」、「ＣＤＲＬ１」、「ＣＤＲＬ２」、「ＣＤＲＬ３」、「ＣＤＲＨ１」、「ＣＤＲＨ２」、「ＣＤＲＨ３」は、Ｋａｂａｔナンバリング規則に従う。
可変ドメイン配列および全長抗体配列のアミノ酸残基には別のナンバリング規則も存在することは、当業者には自明であろう。また、ＣＤＲ配列にも別のナンバリング規則、例えば、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリング規則に従って設定されるものがある。抗体の構造およびタンパク質折りたたみは、他の残基もＣＤＲ配列の一部と考えられることを意味する可能性があり、当業者にはそうであると理解されるであろう。
当業者に利用可能なＣＤＲ配列に対する他のナンバリング規則としては、「ＡｂＭ」（バース大学）および「ｃｏｎｔａｃｔ」（ユニバーシティ・カレッジ・ロンドン）法が含まれる。「最小結合単位」を示すために、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭおよびｃｏｎｔａｃｔ法のうち少なくとも２つを用いた最小オーバーラッピング領域を決定することができる。最小結合単位は、ＣＤＲの一部分であり得る。
以下の表５は、各ＣＤＲまたは結合単位に対して各ナンバリング規則を用いた１つの定義を示す。表５では、可変ドメインアミノ酸配列をナンバリングするためにＫａｂａｔナンバリングスキームが使用される。ＣＤＲ定義には、使用する個々の刊行物によって異なるものがあることに留意されたい。
クエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントが実行された後にサブジェクト核酸配列がクエリー核酸配列と１００％のクエリー被覆率を有する場合にＢＬＡＳＴＮアルゴリズムにより計算される、パーセンテージとして表される「同一性」値である。このようなクエリー核酸配列とサブジェクト核酸配列の間のペアワイズＢＬＡＳＴＮアラインメントは、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＮアルゴリズムのデフォルト設定を用いることにより、低複雑性領域のフィルターを解除して実行される。重要なこととして、クエリー配列は本明細書の１以上の請求項で特定される核酸配列により記載することができる。
本開示の組成物および関連の方法において有用であり、含まれ得る核酸配列は、本開示で特定される核酸配列（例えば、抗体重鎖または抗体軽鎖をコードする核酸）と約８５％〜約１００％、約９０％〜約１００％、約９５％〜約１００％の間、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％および約１００％の同一性を有し得る。本開示では、記載の核酸配列間の同一性パーセントは、上記に列挙された同一性パーセント範囲の不連続の任意の部分範囲（例えば、特定の範囲内の整数値または特定の範囲内の不連続の下位値の任意の範囲）も含み得る。
クエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントが実行された後にサブジェクトアミノ酸配列がクエリーアミノ酸配列と１００％のクエリー被覆率を有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムにより計算される、パーセンテージとして表される「同一性」値である。このようなクエリーアミノ酸配列とサブジェクトアミノ酸配列の間のペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントは、National Center for Biotechnology Instituteのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を用いることにより、低複雑性領域のフィルターを解除して実行される。重要なこととして、クエリー配列は本明細書の１以上の請求項で特定されるアミノ酸配列により記載することができる。
本開示の組成物および関連の方法において有用であり、含まれ得るアミノ酸配列は、本開示で特定されるアミノ酸配列（例えば、抗体重鎖または抗体軽鎖）と約８５％〜約１００％、約９０％〜約１００％、約９５％〜約１００％の間、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％および約１００％の同一性を有し得る。本開示では、記載のアミノ酸配列間の同一性パーセントは、上記に列挙された同一性パーセント範囲の不連続の任意の部分範囲（例えば、特定の範囲内の整数値または特定の範囲内の不連続の下位値の任意の範囲）も含み得る。
用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、「タンパク質」および「ペプチド鎖」はそれぞれ、２つ以上のアミノ酸残基を含んでなる分子を意味する。ペプチドは単量体または重合体であり得る。
特定のアミノ酸置換は「保存的」であると見なされることは、当技術分野で十分に認識されている。アミノ酸は、共通の側鎖特性に基づいてグループに分けられ、抗原結合タンパク質の結合親和性の総てまたは実質的に総てを維持するグループ内の置換は、保存的置換と見なされる。表６参照。本明細書に開示される抗原結合タンパク質は、このような「保存的」アミノ酸置換を含んでなり得る。
用語「医薬組成物」は、本明細書で使用する場合、患者への投与に好適な組成物を意味する。
本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載の抗体の精製調製物を含んでなり得る。
例えば、医薬調製物は、本明細書に記載の抗体の精製調製物を薬学的に許容可能な担体と組み合わせて含んでなり得る。
一般に、このような医薬組成物は、既知の、許容可能な医薬実務に求められる薬学的に許容可能な担体を含んでなる。このような担体の例としては、場合により好適なバッファーで５〜８の範囲内のｐＨに緩衝された、無菌担体、例えば、生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース液が含まれる。
医薬組成物は、注射または注入（例えば、静脈内、腹腔内、皮内、皮下、筋肉内、または門脈内）により投与され得る。このような組成物は好適には目に見える粒状物質を含まない。医薬組成物は、１ｍｇ〜１０ｇの間の抗原結合タンパク質、例えば、５ｍｇ〜１ｇの間の抗原結合タンパク質を含んでなり得る。あるいは、組成物は、５ｍｇ〜５００ｍｇの間、例えば、５ｍｇ〜５０ｍｇの間の抗原結合タンパク質を含んでなり得る。
このような医薬組成物の調製方法は、当業者に周知である。医薬組成物は、単位投与形中１ｍｇ〜１０ｇの間の抗原結合タンパク質を、場合により、使用説明書とともに含んでなり得る。医薬組成物は、当業者の周知または自明の方法に従って投与前に再構成するために凍結乾燥（フリーズドライ）されてもよい。抗体がＩｇＧ１アイソタイプを有する場合には、銅により媒介されるこのアイソタイプの抗体の分解の程度を低減するために、医薬組成物にクエン酸塩（例えば、クエン酸ナトリウム）またはＥＤＴＡまたはヒスチジンなどの銅のキレーターを加えてもよい。医薬組成物はまた、アルギニンなどの可溶化剤、ポリソルベート８０などの界面活性剤／抗凝集剤、およびバイアルのヘッドスペースの酸素を置換するための窒素などの不活性ガスも含んでなり得る。
用語「治療上有効な量」は、本明細書で使用する場合、処置される病態（例えば、喘息、重症好酸球性喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症（ＥＧＰＡ）、好酸球増加症候群および鼻ポリープ）の１以上の症状の処置または管理において治療利益をもたらす薬剤（抗体または医薬組成物など）の量を意味する。喘息を含む重症好酸球性喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息または亜好酸球性喘息の１以上の症状のこのような処置または管理の例としては、１）喘息増悪頻度の低減；２）経口または全身性コルチコステロイド、入院、および／または救急部（ＥＤ）受診を必要とする臨床上有意な初回増悪までの時間の短縮；３）入院（挿管および集中治療室への収容を含む）またはＥＤ受診を必要とする増悪の頻度の低減；４）入院またはＥＤ受診を必要とする初回増悪までの時間の短縮；５）臨床的気管支拡張薬前ＦＥＶ１におけるベースラインからの変化；６）臨床的気管支拡張薬後ＦＥＶ１におけるベースラインからの変化；７）喘息コントロール質問票(Asthma Control Questionnaire)（ＡＣＱ）スコアにおけるベースラインからの変化；８）肺活量測定（例えば、肺活量(vital capacity)（ＶＣ）、努力肺活量(forced vital capacity)（ＦＶＣ）、０．５、１．０（ＦＥＶ１）、２．０、および３．０秒の時間間隔での努力呼気肺活量(forced expiratory volume)（ＦＥＶ）、２５〜７５％努力呼気流量(forced expiratory flow)（ＦＥＦ２５〜７５）および最大換気量(maximal voluntary ventilation)（ＭＶＶ） 全肺気量、一回換気量(idal volume)、残気量、呼気予備量、吸気予備量、吸気量、吸気肺活量、肺活量、機能的残気量、全肺気量のパーセントとして表される残気量、肺胞ガス量、誘導気道の容積を含む肺の実容積、努力肺活量など）により評価される肺機能の改善；および９）管理にステロイド（例えば、経口ステロイドまたはステロイド様プレドニゾン、プレドニゾロンなど−−任意の経路で投与される）を要する喘息増悪の低減が含まれる。管理にステロイドを要する喘息増悪におけるこのような低減は、ステロイド（例えば、経口ステロイド）を要する増悪におけるおよそ５０％の低減であり得る。
治療上有効な量および処置計画は一般に経験的に決定され、患者の年齢、体重および健康状態、ならびに処置される疾患または障害などの因子によって異なり得る。このような因子は主治医の裁量の範囲内である。
被験体に投与される抗原結合タンパク質の用量一般に、１μｇ／ｋｇ〜１５０ｍｇ／ｋｇの間、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの間、０．５ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇの間、１〜２５ｍｇ／ｋｇの間、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇの間または１〜１０ｍｇ／被験体の体重ｋｇの間である。例えば、用量は、１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、または６０ｍｇ／ｋｇであり得る。用量はまた、１０ｍｇ／ｋｇ〜１１０ｍｇ／ｍｇ １５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇまたは１５ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであり得る。抗原結合タンパク質は、例えば、非経口、皮下、静脈内、または筋肉内投与され得る。用量はまた、被験体当たり約２０ｍｇ〜被験体当たり約７５０ｍｇ、被験体当たり約７５ｍｇ〜被験体当たり約７５０ｍｇ、被験体当たり約２０ｍｇ〜被験体当たり約２００ｍｇなど、被験体当たりに基づいて投与され得る。用量は、これらの用量範囲内のいずれの不連続の部分範囲であってもよい。例えば、用量（例えば、メポリズマブまたはメポリズマブを含んでなる医薬組成物の用量）はまた、被験体当たり約１００ｍｇ（例えば、４週間ごとに１回）、または被験体当たり３００ｍｇなど、被験体当たりに基づいて皮下投与されてもよい（または静脈内投与とおよそ同じもしくは匹敵するバイオアベイラビリティが達成される限り、他の投与用量が皮下であってもよい−例えば、被験体当たり３００ｍｇの総皮下投与用量を達成するために被験体当たり１００ｍｇの３用量）。
本明細書に示される範囲は、いずれのタイプのものも、特定の記載範囲内の総ての値および特定の範囲のエンドポイントの周辺の値を含む。
場合により、治療組成物の有効一日用量は、場合により単位投与形で一日に適当な間隔で別個に投与される２、３、４、５、６以上の用量で投与されてよい。
用量の投与は、２〜２４時間、例えば、２〜１２時間、または２〜６時間の期間にわたる低速点滴によるものでもよい。このような投与は副作用の軽減をもたらし得る。
用量の投与は、要すれば、１回以上、例えば、１日３回、毎日１回、２日ごとに１回、１週間に１回、１４日ごとに１回、月に１回、３か月ごとに１回、４か月ごとに１回、６か月ごとに１回、または１２か月ごとに１回反復させてよい。本抗原結合タンパク質は、例えば、６か月以上の期間、週に１回の維持療法により投与してもよい。本抗原結合タンパク質は、例えば、３〜６か月の期間、次いで３〜６か月無投与、その後、３〜６か月、再び抗原結合タンパク質の投与など、周期として間欠療法により投与してもよい。
例えば、用量は、１４日または２８日ごとに１回、各投与日に複数用量の形態で皮下投与してよい。一つの実施態様では、組成物の用量は４週（２８日）ごとに１回、１００ｍｇである。
本抗原結合タンパク質は、療法を特定の部位に標的化するように被験体に投与し得る。
本開示の方法の抗原結合タンパク質は、抗体または小分子阻害剤などの１以上の他の治療上活性な薬剤と併用してもよい。
用語「処置する」およびその文法的変形は、本明細書で使用する場合、治療的療法を意味する。特定の病態に関して、処置するとは、（１）その病態の生物学的徴候のうち１以上の病態を改善すること、（２）ａ）その病態に至るもしくはその病態の一因である生物学的カスケードにおける１以上の点、またはｂ）その病態の生物学的徴候のうち１以上に干渉すること、（３）その病態またはその処置に関連する症状、影響または副作用のうち１以上を緩和すること、（４）その病態またはその病態の生物学的徴候のうち１以上の進行を緩徐化すること、あるいは（５）その病態の生物学的徴候のうち１以上の発生を予防することを意味する。予防的療法もまたそれにより企図される。当業者ならば、「予防」は絶対的用語でないことを認識するであろう。医学では、「予防」はある病態もしくはその生物学的徴候の尤度もしくは重篤度を実質的に軽減するため、またはそのような病態もしくはその生物学的徴候の発生を遅延させるための薬物の予防的投与を意味するものと理解される。
用語「個体」、「被験体」および「患者」は、本明細書では互換的に使用される。被験体は一般にヒトである。被験体はまたマウス、ラット、または霊長類（例えば、マーモセットもしくはサル）などの哺乳動物でもあってもよい。被験体は非ヒト動物であってもよい。本開示の抗原結合タンパク質、組成物および方法はまた獣医学的使用も有する。処置される被験体は農用動物、例えば、雌牛もしくは非去勢雄牛、ヒツジ、ブタ、去勢雄牛、ヤギまたはウマであり得、またはイヌもしくはネコなどの飼育動物であり得る。動物はいずれの齢であってもよく、または成熟成体動物であってもよい。
処置は治療的、防止的または予防的であり得る。被験体はそれを必要とするものである。処置を必要とするものには、未来にその疾患を発症する可能性のある個体に加え、特定の医学的疾患にすでに罹患している個体が含まれ得る。
よって、本明細書に記載される開示の方法、抗原結合タンパク質および組成物は、明示されていれば、防止的処置または予防的処置にも使用可能である。この場合、本開示の方法、抗原結合タンパク質および組成物は、疾患の１以上の様相または症状の発生を予防するまたは遅延させるために使用することができる。被験体は無症候性であり得る。被験体はその疾患に対して遺伝的組成物を有し得る。防止上有効な量の抗原結合タンパク質がこのような個体に投与される。防止上有効な量は、本明細書に記載される疾患の１以上の様相または症状の発生を予防するまたは遅延させる量である。
本開示の方法、抗原結合タンパク質および組成物は、実行可能な治療的処置をなすために、完全な治癒に作用する、またはその疾患の総ての症状または徴候を根絶する必要はない。当技術分野で認識されるように、処置の方法で治療薬として使用される薬物は、所与の病状の重篤度を軽減し得るが、有用な治療薬として認識されるために、その疾患の総ての徴候を排除する必要はない。同様に、防止的に投与される処置は、実行可能な予防薬をなすために疾患の発生の防止に完全に有効である必要はない。単に疾患の影響を軽減すること（例えば、その症状の数もしくは重篤度を軽減することによる、または別の処置の有効性を増強することによる、または別の有益な効果をもたらすことによる）、またはその疾患が起こる（例えば、その疾患の発生を遅延させることによる）もしくは被験体において増悪する尤度を引き下げることで十分である。
本開示の一つの態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦８０％の酸性抗体変異体を含んでなる。
一つの実施態様では、組成物は、ａ）≧０．７０のＩＬ−５特異的抗原結合；および／またはｂ）≧７０％のＦｃＲｎ結合を有する。ＩＬ−５特異的抗原結合、例えば、配列番号１１のアミノ酸配列を含んでなるヒトＩＬ−５への結合は、当技術分野で周知の表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））などの標準アッセイを用いて測定することができる。ＦｃＲｎ結合も同様に、当技術分野で周知の表面プラズモン共鳴（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））などの標準アッセイを用いて測定することができる。
別の実施態様では、ａ）特異的抗原結合は０．７０〜１．３０の範囲であり；および／またはｂ）ＦｃＲｎ結合は７０％〜１３０％の範囲である。いくつかの実施態様では、特異的抗原結合は、約０．９〜１．１、０．７５〜約１、約０．７〜約０．８、約０．７、約０．９１〜約０．９５、約．９９４〜約．９９７または約０．７〜約０．９の範囲であり得る。いくつかの実施態様では、ＦｃＲｎ結合は、約７０％〜約１００％、約１００％〜約１３０％、約７０％、約８０％、約９０％、約１００％、約１１０％、約１２０％、約８０％〜約９０％、約８０％〜約１００％、約１００％〜約１１０％、約１１０％〜約１２０％、約１２０％〜約１３０％、約８０％〜約１２０％および約９０％〜約１１０％の範囲であり得る。
一つの実施態様では、本組成物は、≦８０％の酸性抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≦７５％、≦７０％、≦６５％、≦６０％、≦５５％、≦５０％、または≦４５％の酸性抗体変異体を含んでなり得る。
別の実施態様では、本組成物は、≦３５％の脱アミド化抗体変異体を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≦２２．５％、≦２０％、≦１７．５％、≦１５％、≦１２．５、≦１０％、または≦７．５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体を含んでなり得る。
別の実施態様では、本組成物は、≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≦３２．５％、≦３０％、≦２５．５％、または≦２０％、≦１７．５％、≦１５％、≦１２．５％、≦１０％、または≦７．５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体を含んでなり得る。
別の実施態様では、本組成物は、≦５５％の酸化抗体変異体を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）重鎖アミノ酸配列のＭ６４；ｂ）重鎖アミノ酸配列のＭ２５４；および／またはｃ）重鎖アミノ酸配列のＭ４３０のうちいずれか１つもしくは組合せで≦５５％の酸化抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≦５０％、≦４５％、≦４０％、≦３５％、≦３０％、または≦２５％、≦２０％、≦１５％、≦１０％、または≦５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４、Ｍ２５４、および／またはＭ４３０で酸化された抗体変異体を含んでなり得る。
別の実施態様では、本組成物は、≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≦２．５％、≦２％、≦１．５％、≦１％、≦０．５％、≦０．４％、≦０．３％、≦０．２５％、≦０．２％、≦０．１５％、または≦０．１％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体を含んでなり得る。
別の実施態様では、脱アミド化抗体変異体量および／または酸化変異体量は、ペプチドマッピングＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定される。
