JP2018194488A - 間質性肺炎の病期の判別を補助する方法 - Google Patents

Abstract

【課題】間質性肺炎の病期の判別を補助し、これにより詳細な臨床情報の取得を補助することができる新規な方法を提供すること。
【解決手段】間質性肺炎の病期の判別を補助する方法は、ヒトの第１検体中の、プロスタグランジンＥ２及びその代謝物よりなる群より選択される少なくとも１つの炎症マーカーを測定する工程と、ヒトの第２検体中のＫＬ−６を測定する工程とを含む。第１検体としては尿検体が好ましく、炎症マーカーとしては尿中プロスタグランジンＥ２主要代謝物が好ましい。
【選択図】図１

Description

本発明は、間質性肺炎の病期の判別を補助する方法に関する。

間質性肺炎とは、肺胞壁及びその周辺に生じる炎症や線維化等の疾患の総称であり、原因不明で生じる特発性間質性肺炎（ＩＩＰｓ）と、膠原病、薬剤、放射線、感染症、粉じん等を原因として発症する間質性肺炎とに分けられる。ＩＩＰｓの半数以上を占めるのが特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。ＩＰＦは慢性かつ進行性の経過を示し、高度の線維化を生じる疾患である。ＩＰＦを含む間質性肺炎の鑑別診断・病期判定は、高分解能コンピューター断層撮影（ＨＲＣＴ）を用いて行われる。特に、経過観察における疾患の重症度判定は、ＨＲＣＴで肺の線維化の度合いを観察することにより行われる。

ＨＲＣＴに加えて、間質性肺炎の病期の判別方法として、シアル化糖鎖抗原の１種である、ＫＬ−６が広く知られている（非特許文献１）。また、間質性肺炎の症状を判断するマーカーとしては、血清中のサーファクタントプロテインＤ（ＳＰ-Ｄ）、サーファクタントプロテインＡ（ＳＰ−Ａ）、尿中プロスタグランジン主要代謝物(ＰＧＥ−ＭＵＭ)も知られている（特許文献１）。

間質性肺炎の病態には炎症と線維化が重要である。間質性肺炎の重症度の高い病期には、活動性炎症期、線維化進展期が存在する。炎症が主体であれば副腎皮質ステロイド、免疫抑制剤などが治療に用いられ、線維化が主体であれば抗線維化薬が使用されるため、その判別が臨床上重要である。

特許第４９１４３４７号掲載公報

Kohno N, et al. New serum indicator of interstitial pneumonitis activity. Sialylated carbohydrate antigen KL-6. Chest, 1989; 96(1): 68-73 Janssen R, et al. Study of clara cell 16, KL-6 and surfactant protein-D in serum as disease markers in pulmonary sarcoidosis. Chest, 2003; 124 (6): 2119-2125 Best AC, Meng J, Lynch AM, et al. Idiopathic pulmonary fibrosis: physiologic tests, quantitative CT indexes, and CT visual scores as predictors of mortality. Radiology. 2008; 246(3):935-940

上記の通り、間質性肺炎の病期の判別には、高分解能ＣＴによる肺の線維化の観察が必要である。しかしながら、ＨＲＣＴは高価であるため利用可能な施設は限られ、また、被曝のリスクもあるため、頻回な実施は困難である。一方、上記のとおり、間質性肺炎の病期マーカーとして、ＫＬ−６、ＳＰ-Ｄ、ＳＰ-Ａ及びＰＧＥ−ＭＵＭ等が知られている。

Rob Janssenらは、間質性肺疾患の一つであるサルコイドーシスの患者について、その病期（ステージ）ごとにＫＬ−６を測定した。診断時のサルコイドーシスの評価は、胸部Ｘ線写真によるスコアリングを行い、実質性の浸潤が無い場合はステージ１、実質性の浸潤がある場合をステージ２または３とした。健常３８症例のＫＬ−６平均測定値は１７７Ｕ／ｍＬであったのに対し、２８症例のステージ１におけるＫＬ−６の平均測定値は２６９Ｕ／ｍＬ、ステージ２及び３では４５１Ｕ／ｍＬであり、重症度に従って健常からステージ１、２とＫＬ−６測定値は上昇したが、一方でステージ２から３では測定値はほぼ同程度であった（非特許文献２）。このように、ＫＬ−６は、間質性肺炎において、一定以上線維化が進むと測定値がほぼ平衡となることから、間質性肺炎の重症例における臨床判断においては、ＫＬ−６を単独で測定するよりも、より詳細な情報が必要であることが示唆された。

