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JP2016040269A - Ｖｅｇｆ−ｃ拮抗剤を用いた併用治療 - Google Patents

Ｖｅｇｆ−ｃ拮抗剤を用いた併用治療 Download PDF

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JP2016040269A
JP2016040269A JP2015185027A JP2015185027A JP2016040269A JP 2016040269 A JP2016040269 A JP 2016040269A JP 2015185027 A JP2015185027 A JP 2015185027A JP 2015185027 A JP2015185027 A JP 2015185027A JP 2016040269 A JP2016040269 A JP 2016040269A
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イー． ボールドウィン、メガン
E Baldwin Megan
イー． ボールドウィン、メガン
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Vegenics Pty Ltd
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Vegenics Pty Ltd
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Abstract

【課題】有効量の血管新生因子（ＶＥＧＦ−Ｃ）拮抗剤と抗腫瘍性組成物を組みわせて投与する、特異性があってより効果的ながんの治療法の提供。
【解決手段】ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤であるＶＥＧＦ−Ｃ抗体とＶＥＧＦ−Ａ抗体であるベバシズマブに、ドセタキセル、５−フルオロウラシル、テモゾロマイド、ゲムシタビン、オキサリプラチン、パクリタキセル、カルボプラチンおよびイリノテカンなどの化学療法剤をさらに含む抗腫瘍性組成物からなる複合薬。
【選択図】なし

Description

本願発明は、有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物を組みわせて投与することを含むがん治療に関する。
がんは依然としてヒトの健康にとって最も恐ろしい脅威の１つである。２００９年には、がんは米国でほぼ１５０万人の新たな患者を侵したと推測された。またがんは、死亡の約１／４を占め、心疾患に次ぐ２番めの主な原因であった。がんは、２０１０年までには第１の死因として心疾患を上回るかもしれないと予想されてきた。これらの死のほとんどには、固形腫瘍が関与している。特定のがんの治療は著しく進歩してきた。しかし、がん全部を含めた５年生存率は、過去２０年間で約１０％しか向上していない。がん、つまり悪性腫瘍は、転移して無制御に急激に増殖するため、適宜に検出して治療することが極めて難しい。さらに、がんは組織内の１つまたは少数の正常細胞が悪性転換することによって、体内のほぼあらゆる組織から生じうる。また、特定の組織を起源とするがんの種類は、それぞれ互いに異なる。
現在のがん治療方法は、比較的に非選択的である。手術によって病変した組織を除去し、放射線治療によって固形腫瘍を縮小させ、化学療法によって迅速に分裂する細胞を殺す。特に化学療法は、多くの副作用をもたらす。副作用は、可能な投与量を制限して、潜在的に有効な薬を使用することができなくなるほど深刻な場合もある。さらに、がんは化学療法薬に対する抵抗性を獲得することが多い。
したがって、特異性があってより効果的ながんの治療法に対して、差し迫った必要性が存在する。
第１の態様は、対象におけるがんの治療方法を提供する。この態様は、対象に治療に有効な量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物を組み合わせて投与することを含む。
第１の態様の方法は、たとえばヨーロッパ型（「〜用薬」）または第２医学用途（スイス）型（「薬剤の製造におけるある薬剤の使用」）などの代替の形態によって表現されてもよい。
第２の態様は、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を含む物品（ａｒｔｉｃｌｅ）の製造を提供する。製造品は、キットを含んでもよい。製造品は、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と添付文書とを含む容器を含んでもよい。添付文書は、がんを患った対象に抗腫瘍性組成物と併用してＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を投与する方法を、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤の使用者に示す。
第２の態様のある態様では、製造品はヒトの対象（患者：ｓｕｂｊｅｃｔ）のがんを治療するために使用されるＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を含むキットを含む。この場合、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、抗腫瘍性組成物と併用して対象に投与される。
ある形態は、ある特定の使用に適しているか、またはある特定の用途に制限されるように指定されており、「〜用（ｆｏｒ）」という言葉によって示されている。別の形態は、特定の用途のみに制限されており、「〜に使用される場合」という言葉によって示されている。
第１の態様または第２の態様のある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤はＶＥＧＦ−Ｃ抗体である。
第１の態様または第２の態様のある態様では、対象はヒトである。
第１の態様または第２の態様のある態様では、がんは固形腫瘍および／または血管腫瘍を含む。固形腫瘍は、肉腫、上皮性悪性腫瘍、リンパ腫、黒色腫および芽細胞腫から選択されてもよい。
第１の態様または第２の態様のある態様では、がんは原発性がんである。したがって、治療は転移を妨げるか改善してもよい。また治療はステージＩがんまたはステージＩＩがんに対して行われてもよい。第１の態様または第２の態様の別の態様では、がんは転移性であって、治療はステージＩＩＩがんまたはステージＩＶがんに対して行われてもよい。
第１の態様または第２の態様のある態様では、抗腫瘍性組成物は治療されるがんに対する標準治療を含む。
第１の態様または第２の態様のある態様では、肺がん、気管支がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、肝臓がん、食道がん、膀胱がん、非ホジキンリンパ腫、腎臓がん、乳がん、卵巣がんおよび脳腫瘍（たとえば膠芽細胞腫）から構成される群からがんは選択される。
第１の態様または第２の態様のある態様では、抗腫瘍性組成物は化学療法剤を含む。たとえば、好適な化学療法剤にはドセタキセル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、テモゾロマイド（ＴＭＺ）、ゲムシタビン、オキサリプラチン、パクリタキセル、カルボプラチンおよびイリノテカンが含まれる。
第１の態様または第２の態様の別の態様では、抗腫瘍性組成物は血管新生阻害剤を含む。血管新生阻害剤は血管新生抑制抗体であることが好ましい。血管新生抑制抗体はＶＥＧＦ−Ａ抗体であってもよい。ＶＥＧＦ−Ａ抗体はベバシズマブであってもよい。
第１の態様または第２の態様のさらなる態様では、抗腫瘍性組成物は化学療法剤および血管新生阻害剤を含む。ある態様では、ドセタキセル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、テモゾロマイド（ＴＭＺ）、およびゲムシタビンから構成される群から化学療法剤は選択される。また血管新生阻害剤は、たとえばベバシズマブなどの抗体である。
第１の態様または第２の態様のさらなる態様では、がんは固形がんおよび／または血管の腫瘍を含む。血管の腫瘍は、血管新生抑制であるＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤に耐性を有する。血管の腫瘍では、対象は好ましくはＶＥＧＦ−Ｃ抗体であるＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤、ならびに化学療法剤およびＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤を含む抗腫瘍性組成物を用いる併用療法を受ける。このＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤は、対象が抵抗性を獲得したＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤と同じであってもよいし異なっていてもよい。ある態様では、対象が抵抗性を獲得したＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤はベバシズマブである。
ヒトＶＥＧＦ−Ｃのアミノ酸配列を示す（配列番号１）。ヒトＶＥＧＦ−ＣのＶＨＤに下線が引かれている。 ヒトＶＥＧＦ−Ａのアミノ酸配列を示す（配列番号２）。 ＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の重鎖のアミノ酸配列を示す（配列番号３）。重鎖可変（ＶＨ）領域に下線が引かれている。 図３に示す抗体の軽鎖のアミノ酸配列を示す（配列番号４）。軽鎖可変（ＶＬ）領域に下線が引かれている。 実施例２に従ったＰＣ−３ヒト前立腺腫瘍（異種移植）の単一の治療に対する時間（日）にわたる反応（腫瘍体積（ｍｍ３））を示す。ＶＥＧＦ−Ｃ抗体（ＶＧＸ−１００）は１０（＊）、２０（◆）および４０（△）ｍｇ／ｋｇにて試験され、１０ｍｇ／ｋｇ（灰色の■）のＶＥＧＦ−Ａ抗体（ベバシズマブ、アバスチン）と比較された。抗体は腹腔内注射によって週に２回投与された。ネガティブコントロールは、最上段の線（◆）によって示されている。１０ｍｇ／ｋｇと２０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００は、ネガティブコントロールと比べて改善されているが、互いに区別できない。しかし、４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００や１０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブほど有効ではない。４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００は、１０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブと同等に有効であることが示された。 実施例３に従った研究におけるヌードマウスにおいて、ＰＣ−３ヒト前立腺腫瘍異種移植モデルにおける時間（腫瘍移植後１６０日までの日数）にわたるがん腫瘍の平均サイズ（ｍｇ）を示す。マウスは単剤療法としてＶＥＧＦ−Ｃ抗体（ＶＧＸ−１００）を用いて、または併用療法としてＶＥＧＦ−Ａ抗体（ベバシズマブ、アバスチン）および／または化学療法剤（ドセタキセル）を用いて治療された。ＶＧＸ−１００（４０ｍｇ／ｋｇ）とベバシズマブ（１０ｍｇ／ｋｇ）が腹腔内注射によって週に２回投与された。ドセタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）が静脈注射によって腫瘍移植後７日目、１４日目、および２１日目に投与された。腫瘍移植後１６０日目において、最下段の線はＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋ドセタキセルの３剤併用療法である。そして下から順に、ＶＧＸ−１００＋ドセタキセル、ベバシズマブ＋ドセタキセル、ドセタキセルである。その他の治療は、１６０日目において区別できない。一方、６０日目には、アイソタイプのネガティブコントロールが最上段である。そして上から順に、ＶＧＸ−１００、ベバシズマブおよびＶＧＸ−１００＋ベバシズマブである。 図６の様々な治療群における腫瘍組織量を示す。 図６のマウスの生存率を示す。移植後１６０日目において、最上段の線はＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋ドセタキセルの３剤併用療法である。そして上から順に、ＶＧＸ−１００＋ドセタキセル、ベバシズマブ＋ドセタキセル、ドセタキセル、アイソタイプのネガティブコントロール、ベバシズマブ、ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ、およびＶＧＸ−１００である。 実施例３に従った第２の研究におけるヌードマウスにおいて、ＰＣ−３ヒト前立腺腫瘍の単一治療または併用治療に対する時間（腫瘍移植後７０日までの日数）にわたる反応（平均腫瘍組織量（ｍｇ））を示す。単剤療法としてまたは併用療法としてＶＥＧＦ−Ａ抗体（ベバシズマブ、アバスチン）および／または化学療法剤（ドセタキセル）を用いて、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体（ＶＧＸ−１００）が試験された。ＶＧＸ−１００（４０ｍｇ／ｋｇ）とベバシズマブ（１０ｍｇ／ｋｇ）が腹腔内注射によって週に２回投与された。ドセタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）が静脈注射によって腫瘍移植後７日目、１４日目、および２１日目に投与された。腫瘍移植後４９日目において、最上段の線はアイソタイプのネガティブコントロール（○）である。そして上から順に、ベバシズマブ（灰色の●）、ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ（○の中に・）、ＶＧＸ−１００（□）、ドセタキセル（灰色の◆）、ＶＧＸ−１００＋ドセタキセル（■）、ベバシズマブ＋ドセタキセル（△）、およびＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋ドセタキセルの３剤併用療法（＊）である。３剤併用療法は、あらゆる２剤併用療法よりも優れていた。 前立腺腫瘍を有する実施例４のマウスの百分率（％）を前立腺内腫瘍接種後７週間まで示す。ドセタキセル（０．５ｍｇ／ｋｇ；□）と併用したＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００は、このモデルでは腫瘍の出現を遅らせた。ＶＧＸ−１００（○）；アイソタイプのネガティブコントロール（●）；ドセタキセル（■）；ドセタキセル＋ＶＧＸ−１００（□）；ドセタキセル（▲）；ドセタキセル＋ＶＧＸ−１００（△）；ＰＳＡコントロール（灰色の◆）である。 実施例６に従ったＵ８７ＭＧ膠芽細胞腫腫瘍（異種移植）の単一治療における時間（日）に対する反応（腫瘍体積（ｍｍ３））を示す。１０ｍｇ／ｋｇ（×）、２０ｍｇ／ｋｇ（×）および４０ｍｇ／ｋｇ（▲）において、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体（ＶＧＸ−１００）が試験され、１０ｍｇ／ｋｇ（■）におけるＶＥＧＦ−Ａ抗体（ベバシズマブ、アバスチン）と比較された。抗体は、腹腔内注射によって週に２回投与された。ネガティブコントロールは、最上段の線によって示されている。１０ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇにおけるＶＧＸ−１００は、区別できなかった。これらはネガティブコントロールに対しては改善されたが、４０ｍｇ／ｋｇにおけるＶＧＸ−１００または１０ｍｇ／ｋｇにおけるベバシズマブほどは有効ではなかった。４０ｍｇ／ｋｇにおけるＶＧＸ−１００では、ネガティブコントロールに対する有効性が見られた。 実施例７に従ったヌードマウスにおけるＵ８７ＭＧヒト膠芽細胞腫の成長に対する単剤療法またはベバシズマブとの併用としてのＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の効果（平均腫瘍組織量（ｍｇ））を示す。ベバシズマブ（１０ｍｇ／ｋｇ）およびＶＧＸ−１００（４０ｍｇ／ｋｇ）は、腹腔内注射によって週に２回投与された。最後の時点において、アイソタイプのネガティブコントロールは最上段の線（●）である。そして上から順に、ＶＧＸ−１００単独（■）、ベバシズマブ単独（灰色の●）、およびＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ（灰色の■）である。 実施例８に従ったヌードマウスにおけるＫＰ４ヒト膵臓腫瘍の成長に対する単剤療法またはベバシズマブと併用としてのＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の時間（移植後の日数）に対する効果（平均腫瘍組織量（ｍｇ））を示す。ＶＧＸ−１００およびベバシズマブは、腹腔内注射によって週に２回投与された。ＶＧＸ−１００は、単剤療法では２０ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋｇ、併用療法では４０ｍｇ／ｋｇにて投与された。ベバシズマブは、単剤療法および併用療法に対して１０ｍｇ／ｋｇにて投与された。移植後３０日目において、アイソタイプのネガティブコントロールは最上段の線である。そして上から順に、２０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００、４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００、ベバシズマブ、一番下の線がＶＧＸ−１００＋ベバシズマブである。 吸収波長４５０ｎｍにてＢｉａＣｏｒｅを用いて測定された、ＶＥＧＦ−ＣとＶＥＧＦ−Ｄの単量体および二量体に対するＥＬＩＳＡアッセイにおけるＶＧＸ−１００の結合を示す。 Ｂａ／Ｆ３バイオアッセイ（Ｓｔａｃｋｅｒら（１９９９年）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ 第２７４巻第３４８８４〜３４８９２頁、Ａｃｈｅｎら（２０００年）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ 第２６７巻第２５０５〜２５１５頁）を用いた（ａ）ＶＥＧＦＲ−２および（ｂ）ＶＥＧＦＲ−３に対するＶＥＧＦ−Ｃの結合におけるＶＧＸ−１００の結合の影響を示す。ＢＡ／Ｆ３−ＶＥＧＦＲ−２／ＥｐｏＲ細胞またはＢＡ／Ｆ３−ＶＥＧＦＲ−３／ＥｐｏＲ細胞を用いて、ＶＥＧＦＲ−２またはＶＥＧＦＲ−３の細胞外ドメインに対するＶＥＧＦ−Ｃの結合が測定された。リガンドおよびＶＧＸ−１００に対する反応が、４８時間の暴露に続いて［３Ｈ］−チミジンの取り込みによって測定された。 ＶＥＧＦ−Ｃの生物活性を阻害するためにＶＧＸ−１００が使用されたＨＵＶＥＣ増殖アッセイの結果を示す。 実施例１０に従ったヌードマウスにおけるＨＣＴ−１１６ヒト大腸腫瘍の成長に対する単剤療法またはベバシズマブ（アバスチン）および／または５−ＦＵの併用によるＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の時間（腫瘍移植後の日数）に対する効果（平均腫瘍組織量（ｍｇ））を示す。アイソタイプのコントロール（○）；ベバシズマブ単独（灰色の●）；ＶＧＸ−１００単独（□）；５−ＦＵ単独（◇）；ベバシズマブ＋５−ＦＵ（△）；ＶＧＸ−１００＋５−ＦＵ（■）；ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ（○の中に?）；ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋５−ＦＵ（＊）である。 実施例１１に従ったヌードマウスにおけるＨ２９２ヒト肺腫瘍の成長に対する単剤療法またはベバシズマブおよび／またはドセタキセルの併用によるＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の時間（腫瘍移植後の日数）に対する効果（平均腫瘍組織量（ｍｇ））を示す。最上段の線から順に、以下のとおりである：ＶＧＸ−１００単独（灰色の■）；アイソタイプのコントロール（●）；ドセタキセル単独（灰色の▲）；ベバシズマブ単独（●）；ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ（灰色の■）；ベバシズマブ＋ドセタキセル（灰色の◆）；ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋ドセタキセル（灰色の▲）。 実施例１２に従ったヌードマウスにおけるＯＶＣＡＲ−８ヒト卵巣腫瘍の成長に対するベバシズマブとドセタキセルの併用によるＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の時間（腫瘍移植後の日数）に対する効果（平均腫瘍組織量（ｍｇ））を示す。最上段の線から順に、以下のとおりである：アイソタイプのコントロール（●）；ドセタキセル単独（灰色の▲）；ベバシズマブ＋ドセタキセル（灰色の◆）；ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋ドセタキセル（灰色の▲）。 実施例１３に従った同所性ＭｅｔａＭｏｕｓｅ（登録商標）モデルにおけるＰＣ−３−ＧＦＰヒト前立腺腫瘍の成長に対するＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の単剤としての時間（腫瘍移植後の日数）に対する効果（平均腫瘍組織量（ｍｍ３））を示す。アイソタイプのコントロール（●）；ＶＧＸ−１００単独（灰色の■）である。
［詳細な説明］
（定義）
「病気」または「疾患」は、本願発明の物質、組成物または方法を用いた治療による恩恵を受ける任意の状態または表現型である。これには、動物を問題としている疾患にかかりやすくさせる病状を含む慢性および急性の疾患または病気が含まれる。ここで治療される疾患の限定されない例には、良性腫瘍および悪性腫瘍；白血病およびリンパ性悪性疾患；ニューロン、グリア、星状細胞、視床下部、および他の腺、マクロファージ、上皮、間質、および卵割腔の疾患；炎症性、免疫性および他の血管形成関連疾患；ならびにがんが含まれる。
「細胞増殖性疾患」および「増殖性疾患」との用語は、ある程度の異常な細胞増殖に関連した疾患をいう。ある態様では、細胞増殖性疾患は悪性腫瘍である。ある態様では、細胞増殖性疾患はがんである。ある態様では、細胞増殖性疾患は血管形成である。
「腫瘍」という用語は、悪性または良性のあらゆる腫瘍細胞の成長および増殖、ならびにあらゆる前がんおよびがんの細胞および組織をいう。本願明細書で言及するように、「がん」、「がんの」、「細胞増殖性疾患」、「増殖性疾患」および「腫瘍」との用語は、互いに排他的ではない。
「がん」および「がんの」との用語は、哺乳類における生理的状態をいうか、または説明する。この生理的状態は、一般に制御されない細胞増殖によって特徴づけられる。がんの例としては、上皮性悪性腫瘍、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、黒色腫および白血病またはリンパ性悪性疾患が含まれるが、これらには限られない。そのようながんのより具体的な例には、以下のものが含まれる：副腎皮質の上皮性悪性腫瘍、肺の腺上皮性悪性腫瘍、エイズによるがんおよびリンパ腫、肛門がん、星状細胞腫、Ｂ細胞リンパ腫（低悪性度／小胞状の非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、小リンパ球性ＮＨＬ、中悪性度／小胞状のＮＨＬ、中悪性度の広範性のＮＨＬ、高悪性度の免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度のリンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度の小型非開裂細胞性ＮＨＬ、巨大病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、エイズによるリンパ腫およびヴァルデンストレームマクログロブリン血症を含む）、膀胱がん、乳がん（オスの乳がんを含む）、気管支がん、肝内胆管のがん、カルチノイド腫瘍、子宮頸がん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄増殖性疾患、明細胞肉腫、結腸がん、結腸直腸がん、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、ユーイング肉腫、胆嚢膀胱がん、胃（ｇａｓｔｒｉｃ）がん（消化管がんを含む）、胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、神経膠腫または脳腫瘍（膠芽細胞腫を含む）、有毛細胞白血病、頭部がんおよび頸部がん、肝細胞の上皮性悪性腫瘍、下咽頭がん、島細胞上皮性悪性腫瘍、眼内黒色腫、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭がん、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、有毛細胞白血病、口唇がんおよび口腔がん、肝臓がん、肺がん（非小細胞および小細胞肺がんを含む）、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、悪性線維性組織球腫、悪性中皮腫、髄芽細胞腫、メルケル細胞上皮性悪性腫瘍、悪性中皮腫、原発不明の頸部扁平上皮がん、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄増殖性疾患、鼻腔がんおよび副鼻腔がん、鼻咽腔がん、神経芽細胞腫、口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、上皮性卵巣がん、卵巣胚細胞腫瘍、膵臓がん、島細胞膵臓がん、副甲状腺がん、陰茎がん、腹膜がん、褐色細胞腫、下垂体部腫瘍、形質細胞腫、胸膜肺芽細胞腫、移植後再発リンパ増殖性疾患、中枢神経系原発リンパ腫、原発性肝臓がん、未分化神経外胚葉性腫瘍、前立腺がん、直腸がん、腎細胞（腎臓）がん、腎盂の移行上皮がん、尿管がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、軟部組織肉腫、セザリー症候群、皮膚がん、皮膚黒色腫、メルケル細胞皮膚上皮性悪性腫瘍、小腸がん、扁平上皮がん、肺の扁平上皮性悪性腫瘍、精巣がん、胸腺腫、胸腺上皮性悪性腫瘍、甲状腺がん、妊娠性絨毛腫瘍、原発部位不明の上皮性悪性腫瘍、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、ウィルムス腫瘍、加えて母斑症、浮腫（脳腫瘍に関連する浮腫など）、およびメーグス症候群に関連する異常血管増殖。
「抗腫瘍性組成物」との用語は、がんの治療に有用な組成物をいう。好ましくは、抗腫瘍性組成物は、腫瘍の成長もしくは機能を阻害もしくは抑制すること、および／または腫瘍細胞の破壊を引き起こすことのできる１以上の活性治療薬を含む。治療薬（抗がん剤）の好適な例としては、以下のものが挙げられるが、これらには限られない：化学療法剤、放射線療法に使用される薬剤（たとえば放射性同位体）、細胞毒性薬、成長抑制薬、毒素、血管新生阻害剤、抗リンパ管新生剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤およびがんを治療するための他の試薬であるたとえばＨＥＲ２−抗体、ＣＤ−２０抗体、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）拮抗剤（たとえばチロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（たとえばエルロチニブ（タルセバ（登録商標））、血小板由来の成長因子阻害剤（たとえばグリベック（Ｇｌｅｅｖａｃ）（登録商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ−２阻害剤（たとえばセレコキシブ）、サイトカイン、インターフェロン、たとえば以下の１つ以上に結合する拮抗薬（たとえば中和抗体）：ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−β、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ受容体（たとえばＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３、ＮＰ−１およびＮＰ−２）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２、ならびに他の生物活性剤および有機化学物質。これらを組み合わせたものもまた、本願発明に含まれる。
「細胞毒性薬」との用語は、細胞の機能を抑制または阻害する基質、および／または細胞の破壊を引き起こす基質をいう。この用語は、以下のものを含むことが意図されている：放射性同位体（たとえばＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２およびＬｕの放射性同位体）；メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤などの化学療法剤；核酸分解酵素などの酵素またはそのフラグメント；抗生物質；低分子毒素または細菌、真菌、植物または動物由来の酵素活性を有する毒素（そのフラグメントおよび／または変異体を含む）などの毒素；以下に開示される様々な抗腫瘍剤または抗がん剤。他の細胞毒性薬は、以下に説明する。殺腫瘍剤は、腫瘍細胞の破壊を引き起こす。