別の実施態様では、本組成物は、≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≦１７．５％、≦１５％、≦１２．５、≦１０％、≦７．５％、≦５％、または≦４％の凝集変異体を含んでなり得る。本組成物は、３％、２％、１％または０．５％以下の凝集抗体を含んでなり得る。本組成物は、９８％以上の単量体抗体を含んでなり得る。
別の実施態様では、凝集抗体変異体は、二量体を含んでなる。このような凝集抗体は、２つの抗体分子（例えば、２つのＩｇＧ１抗体分子）を含んでなり得る。
別の実施態様では、凝集抗体変異体量は、サイズ排除クロマトグラフィー(size exclusion chromatography)（ＳＥＣ）により決定される。サイズ排除クロマトグラフィーを実行し、タンパク質分子のサイズを決定するための方法は当技術分野で周知である。
別の実施態様では、本組成物は、≧５０％の重鎖アミノ酸配列Ｃ末端リシンＫ４４９欠失抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≧６０％、≧７０％、≧７５、≧８０％、≧８５％、≧９０％、または≧９５％の重鎖アミノ酸配列Ｃ末端リシンＫ４４９欠失抗体変異体を含んでなり得る。
別の実施態様では、本組成物は、≧５０％の重鎖アミノ酸配列ピログルタミン酸Ｎ末端抗体変異体を含んでなる。例えば、本組成物は、≧６０％、≧７０％、≧７５、≧８０％、≧８５％、≧９０％、または≧９５％の重鎖アミノ酸配列ピログルタミン酸Ｎ末端抗体変異体を含んでなり得る。
別の実施態様では、本組成物は、宿主細胞タンパク質（ＨＣＰ）を含んでなる。ＨＣＰは、ＣＨＯ細胞由来であり得る。ＨＣＰは、メポリズマブ製品関連物質（すなわち、メポリズマブ＋メポリズマブ変異体）に対比されるプロセス関連の不純物である。ＨＣＰの業界標準許容限界は１００ｐｐｍ（１００ｎｇ／ｍｇに相当）までであり得る。本明細書に記載の組成物中のＨＣＰ含量は、≦５０ｎｇ／ｍｇ、≦４０ｎｇ／ｍｇ、≦３０ｎｇ／ｍｇ、または≦２０ｎｇ／ｍｇであり得る。例えば、本組成物のＨＣＰ含量は、≦１０ｎｇ／ｍｇであり得る。特定の実施態様では、本組成物のＨＣＰ含量は、≦５ｎｇ／ｍｇまたは≦２ｎｇ／ｍｇであり得る。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦８０％の酸性抗体変異体および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の別の態様は、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であり、前記組成物は、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；≦５５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４、重鎖アミノ酸配列のＭ２５４、重鎖アミノ酸配列のＭ４３０で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる。
本開示の組成物は、６．８〜７．２の間のｐＨまたはｐＨ６．２〜ｐＨ６．６のｐＨ（６．３のｐＨ値が好ましい）を提供する、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸、クエン酸塩、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、およびヒスチジンからなる群から選択される緩衝剤をさらに含んでなり得る。本開示の組成物中のバッファーは、約１０〜３０ｍＭ、約１０〜２０ｍＭ、約２０ｍＭまたは約１５．５ｍＭの範囲で存在し得る。例えば、本開示の組成物中のバッファーは、約２０ｍＭ、または約１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物で存在する。
本開示の組成物は、６．２〜６．６（含む）のｐＨ（６．３のｐＨ値が好ましい）を提供する第二リン酸ナトリウム七水和物およびクエン酸緩衝剤を含んでなり得る。第二リン酸ナトリウム七水和物緩衝剤は、約１５〜１６．４ｍＭの範囲で存在してよく、クエン酸緩衝剤は、約３．８〜４．９ｍＭの範囲で存在し得る。例えば、本開示の組成物は、約１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物および約４．５ｍＭのクエン酸一水和物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、糖をさらに含んでなり得る。本開示の組成物は、スクロースをさらに含んでなり得る。スクロースは、本開示の組成物中に約５〜２０％；約１０〜１５％、約１１〜１３％または約１２％重量／容量の範囲で存在し得る。
本開示の組成物は、ポリソルベート８０をさらに含んでなり得る。ポリソルベート８０は、約０．０１〜０．１％重量／容量の範囲で存在し得る。例えば、ポリソルベート８０は、本開示の組成物中に約０．０２％重量／容量、または約０．０５％重量／容量で存在し得る。
本開示の組成物は、ＥＤＴＡをさらに含んでなり得る。ＥＤＴＡは、約０．０１〜０．１ｍＭの範囲で存在し得る。例えば、ＥＤＴＡは、約０．０５ｍＭで存在し得る。
一つの実施態様では、本開示の組成物は、２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、容量に対して１２重量％のスクロースおよび容量に対して０．０５重量％のポリソルベート８０をさらに含んでなる。
別の実施態様では、本開示の組成物は、１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡをさらに含んでなる。
本開示の組成物は、１６．１ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０容量および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ６．２の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１５．２ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．８ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ６．２の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１５．８ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．２ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ６．４の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１６．３ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．７ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ６．６の水性液体処方物を含んでなり得る。
本開示の組成物は、１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．５ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ６．３の水性液体処方物を含んでなり得る。重要なこととして、以下の実施例１の接線濾過および限外濾過交換ステップは、本開示の組成物、例えば、６．３のｐＨで１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．５ｍＭのクエン酸一水和物(citric citric acid monohydrate)、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０、０．０５ｍＭのＥＤＴＡを含んでなる本開示の組成物または他のこのような液体処方物を作製するために調整され得る。
本開示の別の態様は、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であり、前記組成物は６．８〜７．２のｐＨであり、前記緩衝剤は、ヒスチジン、リン酸塩、クエン酸、クエン酸塩またはその塩であり、前記精製調製物は、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、前記抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される。本組成物において、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９５％、９６％、９６．８８％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり得る。本組成物において、軽鎖は、配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９８％、９８．６３または９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり得る。
一つの実施態様では、緩衝剤は、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸およびクエン酸塩から選択される少なくとも１つである。
別の実施態様では、緩衝剤は、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、またはクエン酸ナトリウムである。
別の実施態様では、本組成物は、糖、炭水化物および／または塩をさらに含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、スクロースを含んでなる。
本開示の別の態様は、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であり、前記組成物は６．８〜７．２のｐＨであり、前記緩衝剤はリン酸塩またはその塩であり、前記精製調製物は、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、前記抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される。
別の実施態様では、緩衝剤は、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸およびクエン酸塩から選択される少なくとも１つである。
別の実施態様では、本組成物は、糖をさらに含んでなる。
別の実施態様では、前記糖はスクロースである。
別の実施態様では、本組成物は、ポリソルベート８０を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、容量に対して１２重量％のスクロースおよび容量に対して０．０５重量％のポリソルベート８０の第１の処方物；および１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第２の処方物；ならびに２６ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、容量に対して１５重量％のスクロースおよび容量に対して０．０６５重量％のポリソルベート８０の第３の処方物から選択される１つを含んでなる。本組成物は、約６．８〜約７．２、約６．１〜約６．５または約６〜約６．６の間のｐＨであり得る。
別の実施態様では、抗体は、配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトインターロイキン−５に対して約３．５×１０−１１Ｍ以下の解離定数を有する。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態を含んでなる組成物である。前記抗体の主要形態はまた、組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５７．９％、５９．４％、および６０％以上を占め得る。
別の実施態様では、前記抗体の主要形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびにｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態を含んでなる組成物である。抗体の酸性形態はまた、組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の３７．６％、３７．８％、３８．４％および３９．８％を占め得る。ｃＩＥＦにより決定される総酸性ピーク面積は７２％といった高いものであり得、なお０．７４のＩＬ−５特異的結合および８０％のＦｃＲｎ結合を保持する。
別の実施態様では、前記抗体の酸性形態は、ピーク６５の酸性形態、ピーク７８の酸性形態、ピーク８８の酸性形態およびピーク９２の酸性形態から選択される少なくとも１つを含んでなる。
別の実施態様では、前記抗体の酸性形態は、アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの脱アミド化アミノ酸残基を含んでなる。ＬＣ Ｎ３１上の脱アミド化の許容可能なレベルは、ペプチドマッピングＬＣ ＭＳ／ＭＳにより測定した場合１７％以上、または１７．４％以上である。ＨＣ ３８６上の脱アミド化の許容可能なレベルは、ペプチドマッピングＬＣ ＭＳ／ＭＳで測定した場合３０％以上である。許容可能な上限レベルは、組成物中の抗体分子に、ＳＰＲにより測定した場合に約０．７０〜約１．３０の抗原結合活性およびＳＰＲにより測定した場合に約７０％〜約１３０％のＦｃＲｎ結合活性または本明細書に開示される他の抗原結合活性値もしくはＦｃＲｎ結合活性値、または範囲を保持させる特定の変異体のレベルであり得る。
別の実施態様では、前記抗体の酸性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる。ペプチドマッピングＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより測定される抗体の重鎖残基上の酸化の許容可能なレベルは、ＨＣ Ｍ６４、Ｍ２５４、およびＭ４３０では約５０％、ＨＣ Ｗ５２では約３％であり得る。許容可能な上限レベルは、組成物中の抗体分子に、ＳＰＲにより測定した場合に約０．７０〜約１．３０の抗原結合活性およびＳＰＲにより測定した場合に約７０％〜約１３０％のＦｃＲｎ結合活性または本明細書に開示される他の抗原結合活性値もしくはＦｃＲｎ結合活性値、または範囲を保持させる特定の変異体のレベルであり得る。
別の実施態様では、前記抗体の主要形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；前記抗体の酸性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびにｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態を含んでなる組成物である。前記抗体の塩基性形態はまた、組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２．２％および２．３％以上を含んでなり得る。
別の実施態様では、前記抗体の塩基性形態は、ピーク１１２の塩基性形態を含んでなる。
別の実施態様では、前記抗体の塩基性形態は、グリシン４４８であるカルボキシ末端残基を有する重鎖を含んでなる。
別の実施態様では、前記抗体の塩基性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる。
別の実施態様では、前記抗体の主要形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；前記抗体の塩基性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態；ならびにｄ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態を含んでなる組成物である。
別の実施態様では、前記抗体の酸性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；前記抗体の塩基性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる。
別の実施態様では、前記抗体の主要形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；前記抗体の酸性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；前記抗体の塩基性形態は、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびにｃ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；およびｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。本組成物において、ＣＤＲＨ２は、配列番号６のアミノ酸配列と少なくとも８５％または８７．５％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり得る。本組成物において、ＣＤＲＬ１は、配列番号８のアミノ酸配列と９３％、９４％または９４．１１％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり得る。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の酸化形態；およびｃ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と、配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態を含んでなる組成物である。本組成物において、重鎖可変領域は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％または９５．５７％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり得る。本組成物において、軽鎖可変領域は、配列番号３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９８％または９８．３１％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなり得る。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と、配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列と配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびにｃ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態を含んでなる組成物である。