したがって、本発明の目的は、間質性肺炎の病期の判別を補助し、これにより詳細な臨床情報の取得を補助することができる新規な方法を提供することである。

本願発明者等は、鋭意研究の結果、ＰＧＥ−ＭＵＭとＫＬ−６の両者を測定し、これらを組み合わせることにより、間質性肺炎の病期の判別を補助し、これにより詳細な臨床情報を得ることが可能であることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、以下のとおりである。
（１）間質性肺炎の病期の判別を補助する方法であって、ヒトの第１検体中の、プロスタグランジンＥ２及びその代謝物よりなる群より選択される少なくとも１つの炎症マーカーを測定する工程と、ヒトの第２検体中のＫＬ−６を測定する工程と、を含む、方法。
（２）前記第１検体が尿検体であり、前記炎症マーカーが尿中プロスタグランジンＥ２主要代謝物である、（１）に記載の方法。
（３）前記第２検体が血液検体である、（１）又は（２）に記載の方法。
（４）前記間質性肺炎が、特発性肺線維症である（１）〜（３）のいずれか１項に記載の方法。
（５）間質性肺炎の病期の判別を補助する方法であって、ヒトの第１検体中の、プロスタグランジンＥ２及びその代謝物よりなる群より選択される少なくとも１つの炎症マーカーを測定する工程と、
肺の線維化を測定する工程と、
を含む、方法。
（６）肺の線維化を測定する方法が高分解能コンピューター断層撮影（ＨＲＣＴ）である、（５）に記載の方法。

本発明により、間質性肺炎の病期の判別を補助することができる新規な方法が提供された。

下記実施例において測定された、ＦＳの各グループにおける血清ＫＬ−６濃度の分布（左図）及び各グループにおけるＰＧＥ−ＭＵＭ濃度の分布（右図）を示す図である。 下記実施例において測定された、血清ＫＬ−６濃度とＰＧＥ−ＭＵＭ濃度との相関関係を示す図である。

本発明の方法では、ヒトの第１検体中の、プロスタグランジンＥ２及びその代謝物よりなる群より選択される少なくとも１つの炎症マーカーを測定する。検体中のプロスタグランジンＥ２を測定してもよいが、プロスタグランジンＥ２は比較的安定性が低く、正確な測定が容易ではないことから、測定対象をプロスタグランジンＥ２量を反映し得るプロスタグランジンＥ２代謝物としてもよく、特に尿中プロスタグランジンＥ２主要代謝物（ＰＧＥ−ＭＵＭ）とすることが好ましい。ヒトの第１検体は、ヒトから採取される試料であれば特に限定されるものではなく、血清、血漿、全血、尿、便、口腔粘膜、咽頭粘膜、腸管粘膜および生検試料（例、腸管試料、肝臓試料）等をいずれも使用可能であるが、測定対象をＰＧＥ−ＭＵＭとする場合は尿を選択する。ＰＧＥ−ＭＵＭは、ＲＩＡ等の免疫測定法により測定可能であり、その測定法自体は公知であり（例えば、特許文献１）、その測定のためのキットも市販されているので、それらを用いて容易に測定することができる。ただし、本発明の方法は、測定手段に依らないのでいずれの測定手段を用いてもよい。

本発明の方法において、病期の判別の対象となる疾患は、間質性肺炎である。間質性肺炎は、原因不明で生じる特発性間質性肺炎（ＩＩＰｓ）と、膠原病、薬剤、放射線、感染症、粉じん等を原因として発症する間質性肺炎とに分けられるが、本発明の方法は、ＩＩＰｓ、特に特発性肺線維症（ＩＰＦ）を対象疾患とすることが好ましい。