「化学療法剤」との用語は、がん治療に有用な化合物をいう。化学療法剤は、たとえば共通の構造モチーフ、作用機構および／または由来した生物に基づいて、各クラスに広く分類される。たとえば、化学療法剤は、アルキル化剤、代謝拮抗物質、アルカロイド、テルペノイド、トポイソメラーゼ阻害剤、抗生物質、アンドロゲンおよび抗ホルモンとして分類されてもよい。多くの化学療法剤は１以上のクラスに分類されること、および多くの化学療法剤が異なるクラスに属することについて医療従事者によって様々な見解があることは明らかであろう。
アルキル化化学療法剤：アルキル化剤がこう名付けられたのは、細胞中に存在する条件下で多くの求核官能基をアルキル化する能力のためである。アルキル化剤は、標準的なアルキル化剤、アルキル化様剤、および標準的でないアルキル化剤として様々に呼ぶことがある。アルキル化様剤および標準的でないアルキル化剤とは対照的に、標準的なアルキル化剤は真のアルキル基を含み、他のアルキル化剤よりもずっと前から知られてきた。標準的なアルキル化剤は、生物学的に重要な分子中のアミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基、およびリン酸基と共有結合を形成して細胞の機能を修復することによって機能する。標準的なアルキル化剤の例には、ナイトロジェンマスタード、ニトロソ尿素およびスルホン酸アルキルが含まれる。エチレンイミン（アジリジン）およびメチルメラミンも一般には標準的とみなされる。しかし、標準的ではないとみなすこともできる。標準的なアルキル化剤の具体的な例には、以下のものが含まれる：クロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド（たとえばシトキサン（登録商標））、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン（ムスチンＨＮ２）、塩酸メクロレタミン酸化物、メルファラン、ノボエンビキン、フェネステリン、プレドニマスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード（ウラムスチン）およびマンノマスタード（ｍａｎｎｏｍｕｓｔａｒｄｓ）などのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチンおよびニムスチンなどのニトロソ尿素；ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド（ＴＥＰＡ）、トリエチレンチオホスホルアミド（たとえばチオテパ）およびトリメチロールメラミンなどのエチレンイミン（アジリジン）およびメチルメラミン。アルキル化様物質は、白金を用いた化学療法薬（白金類似物質と呼ばれることも多い）を含む。これらの物質はアルキル基を有さない。しかし、にもかかわらずこれらの物質は、恒久的にＤＮＡと連動してＤＮＡ修復を干渉することによって、ＤＮＡを損傷させる。白金類似物質の例には、シスプラチン（たとえばカルボクオン）、カルボプラチン、ネダプラチン、オキシロプラチン、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））およびサトラプラチンが含まれる。標準的でないアルキル化の区分に様々に含まれる物質の中には、プロカルバジン、トリエチレンチオホスホルアミド（たとえばチオテパ）、およびその類似物質が含まれる。類似物質には、アルトレタミン（標準的なアルキル化剤と見なされることもある）、ならびにジカルバジンおよびテモゾロマイドなどのある種のテトラジンなどがある。
代謝拮抗物質の化学療法剤：代謝拮抗物質は、プリンまたはピリミジンを裝って、ＤＮＡの構成単位となる。代謝拮抗物質は、（細胞周期の）「Ｓ」期の間、プリンやピリミジンの基質がＤＮＡに取り込まれるのを阻害して、正常な成長および分裂を停止させる。これらはＲＮＡ合成にも影響を及ぼす。効率が高いため、これらの薬剤は最も広範に使用される細胞増殖抑制剤である。代謝拮抗物質の例には、プリン類似物質、ピリミジン類似物質および抗葉酸剤が含まれる。プリン類似物質の例には、アザチオプリン、フルダラビン、メルカプトプリン（たとえば６−メルカプトプリン）、チアミプリン、チオグアニン（たとえば６−チオグアニン）、ペントスタチンおよびクラドリビンが含まれる。ピリミジン類似物質の例には、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎ）、フロキシウリジン、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））が含まれる。抗葉酸剤の例には、メトトレキサート、デノプテリン、プテロプテリン、トリメトレキサート、トリメトプリン、ピリメタミン、ペメトレキセド、エダトレキサートおよびラルチトレキセドが含まれる。
アルカロイド化学療法剤およびテルペノイド化学療法剤：アルカロイドおよびテルペノイドは、植物や動物に由来し、一般に微小管機能を阻害することによって細胞分裂を起こらなくさせる。主要な例は、ビンカアルカロイドおよびタキサンである。ビンカアルカロイド（マダガスカルのニチニチソウに由来し、チューブリンに結合してチューブリンが微小管へと組み立てられるのを阻害する）の例としては、以下のものが含まれる：ビンブラスチン（ベルバン（登録商標））、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））、ビノレルビン（ナベルビン（登録商標））およびビンデシン（エルディシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ）（登録商標）、フィルデシン（登録商標））。タキサンまたはタキソイド類は、タイヘイヨウイチイの木の皮に由来するタキソール（パクリタキセル）を原料にしている。これらは微小管の安定性を高めて、後期において染色体の分離を阻害することによって機能する。タキサン／タキソイド類の例には、以下のものが含まれる：パクリタキセル（タキソール（登録商標）パクリタキセル）、アブラキサン（アブラキサン（登録商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ非含有）、パクリタキセルのアルブミン改変ナノ粒子製剤）およびドセタキセル（タキソテール（登録商標）ドセタキセル）。テルペノイドは、天然に存在する有機化合物の中で大きく多岐にわたる分類群であって、生物のすべての綱（ｃｌａｓｓｅｓ）に見られる。テルペノイドは、多くのグループによって、抗がん特性および他の治療特性に対する研究が行われている。テルペノイドの例には、エリュテロビンが含まれる。植物由来の化学療法剤の別の群は、ポドフィロトキシンを原料とする。ポドフィロトキシンは、エトポシド、リン酸エトポシド（ｅｐｏｐｓｉｄｅ）、テニポシドおよびアムサクリンを含む他の細胞増殖抑制剤の薬品を製造するために使用される。
トポイソメラーゼ阻害剤化学療法剤：トポイソメラーゼは、ＤＮＡの形態を維持するために必須の酵素である。Ｉ型またはＩＩ型トポイソメラーゼを阻害すると、適切なＤＮＡ超らせん形成が乱されることによって、転写と複製の両方が干渉される。トポイソメラーゼ阻害剤の例には、以下のものが含まれる：β−ラパコン、ラパコール、ベツリン酸、ドキソルビシン、カンプトテシン（ＣＰＴ）、トポテカン（ハイカムチン（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、カンプトサール（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ）（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、９−アミノカンプトテシン、ラルトテカン（登録商標）トポイソメラーゼＩ阻害剤、ラメラリンＤ、トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００、ポドフィロトキシン、エピポドフィロトキシンの誘導体（アムサクリン、エトポシド（ＶＰ−１６）、リン酸エトポシドおよびテニポシドなど）、フルオロキノロン（シプロフロキサシン、ノルフロキサシン、ロメフロキサシンおよびオフロキサシンなど）。
抗生物質化学療法剤：以下のものを含む抗生物質が化学療法剤として使用される：アントラシクリン、エンジイン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、ミトラマイシンおよびマイトマイシン。これらの化学療法剤の大部分が自然源および抗生物質から単離されてきた。しかし、これらの化学療法剤は従来の抗菌性抗生物質の特異性を欠くため、重篤な毒性をもたらしてしまう。これらの薬剤の一般的な特性には、インターカレーション（塩基対の間に入り込むこと）、ＤＮＡ鎖の切断およびトポイソメラーゼＩＩ酵素の阻害を含む様々な異なる様式によるＤＮＡとの相互作用が含まれる。アントラシクリン抗生物質（アントラキノンを含む）の例には、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ダウノルビシン（リポソーム製剤）、ダウノマイシン（ダウノマイシンセルビジン）、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）ドキソルビシン）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、４−デオキシドキソルビシン（エソルビシン）、ドキソルビシン（リポソーム製剤）、エピルビシン、カルミノマイシン、イダルビシン、バルルビシン、ミトキサントロン、デトルビシン、ロドルビシン（テトラグリコシドアントラシクリン）、ピラルビシンおよびゾルビシンが含まれる。エンジイン抗生物質の例には、カリケアマイシン（カリケアマイシンγ１ＩおよびカリケアマイシンΩ１ｌ（たとえばＡｇｎｅｗのＣｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．第３３巻第１８３〜１８６頁（１９９４年）を参照）など）、ジネマイシン（ジネマイシンＡなど）、ジノスタチンおよびエンジイン色素タンパク質（エスペラミシン、ネオカルジノスタチン発色団および関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団など）が含まれる。他の抗生物質には、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カラビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、アクチノマイシンＤ（ダクチノマイシン）、６−ジアゾ−５オキソ−Ｌ−ノルロイシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼルシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）、ズオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）が含まれる。
アンドロゲン化学療法剤：カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノールおよびメピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗アドレナール剤（ａｄｒｅｎａｌｓ）；フロリン酸などの葉酸補充薬；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；ベストラブシル；ビスアントレン；デフォファミン；デメコルシン；ジアジクオン；エフロルニチン；エリプチニウム酢酸塩；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシンやアンサマイトシンなどのメイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；プレドニゾン；フェナメット；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリディンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ダカルバジン；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；アミノプテリン；イバンドロネート；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン（ゼローダ（登録商標））。
抗ホルモン化学療法剤：抗ホルモン化学療法剤が作用することによって、がんの成長を促進しうるホルモンの効果を制御し、減少させ、阻害し、抑制する。また抗ホルモン化学療法剤は、全身性、つまり全身治療の形態であることが多い。これらはホルモン自体であってもよい。例としては、たとえば以下のものを含む抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭｓ）が含まれる：タモキシフェン（ノルバデックス（登録商標）タモキシフェンを含む）、エビスタ（登録商標）ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびフェアストン（登録商標）トレミフェン；抗プロゲステロン剤；エストロゲン受容体下方制御剤（ＥＲＤｓ）；卵巣または精巣を抑制または停止させる働きをする薬剤、たとえばリュープロン（登録商標）およびエリガード（登録商標）酢酸ロイプロリド、酢酸ゴセレリン、酢酸ブセレリンおよびトリプトレリンなどの黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト；フルタミド、ニルタミドおよびビカルタミドなどの他の抗アンドロゲン剤；ならびにたとえば４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、メガーゼ（ＭＥＧＡＳＥ）（登録商標）酢酸メゲストロール、アロマシン（登録商標）エキセメスタン、ホルメスタイン、ファドロゾール、リビゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ）（登録商標）ボロゾール、フェマラ（登録商標）レトロゾール、およびアリミデックス（登録商標）アナストロゾールなどの副腎中でエストロゲンの産生を制御するアロマターゼ酵素を阻害するアロマターゼ阻害剤である。
他の化学療法剤には、以下のものが含まれる：ブリオスタチンおよびカリスタチンなどのポリケチド／大環状ラクトン；ブラタシンおよびブラタシノンなどのアセトゲニン；クロドロネート（たとえばボネフォス（登録商標）またはオスタック（登録商標））、ジドロカル（ＤＩＤＲＯＣＡＬ）（登録商標）エチドロネート、ＮＥ−５８０９５、ゾメタ（登録商標）ゾレドロン酸／ゾレドロネート、フォサマックス（登録商標）アレンドロネート、アレディア（登録商標）パミドロネート、スケリド（登録商標）チルドロネートおよびアクトネル（登録商標）リセドロン酸などのビスホスホネート；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似物質）およびシタラビン（シトシンアラビノシドまたはＡｒａ−Ｃ）などのヌクレオシド類似物質；特に、異常な（ａｂｈｅｒａｎｔ）細胞増殖に関与するシグナル経路における遺伝子、たとえばＰＫＣ−α、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓおよび上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）の発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド；テラトープ（登録商標）ワクチンなどのワクチンや、アロベクチン（登録商標）ワクチン、ロイベクチン（登録商標）ワクチンおよびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンなどの遺伝子治療ワクチン；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；トシル酸ラパチニブ（ＥｒｂＢ−２とＧＷ５７２０１６としても知られるＥＧＦＲの二重チロシンキナーゼ低分子阻害剤）；コルヒチン；ポドフィリン（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ）酸；クリプトフィシン１とクリプトフィシン８を含むクリプトフィシン；ドラスタチン；エリュテロビン；パンクラチスタン；サルコジクチインおよびスポンギスタチン。
化学療法剤は、上述した任意の物質の薬剤的に許容される塩、酸または誘導体をも含む。また、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法に対する略語であるＣＨＯＰや、５−ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせてオキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））を用いた治療計画に対する略語であるフォルフォックスなど、上述した物質の２つ以上の組み合わせをも含む。追加的な化学療法剤は、たとえばメイタンシノイド（たとえばＤＭＩ）ならびにオーリスタチンＭＭＡＥおよびＭＭＡＦなどの抗体薬物複合体として有用な細胞毒性薬を含む。
「成長抑制薬」との用語は、細胞の成長および／または増殖を阻害する化合物または組成物をいう。成長抑制薬の例には、ＧＩ期の停止およびＭ期の停止を誘導する薬剤などの（Ｓ期以外の位置にて）細胞周期の進行を阻害する薬剤が含まれる。標準的なＭ期阻害剤には、ビンカアルカロイド（たとえばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン、およびトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が含まれる。トポイソメラーゼＩＩ阻害剤には、アントラシクリン抗生物質ドキソルビシン（（８Ｓ−シス）−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−ａ−ＬＩｙｘｏ−ヘキサピラノシル）オキシ］−７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，ＩＩ−トリヒドロキシ−８−（ヒドロキシアセチル）−Ｉ−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン）、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシドおよびブレオマイシンなどがある。たとえばタモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシルおよびシタラビン（ａｒａ−Ｃ）などのＤＮＡアルキル化剤などのＧＩ期を阻害する薬剤は、Ｓ期の阻害にまで波及する。さらなる情報は、ＭｅｎｄｅｌｓｏｈｎおよびＩｓｒａｅｌ編集の「Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ」（ＷＢ Ｓａｕｎｄｅｒｓ社：フィラデルフィア、１９９５年）中の村上らによる「細胞周期制御、がん遺伝子、および抗腫瘍性薬」と名付けられた第１章において見つけることができる。タキサン（パクリタキセルおよびドセタキセル）は、いずれもイチイに由来する抗がん剤である。ヨーロッパイチイから得られたドセタキセル（タキソテール（登録商標）、ローヌ・プーラン・ローラー社）は、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、ブリストル・マイヤーズスクイブ社）の半合成類似体である。パクリタキセルとドセタキセルは、チューブリン二量体から微小管への組立てを促進し、脱重合を阻害することによって微小管を安定化させる。これにより細胞中の有糸分裂が抑制される。
「サイトカイン」との用語は、１つの細胞集団から放出され、細胞間伝達物質として別の細胞に作用するタンパク質をいう。そのようなサイトカインの例には、リンホカイン、モノカイン、および従来のポリペプチドホルモンがある。サイトカインには以下のものが含まれる：ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、およびウシ成長ホルモンなどの成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、および黄体形成ホルモン（ＬＨ）などの糖タンパク質ホルモン；上皮成長因子；肝臓成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−αおよびβ；ミュラー管抑制物質；マウスノゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポイエチン（ＴＰＯ）；ＮＧＦ−αなどの神経成長因子；血小板成長因子；ＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−βなどの形質転換成長因子（ＴＧＦｓ）；インスリン様成長因子ＩおよびＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロンα，βおよびγなどのインターフェロンならびにマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）などのコロニー刺激因子（ＣＳＦｓ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；ＩＬ−１、ＩＬ−ｌα、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＪＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２などのインターロイキン（ＩＬｓ）；ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−βなどの腫瘍壊死因子；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子。本願明細書で使用されるように、サイトカインとの用語は、自然源に由来する、または天然の一連のサイトカインを有する組み換え細胞培養および生物活性のある同等物に由来するタンパク質を含む。
「プロドラッグ」との用語は、腫瘍細胞に対する細胞毒性が親薬物よりも弱く、より活性の高い親薬物型へと酵素的に活性化または変換されうる薬剤的に活性のある物質の前駆体または誘導体型をいう。本願開示に関係するプロドラッグは以下のものを含むが、これらには限られない：リン酸塩含有プロドラッグ、チオリン酸塩含有プロドラッグ、硫酸塩含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、任意的に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは任意的に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、より活性の高い細胞毒性を有さない薬剤へと変換可能な５−フルオロシトシンおよび他の５−フルオロウリジンプロドラッグ。プロドラッグ型へと誘導体化できる細胞毒性薬の例には、上述したこれらの化学療法剤が含まれるが、これらには限られない。
「血管新生因子または薬剤」との用語は、たとえば血管形成の促進、内皮細胞の成長、血管の安定性、および／または脈管形成などの血管の発達の刺激に関与する成長因子またはその受容体をいう。たとえば、血管新生因子は以下のものを含むが、これらには限られない：ＶＥＧＦ−ＡおよびＶＥＧＦファミリーのメンバーおよびこれらの受容体（ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３）；胎盤成長因子（ＰｌＧＦ）；血小板由来の成長因子（ＰＤＧＦ）ファミリーのメンバーおよびこれらの受容体（特にＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦＲ−α、またはＰＤＧＦＲ−β）；線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）ファミリーのメンバーおよびこれらの受容体（酸性（ａＦＧＦ）、塩基性（ｂＦＧＦ）、ＦＧＦ４、ＦＧＦ９）；ＴＩＥリガンドおよびこれらの受容体（アンジオポエチン、ＡＮＧＰＴｌ、ＡＮＧＰＴ２、ＴＩＥ１、ＴＩＥ２）；エフリン、Ｂｖ８、デルタ様リガンド４（ＤＬＬ４）、Ｄｅｌ−１、ＢＭＰ９、ＢＭＰ１０、ホリスタチン、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、肝細胞成長因子／分散（ｓｃａｔｔｅｒ）因子（ＨＧＦ／ＳＦ）、インターロイキン８（ＩＬ−８）、ＣＸＣＬ１２、レプチン、ミドカイン、ニューロピリン（ＮＲＰ１、ＮＲＰ２）、血小板由来内皮細胞成長因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、プレイオトロフィン（ＰＴＮ）、プログラニュリン、プロリフェリン、形質転換成長因子α（ＴＧＦ−α）、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、Ａｌｋｌ、ＣＸＣＲ４、Ｎｏｔｃｈ１、Ｎｏｔｃｔ４、Ｓｅｍａ３Ａ、Ｓｅｍａ３Ｃ、Ｓｅｍａ３Ｆ、Ｒｏｂｏ４など。基底膜特異的な硫酸ヘパランプロテオグリカンコアタンパク質（ＨＳＰＧ）または硫酸ヘパランプロテオグリカン２（ＨＳＰＧ２）としても知られるペルレカン（ＰＬＣ）など、血管形成を促進する因子をさらに含むであろう。成長ホルモン、インスリン様成長因子Ｉ（ＩＧＦ−Ｉ）、血管ＩＢＰ様成長因子（ＶＩＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、ＥＧＦ様ドメイン集合体（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）７（ＥＧＦＬ７）および結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）およびそのファミリーのメンバーなどの創傷治癒を促進する因子もまた含めることができるであろう。たとえば以下の文献を参照のこと：ＫｌａｇｓｂｒｕｎおよびＤ’Ａｍｏｒｅ（１９９１年）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．第５３巻第２１７〜２３９頁；ＳｔｒｅｉｔおよびＤｅｔｍａｒ（２００３年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ 第２２巻第３１７２〜３１７９頁；ＦｅｒｒａｒａおよびＡｌｉｔａｌｏ（１９９９年）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 第５巻第１２号：第１３５９〜１３６４頁；Ｔｏｎｉｎｉら（２００３年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ 第２２巻：第６５４９〜６５５６頁（たとえば表１には既知の血管新生因子が掲載されている）；佐藤（２００３年）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．第８巻：第２００〜２０６頁。
「血管新生阻害剤」または「血管形成阻害剤」との用語は、直接的または間接的に血管形成、脈管形成、または望ましくない血管透過性を抑制する、低分子量物質、ポリヌクレオチド（たとえば抑制性ＲＮＡ（ＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、分離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体または複合物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）またはそれらの融合タンパク質をいう。当然ながら、血管新生阻害剤には結合して（上述したように）血管新生因子またはその受容体の血管形成活性を阻害する薬剤が含まれる。たとえば、血管新生阻害剤は、後述するように血管形成薬に対する抗体または他の拮抗剤である。たとえば、ＶＥＧＦ−Ａに対する抗体またはＶＥＧＦ−Ａ受容体（たとえばＶＥＧＦＲ−１またはＶＥＧＦＲ−２）に対する抗体、抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ−Ａ受容体のシグナル伝達を阻害する低分子剤（たとえばＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）／ＳＵｌ１２４８（スニチニブリンゴ酸塩）、ＡＭＧ７０６またはたとえば国際特許出願第２００４／１１３３０４号に記載された物質である。血管新生阻害剤は以下の物質を含むが、これらには限られない：ＶＥＧＦ特異拮抗剤などのＶＥＧＦ−Ａ阻害剤、ＥＧＦ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、エルビタックス（登録商標）（セツキシマブ（登録商標）、ＩｍＣＩｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ブランチバーグ、ニュージャージー州）、ベクチビックス（登録商標）（パニツムマブ、アムジェン社、サウザンドオークス、カリフォルニア州）、ＴＩＥ２阻害剤、ＩＧＦ１Ｒ阻害剤、ＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤、ＭＭＰ−２（マトリックスメタロプロテアーゼ２）阻害剤、およびＭＭＰ−９（マトリックスメタロプロテアーゼ９）阻害剤、ＣＰ−５４７６３２（ファイザー社、ニューヨーク州、米国）、アキシチニブ（ファイザー社；ＡＧ−０１３７３６）、ＺＤ−６４７４（アストラゼネカ社）、ＡＥＥ７８８（ノバルティス社）、ＡＺＤ−２１７１）、ＶＥＧＦトラップ（リジェネロン社、アベンティス社）、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７、ＺＫ−２２２５８４としても知られる：ノバルティス社、シエーリング社）、マクジェン（ペガプタニブオクタナトリウム、ＮＸ−１８３８、ＥＹＥ−００１、ファイザー社／Ｇｉｌｅａｄ社／アイテック社）、ＩＭ８６２（Ｃｙｔｒａｎ社、カークランド、ワシントン州、米国）；リボザイム社（ボルダー、コロラド州）およびカイロン（Ｃｈｉｒｏｎ）社（エメリビル、カリフォルニア州）の合成リボザイムであるアンジオザイムおよびこれらの組み合わせ。他の血管形成阻害剤としては、トロンボスポンジン１、トロンボスポンジン２、コラーゲンＩＶおよびコラーゲンＸＶＩＩＩが含まれる。ＶＥＧＦ阻害剤は、米国特許第６５３４５２４号および第６２３５７６４号に開示されている。いずれの明細書も、その全体がすべての目的に対して援用される。血管新生阻害剤はまた、元々存在するたとえばアンギオスタチンやエンドスタチンなどの血管形成阻害剤も含む。たとえば以下の文献を参照のこと：ＫｌａｇｓｂｒｕｎおよびＤ’Ａｍｏｒｅ（１９９１年）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．第５３巻：第２１７〜２３９頁；ＳｔｒｅｉｔおよびＤｅｔｍａｒ（２００３年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ 第２２巻：第３１７２〜３１７９頁（たとえば表３には、悪性黒色腫の抗脈管形成療法が掲載されている）；ＦｅｒｒａｒａおよびＡｌｉｔａｌｏ（１９９９年）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 第５巻第１２号：第１３５９〜１３６４頁；Ｔｏｎｉｎｉら（２００３年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ 第２２巻：第６５４９〜６５５６頁（たとえば表２には、既知の血管新生抑制因子が掲載されている）；佐藤（２００３年）Ｉｎｔ．Ｊ Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．第８巻：第２００〜２０６頁（たとえば表１には、臨床試験で使用される血管新生阻害剤が掲載されている）。
