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JP2013509193A - Ｉｌ−１７ａ拮抗物質 - Google Patents

Ｉｌ−１７ａ拮抗物質 Download PDF

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Abstract

インターロイキン−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ）抗体拮抗物質、ＩＬ−１７Ａ抗体拮抗物質又はそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド、並びに前述のものを製造及び使用するが開示される。

Description

本発明は、インターロイキン−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ）抗体拮抗物質、ＩＬ−１７Ａ抗体拮抗物質又はそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド、並びに上記のものを製造及び使用する方法に関する。
インターロイキン−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ、ＣＴＬＡ−８、ＩＬ−１７）は、ＩＬ−２３及びＴＧＦ−β等のサイトカインに応答して、活性化Ｔｈ１７細胞、ＣＤ８+ Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、及びＮＫ細胞によって分泌されるサイトカインであり、好中球生態、炎症、臓器破壊、及び宿主細胞防衛に関与する、線維芽細胞及び滑膜細胞等の多数の細胞タイプからの、抗菌性ペプチド（デフェンシン）、炎症促進性サイトカイン、及びケモカイン等のメディエーターの産生を調節する（Ｗｅａｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：８２１〜５２，２００７、Ａｇｇａｒｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１９１０〜４，２００３、Ｍａｎｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ４４１：２３１〜４，２００６に概説される）。ＩＬ−１７Ａは、ＴＮＦ−α及びＩＬ−１β等の他のサイトカインと協同して、炎症促進性環境を増強する。
ＩＬ−１７Ａサイトカインファミリーは、ＩＬ−１７Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＦと指定される６つの同族体から成り、各々、相違する特有の生物学的役割を有する（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１４：１２６５〜７３，２００４、Ｋｏｌｌｓ ａｎｄ Ｌｉｎｄｅｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２１：４６７〜７６，２００４、Ｍｏｓｅｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１４：１５５〜７４，２００３）。このファミリーメンバーのうち、ＩＬ−１７Ｆは、ＩＬ−１７Ａと最も相同であり、肺における好中球増加症の誘導及び炎症促進性サイトカインの誘導等の多くの類似した機能特性を共有するが、人間においては、ＩＬ−１７Ｆは、ＩＬ−１７Ａよりも約１０倍効力が低い（Ｍｏｓｅｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１４：１５５〜７４，２００３、Ｋｏｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２１：４６７〜７６，２００４、ＭｃＡｌｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７５：４０４〜１２，２００５）。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆはまた、生体外で中間生物活性を有する、ヘテロ二量体を形成することができる（Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１３４４７〜５５，２００７）。
ＩＬ−１７Ａは、インターロイキン−１７受容体Ａ（ＩＬ−１７ＲＡ）及び受容体Ｃ（ＩＬ−１７ＲＣ）と相互作用することによってその効果を媒介する（Ｍｏｓｅｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．１４：１５５〜７４，２００３、Ｔｏｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７７：３６〜９，２００６）。ＩＬ−１７Ｆは、同じ受容体を通じてシグナル伝達するが、これらの受容体へのＩＬ−１７Ｆ親和性は、それよりも有意に低い（Ｋｕｅｓｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：５４６２〜７３，２００７）。ヒトＩＬ−１７Ｆ及びヒトＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＲＡ複合体の結晶構造は、ホモ二量体における推定受容体結合空洞を特定した（Ｈｙｍｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．２０：５３３２〜４１，２００１、Ｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０：１２４５〜５１、２００９）。類似した空洞は、中和Ｆａｂとの複合体におけるヒトＩＬ−１７Ａの結晶構造において特定されたが、この空洞は、部分的に占領されていた（Ｇｅｒｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９４：９０５〜２１，２００９）。
ＩＬ−１７Ａの不適切な又は過剰な産生は、関節リウマチ（Ｌｕｂｂｅｒｔｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ４１：８４〜９１，２００８）、ぜんそく等のアレルギー性気道疾患を含む気道過敏症（Ｌｉｎｄｅｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ．４：１３０４〜１２，２００３、Ｉｖａｎｏｖ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．３０：９５〜１０３，２００９に概説される）、乾癬（Ｊｏｈａｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１６０：３１９〜２４，２００９）、アトピー性皮膚炎を含む皮膚過敏症（Ｔｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１１：８７５〜８１，２００３）、全身性硬化症（Ｆｕｊｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇ．Ｓｃｉ．５０：２４０〜４２，２００８）、潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む炎症性腸疾患（Ｈｏｌｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．１４：１１７５〜８４，２００８、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｂｏｗｅｌ Ｄｉｓ．１２：３８２〜８８，２００６）、並びに慢性閉塞性肺疾患を含む肺疾患（Ｃｕｒｔｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｓｏｃ ４：５１２〜２１，２００７）を含む、種々の疾患及び傷害の病理に関連する。
ＩＬ−１７Ａに対する抗体は、ＩＬ−１７Ａ媒介型疾患及び傷害の治療における使用のために提案されている（ＰＣＴ公開第ＷＯ０８／０２１１５６号、第ＷＯ０７／０７０７５０号、第ＷＯ０７／１４９０３２号、第ＷＯ０６／０５４０５９号、第ＷＯ０６／０１３１０７号、第ＷＯ０８／００１０６３号、第ＷＯ１０／０３４４４３号、米国特許出願第ＵＳ２００８／０９５７７５号、第ＵＳ２００９／０１７５８８１号）。抗体治療薬の薬物動態学、有効性、及び安全性プロファイルは、具体的な組成に応じるため、ＩＬ−１７Ａ媒介型疾患及び傷害の治療における使用に好適な、ヒトＩＬ−１７Ａに対する改善された抗体の必要性が存在する。
本発明の一態様は、単離された抗体又はそのフラグメントであり、該抗体は、アミノ酸残基５６〜６８（配列番号１５７）及び１００〜１１６（配列番号１５８）において、又は残基Ｌ２６、Ｒ５５、Ｅ５７、Ｐ５９、Ｅ６０、Ｒ６１、Ｙ６２、Ｓ６４、Ｖ６５、Ｗ６７、Ｒ１０１、Ｅ１０２、Ｐ１０３、及びＦ１１０において、配列番号１０５に示される配列を有するヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する。
本発明の別の態様は、単離された抗体又はそのフラグメントであり、抗体は、ヒトＩＬ−１７Ａ上のＰ２ポケット空洞に特異的に結合し、このＰ２ポケット空洞は、配列番号１０５のアミノ酸残基Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２を含む。
本発明の別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、ある種の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ある種の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ある種の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列又はある種の軽鎖可変領域のアミノ酸配列（ＶＬ）を含むモノクローナル抗体と、ヒトＩＬ−１７Ａ結合をめぐって競合する、単離された抗体又はフラグメントアミノ酸配列である。
本発明の別の態様は、ある種の重鎖可変領域パラトープアミノ酸残基及びある種の軽鎖可変領域パラトープアミノ酸残基を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１７Ａのある種の残基と相互作用する、単離された抗体又はフラグメントである。
本発明の別の態様は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、該抗体が、Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｆ５６及びＹ５８から選択される重鎖可変領域パラトープ、並びにＣｈｏｔｈｉａ残基Ｙ９１、Ｆ９３、及びＦ９４から選択される軽鎖可変領域パラトープを含む。
本発明の別の態様は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、該抗体が、ある種の重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ある種の軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列、ある種の重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列又はある種の軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列を含む。
本発明の別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであり、該抗体は、ある種の重鎖のアミノ酸配列及びある種の軽鎖のアミノ酸配列を含む。
本発明の別の態様は、本発明の単離された抗体又はフラグメント及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物である。
本発明の別の態様は、配列番号６７、６８、６９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００に示されるアミノ酸配列を含む単離された抗体重鎖である。
本発明の別の態様は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８７、８８、８９、９０、又は９１に示されるアミノ酸配列を含む単離された抗体軽鎖である。
本発明の別の態様は、配列番号６７、６８、６９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００に示されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドである。