さらに、本発明では、ヒトの第２検体中のＫＬ−６を測定する。ヒトの第２検体は、第１検体と同一でも異なっていてもよいが、血液検体（全血、血清及び血漿並びにこれらの希釈物）が好ましく、特に血清検体が好ましい。血清中のＫＬ−６の測定方法は公知であり、測定キットも市販されているので、それらを用いて容易に測定することができる。

本明細書において、間質性肺炎の病期は、ＨＲＣＴで観察した肺の線維化度合いを示す、線維化スコア（ＦＳ：ｆｉｂｒｏｓｉｎｇ ｓｃｏｒｅ）を基準とする。発明者らは、非特許文献３に記載の方法を参照して、左右の肺の３つの領域（上葉、中葉、下葉）について、ＨＲＣＴで観察された、すりガラス様陰影(ＧＧＯ)、網状影、蜂巣肺及び肺気腫の領域が占める割合を百分率で定量化して平均値を求めた。このうち、蜂巣肺所見及び網状影の領域を定量化した値の平均値をＦＳとした。本明細書において、各異常領域の定量化は、Ｉｍａｇｅ Ｊ ソフトウェアを用いて行ったが、これに限られるものではない。ＦＳに基づいて、間質性肺炎（ＩＰ）患者は、以下の基準により、軽症から重症に向かって、グループ１〜４に分けられる。
グループ１：ＦＳ ２．５以下
グループ２：ＦＳ ２．５超５以下
グループ３：ＦＳ ５超１０以下
グループ４：ＦＳ １０超

グループ１〜３、特にグループ３のＩＰ患者は、病状の進行が進む増悪傾向が見られる活動性炎症期の患者であるが、グループ４の患者では、活動性炎症期の患者と、病状の進行がほぼ止まった状態になる線維化進展期の患者が混在し、その多くは線維化進展期の患者である。活動性炎症期、特にグループ３の患者においては、進行を遅らせるために、ステロイド療法、免疫抑制剤等の治療を積極的に行う必要がある。一方で、線維化進展期の患者については、抗線維化薬による治療が必要とされる。このように、上記のグループ分け、とりわけ活動性炎症期、線維化進展期の判別は、その治療方針が明確に異なるため、適時に正確に行うことが要求される。しかし、ＨＲＣＴによる観察は頻回に実施することはできないことから、より容易かつ非侵襲的にこれらのグループ分けを補助する方法が求められる。

後述の実施例にて、既存の間質性肺炎のマーカーである血清ＫＬ−６について、各グループでの測定値を比較した（図１）。ＫＬ−６測定値は、活動性炎症期（グループ１〜３）においては、ＦＳの上昇に従って上昇するものの、グループ３、４間ではその測定値に有意差が見られず、ＫＬ−６値が平衡に達したことがわかる。グループ４においては活動性炎症期、線維化進展期の患者を含むにもかかわらずＫＬ−６値はいずれも高値を示し、ＫＬ−６測定値単独では、これらの判別が困難である。

一方、ＰＧＥ−ＭＵＭについて、各グループでの測定値を比較した（図１）。ＰＧＥ−ＭＵＭ測定値は、活動性炎症期（グループ１〜３）においては、ＦＳの上昇に従って上昇したが、グループ４の線維化進展期は、測定値が減じていた。

発明者らは、グループ毎のＫＬ−６とＰＧＥ−ＭＵＭの変動傾向の差異に着目し、これらの測定値を組合せることで、グループ４の線維化進展期の患者を高効率で判別できることを見出した。すなわち、下記実施例に具体的に記載されるとおり、血清ＫＬ−６濃度及びＰＧＥ−ＭＵＭ濃度にそれぞれカットオフ値を設定し、グループ４において、ＫＬ−６濃度がカットオフ値以上、かつ、ＰＧＥ-ＭＵＭ濃度がカットオフ値以下のものを線維化進展期である可能性が高いと判定することができる。なお、上記した通り、ＰＧＥ−ＭＵＭは、血液その他の体成分中のプロスタグランジンＥ２の値を反映可能な指標の１つとして例示しているが、他のプロスタグランジンＥ２の測定値を反映し得る指標（例えば、ＰＧＡＭ、ＰＧＥＭ）を安定的に測定可能であれば、これに替えることが可能であるのは明らかである。本発明は、測定対象をＰＧＥ−ＭＵＭに限定するものではない。また測定法に関してもプロスタグランジンＥ２やその類似体、代謝物に対する抗体を用いたＲＩＡ法以外にも、ＥＩＡ法、ＩＡ法、免疫カラムを用いた方法、ＨＰＬＣ等の分離ステップを組み合わせた質量分析器（マススペクトロメーター）を用いた方法等をいずれも使用可能であり、その測定法は特に限定されるものではない。