「抗脈管形成療法」との用語は、血管新生阻害剤の投与を含む、血管形成を阻害するために有用な治療をいう。
「リンパ管新生（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ）」および「リンパ管形成」との用語は、リンパ管を発達させる刺激に関連する。したがって、「リンパ管新生因子」は成長因子であって、「リンパ管新生治療」はリンパ管の発達を刺激する治療をいう。本願明細書に開示されたリンパ管新生因子はＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄを含むが、これらには限られない。「抗リンパ管新生」はリンパ管形成の抑制に関係することになる。
「毒素」との用語は、細胞の成長または増殖に有害作用を及ぼしうる物質をいう。
「ＶＥＧＦ−Ｃ」との用語は、配列番号１で提供される完全長４１９アミノ酸ポリペプチド、および完全長ポリペプチドの活性のあるフラグメントを含むその天然に存在する対立遺伝子型、短縮型、および加工型をいう。活性フラグメントは、ＶＥＧＦ−Ｃ生物活性を有する配列番号１の完全長アミノ酸配列の任意の部分を含む。また、活性フラグメントは、成熟型ＶＥＧＦ−Ｃを含むが、これには限られない。ＶＥＧＦ−ＣはＮ末端およびＣ末端のプロペプチド、ならびにＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３に対する結合部位を含む中央のＶＥＧＦ相同ドメイン（ＶＨＤ）を含む前駆体タンパク質として合成される。Ｎ末端とＣ末端のプロペプチドは、生合成中に前駆タンパク質転換酵素によるタンパク質分解によってＶＨＤから切断され、十分に加工された成熟型が生成される。ヒトでは、タンパク質分解によって加工された型である成熟したＶＥＧＦ−Ｃは、ホモ二量体として存在し、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３に結合する。加工型成熟ＶＥＧＦ−Ｃは、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３受容体に対する結合親和性を有する。実験的証拠が示すのは、ＶＥＧＦ−Ｃの完全長型、部分加工型および完全加工成熟型がＶＥＧＦＲ−３に結合できるということである。しかし、ＶＥＧＦＲ−２に対する高親和性結合が起きるのは、ＶＥＧＦ−Ｃの完全加工成熟型に対してだけである。「ＶＥＧＦ−Ｃ」との用語は、ヒト以外の種に由来するＶＥＧＦ−Ｃの対立遺伝子型、加工型および切断型に対しても使用される。
ＶＥＧＦ−Ｃは、血管形成調節因子である構造的に関連したＶＥＧＦファミリーの一員である。血管形成活性に加えて、ＶＥＧＦ−ＣはＶＥＧＦＲ−３に結合することを通じてリンパ管形成の制御に関与するようである。腫瘍においてＶＥＧＦ−Ｃによって誘導された血管形成は、固形腫瘍の成長および転移性の拡散を促進しうる。また、ＶＥＧＦ−Ｃによって誘導されたリンパ管形成は、腫瘍細胞のリンパ管およびリンパ節への転移性の拡散を促進しうる。さらに、臨床病理学的なデータが示唆するのは、この成長因子が一般的なヒトのがんにおいて広範に役割を有することである。たとえば、肺がんにおけるＶＥＧＦ−ＣのｍＲＮＡの発現量は、リンパ節転移に関連し、乳がんにおいてはリンパ管浸潤および無病生存率の低下に関連する。
ＶＥＧＦ−Ｃポリペプチドに関して「生物活性」および「生物活性のある」との用語は、完全長および／または成熟型ＶＥＧＦ−Ｃに関する物理／化学特性および生物学的機能をいう。実施の形態によっては、ＶＥＧＦ−Ｃの「生物活性」は、ＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３に結合する能力を有し、これらのリン酸化を促進することを意味する。一般に、ＶＥＧＦ−Ｃは、ＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３の細胞外ドメインに結合することによって、細胞内チロシンキナーゼドメインを活性化または抑制するであろう。その結果、ＶＥＧＦ−Ｃの受容体への結合によって、ＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３を有する細胞の増殖および／または分化および／または活性化が、生体内または試験管内において細胞表面にて促進または抑制されうる。ＶＥＧＦ−ＣのＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３への結合は、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡおよび他の競合的結合アッセイなどの競合的結合法を含む従来技術を用いて測定されうる。リガンド／受容体複合体は、ろ過、遠心分離、フローサイトメトリーなどの分離法を用いて同定されうる。結合解析から得られた結果は、結合データに関する従来の任意のグラフ表示を用いて解析できる。ＶＥＧＦ−ＣはＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３のリン酸化を誘導する。そのため、従来のチロシンリン酸化アッセイも、それぞれＶＥＧＦＲ−２／ＶＥＧＦ−Ｃ複合体およびＶＥＧＦＲ−３／ＶＥＧＦ−Ｃ複合体形成の指標として使用することができる。別の実施の形態では、ＶＥＧＦ−Ｃの「生物活性」は、ＶＥＧＦＲ−２結合能を有することを意味する。
「ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤」との用語は、ＶＥＧＦ−Ｃの発現量を抑制可能な分子、またはＶＥＧＦ−Ｃの生物活性の１以上を中和し、阻害し、抑制し、無効化し、低下させ、干渉する分子をいう。ＶＥＧＦ−Ｃの生物活性には、１以上の受容体に対するＶＥＧＦ−Ｃの結合、ＶＥＧＦ−Ｃを介した血管形成、リンパ内皮細胞（ＬＥＣ）移動、ＬＥＣ増殖、または成体のリンパ管形成を含むが、これらには限られない。本願発明において有用なＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体、およびそれらの抗原−結合フラグメントに特異的に結合するポリペプチド、ＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｃ受容体に結合してリガンド−受容体相互作用を阻害するポリペプチド（たとえばイムノアドヘシン、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ））、ＶＥＧＦ−Ｃに結合してそれを隔離させることによって、ＶＥＧＦ−Ｃが生体内で細胞上に発現している受容体に結合してそれを活性化させることを阻害するＶＥＧＦ−受容体分子およびその誘導体（たとえばＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３から誘導された可溶性受容体トラップ（ｔｒａｐｓ））、ＶＥＧＦ−Ｃ受容体抗体、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３の低分子阻害剤などのＶＥＧＦ−Ｃ受容体拮抗剤を制限なく含む。ＶＥＧＦ−Ｃ特異的拮抗剤はまた、ＶＥＧＦ−Ｃポリペプチドの拮抗剤変異体、ＶＥＧＦ−Ｃに対するアンチセンス核酸塩基オリゴマー、ＶＥＧＦ−Ｃに対する小型ＲＮＡ分子、ＶＥＧＦ−Ｃに対するＲＮＡアプタマー、ペプチボディおよびリボザイムも含む。ＶＥＧＦ−Ｃ特異的拮抗剤はまた、ＶＥＧＦ−Ｃに結合する非ペプチド性低分子も含む。この非ペプチド性低分子は、１以上のＶＥＧＦ−Ｃ生物活性を阻害し、抑制し、無効化し、低下させ、干渉することができる。「ＶＥＧＦ−Ｃ活性」との用語は、（既に定義したように）ＶＥＧＦ−Ｃを介したＶＥＧＦ−Ｃの生物活性を特に含む。態様によっては、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上、ＶＥＧＦ−Ｃの発現量または生物活性を低下または抑制させる。ある好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は試験管内においてＶＥＧＦ−Ｃに結合して、ＶＥＧＦ−Ｃにより誘導された内皮細胞増殖を抑制する。ある好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、それぞれ非ＶＥＧＦ−Ｃポリペプチドまたは非ＶＥＧＦ−Ｃ受容体に対するよりも高い親和性にて、それぞれＶＥＧＦ−ＣポリペプチドまたはＶＥＧＦ−Ｃ受容体に結合する。他の好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤はＶＥＧＦ−ＣポリペプチドまたはＶＥＧＦ−Ｃ受容体に特異的に結合する。ある好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、Ｋｄ＝１μＭ〜１ｐＭにてＶＥＧＦ−ＣまたはＶＥＧＦ−Ｃ受容体に結合する。他の好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、Ｋｄ＝５００ｎＭ〜１ｐＭにてＶＥＧＦ−ＣまたはＶＥＧＦ−Ｃ受容体に結合する。「ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤」との用語は、ＶＥＧＦ−Ｃに結合し、ＶＥＧＦ−Ｃ活性を中和し、阻害し、抑制し、無効化し、低下させ、干渉することができる抗体、抗体フラグメント、他の結合ポリペプチド、ペプチド、および非ペプチド性低分子を含む分子を特に含む。
ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、ＶＥＧＦＲ−３活性を阻害するチロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）であってもよい。ＶＥＧＦＲ−３活性を阻害するＴＫＩとは、ＶＥＧＦＲ−３受容体のチロシンキナーゼ活性を選択的または非選択的に低下させる受容体チロシンキナーゼ活性を有する阻害剤を意味する。そのような阻害剤は一般に、ＶＥＧＦＲ−３の発現にあまり影響を及ぼすことなく、そしてリガンド−結合能などの他のＶＥＧＦＲ−３活性に影響を及ぼすことなく、ＶＥＧＦＲ−３チロシンキナーゼ活性を低下させる。ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、ＶＥＧＦＲ−３触媒ドメインに直接結合する分子、たとえばＡＴＰ類似物質でありうる。ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、１以上の水素結合を介してＶＥＧＦＲ−３触媒ドメインに結合しうる。これはＡＴＰのアデニン部分をＶＥＧＦＲ−３に固定することに類似する（Ｅｎｇｈら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２７１巻第２６１５７〜２６１６４頁（１９９６年）；Ｔｏｎｇら、Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃ．Ｂｉｏｌ．第４巻第３１１〜３１６頁（１９９７年）；Ｗｉｌｓｏｎら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．第４巻第４２３〜４３１頁（１９９７年））。ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、アデニン結合部位に隣接した疎水ポケットにも結合できる（Ｍｏｈａｍｅｄｉら、ＥＭＢＯ Ｊ．第１７巻第５８９６〜５９０４頁（１９９８年）；Ｔｏｎｇら、上述、１９９７年；Ｗｉｌｓｏｎら、上述、１９９７年）。
本願発明に有用なＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、インドリノンなどの特異的ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤を含む。特異的ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、ＶＥＧＦＲ−２に比べて、ＶＥＧＦ−ＣとＶＥＧＦ−Ｄにより誘導されたＶＥＧＦＲ−３キナーゼ活性を別々に阻害する。そのような特異的ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤（たとえばＭＡＥ１０６およびＭＡＺ５１）は、Ｋｉｒｋｉｎら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第２６８巻第５５３０〜５５４０頁（２００１年）に開示されているようにして調整可能である。特異的、選択的、および非選択的な阻害剤を含む追加的なＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、公知であるか、または受容体チロシンキナーゼ阻害を測定するための多くの周知の方法のうちの１つを用いて同定可能である。
例として、たとえばＨｅｎｎｅｑｕｉｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．第４２巻第５３６９〜５３８９頁（１９９９年）およびＷｅｄｇｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．第６０巻第９７０〜９７５頁（２０００年）に示されるように、リン酸化チロシンの産生を解析するための周知のＥＬＩＳＡアッセイを用いて、ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤を同定することができる。そのようなアッセイは、ＶＥＧＦＲ−１などの他の血管内皮成長因子受容体および線維芽細胞成長因子受容体１（ＦＧＦＲ１）などの無関係なチロシンキナーゼよりもＶＥＧＦＲ−３を抑制する分子をスクリーニングするために使用可能である。簡潔に説明すると、スクリーニングされる分子を室温にてポリ（グルタミン酸、アラニン、チロシン）６：３：１ランダム共重合体基質（ＳＩＧＭＡ社、ミズーリ州セントルイス）によりコーティングされた９６−穴プレート中で１０ｍＭ ＭｎＣｌ２および２μＭ ＡＴＰを含むＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液中にて細胞質受容体ドメインとともに２０分間インキュベートすることができる。リン酸化チロシンは、マウスＩｇＧ抗リン酸チロシン抗体（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社、ニューヨーク州レイク・プラシッド）、セイヨウワサビのペルオキシダーゼ結合型ヒツジ抗マウス免疫グロブリン抗体（アマシャム社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）、および２，２’アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸）（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社、インディアナ州インディアナポリス）とともに連続的にインキュベートすることによって検出可能である。そのような試験管内のキナーゼアッセイでは、ＶＥＧＦＲ−３の供給源は、たとえば細胞質受容体ドメイン、たとえばヒトＶＥＧＦＲ−３の第７９８〜１３６３残基を含む組み換えバキュロウイルスを感染させた昆虫細胞から調整された溶解物とすることができる。
本願明細書で使用されるように、ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤との用語は、ＶＥＧＦＲ−３の特異的、選択的、および非選択的な阻害剤を含む。特異的ＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、ＦＧＦＲ１などのほとんどまたはすべての無関係な受容体チロシンキナーゼの活性に比べて、そして血管内皮成長因子受容体であるＶＥＧＦＲ−１およびＶＥＧＦＲ−２の活性に比べて、ＶＥＧＦＲ−３のチロシンキナーゼ活性を低下させる。選択的なＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、ＦＧＦＲ１などのほとんどまたはすべての受容体チロシンキナーゼに比べて、ＶＥＧＦＲ−３のチロシンキナーゼ活性を低下させる。そのような選択的なＶＥＧＦＲ−３阻害剤は、分離されたＶＥＧＦＲ−３細胞質ドメインの抑制に対する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）、つまりたとえばＶＥＧＦＲ−１とＶＥＧＦＲ−２のＩＣ５０のいずれよりも少なくとも１０倍少ないＩＣ５０を有しうる。特定の態様では、本願発明は、単離されたＶＥＧＦＲ−３細胞質ドメインの抑制に対するＩＣ５０が、ＶＥＧＦＲ−１とＶＥＧＦＲ−２のＩＣ５０のいずれよりも少なくとも２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍または５００倍少ない選択的なＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤を提供する。対照的に、非選択的なＶＥＧＦＲ−３キナーゼ阻害剤は、ＶＥＧＦＲ−１とＶＥＧＦＲ−２の少なくとも一方のチロシンキナーゼ活性を、ＶＥＧＦＲ−３と同程度にまで低下させる。
「ＶＥＧＦ−Ｃ抗体」との用語は、ＶＥＧＦ−Ｃまたはその生物活性のあるフラグメント、たとえば成熟した完全加工型に十分な親和性および特異性にて結合する抗体をいう。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は十分な親和性をもってＶＥＧＦ−Ｃに結合可能である。そのため、抗体はＶＥＧＦ−Ｃを標的とする診断薬および／または治療薬として有用である。抗体は、その治療薬（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）としての有効性を評価するために、生物活性アッセイに用いられてもよい。そのようなアッセイは、公知であって標的抗原および抗体用に意図された使用に依存する。アッセイの例には、ＨＵＶＥＣ抑制アッセイ；腫瘍細胞成長抑制アッセイ（たとえば国際特許出願第８９／０６６９２号に開示）；抗体依存細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイおよび補体仲介性細胞毒性（ＣＤＣ）アッセイ（たとえば米国特許第５５００３６２号に開示）；アゴニスト活性アッセイまたは造血アッセイ（たとえば国際特許出願第９５／２７０６２号に開示）が含まれる。ＶＥＧＦ−Ｃ抗体の結合は、ＶＥＧＦ−Ｃ活性を部分的または完全に阻害し、中和し、低下させ、または無効化する（ａｎｔａｇｏｎｉｚｅ）。ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は、一般にはＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、またはＰｌＧＦ、ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦなどの他の成長因子など、他のＶＥＧＦホモローグには結合しないであろう。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体が無関係な非ＶＥＧＦ−Ｃタンパク質に結合する程度は、たとえばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるように、抗体のＶＥＧＦ−Ｃに対する結合の約１０％未満である。好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体はＶＥＧＦ−Ｃポリペプチドに特異的に結合する。態様によっては、ＶＥＧＦ−Ｃに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、または≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。態様によっては、選択された抗体は、Ｋｄ値が１００ｎＭ〜１ｐＭであるｈＶＥＧＦ−Ｃに対する結合親和性を有するであろう。抗体親和性は、たとえば表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（国際特許出願第２００５／０１２３５９号に開示されたＢＩＡｃｏｒｅアッセイなど）；酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）；競合アッセイ（たとえばＲＩＡ）によって決定されてもよい。態様によっては、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は異なる種のＶＥＧＦ−Ｃ間で保存されたＶＥＧＦ−Ｃのエピトープに結合する。
ＶＥＧＦ−Ｃ抗体のある例は、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＰＴＡ−４０９５により生産された、または図３および４にそれぞれ示された重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有するモノクローナルＶＥＧＦ−Ｃ抗体６９Ｄ０９のＶＥＧＦ−Ｃに対する結合を競合的に阻害するモノクローナル抗体である。ＶＥＧＦ−Ｃ抗体の他の例は、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＰＴＡ−４０９５により生産された、または図３および４にそれぞれ示された重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有するモノクローナルＶＥＧＦ−Ｃ抗体６９Ｄ０９と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は、６９Ｄ０９抗体またはそのフラグメントを含むがこれらには限られない完全ヒトＶＥＧＦ−Ｃモノクローナル抗体である。好適な抗体の他の例には、抗体１０３、ＭＭ０００６−２Ｅ６５および１９３２０８が含まれる。そのような抗体のさらなる例は、米国特許第７２０８５８２号、米国特許第７８５０９６３号および米国特許第７１０９３０８号に記載されている。ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は、ヒト化抗体であってもよい。好ましくは、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は寄託されたハイブリドーマＡＴＣＣ ＰＴＡ−４０９５により生産された、またはそれぞれ図３および４に示す重鎖および軽鎖アミノ酸配列を有するヒト抗体である。
「ＶＥＧＦ−Ａ」との用語は、配列番号：２に示された２３２個のアミノ酸ポリペプチド、ならびにその天然に存在する対立遺伝子型、切断型、および加工型をいう。より具体的には、本願明細書で使用されるように「ＶＥＧＦ−Ａ」との用語は、Ｌｅｕｎｇら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ 第２４６巻第１３０６頁およびＨｏｕｃｋら（１９９１年） Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ、第５巻第１８０６頁に開示されているように、ヒトＶＥＧＦ−Ａの１６５個のアミノ酸アイソフォームおよび関連する１２１個、１８９個、および２０６個のアミノ酸アイソフォーム、ならびにその天然に存在する対立遺伝子型および加工型をいう。「ＶＥＧＦ−Ａ」との用語は、１６５個のアミノ酸を有するヒトＶＥＧＦ−Ａアイソフォームのアミノ酸第８〜１０９残基または第１〜１０９残基を含むポリペプチドの切断型をいう場合にも使用される。「ＶＥＧＦ−Ａ」との用語は、マウス、ラットおよび霊長類などのヒト以外の種から得られた様々なアイソフォームを含むＶＥＧＦ−Ａの対立遺伝子型、加工型および切断型をいう場合にも使用される。ＶＥＧＦ−Ａは、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１）およびＶＥＧＦＲ−２（ＫＤＲ）に対する結合親和性を有する。
ＶＥＧＦ−Ａポリペプチドに関して「生物活性」および「生物活性のある」との用語は、任意のＶＥＧＦ−Ａ受容体に対する結合または任意のＶＥＧＦ−Ａシグナル活性をいう。たとえば正常および異常な血管形成および脈管形成の制御（ＦｅｒｒａｒａおよびＤａｖｉｓ−Ｓｍｙｔｈ（１９９７年）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖ．第１８巻第４〜２５頁；Ｆｅｒｒａｒａ（１９９９年）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．第７７巻第５２７〜５４３頁）；胚の脈管形成および血管形成の促進（Ｃａｒｍｅｌｉｅｔら（１９９６年） Ｎａｔｕｒｅ 第３８０頁第４３５〜４３９頁；Ｆｅｒｒａｒａら（１９９６年） Ｎａｔｕｒｅ 第３８０巻第４３９〜４４２頁）；メスの生殖器官における周期的な血管増殖の調節、ならびに骨成長および軟骨形成に対する調節（Ｆｅｒｒａｒａら（１９９８年）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．第４巻：第３３６〜３４０頁；Ｇｅｒｂｅｒら（１９９９年）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．第５巻：第６２３〜６２８頁）である。血管形成および脈管形成において血管新生因子となることに加えて、ＶＥＧＦ−Ａは多面的な成長因子として、内皮細胞の生存、血管透過性および血管拡張、単球走化およびカルシウム流入などの他の生理的過程において、多数の生物学的効果を示す（ＦｅｒｒａｒａおよびＤａｖｉｓ−Ｓｍｙｔｈ（１９９７年）（上述）、およびＣｅｂｅ−Ｓｕａｒｅｚら、Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ．Ｓｃｉ．第６３巻第６０１〜６１５頁（２００６年））。さらに、最近の研究は、網膜色素上皮細胞、膵管細胞、およびシュワン細胞などの少数の非内皮細胞型に対するＶＥＧＦ−Ａの細胞分裂促進作用を報告しているＧｕｅｒｒｉｎら（１９９５年）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．第１６４巻：第３８５〜３９４頁；Ｏｂｅｒｇ−Ｗｅｌｓｈら（１９９７年）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．第１２６巻：第１２５〜１３２頁；Ｓｏｎｄｅｌｌら（１９９９年）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．第１９巻：第５７３１〜５７４０頁。
「ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤」との用語は、ＶＥＧＦ−Ａ発現量を低下させることができる分子、またはＶＥＧＦ−Ａの１以上の生物活性を中和し、阻害し、抑制し、無効化し、低下させ、干渉する分子をいう。このような生物活性には、１以上の受容体に対するＶＥＧＦ−Ａの結合およびＶＥＧＦ−Ａを介した血管形成が含まれるが、これらには限られない。ＶＥＧＦ−Ａ特異的拮抗剤は、ＶＥＧＦ−ＡまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体（たとえばＶＥＧＦＲ−１またはＶＥＧＦＲ−２）に結合することが好ましい。本願発明に有用なＶＥＧＦ−Ａ特異的拮抗剤は、以下の物質に特異的に結合するポリペプチドを制限なく含む：ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ａ抗体およびそれらの抗原結合フラグメント、ＶＥＧＦ−Ａに結合してＶＥＧＦ−Ａを隔離させることによって、ＶＥＧＦ−Ａが生体内の細胞上で発現している受容体に結合してこれらを活性化させることを阻害するＶＥＧＦ−受容体分子および誘導体（たとえばＲｅｇｅｎｅｒｏｎ社のＶＥＧＦ−ＴｒａｐなどのＶＥＧＦＲ−１および／またはＶＥＧＦＲ−２に由来する可溶性の受容体トラップ）、ＶＥＧＦ−ＡおよびＶＥＧＦ−Ａに結合してリガンド−受容体相互作用を阻害する受容体ポリペプチド（たとえばイムノアドヘシンやペプチボディ）、ＶＥＧＦ−Ａ受容体抗体、ＶＥＧＦＲ−１および／またはＶＥＧＦＲ−２の低分子阻害剤などのＶＥＧＦ−Ａ受容体拮抗剤、ＶＥＧＦ１２１−ゲロニン（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ社）などの融合タンパク質、ＶＥＧＦ−Ａポリペプチドの拮抗剤変異体、ＶＥＧＦ−Ａに結合するアプタマー、ＶＥＧＦ−ＡまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体を標的とするアンチセンス核酸塩基オリゴマー、ＶＥＧＦ−ＡまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体を標的とする小型ＲＮＡ分子（たとえばＲＮＡｉ）、およびＶＥＧＦ−Ａに対するリボザイム。ＶＥＧＦ−Ａ特異的拮抗剤はまた、ＶＥＧＦ−Ｃに結合してＶＥＧＦ−Ａの生物活性のうち１つ以上を阻害し、抑制し、無効化し、低下させ、干渉することができる非ペプチド性低分子を含む。したがって、「ＶＥＧＦ−Ａ活性」との用語は、ＶＥＧＦ−Ａを介したＶＥＧＦ−Ａの生物活性を特に含む。態様によっては、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤は少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％，５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上、ＶＥＧＦ−Ａの発現量または１以上の生物活性を低下させるか阻害する。ある好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤はＶＥＧＦに結合してＶＥＧＦ−Ａにより誘導された内皮細胞の増殖を試験管内で阻害する。他の好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤はＶＥＧＦ−ＡポリペプチドまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体に特異的に結合する。ある好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤は、非ＶＥＧＦ−Ａポリペプチドまたは非ＶＥＧＦ−Ａ受容体に対するよりもそれぞれ高い親和性にてＶＥＧＦ−ＡポリペプチドまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体に結合する。ある好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤はＶＥＧＦ−ＡまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体にＫｄ＝１μＭ〜１ｐＭにて結合する。他の好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤はＶＥＧＦ−ＡまたはＶＥＧＦ−Ａ受容体にＫｄ＝５００ｎＭ〜１ｐＭにて結合する。
好ましい態様によると、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤は抗体、ペプチボディ、イムノアドヘシン、低分子またはアプタマーなどのポリペプチドから選択される。好ましい態様では、抗体はアバスチン（登録商標）抗体などのＶＥＧＦ−Ａ抗体、あるいはＶＥＧＦＲ−１またはＶＥＧＦＲ−２抗体などのＶＥＧＦ−Ａ受容体抗体である。ＶＥＧＦ拮抗剤の他の例には、以下のものが含まれる：ＶＥＧＦ−トラップ（Ｔｒａｐ）、Ｍｕｃａｇｅｎ、ＰＴＫ７８７、ＳＵＩ １２４８、ＡＧ−０１３７３６、Ｂａｙ ４３９００６（ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＺＤ−６４７４、ＣＰ６３２、ＣＰ−５４７６３２、ＡＺＤ−２ｌ７ｌ、ＣＤＰ−１７ｌ、ＳＵ−１４８１３、ＣＨＩＲ−２５８、ＡＥＥ−７８８、ＳＢ７８６０３４、ＢＡＹ５７９３５２、ＣＤＰ−７９ｌ、ＥＧ−３３０６、ＧＷ−７８６０３４、ＲＷＪ−４ｌ７９７５／ＣＴ６７５８およびＫＲＮ−６３３。
「ＶＥＧＦ−Ａ抗体」との用語は、十分な親和性および特異性にてＶＥＧＦ−Ａに結合する抗体をいう。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ａ抗体は十分な親和性にてＶＥＧＦ−Ａに結合可能である。そのため、ＶＥＧＦ−Ａ抗体はＶＥＧＦ−Ａを標的とする診断薬および／または治療薬として有用である。ＶＥＧＦ−Ａ抗体は、ＶＥＧＦ−Ａ活性が関与する病気または状態を標的として干渉する治療薬として使用できることが好ましい。ＶＥＧＦ−Ａ抗体は、治療薬としての有効性を評価するために、生物活性アッセイに用いられてもよい。そのようなアッセイは公知であって、標的抗原および抗体に対して意図された使用に依存する。アッセイの例には、ＨＵＶＥＣ抑制アッセイ；腫瘍細胞成長抑制アッセイ（たとえば国際特許出願第８９／０６６９２号に記載）；抗体依存細胞傷害性（ＡＤＣＣ）アッセイおよび補体仲介性細胞毒性（ＣＤＣ）アッセイ（たとえば米国特許第５５００３６２号に記載）；アゴニスト活性アッセイまたは造血アッセイ（たとえば国際特許出願第９５／２７０６２号に記載）が含まれる。ＶＥＧＦ−Ａ抗体の結合は、ＶＥＧＦ−Ａ活性を部分的または完全に阻害し、中和し、減少させ、または無効化するであろう。ＶＥＧＦ−Ａ抗体は一般に、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅなどの他のＶＥＧＦ−Ａホモローグ、またはＰｌＧＦ、ＰＤＧＦ、ｂＦＧＦなどの他の成長因子には結合しないであろう。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ａ抗体が無関係な非ＶＥＧＦ−Ａタンパク質に結合する程度は、たとえばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるように、ＶＥＧＦ−Ａ抗体のＶＥＧＦ−Ａへの結合の約１０％未満である。好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ａ抗体はＶＥＧＦ−Ａポリペプチドに特異的に結合する。態様によっては、ＶＥＧＦ−Ａに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭまたは≦０．１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有する。態様によっては、選択された抗体は、Ｋｄ＝１００ｎＭ〜１ｐＭというｈＶＥＧＦ−Ａに対する結合親和性を有するであろう。抗体親和性は、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（国際特許出願第２００５／０１２３５９号に開示されたＢＩＡｃｏｒｅアッセイなど）、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、および競合アッセイ（たとえばＲＩＡ）によって決定されてもよい。態様によっては、ＶＥＧＦ−Ａ抗体は異なる種のＶＥＧＦ−Ａ間で保存されたＶＥＧＦ−Ａのエピトープに結合する。好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ａ抗体はハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ １０７０９により生産されたモノクローナルＶＥＧＦ−Ａ抗体Ａ４．６．ｌと同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。より好ましくは、ＶＥＧＦ−Ａ抗体はＰｒｅｓｔａら（１９９７年）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．第５７巻第４５９３〜４５９９頁に従って生産された組換えヒト化ＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体である。
Ｐｒｅｓｔａらに従って生産された特に好ましいＶＥＧＦ−Ａ抗体は、「ベバシズマブ（ＢＶ）」または「アバスチン（登録商標）」（「ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ」としても知られる）として知られた抗体である。ベバシズマブは、マウスｈＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体ＡＡ．６．１から得られた変異型ヒトＩｇＧｌフレームワーク領域および抗原結合相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を含む。マウスｈＶＥＧＦ−Ａモノクローナル抗体ＡＡ．６．１は、ヒトＶＥＧＦ−Ａのその受容体への結合を阻害する。ベバシズマブのアミノ酸配列の約９３％（フレームワーク領域の大部分を含む）は、ヒトＩｇＧｌに由来する。この配列の約７％は、マウス抗体Ａ４．６．１に由来する。ベバシズマブは約１４９０００ダルトンの分子量を有し、グリコシル化されている。ベバシズマブおよび他のヒト化ＶＥＧＦ−Ａ抗体は、米国特許第６８８４８７９号にさらに説明されている。米国特許第６８８４８７９号の開示の全体は、参照により本願明細書に明確に援用される。
別の態様では、ＶＥＧＦ−Ａ抗体はラニビズマブ（ルセンティス（登録商標）抗体またはｈｕＦａｂ Ｖ２）である。ラニビズマブは、ヒト化した親和性成熟型ヒトＶＥＧＦ−Ａ Ｆａｂフラグメントであって、大腸菌発現ベクターおよび細菌発酵における標準的な組み換え技術によって生産される。ラニビズマブはグリコシル化されておらず、約４８０００ダルトンの分子量を有する。国際特許出願第９８／４５３３１号および米国特許出願第２００３０１９０３１７号も参照のこと。
本願発明に使用されてもよい他のＶＥＧＦ−Ａ抗体には、米国特許出願第２００６０２８０７４７号、米国特許出願第２００７０１４１０６５号および米国特許出願第２００７００２０２６７号に開示されているように、Ｂ２０またはＧ６抗体の配列に由来する抗体が含まれる。これらの開示の全体は、参照により本願明細書に明確に援用される。ある態様では、米国特許出願第２００６０２８０７４７号、米国特許出願第２００７０１４１０６５号および米国特許出願第２００７００２０２６７号に開示されているように、抗体はＢ２０−４．１である。別の態様では、米国特許出願第６０／９９１３０２号に開示されているように、抗体はＢ２０−４．１．１である。米国特許出願第６０／９９１３０２号の開示の全体は、参照により本願明細書に明確に援用される。潜在的に有用なＧ６に由来する抗体には、Ｇ６−８、Ｇ６−２３およびＧ６−３１が含まれるが、これらには限定されない。
他の追加的なＶＥＧＦ−Ａ抗体は、米国特許第７０６０２６９号、米国特許第６５８２９５９号、米国特許第６７０３０２０号、米国特許第６０５４２９７号、国際特許出願第９６／３００４６号、国際特許出願第９４／１０２０２号、欧州特許第６６６８６８号、米国出願第２００６００９３６０号、米国出願第２００５０１８６２０８号、米国出願第２００３０２０６８９９号、米国出願第２００３０１９０３１７号、米国出願第２００３０２０３４０９号、米国出願第２００５０１１２１２６号およびＰｏｐｋｏｖらのＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ 第２８８巻第１４９〜１６４頁（２００４年）に開示されている。
ＶＥＧＦ受容体は、ＶＥＧＦＲ−１（Ｆｌｔ−１としても知られている）、ＶＥＧＦＲ−２（マウスホモログについてＫＤＲおよびＦＬＫ−１としても知られている）およびＶＥＧＦＲ−３（Ｆｌｔ−４としても知られている）を含む。ＶＥＧＦファミリーの各メンバーに対する各受容体の特異性は様々である。ＶＥＧＦ−ＡはＶＥＧＦＲ−１とＶＥＧＦＲ−２のいずれにも結合する。ＶＥＧＦ−ＣはＶＥＧＦＲ−２とＶＥＧＦＲ−３に結合する。完全長の受容体は、７つのＩｇ様ドメインおよび１つの膜貫通ドメインを有する細胞外ドメインと、チロシンキナーゼ活性を有する１つの細胞内ドメインとを含む。細胞外ドメインは、ＶＥＧＦリガンドの結合に関与する。細胞内ドメインは、シグナル伝達に関与する。
ＶＥＧＦリガンドに特異的に結合するＶＥＧＦ受容体分子またはそれらのフラグメントは、ＶＥＧＦタンパク質に結合して隔離させることによってシグナル伝達を阻害するＶＥＧＦ拮抗剤として使用可能である。好ましい態様では、ＶＥＧＦ受容体分子は可溶性である。可溶性のＶＥＧＦ受容体分子は、ＶＥＧＦタンパク質に結合することによって、ＶＥＧＦタンパク質の生物活性に対して阻害作用を及ぼす。これによって、ＶＥＧＦタンパク質が標的細胞表面に存在する本来の受容体に結合することを阻害する。ＶＥＧＦ受容体分子が細胞膜に結合しなくなることは望ましくない。好ましい態様では、可溶性のＶＥＧＦ受容体分子は、それが由来したＶＥＧＦ受容体型の膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインに対応するあらゆるアミノ酸配列を欠いている。
ＶＥＧＦ−受容体分子は、少なくとも２つの異なる受容体タンパク質に由来するアミノ酸配列を含むキメラ分子であってもよい。そのうち１以上は、ＶＥＧＦに結合してＶＥＧＦの生物活性を阻害することができるＶＥＧＦ受容体タンパク質（つまりＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２またはＶＥＧＦＲ−３）である。態様によっては、キメラＶＥＧＦ受容体分子は、ＶＥＧＦＲ−１，ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３から選択された２つだけの異なる受容体タンパク質に由来するアミノ酸配列を含む。好ましい態様では、ＶＥＧＦ−受容体分子はＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２またはＶＥＧＦＲ−３の細胞外リガンド結合領域に由来する１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つすべてのＩｇ様ドメインのみを含む。好ましくは、ＶＥＧＦ−受容体分子は１つ以上のＩｇ様ドメインを含み、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３に由来するあらゆる膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを欠く。特に好適な態様では、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３に由来するＶＥＧＦ−受容体分子のＩｇ様ドメイン部分は、これらのＩｇ様ドメインのうち１つ、２つ、および３つ、またはＩｇ様ドメインの誘導体から選択される。
ＶＥＧＦ−受容体分子は、融合タンパク質であってもよい。この場合、受容体タンパク質に由来するアミノ酸配列（たとえばＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−２および／またはＶＥＧＦＲ−３に由来するＩｇ様ドメイン）は、無関係なタンパク質に由来するアミノ酸（たとえば免疫グロブリン配列）に結合している。好ましい態様では、受容体タンパク質に由来するアミノ酸配列は、免疫グロブリンのＦｃ領域に融合している。Ｉｇ様ドメインが結合（融合）していてもよい他のアミノ酸配列は、当業者には明らかであろう。
本願発明に有用なＶＥＧＦ−受容体分子の例には、可溶性のＶＥＧＦＲ−１／Ｆｃ（ＩｇのＦｃ領域に融合したＶＥＧＦＲ−１の細胞外ドメインに由来するＩｇ様ドメインを含む）、ＶＥＧＦＲ−２／Ｆｃ（ＩｇのＦｃ領域に融合したＶＥＧＦＲ−２の細胞外ドメインに由来するＩｇ様ドメインを含む）およびＶＥＧＦＲ−１／ＶＥＧＦＲ−２／Ｆｃ（ＩｇのＦｃ領域に融合したＶＥＧＦＲ−１およびＶＥＧＦＲ−２の細胞外ドメインに由来するＩｇ様ドメインを含む）（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ社のＶＥＧＦ−Ｔｒａｐとしても知られる）国際特許出願第９７／４４４５３号を参照）を含む。これらのＶＥＧＦ受容体分子は、ＶＥＧＦ−Ａを隔離する。
ＶＥＧＦ−Ｃを隔離することによってＶＥＧＦ−Ｃ活性またはＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３を介したシグナル伝達を阻害する可溶性のＶＥＧＦ−受容体分子の例は、国際特許出願第２０００／０２３５６５号、国際特許出願第２０００／０２１５６０号、国際特許出願第２００２／０６０９５０号および国際特許出願第２００５／０８７８０８号に開示されている。ＶＥＧＦ−Ｃ活性に対するそのような阻害剤には、ＶＥＧＦＲ−２、ＶＥＧＦＲ−３およびＮＲＰ−２に由来する可溶性のトラップ（ｔｒａｐｓ）が含まれる。好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は可溶性のＶＥＧＦ−Ｃ受容体分子である。好ましいＶＥＧＦ−Ｃ受容体分子は、ＶＥＧＦＲ−３の細胞外ドメインの一部を含むポリペプチドである。この一部は、細胞外ドメインのＩｇ様ドメイン１〜３を少なくとも含み、Ｉｇ様ドメイン４〜７およびあらゆる膜貫通ドメインを欠くポリペプチドを欠く。これらのコンストラクトは、国際特許出願第２００２／０６０９５０号により詳細に説明されている。
ある拮抗剤、特にＶＥＧＦ受容体を標的とするかＶＥＧＦ受容体に由来する拮抗剤は、１つ以上のＶＥＧＦリガンドを拮抗してもよい。たとえば、ＶＥＧＦＲ−３抗体またはＶＥＧＦＲ−３に由来するＶＥＧＦ−受容体分子は、ＶＥＧＦ−ＣおよびＶＥＧＦ−Ｄの活性を阻害（拮抗）するために使用可能である。これらのＶＥＧＦリガンドはいずれもＶＥＧＦＲ−３に結合するためである。ＶＥＧＦ／ＰＧＤＦファミリーのリガンドのうち２つに結合できる拮抗剤分子、たとえばＶＥＧＦ−ＣポリペプチドとＶＥＧＦ−Ｄポリペプチドの両方に結合して隔離可能な可溶性ＶＥＧＦＲ−３受容体トラップの場合、本願明細書で特異的に結合する拮抗剤分子とは、いずれのリガンドにも結合する拮抗剤の能力をいう。例として、またＸおよびＹに結合して拮抗する（たとえばＸおよびＹの１以上の生物活性を中和し、遮断し、阻害し、無効化し、減少させ、干渉する）拮抗剤分子に関して、ある態様では、拮抗剤はＸおよびＹの発現量または生物活性を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上、低下または抑制させる。他の態様によると、拮抗剤は（ｉ）Ｘに結合してＸの生物活性を阻害し（たとえばＶＥＧＦ−Ｃに結合してＶＥＧＦ−Ｃに誘導された内皮細胞の増殖を試験管内で阻害する）、（ｉｉ）Ｙに結合してＹの生物活性を阻害する（たとえばＶＥＧＦ−Ｄに結合してＶＥＧＦ−Ｄに誘導されたリンパ内皮細胞の増殖を試験管内で阻害する）。他の好ましい態様によると、拮抗剤は、非Ｘポリペプチドおよび非Ｙポリペプチドに対するよりも高い親和性にて、ＸおよびＹに別々に結合する。他の好ましい態様によると、拮抗剤はＸとＹのいずれにも特異的に結合する。ある好ましい態様によると、拮抗剤はＫｄ＝１μＭ〜１ｐＭにてＸおよびＹに別々に結合する。他の好ましい態様によると、拮抗剤はＫｄ＝５００ｎＭ〜１ｐＭにてＸおよびＹに別々に結合する。
誤解を避けるために、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤および抗腫瘍性組成物の使用、投与、またはこれらを含む産物と言った場合には、２つの異なる化合物の使用、投与、またはこれらを含む産物を意味するものとする。
「拮抗剤」との用語は、結合する分子の生物活性を阻害するか低下させる化合物または薬剤をいう。拮抗剤には、抗体、合成または天然配列のペプチド、イムノアドヘシン、低分子拮抗剤をいう。これらはＶＥＧＦに結合し、任意的に他の分子と共役するかまたは融合されている。「ブロッキング」抗体または「拮抗剤」抗体は、抗体が結合する抗原の生物活性を阻害するか低下させる抗体である。
「治療する（ｔｒｅａｔ）」、「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」との用語は、治療法および予防（つまり予防措置）の両方をいう。この場合、目的はがんを防止または改善するか、あるいはがんの進行を遅らせる（低下させる）ことである。治療の必要がある対象には、既にがんに罹患している対象に加えて、がんが予防されるべき対象も含む。
「防止する（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」、「防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」、「予防の（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）」または「予防」との用語は、異常または症状を含む状態、病気、疾患、または表現型を、発症しないようにすること、または妨げること、防御すること、または保護することをいう。防止される必要がある対象は、その状態を発症しやすくてもよい。
「改善する（ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ）」または「改善（ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ）」との用語は、異常または症状を含む状態、病気、疾患、または表現型の低下、減少、または除去をいう。治療が必要な対象は、既にその状態を有していてもよいし、またはその状態になりやすくてもよいし、またはその状態を回避されるべき人であってもよい。
「標準治療」または「ベストプラクティス」との用語は、がんなどのある一連の症状または特定の疾患に関して、適切で、一般に認められており、広く使用されていると専門家が同意する治療をいう。当業者は、任意の特定のがんに対する標準治療を認識するであろう。標準治療は、異なるがんの種類に対して、または同じ種類のがんの異なるステージに対して異なりうる。
「耐性がん」または「耐性腫瘍」との用語は、少なくともＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤を含むがん治療の間に、全く反応しないか反応性を失うか低下した反応性を示すかしたがん、がん細胞、または腫瘍をいう。態様によっては、耐性腫瘍はＶＥＧＦ−Ａ抗体治療に抵抗性を有する腫瘍である。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ａ抗体はベバシズマブである。態様によっては、耐性腫瘍は少なくともＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤を含むがん治療に反応する可能性が低い腫瘍である。
「組み合わせ（併用）」投与と言った場合には、任意の順序の同時で（並列的で）連続的な投与をいう。併用投与には、別々の製剤または単一の製剤処方を用いた共投与、および任意の順序の連続的な投与を含む。両方（またはすべて）の活性薬剤が同時に生物活性を及ぼすための時間の間隔が存在することが好ましい。
「対象」との用語は、哺乳類をいう。哺乳類は、霊長類、特にヒトであってもよいし、家畜、動物園にいる動物、またはペットであってもよい。本願明細書に開示された方法および製造品はヒトの医療用の治療に好適であることが特に想定されている。しかし、ウマ、ウシ、ヒツジなどの家畜、イヌやネコなどのペット、またはネコ科の動物、イヌ科の動物、ウシ科の動物、有蹄動物などの動物園にいる動物の治療を含む獣医治療にも、これらは適用可能である。
「治療に有効な量」との用語は、哺乳類の病気、疾患または表現型を治療するために有効な薬剤の量をいう。がんの場合、治療に有効な量の薬剤は、がん細胞の数を減少させてもよいし；腫瘍の大きさを小さくしてもよいし；がん細胞の末梢器官への浸潤を阻害してもよいし（つまり浸潤をある程度遅らせ、好ましくは停止させる）；腫瘍の転移を阻害してもよいし（つまり転移をある程度遅らせ、好ましくは停止させる）；腫瘍成長をある程度抑制してもよいし；および／またはこの疾患または病気に関連する１以上の症状をある程度緩和してもよい。本薬剤が存在するがん細胞の成長を抑制しうる、および／またはがん細胞を殺しうる範囲であれば、本薬剤は細胞増殖抑制剤および／または細胞毒性を示してもよい。がん治療に対して、生体内における有効性は、たとえば生存期間、疾患が進行するまでの時間（ＴＴＰ）、反応率（ＲＲ）、奏功期間、および／またはＱＯＬを評価することによって測定可能である。組み合わせ（併用）において、「治療に有効な量」とは、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物（１以上の他の治療薬を含む）との投与が標的とする疾患の減少または抑制をもたらすことを意味する。
「治療的に相乗的な量」との用語は、標的とする疾患に関連する状態または症状を相乗的に減少させるか取り除くために必要なＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物の量をいう。
「抗体」との用語は、最も広義に使用され、所望の生物活性を示す限り、モノクローナル抗体（完全長、つまり無傷なモノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多価の抗体、多特異的抗体（たとえば二重特異性抗体）、および抗体フラグメント（後述）を特に含む。
「特異的結合」または「特異的に結合する」または「〜に特異的」との用語は、ある分子が他の任意のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにあまり結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに結合する場合の結合をいう。そのような結合は、測定できる程度に非特異的な相互作用とは相違している。たとえば、特異的結合は競合アッセイを用いて決定することができる。本願明細書で使用されるように、特異的結合は、抗体とポリペプチドまたはポリペプチドエピトープとの相互作用、および受容体とポリペプチドまたは他の受容体結合分子との相互作用に関連して使用される。特異的結合はまた、ＶＥＧＦ−ＣまたはＶＥＧＦ−Ａの生物活性を部分的または完全に阻止し、中和し、減少させ、または拮抗する分子の相互作用にも適用される。
特に、「特異的な結合」または「特異的に結合する」または「〜に特異的」とは、特定のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに対する方が非特異的な標的に対してよりも、少なくとも２倍小さなＫｄ値を有する分子をいう。特異的な結合はまた、特定のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープに対する方が非特異的な標的に対してよりも、少なくとも４倍、６倍、８倍、１０倍または１０倍超小さなＫｄ値を有する分子をいう。または、特異的な結合は、標的に対するＫｄ値が少なくとも約１０−４Ｍ、約１０−５Ｍ、約１０−６Ｍ、約１０−７Ｍ、約１０−８Ｍ、約１０−９Ｍ、約１０−１０Ｍ、約１０−１１Ｍ、約１０−１２Ｍ、またはそれ未満である分子として表現できる。
「結合親和性」との用語は一般に、ある分子（たとえば抗体）の単一の結合部位とその結合相手（たとえば抗原）との間における非共有相互作用の強度の合計をいう。本願明細書で使用されるように、他に示さない限り、「結合親和性」は、結合ペア（たとえば抗体や抗原）のメンバー間で１：１相互作用を反映した固有の結合親和性をいう。分子Ｘのその相手Ｙに対する親和性は一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本願明細書に記載された方法を含む公知の一般的な方法によって測定できる。低親和性抗体は一般的に、抗原にゆっくりと結合して容易に解離する傾向がある。一方、高親和性抗体は一般的に、抗原により速く結合してより長く結合したままである傾向がある。結合親和性を測定する様々な方法が公知である。本願発明の目的にはそのうち任意の方法を使用することができる。
ある態様では、「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」または「Ｋｄ定数」は、以下のアッセイで説明するように、関心のあるＦａｂ型の抗体およびその抗原を用いて実行される放射性抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。Ｆａｂの抗原に対する溶液−結合親和性は、非標識抗原の滴定系列の存在下でＦａｂを最小濃度の１２５Ｉ標識抗原と平衡させ、次に結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体でコーティングしたプレートに捕らえることによって測定される（たとえばＣｈｅｎらのＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．第２９３巻第８６５〜８８１頁（１９９９年）を参照）。アッセイ用の条件を確立するために、微量定量プレート（ＤＹＮＥＸ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を５０ｍＭ 炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍｌの捕獲用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ社）とともに一晩コーティングする。続いてＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンを用いて、室温（約２３℃）にて２〜５時間ブロッキングする。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ社 ＃２６９６２０）では、１００ｐｍまたは２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原が連続希釈した関心のあるＦａｂのとともに混合される。関心のあるＦａｂは次に一晩インキュベートされる（インキュベートがさらに長時間（たとえば約６５時間）継続されることにより、確実に平衡に到達するようにしてもよい）。その後、室温で（たとえば１時間）インキュベートするために、混合物が捕獲用のプレートに移される。次にこの溶液は除去され、ＰＢＳに入った０．１％ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標）界面活性剤を用いてプレートが８回洗浄される。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／穴のシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（登録商標）；Ｐａｃｋａｒｄ社）が添加され、プレートがＴＯＰＣＯＵＮＴ（登録商標）γカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ社）上で１０分間計測される。競合的結合アッセイに使用するために、最大結合の２０％以下となる各Ｆａｂの濃度が選択される。