別の実施態様では、総タンパク質濃度は約７５ｍｇ／ｍＬである。総タンパク質濃度はまた、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬ、例えば、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ、約６７．３〜約８７．５ｍｇ／ｍＬ、約７６ｇタンパク質／Ｌ〜約８２ｇタンパク質／Ｌ、約４６ｇタンパク質／Ｌ〜約６６ｇタンパク質／Ｌまたは約１００ｍｇ／ｍＬの範囲のいずれの値の対、または単一の値の周辺であってもよい。本組成物において、サンプル中の抗ヒト−ＩＬ−５抗体の純度は９７．０％、９６％、９５％、または８０％、８５％以上である。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態をさらに含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；およびｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態をさらに含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；およびｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態をさらに含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態；およびｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態をさらに含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）アミノ酸残基１のアミノ末端ピログルタミン酸残基、アミノ酸残基４４８のカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基、２９９番の脱アミド化アスパラギン(aparagine)残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基、３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン残基、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）アミノ酸残基３１の脱アミド化アスパラギン残基、４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システイン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約９２％以上が抗体重鎖のアミノ酸残基１にアミノ末端ピログルタミン酸残基を含んでなり、ｂ）集団の約９０％以上が抗体重鎖のアミノ酸残基４４８にカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基を含んでなり、ｃ）集団の６．０％以下が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり；ｄ）集団の約１．５％以下が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｅ）集団の約４．５％以下が抗体重鎖の２５４番の酸化メチオニンを含んでなり、ｆ）集団の約０．８％以下が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、かつ、ｇ）集団の約６．６％以下が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約９２％〜約９９％が抗体重鎖のアミノ酸残基１にアミノ末端ピログルタミン酸残基を含んでなり、ｂ）集団の約９５％〜約９９．５％が抗体重鎖のアミノ酸残基４４８にカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基を含んでなり、ｃ）集団の約０．３％〜約１．５％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、ｄ）集団の約１．５％〜約４．５％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり；ｅ）集団の約０．５％〜約１．５％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｆ）集団の約０．２％〜約１．５％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基を含んでなるか、または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｇ）集団の約２．５％〜約３．５％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、ｈ）集団の約０．４％〜約０．８％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｉ）集団の約３．３％〜約６．６％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、ｊ）集団の約０．１％〜約１％が抗体軽鎖の４番の酸化メチオニン残基を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約９３．７％〜約９８．６％が抗体重鎖のアミノ酸残基１にアミノ末端ピログルタミン酸残基を含んでなり、ｂ）集団の約９７．６％〜約９９．２％が抗体重鎖のアミノ酸残基４４８にカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基を含んでなり、ｃ）集団の約０．４％〜約１．２％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、ｄ）集団の約１．６％〜約４．２％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり；ｅ）集団の約０．７％〜約０．９％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｆ）集団の約０．３％〜約１．１％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基を含んでなるか、または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｇ）集団の約２．６％〜約３．３％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、ｈ）集団の約０．５％〜約０．７％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｉ）集団の約３．４％〜約６．５％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、ｊ）集団の約０．２％〜約０．８％が抗体軽鎖の４番の酸化メチオニン残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基、３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン残基、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）アミノ酸残基３１の脱アミド化アスパラギン残基、４番の酸化メチオニン残基および２２２番の酸化システイン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約０．３％〜約１．５％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、ｂ）集団の約１．５％〜約４．５％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり；ｃ）集団の約０．５％〜約１．５％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｄ）集団の約０．２％〜約１．５％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基を含んでなるか、または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｅ）集団の約２．５％〜約３．５％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、ｆ）集団の約０．４％〜約０．８％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｇ）集団の約３．３％〜約６．６％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、ｈ）集団の約０．１％〜約１％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約０．４％〜約１．２％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、ｂ）集団の約１．６％〜約４．２％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり；ｃ）集団の約０．７％〜約０．９％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｄ）集団の約０．３％〜約１．１％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基を含んでなるか、または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｅ）集団の約２．６％〜約３．３％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、ｆ）集団の約０．５％〜約０．７％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｇ）集団の約３．４％〜約６．５％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、ｈ）集団の約０．２％〜約０．８％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基および３８６番の脱アミド化アスパラギン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）アミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約０．３％〜約１．５％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、ｂ）集団の約１．５％〜約４．５％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり；かつ、ｃ）集団の約３．３％〜約６．６％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約０．４％〜約１．２％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、ｂ）集団の約１．６％〜約４．２％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり；かつ、ｃ）集団の約３．４％〜約６．５％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン残基、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびにｂ）４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システイン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる組成物である。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約０．５％〜約１．５％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｂ）集団の約０．２％〜約１．５％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基を含んでなるか、または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｃ）集団の約２．５％〜約３．５％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、ｄ）集団の約０．４％〜約０．８％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、かつ、ｅ）集団の約０．１％〜約１％は抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる。
別の実施態様では、本組成物は、ａ）集団の約０．７％〜約０．９％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｂ）集団の約０．３％〜約１．１％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基を含んでなるか、または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、ｃ）集団の約２．６％〜約３．３％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、ｄ）集団の約０．５％〜約０．７％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、かつ、ｅ）集団の約０．２％〜約０．８％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびにｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態を含んでなる組成物である。
本開示の別の態様は、ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびにｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の最大約８０％を占める前記抗体の酸性形態を含んでなる組成物である。
別の実施態様では、本組成物は、喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎からなる群から選択される疾患の処置のためのものである。
別の実施態様は、被験体において疾患を処置する方法であって、ａ）喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎からなる群から選択される疾患を有する被験体を特定する工程；およびｂ）治療上有効な量の本開示による組成物を前記被験体に投与する工程を含んでなり；それにより前記被験体における疾患が処置される方法である。
別の実施態様は、本開示の組成物を生産する方法であって、ａ）宿主細胞において、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を発現させる工程；ｂ）前記細胞を約６．７５〜約７．００のｐＨで増殖させる工程；ｃ）細胞培養上清を採取する工程；ｄ）細胞培養上清をプロテインＡ樹脂またはプロテインＧ樹脂と接触させて抗体分子を結合させる工程；ｅ）前記樹脂から抗体分子を溶出させて第１の溶出液を得る工程；ｆ）前記第１の溶出液を約３．３〜約３．７のｐＨで約１５〜約２４０分処理して処理済みの第１の溶出液を得る工程；ｇ）処理済みの第１の溶出液を約８．３〜約８．７のロードｐＨでイオン交換樹脂と接触させる工程；ｈ）イオン交換樹脂から第２の溶出液（フロースルー溶出液）を回収し、これを約９６時間以内保持する工程；ｉ）前記第２の溶出液をグアニジンおよび硫酸アンモニウムで処理して溶液を得る工程；ｊ）前記溶液を疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂床と約１２ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比〜約２７ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比で接触させる工程；ｋ）抗体分子を含んでなる第３の溶出液を疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂から、約９樹脂床容量〜約１１樹脂床容量の溶出勾配容量および最大ピーク高さの約１７％〜最大ピーク高さの約２３％の溶出ピークカットストップで溶出させる工程；およびｌ）前記第３の溶出液を処方する工程を含んでなり；それにより本開示の組成物が生産される方法である。本開示の方法では、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体の発現に好適な任意の核酸配列。例えば、配列番号１３または配列番号１４の核酸配列は、真核細胞で抗体を発現させるために使用可能である。あるいは、配列番号１に示される抗体重鎖アミノ酸配列または配列番号２に示される抗体軽鎖アミノ酸配列をコードする異なる配列を有する他の核酸配列（例えば、選択的コドンの使用のため）も使用可能である。本開示の方法では、脱アミド化は、約６．７５〜約７．００のｐＨで細胞を増殖させることにより制御することができる。本開示の方法では、脱アミド化は、１６６日以内のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞齢で約１２〜約１８日間細胞を増殖させることにより制御することができる。本開示の方法では、脱アミド化は、処理済みの第１の溶出液をイオン交換樹脂と、約８．３〜約８．７のロードｐＨで接触させ、第２の溶出液をイオン交換樹脂から回収し、これを約９６時間以内保持することにより制御することができる。本開示の方法では、凝集は、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ファストフロークロマトグラフィー中、疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂床と、約１２ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比〜約２７ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比で接触させ；抗体分子を含んでなる第３の溶出液を疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂から、約９樹脂床容量〜約１１樹脂床容量の溶出勾配容量および最大ピーク高さの約１７％〜最大ピーク高さの約２３％の溶出ピークカットストップで溶出させることにより制御することができる。凝集はまた、本開示の医薬組成物の最終の濾過、充填および凍結後に約６時間以内に限定することができる。重要なこととして、本開示の組成物を生産するために、開示されている方法の工程のいずれを省いてもよく、または組み合わせてもよい。
抗体製造の際には、翻訳後修飾が起こり得る。これには特定のリーダー配列の切断、様々なグリコシル化パターンでの様々な糖部分の付加、脱アミド化（例えば、アスパラギンまたはグルタミン残基における）、酸化（例えば、メチオニン、トリプトファンまたは遊離システイン残基における）、ジスルフィド結合スクランブル化、異性化（例えば、アスパラギン酸残基における）、Ｃ末端リシンクリッピング（例えば、一方または両方の重鎖から）、およびＮ末端グルタミン環化（例えば、重鎖および／または軽鎖における）が含まれ得る。
抗体組成物は、（ｉ）抗体（すなわち、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体）；ならびに（ｉｉ）電荷変異体（例えば、酸性および塩基性変異体）、アミノ酸配列変異体、および抗体構造変異体（例えば、凝集および断片化変異体）のうち１以上のまたは組合せを含む抗体変異体を含んでなり得る。
酸性または塩基性抗体変異体は、それらの全体としての酸性または塩基性電荷に基づき、抗体から特徴付けおよび識別を行うことができる。例えば、抗体組成物の電荷分布は、キャピラリー等電点電気泳動(capillary isoelectric focussing)（ｃＩＥＦ）またはイオン交換クロマトグラフィーを用いて検出することができる。酸性変異体は、脱アミド化抗体変異体、糖化抗体変異体、シアリル化抗体変異体、および酸化抗体変異体を含んでなり得る。抗体変異体におけるシステインおよびトリプトファン酸化は、ｐＩシフト（すなわち、電荷の違い）を生じ、他の酸性抗体変異体で検出される。抗体変異体におけるメチオニン酸化は、抗原結合の変化により、またはペプチドマッピングにより、例えば、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳによってモニタリングすることができる。
脱アミド化は、主としてアスパラギン（Ｎ）をイソアスパラギン酸（イソアスパラギネート）（ｉｓｏ−Ｄ）およびアスパラギン酸（アスパラギネート）（Ｄ）におよそ３：１の比で変換する酵素反応である。従って、この脱アミド化反応は、アスパラギネート（Ｄ）のイソアスパラギネートへの異性化に関連する。アスパラギンの脱アミド化およびアスパラギネートの異性化は両方とも中間体スクシンイミドを含む。はるかに程度は低いが、脱アミド化はグルタミン残基でも同様に起こり得る。脱アミド化は、ＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ領域）、またはＦｃ領域内で起こり得る。
脱アミド化は抗体の電荷に変化を生じ、その結果、脱アミド化抗体変異体は抗体に比べて酸性となる。抗体組成物は、≦３５％の脱アミド化抗体変異体を含んでなり得る。例えば、軽鎖のＮ３１は、ｉｓｏ−Ｄ、Ｄまたはスクシンイミドに脱アミド化され得る。抗体組成物は、≦２５％の、軽鎖の３１番で脱アミド化された抗体変異体を含んでなり得る。これは、例えば、抗体組成物の≦２５％に、抗体の軽鎖の配列に１つのアミノ酸変化を生じ得る。