血清ＫＬ−６のカットオフ値としては、適宜最も判別効率の高い値を選択可能であるが、特に、通常の臨床検査（ＣＬＥＩＡ法）でカットオフ値とされる５００Ｕ／ｍＬを好適に使用できる。一方、ＰＧＥ−ＭＵＭの測定値は、現在のところ、ゴールデンスタンダードが存在せず、測定系によって測定値が異なるという事態が生じ得るため、一定の値を規定することは困難であるため、使用する測定系における健常者検体（好適には１２０例以上）の測定値の平均値に標準偏差の２倍を加算した値（ＡＶＥ＋２ＳＤ）を基準として、これより高い値に設定することが好ましい。さらに、ＫＬ−６のカットオフ値を固定した上で、ＰＧＥ−ＭＵＭ測定値のＲＯＣ（受診者動作特性曲線）分析を行い、最適値を設定してもよい。

なお、ＫＬ−６はII型肺胞上皮細胞から分泌され、間質性肺炎による肺胞のダメージ、線維化の程度を反映する。一方、ＰＧＥ−ＭＵＭは、ＴＧＦ−βによって化生上皮細胞に過剰発現したＣＯＸ−２の酵素活性によりアラキドン酸より精製されたＰＧＥ２が、その後、代謝されることで尿中に排泄されるものであり、炎症の活動度を反映する。このように、ＫＬ−６とＰＧＥ−ＭＵＭとは測定対象が異なる。

以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。

１． 測定方法
＜線維化スコア（ｆｉｂｒｏｓｉｎｇ ｓｃｏｒｅ， ＦＳ)＞
左右の肺の３つの領域（上葉、中葉、下葉）について、ＨＲＣＴで観察された、蜂巣肺所見及び網状影の領域が占める割合を百分率で定量化して平均値を求め、ＦＳとした。異常領域の定量化は、Ｉｍａｇｅ Ｊ ソフトウェアを用いて行った。ＦＳに基づいて、間質性肺炎（ＩＰ）患者を、以下の基準により、軽症から重症に向かって、グループ１〜４に分類した。
グループ１：ＦＳ ２．５以下
グループ２：ＦＳ ２．５超５以下
グループ３：ＦＳ ５超１０以下
グループ４：ＦＳ １０超

グループ１〜３、特にグループ３の患者は、活動性炎症期の患者であり、グループ４の患者には、活動性炎症期の患者と線維化進展期の患者が混在するが、その多くは線維化進展期の患者である。以降、グループ１〜３を「活動性炎症期」、グループ４を「線維化進展期」とも称する。

＜ＰＧＥ−ＭＵＭ濃度の測定＞
各尿検体を個々にＰＧＥ−ＭＵＭアッセイに供した。市販の放射免疫測定（ＲＩＡ）キット（ハンガリー国ブダペスト、Institute of Isotopes Co., Ltd.製）を用いて、添付文書記載の方法に従って尿中PGE-MUM濃度を測定した。なお、ＰＧＥ−ＭＵＭ濃度は、尿体積に依存するので、尿中クレアチニン(Cr)濃度で除して正規化した（μg/g Cr）。

＜ＫＬ−６濃度の測定＞
血清ＫＬ−６濃度を市販のキット（ナノピア ＫＬ−６、エーザイ株式会社製）により、添付文書記載の方法に従って測定した。

２． 実験
特発性肺線維症患者３６名について、高分解能コンピューター断層撮影（ＨＲＣＴ）の画像に基づいて線維化スコアを調べ、グループ１〜４に分類した。また、これらの患者から尿検体と血清検体をそれぞれ採取し、ＰＧＥ−ＭＵＭ濃度とＫＬ−６濃度を測定した。