他の態様によると、ＫｄまたはＫｄ値は、固定化抗原ＣＭ５チップを用いて約１０反応単位（ＲＵ）にて、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００装置（ＢＩＡｃｏｒｅ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を用いた表面プラズモン共鳴アッセイによって２５℃にて測定される。つまり、供給業者の取扱説明書に従って、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて、カルボキシメチル化されたデキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ社）が活性化される。抗原は５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）となるように１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）によって希釈され、その後５μｌ／分の流量にて注入されることにより、約１０反応単位（ＲＵ）の共役タンパク質が実現される。抗原の注入に続いて、１Ｍ エタノールアミンが注入されることにより、未反応基がブロックされる。反応速度の測定には、連続的に２倍希釈したＦａｂ（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）が、０．０５％ ＴＷＥＥＮ２０（登録商標）界面活性剤（ＰＢＳＴ）の入ったＰＢＳ中に約２５μｌ／分の流量にて注入される。会合速度（Ｋｏｎ）と解離速度（Ｋｏｆｆ）は、単純な１：１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）評価ソフトウェア バージョン３．２）を用いて、会合と解離のセンサーグラムを同時にフィッティングすることによって計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、Ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。たとえばＣｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ 第２９３巻第８６５〜８８１頁（１９９９年）を参照のこと。会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）が上述した表面プラズモン共鳴アッセイによって１０６Ｍ−１ｓ−１を上回った場合、分光計により測定された抗原の濃度上昇のもと、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中の２０ｎＭ 抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃における蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域）の増加または減少を測定する蛍光消失（ｑｕｅｎｃｈｉｎｇ）技術を用いて、会合速度を決定することができる。分光計としては、ストップフロー付き分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社）またはかくはん式キュベットを備えた８０００系列ＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（登録商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ社）などがある。「会合速度（ｏｎ−ｒａｔｅ）」、「会合速度（ｒａｔｅ ｏｆ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）」、「会合速度」または「ｋｏｎ」もまた、上述したようにＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００システム（ＢＩＡｃｏｒｅ社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を用いて決定可能である。
他に示さない限り、「多価抗体」との表現は、３つ以上の抗原結合部位を含む抗体をいう。多価抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有するように操作されてもよい。また多価抗体は一般に、ＩｇＭ抗体またはＩｇＡ抗体の本来の配列ではない。
「抗体フラグメント」との用語は、無傷な抗体の一部のみを含み、一般に無傷な抗体の抗原結合部位を含むために抗原結合能を保持する分子をいう。この定義に含まれる抗体フラグメントの例には、（ｉ）ＶＬ、ＣＬ、ＶＨおよびＣＨ１ドメインを含むＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ＣＨ１ドメインのＣ末端にて１以上のシステイン残基を有するＦａｂフラグメントであるＦａｂ’フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント；（ｉｖ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインを有し、ＣＨ１ドメインのＣ末端に１以上のシステイン残基を有するＦｄ’フラグメント；（ｖ）抗体の片方の腕にＶＬおよびＶＨドメインを有するＦｖフラグメント；（ｖｉ）ＶＨドメインから構成されるｄＡｂフラグメント；（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲｓ）；（ｖｉｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、つまりヒンジ領域においてジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂ’フラグメントを含む二価フラグメント；（ｉｘ）一本鎖抗体分子（たとえば一本鎖Ｆｖ；ｓｃＦｖ）；（ｘ）同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に結合した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、２つの抗原結合部位を有する「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）」；（ｘｉ）相補的な軽鎖ポリペプチドとともに一対の直列Ｆｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含み、一対の抗原結合領域を形成する「線状（ｌｉｎｅａｒ）抗体」がある。
「モノクローナル抗体」との用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られた抗体をいう。つまり、集団に含まれる個々の抗体は、生じうる自然発生突然変異を除いて同一である。自然発生突然変異は、微量存在してもよい。モノクローナル抗体は非常に特異的であって、単一の抗原を対象とする。さらに、通常は異なる決定基（エピトープ）を対象とする異なる抗体を含むポリクローナル抗体の調整とは対照的に、各モノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基を対象とする。「モノクローナル」との修飾語は、任意の特定の方法による抗体の産生が必要とされると解釈されるべきではない。たとえば、本願発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法によって作製されてもよいし、組み換えＤＮＡ法によって作製されてもよい。「モノクローナル抗体」はまた、ファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
本願明細書におけるモノクローナル抗体は特に、「キメラ」抗体を含む。「キメラ」抗体では、重鎖および／または軽鎖の一部は、特定の種に由来するかまたは特定の抗体のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一か相同である。一方、鎖の残りは、別の種に由来するかまたは抗体の別のクラスもしくはサブクラスに属する抗体中の対応する配列と同一か相同である。モノクローナル抗体はまた、所望の生物活性を示す限り、そのような抗体のフラグメントも含む。
非ヒト（たとえばマウス）抗体の「ヒト化」型と言った場合には、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体をいう。ほとんどの部分については、ヒト化抗体はヒト免疫グロブリン（受容側（ｒｅｃｉｐｉｅｎｔ）抗体）である。ここでは受容側の超可変領域の残基は、所望の特異性、親和性、および能力を有し、マウス、ラット、ウサギ、またはヒト以外の霊長類である非ヒト種（提供側（ｄｏｎｏｒ）抗体）の超可変領域に由来する残基に置換されている。ヒト免疫グロブリンの免疫グロブリンの残基が、対応する非ヒト種のフレームワーク領域（ＦＲ）の残基に置換されている例もある。さらに、ヒト化抗体は受容側抗体または提供側抗体には見られない残基を含んでもよい。これらの改良は、抗体の性能をさらに改善するために行われる。一般に、ヒト化抗体は実質的に１以上、典型的には２つの可変ドメインのすべてを含むであろう。この場合、すべてまたは実質的にすべての超可変ループは非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、すべてまたは実質的にすべてのフレームワーク領域はヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域に対応する。ヒト化抗体はまた、典型的にはヒト免疫グロブリンの免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部も任意的に含む。
「ヒト抗体」との用語は、ヒトによって産生された抗体の配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、および／または本願明細書に開示されるようにヒト抗体を作製するための任意の技術を用いて作製された抗体をいう。ヒト抗体のこの定義は特に、非ヒト抗原−結合残基を含むヒト化抗体を除外する。ヒト抗体は、公知の様々な技術を用いて産生可能である。ある態様では、ヒト抗体はヒト抗体を発現するファージライブラリーから選択される。ヒト抗体はまた、ヒト免疫グロブリン座位をトランスジェニック動物に導入することによって作製可能である。トランスジェニック動物は、たとえば内因性の免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウスである。挑戦にあたって、ヒト抗体の産生が観察される。ヒト抗体の産生は、遺伝子再構成、集合および抗体のレパートリーを含むすべての点で、ヒトで見られる抗体の産生とよく似ている。または、標的抗原に対する抗体を産生するヒトＢリンパ球の不死化を通じてヒト抗体は調整されてもよい（そのようなＢリンパ球は、個体から回復されてもよいし、試験管内で接種して付与されてもよい）。
「親和性成熟型」抗体とは、１以上のＣＤＲにおいて、改変を有さない親抗体に比べて抗原に対する抗体の親和性の向上をもたらす１以上の改変を有する抗体をいう。ある態様では、親和性成熟型抗体は標的抗原に対してナノモル、さらにはピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟型抗体は、公知の手順、たとえばＶＨおよびＶＬのドメインシャッフリング、またはＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム変異導入法による親和性成熟によって生産される。
ポリペプチド、ＣＤＲ、抗体または他の構成要素に関して「単離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）」との用語は、自然環境の成分から同定され、分離され、および／または回収されたポリペプチド、ＣＤＲ、抗体または他の構成要素をいう。自然環境の汚染物質成分は、ポリペプチドまたは抗体に対する診断または治療上の使用に干渉する物質である。また汚染物質成分は、酵素、ホルモン、および他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を含みうる。態様によっては、（１）ローリー法により決定されるように、ポリペプチドの９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超まで、（２）ロータリ配列決定装置を用いてＮ末端または内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度にまで、あるいは（３）クマシー・ブルーまたは好ましくは銀染色を用いた還元状態または非還元状態におけるＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一さにまで、ポリペプチドは精製されるであろう。単離されたポリペプチドは、組み換え細胞内の本来の位置にある（ｉｎ ｓｉｔｕ）ポリペプチドを含む。ポリペプチドの自然環境の１以上の構成要素が存在しないからである。しかし通常は、単離されたポリペプチドは１以上の精製ステップによって調整されるであろう。
抗体に関して「生物学的特性」との用語は、抗体の１以上の生物学的特性を有する指定された抗体をいう。この生物学的特性は、抗体を同じ抗原に結合する他の抗体から区別する。対象とする抗体が結合する抗原上のエピトープに結合する抗体をスクリーニングするために、お決まりのクロスブロッキングアッセイを行うことができる。
「標識（ｌａｂｅｌ）」との用語は、たとえばポリペプチドまたは抗体に直接的または間接的に共役した検出可能な化合物または組成物をいう。標識はそれ自体が検出可能であってもよいし（たとえば放射性同位元素標識または蛍光標識）、酵素標識の場合には検出可能な基質化合物または組成物の化学的変化を触媒してもよい。
本願明細書で使用されるように、言語表現または必要な意味のために文脈が他の意味を要する場合を除いて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」との語句または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形型が、包含的な意味で、つまり規定された特徴の存在を特定するために使用される。しかし、本願発明の様々な態様において、さらなる特徴の存在または追加を除外ために使用されるわけではない。
「生存期間」との用語は、薬剤を最初に投与してから死ぬまでの時間をいう。「生存期間」はまた、治療群対対照群の成層（ｓｔｒａｔｉｆｉｅｄ）ハザード比（ＨＲ）を用いて測定可能である。ＨＲは、治療中における対象の死亡リスクを表す。
「疾患の進行までの時間」との用語は、治療を行なってから疾患の進行に至るまでの時間をいう。
「奏効率」との用語は、治療に反応を示す治療された対象の百分率をいう。
「奏功期間」との用語は、初期反応から疾患の進行までの時間をいう。
（ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤の治療上の使用）
本願発明者らは、抗腫瘍性組成物とともにＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤、特にＶＥＧＦ−Ｃ抗体を用いることにより、がん治療において著しい利益がもたらされることを発見した。
したがって、第１の態様では、本願発明は対象におけるがんの治療方法を提供する。本方法は、治療に有効な量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物を組み合わせて対象に投与することを含む。
第１の態様のある形態では、本願発明は対象中のがんを治療するために組み合わせたＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤および抗腫瘍性組成物を提供する。
第２の態様では、本願発明はＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を含む製造品（たとえばキット）を提供する。本製造品は、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を含む容器、およびＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤の使用者に、抗腫瘍性組成物と組み合わせたＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤のがんに罹患した対象への投与を指示する添付文書を含んでもよい。
本願発明の第１の態様または第２の態様の好ましい態様では、対象はヒトである。
がんは通常、進行ステージによって定義される。全ステージのグループ分け（ローマ数字病期分類とも呼ばれる）には、がんの進行を説明するために数字Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶを使用する。大まかに言うと、ステージは以下のように定義される。ステージＩは通常、がんが比較的小さく、起因した臓器内にとどまっていること、つまりがんが局部的であることを意味する。ステージＩＩは通常、がんが周辺組織まで拡散し始めてはいないが、腫瘍がステージＩよりも大きいこと、つまりがんが局部的に進行していることを意味する。ステージＩＩは、がん細胞が腫瘍近くのリンパ節へと拡散していることを意味することもある。ステージＩＩＩは通常、がんがより大きいことを意味する。がんが周辺組織へと拡散し始めているかもしれない。また、周辺組織中のリンパ節中にがん細胞が存在する。がんは依然として局部的に進行しているが、通常はこの段階ではステージＩＩよりも大きい。ステージＩＶは通常、がんが他の臓器または体全体へと拡散または転移していることを意味する。これは転移性がんとも呼ばれる。このステージは通常、手術不可能ながんを表す。これらのステージは正確に定義される。しかし、定義はそれぞれのがんの種類によって異なる。
あいにく、がんは原発腫瘍が除去されてから数ヶ月〜数年後に再発することが普通である。原発腫瘍が発見された頃には、がん細胞が既に逃げ出して遠隔部位に留まってはいたが、除去時に検出できるほど大きな腫瘍を形成していなかったからである。原発腫瘍のごく一部が最初の手術では取り残された結果、これが後に肉眼で見える腫瘍へと成長する場合がある。すべての目に見える腫瘍が撲滅された後に再発するがんは、再発病と呼ばれる。原発腫瘍の領域にて再発する病気は局部的な再発であって、転移によって再発する病気は、遠隔再発と呼ばれる。遠隔再発は通常、ステージＩＶの疾患と同じように治療される（これらの用語は交互に使用されることもある）。局所再発の深刻さは、がんの種類に応じて遠隔再発とは全く異なりうる。
第１の態様の方法および第２の態様の製造品は、上述したあらゆるがんおよび任意のステージのがんの治療に使用されてもよい。第１の態様の方法および第２の態様の製造品は、ステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶのがん、または手術（たとえば切除）後に採用された治療計画、または再発がんの治療に使用されてもよい。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤が初期ステージのがんの治療に有用であることが予想される。理論に制限されることなく、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を抗腫瘍性物質と組み合わせて使用することは、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤がＶＥＧＦ−Ｃにより促進された腫瘍の成長を阻害することによって抗腫瘍性物質の腫瘍への攻撃（たとえば縮小または除去）をより有効にすることができる限り、患者のためになりうると予想される。
本願発明の方法、物品および使用は、がんが原発器官から局所的なリンパ節およびその先へと拡散し始めた対象の治療において、特に有用であることが予想される。たとえば、本願発明の方法、物品および使用は、がんが体の他の組織または部分（たとえば器官）へと転移した、加えて任意的に局所的および／または離れたリンパ節へと拡散した対象を治療するために、特に有用であることが予想される。本願発明の方法、物品および使用は、ステージＩＩＩまたはＩＶのがんを有する対象、および／またはがんがもはや切除不可能な対象を治療するために、特に有用であることが予想される。
第１の態様の方法または第２の態様の製造品は、血管が新生された固形腫瘍を治療するために特に好適である。第１の態様または第２の態様のある態様では、がんは、肺がんおよび気管支がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、肝臓がん、食道がん、膀胱腺および膀胱がん、非ホジキンリンパ腫、腎臓がん、乳がん、卵巣がんおよび脳腫瘍（たとえば膠芽細胞腫）から構成される群より選択される。第１の態様または第２の態様の好ましい態様では、がんは、結腸直腸がん（たとえば転移性結腸直腸がん）、肺がん（たとえば非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、前立腺がん、膠芽細胞腫、腎臓がん（たとえば転移性腎細胞上皮性悪性腫瘍（ＲＣＣ））、膵臓がんまたは卵巣がんである。
第１の態様の方法および第２の態様の製造品は、抗脈管形成療法、つまり腫瘍成長を支持するための栄養を供給するために必要な腫瘍の血管の発達を抑制することを目指した新たながん治療方法を包含する。血管形成は初期の腫瘍成長と転移の両方に関与する。そのため、本開示により提供される血管新生抑制治療は、原発部位における腫瘍の腫瘍性成長を阻害することができるとともに、二次部位において腫瘍の転移を防止することができる。そのため、他の治療法によって腫瘍を攻撃することが可能となる。
第１の態様の方法および第２の態様の製造品は、抗リンパ管新生治療、つまり腫瘍の転移性拡散に関与してきたリンパ管の発達を抑制することを目指した新たながん治療方法を包含しうる。
第１の態様の方法および第２の態様の製造品は、血管新生抑制と抗リンパ管新生の併用治療を包含する。これにより、各治療法の両方を組み合わせた利益が提供される。
ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、本願明細書に記載された任意の好適な分子であってもよい。好ましい態様では、本願明細書に記載されたように、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤はＶＥＧＦ−Ｃ抗体、ＶＥＧＦＲ−３抗体およびＶＥＧＦＲ−３受容体分子（つまりＶＥＧＲ−３受容体トラップ）から選択される。
非常に好ましい態様では、本願明細書で説明されるように、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤はＶＥＧＦ−Ｃ抗体である。好ましいＶＥＧＦ−Ｃ抗体は、ＶＥＧＦ−Ｃに対するモノクローナルＶＥＧＦ−Ｃ抗体６９Ｄ０９の結合を競合的に阻害するモノクローナル抗体である。モノクローナルＶＥＧＦ−Ｃ抗体６９Ｄ０９は、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＰＴＡ−４０９５により産生されるか、またはそれぞれ図３、４に示された重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を有する。別の好適なＶＥＧＦ−Ｃ抗体は、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＰＴＡ−４０９５により産生されたモノクローナルＶＥＧＦ−Ｃ抗体６９Ｄ０９、またはそれぞれ図３、４に示された重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。ある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は完全長ヒトＶＥＧＦ−Ｃモノクローナル抗体である。ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は６９Ｄ０９抗体またはそのフラグメントも含むが、これらには限られない。ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は、ヒト化抗体であってもよい。好ましくは、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体は寄託されたハイブリドーマＡＴＣＣ ＰＴＡ−４０９５により産生されるか、または図３および４に示された重鎖および軽鎖のアミノ酸配列を有するヒト抗体である。
ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤の投与と組み合わせて投与される抗腫瘍性組成物には、１以上の治療薬を使用可能である。第１の態様または第２の態様のある態様では、抗腫瘍性組成物は治療されるがんに対する標準治療を含む。
腫瘍などの様々な疾患を治療するために使用される場合には、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は同じまたは類似の疾患に好適な他の治療薬と組み合わせることができることが想定される。がんの治療に使用される場合、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、手術、放射線治療、化学療法またはこれらの組み合わせなど、従来のがん治療法と組み合わせて使用されてもよい。がんの治療に使用される場合、抗腫瘍性組成物は腫瘍成長もしくは機能の抑制もしくは阻害、および／または腫瘍細胞の破壊が可能な１以上の治療薬を含むことが好ましい。
ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を併用したがん治療に有用な他の治療薬には、他の血管新生阻害剤が含まれる。多くの血管新生阻害剤が同定されており、公知である。第１の態様または第２の態様の他の態様では、抗腫瘍性組成物は血管新生阻害剤を含む。好ましくは、血管新生阻害剤は血管新生抑制抗体である。第１の態様または第２の態様の好ましい態様では、抗腫瘍性組成物はＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤を含む。好ましいＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤は、ＶＥＧＦ−Ａ抗体およびＶＥＧＦ−Ａに特異的な可溶性ＶＥＧＦ−受容体分子（たとえばＲｅｇｅｎｅｒｏｎ社のＶＥＧＦトラップ）から選択される。好ましいＶＥＧＦ−Ａ抗体はベバシズマブ（アバスチン）である。
ある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は他のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と組み合わせて使用される（つまり抗腫瘍性組成物はＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を含む）。他のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、たとえばＶＥＧＦ−Ｃ抗体、ＶＥＧＦ−Ｃ変異体、ＶＥＧＦ−Ｃ特異的な可溶性ＶＥＧＦ−受容体分子、ＶＥＧＦ−ＣまたはＶＥＧＦ−Ｃ受容体をブロッキングできるアプタマー、ＶＥＧＦＲ−３中和抗体、ＶＥＧＦＲ−３チロシンキナーゼの低分子量阻害剤、およびこれらの任意の組み合わせである。これに代えて、またはこれに加えて、同じタイプの２以上の拮抗剤が対象に共に投与されてもよい。たとえば、２つのＶＥＧＦ−Ｃ抗体が対象に共に投与されてもよい。
ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を併用した腫瘍治療に有用な他の治療薬には、腫瘍成長に関与する他の因子、たとえばＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２（ＨＥＲ２としても知られている）、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、またはＴＮＦの拮抗剤が含まれる。対象に１以上のサイトカインを投与することも有益な場合があってもよい。ある例では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は成長抑制薬とともに投与される。たとえば、成長抑制薬が最初に投与されて、続いてＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤が投与されてもよい。しかし、同時投与またはＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を最初に投与することもまた考えられる。成長抑制薬の好適な投与量は、現在使用されている投与量であって、成長抑制薬とＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤の複合作用（相乗効果）のために減らされてもよい。