例えば、重鎖のＮ３８６は、ｉｓｏ−Ｄ、Ｄまたはスクシンイミドに脱アミド化され得る。抗体組成物は、≦３５％の、重鎖の３８６番で脱アミド化された抗体変異体を含んでなり得る。これは、例えば、抗体組成物の≦３５％に、抗体の重鎖の配列に１個のアミノ酸変化を生じ得る。本組成物は、抗体変異体の混合物を含んでなり得る。脱アミド化イベントは蓄積し得るので、２個以上のアスパラギン残基が脱アミド化される。従って、抗体組成物は、抗体の重鎖の配列に少なくとも１つのアミノ酸変化および／または抗体の重鎖の配列に少なくとも１つのアミノ酸変化を含んでなり得る。例えば、抗体組成物は、軽鎖３１番で脱アミド化された抗体変異体および重鎖の３８６番で脱アミド化された抗体変異体を含んでなり得る。
酸化は、生産および保存中に（すなわち、酸化条件の存在下で）起こり得、直接的には反応性酸素種により、または間接的には酸化ストレスの二次的副産物との反応により誘導されるタンパク質の共有結合的修飾をもたらす。酸化は主として主としてメチオニン残基で起こるが、トリプトファンおよび遊離システイン残基でも起こり得る。酸化はＣＤＲ、Ｆａｂ（非ＣＤＲ）領域、またはＦｃ領域で起こり得る。
酸化は、抗体の電荷に変化を引き起こし得、その結果、酸化抗体変異体は、抗体に比べて酸性となる。一部の酸化抗体変異体は、抗体と同じ電荷を有する。抗体組成物は、≦５５％の酸化抗体変異体を含んでなり得る。例えば、重鎖のＭ６４、Ｍ２５４、および／またはＭ４３０のうちいずれか１つもしくは組合せが酸化され得る。抗体組成物は、≦５５％の、重鎖のＭ６４、Ｍ２５４、および／またはＭ４３０のうちいずれか１つもしくは組合せで酸化された抗体変異体を含んでなり得る。例えば、重鎖のＷ５２が酸化され得る。抗体組成物は、≦３％の、重鎖のＷ５２で酸化された抗体変異体を含んでなり得る。
本組成物は、抗体変異体の混合物を含んでなり得る。従って、抗体組成物は、抗体の重鎖の配列に少なくとも１つのアミノ酸変化および／または抗体の重鎖の配列に少なくとも１つのアミノ酸変化を含んでなり得る。例えば、抗体組成物は、軽鎖の３１番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖の３８６番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖のＭ６４、Ｍ２５４、および／もしくはＭ４３０および／もしくはＷ５２のうちいずれか１つもしくは組合せに酸化を含んでなり得る。
ジスルフィド結合のスクランブル化は、生産および塩基性保存条件中に起こり得る。ある特定の状況下では、ジスルフィド結合は破断または適切に形成しないことがあり、不対合システイン残基（−ＳＨ）を生じる。これらの遊離（不対合）スルフヒドリル（−ＳＨ）がシャッフリングを促進し得る。
重鎖および／または軽鎖のＮ末端グルタミン（Ｑ）およびグルタミン酸塩（グルタミン酸）（Ｅ）は、環化を介してピログルタメート（ｐＧｌｕ）を形成すると思われる。ほとんどのｐＧｌｕの形成は生産バイリアクター内で起こると思われるが、それはまた処理および保存条件のｐＨおよび温度によって、非酵素的に形成される場合もある。Ｎ末端ＱまたはＥの環化は一般に天然ヒト抗体で見られる。本明細書に記載の抗体組成物は、≧５０％で抗体のＮ末端にｐＧｌｕを含んでなり得る。ｐＧｌｕは、重鎖に存在し得る。これは、例えば、抗体組成物の≧５０％に、抗体の重鎖または軽鎖の配列に１つのアミノ酸変化を生じ得る。
本組成物は、抗体変異体の混合物を含んでなり得る。配列変化は蓄積し得るので、本組成物は重鎖および／または軽鎖に２つ以上の配列変化を含んでなる。従って、本抗体組成物は、抗体の重鎖の配列に少なくとも１つのアミノ酸変化および／または抗体の重鎖の配列に少なくとも１つのアミノ酸変化を含んでなり得る。例えば、抗体組成物は、軽鎖の３１番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖の３８６番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖のＭ６４、Ｍ２５４、および／もしくはＭ４３０および／もしくはＷ５２のうちいずれか１つもしくは組合せに酸化；ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖のＮ末端にｐＧｌｕを含んでなり得る。
Ｃ末端リシンクリッピングは、カルボキシペプチダーゼにより触媒される酵素反応であり、組換えおよび天然ヒト抗体に共通に見られる。このプロセスの変形には、組換え宿主細胞からの細胞酵素による一方または両方の重鎖からのリシンの除去が含まれる。ヒト被験体／患者に投与すると、残っているＣ末端リシンの除去がもたらされる可能性がある。本明細書に記載の抗体組成物は、≧５０％の、抗体のＣ末端におけるＣ末端リシン欠失を含んでなり得る。抗体の一方または両方の重鎖でＫ４４９が欠失され得る。従って、重鎖におけるリシン単一欠失および重鎖におけるリシン二重欠失の２つの抗体変異体が存在する。本抗体（すなわち、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体）は、両方のリシンが無傷である／存在する。これは、例えば、抗体組成物の≧５０％に、抗体の重鎖の配列に１つのアミノ酸変化を生じ得る。
本組成物は、抗体変異体の混合物を含んでなり得る。例えば、抗体組成物は、軽鎖の３１番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖の３８６番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖のＭ６４、Ｍ２５４、および／もしくはＭ４３０および／もしくはＷ５２のうちいずれか１つもしくは組合せに酸化；ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖のＮ末端にｐＧｌｕ；ならびに／またはＣ末端にＣ末端リシン欠失を含んでなり得る。
凝集または断片化抗体変異体は、それらのサイズに基づいて抗体から特徴付けおよび識別を行うことができる。例えば、抗体組成物のサイズ分布は、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を用いて検出することができる。
抗体組成物は、≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなり得る。凝集抗体変異体は、二量体を含んでなり得る。本組成物は、抗体変異体の混合物を含んでなり得る。例えば、抗体組成物は、軽鎖の３１番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖の３８６番で脱アミド化された抗体変異体；ならびに／または重鎖のＭ６４、Ｍ２５４、および／もしくはＭ４３０および／もしくはＷ５２のうちいずれか１つもしくは組合せに酸化；ならびに／または重鎖および／もしくは軽鎖のＮ末端にｐＧｌｕ；ならびに／またはＣ末端にＣ末端リシン欠失；ならびに／または凝集抗体変異体を含んでなり得る。
記載の組成物は、１以上の翻訳後修飾を施された、または受けたものであってもよい。この修飾は、ＣＤＲ、可変フレームワーク領域、または定常領域で起こり得る。この修飾は、分子の電荷に変化をもたらし得る。上記の一次アミノ酸配列における翻訳後修飾および変化は、組成物の抗原結合親和性、生物活性、ＰＫ／ＰＤ、凝集、免疫原性、またはＦｃ受容体との結合に有意な変化をもたらさない。本組成物は夾雑物質を実質的に含まない。
上記の抗体および抗体変異体を含んでなる抗体組成物は、特異的抗原結合および／またはＦｃＲｎ結合を保持する。例えば、上記の抗体および抗体変異体を含んでなる抗体組成物は、≧０．７０のＩＬ−５特異的抗原結合；および／または≧７０％のＦｃＲｎ結合を有する。従って、変異体のこれらのレベル（％）は、機能に影響を及ぼすことなく抗体組成物に忍容され得る。
本明細書に記載の組成物は、いくつかの従来技術のいずれによって生産されてもよい。例えば、本組成物は、組換え発現系で発現させ、そこから精製してもよい。一つの実施態様では、本組成物は、配列番号１および配列番号２を含んでなるポリペプチドの発現に好適な条件下で宿主細胞を培養し、そこで組成物が発現され、場合により精製され、場合により医薬組成物内に処方されるという方法によって生産される。
いくつかの異なる発現系および精製計画が本組成物を生産するために使用可能である。一般に、宿主細胞は、抗体をコードする組換え発現ベクターで形質転換される。哺乳動物起源の真核細胞株（例えば、ＣＨＯ、Ｐｅｒｃ６、ＨＥＫ２９３、ＨｅＬａ、ＮＳ０）を含む広範囲の宿主細胞が使用可能である。好適な宿主細胞としては、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯＫ１およびＣＨＯ−ＤＧ４４）などの哺乳動物細胞が含まれる。
宿主細胞は、単離された宿主細胞であり得る。宿主細胞は通常、多細胞生物（例えば、植物または動物）の一部ではない。宿主細胞は非ヒト宿主細胞であってよい。
真核生物または哺乳動物細胞宿主とともに使用するための適当なクローニングおよび発現ベクターならびにクローニング方法は当技術分野で公知である。
前記細胞は、本抗体の発現を促進する条件化で培養することができる。例えば、前記細胞を培養するために生産バイオリアクターが使用される。生産バイオリアクター容量は、（ｉ）約２０，０００リットル、約１０，０００リットル；約５，０００リットル；約２，０００リットル；約１，０００リットル；または約５００リットル；または（ｉｉ）５００〜２０，０００リットルの間；５００〜１０，０００リットルの間；５００〜５，０００リットルの間；１，０００〜１０，０００リットルの間、または２，０００〜１０，０００リットルの間であり得る。例えば、前記細胞は、生産バイオリアクターにて約６．７５〜ｐＨ７．００のｐＨで培養することができる。あるいは、前記細胞は生産バイオリアクターにて約１２〜約１８日間培養することができる。あるいは、前記細胞は、生産バイオリアクターにて約６．７５〜ｐＨ７．００のｐＨで、約１２〜約１８日間培養することができる。この培養工程は、脱アミド化抗体変異体のレベルを制御する、例えば、脱アミド化抗体変異体のレベルを低減するための助けとなり得る。
本組成物は、従来のタンパク質精製手順により回収および精製することができる。例えば、本組成物は、直接培養培地から採取してもよい。細胞培養培地の採取は、例えば、遠心分離および／または深層濾過による清澄化を介してもよい。本組成物の回収の後、十分な純度を確保するために精製が行われる。
精製では、１以上のクロマトグラフィー工程、例えば、１以上のクロマトグラフィー樹脂；および／または１回以上の濾過工程を使用することができる。本組成物を精製するために、例えば、プロテインＡ、Ｇ、またはＬなどの樹脂を用いたアフィニティークロマトグラフィーを使用することができる。その代わりに、またはそれに加えて、陽イオン交換などのイオン交換樹脂を本組成物の精製に使用してもよい。その代わりに、またはそれに加えて、疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂を本組成物の精製に使用してもよい。あるいは、精製工程は、アフィニティークロマトグラフィー樹脂工程、次いで、陽イオン交換樹脂工程、次いで、疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂工程を含んでなる。
例えば、採取物をプロテインＡ樹脂と接触させる。本組成物を含んでなる溶液をプロテインＡ樹脂から溶出させ、ｐＨ３．３〜３．７で１５〜２４０分処理すればよい。このプロテインＡ樹脂工程は、凝集抗体変異体のレベルを制御する、例えば、凝集抗体変異体のレベルを低減するための助けとなり得る。
次に、本組成物を含んでなる溶液を深層濾過および／または二重層濾過によりさらに清澄化してもよい。
その代わりに、またはそれに加えて、陰イオン交換樹脂を用いてもよい。本組成物を含んでなる溶液を、陰イオン交換樹脂（例えば、Ｑ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ファストフロー陰イオン交換クロマトグラフィー）と、８．３〜８．７のロードｐＨで接触させることができる。本組成物を含んでなる溶液を陰イオン交換樹脂から溶出させ、９６時間以内保持することができる。この陰イオン交換樹脂工程は、脱アミド化抗体変異体のレベルを制御する、例えば、脱アミド化抗体変異体のレベルを低減するための助けとなり得る。
場合により、グアニジンおよび／または硫酸アンモニウムを、本組成物を含んでなる溶液に加え、１５〜２４０分間保持してもよい。
その代わりに、またはそれに加えて、疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂を使用してもよい。本組成物を含んでなる溶液を疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂（例えば、フェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ファストフロークロマトグラフィー）と、１２〜２７ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比で接触させてもよい。例えば、本組成物を含んでなる溶液を、約９〜約１１の溶出勾配容量（床容量；ＢＶ）を用いて溶出させてもよい。疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂からの溶出中に約１７〜約２３の溶出ピークカットストップ（最大ピーク高さの％）を使用してもよい。この疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂工程は、凝集抗体変異体のレベルを制御する、例えば、凝集抗体変異体のレベルを低減するための助けとなり得る。
次に、本組成物を含んでなる溶液を、ウイルスを除去するために濾過してもよい。その後、本組成物を含んでなる溶液を、約７６ｇタンパク質／Ｌ〜約８２ｇタンパク質／Ｌ、または〜約１００ｇタンパク質／Ｌの抗体濃度で処方してよい。本組成物を含んでなる溶液を容器に充填し、凍結させてもよい。本組成物を含んでなる溶液のアリコートを凍結乾燥してもよい。凍結乾燥品は、７５ｍｇ／Ｌのタンパク質、モノクローナル抗ＩＬ−５メポリズマブ抗体および２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、容量に対して１２重量％のスクロースおよび容量に対して０．０５重量％のポリソルベート８０を含んでなる、ｐＨ約６．８〜約７．２の組成物を作製するために、水の添加により再構成してもよい。
別の実施態様では、本開示の組成物は、本開示の組成物を生産するこの方法を用いて生産される。
本開示の別の態様は、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であり、本組成物は６．２〜６．６のｐＨであり、前記緩衝剤は、ヒスチジン、リン酸塩、クエン酸、クエン酸一水和物、クエン酸塩またはその塩であり、前記精製調製物は、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列と配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列とを含んでなり、かつ、前記抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される。
本開示の別の態様は、モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であり、本組成物は６．２〜６．６のｐＨであり、前記緩衝剤は、リン酸塩またはその塩であり、前記精製調製物は、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、前記抗体は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列と配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列とを含んでなり、かつ、前記抗体は、チャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される。
本開示の組成物の別の実施態様では、緩衝剤は、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩およびクエン酸から選択される少なくとも１つである。
本開示の組成物の別の実施態様では、１６．１ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．９ｍＭのクエン酸、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第１の処方物；１５．２ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．８ｍＭのクエン酸、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第２の処方物；１５．８ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．２ｍＭのクエン酸、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第３の処方物；１６．３ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．７ｍＭのクエン酸、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第４の処方物；ならびに１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．５ｍＭのクエン酸、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第５の処方物から選択される１つを含んでなる。
要約すれば、本開示は、以下のものを含む。
１．配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦８０％の酸性抗体変異体を含んでなる、組成物。
２．
ａ）≧０．７０のＩＬ−５特異的抗原結合；および／または
ｂ）≧７０％のＦｃＲｎ結合
を有する、１に記載の組成物。
３．ａ）特異的抗原結合が０．７０〜１．３０の範囲であり；かつ／またはｂ）ＦｃＲｎ結合が７０％〜１３０％の範囲である、２に記載の組成物。
４．≦３５％の脱アミド化抗体変異体を含んでなる、１〜３のいずれか１つに記載の組成物。
５．≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体を含んでなる、１〜４のいずれか１つに記載の組成物。
６．≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体を含んでなる、１〜５のいずれか１つに記載の組成物。
７．
ａ）重鎖アミノ酸配列のＭ６４；
ｂ）重鎖アミノ酸配列のＭ２５４；および／または
ｃ）重鎖アミノ酸配列のＭ４３０
のうちいずれか１つまたは組合せで≦５５％の酸化抗体変異体を含んでなる、１〜６のいずれか１つに記載の組成物。
８．≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体を含んでなる、１〜７のいずれか１つに記載の組成物。
９．脱アミド化抗体変異体量および／または酸化変異体量がペプチドマッピングＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより決定される、４〜８のいずれか１つに記載の組成物。
１０．≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、１〜９のいずれか１つに記載の組成物。
１１．前記凝集抗体変異体が二量体を含んでなる、１０に記載の組成物。
１２．前記凝集抗体変異体量がＳＥＣにより決定される、１０または１１に記載の組成物。
１３．≧５０％の重鎖アミノ酸配列Ｃ末端リシンＫ４４９欠失抗体変異体を含んでなる、１〜１２のいずれか１つに記載の組成物。
１４．≧５０％の重鎖アミノ酸配列ピログルタミン酸Ｎ末端抗体変異体を含んでなる、１〜１３のいずれか１つに記載の組成物。
１５．配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦８０％の酸性抗体変異体および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
１６．配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
１７．配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦５５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
１８．配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