図１左図は、各グループのＫＬ−６濃度の分布を、図１右図は各グループのＰＧＥ−ＭＵＭ濃度の分布を示す。左図に示されるように、グループ１から３までは、ＦＳとＫＬ−６濃度との間にある程度の相関がみられるが、グループ４では、活動性炎症期、線維化進展期の患者が混在し、その多くが線維化進展期の患者であるにもかかわらず、ＫＬ−６濃度はグループ３と同様に、高値のままであった。一方、右図に示されるように、グループ１〜３までは、ＦＳが上昇するにしたがってＰＧＥ−ＭＵＭ濃度にも上昇が見られるが、グループ４では、ＰＧＥ−ＭＵＭ濃度が低くなった。

ＫＬ−６濃度とＰＧＥ−ＭＵＭ濃度の相関関係を図２に示す。図２に示されるように、両者の間には相関関係は見られないことから、両濃度は、それぞれ独立のパラメータとして存在し得ることが分かった。

４．グループ１〜３（活動性炎症期）とグループ４（線維化進展期）との判別
（１）ＫＬ−６濃度単独による判別（比較例１）
上記測定結果に基づき、グループ１〜３（活動性炎症期）とグループ４（線維化進展期）の判別を試みた。ＫＬ−６のカットオフ値を５００ｍＡＵ／ｍＬとし、これ以上の場合を「線維化進展期」、これ未満の場合を「活動性炎症期」として、ＫＬ−６単独で活動性炎症期と線維化進展期の判別を試みた。結果を下記表１に示す。

表中の「感度」は、線維化進展期（グループ４）の患者が正しく線維化進展期と判別された割合を示す。一方、「特異度」は、活動性炎症期（グループ１〜３）の患者が、活動性炎症期と正しく判別された割合を示す。「全体一致率」とは、全患者において、正しく判別された割合を示す。

（２） ＫＬ−６濃度とＰＧＥ−ＭＵＭ濃度の組合せによる判別（実施例１）
ＫＬ−６濃度のカットオフ値を５００ｍＡＵ／ｍＬとし、さらにＰＧＥ−ＭＵＭ濃度のカットオフ値を２４μｇ／ｇＣｒとし、ＫＬ−６がカットオフ値以上、かつ、ＰＧＥ−ＭＵＭ濃度がカットオフ値以下の場合を「線維化進展期」、これ以外を「活動性炎症期」として線維化進展期と活動性炎症期の判別を試みた。結果を下記表２に示す。

表２の結果においては、感度は１００％、特異度は７１．９％、全体一致率７５．０％となった。表１との比較から明らかなように、ＫＬ−６濃度とＰＧＥ−ＭＵＭ濃度とを組み合わせることにより、臨床診断に関わる病期、特に活動性炎症期、線維化進展期の判別の補助をより効率よく実施できることが判明した。

本発明の方法は、間質性肺炎、特に特発性肺線維症の病期の判別に有用であり、医療分野において、間質性肺炎の診断、治療中の経過観察に利用可能である。

Claims (6)

1. 間質性肺炎の病期の判別を補助する方法であって、
   ヒトの第１検体中の、プロスタグランジンＥ２及びその代謝物よりなる群より選択される少なくとも１つの炎症マーカーを測定する工程と、
   ヒトの第２検体中のＫＬ−６を測定する工程と、
   を含む、方法。
2. 前記第１検体が尿検体であり、前記炎症マーカーが尿中プロスタグランジンＥ２主要代謝物である、請求項１に記載の方法。
3. 前記第２検体が血液検体である、請求項１又は２に記載の方法。
4. 前記間質性肺炎が、特発性肺線維症である請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
5. 間質性肺炎の病期の判別を補助する方法であって、
   ヒトの第１検体中の、プロスタグランジンＥ２及びその代謝物よりなる群より選択される少なくとも１つの炎症マーカーを測定する工程と、
   肺の線維化を測定する工程と、
   を含む、方法。
6. 肺の線維化を測定する方法が高分解能コンピューター断層撮影（ＨＲＣＴ）である、請求項５に記載の方法。

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