第１の態様または第２の態様の好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体などのＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤および１以上の化学療法剤の有効量を組み合わせて、がんになりやすいかがんであると診断された対象に投与される（つまり、抗腫瘍性組成物は化学療法剤を含む）。本願開示に従って、上述した薬剤を含む、抗がん活性を示す任意の化学療法剤を使用することができる。化学療法剤は、ドセタキセル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、テモゾロマイド（ＴＭＺ）、ゲムシタビン、オキサリプラチン、パクリタキセル、カルボプラチンおよびイリノテカンから構成される群から選択されてもよい。
好ましい態様では、本方法は、有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤、特にＶＥＧＦ−Ｃ抗体と、治療中または治療されるがん用の標準化学療法を組み合わせて対象に処方することを含む。結腸直腸がん、肺がん、膵臓がん、前立腺がん、膠芽細胞腫、腎臓がん、乳がん、肝臓がん、非ホジキンリンパ腫、卵巣がんおよび脳腫瘍に感受性があるかまたはこれらであると診断された対象を治療するために、本方法が特に有益となりうることが想定される。この場合、有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤、特にＶＥＧＦ−Ｃ抗体と、特定のがんに対する標準化学療法とが対象に対して組み合わせて処方される。結腸直腸がん（特に転移性ＣＲＣ）、肺がん（特に非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ））、膵臓がん、前立腺がん、膠芽細胞腫、腎臓がん（特に転移性腎細胞上皮性悪性腫瘍（ＲＣＣ））、膵臓がん、乳がん（特にＨＥＲ２陰性転移性乳がん）、卵巣がんおよび膠芽細胞腫に感受性があるかまたはこれらであると診断された対象を治療するために、本方法が特に有益となりうることが想定される。この場合、有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤、特にＶＥＧＦ−Ｃ抗体と、特定のがんに対する標準化学療法とが対象に対して組み合わせて処方される。
特定の種類のがんに対して、１つ以上の「標準化学療法」または「標準化学療法計画（ｒｅｇｉｍｅ）」が存在してもよい。たとえば、「標準」療法は治療されるがんのステージ、原発腫瘍が転移しているかどうか、患者の年齢、異なる国の治療指針における差異などによって変わってもよい。結腸直腸がんに対する標準化学療法は５−ＦＵである。膵臓がんに対する標準化学療法はゲムシタビンである。前立腺がんに対する標準化学療法はドセタキセルである。膠芽細胞腫に対する標準化学療法はＴＭＺである。結腸直腸がん、膵臓がん、前立腺がんまたは膠芽細胞腫は転移性でありうる。
ほんの一例として、転移性結腸直腸がんに対する標準化学療法による治療を以下に説明する。
結腸直腸がんは、米国では３番目に多いがん死亡率の原因である。米国では１９９９年に、約１２９０００の新たな結腸直腸がんの症例が診断され、結腸直腸がんによって５６０００人が死亡したと推定された。結腸直腸がん患者の約７０％は、潜在的には外科的切除によって治療可能な病状で存在する。しかし、進行性または転移性の疾患を有する３０％の人、および切除後に再発する２０％の人の予後は芳しくない。転移性の疾患を有する人の平均生存期間は１２〜１４ヶ月である。
米国における転移性結腸直腸がんの標準治療は、最近までずっと、５−ＦＵと５−ＦＵの生物化学調整物質であるロイコボリンを用いた化学療法であった。５−ＦＵ／ロイコボリンの組み合わせは、大腸腫瘍の低頻度で一時的な縮小をもたらす。しかし、５−ＦＵ単独と比べて、生存期間を延ばすことは実証されていない。また５−ＦＵは、効果のない治療と最善の対症療法の組み合わせに比べて、生存期間を延ばすことが実証されていない。５−ＦＵ／ロイコボリンに対して生存利益が実証されていないのは、１つには不十分な規模の臨床試験しか行われていないことにあるであろう。対象が切除可能な結腸直腸がんに対するアジュバント化学療法を受ける大規模な無作為化試験では、５−ＦＵ／ロイコボリンはロムスチン（ＭｅＣＣΝＵ）、ビンクリスチン、および５−ＦＵ（ＭＯＦ）と比較して生存期間の延長を示した。
米国では、５−ＦＵ／ロイコボリン化学療法は一般的に１つまたは２つのスケジュール、つまりメイヨクリニック計画（ｒｅｇｉｍｅｎｓ）およびロズウェルパーク計画に従って行われている。メイヨクリニック計画は、５−ＦＵと低用量ロイコボリンの集中コースから構成される（４２５ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵと２０ｍｇ／ｍ２のロイコボリンを静注によって５日間、毎日投与。これを４〜５週間の間隔で反復するコース）。ロズウェルパーク計画は、週１回の５−ＦＵと高用量ロイコボリンの投与から構成される（静注により投与される５００〜６００ｍｇ／ｍ２の５−ＦＵと、６週間にわたり毎週２時間の点滴により投与される５００ｍｇ／ｍ２のロイコボリン。これを８週間ずっと繰り返すコース）。メイヨクリニック計画とロズウェルパーク計画を比較した臨床試験は、効果の差を実証していない。しかし、差を実証するには力不足であった。２つの計画の毒性プロフィールは異なる。メイヨクリニック計画は、白血球減少と口内炎をより高頻度に生じさせる。ロズウェルパーク計画は、下痢をより高頻度に生じさせる。転移性結腸直腸がんであると新たに診断された、いずれかの計画を処方されている対象は、疾患の進行に対する平均（ｍｅｄｉａｎ）期間を４〜５ヶ月、平均生存期間を１２〜１４ヶ月と予想することができる。
最近、転移性結腸直腸がんに対する新たな第一治療が現れた。それぞれ約４００人を対象とした２つの無作為化臨床試験によって、５−ＦＵ／ロイコボリンと組み合わせたイリノテカンが評価された。いずれの試験でも、イリノテカン／５−ＦＵ／ロイコボリンの組み合わせは、５−ＦＵ／ロイコボリンと比較して、生存期間の統計的に有意な上昇（２．２ヶ月および３．３ヶ月）、疾患が進行する時間、および奏効率を実証した。イリノテカンによる利益は、毒性の上昇という犠牲の上にもたらされた。つまり、イリノテカンの５−ＦＵ／ロイコボリンへの添加は、５−ＦＵ／ロイコボリン単独と比較して、国立がん研究所共通毒性基準（ＮＣＩ−ＣＴＣ）における悪性度３／４の下痢、悪性度３／４の嘔吐、悪性度４の好中球減少症、および無力症の発生率の上昇と関係していた。第二の設定において、単剤イリノテカンが生存期間を延ばすことを示す証拠も存在する。２つの無作為化試験は、イリノテカンが５−ＦＵ治療の後に病状が進行した対象の生存期間を延ばすことを実証している。一方の試験は、イリノテカンを最善の対症療法と比較し、生存期間が２．８ヶ月延びることを示した。他方の試験は、イリノテカンと注入投与された５−ＦＵとを比較し、生存期間が２．２ヶ月延びることを示した。イリノテカンは第一または第二の設定における生存期間に対してより効果的かどうかという問題は、十分に管理された方法によっては試験されていない。
第１の態様または第２の態様のさらなる態様では、抗腫瘍性組成物は化学療法剤および血管新生阻害剤を含む。ある態様では、化学療法剤は、ドセタキセル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、テモゾロマイド（ＴＭＺ）、ゲムシタビン、オキサリプラチン、パクリタキセル、カルボプラチンおよびイリノテカンから構成される群から選択される。また、血管新生阻害剤は、たとえばベバシズマブなどの抗体である。
第１の態様または第２の態様の好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤（たとえばＶＥＧＦ−Ｃ抗体）はＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤と併用して投与される。好ましいＶＥＦＧ−Ａ拮抗剤はベバシズマブである。
第１の態様または第２の態様の好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤（たとえばＶＥＧＦ−Ｃ抗体）は、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤（たとえばベバシズマブなどのＶＥＦＧ−Ａ抗体）と併用して、任意的に１以上の追加的な抗がん治療薬と併用して投与される。
ほんの一例として、潜在的な組み合わせの以下の例を説明する。
結腸直腸がんまたは肺がんの治療において、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体＋ＶＥＧＦ−Ａ抗体＋フォルフォックス。
結腸直腸がん、肺がんまたは乳がんの治療において、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体＋ＶＥＧＦ−Ａ抗体＋パクリタキセル。
肺がんの治療において、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体＋ＶＥＧＦ−Ａ抗体＋パクリタキセル＋カルボプラチン。
結腸直腸がんの治療において、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体＋ＶＥＧＦ−Ａ抗体＋イリノテカン。
腎臓がんの治療において、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体＋ＶＥＧＦ−Ａ抗体＋インターフェロン。
膠芽細胞腫の治療において、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体＋ＶＥＧＦ−Ａ抗体。
上述のすべての例において、がんは末期ステージおよび／または転移性であってもよい。好ましい態様では、ＶＥＧＦ−Ａ抗体はベバシズマブである。
ある態様では、治療されるがんは耐性がんである。たとえば、治療されるがんはＶＥＧＦ−Ａ抗体、特にベバシズマブに対して抵抗性を有する。好ましい態様では、対象はＶＥＧＦ−拮抗剤、特にベバシズマブなどのＶＥＧＦ−Ａ抗体を含むがん治療の過程で、反応しなくなるかまたは反応の低下を示す。
第１の態様または第２の態様のさらなる態様では、がんは血管新生抑制であるＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤に耐性を有するようになっている。この場合、本願明細書で説明するように、対象はＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤、好ましくはＶＥＧＦ−Ｃ抗体と抗腫瘍性組成物との併用療法を受ける。好ましくは、がんは固形腫瘍および／または血管の腫瘍を含む。ある態様では、本願明細書で説明するように、標準治療はＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤をＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤に代えることによって改良される。別の態様では、本願明細書で説明したＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤が標準治療に追加される。つまり、治療計画においてＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤が維持される。
抗がん治療の開始時において（つまりベバシズマブなどのＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤を投与されたことがない患者において）、またはＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤に対する抵抗性を有さないことが明らかな抗がん治療の時点において、既にベバシズマブなどのＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤を含むがん治療計画にＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を含めることは、疾患の進行、腫瘍体積の減少、生存期間、奏効率および奏功期間の点で著しい利益をもたらしうることも、本願発明者らは発見した。第１の態様または第２の態様のさらなる態様では、１以上の化学療法剤および１以上のＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤を含む抗腫瘍性組成物と組み合わせてＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤が投与される。たとえば、ＶＥＧＦ−Ａ抗体および化学療法剤と組み合わせてＶＥＧＦ−Ｃ抗体が適切に投与される。
（投与量および投与）
治療に有効な量の抗がん剤（たとえばＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤および抗腫瘍性組成物）の対象への正確な投与方法、続く抗がん剤に対する患者に起こりうる反応性の診断が参加する医師の裁量であることは、医療分野の当業者には明らかであろう。投与量、他の薬との組み合わせ、時期および投与の頻度などを含む投与方法は、そのような抗がん剤に対して患者に起こりうる反応性の診断、患者の病状および病歴の影響を受けうる。ある疾患であると診断され、抗がん剤に比較的感受性がないと予想される患者でさえ、特に他の薬と組み合わせて、この治療の恩恵を受けうる。
抗がん剤を含む治療用組成物は、適正な医療行為に合った方法で製造され、投薬され、処方される。この場合に考慮すべき要因には、治療される疾患の特定の型、治療される特定の哺乳類、個々の患者の病態、薬の到達部位、起こりうる副作用、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤の型、投与方法、投与のスケジュール、および医療従事者に知られている他の要因が含まれる。投与される抗がん剤の有効量は、これらを考慮した上で制御されるであろう。
ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤（たとえば抗体）と治療薬を含む抗腫瘍性組成物は、非経口（たとえば静脈内（ＩＶ）投与）、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内（ｉｎｔｒａｃｅｒｏｂｒｏｓｐｉｎａｌ）、皮下（ＳＣ）、関節内、滑液嚢内、髄腔内、経口、局所および吸入経路（たとえば肺内）を含む任意の好適な方法を用いて、対象に投与されてもよい。非経口点滴には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、および皮下投与が含まれる。ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤（たとえば抗体）の静脈内または皮下投与が好ましい。最も好ましくは、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は静脈内点滴によって投与される。
「静脈内点滴」との用語は、約５分超、好ましくは約３０〜９０分の時間をかけて、薬を動物またはヒトの患者の静脈中に導入することをいう。しかし、静脈内点滴は代わりに１０時間以下の時間をかけて行われてもよい。対象は時間をかけて、またはそれに代えて急速静注もしくはプッシュ法（ｐｕｓｈ）によって連続的に点滴を受けてもよい。「静脈内急速静注」または「静脈内プッシュ法」との用語は、約１５分以下、または約５分以下で体が薬剤を受け取るように、動物またはヒトの静脈に薬剤を投与することをいう。
「皮下投与」との用語は、薬剤の容器（ｒｅｃｅｐｔａｃｌｅ）から比較的ゆっくりと持続的に供給することによって、動物またはヒトの対象の皮膚の下、好ましくは皮膚と下層組織との間の嚢内に薬剤を導入することをいう。嚢は、皮膚をつまむか引っ張って下層組織から引き離すことによって形成されてもよい。
「皮下点滴」との用語は、３０分以下、または９０分以下の時間をかけて（しかしこれらの時間には限られない）、薬剤の容器から比較的ゆっくりと持続的に供給することによって、動物またはヒトの対象の皮膚の下、好ましくは皮膚と下層組織との間の嚢内に薬剤を導入することをいう。任意的に、点滴は薬物供給ポンプを動物またはヒトの対象の皮膚の下に皮下移植することによって行われてもよい。この場合、ポンプは所定量の薬剤を所定の期間、たとえば３０分、９０分、または治療計画の長さに及ぶ期間、供給する。
「皮下急速静注」との用語は、動物またはヒトの対象の皮膚の下に薬剤を投与することをいう。この場合、急速静注薬剤供給は約１５分間未満、５分間未満、または６０秒間未満である。投与は、皮膚と嚢が形成された下層組織との間の嚢内に行われることが好ましい。この場合、嚢はたとえば皮膚をつまむか引っ張って下層組織から引き離すことによって形成される。
併用投与は、別々の製剤または単一の製剤を用いた共投与、および順序を問わない連続投与を含む。この場合、好ましくは両方（またはすべて）の活性薬剤が同時に生物活性を及ぼす期間が存在する。
上述した従来の経路による患者への抗がん剤の投与は別として、本願発明は遺伝子治療による投与を含む。抗がん剤をコードする核酸のそのような投与は、「有効量の抗がん剤を投与する」との表現によって包含されている。たとえば細胞内抗体を産生するための遺伝子治療の使用に関する国際特許出願第１９９６／０７３２１号を参照のこと。
患者の細胞中に核酸（任意的にベクターに入っている）を導入するのには２つの主要なアプローチがある。つまり、生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）および生体外（ｅｘ ｖｉｖｏ）である。生体内供給では、核酸は通常は拮抗剤が必要とされる部位にて患者の体内に直接注入される。生体外治療では、患者の細胞が除去され、核酸がそれらの単離された細胞内に導入される。改変された細胞は、患者に直接的に、またはたとえば患者に埋め込まれた多孔質膜内に封入されて投与される（たとえば米国特許第４８９２５３８号および米国特許第５２８３１８７号を参照）。生存細胞中に核酸を導入するためには、様々な技術が使用可能である。核酸が所望の宿主の培養細胞内に試験管内で移入されるか生体内で移入されるかによって、技術は異なる。試験管内で哺乳類の細胞中に核酸を移入するために好適な技術には、リポソーム、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ−デキストラン、リン酸カルシウム沈殿法などを使用することが含まれる。遺伝子の細胞外供給に一般的に使用されるベクターはレトロウイルスである。
現在好適な試験管内で核酸を移入する技術には、ウイルス（アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス１型、またはアデノ随伴ウイルス）のベクターを用いたトランスフェクションおよび脂質に基づく方法（遺伝子の脂質介在移入に有用な脂質は、たとえばＤＯＴＭＡ、ＤＯＰＥおよびＤＣ−Ｃｈｏｌである）が含まれる。状況によっては、たとえば標的細胞上の細胞表面膜タンパク質に特異的な抗体や、標的細胞上の受容体に対するリガンドなど、標的細胞に特異的な薬剤とともに核酸源を供給することが望ましい。リポソームが使用される場合には、たとえば特定の細胞種に影響を及ぼす外被タンパク質またはその断片、循環（ｃｙｃｌｉｎｇ）において内在化を受けるタンパク質に対する抗体、および細胞内局在を標的とし、細胞内の半減期を延ばすタンパク質を標的とする、および／またはこれらの取り込みを促進するエンドサイトーシスに関与する細胞表面膜タンパク質に結合するタンパク質が使用されてもよい。受容体介在型エンドサイトーシスの技術は、たとえばＷｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６２巻第４４２９〜４４３２頁（１９８７年）；Ｗａｇｎｅｒら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ 第８７巻第３４１０〜３４１４頁（１９９０年）に説明されている。遺伝子標識および遺伝子治療用のプロトコールは、たとえばＡｎｄｅｒｓｏｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ 第２５６巻第８０８〜８１３頁（１９９２年）および国際特許出願第１９９３／２５６７３号に説明されている。
ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤（たとえばＶＥＧＦ−Ｃ抗体）を含む製剤はまた、治療に有効な量の抗腫瘍性物質、たとえば化学療法剤、成長抑制薬、細胞毒性薬、サイトカイン、抗ホルモン薬、血管新生阻害剤、抗リンパ血管形成薬、およびこれらの組み合わせなどを含んでいてもよい。そのような分子は、意図された目的に対して有効な量にて適切に組み合わせられて存在する。
ある態様では、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤はＶＥＧＦ−Ｃ抗体であって、抗腫瘍性物質はＶＥＧＦ−Ａ抗体など（たとえばベバシズマブ）のＶＥＧＦ−Ｃ抗体以外の治療用抗体である。抗腫瘍性物質として使用されてもよい他の治療用抗体は、がん細胞表面のマーカーを結合させる抗体を含む。治療用抗体はたとえば、ＨＥＲ２抗体であるトラスツズマブ（たとえばハーセプチン（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ）またはＨＥＲ２抗体であるペルツズマブ（Ｏｎｍｉｔａｒｇ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ。米国特許第６９４９２４５号を参照）であってもよい。
本願発明に従った他の治療計画は、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤の投与、ならびに放射線療法および／または骨髄や末梢血の移植、および／または細胞毒性薬、化学療法剤、もしくは成長抑制薬を制限なく含んでもよい。ある態様では、化学療法剤は、たとえばＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ヒドロキシダウノルビシン（アドリアマイシン；ドキソルビシン）、ビンクリスチン（オンコビン（登録商標））およびプレドニゾロンの併用療法の略語）；ＣＶＰ（たとえば低悪性度の非ホジキンリンパ腫に使用されるシクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの併用療法）；ＣＯＰ（たとえば白血病の治療に使用されるシクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの併用療法）；フォルフォックス（５−ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせてオキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））を用いる治療計画の略語）；または抗ＰＳＣＡ、抗ＨＥＲ２（たとえばハーセプチン（登録商標）、オムニターグ（登録商標））などの免疫治療薬の薬剤または薬剤の組み合わせである。併用療法は、同時または連続的な処方計画によって行われてもよい。追加的な化学療法剤には、たとえばメイタンシノイド（たとえばＤＭＩ）やオーリスタチン（ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）などの抗体薬物複合体として有用な細胞毒性薬が含まれる。たとえば化学療法剤の副作用を弱めるための薬剤もまた併用されてもよい。連続的に投与する場合、２つ以上の投与による組み合わせが行われてもよい。併用投与は、別々の製剤または単一の製剤を用いた共投与、および順序を問わない連続投与を含む。この場合、好ましくは両方（またはすべて）の活性薬剤が同時に生物活性を及ぼす期間が存在する。
上述した共投与される任意の薬剤の好適な投与量は、現在使用されている投与量であって、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と他の化学療法剤または治療の複合作用（相乗効果）のために減らされてもよい。
併用療法は、「相乗効果」をもたらしてもよく、「相乗的」であることを示してもよい。つまり、活性成分が一緒に使用される場合に達成される効果が、化合物を別々に使用した場合に生じる効果の合計よりも大きい。活性成分が以下の場合に、相乗効果が達成されてもよい：（１）共に製剤化され、組み合わされた単位投与錠剤として同時に投与または供給される；（２）別々の製剤として交互にまたは並行して供給される；または（３）何からの他の投与計画によって供給される。交互の治療において供給される場合、たとえば別々の注射器を用いた異なる注射によって化合物が連続的に投与または供給されたときに相乗効果が達成されうる。各活性成分の有効な投与量が逐次的に、つまり連続的に投与されてもよい。または、２つ以上の有効な投与量の活性成分が同時に投与されてもよい。
当業者には理解されるように、適切な投与量の化学療法剤は、化学療法剤が単独でまたは他の化学療法剤と組み合わせて投与される臨床治療において既に使用されている量であることが多いであろう。投与量の変動は、治療される条件に応じて生じる可能性があるであろう。治療を施す医師は、個々の対象に対して適切な投与量を決定可能であろう。
病気を予防または治療するために、適切な投与量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、上述したように治療される病気の型、病気の重症度および経過、予防または治療のいずれの目的で抗体が投与されているか、以前の治療、対象の病歴および抗体に対する反応性、および参加する医師の裁量に依存するであろう。たとえば１つの器官または組織を標的とする投与は、別の器官または組織への供給方法とは異なる供給方法を必要としうる。抗体は、１度にまたは一連の治療にわたって対象に適切に投与される。併用療法計画では、治療に有効な量または相乗効果をもたらす量にて、本願開示の組成物が投与される。
通常の投与量は、哺乳類の体重に対して１日あたり約１ｎｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇ超まで変化してもよい。たとえば投与量は、投与経路に応じて、約１０ｎｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日、約１００ｎｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約１μｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日、または約１０μｇ／ｋｇ／日、約５０μｇ／ｋｇ／日、約１００μｇ／ｋｇ／日、約５００μｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日、約２．５ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日、約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約２０ｍｇ／ｋｇ／日、約３０ｍｇ／ｋｇ／日、約４０ｍｇ／ｋｇ／日、約５０ｍｇ／ｋｇ／日、約６０ｍｇ／ｋｇ／日、約７０ｍｇ／ｋｇ／日、約８０ｍｇ／ｋｇ／日、約９０ｍｇ／ｋｇ／日、約１００ｍｇ／ｋｇ／日、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日、もしくは約５００ｍｇ／ｋｇ／日であってもよい。
たとえば１以上の別々の投与によろうと連続的な点滴によろうと、病気の型および深刻度に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ（たとえば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の拮抗剤（たとえばＶＥＧＦ−Ｃ抗体）が、対象への投与に対して最初の候補となる投与量である。典型的な毎日の投与量は、上述した要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上であってもよい。数日またはそれ以上に及ぶ反復的な投与に対して、条件によって、病気の症状の所望の抑制が生じるまで、治療は持続される。しかし、他の投与計画が有用であってもよい。
拮抗剤（たとえば抗体）は、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇに及ぶ投与量にて２〜３週間ごとに投与されてもよい。より好ましくは、そのような投与計画は、転移性結腸直腸がんなどのがんを治療するための第一治療として、化学療法計画と組み合わせて使用される。化学療法計画は、従来の高用量な断続投与を含んでもよい。化学療法剤は、予定された休止を伴うことなく、より小用量より高頻度な投与量にて投与されてもよい（「規則正しい化学療法」）。本願発明の治療の進行は、従来技術およびアッセイによって容易に監視できる。
（治療の有効性）
本願開示の治療の主な利点は、目立った毒性または副作用を生じることなく、ヒトの対象に著しい抗がん効果を生み出すことによって、対象が治療全体から恩恵を受けることができるという能力である。治療の有効性は、がん治療を評価する際に一般に使用される様々な評価項目によって測定可能である。評価項目には、腫瘍退縮、腫瘍の質量または大きさの縮小、増殖抑制期間、生存期間、無進行生存、全奏効率、奏功期間、およびＱＯＬが含まれるが、これらには限られない。血管新生阻害剤は腫瘍の血管系を標的とするが必ずしも腫瘍細胞自体を標的とするわけではない。そのため、血管新生阻害剤は抗がん剤のうち独自のクラスをなす。したがって、血管新生阻害剤は独自の測定および薬剤に対する臨床反応の定義を必要としうる。たとえば、２次元解析における５０％超の腫瘍の縮小が、反応を示すための標準的な閾値である。しかし、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、原発腫瘍の縮小を伴わずに転移性拡散を抑制しうる。または、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、単に腫瘍を静止させる（ｔｕｍｏｒｉｓｔａｔｉｃ）効果を及ぼしうる。したがって、たとえば血管形成に対する血漿または尿のマーカーの測定、および放射線イメージングを通じた反応の測定を含む抗脈管形成療法の有効性を確定するための新たな手法を使用すべきである。