本発明の別の態様は、配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８７、８８、８９、９０、又は９１に示されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドである。
本発明の別の態様は、少なくとも１つの本発明のポリヌクレオチドを含むベクターである。
本発明の別の態様は、本発明のベクターを有する宿主細胞細胞である。
本発明の別の態様は、ヒトＩＬ−１７Ａの、ＩＬ−１７ＲＡとの相互作用を阻害する方法であり、ヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＲＡを提供する工程と、
ヒトＩＬ−１７Ａを、Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基においてヒトＩＬ−１７Ａに結合する拮抗物質と接触させる工程と、を含む。
本発明の別の態様は、ＩＬ−１７Ａ生物活性を阻害する方法であり、ヒトＩＬ１７−Ａ及びＩＬ−１７ＲＡを提供する工程と、ヒトＩＬ−１７Ａを、Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基においてヒトＩＬ−１７Ａに結合する拮抗物質と接触させる工程と、を含む。
本発明の別の態様は、請求項３又は７に記載の単離された抗体の治療上の有効量を、炎症性状態の治療を必要とする患者に、炎症性状態を治療するうえで充分な時間にわたって投与する工程を含む、炎症性状態を治療する方法である。
Ａ〜Ｈはファミリー２、６ａ、６ｂ、１９ａ、及び１９ｂ ＩＬ−１７Ａ抗体拮抗物質のＣＤＲ配列。 例示のＡ）ＩＧＬＶ３及びＩＧＬＪ、並びにＢ）パラトープ残基をグラグトするための足場としてのＩＧＨＶ３及びＩＧＨＪ生殖細胞系列遺伝子。ｍＡｂ６７８５配列は、上に示される。ＣＤＲ領域は、下線を引かれており、ｍＡｂ６７８５軽鎖（Ｙ３１、Ｄ４９、Ｙ９０、Ｆ９２、Ｆ９３）及び重鎖（Ｓ５２、Ｔ５４、Ｆ５７、Ｙ５９、Ｑ９９、Ｌ１００、及びＴ１０１）におけるコア接触部位は、アスタリスク「*」によって示される。Ｂ）におけるフレームワーク４領域は、二重下線を引かれている。示されている配列は、特に具体的な指示がない限り、*０１対立遺伝子。 選択された抗体Ａ）軽鎖及びＢ）重鎖のためのＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｉａ番号付け。Ｋａｂａｔ ＣＤＲ及びＣｈｏｔｈｉａ ＨＶの場所は、灰色で強調表示されている。 ＥＬＩＳＡ形式での、標識化されたＡ及びＢ）ｍＡｂ１９２６、Ｃ）ｍＡｂ３１７、Ｄ）ｍＡｂ３１７１、Ｅ）及びＦ）ｍＡｂ７３５７の、ＩＬ−１７Ａとの競合結合アッセイ。 Ａ）異なる抗ＩＬ−１７Ａ ｍＡｂと複合体化されたＩＬ−１７ＡのＨ／Ｄ交換マップ。保護ブロックの上の番号付けは、成熟ＩＬ−１７Ａ（配列番号１０５）配列の番号付けに相当する。 Ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８複合体の全体的な分子構造。ＩＬ−１７Ａの二量体は、濃い灰色及び薄い灰色で示される。２つのＦａｂ分子は、それぞれ濃い灰色及び薄い灰色で示される。Ｂ）ＩＬ−１７Ａ（薄い灰色）及びＩＬ−１７Ｆ（濃い灰色）の単量体の比較、Ｃ）ＩＬ−１７Ａの二量体（薄い及び濃い灰色）、Ｄ）ＩＬ−１７Ｆの二量体（薄い及び濃い灰色）。 Ｆａｂ６４６８に対するＩＬ−１７Ａ上の２つの結合部位及びコアエピトープ。プロトマー１及び２は、それぞれ濃い及び薄い灰色である。コアエピトープは、黒色の楕円形によって示される。破線は、無秩序残基を表す。 ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ推定受容体結合ポケットの比較。Ａ）ＩＬ−１７ＡのＰ１及びＰ２ポケットの正面及び背面図。ｍＡｂ６４６８軽鎖ＣＤＲ３のＦＦモチーフは、Ｐ２ポケットに示される。Ｂ）Ｐ２ポケットにおけるＮ末端ＦＦモチーフを有するＩＬ−１７Ｆ。Ｃ）ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの配列整列並びにＰ１及びＰ２ポケットの保存。 ＥＬＩＳＡ形式での、ｍＡｂ１９２６の、ＩＬ−１７Ａタンパク質の異なる種への結合特異性。
本明細書に引用する、特許及び特許出願を含むがそれらに限定されない刊行物はすべて、それらがあたかも本明細書に完全に記載されているのとまったく同様に本願に援用するものである。
本明細書で使用されるとき、用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないことが理解される。別段の規定がない限り、本明細書で使用されるとき、全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野における当業者によって一般的に理解されている意味と同一の意味を有する。
本明細書に記載されているものと同様又は同等の任意の方法及び材料を、本発明の試験を実施するために使用できるが、例示となる材料及び方法を本明細書に記載する。本発明の記載及び請求には、以下の用語が使用される。
本明細書で使用されるとき、「拮抗物質」という用語は、任意の機序によって、ＩＬ−１７Ａ活性を部分的に又は完全に阻害する分子を意味する。例示の拮抗物質は、抗体、融合タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣体、核酸、オリゴヌクレオチド、及び小分子である。薬剤は、後述されるＩＬ−１７Ａ活性についての周知のアッセイを使用して特定することができる。
本明細書で使用されるとき、「ＩＬ−１７Ａ抗体拮抗物質」又は「ＩＬ−１７Ａに反応する抗体」という用語は、直接若しくは間接に、ＩＬ−１７Ａ生物活性を低減若しくは阻害する、ＩＬ−１７Ａのその受容体への結合を遮断する、又はＩＬ−１７Ａ受容体活性化を阻害することができる抗体を指す。例えば、ＩＬ−１７Ａに反応する抗体は、ＩＬ−１７Ａに直接結合し、ＩＬ−１７Ａ活性を中和する、すなわち、サイトカイン及びケモカイン放出を低減するために、ＩＬ−１７Ａシグナル伝達を遮断することができる。
「ＩＬ−１７Ａ」（ＣＴＬＡ−８、ＩＬ−１７、インターロイキン−１７Ａ）という用語は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２１８１に示されるアミノ酸配列を有する、ヒトＩＬ−１７Ａポリペプチドを指す。配列番号１０５は、成熟ヒトＩＬ−１７Ａのアミノ酸配列を示す。生体内ＩＬ−１７Ａは、２つの単量体のホモ二量体を形成し、それらは単量体Ａ及び単量体Ｂ、又はプロトマーＡ及びプロトマーＢ、又はプロトマー１及びプロトマー２、又は鎖Ａ及び鎖Ｂと指定される。ＩＬ−１７Ａはまた、ＩＬ−１７Ｆとのヘテロ二量体を形成することができる。「ＩＬ−１７Ａ」という用語は、単量体、ホモ二量体、及びヘテロ二量体型を含む。「ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６」という用語は、Ａ７０Ｑ及びＡ１３２Ｑ置換を有するＩＬ−１７Ａの変異型を指す。成熟ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６のアミノ酸配列は、配列番号１０６に、及びｃＤＮＡ配列は、配列番号１１２に示される。ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ａｍｕｔ６は、同等の活性を有する（ＰＣＴ特許出願第ＷＯ０９／００３０９６号）。
本明細書で使用されるとき、「ＩＬ−１７Ａ受容体」という用語は、は、両方の受容体ポリペプチド、ＩＬ−１７ＲＡ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０５５１５４、配列番号１０７）及びＩＬ−１７ＲＣ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿７０３１９１、配列番号１１３）、並びに２つのポリペプチドのホモ二量体又はヘテロ二量体を含む。
本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、広義で意図され、ポリクローナル抗体、マウス、ヒト型（human）、ヒト適合性、ヒト化、及びキメラモノクローナル抗体を含むモノクローナル抗体、抗体フラグメント、少なくとも２つの無傷抗体、二量体の、四量体の、又は多量体の抗体から形成される多重特異的抗体を含む、免疫グロブリン分子を含む。
本明細書で使用されるとき、「モノクローナル抗体」（ｍＡｂ）という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体（又は抗体フラグメント）を意味する。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、典型的に単一のエピトープに対して向けられている。「モノクローナル」という修飾語は、抗体のほぼ均質な性質を指して言うものであり、抗体がいずれかの特定の方法によって作製される必要はない。
免疫グロブリンは、重鎖の定常領域のアミノ酸配列に応じて、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つの大きなクラスに分類することができる。ＩｇＡ及びＩｇＧは、ＩｇＡ1、ＩｇＡ2、ＩｇＧ1、ＩｇＧ2、ＩｇＧ3、ＩｇＧ4というアイソタイプに更に細かく分類される。あらゆる脊椎動物種の抗体の軽鎖は、定常領域のアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）及びラムダ（λ）の２つの明確に異なるタイプのうちの１つに分類することができる。
「抗体フラグメント」という用語は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、重鎖定常領域（ＣＨ）、軽鎖定常領域（ＣＬ）、又は抗体重鎖若しくは軽鎖のいずれかからのフレームワーク領域（ＦＲ）等の、免疫グロブリン分子の少なくとも一部分を含む。抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）2、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、又は二重特異性抗体であってもよい。上述の抗体フラグメントの構造、並びに抗体及びそのフラグメントの調製及び使用のための技術は、当該技術分野において周知である。
「フレームワーク」領域からなる抗体可変領域は、３つの「抗原結合部位」によって妨害される。抗原結合部位は、種々の用語を使用して記載される。（ｉ）３つがＶＨに（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）、及び３つがＶＬに（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）ある、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づく（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１３２：２１１〜２５０，１９７０、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）３つがＶＨに（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及び３つがＶＬに（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）ある、「高度可変領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７，１９８７）によって記載されるように、構造において高度可変である抗体可変ドメインの領域を指す。他の用語には、「ＩＭＧＴ−ＣＤＲ」（Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５〜７７，２００３）及び「特異性決定残基使用」（ＳＤＲＵ）（Ａｌｍａｇｒｏ，Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２〜１４３，２００４）が含まれる。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位の標準化された番号付け及び記載を提供する。各ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴの表記間の対応については、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５〜７７，２００３に記載されている。