１９．配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；≦５５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４、重鎖アミノ酸配列のＭ２５４、重鎖アミノ酸配列のＭ４３０で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体；および≦２０％凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
２０．モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含み、
６．８〜７．２のｐＨであり、
前記緩衝剤がヒスチジン、リン酸塩、クエン酸、クエン酸塩またはその塩であり、
前記精製調製物が、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、
前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ、
前記抗体がチャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される、
組成物。
２１．前記緩衝剤が第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸およびクエン酸塩から選択される少なくとも１つである、２０の組成物。
２２．前記緩衝剤がリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、またはクエン酸ナトリウムである、２２の組成物。
２３．糖、炭水化物および／または塩をさらに含んでなる、２２の組成物。
２４．スクロースを含んでなる、２３の組成物。
２５．モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなり、
６．８〜７．２のｐＨであり、
前記緩衝剤がリン酸塩またはその塩であり、
前記精製調製物が、図１に示される，ピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、
前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ、
前記抗体がチャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される、
組成物。
２６．前記緩衝剤が第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸およびクエン酸塩から選択される少なくとも１つである、２５の組成物。
２７．糖をさらに含んでなる、２６の組成物。
２８．前記糖がスクロースである、２７の組成物。
２９．ポリソルベート８０を含んでなる、２８の組成物。
３０．２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、容量に対して１２重量％のスクロースおよび容量に対して０．０５重量％のポリソルベート８０の第１の処方物；１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第２の処方物；ならびに２６ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、容量に対して１５重量％のスクロースおよび容量に対して０．０６５重量％のポリソルベート８０の第３の処方物から選択される１つを含んでなる、２９の組成物。
３１．前記抗体が配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトインターロイキン−５に対して約３．５×１０−１１Ｍ以下の解離定数を有する、２９の組成物。
３２．前記モノクローナル抗体濃度が約７５ｍｇ／ｍＬまたは約１００ｍｇ／ｍＬである、３１の組成物。
３３．前記抗体が配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトインターロイキン−５に対して約３．５×１０−１１Ｍ以下の解離定数を有する、３０の組成物。
３４．前記モノクローナル抗体濃度が約７５ｍｇ／ｍＬまたは約１００ｍｇ／ｍＬである、３３の組成物。
３５．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態
を含んでなる、組成物。
３６．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、３５の組成物。
３７．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびに
ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態
を含んでなる、組成物。
３８．前記抗体の酸性形態が、ピーク６５の酸性形態、ピーク７８の酸性形態、ピーク８８の酸性形態およびピーク９２の酸性形態から選択される少なくとも１つを含んでなる、３７の組成物。
３９．前記抗体の酸性形態が、アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの脱アミド化アミノ酸残基を含んでなる、３８の組成物。
４０．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、３９の組成物。
４１．前記抗体の酸性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、３９の組成物。
４２．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；かつ、
前記抗体の酸性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、
３９の組成物。
４３．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびに
ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態
を含んでなる、組成物。
４４．前記抗体の塩基性形態がピーク１１２の塩基性形態を含んでなる、４３の組成物。
４５．前記抗体の塩基性形態が、グリシン４４８であるカルボキシ末端残基を有する重鎖を含んでなる、４４の組成物。
４６．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、４５の組成物。
４７．前記抗体の塩基性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、４５の組成物。
４８．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；かつ、
前記抗体の塩基性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、
４５の組成物。
４９．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；
ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態；ならびに
ｄ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態
を含んでなる、組成物。
５０．前記抗体の酸性形態が、ピーク６５の酸性形態、ピーク７８の酸性形態、ピーク８８の酸性形態およびピーク９２の酸性形態から選択される少なくとも１つを含んでなる、４９の組成物。
５１．前記抗体の酸性形態が、アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの脱アミド化アミノ酸残基を含んでなる、５０の組成物。
５２．前記抗体の塩基性形態がピーク１１２の塩基性形態を含んでなる、４９の組成物。
５３．前記抗体の塩基性形態が、グリシン４４８であるカルボキシ末端残基を有する重鎖を含んでなる、５２の組成物。
５４．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、４９の組成物。
５５．前記抗体の酸性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、４９の組成物。
５６．前記抗体の塩基性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、４９の組成物。
５７．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；かつ、
前記抗体の酸性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、
４９の組成物。
５８．前記抗体の酸性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；かつ、
前記抗体の塩基性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、
４９の組成物。
５９．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；かつ、
前記抗体の塩基性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、
４９の組成物。
６０．前記抗体の主要形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；
前記抗体の酸性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなり；かつ、
前記抗体の塩基性形態が、トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つの酸化アミノ酸残基を含んでなる、
４９の組成物。
６１． ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
を含んでなる、組成物。
６２．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
を含んでなる、組成物。
６３．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
ｂ）アスパラギン２９９で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３１７で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基、アスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基およびアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびに
ｃ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基、システイン２２２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基およびシステイン２２０で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
を含んでなる、組成物。
６４．
ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
を含んでなる、組成物。
６５．
ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
を含んでなる、組成物。
６６．
ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
ｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態；ならびに
ｃ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
を含んでなる、組成物。
６７．
ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
を含んでなる、組成物。
６８．
ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
を含んでなる、組成物。
６９．
ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
ｂ）アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびに
ｃ）トリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８２で酸化された重鎖アミノ酸残基、メチオニン８５で酸化された重鎖アミノ酸残基およびメチオニン４で酸化された軽鎖アミノ酸残基から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
を含んでなる、組成物。
７０．
ａ）アミノ酸残基１のアミノ末端ピログルタミン酸残基、アミノ酸残基４４８のカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基、２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基、３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される；少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態、ならびに
ｂ）アミノ酸残基３１の脱アミド化アスパラギン残基、４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システインからなる群から選択される．少なくとも１つのアミノ酸残基修飾←を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態
を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
７１．
ａ）集団の約９２％以上が抗体重鎖のアミノ酸残基１にアミノ末端ピログルタミン酸残基を含んでなり、
ｂ）集団の約９０％以上が抗体重鎖のアミノ酸残基４４８にカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基を含んでなり、
ｃ）集団の６．０％以下が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｄ）集団の約１．５％以下が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｅ）集団の約４．５％以下が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、
ｆ）集団の約０．８％以下が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、かつ、
ｇ）集団の約６．６％以下が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、
７０の組成物。
７２．
ａ）集団の約９３．７％〜約９８．６％が抗体重鎖のアミノ酸残基１にアミノ末端ピログルタミン酸残基を含んでなり、
ｂ）集団の約９７．６％〜約９９．２％が抗体重鎖のアミノ酸残基４４８にカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基を含んでなり、
ｃ）集団の約０．４％〜約１．２％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｄ）集団の約１．６％〜約４．２％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｅ）集団の約０．７％〜約０．９％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｆ）集団の約０．３％〜約１．１％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｇ）集団の約２．６％〜約３．３％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、
ｈ）集団の約０．５％〜約０．７％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｉ）集団の約３．４％〜約６．５％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、
ｊ）集団の約０．２％〜約０．８％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる、
７１の組成物。
７３．
ａ）２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基、３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン２５４、番の酸化メチオニン、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびに
ｂ）アミノ酸残基３１の脱アミド化アスパラギン残基、４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システインからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態
を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
７４．
ａ）集団の約０．３％〜約１．５％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｂ）集団の約１．５％〜約４．５％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｃ）集団の約０．５％〜約１．５％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｄ）集団の約０．２％〜約１．５％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｅ）集団の約２．５％〜約３．５％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、
ｆ）集団の約０．４％〜約０．８％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｇ）集団の約３．３％〜約６．６％が抗体軽鎖アミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、
ｈ）集団の約０．１％〜約１％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる、
７３の組成物。
７５．
ａ）集団の約０．４％〜約１．２％が抗体重鎖の３１７番にアミド化アスパラギン残基 を含んでなり、
ｂ）集団の約１．６％〜約４．２％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｃ）集団の約０．７％〜約０．９％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｄ）集団の約０．３％〜約１．１％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｅ）集団の約２．６％〜約３．３％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、
ｆ）集団の約０．５％〜約０．７％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｇ）集団の約３．４％〜約６．５％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、
ｈ）集団の約０．２％〜約０．８％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる、
７４の組成物。
７６．
ａ）２９９番の脱アミド化アスパラギン残基、３１７番の脱アミド化アスパラギン残基および３８６番の脱アミド化アスパラギン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびに
ｂ）アミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態
を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
７７．
ａ）集団の約０．３％〜約１．５％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｂ）集団の約１．５％〜約４．５％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、