ここに開示されるのは、がんにかかりやすいか、がんであると診断されたヒトの対象の生存期間を延ばすための方法である。本方法は、対象に有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物とを組み合わせて投与することを含む。抗腫瘍性組成物は、１以上の化学療法剤を含んでもよい。この場合、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物を効果的に投与すると、生存期間が延びる。
たとえば、少なくとも２つ、任意的には３つの治療薬（たとえば化学療法剤）を含む抗腫瘍性組成物と組み合わせてＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤で治療された対象群は、同じ化学療法薬のカクテル単独で治療された対象群に比べて、少なくとも約２ヶ月、好ましくは約２〜約５ヶ月長い平均生存期間を有しうる。この生存期間の伸長は、統計的に有意である。ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と１以上の治療薬（たとえば化学療法剤）を含む抗腫瘍性組成物との併用治療は、化学療法単独と比較した場合、死亡のリスクを約３０％以上（つまり約０．７０の層別ＨＲ）または約３５％以上（つまり約０．６５の層別ＨＲ）まで著しく低下させうる。
また、がんにかかりやすいか、またはがんであると診断されたヒトの対象の無進行生存を増加させる方法も開示される。本方法は、対象に有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物とを組み合わせて投与することを含む。抗腫瘍性組成物は、１以上の化学療法剤を含んでもよい。この場合、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物の投与によって、無進行生存の継続期間が効果的に増大する。
たとえば、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と１以上の化学療法剤とを用いた本願開示の併用治療は、化学療法単独と比較した場合、無進行生存を約２ヶ月以上、好ましくは約２〜約５ヶ月、著しく増大させうる。
また、がんにかかりやすいか、またはがんであると診断された対象群を治療するための方法も開示されている。本方法は、有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物とを組み合わせて対象群に投与することを含む。抗腫瘍性組成物は、１以上の化学療法剤を含んでもよい。この場合、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物の投与は、対象群における奏効率を効果的に増大させうる。たとえば、併用治療は、化学療法単独で治療された群と比べて、治療された対象群における奏効率を著しく増大させうる。この増大は、カイ二乗検定のＰ値が０．００５未満である。
また、がんにかかりやすいか、またはがんであると診断されたヒトの対象（群）における奏功期間を増大させるための方法も開示されている。本方法は、有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物とを組み合わせて対象（群）に投与することを含む。抗腫瘍性組成物は、１以上の化学療法剤を含んでもよい。この場合、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物の投与は、奏功期間を効果的に増大させうる。たとえば、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と１以上の化学療法剤とを用いた併用治療により、２ヶ月以上という統計的に有意な奏功期間の増大が得られうる。
また、転移性結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がんまたは膠芽細胞腫を有するヒトの対象（群）を治療するための方法も開示されている。本方法は、有効量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物とを組み合わせて対象（群）に投与することを含む。この場合、上記の抗腫瘍性組成物は１以上の化学療法剤を含む。この場合、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物との投与により、生存期間、無進行生存、奏効率または奏功期間により測定された、治療された対象（群）の統計的に有意かつ臨床的に意義のある改善が得られる。
（治療の安全性）
本願明細書に開示されているのは、対象に対してそれほど副作用なくがんを効果的に治療するための方法である。少なくとも２つまたは３つの化学療法剤を含む化学療法カクテルと組み合わせてＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を用いる本願開示の併用療法は、化学療法単独と比較した場合、有害事象という事件の発生を有意には増加させない。したがって、本願開示の治療は、予想外にも許容できるレベルでしか副作用を有さない。同時に、本願開示の治療は、抗がん効果を著しく向上させる。
（製造品（キット））
上述した疾患またはがんの治療に有用な物質を含む製造品も開示されている。本製造品は、容器、ラベルおよび添付文書を含んでもよい。好適な容器には、たとえば瓶、バイアル、シリンジなどが含まれる。この容器は、様々な材料、たとえばガラスやプラスチックから成形されていてもよい。この容器は、疾患またはがんの治療に効果的な組成物を保持する。またこの容器は、滅菌された点検口（ａｃｃｅｓｓ ｐｏｒｔ）を有してもよい（たとえば容器は、皮下注射針によって穴を開けることができるストッパーを有する静脈内溶液用バッグまたはバイアルであってもよい）。組成物中の１以上の活性薬剤は、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤（たとえばＶＥＧＦ−Ｃ抗体）である。容器上、または容器と関連付けられたラベルは、組成物が選択された状態の治療に使用されることを示す。製造品は、リン酸緩衝生理食塩水、リンガー溶液およびデキストロース溶液などの薬剤的に許容される緩衝液を含む第２の容器をさらに含んでもよい。本容器は、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の物質をさらに含んでもよい。他の物質は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジを含む。加えて、本製造品は、使用するための指示を有する添付文書を含む。添付文書は、たとえば組成物がドキソルビシンやエピルビシンなどのアントラシクリン型化学療法剤とともに使用されるべきではないという警告、または組成物の使用者に対するＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物とを対象に投与するための指示を含む。
製造品は、キットの形態であってもよい。対象のがんを治療するためのキットは、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物を含んでもよい。別の態様では、対象のがんを治療するためのキットは、ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と、抗腫瘍性組成物と組み合わせてＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤を使用するための使用説明書と、を含んでもよい。抗腫瘍性物質は、対象のがんを治療するための１以上の化学療法剤、たとえばＶＥＧＦ−Ａ抗体を含んでもよい。
（製剤）
本願開示に従って使用される拮抗剤の製剤（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）は、所望の純度を有する抗体を、任意的に薬剤的に許容されるキャリア、賦形剤または安定剤と、凍結乾燥製剤または水溶液の形で混合することによって、保存用に調整される。許容されるキャリア、賦形剤または安定剤は、用いられる投与量および濃度では受容側にとって毒性を有さない。許容されるキャリア、賦形剤または安定剤には、以下のものが含まれる：リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質；保存料（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、またはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖類、二糖類、および他の炭水化物；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（亜鉛−タンパク質複合体など）；および／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（登録商標）またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。凍結乾燥されたＶＥＧＦ−Ａ抗体製剤は、国際特許出願第９７／０４８０１号に開示されている。
本願発明の製剤はまた、治療される特定の兆候に対して必要な１つ以上の活性のある化合物も含んでいてもよい。好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有する化合物である。たとえば、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦＲ、またはＥｒｂＢ２に結合する抗体（たとえばハーセプチン（登録商標））を１つの製剤でさらに提供することが望ましくてもよい。これに代えて、またはこれに加えて、組成物は細胞毒性薬、サイトカイン、成長抑制薬および／または低分子ＶＥＧＦＲ拮抗剤を含んでもよい。そのような分子は、意図された目的に対して効果的な量の組み合わせにて好適に存在する。
活性成分はまた、たとえばそれぞれコロイド薬物送達システム（たとえばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルションにおけるヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルなどの液滴形成技術または界面重合により調整されたマイクロカプセル中に封入されていてもよい。
生体内投与に使用される製剤は、滅菌されていなければならない。これは滅菌ろ過膜を通すろ過によって容易に実現できる。
持続放出性製剤が調整されてもよい。持続放出性製剤の好適な例には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれる。このマトリックスは、成形された物品、たとえばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。持続放出マトリックスには、ポリエステル、ヒドロゲル（たとえばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸の共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、リュープロンデポ（ＤＥＰＯＴ）（登録商標）（乳酸−グリコール酸共重合体およびロイプロリド酢酸塩から構成される注入可能なミクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸共重合体、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシブチル酸が含まれる。エチレン−酢酸ビニルや乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日以上にわたり分子の放出を可能にする。一方、あるヒドロゲルは、タンパク質をより短い期間でしか放出しない。カプセルに入れられた抗体が体内で長期間留まる場合、抗体は３７℃の水分に曝される結果、変性または凝集しうる。その結果、生物活性を失ってしまい、抗原性が変わってしまう可能性がある。関与するメカニズムに応じた安定化を実現するために、合理的な戦略を考えだすことができる。たとえば、凝集のメカニズムがチオ−ジスルフィド交換を介した分子間のジスルフィド結合の形成であると明らかになった場合、スルフヒドリル基を修飾し、酸性溶液から凍結乾燥し、含水率を制御し、適切な添加剤を使用し、特異的なポリマーマトリックス組成物を作製することによって、安定化が実現されてもよい。
以下の実施例は、単に本願発明の実行を説明することが意図されており、本願発明を制限するために提供されるわけではない。ここで引用するすべての特許および科学論文は、明確にそれらの全体が参照によって援用される。しかし、当然のことながら、何らかの従来技術の文献がここで参照された場合、そのような参照は、その文献がオーストラリアまたは他のあらゆる国において当該技術分野における一般的な技術常識の一部を構成することを自白するものではない。
（実施例）
（実施例１）
直接結合ＥＬＩＳＡによって、捕獲抗原としてＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−ＤまたはＶＥＧＦ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）および結合型ＶＧＸ−１００を用いて、ウサギ抗ヒトＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｂｃａｍ社）によって検出することによって、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００が評価された。結果が図１４に示されている。ＥＬＩＳＡによってＫＤ＝１．８ｎＭ（ＢｉａＣｏｒｅ）にて、ＶＧＸ−１００はＶＥＧＦ−Ｃを選択的に認識して結合した。
ＶＥＧＦ−ＣのＶＥＧＦＲ−２またはＶＥＧＦＲ−３の細胞外ドメインへの結合を測定するためのバイオアッセイが、ＢＡ／Ｆ３−ＶＥＧＦＲ−２またはＢＡ／Ｆ３−ＶＥＧＦＲ−３／ＥｐｏＲ細胞を用いて行われた。リガンドおよびＶＧＸ−１００に対する反応が、［３Ｈ］チミジンの取り込みによって４８時間の暴露に続いて測定された。結果が図１５に示されている。ＶＧＸ−１００はＢａ／Ｆ３バイオアッセイにおいて、（ａ）ＶＥＧＦＲ−２および（ｂ）ＶＥＧＦＲ−３へのＶＥＧＦ−Ｃの結合を阻害した。
ＨＵＶＥＣ増殖アッセイが４８時間実行され、細胞数がＷＳＴ−１試薬を用いて測定された（Ｒｏｃｈｅ社）。結果が図１６に示されている。ＶＧＸ−１００は、ＶＥＧＦ−Ｃによって刺激されたＨＵＶＥＣの増殖を抑制した。
（実施例２：前立腺がん（ＰＣ−３）単剤療法）
実験を開始するために、１００μｌの培地／マトリゲル（１：１）混合物に懸濁された５×１０６個のＰＣ−３細胞が、ヌードマウスの右側の領域へと皮下的に埋め込まれた。細胞は８０匹のマウスに移植された。マウスの腫瘍成長が毎日細胞の埋め込み後に監視された。腫瘍体積が８０〜１００ｍｍ３に達したときに、平均値に最も近い腫瘍体積を有するマウスのみを用いて、マウスはそれぞれ１０個体を含む５つのグループへと無作為に分けられた。大きすぎるまたは小さすぎる腫瘍体積を有するマウスは、実験から除外された。公式Ｖ＝Ｌ×Ｗ×Ｈ×π／６を用いて腫瘍体積が測定された。式中、ＬおよびＷは腫瘍の最大直径および最小直径を表す。Ｈは腫瘍の高さを表す。薬剤による治療は、無作為化の翌日から開始された。コントロールの賦形剤、試験抗体およびＶＥＧＦ−Ａ抗体ベバシズマブは、腹腔内注射によって投与あたり６８〜１０８μｌに及ぶ体積にて投与された。ベバシズマブは、水溶液に入った薬剤として２５ｍｇ／ｍｌの濃度にて供給され、ＰＢＳを用いて１０倍希釈された。治療は２１日間にわたって週に２回実行された。全実験の間にわたって、腫瘍体積は週に２回測定され、体重は週に１回測定された。マウスは、本薬剤治療によって起こりうる中毒作用が観察された。腫瘍体積が１５００ｍｍ３超に達した場合、マウスが本来の体重の２５％超を失った場合、腫瘍の潰瘍形成が現れた場合、またはマウスが瀕死状態になった場合、不定期の屠殺（ｓａｃｒｉｆｉｃｅｓ）が実行された。実験の最後に、各治療群の腫瘍成長率対コントロールの腫瘍成長率に関して、統計解析が実行された。最終的にマウスは、腫瘍が除去され、ＯＣＴ中に置かれ、ＩＨＣ解析用に−８０℃にて保存された。肝臓、肺、脾臓、腎臓、精巣および前立腺に対して肉眼的検査が実行された。これらの器官において異常な観察が見られなかった場合には、組織が廃棄された。
ＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００（４０ｍｇ／ｋｇ）は、ＶＥＧＦ−Ａ抗体ベバシズマブに対する同等の有効性とともに、皮下ＰＣ−３異種移植腫瘍モデルにおいて著しい単剤活性を示した（図５）。
（実施例３：前立腺がん（ＰＣ−３）異種移植モデルにおける併用療法）
本実験は、確立されたオスヌードマウスにおけるＰＣ−３ヒト前立腺上皮性悪性腫瘍異種移植に対して、ＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００単独の場合、およびＶＥＧＦ−Ａ抗体ベバシズマブ、化学療法剤ドセタキセル、およびベバシズマブ＋ドセタキセルと組み合わせた場合の抗がん効果を評価した。具体的には、以下の治療が評価された：（ｉ）ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ；（ｉｉ）ＶＧＸ−１００＋ドセタキセル；（ｉｉｉ）ＶＧＸ−１００＋ドセタキセル＋ベバシズマブ；（ｉｖ）ドセタキセル；および（ｖ）ドセタキセル＋ベバシズマブ。ＶＧＸ−１００およびベバシズマブが実験の継続期間に対して３日ごとに１０ｍｇ／ｋｇにて２回の注射、続いて３日の休止をはさんで（３日空けて各週２回）、腹腔内に投与された。ドセタキセルは、毎週３回の注射（１０ｍｇ／ｋｇ）にて静脈内投与された。
（材料と方法）
（化学物質）
ＨＩｇＧ１アイソタイプコントロール−ヒト化抗体（６．４〜１２．３６ｍｇ／ｍｌ）およびＶＧＸ−１００（５．５３ｍｇ／ｍｌおよび５．７５ｍｇ／ｍｌ）が、ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）に入った凍った無色の原液として準備され、−８０℃にて遮光して保存された。原液は解凍され、治療開始時に４℃にて保存された。原液をＤＰＢＳで希釈することによって、投与用溶液（０．２ｍｌ／２０ｇの体重中に４０ｍｇ／ｋｇ）が調整された。得られた製剤は、ｐＨ＝７．０２〜７．２１で透明であった。投与用バイアルは、投与中に濡れた氷上に保持され、穏やかにピペットで取られ、投与中以外は針によって吸引されなかった。投与用溶液は、毎週ＤＰＢＳ中で調整され、使用しないときは４℃にて遮光して保存された。
ベバシズマブ（ロット：７７３３１３、２５ｍｇ／ｍｌ）はＭｃＫｅｓｓｏｎ Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｃａｒｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ社から無色の溶液として取得され、４℃にて保存された。ベバシズマブは、原液を水（ｐＨ＝６．５）で希釈することによって、投与の前に速やかに調整された。
ドセタキセル（ロット番号：Ｄ９Ａ０９５）は、Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ社によって製造され、５０％ エタノール／５０％ Ｔｗｅｅｎ８０に入った淡黄色の溶液としてＭｃＫｅｓｓｏｎ社から取得された。ドセタキセルは、４℃にて遮光して保存された。ドセタキセルが添付文書の指示に従って、添付の希釈剤（滅菌水）を用いて希釈されることによって、透明で無色の１０ｍｇ／ｍｌ原液が得られた。各治療日には、新鮮な１０ｍｇ／ｍｌストックが調整され、水を用いてさらに希釈されることによって、適切な濃度にされた。得られた溶液は透明で無色であり、ｐＨ＝７．１６であった。
すべての被験物質は、調整後２時間以内に投与された。併用療法を受けるグループに対して、表１に示した順序にて、互いに３０分以内に薬剤が投与された。
（動物および飼育（Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ））
Ｔａｃｏｎｉｃ社からオスのＮＣＲ（ＮＣＲＮＵ−Ｍ）胸腺欠損マウスが取得された。実験１日目には、これらのマウスは６〜７週齢であった。マウスには放射線を照射したＲｏｄｅｎｔ Ｄｉｅｔ ５０５３（ＬａｂＤｉｅｔ（登録商標））および水が自由に与えられた。マウスは、Ｂｉｏｂｕｂｂｌｅ（登録商標）クリーンルームの内部に、Ｂｅｄ−Ｏ’Ｃｏｂｓ（登録商標）床敷を備え固定されたケージ中に収容された。Ｂｉｏｂｕｂｂｌｅ（登録商標）クリーンルームは、１時間あたり１００回の完全な換気にてドーム室（ｂｕｂｂｌｅ）環境中にＨＥＰＡフィルターを通した空気を供給する。すべての治療、体重の測定、および腫瘍の測定は、ドーム室環境中で行われた。この環境は、２１．１±１．１℃（７０±２°Ｆ）の範囲の温度および３０〜７０％の範囲の湿度に制御された。
試験マウスは、第０日目に皮下的に移植された。すべてのマウスに関し、毎日少なくとも１回、臨床的兆候が観察された。２ｇ超の腫瘍を有するマウス、または潰瘍化した腫瘍を有するマウスは、安楽死させられた。明らかな苦痛を有すると分かったマウス、または瀕死の状態にあると分かったマウスも同様である。本実験において行われたすべての手順は、すべての法律、制御、国立衛生研究所（ＮＩＨ）のガイドライン、およびＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ社のＡｎｎ Ａｒｂｏｒ’ｓ（ＤＩＳ−ＡＡ） Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ委員会の承認に従って実行された。
（細胞調整）
ＡＴＣＣ社からＰＣ−３細胞が取得され、３７℃にて５％二酸化炭素雰囲気下で、１０％のウシ胎児血清および１％のペニシリン−ストレプトマイシン−グルタミンを追加されたＨａｍのＦ−１２培地を用いて増殖された。増殖が完了したときに、トリプシン（Ｃｅｌｌ Ｇｒｏ（登録商標））を用いて細胞が回収され、トリプシンは中和され、細胞が移植用にプールされた。ＰＣ−３細胞（１０代継代）の懸濁液は、トリパンブルー防湿（ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ）を用いて血球計によって計算された。細胞懸濁液は、エッペンドルフ社の５８１０Ｒ遠心分離機を用いて１５００ｒｐｍ（３００×ｇ）にて５分間、４℃にてペレットになるまで濃縮された。２．５×１０７細胞／ｍｌの懸濁液が５０％ 無血清培地および５０％ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）中に準備された。注射前の生存率は９７．７％であった。試験用マウスには、２７口径針およびシリンジを用いて、第０日目において５×１０６個の細胞／マウス（０．２ｍｌ）が皮下的に移植された。細胞懸濁液が濡れた氷上に保持されることによって生存率の損失が最小化された。また、細胞懸濁液が頻繁に逆さにされることによって、接種手順中に均一な細胞懸濁液が維持された。
（治療）
試験中の全てのグループに対する平均推定腫瘍塊が１２９ｍｇ（グループの平均は、１２３〜１３４ｍｇに及んだ）であった第８日目に、治療が開始された。治療開始時には、すべてのマウスの体重は１９．２ｇ以上であった。最初の治療時における平均グループ体重は、拮抗していた（グループ平均の範囲は２１．５〜２２．８ｇ）。すべてのマウスは、治療日における個々の体重に従って投与された（０．２ｍｌ／２０ｇ）。
（測定および評価項目（ｅｎｄｐｏｉｎｔｓ））
体重および腫瘍の測定は、毎週３回記録された。単位密度を仮定した長楕円の体積に対する以下の公式を用いて、キャリパー測定から腫瘍組織量（ｍｇ）が推定された：腫瘍組織量（ｍｇ）＝（Ｌ×Ｗ２）／２。式中、ＬとＷはそれぞれ直行する腫瘍の長さと幅の測定値（ｍｍ）である。有効性を評価するために使用した主要評価項目は以下の通りである：腫瘍成長遅延、％Ｔ／Ｃ（治療群の腫瘍塊の平均を対照群の腫瘍塊の平均で割って１００を乗じた値として定義される）、完全および部分腫瘍反応、および実験の最後において腫瘍になっていない生存個体の数。式中、ＴとＣはそれぞれ、選択された評価サイズである７５０ｍｇまで成長するために、治療群および対照群の腫瘍に必要となる日数の平均である。本実験に対して腫瘍成長の遅延は、Ｔ−Ｃ値として表された。本実験では、コントロールの平均が１ｇに達したときに％Ｔ／Ｃが評価された。
完全寛解つまり完全縮小（ＣＲ）は、検出できない大きさ（５０ｍｇ未満）まで腫瘍塊が縮小することとして定義される。本願明細書で使用されるように、「完全縮小（ＣＲ）」は最初の治療後の任意の時点において、腫瘍組織量が測定できない体積にまで縮小した場合に動物に対して認められる。３ｍｍ未満の腫瘍のあらゆる測定値は、「０」として記録する。これは国立癌研究所の慣例を順守しており、それらの小さなサイズにて測定される不確定な生態現象（ｂｉｏｌｏｇｙ）に加えて、そのような測定値における内在する許容できないほど高い機械的誤差を反映している。
部分反応つまり部分縮小（ＰＲ）は、最初の治療時からの腫瘍塊または全身腫瘍組織量の５０％以上の減少として定義される。部分縮小（ＰＲ）は、腫瘍を有さない生存個体（ＴＦＳ）と同様に、完全縮小（ＣＲ）には含まれない。
「％ 腫瘍を有さない生存個体（ＴＦＳ）」とは、治療最終日において測定可能な病気の証拠を有さない任意の動物をいう。この値は完全縮小（ＣＲ）には含まれない。
「腫瘍倍増時間（Ｔｄ）」は、体積の倍加時間（日）として表された腫瘍の成長速度をいう。「腫瘍倍増時間（Ｔｄ）」は、腫瘍成長曲線の指数関数部分の対数線形最小二乗回帰から計算される。
「評価サイズに達する時間」は、腫瘍が所定の評価サイズに達するまでにかかる時間（日）をいう。「評価サイズに達する時間」は、最終的な（治療後の）腫瘍成長曲線の指数関数部分に対して、腫瘍組織量対時間の対数線形最小二乗の最良適合から計算される。この値は、実験中の各動物に対して計算される。群の中央値は、次に腫瘍成長の遅れを計算するために使用される。
「集団（ｆｏｌｄ）の成長の終点に達する時間」は、不定期な（すべての群にわたる最初の平均腫瘍組織量が十分に一致していない場合であることが多い）状況をいう。この状況では、集団（ｆｏｌｄ）の成長の観点から、有効性のパラメータを示すことが有利である。この場合、選択された評価項目は、最初の腫瘍組織量に対する選択された倍数にまで到達するまでにかかる時間である。これは、最初の腫瘍サイズが一致しないという妨害作用を除外することによって、統計的に有意な治療効果を明らかにする可能性を増大させる。「集団の成長の終点に達する時間」は、評価サイズに達する時間で説明されたように、集団の成長データから計算される。
「最後の処方薬（Ｒｘ）における腫瘍組織量」は、治療最終日における腫瘍組織量をいう。この値は、最終的な（治療後の）腫瘍成長曲線の指数関数部分に対して、腫瘍組織量対時間の対数線形最小二乗の最良適合から計算される。
「腫瘍成長の遅れ（Ｔ−Ｃ）」は、治療群と対照群（表２の１つめの群）が所定の評価サイズに達するのにかかる平均期間の差異をいう。「腫瘍成長の遅れ（Ｔ−Ｃ）」は、中央値の成長曲線の補間からではなく、群中の各動物に対する評価サイズに達する平均期間から計算される。
「明らかな正味の腫瘍細胞の死滅」とは、最初と最後の治療間における腫瘍組織量（対数で測定される）における正味の変化をいう。補間によって、各動物に対する対数線形回帰直線が使用されることによって、コントロールと治療群に対して、治療の開始時における腫瘍の質量（ＴＷ）、治療の終了時におけるＴＷがそれぞれ計算される。各治療群に対して、中央値ＴＷ（治療の終了時）が中央値コントロールＴＷ（治療の開始時）から引かれることによって、明らかな正味の細胞の死滅（対数単位）が計算される。
実験を通じた様々な時点において摘出された腫瘍のＬＹＶＥ−１とＣＤ３１による免疫組織化学染色が実行されるであろう。
（副作用の評価）
すべてのマウスに対して、臨床兆候が毎日観察された。マウスは毎治療日に体重測定され、その後少なくとも毎週２回体重測定された。個々の体重は毎週２回記録された。
死亡または安楽死時には、すべてのマウスは解剖されることによって、死亡の潜在的な原因および毒性を受けたと推定される標的器官の一般的な評価が提供された。転移の存在／不存在も記録された。個体および群の毒性の知見が表１および２に要約されている。
（結果）
実施例３の結果が表１、２および図６〜９に示されている。
（腫瘍成長／一般的な観察／対照群）
腫瘍成長の遅れの有効性を評価するために、７５０ｍｇの腫瘍組織量が選択された。コントロール腫瘍の中央値は、２０日目に評価サイズに達した。対照群の腫瘍体積倍加時間は、６．１日であった（表２）。対照群のマウスは、２５日目までに体重が１１％減少し、その後ゆっくりと回復した。対照群には自発的な腫瘍退縮は見られなかった。本実験の移植に使用された腫瘍細胞の３つのチオグリコレート培養物はすべて、全体の細菌汚染が観察されなかった。このモデルに対する病歴データに基づいて、対照群の生態現象が正常であると判断された。これは約７時間という以前から使われてきた腫瘍体積倍加時間に基づく。
（有効性）
有効性に関する最初の測定は、２２日目（コントロールの腫瘍組織量の中央値が１ｇに達する日）における腫瘍成長の遅れ、部分的または完全な腫瘍退縮、および腫瘍を有さない生存個体であった。集められた有効性のデータおよびグラフは、表１，２および図６，７に示されている。マウスの生存率は、図８に示されている。
（単剤）
（３日おきに２回；３日間の休止）×２２回（（Ｑ３Ｄｘ２；３ ｄａｙｓ ｏｆｆ）×２２）という１０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブを用いた投与では、５．６日という有意でない（Ｐ＞０．０５）腫瘍成長の遅れしか示さず、２２日目におけるＴ／Ｃ値は７０％であった。腫瘍退縮は観察されなかった。