本明細書で使用されるとき、「Ｃｈｏｔｈｉａ残基」は、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ（Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３，９２７〜４８，１９９７）に従って番号付けされた抗体ＶＬ残基及びＶＨ残基である。ポリペプチド番号付けに関連して２つの最も使用される番号付けシステム、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５th Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１）とＣｈｏｔｈｉａ（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜１７，１９８７）との間の対応を、本発明の代表的な抗体に対して図３に示す。
「フレームワーク」又は「フレームワーク配列」は、抗原結合部位として記載されていない、可変領域の残りの配列である。抗原結合部位は上述のような種々の用語によって記載され得るため、フレームワークの正確なアミノ抗原結合部位がどのように記載されるかによって決まる。
本明細書で使用されるとき、「実質的に同一」という用語は、比較されている２つの抗体又は抗体フラグメントアミノ酸配列が、同一であるか、又は「ごく僅かな差異」を有することを意味する。ごく僅かな差異とは、抗体特性に悪影響を及ぼさない、抗体又は抗体フラグメントアミノ酸配列における１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸の置換である。本明細書で開示する配列とほぼ同じアミノ酸配列も本願の一部である。特定の実施形態では、配列の同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも高い。同一性百分率は、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ ｖ．９．０．０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｓｌｂａｄ，ＣＡ）のＡｌｉｇｎＸモジュールの初期設定を使用する一対整列によって決定することができる。本発明のタンパク質配列を、問い合わせ配列として使用して、例えば、関連配列を特定するために、公的又は特許データベースに対して検索を実行することができる。かかる検索を実行するために使用される例示のプログラムは、初期設定を使用する、ＸＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴＰプログラム（ｈｔｔｐ＿／／ｗｗｗ＿ｎｃｂｉ＿ｎｌｍ／ｎｉｈ＿ｇｏｖ）、又はＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ（商標）（ＧｅｎｏｍｅＱｕｅｓｔ、Ｗｅｓｔｂｏｒｏｕｇｈ、ＭＡ）一式である。
本願で用いられる「〜と組み合わせて（in combination with）」という用語は、記述の対象である薬剤が、他の薬剤と共に、混合物中で一緒に、又は単独薬剤として同時に、又は単独薬剤として順次に任意の順序で、動物に投与され得ることを意味する。
本明細書で使用されるとき、「炎症性状態」という用語は、部分的には、サイトカイン、ケモカイン、又は炎症性細胞（例えば、好中球、単球、リンパ球、マクロファージ）の活性によって媒介される、有害な刺激等（病原体、損傷した細胞、身体的傷害、若しくは刺激物）に対する急性又は慢性の局部的又は全身性反応を指し、ほとんどの例において、疼痛、潮紅、膨張、及び組織機能の障害によって特徴付けられる。
本明細書で使用されるとき、「ＩＬ−１７Ａ媒介型炎症性状態」という用語は、少なくとも部分的にはＩＬ−１７Ａ生物活性から結果として生じる、又はＩＬ−１７Ａ活性によって引き起こされる、炎症性状態を指す。例示のＩＬ−１７Ａ媒介型炎症性状態は、乾癬及び関節リウマチである。
本明細書で使用されるとき、「ＩＬ−１７Ａ媒介型状態」という用語は、ＩＬ−１７Ａが、直接又は間接によらず、疾患又は状態の、因果関係、発症、進行、持続、又は病理を含む、疾患及び病状において役割を果たす、全ての疾患及び病状を包含する。
用語「エピトープ」は、本明細書で使用するとき、抗体が特異的に結合する抗原の部分を意味する。エピトープは、通常、アミノ酸又は多糖類側鎖のような化学的に活性な（極性、非極性又は疎水性）部分の表面集団からなり、特定の３次元構造特性並びに特定の帯電特性を有し得る。エピトープは、立体配座空間単位を形成する隣接した又は隣接していないアミノ酸のいずれか又は両方から成り得る。隣接していないエピトープについて、抗原の直鎖配列の異なる部分からのアミノ酸は、タンパク質分子の折り畳みを通じて、３次元空間において近接近する。
本明細書で使用されるとき、「パラトープ」という用語は、抗原がそこに特異的に結合する、抗体の一部分を意味する。パラトープは元来線状であるか、又は不連続であることができ、抗体のアミノ酸の線状構造よりも、隣接していないアミノ酸間の空間的な関係により形成される。「軽鎖パラトープ」及び「重鎖パラトープ」又は「軽鎖パラトープアミノ酸残基」及び「重鎖パラトープアミノ酸残基」は、それぞれ、抗原と接触する抗体の軽鎖及び重鎖残基を指す。
用語「特異的結合」は、本明細書で使用するとき、抗体が特定の抗原と、他の抗原又はタンパク質に対するよりも高い親和性で結合することを指す。典型的に、抗体は、解離定数（ＫD）が１０-7Ｍ以下で結合し、既定の抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン、又はその他任意の特定ポリペプチド）に結合するためのＫDよりも、少なくとも１０倍低いＫDで、既定の抗原に結合する。「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」という語句は、本明細書で、例えば、ＩＬ−１７Ａ特異的抗体のように「抗原に特異的に結合する抗体」又は「抗原特異的抗体」という用語と、互換可能に使用される。解離定数は標準的な手順を用いて測定することができる。
本明細書で使用されるとき、「ＩＬ−１７Ａ生物活性」又は「ＩＬ−１７Ａ活性化」という用語は、ＩＬ−１７Ａ受容体へのＩＬ−１７Ａ結合の結果として生じる任意の活性を指す。例示のＩＬ−１７Ａ生物活性は、ＩＬ−６若しくはＩＬ−８の増加した分泌、ＮＦ−κＢ活性化、又はＩＬ−１７Ａ受容体への結合時のＥＲＫ１、ＥＲＫ２、及びｐ３８等の下流キナーゼの調節をもたらす。サイトカイン及びケモカインの、細胞、組織からの、若しくは循環中の放出、ＮＦ−κＢ活性化、又はキナーゼリン酸化事象は、周知の方法、例えば、免疫学的アッセイ、免疫ブロット法、又はレポーター遺伝子系を使用して測定することができる（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３：８１１〜２１、１９９５、Ａｗａｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：５３３７〜４４，１９９９）。
「ベクター」という用語は、生体系内で複製されることができる、又はかかる系の間で移動可能である、ポリヌクレオチドを意味する。ベクターポリヌクレオチドは典型的に、生体系においてこれらのポリヌクレオチドの複製又は維持を促進するように機能する複製起点、ポリアデニル化信号、又は選択マーカー等の因子を含有する。このような生体系の例としては、細胞、ウイルス、動物、植物、及びベクターを複製することのできる生物学的構成成分を利用して再構成された生体系を挙げることができる。ベクターを含むポリヌクレオチドは、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ分子又はこれらのハイブリッドであってもよい。
「発現ベクター」という用語は、生体系又は再構成された生体系において、その発現ベクター中に存在するポリヌクレオチド配列によってコードされたポリペプチドの翻訳を命令するために利用することができるベクターを意味する。
用語「ポリヌクレオチド」は、糖−リン酸骨格鎖又は他の等価な共有結合化学によって共有結合されたヌクレオチド鎖を含む分子を意味する。二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ及びＲＮＡが、ポリヌクレオチドの典型的な例である。
「ポリペプチド」又は「タンパク質」という用語は、ペプチド結合によって連結されてポリペプチドを形成する少なくとも２つのアミノ酸残基を含む分子を意味する。５０個のアミノ酸未満の小さなポリペプチドは「ペプチド」と呼ばれる場合がある。
本明細書では以下のようにアミノ酸の慣習的な１文字及び３文字の略号を用いる。
物質の組成物
本発明はＩＬ−１７Ａの生物活性を阻害することが可能なＩＬ−１７Ａ抗体拮抗物質及びかかる抗体の使用法を提供する。かかる抗体によってＩＬ−１７Ａ活性化が阻害され得る例示の機序としては、ＩＬ−１７Ａのホモ若しくはヘテロ二量化の生体外で、生体内で、若しくはその場での阻害、及びＩＬ−１７Ａの、ＩＬ−１７Ａ受容体への結合の遮断、受容体二量化の阻害、下流シグナル伝達経路のキナーゼ活性の阻害、又はＩＬ−１７Ａ ｍＲＮＡ転写の阻害が挙げられる。他の機序によってＩＬ−１７Ａの活性を阻害することが可能な他の抗体拮抗物質もまた、本発明の異なる態様及び実施形態の範囲に含まれるものである。これらの拮抗物質は、研究用試薬、診断用試薬及び治療薬として有用である。
本発明は、ヒト免疫グロブリンの遺伝子ライブラリーから誘導される抗原結合部位を提供する。抗原結合部位を担持するための構造は、概して、抗体重鎖若しくは軽鎖又はそれらの部分である。
本発明は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はそのフラグメントを提供し、該抗体は、表１ａに示されるように、重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）アミノ酸配列並びに軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）アミノ酸配列を含む。
ある種の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、配列番号２３、３５、及び５２に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、配列番号３５のＨＣＤＲ２は更に、式（Ｉ）：
Ｘａａ1−Ｉ−Ｉ−Ｐ−Ｗ−Ｆ−Ｇ−Ｘａａ2−Ｔ−Ｘａａ3−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ、
（Ｉ）に示すように記載され、式中、
Ｘａａ1は、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、又はＴｙｒであり得、
Ｘａａ2は、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒであり得、
Ｘａａ3は、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、又はＡｓｐであり得る。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、配列番号２、５、及び１１に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、配列番号１１のＬＣＤＲ３は更に、式（ＩＩ）：
Ｘａａ4−Ｑ−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10、
（ＩＩ）に示すように記載され、式中、
Ｘａａ4は、Ｈｉｓ又はＧｌｎであり得、
Ｘａａ5は、Ｐｈｅ又はＧｌｙであり得、
Ｘａａ6は、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、又はＡｓｎであり得、
Ｘａａ7は、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒであり得、
Ｘａａ8は、Ｐｒｏ又はＡｒｇであり得、
Ｘａａ9は、Ｓｅｒ又はＰｒｏであり得、
Ｘａａ10は、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、又はＬｅｕであり得る。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、結合ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、配列番号２、５、及び１７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、配列番号１７のＬＣＤＲ３は更に、式（ＩＩＩ）：