ｃ）集団の約３．３％〜約６．６％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、
７６の組成物。
７８．
ａ）集団の約０．４％〜約１．２％が抗体重鎖の３１７番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、
ｂ）集団の約１．６％〜約４．２％が抗体重鎖の３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなり、かつ、
ｃ）集団の約３．４％〜約６．５％が抗体軽鎖のアミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、
７７の組成物。
７９．
ａ）５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、８２番の酸化メチオニン残基、８５番の酸化メチオニン残基、２２２番の酸化システイン、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびに
ｂ）４番の酸化メチオニン残基および２２０番の酸化システインからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態
を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
８０．
ｃ）集団の約０．５％〜約１．５％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｄ）集団の約０．２％〜約１．５％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｅ）集団の約２．５％〜約３．５％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、
ｆ）集団の約０．４％〜約０．８％が抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、かつ、
ｇ）集団の約０．１％〜約１％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
７９の組成物。
８１．
ａ）集団の約０．７％〜約０．９％が抗体重鎖の６４番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｂ）集団の約０．３％〜約１．１％が抗体重鎖の８２番に酸化メチオニン残基または抗体重鎖の８５番に酸化メチオニン残基を含んでなり、
ｃ）集団の約２．６％〜約３．３％が抗体重鎖の２５４番に酸化メチオニンを含んでなり、
ｄ）集団の約０．５％〜約０．７％に抗体重鎖の４３０番に酸化メチオニン残基を含んでなり、かつ、
ｅ）集団の約０．２％〜約０．８％が抗体軽鎖の４番に酸化メチオニン残基を含んでなる、
８０の組成物。
８２．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態
を含んでなる、組成物。
８３．
ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびに
ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の最大約８０％を占める前記抗体の酸性形態、
を含んでなる、組成物。
８４．喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎からなる群から選択される疾患の処置のための、１〜８３のいずれかに記載の組成物。
８５．被験体において疾患を処置する方法であって、
ａ）喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎からなる群から選択される疾患を有する被験体を特定する工程；および
ｂ）治療上有効な量の１〜８４のいずれかに記載の組成物を前記被験体に投与する工程
を含んでなり、それにより、前記被験体の疾患が処置される、方法。
８６．
ａ）≧０．７０のＩＬ−５特異的抗原結合；および／または
ｂ）≧７０％のＦｃＲｎ結合
を有する、２０〜８３の組成物。
８７．ａ）特異的抗原結合が０．７０〜１．３０の範囲であり；かつ／またはｂ）ＦｃＲｎ結合が７０％〜１３０％の範囲である、２０〜８３の組成物。
８８．≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、２０〜８３の組成物。
８９．前記凝集抗体変異体が二量体を含んでなる、２０〜８３の組成物。
９０．１〜８３の組成物を生産する方法であって、
ａ）宿主細胞で、配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を発現させる工程；
ｂ）前記細胞を約６．７５〜約７．００のｐＨにて、１６６日以内のｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞齢で約１２〜約１８日間増殖させる工程；
ｃ）細胞培養上清を採取する工程；
ｄ）前記細胞培養上清をプロテインＡ樹脂またはプロテインＧ樹脂と接触させて抗体分子を結合させる工程；
ｅ）前記抗体分子を前記樹脂から溶出させて第１の溶出液を得る工程；
ｆ）前記第１の溶出液を約３．３〜約３．７のｐＨで約１５〜約２４０分間処理して、処理済みの第１の溶出液を得る工程；
ｇ）前記処理済みの第１の溶出液を陰イオン交換樹脂と、約８．３〜約８．７のロードｐＨで接触させる工程；
ｈ）前記陰イオン交換樹脂から第２の溶出液を回収し、これを約９６時間以内保持する工程；
ｉ）前記第２の溶出液をグアニジンおよび硫酸アンモニウムで処理して溶液を得る工程；
ｊ）前記溶液を疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂床と、約１２ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比〜約２７ｇタンパク質／Ｌ樹脂のロード比で接触させる工程；
ｋ）前記抗体分子を含んでなる第３の溶出液を前記疎水性相互作用クロマトグラフィー樹脂から、約９樹脂床容量〜約１１樹脂床容量の溶出勾配容量および最大ピーク高さの約１７％〜最大ピーク高さの約２３％の溶出ピークカットストップで溶出させる工程；および
ｌ）前記第３の溶出液を処方する工程
を含んでなり、それにより１〜８３の組成物が生産される、方法。
９１．９０の方法により生産される１〜８３の組成物。
９２．モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなり、
６．２〜６．６のｐＨであり、
前記緩衝剤がヒスチジン、リン酸塩、クエン酸、クエン酸一水和物、クエン酸塩またはその塩であり、
前記精製調製物が、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、
前記抗体が配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ、
前記抗体がチャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される、
組成物。
９３．前記緩衝剤が第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸およびクエン酸一水和物から選択される少なくとも１つである、９２の組成物。
９４．前記緩衝剤がリン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸、クエン酸一水和物またはクエン酸ナトリウムである、９２の組成物。
９５．糖、炭水化物および／または塩をさらに含んでなる、９２の組成物。
９６．スクロースを含んでなる、９５の組成物。
９７．モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなり、
６．２〜６．６のｐＨであり、
前記緩衝剤がリン酸塩またはその塩であり、
前記精製調製物が、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、
前記抗体が配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ、
前記抗体がチャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される、
組成物。
９８．前記緩衝剤が第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸、クエン酸一水和物およびクエン酸塩から選択される少なくとも１つである、９７の組成物。
９９．糖をさらに含んでなる、９８の組成物。
１００．前記糖がスクロースである、９９の組成物。
１０１．ポリソルベート８０を含んでなる、１００の組成物。
１０２．１６．１ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．９ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第１の処方物；１５．２ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．８ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第２の処方物；１５．８ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．２ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第３の処方物；１６．３ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、３．７ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第４の処方物；ならびに１５．５ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、４．５ｍＭのクエン酸一水和物、容量に対して１２重量％のスクロース、容量に対して０．０２重量％のポリソルベート８０および０．０５ｍＭのＥＤＴＡの第５の処方物から選択される１つを含んでなる、１０１の組成物。
１０３．前記抗体が配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトインターロイキン−５に対して約３．５×１０−１１Ｍ以下の解離定数を有する、１０１の組成物。
１０４．前記モノクローナル抗体濃度が約７５ｍｇ／ｍＬまたは約１００ｍｇ／ｍＬである、１０１の組成物。
１０５．前記抗体が配列番号１１で示されるアミノ酸配列を含んでなるヒトインターロイキン−５に対して約３．５×１０−１１Ｍ以下の解離定数を有する、１０２の組成物。
１０６．前記抗体が約７５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの間の濃度である、１〜１０５のいずれか１つに記載の組成物。
１０７．
ａ）６．８〜７．２の間のｐＨを提供する、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸塩、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、およびヒスチジンからなる群から選択される緩衝剤；および／または
ｂ）糖；および／または
ｃ）ポリソルベート８０；および／またはｄ）ＥＤＴＡ
のうちの１つまたは組合せをさらに含んでなる、１〜１０６のいずれか１つに記載の組成物。
１０８．
ａ）６．２〜６．６の間のｐＨを提供する、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸塩、クエン酸一水和物、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、およびヒスチジンからなる群から選択される緩衝剤；および／または
ｂ）糖；および／または
ｃ）ポリソルベート８０；および／またはｄ）ＥＤＴＡ
のうちの１つまたは組合せをさらに含んでなる、１〜１０７のいずれか１つに記載の組成物。
３３．療法において使用するための、１〜１０８のいずれかに記載の組成物。
３５．喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎の処置に使用するための、１〜１０８のいずれかに記載の組成物。
実施例１
組成物の作製
モノクローナル抗ＩＬ−５抗体メポリズマブを含んでなる組成物の複数のバッチを作製した。
配列番号１３および配列番号１４で示される核酸配列を含んでなる発現ベクター構築物で安定トランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣細胞の接種物を、液体細胞培養培地を含有する５０００Ｌのバイオリアクターで培養した。これらの核酸によりコードされている成熟抗体はメポリズマブであり、配列番号１で示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２で示される軽鎖アミノ酸配列を含んでなる。
バイオリアクターは、約３４．５℃〜約３５．５℃の温度で作動させた。空気および酸素は培養培地中に散布し、約６．７５〜７．００のｐＨを維持した。培養期間は約１２〜１８日であった。ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞齢（マスターセルバンクの最初の解凍から採取までの培養日数）は１６６日以内であった。この後、清澄な細胞培養上清を細胞培養培地の遠心分離および深層濾過により採取した。次に、この清澄な上清をプロテインＡクロマトグラフィーに付し、このクロマトグラフィーカラムから不純物を洗い流した。次に、抗体分子を含む結合タンパク質をプロテインＡカラムから溶出させ、約３．３〜３．７のｐＨで約１５〜２４０分間処理した。その後、この処理調製物を約ｐＨ４．３〜４．７に調整し、約２０〜１１１０分間保持した。次に、この処理調製物をデプスフィルターおよび０．５／０．２μｍ二層フィルターの濾過トレインで清澄化した。その後、濾過した調製物を約８．３〜８．７のロードｐＨでＱ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ファストフロー陰イオン交換クロマトグラフィーに付し、クロマトグラフィーカラムから溶出させた。次に、この溶出液を約９６時間以内保持した。その後、グアニジンおよび硫酸アンモニウムを加えた。グアニジンを約１．８Ｍ〜２．２Ｍの濃度まで加え、約１５〜２４０分間保持した。その後、この溶液を約１２ｇタンパク質／Ｌ樹脂〜約２７ｇ／Ｌ樹脂のロード比、約９〜約１１の溶出勾配容量（床容量；ＢＶ）、および約１７〜約２３の溶出ピークカットストップ（最大ピーク高さの％）でフェニルＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）ファストフロークロマトグラフィーに付した。その後、Ｐｌａｎｏｖａ ２０Ｎウイルス除去フィルターを用いてウイルス濾過を行った。次に、この濾液を約４６ｇタンパク質／Ｌ〜約６６ｇタンパク質／Ｌの目標濃度に調整し、約２０ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物および容量に対して１２重量％のスクロースを含んでなる溶液を用いた接線濾過および限外濾過交換によりバルク原薬(bulk drug substances)（ＢＤＳ）を処方した。その後、この溶液を７６ｇタンパク質／Ｌ〜約８２ｇタンパク質／Ｌの目標濃度に調整し、容量に対して約０．０５重量％のポリソルベート８０を加えた。その後、この溶液を０．５／０．２μｍＰＥＳフィルターで濾過し、溶液の容器を充填し、凍結させた。薬物製品は当技術分野で周知の製造法による解凍およびバルクコンテナの組合せ、その後のバルクのバイアルへの濾過、凍結乾燥、封栓および圧着を含む無菌製造法を用いて製造した。最終的な薬物製品調製物は、単回使用バイアル中の凍結乾燥薬物製品である。
生産された各バッチからの凍結乾燥品を水の添加により再構成し、１００ｍｇ／ｍＬのタンパク質、モノクローナル抗ＩＬ−５メポリズマブ抗体および２６ｍＭの第二リン酸ナトリウム七水和物、容量に対して１５重量％のスクロースおよび容量に対して０．０６５重量％のポリソルベート８０を含んでなる組成物を約６．８〜約７．２のｐＨで作製した。
実施例２
組成物の特性評価
上記のように作製されたモノクローナル抗ＩＬ−５抗体を含んでなる組成物のバッチからのサンプルを特性決定した。
キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）は、この組成物（例えば、組成物参照標準（ＲＳ）１０１２４５７２２）中の６つの抗体アイソフォームの存在を一貫して示した。図１参照。これらのアイソフォームは、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２のアイソフォームである。本組成物のサンプルを、標準法を用いてｃＩＥＦに付した。ｃＩＥＦにより分析されるサンプルにｐＩ７．９およびｐＩ９．４６標準を含めた。図１に示されるｃＩＥＦ電気泳動図は、複数のバッチからの組成物に代表的なものである。
電気泳動図は、本組成物が抗体の主要形態、酸性形態および塩基性形態を含んでなることを示す。主要形態は図１に見て取ることができ、場合によってはピーク１００としても特定される。前記抗体の酸性形態は、図１のピーク６５、ピーク７８、ピーク８８およびピーク９２の形態に相当する。抗体の塩基性形態は、図１のピーク１１２の形態に相当する。
ピークの割り当てに使用される式は次の通りである：
ピーク名＝ｉｎｔ｛（ｐＩピーク−８）／（ｐＩメイン−８）＊１００｝式中：ｉｎｔ＝整数およびｐＩピーク＝呼称されるピークのｐＩ。表７は、モノクローナル抗ＩＬ−５抗体を含んでなる組成物のｃＩＥＦ電気泳動図に関するピーク命名規則を示す。ここに記載されるように決定されたピークの名称は観測された電気泳動／クロマトグラフィーパターンに基づいて確認する必要がある。ここに記載される範囲内にないピークは、上式に従って処理する必要がある。
電気泳動図ピークの積分解析を行った。表８参照。
これは、主要形態がサンプルの総ピーク面積の５０．０％以上に相当したことを示した（約５８．１％〜６２．３％の間の値が同様に見られる）。これはまた、酸性形態がサンプルの総ピーク面積の４５．０％以下に相当したことを示した（約２０％〜約４５％の間、例えば、３２．２％〜４０．７％の間が同様に見られる）。塩基性形態は、サンプルの総ピーク面積の約１％〜約１５％に相当した（約１．２％〜約４．９％の間の値が同様に見られる）。
次に、ｃＩＥＦにより得られた主要形態、酸性形態および塩基性形態のピーク画分を、弱陽イオン交換（ＷＣＸ）、トリプシンペプチドマッピングおよび液体クロマトグラフィー−質量分析／質量分析（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）によりさらに分析した。標準的方法をこれらの分析に使用した。
これらのＷＣＸ、トリプシンペプチドマッピングおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳの結果は、主要形態ピーク画分が２つのＩｇＧ１ ｍＡｂ修飾を含んでいたことを示した。よって、配列番号 の抗体重鎖アミノ酸配列では、９９．６％のＮ末端グルタミン（Ｇｌｎ、Ｑ）が環化されてピログルタミン酸（ｐＧｌｕ）となっており、重鎖（ＨＣ）Ｃ末端リシン（Ｌｙｓ、Ｋ）４４９の９９．９％が切断されていた。一般に、試験したバッチのｐＧｌｕレベルは＞９５．０％であり、Ｃ末端Ｋ４４９不在のＨＣのレベルは＞９８．０％であった。
これらのＷＣＸ、トリプシンペプチドマッピングおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳ結果はまた、酸性形態ピークに関して、脱アミド化に特徴的な１ダルトン質量シフトが見られたことを示した。ペプチドマッピングＬＣ−ＭＳ／ＭＳは、酸性形態ピークが脱アミド化抗体種の混合物を含有することを示した。脱アミド化は、配列番号１で示されるアミノ酸配列のＨＣ Ｎ３８６および配列番号２で示されるアミノ酸配列のＬＣ Ｎ３１で主として見られた。配列番号１で示されるアミノ酸配列のＨＣ Ｎ３１７では、より低レベルの脱アミド化も見られた。
全体として、この実験データは、配列番号１で示されるアミノ酸配列のアスパラギン残基ＨＣ Ｎ３１７、ＨＣ Ｎ３８６、ＨＣ Ｎ２９９および配列番号２で示されるアミノ酸配列のＬＣ Ｎ３１は脱アミド化に対して感受性があったことを示した。