（３日おきに２回；３日間の休止）×９回という４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００を用いた投与は有効ではなく、２．２日という有意でない腫瘍成長の遅れしか示さず、２２日目におけるＴ／Ｃ値は８７％であった。腫瘍退縮は観察されなかった。
７日おきに３回という１０ｍｇ／ｋｇのドセタキセルを用いた投与は非常に有効であって、５６．５日という有意な（Ｐ＜０．０５）腫瘍成長の遅れを示し、正味の腫瘍細胞の死滅は正の１．１３ｌｏｇｓであって、２２日目におけるＴ／Ｃ値は８％であった。完全な腫瘍退縮の発生は１００％であった。反応したマウスの２０％は、１６０日目の実験終了時において、がんを有さない状態を維持していた。この治療計画によりもたらされた腫瘍成長の遅れは、統計的に有意であった。この治療計画の抗がん活性はまた、ベバシズマブおよびＶＧＸ−１００よりも統計的に優れていた。
（併用治療計画）
ベバシズマブ＋ドセタキセルの併用療法（いずれも１０ｍｇ／ｋｇにて投与）は、非常に有効であって、７６．７日という有意な（Ｐ＜０．０５）腫瘍成長の遅れを示し、２２日目におけるＴ／Ｃ値は８％であった。完全な腫瘍退縮の発生は７０％であった。腫瘍を有さない生存個体は存在しなかった。この治療計画の抗がん活性は、腫瘍成長の遅れの解析に基づくと、ドセタキセルを単剤として用いた場合よりも統計的に優れているわけではなかった。この治療計画によってもたらされた正味の腫瘍細胞の死滅（−２．２０ ｌｏｇｓ）は、ドセタキセルを単剤として用いた場合よりもはるかに低かった。
４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００と１０ｍｇ／ｋｇのドセタキセルの併用療法は、非常に非常に有効であって、１１０．３日という有意な（Ｐ＜０．０５）腫瘍成長の遅れを示し、２２日目におけるＴ／Ｃ値は８％であった。完全な腫瘍退縮の発生は１００％であった。反応したマウスの２０％は、１６０日目の実験終了時において、がんを有さない状態を維持していた。この治療計画の抗がん活性は、曲線の下側の領域（つまり時間に対する腫瘍組織量）の解析に基づくと、ドセタキセルを単剤として用いた場合よりも統計的に有意であった。この治療計画によってもたらされた正味の腫瘍細胞の死滅（−２．０６ ｌｏｇｓ）は、ドセタキセルを単剤として用いた場合よりもはるかに低かった。
４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００と１０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブの併用療法は、８．２日という有意ではない（Ｐ＞０．０５）腫瘍成長の遅れしか示さず、２２日目におけるＴ／Ｃ値は７６％であった。腫瘍退縮は見られなかった。この治療計画の抗がん活性は、腫瘍成長の遅れの解析に基づくと、ベバシズマブまたはＶＧＸ−１００のいずれかを単剤として用いた場合よりも統計的に優れているわけではなかった。
４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００と１０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブの併用療法は、非常に非常に有効であって、１４０日超という有意な（Ｐ＜０．０５）腫瘍成長の遅れを示し、２２日目におけるＴ／Ｃ値は７％であった。完全な腫瘍退縮の発生は１００％であった。反応したマウスの４０％は、１６０日目の実験終了時において、がんを有さない状態を維持していた。この治療計画によってもたらされた腫瘍成長の遅れは、ベバシズマブ＋ドセタキセルという２薬を組み合わせた場合よりも有意に低かった。
（議論）
図６は、ＶＧＸ−１００（およびこの前立腺がんモデルではベバシズマブ）が化学療法の抗がん効率を著しく促進することを示す。ドセタキセルはこのモデルに対しては単剤として非常に有効であり、長期の腫瘍成長の遅れ、腫瘍退縮および腫瘍を有さない生存個体をもたらす。ベバシズマブとＶＧＸ−１００はいずれも有効である。しかし、ドセタキセルにＶＧＸ−１００を加えると、腫瘍成長抑制において統計的に有意な改善が見られる。さらに、ベバシズマブ＋ドセタキセルの組み合わせにＶＧＸ−１００を加えると、ベバシズマブ＋ドセタキセルに比べて、腫瘍成長抑制において著しい改善がもたらされる。
図７は、ＰＣ−３モデルにおける腫瘍成長抑制を要約する。実験の最後（１６０日目）において、ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋ドセタキセルという３薬の組み合わせによって治療されたマウス中の腫瘍は、コントロールマウスの腫瘍サイズの１６．５％であった（表３参照）。
３薬の組み合わせによる腫瘍成長抑制は、ベバシズマブ＋ドセタキセルよりも優れていた（Ｐ値＝０．０００１）。これは０．０１６７という統計的有意性の標準を上回る。ＶＧＸ−１００＋ドセタキセルは、ドセタキセル単独よりも優れていた（Ｐ値＝０．００６５）。これも統計的有意性の閾値を上回る。Ｐ値は、曲線測定下にある領域のＡＮＯＶＡを用いて計算された。０．０１６７というボンフェローニ調整αレベルが統計的有意性の閾値として決定された。
図８は、異なる治療群におけるマウスの生存率を要約する。ＶＧＸ−１００をドセタキセル＋ベバシズマブに追加することによって、この前立腺がんモデルにおける生存率が向上する。図の左側は、本実験の各治療群における生存したマウスの百分率（％）を時間の関数として示す。ＶＧＸ−１００＋ドセタキセル＋ベバシズマブという３薬の組み合わせによって治療した群におけるマウスの生存率が最も高く（８０％）、ドセタキセル＋ベバシズマブのみにより治療した群の生存率を統計的に有意な差により上回った（Ｐ値＝０．０１６１）。表４は、各治療群に対する平均生存期間を要約する。３薬の組み合わせにより治療したマウスの４０％は、実験の終了時において検出できる腫瘍を有さなかった（腫瘍を有さない生存個体：ＴＦＳ）。これは、ベバシズマブ＋ドセタキセルで治療されたマウスやドセタキセル単独で治療されたマウスの２０％とは比較にならない。２ｇ超の腫瘍を有するマウスは、安楽死させられた。
実施例３に従った第２の研究の結果が図９に示されている。
（実施例４：前立腺がん（ＰＣ−３）同所性モデルにおける併用療法）
（実験方法）
オスのＳＣＩＤマウス（３〜４週齢）がＡＲＣ社（パース）から取得された。マウスは鎮痛剤（カルプロフェン）が注射され、ケタミン／キシラジンを用いて麻酔され、続いてイソフルレンが持続された。前立腺が外科的に露出され、１０５個／１０μｌの細胞が注射された。
毎週２回の体重測定と目視検査によって、マウスの一般的な健康が監視された。
腫瘍成長と播種性転移（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｉｏｎ）が触診および長期的（ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ）生体内イメージング（少なくとも週１回行われるＸ線および蛍光イメージングの組み合わせ）により監視された。
マウスの健康の悪化または過剰な腫瘍組織量が記録されない限り、実験は８週間継続された。その後、マウスは麻酔され、心穿刺によって血液が収集され、腫瘍が重量測定おそび計測され、最終的な画像が撮影され、組織学的分析用に器官が摘出された。また転移も解析された。
（実験計画）
以下のように、群あたり１２個体であった。ＶＧＸ−１００の投与は、週に２〜３回であった。ドセタキセルの投与と抗脈管形成療法が決定された。投与は腫瘍を接種して１日後に開始された。
Ａ．ＰＣ−３腫瘍異種移植：単剤用量反応実験。単剤療法ＰＣ−３異種移植実験では、群Ａ〜Ｈを用いた（表５）。
ＶＧＸ−１００、ドセタキセル、ビカルタミドおよびＧＮＲＨの単剤としての準最大投与量および最大投与量が決定された。
Ｂ．ＰＣ−３腫瘍異種移植：用量反応実験における化学療法との組み合わせ。併用療法ＰＣ−３異種移植実験には、群Ａ〜Ｅを用いた（表６）。
Ｃ．ＰＣ−３腫瘍異種移植：抗（ａ−）血管形成Ｔｘ（ベバシズマブなど）用量反応実験との組み合わせ。併用療法ＰＣ−３異種移植実験には、群Ａ〜Ｆが用いられる（表７）。
（腫瘍成長および転移の監視）
腫瘍の大きさが週に１回以上、触診と、Ｘ線法および蛍光法の組み合わせを用いた長期的生体内イメージングと、によって記録された。
腫瘍全体の横断面を代表する切片を得るために、腫瘍は一定で再現可能な方法にて中央を通って切断された。以下のように初期および転移性腫瘍のサンプルが取得され、解析された：
・凍結切片：ＣＤ３１染色
・パラフィンブロック：腫瘍サンプルはホルマリン中で固定され、パラフィン中に包埋された。切片はＨ＆Ｅ、抗（ａ−）ＬＹＶＥ−１抗体（リンパ管検出用）および抗（ａ−）ＣＤ３４（血管検出用）を用いて染色された。
・ＩＨＣ／ＩＦ解析：抗（ａ−）ＬＹＶＥ−１、抗（ａ−）ＣＤ３４（または抗（ａ−）ＣＤ３１）染色に加えて、ＩＨＣ／ＩＦ法を用いてＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２およびＶＥＧＦＲ−３タンパク質の発現量が決定された。ＦＦＰＥおよび凍結切片の両方が（入手可能な抗体の特性に応じて）この解析に使用された。
・血清サンプル：血清は心穿刺によって実験の最後に収集された。ＰＳＡの発現量は測定されなかった。ＰＣ−３細胞はＰＳＡを産生しないからである。残りの血清は、将来の解析用に凍結された。
実施例４の結果は図１０に示されている。
（実施例５：前立腺がん（ＬＮＣａＰ）同所性モデルにおける併用療法）
ＬＮＣａＰ前立腺がん細胞がＰＣ−３前立腺がん細胞に置き換えられた以外は、実施例４と同じプロトコールを用いた。単剤用量反応実験（Ａ）では、表３に沿って、群Ａ〜ＬがＬＮＣａＰの実験に含められる。化学療法用量反応実験との組み合わせ（Ｂ）では、表６に沿って、群Ａ〜ＩがＬＮＣａＰの実験に含められる。
実施例５のＬＮＣａＰの実験では、ＰＳＡの発現量が測定された。
（実施例６：膠芽細胞腫（Ｕ８７ＭＧ）異種移植モデルにおける単剤療法）
実験を開始するために、１００μｌの培地／マトリゲル（１：１）混合液中に懸濁された５×１０６個のＵ−８７細胞がヌードマウスの右側腹部に皮下的に移植された。がん細胞は、８０匹のマウスに移植された。マウスは細胞移植後に毎日、腫瘍成長が監視された。腫瘍体積が８０〜１００ｍｍ３に達したときに、マウスはそれぞれ１０匹ずつの５つの群に無作為化された。各群には、平均値に最も近い腫瘍体積を有するマウスのみを使用した。腫瘍体積が大きすぎるまたは小さすぎるマウスは、実験から除外された。公式Ｖ＝Ｌ×Ｗ×Ｈ×π／６を用いて腫瘍体積が測定された。式中、ＬとＷは、腫瘍の最大および最小の直径を表す。Ｈは腫瘍の高さを表す。薬剤を用いた治療は、無作為化の翌日から開始された。賦形剤のコントロール、試験抗体およびベバシズマブは、腹腔内注射によって投与あたり６４〜１０８μｌの体積にて投与された。ベバシズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社）は、濃度が２５ｍｇ／ｍｌである水溶液中の薬剤として供給され、ＰＢＳを用いて１０倍に希釈された。治療は毎週２回、２７日間にわたって行われた。実験の間ずっと、腫瘍体積は毎週２回、体重は毎週１回測定された。マウスは、本薬剤治療によって起こりうる中毒作用も観察された。腫瘍体積が１５００ｍｍ３超に達した場合、マウスが本来の体重の２５％超を失った場合、腫瘍の潰瘍形成が現れた場合、またはマウスが瀕死状態になった場合、不定期の屠殺が実行された。最終的にマウスは、腫瘍が除去され、最適切削温度（ＯＣＴ）中に置かれ、ＩＨＣ解析用に−８０℃にて保存された。肝臓、肺、脾臓、腎臓、精巣および前立腺に対して肉眼的検査が実行された。これらの器官において異常な観察が見られなかった場合には、組織が廃棄された。
ＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００（４０ｍｇ／ｋｇ）は、単剤Ｕ８７ＭＧ異種移植実験における賦形剤コントロールと比べて腫瘍成長を有意に抑制した（図１１）。
（実施例７：膠芽細胞腫（Ｕ８７ＭＧ）異種移植モデルにおける併用療法）
この実験は、Ｕ８７ＭＧ膠芽細胞腫細胞がＰＣ−３前立腺がん細胞と置き換えられた点以外は概して実施例３に従って行われた。ヒト膠芽細胞腫腫瘍株（Ｕ８７ＭＧ）に由来する細胞がマウスに皮下的に移植され、腫瘍が約１５０ｍｇの平均サイズに達するまで育てられた。マウスは毎週２回、ＶＧＸ−１００（４０ｍｇ／ｋｇ）、ベバシズマブ（１０ｍｇ／ｋｇ）、これら２つの組み合わせ、またはネガティブコントロール抗体（アイソタイプコントロール）のいずれかを用いて治療された。腫瘍サイズは、キャリパーを用いて毎週２〜３回測定された。垂直の棒は、各治療群の各時点に対する腫瘍の質量の平均の標準誤差を示す。治療群あたり１０匹のマウスが含まれた。
単独で投与された場合には、Ｕ８７ＭＧ脳腫瘍腫瘍の成長を遅くするのに、ベバシズマブはわずかな効果しか有さなかった。またＶＧＸ−１００は有意な効果を有さなかった。しかし組み合わせて使用されると、ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブは４９日目における腫瘍成長において、４２％の減少を実現することができた（図１２参照）。
（実施例８：膵臓がん（ＫＰ４）異種移植モデルにおける併用療法）
実験を開始するために、１００μｌの培地／マトリゲル（１：１）混合液中に懸濁された５×１０６個のＫＰ４細胞がヌードマウスの右側腹部に皮下的に移植された。がん細胞は、９０匹のマウスに移植された。マウスは細胞移植後に毎日、腫瘍成長が監視された。腫瘍体積が８０〜１００ｍｍ３に達したときに、マウスはそれぞれ１０匹ずつの５つの群に無作為化された。各群には、平均値に最も近い腫瘍体積を有するマウスのみを使用した。腫瘍体積が大きすぎるまたは小さすぎるマウスは、実験から除外された。公式Ｖ＝Ｌ×Ｗ×Ｈ×π／６を用いて腫瘍体積が測定された。式中、ＬとＷは、腫瘍の最大および最小の直径を表す。Ｈは腫瘍の高さを表す。薬剤を用いた治療は、無作為化の翌日から開始された。賦形剤のコントロール、試験抗体およびベバシズマブは、腹腔内注射によって投与あたり６８〜１２２μｌの体積にて投与された。ベバシズマブは、濃度が２５ｍｇ／ｍｌである水溶液中の薬剤として供給され、ＰＢＳを用いて１０倍に希釈された。すべての治療薬は毎週２回、３０日間にわたって腹腔内に投与された。マウスはＶＧＸ−１００（２０または４０ｍｇ／ｋｇ）、ベバシズマブ（１０ｍｇ／ｋｇ）、これら２薬の組み合わせ（４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００＋１０ｍｇ／ｋｇのベバシズマブ）、またはアイソタイプのネガティブコントロール抗体のいずれかを用いて治療された。
実験の間ずっと、腫瘍体積は毎週２回、体重は毎週１回測定された。マウスは、本薬剤治療によって起こりうる中毒作用も観察された。腫瘍体積が２０００ｍｍ３超に達した場合、マウスが本来の体重の２５％超を失った場合、腫瘍の潰瘍形成が現れた場合、またはマウスが瀕死状態になった場合、不定期の屠殺が実行された。実験の最後においてマウスは、腫瘍が除去され、最適切削温度（ＯＣＴ）中に置かれ、ＩＨＣ解析用に−８０℃にて保存された。肝臓、肺、脾臓、腎臓、精巣および前立腺に対して肉眼的検査が実行された。これらの器官において異常な観察が見られなかった場合には、組織が廃棄された。
図１３は、各治療群における経時的な平均腫瘍組織量を示す。４０ｍｇ／ｋｇのＶＧＸ−１００で治療されたマウスの膵臓腫瘍は、平均してコントロールマウスの腫瘍の大きさの３５．３％であった。これはベバシズマブで治療した腫瘍のサイズ（３０．４％）と類似している。アスタリスク（＊）は、治療群における腫瘍の平均サイズに、コントロールと比較して統計的に有意な差が存在することを示す（ＡＮＯＶＡを用いた解析）。腫瘍のサイズは、キャリパーを用いて毎週２〜３回測定された。コントロールと比較した腫瘍のサイズは、治療３０日後に計算された。垂直の棒は、各治療群の各時点に対する腫瘍の質量の平均の標準誤差を示す。
ＬＹＶＥ−１とＣＤ３１のリンパ節組織における免疫組織化学的染色と定量が行われた。ホルマリン固定凍結ＫＰ４腫瘍を用いて、血管とリンパ管の免疫組織化学的染色および定量が行われた。
（実施例１０：結腸直腸の上皮性悪性腫瘍（ＨＣＴ−１１６）併用療法モデル）
この実験は、ＨＣＴ−１１６結腸直腸の上皮性悪性腫瘍細胞がＰＣ−３前立腺がん細胞と置き換えられた点、および化学療法剤としてフルオロウラシルがドセタキセルと置き換えられた点、以外は概して実施例３に従って行われた。
マウスは以下の治療群に分けられた：アイソタイプコントロール；ベバシズマブ単独；ＶＧＸ−１００単独；５−ＦＵ単独；ベバシズマブ＋５−ＦＵ；ＶＧＸ−１００＋５−ＦＵ；ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ；ＶＧＸ−１００＋ベバシズマブ＋５−ＦＵ。使用時には、５−ＦＵは実験の継続期間中、毎週２回、５０ｍｇ／ｋｇにて静脈内に投与された。ＶＧＸ−１００は実験の継続期間中、毎週２回、４０ｍｇ／ｋｇにて腹腔内に投与された。ベバシズマブは実験の継続期間中、毎週２回、１０ｍｇ／ｋｇにて腹腔内に投与された。
結果が図１７に示されている。ベバシズマブと組み合わせた場合のＶＥＧＦ−Ｃ抗体ＶＧＸ−１００の腫瘍に対する小さな相加効果が観察された。同様に、ＶＧＸ−１００がフルオロウラシル化学療法と組み合わせられた場合の小さな相加効果に関する証拠が見られた。
（実施例１１：肺の上皮性悪性腫瘍（Ｈ２９２）併用療法腫瘍モデル）
実施例３で説明されたものと類似したプロトコールが使用された。Ｈ２９２細胞（５×１０５個）がヌードマウスの右腋窩の上部に皮下的に移植された。マウスは平均腫瘍組織量が７５〜１７５ｍｇの場合に各治療群（１０個体／群）へと割り振られた。腫瘍組織量は、公式：腫瘍組織量（ｍｇ）＝（Ｌ×Ｗ２）／２を用いてキャリパー測定から推定された。式中、ＬとＷはそれぞれ直交する腫瘍の長さと幅の測定値（ｍｍ）である。抗体は、腹腔内注射によって週２回投与された（アイソタイプコントロールとＶＧＸ−１００は４０ｍｇ／ｋｇ；ベバシズマブは１０ｍｇ／ｋｇ）。ドセタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）は３週間にわたって毎週、静脈内に投与された。結果が図１８に示されている。
（実施例１２：卵巣の上皮性悪性腫瘍（ＯＶＣＡＲ−８）併用療法モデル）
実施例３で説明されたものと類似したプロトコールが使用された。ＯＶＣＡＲ−８細胞（１×１０７個）がヌードマウスの右腋窩の上部に皮下的に移植された。マウスは平均腫瘍組織量が７５〜１７５ｍｇの場合に各治療群（１０個体／群）へと割り振られた。腫瘍組織量は、公式：腫瘍組織量（ｍｇ）＝（Ｌ×Ｗ２）／２を用いてキャリパー測定から推定された。式中、ＬとＷはそれぞれ直交する腫瘍の長さと幅の測定値（ｍｍ）である。抗体は、腹腔内注射によって週２回投与された（アイソタイプコントロールとＶＧＸ−１００は４０ｍｇ／ｋｇ；ベバシズマブは１０ｍｇ／ｋｇ）。ドセタキセル（１０ｍｇ／ｋｇ）は３週間にわたって毎週、静脈内に投与された。結果が図１９に示されている。
（実施例１３：前立腺がん（ＰＣ−３）同所性モデルにおける単剤療法）
ＰＣ−３−ＧＦＰヒト前立腺がん同所性ＭｅｔａＭｏｕｓｅ（登録商標）モデルがＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ社によって実行された。ＰＣ−３−ＧＦＰ腫瘍フラグメントは、外科的に前立腺の腹葉に移植され、縫合糸を用いて縫合された。治療は手術３日後に開始された（６０ｍｇ／ｋｇ、週３回、腹腔内）。ＧＦＰ可視化腫瘍の確立後に、ＧＦＰ発現腫瘍の全身イメージングが週１回、生きたマウス中で実行された。原発腫瘍サイズは、キャリパー測定および公式（Ｌ×Ｗ２）／２によって計算された腫瘍体積（ｍｍ３）を用いて週１回推定された。結果が図２０に示されている。実験の詳細は以下の通りである。
実験動物：本実験では、オスのＮＣｒヌードマウス（５〜６週齢）が使用された。元々のつがいはＴａｃｏｎｉｃ社（ニューヨーク州ジャーマンタウン）から購入された。試験用マウスは、繁殖されてＨＥＰＡフィルターを通した環境下で実験用に維持された。ケージ、えさ、床敷はオートクレーブされた。マウスのえさは、ＰＭＩ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ社（ミズーリ州ブレントウッド）から取得された。
実験用の化合物と薬剤の調製：賦形剤、ＶＧＸ−１００およびアイソタイプは、使用するまで−２０℃にて保存された。ＶＧＸ−１００とアイソタイプは、使用前にＰＢＳを用いて適切な濃度（７．５ｍｇ／ｍｌおよび７．５ｍｇ／ｍｌ）に希釈された。
ＰＣ−３−ＧＦＰヒト前立腺がん同所性メタマウス（登録商標）モデル：ヒト前立腺がん細胞株Ｐ−Ｃ−３は、ＡＴＣＣ社から購入された。
ａ．ＧＦＰ発現ベクター：内部リボソーム侵入部位を有し、強化型ＧＦＰおよびネオマイシン耐性遺伝子を同一の２シストロン性のコンストラクト（ｍｅｓｓａｇｅ）上で発現するｐＬＥＩＮレトロウイルスベクター（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）が腫瘍細胞に形質導入するために使用された。
ｂ．細胞培養物のパッケージング、ベクターの作製、トランスフェクション、およびサブクローニング：１０Ａｌウイルス外皮を発現し、ＮＩＨ ３Ｔ３に由来するパッケージング細胞株であるＰＴ６７がＣＬＯＮＴＥＣＨ社から購入された。ＰＴ６７細胞は、加熱不活性化型の１０％ＦＢＳ（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社、カリフォルニア州カラバサス）を補充されたＤＭＥＭ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社）中で培養された。ベクターの作製には、パッケージング細胞（ＰＴ６７）が、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチル硫酸試薬（Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ社）と飽和量のｐＬＥＩＮプラスミドとの沈殿混合物とともに、７０％の集密度（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ）にて１８時間インキュベートされた。このときに新鮮な培地が補充された。細胞は、トランスフェクションの４８時間後に蛍光顕微鏡法によって解析された。選択をするために、細胞は５００〜２０００μｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、ニューヨーク州グランドアイランド）の存在下で７日間培養された。
ｃ．レトロウイルスによる腫瘍細胞のＧＦＰ形質導入：ＧＦＰ遺伝子を形質導入するために、ＰＴ６７細胞のレトロウイルスの上清と１０％ＦＢＳ（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社）を含むＲＰＭＩ １６４０（ＧＩＢＣＯ社）との１：１の沈殿混合物とともに、２５％の集密度のＰＣ−３細胞が７２時間インキュベートされた。このときに新鮮な培地が補充された。細胞は、形質導入の７２時間後にトリプシン−ＥＤＴＡを用いて収集され、２００μｇ／ｍｌのＧ４１８を含む選択培地中で１：１５の比にて継代培養された。Ｇ４１８の密度は、４００μｇ／ｍｌにまで段階的に増大された。ＧＦＰを安定的に発現するクローンは、クローニングシリンダー（Ｂｅｌ−Ａｒｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ社）およびトリプシン−ＥＤＴＡを用いて単離され、次に従来の培養法を用いて増幅および導入された。
ｄ．皮下異種移植：腫瘍のストックは、５×１０６細胞／１００μｌの濃度にてＰＣ−３−ＧＦＰ細胞をヌードマウスの脇腹へと皮下的に注射することによって作製された。ヌードマウスにおいて成長し、皮下注射（ｓ．ｃ．）により収集されや腫瘍細胞は、検査され、肉眼で見て壊死と分かる組織、壊死と疑われる組織、またはＧＦＰを発現しない腫瘍組織はすべて除去された。腫瘍組織は、次に約１ｍｍ３の小さなフラグメントへと分割された。
ｅ．外科的な同所性移植（ＳＯＩ）：マウスはケタセット、キシラジンおよびＰｒｏｍＡｃｅの混合物を用いて麻酔され、外科手術がされる部位はヨードおよびアルコールを用いて消毒された。滅菌した外科用メスおよび刃（＃１０）を用いて、ヌードマウスの下腹部に長さ約２ｃｍの切開が行われた。前立腺が露出され、前立腺被膜が注意深く切開された。ＰＣ−３−ＧＦＰ組織の２つのフラグメント（各１ｍｍ３）が、滅菌した８−０外科用縫合糸（ナイロン製）を用いて前立腺の２つの腹葉間で縫合された。腹部は滅菌した６−０外科用縫合糸（シルク製）を用いて１つの層にて閉じられた。すべての手順は、ＨＥＰＡフィルターを通した層流フード内で５倍の解剖顕微鏡下で実行された。
実験計画：両群の治療は、外科的な同所性移植（ＳＯＩ）の３日後に開始された。表９は実験計画を示す。
蛍光光学腫瘍イメージング（ＦＯＴＩ）：ＦｌｕｏｒＶｉｖｏイメージングシステム（ＩＮＤＥＣ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社、カリフォルニア州サンタクララ）が全身イメージングに使用された。ＧＦＰ発現腫瘍の全身光学イメージングは、ＧＦＰ可視化腫瘍が確立された後、生きたマウス中で週に１回行われた。解剖では、リンパ節への転移を調べるために、開いた状態でのイメージングが胸部および腹部にて行われた。
腫瘍のサイズおよび体重の測定：原発腫瘍のサイズおよび体重は、それぞれキャリパーおよび電子はかりを用いて週に１回測定された。原発腫瘍のサイズは、直交する小さい寸法（Ｗ）および大きい寸法（Ｌ）を測定することによって、週に１回推定された。おおよその腫瘍体積（ｍｍ３）が公式：（Ｗ２×Ｌ）×１／２を用いて計算された。
実験の終点：すべてのマウスは、治療開始後３０日目に屠殺された。
最終的な腫瘍の質量：原発腫瘍は解剖時に摘出されて解剖時に質量が測定された。
組織の収集：初期の前立腺腫瘍および転移が見られたあらゆる器官は、収集された。腫瘍および器官は、各断片において腫瘍が等しく見えるようにするために、対称に切断された。各腫瘍の一方の断片および各器官は、１０％のＮＢＦ中で固定された。各腫瘍の他方の断片および各器官は、液体窒素中で瞬間冷凍された。
本実験に用いた統計解析：実験群間で平均腫瘍体積と腫瘍の質量を比較するために、α＝０．０５のスチューデントｔ−検定が使用された。
（結果）
本実験に用いたマウスは、治療後３０日目に屠殺された。腫瘍体積および腫瘍の質量は、賦形剤コントロールと治療群とを比較するために、スチューデントｔ−検定を用いて解析された。
１．腫瘍体積に及ぼす効果：治療後２８日目において、治療群の平均腫瘍体積が対照群と比較された。腫瘍体積は、治療群ではアイソタイプ対照群と比較して統計的に有意な（ｐ＜０．０５）減少を示した（表１０参照）。
２．腫瘍の質量に及ぼす効果：治療群の腫瘍の質量の平均が、対照群の腫瘍の質量の平均と比較された。治療群ではアイソタイプ対照群と比較して、治療後３０日目には統計的に有意な減少は観察されなかった（表１１参照）。
３．転移に及ぼす効果：すべての実験動物は、屠殺時に切開された。ＧＦＰを発現する転移の光学イメージングが実行された。転移の罹病率（ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ）がＦＯＴＩおよびフィッシャーの正確確率検定を用いて解析された。リンパ節（ＬＮｓ）に対する転移の罹病率の有意差（Ｐ＝０．０１９）が治療群と対照群との間で見出された（表１２参照）。
４．毒性の推定：賦形剤コントロールと比較して、それほど体重を減らすことのない抗体治療群の安定した体重は、これらの実験の投与量では抗体ＶＧＸ−１００が明白な毒性を有さなかったことを示す。
（結論）
治療後２８日目の結果に基づくと、治療群［ＶＧＸ−１００（６０ｍｇ／ｋｇ）、腹腔内投与］では対照群［アイソタイプ（６０ｍｇ／ｋｇ）、腹腔内投与］と比較して、平均腫瘍体積は統計的に有意な減少（５９％の減少）を示した。ＶＧＸ−１００はまた、治療群では対照群と比較して、転移の局所的なリンパ節への罹病率を５５％低下させた。これらの実験の投与量では抗体ＶＧＸ−１００およびアイソタイプが明白な毒性を有さなかったことを示す。治療群では全実験を通して、大きな体重の低下は観察されなかった。

Claims (6)

  1. 治療に有効な量のＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤と抗腫瘍性組成物との複合薬であって、
    ＶＥＧＦ−Ｃ拮抗剤は、配列番号３で提供される重鎖と、配列番号４で提供される軽鎖とを含むＶＥＧＦ−Ｃ抗体であって、
    抗腫瘍性組成物は、ＶＥＧＦ−Ａ抗体であるベバシズマブを含み、ドセタキセル、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、テモゾロマイド（ＴＭＺ）、ゲムシタビン、オキサリプラチン、パクリタキセル、カルボプラチンおよびイリノテカンから構成される群から選択される化学療法剤をさらに含み、
    がんは、肺がん、気管支がん、結腸直腸がん、前立腺がん、膵臓がん、肝臓がん、食道がん、膀胱腺（ｕｒｉｎａｒｙ）がん、膀胱（ｂｌａｄｄｅｒ）がん、腎臓がん、乳がん、卵巣がんおよび脳腫瘍、膠芽細胞腫、および非ホジキンリンパ腫から選択される固形の血管腫瘍であることを特徴とするヒトの対象中のがんを治療する複合薬。
  2. がんは、転移性、ステージＩＩＩまたはステージＩＶである請求項１に記載の複合薬。
  3. がんは、再発性であって、任意的に局所的に再発性である請求項１または２に記載の複合薬。
  4. 対象は、以前治療を受けていない請求項１〜３のいずれか１項に記載の複合薬。
  5. がんは、ＶＥＧＦ−Ａ拮抗剤に対して抵抗性を有する請求項１〜３のいずれか１項に記載の複合薬。
  6. 任意の順序にて連続的に投与される請求項１〜５のいずれか１項に記載の複合薬。
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