Ｘａａ11−Ｑ−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ｘａａ18−Ｔ、
（ＩＩＩ）に示すように記載され、
式中、
Ｘａａ11は、Ｇｌｎ又はＴｈｒであり得、
Ｘａａ12は、Ｓｅｒ又はＴｙｒであり得、
Ｘａａ13は、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、又はＴｙｒであり得、
Ｘａａ14は、Ｈｉｓ又はＳｅｒであり得、
Ｘａａ15は、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、又はＳｅｒであり得、
Ｘａａ16は、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、又はＳｅｒであり得、
Ｘａａ17は、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、又はＬｅｕであり得、
Ｘａａ18は、Ａｌａ、Ｌｅｕ、又はＡｓｐであり得る。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、配列番号２４、３６、及び５７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、配列番号５７のＨＣＤＲ３は更に、式（ＩＶ）：
Ｅ−Ｖ−Ｄ−Ｓ−Ｘａａ19−Ｙ−Ｙ−Ｓ−Ｙ−Ｆ−Ｄ−Ｉ、
（ＩＶ）に示すように記載され、
式中、
Ｘａａ19は、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、又はＴｈｒである。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、配列番号３、６、及び２２に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、配列番号２２のＬＣＤＲ３は更に、式（Ｖ）：
Ｇ−Ｓ−Ｙ−Ｄ−Ｆ−Ｆ−Ｌ−Ｇ−Ｘａａ20−Ｉ−Ｖ、
（Ｖ）に示すように記載され、
式中、
Ｘａａ20は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒである。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、配列番号２５、４６、及び６１に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、配列番号４６のＨＣＤＲ２は更に、式（ＶＩ）：
Ｘａａ21−Ｉ−Ｘａａ22−Ｘａａ23−Ｘａａ24−Ｘａａ25−Ｘａａ26−Ｘａａ27−Ｘａａ28−Ｘａａ29−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ、
（ＶＩ）に示すように記載され、
式中、
Ｘａａ21は、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、又はＶａｌであり得、
Ｘａａ22は、Ａｓｎ又はＳｅｒであり得、
Ｘａａ23は、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、又はＨｉｓであり得、
Ｘａａ24は、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり得、
Ｘａａ25は、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり得、
Ｘａａ26は、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、又はＡｓｐであり得、
Ｘａａ27は、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、又はＰｈｅであり得、
Ｘａａ28は、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、又はＩｌｅであり得、
Ｘａａ29は、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、又はＡｓｎであり得、
配列番号６１のＨＣＤＲ３は、式（ＶＩＩ）：
Ｑ−Ｌ−Ｘａａ30−Ｌ−Ｄ−Ｖ、
、（ＶＩＩ）に示すように記載され、
式中、
Ｘａａ30は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、又はＴｈｒであり得る。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、配列番号２５、５１、及び５８に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含み、配列番号５１のＨＣＤＲ２は更に、式（ＶＩＩＩ）：
Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｘａａ31−Ｘａａ32−Ｘａａ33−Ｘａａ34−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｘａａ35−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ、
（ＶＩＩＩ）に示すように記載され、
式中、
Ｘａａ31は、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、又はＨｉｓであり得、
Ｘａａ32は、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、又はＡｒｇであり得、
Ｘａａ33は、Ｇｌｙ又はＡｓｐであり得、
Ｘａａ34は、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、又はＡｓｎであり得、
Ｘａａ35は、Ａｓｐ又はＧｌｙであり得る。
その抗原結合部位アミノ酸配列が表１ａに示される配列（配列番号１〜６１）と実質的に同一である抗体は、本発明の範囲内に包含される。典型的に、これは、類似した電荷又は疎水性若しくは立体化学的性質を有するアミノ酸との、１つ以上のアミノ酸置換を伴い、抗体特性、例えば、安定性又は親和性を改善するようにされる。例えば、保存的置換は、その位置のアミノ酸残基の極性又は電荷にほとんどあるいは全く影響しないように、天然アミノ酸残基の非天然残基との置換を伴ってもよい。更に、アラニン・スキャニング変異導入法について以前に記載されているように（ＭａｃＬｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５〜６７，１９９８、Ｓａｓａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１〜２４，１９９８）、ポリペプチド内の任意の内因性の残基をアラニンで置換することもできる。保存的な置換は、かかる修飾が行われた分子と類似した機能的及び化学的性質を有する分子をもたらす。分子の機能的及び／又は化学的特性における非保存的置換は、（１）置換領域における分子骨格鎖の構造を、例えばシート若しくはヘリックス立体配座として維持する、（２）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性を維持する、又は（３）分子のサイズを維持する、効果において、有意に異なるアミノ酸配列中の置換を選択することによって実現することができる。当業者であれば、所望のアミノ酸置換（保存的又は非保存的であるかによらず）を、かかる置換が望ましい時点で決定することができる。例えば、アミノ酸置換を使用して、親和性に影響を及ぼす残基、又は凝集等の望ましくない特性を付与する残基等の、抗体の機能に重要な残基を特定することができる。例示のアミノ酸置換は、表１ｂ、及び図１に示される。
抗原結合部位とは対照的に、フレームワーク領域における置換も、それらが抗体の特性に悪影響を及ぼさない限りは行われてもよい。フレームワーク置換は、抗体親和性又は安定性を改善するために、例えば、バーニアゾーン残基において行うことができる（米国特許第６，６４９，０５５号）。置換はまた、潜在的な免疫原性を低減するために、相同のヒト生殖細胞系列遺伝子配列と比較したとき配列において異なる、抗体中のフレームワーク位置においても行うことができる。これらの修飾は、例えば、ｐＩＸライブラリー等の、ｄｅ ｎｏｖｏ抗体ライブラリーに由来する抗体に対して行うことができる。
保存的アミノ酸置換はまた、生物学的系における合成によってよりはむしろ、化学的ペプチド合成によって典型的に組み込まれる、非天然産のアミノ酸残基も包含する。アミノ酸置換は、例えば、ＰＣＲ突然変異生成（米国特許第４，６８３，１９５号）によって行うことができる。変異型のライブラリーは、周知の方法を使用して、例えば、無作為（ＮＮＫ）又は非無作為コドン、例えば、１１個のアミノ酸（ＡＣＤＥＧＫＮＲＳＹＷ）をコードするＤＶＫコドンを使用して、及び実施例１に示されるように、所望の特性を有するライブラリー又は変異型をスクリーニングして、生成することができる。図１は、抗体特性を改善するために、ＬＣＤＲ３、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３領域内の５つの親ＩＬ−１７Ａ抗体拮抗物質に対して行われた置換を示す。親和性又は安定性等の、改善された特性は、周知の方法によって測定することができる。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、ある種のＶＨ及びＶＬ配列を含み、また表２に示される各々単離されたＶＨ及びＶＬも提供する。
実施例に例証される実施形態は、１つは重鎖から及び１つは軽鎖からの、可変領域の対、完全長抗体鎖の対、又はＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域の対を含むが、当事者であれば、代替的な実施形態が、単一の重鎖可変領域若しくは単一の軽鎖可変領域、単一の完全長抗体鎖、又は重鎖若しくは軽鎖のいずれかの１つの抗体鎖からのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を含んでもよいことを認識するであろう。単一の可変領域、完全長抗体鎖、又は１つの鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域を使用して、別の鎖中の対応するドメインをスクリーニングすることができ、これらの２つの鎖は、ＩＬ−１７Ａに特異的に結合する抗体を形成することができる。スクリーニングは、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ９２／０１０４７号で開示されている階層的二重コンビナトリアルアプローチを使用する、ファージディスプレイスクリーニング法によって実現されてもよい。このアプローチでは、Ｈ又はＬ鎖のいずれかのクローンを含む個別のコロニーを用いて他方の鎖（Ｌ又はＨ）をコードするクローンの完全なライブラリに感染させ、得られた２鎖特異的抗原結合ドメインを上述のようなファージディスプレイ法に基づいて選択する。
他の実施形態では、本発明は、表２に示されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を有するＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供する。
他の実施形態では、本発明は、表２に示されるＶＨ及びＶＬアミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供する。
別の態様では、本発明は、表２に示されるある種の重鎖及び軽鎖アミノ酸配列を有する単離された抗体又はフラグメントを提供する。抗体残基を連続して番号付けすることに加えて、ポリペプチドをコードする抗体鎖は、Ｋａｂａｔの又はＣｈｏｔｈｉａの、番号付けに基づいて番号付けすることができる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１〜９１７，１９８７）。選択された抗体鎖のための連続したＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｉａ番号付けの間の対応の例は、図３に示される。灰色で強調表示された位置は、抗体ＣＤＲ領域を示す。