これらのＷＣＸ、トリプシンペプチドマッピングおよびＬＣ−ＭＳ／ＭＳは、塩基性形態ピークに関して、このピークの抗体形態が少なくとも１つの重鎖カルボキシ末端リシンアミノ酸残基を無傷で有していたことを示した。無傷のリシンを有する抗体種は、これらが存在しない他の形態に比べて、これらの残基に由来する余分な正電荷のために塩基性領域に移動する。よって、ピーク１１２などの塩基性形態は、一方または両方の重鎖アミノ酸配列が配列番号１で示されるカルボキシ末端リシンアミノ酸配列を無傷で有する抗体形態に相当する。
モノクローナル抗ＩＬ−５抗体を含んでなる組成物の一次配列決定もまた、標準ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ技術により行った。これらの解析では、組成物中の抗体分子の一次構造およびアミノ酸配列を調べた。特に、これらの解析は、抗ＩＬ−５抗体においてどのアミノ酸残基が脱アミド化、酸化、環化され、または不在であったか、および組成物中に存在する抗ＩＬ−５抗体の集団（例えば、配列番号１３の核酸配列および配列番号１４の核酸配列から発現されたもの）中のこれらのパーセンテージを示した。表９参照。
抗体変異体
メポリズマブは、可溶性ＩＬ−５と結合し、可溶性ＩＬ−５がその受容体と結合するのを遮断する。ＩＬ−５の構造は分泌型タンパク質であることを示し、いずれの細胞種にもＩＬ−５の膜結合型の証拠はない。よって、Ｆｃエフェクター機能はメポリズマブ作用機序（ＭＯＡ）の一部ではない。メポリズマブのＭＯＡおよびＰＫ特性に基づけば、この抗体の生物活性に関与する２つの機能があり、それはＣＤＲを介したＩＬ−５への結合とＦｃ領域を介したＦｃＲｎ受容体への結合である。
上記で行った、下記に示されるような詳細な特性評価研究を通じ、少なくとも脱アミド化(deamidaton)、酸化、および凝集がメポリズマブの組成物中で抗体変異体に至り得ること、およびこれらの変異体がメポリズマブの機能に影響を及ぼし得ることが決定付けられた。適当な生物機能を確保するためには、これらの変異体の特定のレベルが維持されなければならない。本明細書では、機能は、０．７０〜１．３０特異的抗原結合活性（ＩＬ５−結合）および７０％〜１３０％ＦｃＲｎ結合という許容範囲内で記載される。よって、機能に影響を及ぼす抗体変異体を同定するための工程には、（ｉ）抗体変異体が形態されるか、（ｉｉ）その変異体が機能に影響を及ぼすか、および（ｉｉｉ）どの程度の変異体が機能的組成物をもたらし得るかということが含まれる。
機能
ＩＬ−５結合：それまでに作成された総ての原薬（ＤＳ）および薬物製品（ＤＰ）リリースデータおよび安定性データを用いて許容可能な抗原結合機能活性範囲を計算するために、統計分析を行った。計算された統計範囲を臨床試験と比較し、効力に及ぼす製品関連変異体の既知の影響に基づいて評価した。この分析に基づけば、リリース時および保存寿命の終了時の許容可能な抗原結合機能活性範囲は、０．７０〜１．３０の特異的抗原結合である。
ＩＬ−５特異的結合は、結合モードで行うＢＩＡＣＯＲＥ（商標）装置を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により決定した。このＳＰＲアッセイは、効力に関連したメポリズマブおよびメポリズマブ変異体の変化から生じる抗原結合の低下を検出することができる。
ＳＰＲは、メポリズマブの特異的抗原結合活性を決定するために使用する。まず、メポリズマブ参照標準を固定化されたプロテインＡを含有するＣＭ５センサーチップの表面に注入し、次に、固定濃度の希釈ＩＬ−５タンパク質を注入し、ＩＬ−５が、捕捉されたメポリズマブサンプルに結合することを可能とする。メポリズマブのＩＬ−５への機能的結合として報告される、ＩＬ−５に結合したメポリズマブの濃度は、対応するメポリズマブ参照標準検量線から決定される。ＳＰＲ結果はＩＬ−５に対するメポリズマブの機能的結合濃度を総タンパク質濃度で割った商として報告した。
ＦｃＲｎ結合：メポリズマブの新生児Ｆｃ（ＦｃＲｎ）受容体結合活性もまた、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）装置を用いた表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定した。それまでにメポリズマブ製品開発中に作成された結果、既知のアッセイ変数、および同様のｍＡｂ製品に関して作成された結果に基づき、許容可能なＦｃＲｎ結合機能活性範囲は７０〜１３０％であると決定された。
メポリズマブのＦｃ領域はＦｃＲｎと結合し、この相互作用は、メポリズマブの長い血清半減期（平均終末半減期＝２０日）を反映する。ＳＰＲアッセイでは、固定化されたＦｃＲｎ受容体を含有するニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）センサーチップを用いて固定濃度のメポリズマブを捕捉させた。まず、Ｎｉ２＋を固定濃度で注入し、ＮＴＡを介したＮｉ２＋のキレート化によりＮＴＡセンサーチップに捕捉した。次に、ＦｃＲｎ受容体を固定濃度で注入し、ＦｃＲｎ受容体のα鎖のＣ末端にある６×ヒスチジンタグが、予め捕捉されていたＮｉ２＋に結合する。次に、標準曲線濃度範囲内で希釈しておいたメポリズマブを、捕捉されたＦｃＲｎ受容体を含有するＮＴＡセンサーチップの表面に注入した。ＦｃＲｎ受容体に結合したメポリズマブの濃度を、対応するメポリズマブ参照標準検量線から外挿した。このＳＰＲ結果は、ＦｃＲｎ受容体に対するメポリズマブの機能的結合濃度を総タンパク質濃度で割った商として報告した。
特異的抗原結合およびＦｃＲｎ結合のためのこのＳＰＲ法は、メポリズマブの参照標準を使用する。メポリズマブ参照標準は単に、方法が適切に実施されていることを保証するためにシステムの適合性およびサンプル比較データを得る目的で、アッセイで使用される。参照標準は検量線の確立を可能とし、サンプルの濃度はこの曲線から外挿される。
酸性変異体
次に、抗体機能／有効性、すなわち、抗原結合およびＦｃＲｎ結合活性に及ぼす酸性変異体のレベルの上昇、例えば、脱アミド化の影響を決定するために強制分解試験を行った。
ｐＨ９．０での強制分解試験では、組成物は６Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ９．０に調整し、４０℃で３０日間インキュベートした。サンプルを０、３、７、１４および３０日目に採取し、対照として使用した非ストレス組成物と比較した。次に、ｐＨ９．０ストレスサンプルをｃＩＥＦにより分析した。これらの結果を表１０および図１で示す（０日目および３日目）。ｐＨ９．０ストレス組成物は、１４日目にｃＩＥＦアッセイの能力を超えて分解されたので、７日までの結果だけを表１０に示す。ｐＨ９．０で３日間のストレス条件では、全酸性領域は、組成物の２つの異なるバッチについて７４．４％および７１．９％であることが認められた。
次に、異なるバッチからの組成物のｐＨ９．０強制分解試験サンプルを、標準表面プラズモン共鳴(surface plasmon reasonance)（ＳＰＲ）法を用いて、特異的抗原結合活性（表１１）およびＦｃＲｎ結合活性（表１２）に関して試験した。
３日目の（すなわち、約７２〜７４％酸性変異体）のＩＬ５特異的結合活性は、ｐＨ９．０強制分解を受けた組成物の両バッチで０．７４であった。ＦｃＲｎ結合活性はｐＨ９．０強制分解を受けた組成物の両バッチでそれぞれ８２％および８０％であった。これらの値は、各アッセイの受容判定基準内であった。特異的抗原結合活性の受容判定基準は０．７０〜１．３０であり、ＦｃＲｎ結合の受容判定基準は７０％〜１３０％である。よって、メポリズマブ組成物の機能を維持するための酸性変異体は、約７４％といった高いものであり得る。
脱アミド化
強制分解試験は、脱アミド化に対して感受性があることと思われるどの残基が実際に脱アミド化するか、および脱アミド化変異体が機能に影響を及ぼすか、および機能を維持するために組成物内にどの程度の脱アミド化が許容されるかを決定することができる。脱アミド化に対して感受性があると実験的に決定されたアスパラギン残基は、ＨＣ Ｎ３１７、ＨＣ Ｎ３８６、ＨＣ Ｎ２９９、およびＬＣ Ｎ３１である。強制分解試験は、抗原結合活性に及ぼす、配列番号２で示される抗体軽鎖アミノ酸配列における脱アミド化ＬＣ Ｎ３１レベルの上昇の影響を決定するために行った。これらの試験では、異なるバッチからの組成物を６Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ９．０に調整し、４０℃で３０日間インキュベートした。０、３、７、１４および３０日目にサンプルを採取し、対照として使用した非ストレス組成物（例えば、参照標準）と比較した。ｐＨ９．０ストレスサンプルをペプチドマッピングＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより試験した。これらの結果を表１３に示す。メポリズマブがｐＨ９．０で３日間保持される場合、配列番号２で示される抗体軽鎖アミノ酸配列中の脱アミド化ＬＣ Ｎ３１のレベルは、組成物の異なるバッチで１７．４％および１６．８％であった。表１３参照。ｐＨ９．０で３日間保持されたメポリズマブに関する抗原およびＦｃＲＮ結合データを表１１および表１２に示す。
従って、３日目の、０．７４の特異的抗原結合活性（表１１）、および８４％および８２％のＦｃＲｎ結合活性（表１２）は、最大１７％前後のＮ３１における脱アミド化、および最大２８％前後のＮ３８６における脱アミド化（表１３）は、機能的組成物を０．７０〜１．３０特異的抗原結合活性および７０％〜１３０％ＦｃＲｎ結合の許容可能な範囲内に維持できることを示す。
酸化
組成物の重鎖および軽鎖中のメチオニンおよび他のアミノ酸残基の酸化に対する感受性を実験的に検討するために強制分解試験を行った。強制分解試験は、酸化に対して感受性があると思われるどの残基が実際に酸化するか、およびその酸化変異体が機能に影響を及ぼすか、および機能／有効性（抗原結合および／またはＦｃＲｎ結合）を維持するために組成物内にどの程度の酸化が許容されるかを決定することができる。
酸化を誘導するために、組成物のサンプルを室温（ＲＴ）で４８時間、０．１％過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）とともにインキュベートした。サンプルを０、６、１２、２４、および４８時間で回収した。これらを、対照として使用した非ストレス組成物（例えば、参照標準）と比較した。これらの試験から、最も酸化傾向の大きいメチオニン（Ｍ）残基として、配列番号１で示される抗体重鎖アミノ酸配列のＨＣ Ｍ６４、ＨＣ Ｍ８２、ＨＣ Ｍ８５、ＨＣ Ｍ２５４、ＨＣ Ｍ３６０、ＨＣ Ｍ４３０、および配列番号２で示される抗体軽鎖アミノ酸配列のＬＣ Ｍ４が含まれると決定された。最も酸化傾向の大きいメチオニン（Ｍ）残基として、ＨＣ ＣＤＲ２内に位置するＭ６４；Ｆｃ領域内のＦｃＲｎおよびプロテインＡ結合ポケット内に位置するＭ２５４およびＭ４３０；ならびに配列番号１で示される抗体重鎖アミノ酸配列のＭ３６０が含まれる。程度は低いが酸化傾向のあるメチオニン残基としては、配列番号１で示される抗体重鎖アミノ酸配列のＨＣ Ｍ４、ＨＣ Ｍ８２、およびＨＣ Ｍ８５が含まれた。加えて、配列番号２で示される抗体軽鎖アミノ酸配列のＬＣ Ｃ２２０は、化学誘導条件下で酸化傾向があることが決定付けられた。重要なこととして、ＬＣ Ｃ２２０およびＨＣ Ｃ２２２は、重鎖および軽鎖を連結する鎖内ジスルフィド結合を形成する。
メチオニン酸化から生じるスルホキシドおよびシステイン酸化から生じるスルホン酸のレベルはペプチドマッピングＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて測定し、表１４にまとめる。ＨＣ Ｍ６４、Ｍ２５４、Ｍ３６０、およびＭ４３０は、０．１％過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）とともにインキュベートした後４８時間の時点で７０％を超えるものが酸化された。
組成物中の抗体による特異的抗原結合をＳＰＲにより測定した。これは、表１５に要約されるように異なるＨ２Ｏ２ストレスバッチにおける４８時間での特異的抗原結合活性のより大きな低下を示した。この抗原結合の低下は、ペプチドマッピングＬＣ−ＭＳ／ＭＳにより見られた比較的高レベルのＭ６４酸化と相関がある。組成物の異なるバッチからの供試サンプルの特異的抗原結合活性は、それぞれおよそ１５％および３２％低下した。メポリズマブが８５．６％酸化されても、特異的抗原結合活性はなお０．５７で保持された。 メポリズマブの酸化の累積レベルと特異的抗原結合活性の間の線形関係を用い、最悪の場合、ＨＣ Ｍ６４はおよそ５０％酸化され得るが、組成物中の抗体は抗原結合活性をなお０．７０〜１．３０の範囲に保持するであろうことが決定付けられた。
組成物の異なるバッチからのＨ２Ｏ２ストレスサンプルのＦｃＲｎ結合活性プロフィールは極めて類似しており、表１６に示されるように、対照（非処理参照標準）に比べて４８時間の時点のＦｃＲｎ結合活性に実質的低下を伴った。ＨＣ Ｍ２５４およびＨＣ Ｍ４３０はＦｃ領域内に位置し、酸化された場合、ＦｃＲｎ結合に低下をもたらすことが示されている。強制分解試験の際に作成されたペプチドマッピング結果に基づけば、組成物がＨ２Ｏ２で４８時間化学的に酸化される場合、異なるバッチで見られる酸化ＨＣ Ｍ２５４およびＨＣ Ｍ４３０のレベルは≧９５％である。ＦｃＲｎ結合結果は、組成物の異なるバッチからのＨ２Ｏ２ストレスサンプルで抗原ＦｃＲｎ結合におけるおよそ８０％の低下を示した。メポリズマブが≧９０％酸化されても、ＦｃＲｎ結合活性はなお２２％で保持された。メポリズマブの酸化の累積レベルとＦｃＲｎ結合活性の間の線形関係を用い、最悪の場合、ＨＣ Ｍ２５４およびＨＣ Ｍ４３０は５０％酸化され得るが、組成物中の抗体はＦｃＲｎ結合活性をなお７０％〜１３０％の範囲に保持するであろうことが決定付けられた。
組成物の異なるバッチおいて抗体の抗原結合活性に及ぼす光により誘導されるトリプトファン酸化の影響を決定するために光ストレス試験を行った。これは、抗体重鎖のトリプトファンＷ５２に酸化傾向があることを示した。これらの試験では、異なるバッチからの組成物に１８０万ｌｕｘ−ｈｒの可視光を２５℃でおよそ６０時間当てて光ストレスを誘導した。０、３、７、１４、および３０時間で回収したサンプルを、対照として使用した組成物の非ストレス参照標準と比較した。トリプトファン酸化から生じる二酸化／キヌレニンのレベルは、表１７に要約されるように、露光ストレス組成物の異なるバッチにおいて極めて類似していた。６０時間の露光後にＨＣ Ｗ５２酸化の増加が検出された。
露光ストレス組成物の異なるバッチの抗体の特異的抗原結合活性プロフィールは、特異的抗原結合活性の経時的低下を示した。これを表１８に要約する。メポリズマブがおよそ７％酸化されても、特異的抗原結合活性はなお０．５３で保持された。メポリズマブにおけるトリプトファン酸化の累積レベルと特異的抗原結合活性の間の線形関係を用い、最悪の場合、Ｗ５２は３％酸化され得るが、組成物中の抗体は抗原結合活性をなお０．７０〜１．３０の範囲に保持するであろうことが決定付けられた。
よって、機能（ＩＬ−５結合、および／またはＦｃＲｎ結合）を維持するために、ＨＣ Ｍ６４は５０％まで酸化可能であり、ＨＣ Ｍ２５４およびＨＣ Ｍ４３０は５０％まで酸化可能であり、Ｗ５２は３％まで酸化され得る。
凝集
組成物中の抗体のサイズ分布を、標準非変性サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）法を使用することによりモニタリングした。図３および図４に示されるように、ＲＳ組成物ＳＥＣプロフィールにおいて３つのピークが検出された。相対パーセンテージ面積９９．４％の、７．９分の主要ピークは単量体と同定され、相対パーセンテージ面積０．５％の、およそ６．７分の小ピークは凝集物と同定された。第２の小ピークはいくつかのバッチで見られており、主要ピークの後に溶出し、断片の存在を示す。一般に、このピークはＳＥＣアッセイＱＬ０．１を下回る。
凝集物ピークを、ＳＥＣを多角度光散乱(multi-angle light scattering)（ＭＡＬＳ）検出および分析的超遠心分離(analytical ultracentrifugation)（ＡＵＣ）とともに用いてさらに特性評価した。結果は、ＲＳ組成物に関しては図５に、また、組成物の異なるバッチに関しては図６示されるように、ＳＥＣ−ＭＡＬＳプロフィールが先に溶出するピーク（二量体）と後に溶出するピーク（単量体）を含有することを示す。各ピークを横断する線は、検出された種のモル質量および二量体ピークの位置（サンプル中の二量体の存在量が少ないためにクロマトグラムでは見えにくい）を表す。
ＳＥＣ−ＭＡＬＳデータを、抗体単量体および二量体のモル質量を計算するために使用した。ＲＳ組成物中の、および組成物の異なるバッチの、単量体の得られたモル質量を、表１９に示されるように、１４８，７６０ｋＤａのメポリズマブ単量体理論質量に匹敵した。サンプル中に存在するこの種のレベルが少ないために、二量体に関して見られた分子量に変動が検出された。
自己会合平衡またはより高次の凝集物のクロマトグラフィー分離からの排除の摂動が無いことを確認するために、ＳＥＣを含む画分に基づく方法に対する補足的技術として沈降速度曲線下面積（ＡＵＣ）積分解析を使用した。ＡＵＣ解析の結果は、ｃ（ｓ）分布は、表２０に示されるように、組成物のＲＳバッチおよび組成物の別のバッチの両方で２．８１Ｓの沈降係数を有する、単量体と同定される１つの主要種（主要ピーク）；ならびに組成物のＲＳバッチでは４．８７Ｓおよび組成物の別のバッチでは５．１０Ｓの沈降係数を有する、二量体と同定される１つの凝集物ピークを含有することを示した。ＰＲＳとＢＤＳの間の沈降係数値の違いは実質的なものとは見なされず、サンプル内の二量体の存在量が少ないことによるものである。検出された唯一の高分子量種は二量体であり、これはＳＥＣ−ＵＶおよびＳＥＣ−ＭＡＬＳ結果と一致する。
単量体および二量体に関して決定された沈降係数は、ＩｇＧ１モノクローナル抗体に関して慣例的に見られる値より低かった。メポリズマブの処方物は１２％（ｗ／ｖ）スクロースを含有し、極めて粘稠なサンプルとなり、組成物中のこれらの抗体分子に見られるより低い沈降係数を生じる。ＳＥＣ−ＵＶ、ＳＥＣ−ＭＡＬＳ、およびＡＵＣ解析の結果は、組成物中の凝集物種が抗体二量体であることを示す。
抗原結合活性に及ぼす凝集物の影響を検討するため、異なるバッチからの組成物に対して低ｐＨ試験を行った。異なるバッチからの組成物サンプルを５Ｎ塩酸でｐＨ３．５に調整した。ｐＨ３．５に調整したサンプルを、次に、４０℃で３０日間インキュベートして化学修飾を誘導した。０、３、７、１４および３０日にサンプルを採取し、対照として使用した組成物の非ストレスＲＳサンプルと比較した。これは、組成物が低ｐＨ３．５で化学的にストレスを受けた場合、凝集が主要分解経路の１つであることを示した。
組成物のｐＨ３．５ストレスサンプルのＳＥＣ分解プロフィールを図７に示し、表２１に要約する。低ｐＨ３．５ストレス条件下で、組成物の異なるバッチ間で凝集速度の違いが見られた。しかしながら、３０日までに組成物の両バッチは平衡に達し、同等レベルの凝集を示す。この異なるバッチ間の凝集速度の違いは、これらのバッチで非共有結合性二量体に対して共有結合性二量体のレベルが高いことによるものである。組成物のＭＤＳ１バッチに見られるより緩慢な凝集速度は、ＭＤＳ２バッチに比べて非共有結合性二量体の割合が高いことによるものであり、非共有結合性二量体は平衡が達成されるまで会合したり解離したりし、凝集物形態の全体的な速度を緩慢にし得る。
組成物のｐＨ３．５ストレスバッチのサンプルの特異的抗原結合活性プロフィールは、表２２に要約されるように、特異的抗原結合活性に経時的低下を示した。
組成物のｐＨ３．５ストレスバッチのサンプルのＦｃＲｎ結合活性プロフィールは、表２３に要約されるように、ＦｃＲｎ結合活性に経時的低下を示した。
要約すれば、表２１〜２３は、サンプル中に存在する凝集物がおよそ４０％である場合に、抗原結合およびＦｃＲｎ結合におよそ５０％の低下が見られることを示す。メポリズマブがおよそ４０％凝集した場合でも、特異的抗原結合活性はなお０．５７で保持され、ＦｃＲｎ結合活性は５１％で保持された（表２２ ＭＤＳ２ ３日目）。共有結合性二量体と非有結合性二量体の比が異なるために、３日目のＭＤＳ１とＭＤＳ２の間で凝集物含量に若干異なる分解プロフィールが見られた（表２１）。
メポリズマブの凝集と特異的抗原活性およびＦｃＲｎ結合活性の間の線形関係はＭＤＳ２から使用し、最悪の場合、メポリズマブは２０％凝集物となり得るが、組成物中の抗体は抗原結合活性をなお０．７０〜１．３０の範囲に、また、７０〜１３０％のＦｃＲｎ結合活性に保持するであろうことが決定付けられた。
従って、メポリズマブを含んでなる組成物中の抗体は２０％が凝集物であり得るが、なおＩＬ−５結合活性を０．７０〜１．３０の範囲に、また、ＦｃＲｎ結合活性を７０％〜１３０％の範囲に保持する。
ＨＣＰ
メポリズマブ組成物中の残存ＣＨＯ宿主細胞タンパク質レベルを、酵素結合免疫吸着アッセイ(enzyme-linked immunosorbent assay)（ＥＬＩＳＡ）を用いて測定する。この方法では、メポリズマブの生産プロセス条件を模倣した条件下で増殖させたＣＨＯ細胞株の天然抗原に対して生産された抗体を使用する。