他の実施形態では、本発明は、ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、抗体は、Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｓ５１、Ｔ５３、Ｆ５６、Ｙ５８、Ｑ９５、Ｌ９６、及びＴ９７から選択される重鎖可変領域パラトープ、並びにＣｈｏｔｈｉａ残基Ｙ３２、Ｄ５０、Ｙ９１、Ｆ９３、及びＦ９４から選択される軽鎖可変領域パラトープを含む。重鎖パラトープ及び軽鎖パラトープＣｈｏｔｈｉａ残基は、配列番号８６の重鎖残基Ｓ５２、Ｔ５４、Ｆ５７、Ｙ５９、Ｑ９９、Ｌ１００、及びＴ１０１、並びに配列番号７９の軽鎖残基Ｙ３１、Ｄ４９、Ｙ９０、Ｆ９２、及びＦ９３に相当する。
他の実施形態では、本発明は、配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１７Ａの残基と相互作用する重鎖可変領域パラトープアミノ酸残基を含み、
ヒトＩＬ−１７ＡのＲ５５又はＥ５７と相互作用する第１のスレオニン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＲ５５又はＥ５７と相互作用するグルタミン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＥ５７と相互作用するリジン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＰ５９、Ｅ６０、又はＲ１０１と相互作用するチロシン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＥ６０、Ｒ１０１、Ｅ１０２、又はＰ１０３と相互作用するフェニルアラニン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＥ６０と相互作用するセリン残基、及び
ヒトＩＬ−１７ＡのＥ６０と相互作用する第２のスレオニン残基を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供する。
他の実施形態では、本発明は、配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１７Ａの残基と相互作用する軽鎖可変領域パラトープアミノ酸残基を含み、
ヒトＩＬ−１７ＡのＬ２６と相互作用する第１のフェニルアラニン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＲ５５又はＷ６７と相互作用するアスパラギン酸残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＰ５９、Ｓ６４、又はＲ１０１と相互作用する第１のチロシン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＰ５９、Ｅ６０、Ｒ６１、Ｙ６２、Ｒ１０１、又はＦ１１０と相互作用する第２のフェニルアラニン残基、及び
ヒトＩＬ−１７ＡのＶ６５と相互作用する第２のチロシン残基を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供する。
別の実施形態では、本発明は、配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１７Ａの残基と相互作用する重鎖可変領域パラトープアミノ酸残基及び軽鎖可変領域パラトープアミノ酸残基を含み、
ヒトＩＬ−１７ＡのＲ１０１と相互作用する重鎖可変領域におけるチロシン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＲ１０１と相互作用する重鎖可変領域におけるフェニルアラニン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＹ６２及びＲ１０１と相互作用する軽鎖可変領域における第１のフェニルアラニン残基、
ヒトＩＬ−１７ＡのＬ２６及びＦ１１０と相互作用する軽鎖可変領域における第２のフェニルアラニン残基、及び
ヒトＩＬ−１７ＡのＲ１０１と相互作用する軽鎖可変領域におけるチロシン残基を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供する。
別の実施形態では、本発明は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントを提供し、該抗体は、
Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｆ５６及びＹ５８から選択される重鎖可変領域パラトープ、並びに
Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｙ９１、Ｆ９３、及びＦ９４から選択される軽鎖可変領域パラトープを含む。
重鎖パラトープＣｈｏｔｈｉａ残基Ｆ５６及びＹ５８並びに軽鎖パラトープＣｈｏｔｈｉａ残基Ｙ９１、Ｆ９２、及びＦ９４は、ＩＬ−１７Ａ残基Ｌ２６、Ｙ６２、Ｒ１０１、及びＦ１１０と直接接触している残基である。これらのＩＬ−１７Ａ残基は、Ｆａｂ６４６８エピトープ及びＰ２ポケット空洞の両方の部分である（下記を参照されたい）。特定の理論に決して束縛されるものではないが、これらの選択された残基におけるＦａｂ６４６８とＩＬ−１７Ａとの間の相互作用は、抗体がＩＬ−１７Ａ活性を遮断するために十分であることが考えられる。
いかなる非ヒト配列も欠く完全な型（human）ｍＡｂは、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：５７〜８６，２０００、及びＫｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．２５４：６７〜８４ ２００１に参照される技術によって、ファージディスプレイライブラリーから調製及び最適化することができる。例示の方法では、本発明の抗体は、バクテリオファージｐＩＸコートタンパク質を有する融合タンパク質として、抗体重鎖及び軽鎖可変領域を発現するライブラリーから単離される。抗体ライブラリーは、ヒトＩＬ−１７ｍｕｔ６（配列番号１０５）への結合についてスクリーニングされ、得られた陽性クローンは更に特徴付けられ、Ｆａｂはクローンライセートから単離され、完全長ＩｇＧｓとして発現される。例示の抗体ライブラリー及びスクリーニング方法は、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９７：３８５〜９６，２０１０、ＰＣＴ特許出願第ＷＯ０９／０８５４６２号，及び米国第１２／５４６８５０号、米国特許第５，２２３，４０９号、第５，９６９，１０８号、及び第５，８８５，７９３号）に記載されている。
結果として得られたｍＡｂは、本明細書に例示されるように、それらのフレームワーク領域において、ある種のフレームワーク残基をマッチングヒト生殖細胞系列に存在する残基に変更するように更に修飾することができる。
特異的なＩＬ−１７Ａエピトープに結合する本発明の抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を発現するヒト化マウス（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６〜９，１９９４、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４：８４５〜５１，１９９６、Ｍｅｎｄｅｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６〜５６，１９９７、米国特許第５，７７０，４２９号、第７，０４１，８７０号、及び第５，９３９，５９８号）又はＢａｌｂ／ｃマウスに、エピトープをコードするペプチド、例えば、ペプチド56ＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥ68（配列番号１５７）又は100ＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦｒｌＥＫＩＬ116（配列番号１５８）で免疫付与することによって、及びＫｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５〜９７のハイブリドーマ法を使用して作製することができる。結果として得られた抗体は、標準の方法を使用して、エピトープへのそれらの結合について試験される。特定されたｍＡｂは更に、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），８６：１００２９〜３２，１９８９及びＨｏｄｇｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：４２１，１９９１で開示されている技術等の技術によって、変化したフレームワーク支持残基を組み込むことによって結合親和性を保存するように修飾することができる。
ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する、ある種のパラトープ残基（例えば、表１０に記載されるコアパラトープ残基）を有する単離された抗体は、例えば、パラトープ残基を好適な足場にグラグトすること、操作された足場を完全抗体に組み立てること、結果として得られた抗体を発現させること、及び抗体をＩＬ−１７Ａへの結合について又はＩＬ−１７Ａ生物活性に及ぼす効果について試験することによって、作製することができる。例示の足場は、ヒト生殖細胞系列遺伝子によりコードされたヒト抗体可変領域のアミノ酸配列である。足場は、例えば、全体的な配列相同性、パラトープ残基の間の同一性％、又は足場とｍＡｂ６７８５等の例示の抗体との間の正準構造クラス同一性に基づいて選択することができる。ヒト抗体生殖細胞系列遺伝子は、例えば、ＴｏｍＬｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ２２７：７７６〜７９８、及びＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ＿：／／＿ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）で開示されている。コンセンサスヒトフレームワーク領域はまた、例えば、米国特許第６，０５４，２９７号に記載されているように使用することができる。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ１０／０４５３４０号に記載されている方法に従って、好適な足場の選択を行うことができる。
パラトープ残基をグラフトする足場として使用可能な例示のヒト生殖細胞系列遺伝子は、Ｖλ３、Ｖｈ３、Ｊλ、及びＪｈフレームワークによってコードされた遺伝子である。例示のＶκ３遺伝子には、ＩＧＬＶ３−１、ＩＧＬＶ３−９、ＩＧＬＶ３−１０、ＩＧＬＶ３−１２、ＩＧＬＶ３−１６、ＩＧＬＶ３−１９、ＩＧＬＶ３−２１、ＩＧＬＶ３−２２、ＩＧＬＶ３−２５、ＩＧＬＶ３−２７、及びＩＧＬＶ３−３２（ＩＭＧＴ命名法、*０１対立遺伝子）、（それぞれ配列番号１１７〜１２７）がある。例示のＪλ遺伝子には、ＩＧＬＪ１、ＩＧＬＪ２、ＩＧＬＪ３、ＩＧＬＪ４、ＩＧＬＪ５、ＩＧＬＪ６、及びＩＧＬＪ７（それぞれ配列番号１２８〜１３４）がある。例示のＶｈ３遺伝子には、ＩＧＨＶ３−７、ＩＧＨＶ３−９、ＩＧＨＶ３−１１、ＩＧＨＶ３−１６、ＩＧＨＶ３−１９、ＩＧＨＶ３−２０、ＩＧＨＶ３−２１、ＩＧＨＶ３−２３、ＩＧＨＶ３−３０、ＩＧＨＶ３−３０*０３、ＩＧＨＶ３−３３、ＩＧＨＶ３−４５、ＩＧＨＶ３−４８、ＩＧＨＶ３−６４、及びＩＧＨＶ３−７４（ＩＭＧＴ命名法、異なる対立遺伝子が指定される場合を除いて*０１対立遺伝子）（それぞれ配列番号１３５〜１５０）がある。例示のＪｈ遺伝子には、ＩＧＨＪ１、ＩＧＨＪ２、ＩＧＨＪ３、ＩＧＨＪ４、ＩＧＨＪ５、及びＩＧＨＪ６（それぞれ配列番号１５１〜１５６）がある。この生殖細胞系列Ｊ領域は、ＦＲ４配列を選択するために、その全体又は一部を使用される。例えば、ｍＡｂ６７８５軽鎖パラトープ残基は、ＩＧＬＶ３−１とＩＧＬＪ２配列との間の単一のアミノ酸残基、例えば、メチオニンの挿入により、ＩＧＬＪ２（配列番号１２９）によってコードされたＪ領域配列に結合される、ＩＧＬＶ３−１（配列番号１１７）によってコードされたＶλ３タンパク質フレームワーク中にグラフトすることができる。ＩＧＬＶ３−１によってコードされたＶλ３タンパク質フレームワークは、更なる置換、例えば、配列番号１１７の３３位（「ＡＣＷ」）におけるシステイン残基の、例えば、アスパラギンとの置換、及び配列番号１１７の残基１〜３の、ＩＧＬＶ１ファミリーの「ＱＳＶ」等の他のラムダ鎖ファミリーに共通のアミノ末端配列との置換（「ＳＹＥ」）を含んでもよい。他の例示の機能的Ｖλ３及びＪλ遺伝子からの配列は、ＣＤＲ３領域の長さが１１アミノ酸になるように、Ｖλ３遺伝子によってコードされたカルボキシ末端と、Ｊλ遺伝子によってコードされたアミノ末端と間の０、１、又は２個のアミノ酸残基の挿入により、ｍＡｂ６７８５軽鎖パラトープ残基をグラグトするために使用することができる。例えば、メチオニン及びイソロイシンは、ＩＧＬＶ３−２２（配列番号１２４）とＩＧＬＪ２（配列番号１２９）との間に挿入することができる。図２Ａは、グラフトに使用可能な例示の軽鎖足場の整列を示す。ｍＡｂ６７８５重鎖パラトープ残基は、ＩＧＨＶ３−２３（配列番号１４２）によってコードされた例えば、Ｖｈ３フレームワーク上にグラフトすることができ、それはＶ領域とＪ領域との間のＨＣＤＲ３を構成する、約５〜７つの残基、例えば、６つの残基の挿入により、ＩＧＨＪ１（配列番号１５１）の領域ＦＲ４配列（１１Ｃ−末端アミノ酸、例えば「ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ」）に結合される。挿入されたＨＣＤＲ３約５〜７つの残基には、グルタミン、ロイシン、及びスレオニン、例えば、ｍＡｂ６７８５Ｖｈからのパラトープ残基のうちの３つの挿入が含まれる（表１０）。他の例示の機能的Ｖｈ３及びＪｈ遺伝子からの配列は、ｍＡｂ６７８５重鎖パラトープ残基をグラグトするために使用することができる。場合によっては、Ｖｈ３遺伝子からの１個のＣ−末端アミノ酸は、ＦＲ３配列のみが足場に含まれるように、ＨＣＤＲ３を構成する約５〜７つの残基の挿入の前に欠失され得る。１７個の残基（ＩＧＨＶ３−２３（配列番号１４２）の残基５０〜６６）のＣＤＲ２をコードする他のＶｈ３遺伝子からの配列を使用することもでき、他のＪｈ遺伝子のＦＲ４配列は、ＩＧＪＨ１の代わりに置換することができる。
ヒトＩＬ−１７Ａへの特異的結合の及び結果として得られた抗体の生物活性は、標準の方法を使用して評価することができる。ｍＡｂ６７８５軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の、例示のＶｈ３、Ｖλ３、Ｊλ、又はＪｈ遺伝子との整列は、図２Ａ及び２Ｂに示される。代替的に、表１０に記載されるように、拡張されたパラトープの残基ｍＡｂ６７８５をコアパラトープ残基の代わりに使用することができる。パラトープグラフトされた操作された抗体は更に、バーニアゾーン残基（米国特許第６，６３９，０５５号）又は親和性決定残基（米国特許出願第２０１０／０２６１６２０号、Ｃｏｂａｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．３７８：６２２〜３３，２００８）の置換によって、抗体特性、例えば親和性を改善するように修飾することができる。パラトープグラフトされた抗体がＩＬ−１７Ａへの結合を保持する限り、パラトープグラフトされた抗体におけるフレームワークアミノ酸配列は、ｍＡｂ６７８５フレームワーク配列と７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であり得る。例示の生殖細胞系列遺伝子フレームワークの対立遺伝子の変異型をＶ及びＪ領域タンパク質配列の代わりに使用することができる。対立遺伝子の変異型の配列は、周知であり、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ＿：／／＿ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）で得ることができる。
標準的な方法を用いて、パラトープ残基に追加して抗原結合部位由来の配列をグラフトすることもできる。例えば、完全なＨＣＤＲ３又はＬＣＤＲ３をグラフトしてもよい。
本発明の別の実施形態は、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合し、ある種のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含むモノクローナル抗体と、ヒトＩＬ−１７Ａ結合をめぐって競合する、単離された抗体又はフラグメントである。本発明の例示のモノクローナル抗体は、配列番号２５、４３、及び６０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列並びに配列番号３、６、及び１８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体である。
ＩＬ−１７Ａへの特異的結合との間の競合は、周知の方法を使用して生体外でアッセイすることができる。例えば、非標識抗体の存在下でのＭＳＤ Ｓｕｌｆｏ−Ｔａｇ（登録商標）ＮＨＳ−エステル標識抗体のＩＬ−１７Ａへの結合を、ＥＬＩＳＡによって評価することができる。
本発明の別の実施形態は、単離された抗体又は抗体又はそのフラグメントであり、該抗体は、アミノ酸残基５６〜６８（配列番号１５７）及び１００〜１１６（配列番号１５８）において、又は残基Ｌ２６、Ｒ５５、Ｅ５７、Ｐ５９、Ｅ６０、Ｒ６１、Ｙ６２、Ｓ６４、Ｖ６５、Ｗ６７、Ｒ１０１、Ｅ１０２、Ｐ１０３、及びＦ１１０において、配列番号１０５に示される配列を有するヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する。
幾つかの周知の方法を用いて本発明の抗体の結合エピトープを決定することができる。例えば、両方の個別の構成成分の構造が知られている場合、インシリコでタンパク質−タンパク質のドッキングを行って、適合する相互作用部位を特定することができる。抗原抗体複合体において水素−重水素（Ｈ／Ｄ）交換を行って、抗体が結合し得る抗原の領域をマッピングすることができる。抗原のセグメント及び点突然変異生成を使用して、抗体の結合に重要なアミノ酸の位置を特定することができる。抗体−抗原複合体の共結晶構造を使用して、エピトープ及びパラトープに寄与する残基を特定することができる。
前述の抗ＩＬ−１７Ａ抗体は、本発明に記載されるＦａｂ６４６８のためのエピトープと異なる、ＩＬ−１７Ａ上のエピトープに結合する。抗体結合ヒトＩＬ−１７Ａ（配列番号１０５）残基７４〜８５、４６〜５３、７１〜８７、８０〜８６、１１〜１８、２９〜４１、又は５４〜６２が記載されている（それぞれＰＣＴ公開第ＷＯ０８／０２１１５６号、第ＷＯ０７／１０６７６９号、第ＷＯ０７／１４９０３２号、第ＷＯ０７／０７０７５０号、米国出願第ＵＳ２００８／０９５７７５号）。立体配座エピトープは、ＰＣＴ公開第ＷＯ０９／１３０４５９号、及びＧｅｒｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ：３９４：９０１〜２１，２００９に記載されている。
本発明の別の実施形態は、単離された抗体又はそのフラグメントであり、ここで抗体は、ＩＬ−１７Ａ上のＰ２ポケット空洞に特異的に結合し、このＰ２ポケット空洞は、配列番号１０５のアミノ酸残基Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２からなる。
抗ＩＬ−１７Ａ Ｆａｂ６４６８とのＩＬ−１７Ａホモ二量体の共結晶構造は、Ｌ−１７ＲＡ結合に関与する可能性が高い、ＩＬ−１７Ａホモ二量体の表面上の疎水性Ｐ２ポケット空洞を特定した（実施例を参照されたい）。本明細書で使用されるとき、「Ｐ２ポケット空洞」は、ＩＬ−１７Ａホモ二量体上の第三級疎水性構造的空洞を指し、Ｐ２ポケットにおける表面露出残基は、単量体Ａ上のＶ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２、並びに単量体Ｂ上のＶ２２、Ｖ２４、及びＬ１１２であり、逆もまた同様である。ＩＬ−１７Ａ、例えば、Ｆａｂ６４６８に反応する、本発明の選択された抗体は、Ｐ２ポケット空洞残基Ｌ２６、Ｙ６２、Ｒ１０１、及びＦ１１０と直接接触し、これらの残基もまたＦａｂ６４６８エピトープの部分である。特定の理論に決して束縛されるものではないが、選択されたＩＬ−１７ＡＰ２ポケット空洞残基に結合する本発明の抗体は、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７ＲＡとの間の相互作用を遮断する。共結晶構造に基づき、Ｆａｂ６４６８の軽鎖（配列番号７９）中の残基９３及び９４におけるフェニルアラニンモチーフ（ＦＦ）は、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７ＲＡ相互作用を遮断し、したがってＰ２ポケット空洞遮断剤である。新規ペプチド又は小分子等の他のＰ２ポケット空洞遮断剤拮抗物質もまた、本発明の範囲内である。これらは、ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８共構造に基づいてモデル化され、ＩＬ−１７Ａに結合するＦａｂ６４６８を置き換えるそれらの能力についてスクリーニングされ得る。例えば、ペプチド阻害剤は、ＦＦモチーフを組み込んだ無作為ペプチドライブラリー（例えば、ＸＸＸＸＦＦＸＸのライブラリー、Ｘは任意のアミノ酸を示し、Ｆはフェニルアラニンである）からスクリーニングされ、例えば、ｐＩＩＩ、ｐＶＩＩ、又はｐＩＸコートタンパク質との融合として、バクテリオファージ上に表示され得（米国第５，２２３，４０９号、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：６０２５〜３０，１９９９，Ｔｏｒｎｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．３６０：３９〜４６，２０１０、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９７：３８５〜９６，２０１０）、その後、それらの、ＩＬ−１７Ａに結合するＦａｂ６４６８の阻害及びＩＬ−１７Ａ活性の阻害について試験され得る。
小分子は、合成若しくは天然の組成物、又はそれらの任意の組み合わせのライブラリーを使用してスクリーニングされ得、結果として得られた第１の陽性ヒットは、薬剤の構造的類似体を産生するように容易に修飾され得る。ペプチドライブラリー及びｐＩＸ融合を作製する、並びに結果として得られたライブラリーをスクリーニングする方法は、周知である。
ヒトＩＬ−１７Ａの、ＩＬ−１７ＲＡとの相互作用を阻害する方法の、本発明の別の実施形態は、
ヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＲＡを提供する工程と、
ヒトＩＬ−１７Ａを、Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基において、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する拮抗物質と接触させる工程と、を含む。
本発明の別の実施形態は、ヒトＩＬ−１７Ａ生物活性を阻害する方法であり、
ヒトＩＬ１７−Ａ及びＩＬ−１７ＲＡを提供する工程と、
ヒトＩＬ−１７Ａを、Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２からなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基において、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する拮抗物質と接触させる工程と、を含む。
ヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＲＡは、単離されたタンパク質又は融合タンパク質として提供され得る。ヒトＩＬ−１７Ａホモ二量体は、ＩＬ−２、ＩＬ−２３及びＩＬ−１βの存在下での２つの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８刺激によるナイーブＣＤ４Ｔ細胞の生体外刺激によって調製された、活性化Ｔｈ１７細胞の培地から精製され得る。ＩＬ−１７ＲＡは、細胞若しくは細胞膜に関連し得、天然若しくは過剰発現され得るか、又はＩＬ−１７ＲＡのフラグメント、例えば、受容体の細胞外ドメインであり得る。ＩＬ−１７ＲＡは、ヒトＩＬ−１７ＲＡ、又はマウス、ラット、若しくはサル等の他の種からのＩＬ−１７ＲＡであり得る。ヒトＩＬ−１７Ａ残基Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２に結合する拮抗物質は、突然変異生成研究によって又は共結晶構造によって、拮抗物質の、ＩＬ−１７Ａに結合するＦａｂ６４６８を置き換える能力によって特定することができる。ヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＲＡの融合タンパク質は、周知の方法によって作製することができる。例示の融合タンパク質は、免疫グロブリンＦｃドメインに融合された可溶性ＩＬ−１７ＲＡである。
本発明の別の態様は、本発明の抗体重鎖若しくは抗体軽鎖又はそれらのフラグメント、又はそれらの補体うちのいずれかをコードする、単離されたポリヌクレオチドである。ある種のポリヌクレオチドの例が本明細書に開示されるが、遺伝コードの縮重又は所定の発現系におけるコドンの選択性を考慮すると、本発明の抗体拮抗物質をコードする他のポリヌクレオチドも本発明の範囲内に含まれる。例示のポリヌクレオチドは、配列番号１０１、１０２、１０３、及び１０４に示される。