メポリズマブ組成物では、ＨＣＰ含量の許容可能な範囲は≦１０ｎｇ／ｍｇであることが決定された。この範囲は、それまでに作成されたリリースデータに由来し、真の分析的およびプロセス変動を表す。原薬の３７の異なるバッチは以下のＨＣＰ含量を有していた：１．１ｎｇ／ｍｇ（２バッチ）、１．０ｎｇ／ｍｇ（５バッチ）、０．９ｎｇ／ｍｇ（１バッチ）、０．８ｎｇ／ｍｇ（３バッチ）、０．７ｎｇ／ｍｇ（１バッチ）、０．６（１バッチ）、０．５ｎｇ／ｍｇ（１バッチ）、＜０．５ｎｇ／ｍｇ（４バッチ）、＜１ｎｇ／ｍｇ（１９バッチ）。
要約すると、メポリズマブの生物活性に関与する２つの有力な機能があり、それはＣＤＲを介したＩＬ−５への結合とＦｃ領域を介したＦｃＲｎ受容体への結合である。上記で行った詳細な特性評価研究を通じ、特定の脱アミド化抗体変異体、特に、酸化抗体変異体、および凝集抗体変異体が、メポリズマブの組成物の機能に影響を及ぼし得ることが決定付けられた。従って、適当な機能／有効性を確保するためにはこれらの変異体の特定のレベルが維持される必要がある。
実施例３
非公式配列表
下記の下線は、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義に従い、抗体の可変重鎖および可変軽鎖部分におけるＣＤＲ配列またはこれらのＣＤＲ配列をコードする核酸配列を特定する。例えば、配列番号１では、フレームワークおよびＣＤＲが、示されている配列のアミノ近位部分からカルボキシ末端部分へと順に、プレーンテキストフレームワーク１、下線のＣＤＲ１、プレーンテキストフレームワーク２、下線のＣＤＲ２、プレーンテキストフレームワーク３、下線のＣＤＲ３およびプレーンテキストフレームワーク４として表されている。一文字アミノ酸コードの文字の右にあるアスタリスクは、左にあるアミノ酸残基がＮ−グリコシル化部位であることを示す。このスキームは例えば、配列番号１〜４、１１、１２および１９〜２２などに使用されている。これらの配列に示されるアミノ末端メチオニン残基は切断され得る。よって、これらの配列は、ここでアミノ末端メチオニン残基を示していれば、そのようなアミノ末端メチオニン残基を欠くこれらのタンパク質の切断型も開示すると考えるべきである。核酸配列はＤＮＡ核酸配列として表され、「ｔ」核酸残基を含み、対応するＲＮＡ配列は、また、「ｔ」核酸残基が「ｕ」核酸残基も表すと見なされ得るように開示されるものと考えるべきである。加えて、５’近位の「ａｔｇ」開始コドンおよび３’近位の「ｔａａ」、「ｔａｇ」、および「ｔｇａ」終止コドンは、以下のｃＤＮＡ核酸配列から省かれている。例えば、配列番号３１〜３４などの場合がそうである。
メポリズマブ全長重鎖
配列番号１
メポリズマブ全長軽鎖
配列番号２
メポリズマブＶＨ
配列番号３
メポリズマブＶＬ
配列番号４
メポリズマブＣＤＲＨ１
配列番号５
メポリズマブＣＤＲＨ２
配列番号６
メポリズマブＣＤＲＨ３
配列番号７
メポリズマブＣＤＲＬ１
配列番号８
メポリズマブＣＤＲＬ２
配列番号９
メポリズマブＣＤＲＬ３
配列番号１０
ヒトＩＬ−５（成熟タンパク質）
配列番号１１
ヒトＩＬ−５受容体サブユニットαアイソフォーム１（成熟タンパク質）
配列番号１２
メポリズマブ全長重鎖コードＤＮＡ
配列番号１３
メポリズマブ全長軽鎖コードＤＮＡ
配列番号１４
本発明はここに十分に記載され、当業者には、添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、それに対して多くの変更および修飾がなされ得ることが自明である。

Claims (35)

  1. 配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦８０％の酸性抗体変異体を含んでなる、組成物。
  2. 配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦８０％の酸性抗体変異体および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
  3. 配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体、および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
  4. 配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦５５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
  5. 配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
  6. 配列番号１に示される重鎖アミノ酸配列および配列番号２に示される軽鎖アミノ酸配列を有する抗体、または前記重鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖アミノ酸配列および／もしくは前記軽鎖アミノ酸配列と少なくとも９０％同一の軽鎖アミノ酸配列を有する抗体変異体を含んでなる組成物であって、≦２５％の、軽鎖アミノ酸配列のＮ３１で脱アミド化された抗体変異体；≦３５％の、重鎖アミノ酸配列のＮ３８６で脱アミド化された抗体変異体；≦５５％の、重鎖アミノ酸配列のＭ６４、重鎖アミノ酸配列のＭ２５４、重鎖アミノ酸配列のＭ４３０で酸化された抗体変異体；≦３％の、重鎖アミノ酸配列のＷ５２で酸化された抗体変異体；および≦２０％の凝集抗体変異体を含んでなる、組成物。
  7. モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であって、
    ６．８〜７．２のｐＨであり、
    前記緩衝剤がヒスチジン、リン酸もしくはクエン酸、またはその塩であり、
    前記精製調製物が、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、
    前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ、
    前記抗体がチャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される、組成物。
  8. モノクローナル抗体の精製調製物および緩衝剤を含んでなる組成物であって、
    ６．８〜７．２のｐＨであり、
    前記緩衝剤がリン酸またはその塩であり、
    前記精製調製物が、図１に示されるピーク６５、ピーク７８、ピーク８８、ピーク９２、主要ピークおよびピーク１１２により表されるアイソフォームを含んでなり、
    前記抗体が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖アミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖アミノ酸配列を含んでなり、かつ
    前記抗体がチャイニーズハムスター卵巣細胞により生産される、組成物。
  9. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態
    を含んでなる、組成物。
  10. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびに
    ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態
    を含んでなる、組成物。
  11. ａ）抗配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびに
    ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態
    を含んでなる、組成物。
  12. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の５０％以上を占める前記抗体の主要形態；
    ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約２０％〜約４５％を占める前記抗体の酸性形態；ならびに
    ｄ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の約１％〜約１５％を占める前記抗体の塩基性形態
    を含んでなる、組成物。
  13. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）３５％以下のアスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基および２５％以下のアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
    を含んでなる、組成物。
  14. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）３％以下のトリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、５５％以下のメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、５０％以下のメチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、５０％以下のメチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、および５０％以下のメチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
    を含んでなる、組成物。
  15. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）３５％以下のアスパラギン３８６で脱アミド化された重鎖アミノ酸残基および２５％以下のアスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびに
    ｃ）３％以下のトリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、５０％以下のメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基、５０％以下のメチオニン２５４で酸化された重鎖アミノ酸残基、５０％以下のメチオニン３６０で酸化された重鎖アミノ酸残基、および５０％以下のメチオニン４３０で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
    を含んでなる、組成物。
  16. ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）２５％以下の、アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
    を含んでなる、組成物。
  17. ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）３％以下のトリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基および５０％以下のメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
    を含んでなる、組成物。
  18. ａ）配列番号５で示されるＣＤＲＨ１アミノ酸配列、配列番号６で示されるＣＤＲＨ２アミノ酸配列、および配列番号７で示されるＣＤＲＨ３アミノ酸配列を有する重鎖可変領域と；配列番号８で示されるＣＤＲＬ１アミノ酸配列、配列番号９で示されるＣＤＲＬ２アミノ酸配列、および配列番号１０で示されるＣＤＲＬ３アミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）３％以下のトリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基および５０％以下のメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態；ならびに
    ｃ）２５％以下の、アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
    を含んでなる、組成物。
  19. ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）２５％以下の、アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態
    を含んでなる、組成物。
  20. ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）３％以下のトリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、および５０％以下のメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
    を含んでなる、組成物。
  21. ａ）配列番号３で示されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域配列および配列番号４で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）２５％以下の、アスパラギン３１で脱アミド化された軽鎖アミノ酸残基を含んでなる前記抗体の脱アミド化形態；ならびに
    ｃ）３％以下のトリプトファン５２で酸化された重鎖アミノ酸残基、および５０％以下のメチオニン６４で酸化された重鎖アミノ酸残基からなる群から選択される少なくとも１つを含んでなる前記抗体の酸化形態
    を含んでなる、組成物。
  22. ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列を有する重鎖配列および配列番号２で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）アミノ酸残基１のアミノ末端ピログルタミン酸残基、アミノ酸残基４４８のカルボキシ末端グリシンアミノ酸残基、３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびに
    ｃ）アミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態
    を有する、抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
  23. ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列を有する重鎖配列および配列番号２で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）３８６番の脱アミド化アスパラギン残基、５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、２５４番の酸化メチオニン、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびに
    ｃ）アミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態
    を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
  24. ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列を有する重鎖配列および配列番号２で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）３８６番に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態；ならびに
    ｃ）アミノ酸残基３１に脱アミド化アスパラギン残基を含んでなる、配列番号２で示される前記抗体軽鎖アミノ酸配列の修飾形態
    を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
  25. ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列を有する重鎖配列および配列番号２で示されるアミノ酸配列を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）５２番の酸化トリプトファン残基、６４番の酸化メチオニン残基、２５４番の酸化メチオニン、３６０番の酸化メチオニンおよび４３０番の酸化メチオニン残基からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基修飾を含んでなる、配列番号１で示される前記抗体重鎖アミノ酸配列の修飾形態
    を有する抗ＩＬ−５抗体の集団を含んでなる、組成物。
  26. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；ならびに
    ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態
    を含んでなる、組成物。
  27. ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する重鎖配列および配列番号２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する軽鎖配列を含んでなる抗ＩＬ−５抗体；
    ｂ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の２０％以上を占める前記抗体の主要形態；ならびに
    ｃ）組成物のキャピラリー等電点電気泳動を用いて測定した際に組成物中のタンパク質の最大約８０％を占める前記抗体の酸性形態
    を含んでなる、組成物。
  28. 前記抗体が約７５ｍｇ／ｍｌ〜約１００ｍｇ／ｍｌの間の濃度である、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
  29. （ａ）６．８〜７．２の間のｐＨを与える、第二リン酸ナトリウム七水和物、リン酸塩、クエン酸塩、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、クエン酸ナトリウム、およびヒスチジンからなる群から選択される緩衝剤；および／または
    （ｂ）糖；および／または
    （ｃ）ポリソルベート８０；および／または
    （ｄ）ＥＤＴＡ
    のうちの１つまたは組合せをさらに含んでなる、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
  30. 配列番号１および配列番号２を含んでなる参照標準組成物と比べて、少なくとも０．７０のＩＬ−５特異的抗原結合活性；および／または少なくとも７０％のＦｃＲｎ結合活性を有する、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の組成物。
  31. 被験体において疾患を処置する方法であって、
    ａ）喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎からなる群から選択される疾患を有する被験体を特定する工程；および
    ｂ）治療上有効な量の請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物を前記被験体に投与する工程
    を含んでなり、それにより前記被験体における疾患が処置される、方法。
  32. 前記組成物が、４週間に１回、１００ｍｇの用量で投与される、請求項３１に記載の方法。
  33. 療法において使用するための、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
  34. 請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物と、薬学的に許容可能な担体とを含んでなる、医薬組成物。
  35. 喘息、重症好酸球性喘息、重症喘息、コントロール不良好酸球性喘息、好酸球性喘息、亜好酸球性喘息、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、好酸球増加症候群、鼻ポリープ、水疱性類天疱瘡および好酸球性食道炎の処置において使用するための、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の組成物。
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