例示の抗体拮抗物質は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、又はＩｇＭアイソタイプの抗体であり得る。更にかかる抗体拮抗物質は、グリコシル化、異性化、脱グリコシル化、又はポリエチレングリコール部分の付加（ペギレーション）及び脂質化等の非天然の共有結合修飾等の反応によって翻訳後修飾され得る。かかる修飾は、生体内あるいは生体外で行われてもよい。例えば、本発明の抗体をポリエチレングリコールと結合させて、薬物動態的なプロファイルを改善することができる。共役は当業者に既知の方法によって行うことができる。治療用抗体のＰＥＧとの共役によって、機能を低下させずに薬力学的動態が向上することが示されている。Ｄｅｃｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，ｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８７：３８２〜９０，２０００、Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ １５：４０９〜１８，２００４、Ｌｅｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ １６：１０６〜１９，２００１、及びＹａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１６：７６１〜７０，２００３を参照されたい。
本発明の抗体の薬物動態的な特性は、当業者に既知の技術によるＦｃ修飾を通じて向上することができる。抗体の「Ｆｃ」は、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、種々のエフェクタ−機能を示す。抗体「Ｆｃ」は、周知の用語であり、抗体のパパイン開裂に基づいて記載される。抗体のＦｃは、補体活性化、Ｃ１ｑ結合、及びＦｃ受容体結合に基づいて、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性）及びＣＤＣ（補体依存性細胞傷害性）に直接関与する。かかる補体及びＦｃ受容体結合部位は、周知であり、例えば、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ｐ３３１、及びＰ３２９が含まれる（ＫａｂａｔのＥＵインデックスに従った番号付け）（Ｂｒｅｋｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２５４２〜７，１９９５、米国特許第５，６２４，８２１号、第７，５９７，８８９号、Ｃａｎｆｉｅｌｄ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３〜９１，１９９１）。例えば、ＩｇＧ１のヒンジ領域のＬｅｕ２３４／Ｌｅｕ２３５のＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａへの変異、又はＩｇＧ４のヒンジ領域のＰｈｅ２３５／Ｌｅｕ２３６のＰ２３５Ａ／Ｌ２３６Ａへの変異によって、ＦｃＲへの結合性が最小となり、補体依存性細胞傷害活性及びＡＤＣＣを介在する免疫グロブリンの能力が低減する。イソメラーゼの作用を介して重鎖間又は重鎖内のいずれかの生体内ジスルフィド結合を形成することができる（Ａａｌｂｅｒｓｅ ａｎｄ Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０５：９〜１９，２００２）、ＩｇＧ４重鎖のヒンジ領域内のＣｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（ＣＰＳＣ）モチーフにおけるＳｅｒからＰｒｏへの置換は、「ＩｇＧ１様挙動」をもたらし、すなわち、Ｐｒｏ置換された分子は、重鎖間ジスルフィド結合を形成することができない。ＣＰＳＣモチーフの位置は典型的に、成熟した重鎖の残基２２８に見出されるが、ＣＤＲの長さに応じて変化し得る。Ｌｅｕ２３４／Ｌｅｕ２３５残基を有する例示のＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１４に示されるアミノ酸配列を有し、残基Ｌ１１７及びＬ１１８は、成熟した重鎖におけるＬｅｕ２３４／Ｌｅｕ２３５残基に相当する。Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ（ＣＰＳＣ）モチーフ及びＬｅｕ２３４／Ｌｅｕ２３５残基を有する例示のＩｇＧ４ Ｆｃ領域は、配列番号１１５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＰＳＣモチーフは、残基１０６〜１０９に位置し、Ｌｅｕ２３４／Ｌｅｕ２３５残基は、１２２及び１２３位に位置する。
安定性、選択性、交差反応性、親和性、免疫原性、又は他の望ましい生物学的若しくは生物物理学的特性を改善するように修飾される、本発明の抗体又はそのフラグメントが発明の範囲内にある。抗体の安定性は、（１）内在的な安定性に影響を及ぼす個々のドメインのコアパッキング、（２）ＨＣとＬＣとのペアリングに影響を及ぼすタンパク質／タンパク質の界面相互作用、（３）極性及び荷電残基の埋め込み、（４）極性及び荷電残基のためのＨ結合ネットワーク、並びに（５）他の分子内及び分子間力の間の表面電荷及び極性残基の分布、を含む幾つかの因子によって影響を受ける。（Ｗｏｒｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３０５：９８９〜１０１０、２００１）。構造を不安定化させる可能性のある残基は、抗体の結晶構造に基づいて、あるいは場合によっては分子モデリングによって特定され得、抗体の安定性に及ぼすこれらの残基の効果を、特定された残基に突然変異を有する変異体を生成し、評価することによって試験することができる。抗体の安定性を高める方法の１つは、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）によって測定される熱転移中点（Ｔｍ）を高くすることである。広くは、タンパク質Ｔｍは、その安定性と相関し、溶液中のほどき及び変性、並びにタンパク質がほどける傾向に応じる分解プロセスに対する、その感受性と逆相関する（Ｒｅｍｍｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｐｈａｒｍ。１３：３６〜４６、２０００）。幾つかの研究は、ＤＳＣによる熱安定性として測定される製剤の物理的安定性及び他の方法によって測定される物理的安定性の、順位付けの間の相関を見出している（Ｇｕｐｔａ ｅｔ ａｌ．，ＡＡＰＳ ＰｈａｒｍＳｃｉ．５Ｅ８，２００３、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３：３０７６〜８９，２００４、Ｍａａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１４０：１５５〜６８，１９９６、Ｂｅｄｕ−Ａｄｄｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１：１３５３〜６１，２００４、Ｒｅｍｍｅｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，１５：２００〜８，１９９７）。製剤研究は、ＦａｂのＴｍが対応するｍＡｂの長期の物理的安定性と密接な関係があることを示唆している。フレームワーク又はＣＤＲ内のいずれかにおけるアミノ酸の差異は、Ｆａｂドメインの熱安定性に有意な影響を及ぼし得る（Ｙａｓｕｉ、ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３５３：１４３〜６，１９９４）。
本発明の抗体拮抗物質は、約１０-7、１０-8、１０-9、１０-10、１０-11又は１０-12Ｍ以下のＫdでＩＬ−１７Ａと結合することができる。抗体等の所定の分子のＩＬ−１７Ａに対する親和性は、任意の好適な方法を使用して実験的に決定することができる。かかる方法は、当業者に既知のＢｉａｃｏｒｅ又はＫｉｎＥｘＡ装置、ＥＬＩＳＡ又は競合的結合アッセイを利用し得る。
所望の親和性でヒトＩＬ−１７Ａに結合する抗体拮抗物質は、抗体親和性成熟を含む技術によって、変異型又はフラグメントのライブラリーから選択することができる。抗体拮抗物質は、任意の好適な方法を使用してＩＬ−１７Ａの生物活性の阻害に基づいて特定することができる。かかる方法では、周知の方法を使用した、本出願に記載されるようなレポーター遺伝子アッセイ又はサイトカイン産生を測定するアッセイを利用し得る。
本発明の別の実施形態は、少なくとも１つの本発明のポリヌクレオチドを含むベクターである。かかるベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクター、バキュロウイルス発現ベクター、トランスポゾンに基づいたベクター、又は任意の手段によって特定の生物又は遺伝子的バックグラウンドに本発明のポリヌクレオチドを導入するのに適した他の任意のベクターであってもよい。
本発明の別の実施形態は、配列番号６７〜７５及び８１〜８６に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖可変領域、又は配列番号６２〜６６及び７６〜８０に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖可変領域、又は配列番号９２〜１００に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖、又は配列番号８７〜９１に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖、を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド等の、本発明のポリヌクレオチドのいずれかを含む宿主細胞細胞である。かかる宿主細胞細胞は、真核細胞、細菌細胞、植物細胞又は古細菌細胞であってもよい。真核細胞の例としては、哺乳動物、昆虫、鳥類又は他の動物由来のものであり得る。哺乳動物真核細胞としては、ＳＰ２／０（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ培養Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ），Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ，ＣＲＬ−１５８１）、ＮＳ０（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ，Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ，ＵＫ，ＥＣＡＣＣ Ｎｏ．８５１１０５０３）、ＦＯ（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１６４６）、及びＡｇ６５３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８０）マウス細胞株等の、ハイブリドーマ又は骨髄腫細胞株等の不死化細胞株が挙げられる。例示のヒト骨髄腫細胞株には、Ｕ２６６（ＡＴＴＣ ＣＲＬ−ＴＩＢ−１９６）がある。他の有用な細胞株としては、ＣＨＯ−Ｋ１ＳＶ（Ｌｏｎｚａ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）、ＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣＣＲＬ−６１）、又はＤＧ４４等の、チャイニーズハムスターの卵巣（ＣＨＯ）細胞に由来するものが挙げられる。
本発明の別の実施形態は、本発明の宿主細胞細胞を培養する工程と、宿主細胞細胞によって産生された抗体を回収する工程とを含む、ＩＬ−１７Ａとの反応性を有する抗体を製造する方法である。抗体を製造して精製する方法は、当該技術分野で周知である。発現について、操作されたファミリー２、６ａ、６ｂ、１９ａ、及び１９ｂ重鎖配列は、ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡ（配列番号１０９）等のＮ末端リーダー配列を含み得る。リーダー配列を含む候補ｍＡｂ６７８５（ファミリー１９）及び成熟型（リーダー配列を含まない）の重鎖をコードする例示のヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１０１及び１０２に示される。同様に、発現について、本発明のファミリー２、６ａ、６ｂ抗体の軽鎖配列は、ＭＧＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号１１０）等のＮ末端リーダー配列を含み得、本発明のファミリー１９ａ及び１９ｂ抗体の軽鎖配列は、ＭＡＷＳＰＬＬＬＴＬＬＡＨＣＴＧＳＷＡ（配列番号１１６）等のＮ末端リーダー配列を含み得る。リーダー配列を有するコドン最適化されたｍＡｂ６７８５及び成熟型（リーダー配列を有さない）の軽鎖をコードする例示のヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号１０３及び１０４に示される。
本発明の別の実施形態は、本発明の抗体を産生するハイブリドーマ細胞株である。
治療の方法
本発明のＩＬ−１７Ａ拮抗物質、例えば、ＩＬ−１７Ａ抗体拮抗物質は、動物患者においてＩＬ−１７Ａの影響を低減することが所望される場合の任意の療法で利用され得る。ＩＬ−１７Ａは、体内で循環している可能性があり、あるいは望ましくない高レベルで体内の特定の部位、例えば、炎症の部位に局在して存在する可能性がある。特定の理論に決して束縛されるものではないが、本発明の拮抗物質は、ＩＬ−１７Ａのその受容体への結合、又はＩＬ−１７Ａのホモ若しくはヘテロ二量化を予防又は低減することによって、有益な療法を提供する。本発明の方法を用いて任意の分類に属する動物患者を治療することができる。かかる動物の例としては、ヒト、齧歯類、イヌ、ネコ、及び家畜等の哺乳動物が挙げられる。
本発明の抗体は、炎症性状態、アレルギー及びアレルギー性状態、過敏症反応、自己免疫疾患、重症感染症、並びに臓器又は組織移植拒絶症等の、ＩＬ−１７Ａ媒介型の状態の予防及び治療に有用であり得る。本発明の抗体はまた、かかる治療のための薬剤の調製においても有用であり、薬剤は、本明細書に定められる投薬量で投与するために調製される。例示のＩＬ−１７Ａ媒介型状態は、関節リウマチ（ＲＡ）、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、変形性関節症、骨粗鬆症、ブドウ膜炎、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症、及び肝硬変）、炎症性腸障害（例えば、クローン病、潰瘍性大腸炎、及び炎症性腸疾患）、ぜんそく（を含むアレルギー性ぜんそく）、アレルギー、ＣＯＰＤ、多発性硬化症、乾癬、全身性紅斑性狼瘡、糖尿病、並びに癌を含む、炎症性状態、免疫並びに増殖性障害である。抗ヒトＩＬ−１７Ａ療法で治療された患者におけるプラスの転帰は、関節リウマチ、乾癬、及び非感染性ブドウ膜炎で記載されている（Ｇｅｎｏｖｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ．６２：９２９〜３９，２０１０、Ｈｕｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２：５２ｒａ７２．，２０１０）。
炎症性肺状態は、炎症性状態の一例である。例示の炎症性肺状態には、ウイルス性、細菌性、真菌性、寄生生物、又はプリオン感染に関連する状態を含む感染誘発性肺状態、アレルゲン誘発性肺状態、石綿症、珪肺症、又はベリリウム中毒等の汚染物質誘発性肺状態、胃吸引誘発性肺状態、免疫調節異常、嚢胞性線維症等の遺伝性素因による炎症性状態、並びに人工呼吸器傷害等の物理的外傷誘発性肺状態が含まれる。これらの炎症性状態には更に、ぜんそく、気腫、気管支炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、サルコイドーシス、ヒスチオサイトーシス、リンパ管筋腫症、急性肺傷害、急性呼吸窮迫症候群、慢性肺疾患、気管支肺異形成症、院外感染性肺炎、院内肺炎、人工呼吸器関連肺炎、敗血症、ウイルス性肺炎、インフルエンザ感染、パラインフルエンザ感染、ロタウイルス感染、ヒトメタニューモウイルス感染、呼吸系発疹ウイルス感染、及びアスペルギルス又は他の真菌感染も含まれる。例示の感染関連炎症性疾患としては、重症肺炎、嚢胞性線維症、気管支炎、気道増悪、及び急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を含むウイルス又は細菌性肺炎が挙げられ得る。かかる感染に伴う状態は、一次ウイルス感染及び二次ウイルス感染等の複数の感染を伴う場合がある。調節不全のＩＬ−１７Ａ産生は、ぜんそく及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）等の肺疾患の病理において役割を果たす可能性がある（Ａｌｃｏｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．７２：４９５〜５１６，２０１０に概説される）。ＩＬ−１７Ａは、ＩＬ−１７Ａが、肺常在上皮細胞からの好中球動員、生存、及び活性化において重要な因子を誘発する能力を有するため、重症のぜんそく並びにＣＯＰＤの顕著な特徴である肺の好中球性炎症を調節することが示されている（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ）。本発明の抗体は、肺上皮細胞からのＩＬ−６、ＩＬ−８、及びＧＭ−ＣＳＦ分泌を抑制し、したがって、ぜんそく及びＣＯＰＤ等の肺炎症性状態を有する対象の治療的又は予防的治療において有益であり得る。ぜんそく及び気道炎症のために一般的に使用される動物モデルには、オボアルブミンチャレンジモデル及びメタコリン感作モデルが含まれる（Ｈｅｓｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９３：４０１〜１２，１９９５）。培養したヒト気管支上皮細胞、気管支線維芽細胞又は気道平滑筋細胞からのサイトカイン及びケモカインの産生の阻害を生体外モデルとして用いることもできる。本発明の拮抗物質をこれらのモデルのいずれかに投与することによって、ぜんそく、気道炎症、ＣＯＰＤ等の症状を改善し、経過を変化させるためのこれらの拮抗物質の使用を評価することができる。
乾癬は、炎症性状態の別の例である。乾癬は、角化細胞のＴ細胞媒介型高度増殖並びに炎症性浸潤によって特徴付けられる。乾癬組織の炎症及び高度増殖は、正常な皮膚とは異なる組織学的、抗原性、及びサイトカインプロファイルに関連する。乾癬に関連するサイトカインの中でもとりわけ、ＴＮＦα、ＩＬ−１９、ＩＬ−１８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＦＮγ、ＩＬ−１７Ａ、及びＩＬ−２３が挙げられる（Ｇｕｄｊｏｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１〜８，２００４）。ＩＬ−１７Ａは、乾癬病変で過剰発現されることが見出されており（米国特許第７，７７６，５４０号）、抗ヒトＩＬ−１７Ａ療法で治療された患者におけるプラスの転帰が記載されている（Ｈｕｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２：５２ｒａ７２．，２０１０）。
変形性関節症、関節リウマチ、傷害の結果として関節炎にかかった関節等を含む関節炎が、一般的な炎症性状態であり、それらは本発明の拮抗物質等の抗炎症性タンパク質の治療的使用から利益を受けるであろう。ＩＬ−１７Ａシグナル伝達の活性化によって、炎症を起こした関節の炎症及び更なる組織損傷が持続し得る。関節リウマチのための複数の動物モデルが既知である。例えばコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）モデルでは、ヒト関節リウマチとよく似た慢性炎症性関節炎をマウスに発症させる。本発明のＩＬ−１７Ａ抗体をＣＩＡモデルマウスに投与することによって、疾患の症状を改善して疾患の経過を変化させるためのこれらの拮抗物質の使用を評価することができる。
慢性の消化管炎症性状態の例としては、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、及びクローン病（ＣＤ）、外界からの刺激によって誘発される大腸炎（例えば、化学療法、放射線療法等の投与等の治療レジメンによって引き起こされるかあるいはこれにともなう（例えば、副作用として）消化管炎症（例えば、大腸炎））、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、膠原性又はリンパ性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫症又はセリアック病などの状態における大腸炎、食品アレルギー、胃炎、感染性胃炎又は小腸結腸炎（例えばヘリコバクター・ピロリの感染による慢性活動性胃炎）、並びに感染性病原体によって引き起こされる消化管炎症の他の形態がある。胃腸炎症性状態のための複数の動物モデルが存在する。最も広く使用されるモデルは、結腸に慢性炎症及び潰瘍形成を誘発する２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸／エタノール（ＴＮＢＳ）誘発大腸炎モデル又はオキサゾロンモデルである（Ｎｅｕｒａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １９：５１〜６２、２０００）。別のモデルでは、血性下痢、体重減少、結腸の短縮、及び好中球の浸潤を伴う粘膜の潰瘍形成として発現する急性大腸炎を誘発する硫酸デキストランナトリウム（ＤＳＳ）を使用する。別のモデルは、ナイーブなＣＤ４５ＲＢhigh ＣＤ４ Ｔ細胞をＲＡＧ又はＳＣＩＤマウスに養子移入することを含む。このモデルでは、ドナーのナイーブＴ細胞がレシピエントの腸を攻撃することにより、ヒトの炎症性腸疾患に似た慢性腸炎症及び症状を引き起こす（Ｒｅａｄ ａｎｄ Ｐｏｗｒｉｅ，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｔｏｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｈａｐｔｅｒ １５ ｕｎｉｔ １５．１３，２００１）。これらのモデルのいずれかにおいて本発明の拮抗物質の投与を用いることによって、これらの拮抗物質が、炎症性腸疾患等の腸内の炎症に伴う症状を改善し、疾患の経過を変化させる潜在的な有効性を評価することができる。
腎線維症は、急性刺激（例えば、移植片虚血／再潅流）（Ｆｒｅｅｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１６：２４０１〜６，２００１）又は 慢性状態（例えば、糖尿病）（Ｒｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１１ Ｓｕｐｐｌ ９：３８〜４４，１９９６）のいずれかから発症し得る。その病因は典型的に、腎糸球体濾過器官及び尿細管間質に最初に炎症反応が起こった後、線維化が持続することとして特徴付けられる（Ｌｉｕ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．６９：２１３〜７，２００６）。尿細管間質線維症は、末期の腎不全に対する腎損傷の病因において重要な役割を果たしていることが示されており、近位細管細胞が中心的媒介物質であることが明らかにされている（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ａｎｄ Ｓｔｅａｄｍａｎ，Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１７：２４７〜５２，２００２、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｃｈａｎｇ Ｇｕｎｇ Ｍｅｄ．Ｊ．３０：２〜６，２００７）。尿細管間質区画における線維化は、部分的に、常在線維芽細胞の活性化により媒介され、この常在線維芽細胞は、炎症促進性のサイトカインを分泌し、これが近位細管上皮を刺激して、局所的な炎症及び線維化の媒介物質を分泌する。更に、走化性サイトカインが線維芽細胞及び上皮細胞によって分泌され、単核白血球／マクロファージ及びＴ細胞を尿細管間質へと湿潤させるよう導く方向付け勾配を供給する。炎症性湿潤により、更なる線維化及び炎症性のサイトカインが産生され、それらは更に線維芽細胞及び上皮サイトカインの放出を活性化し、同時に上皮も刺激して表現型移行を起こし、これにより細胞が過剰な細胞外マトリックス構成成分を沈積させる（Ｓｉｍｏｎｓｏｎ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．７１：８４６〜５４、２００７）。ＩＬ−１７Ａは、ヒト腎同種移植片拒絶中に上方調節されることが示されている（Ｖａｎ Ｋｏｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．９：１５２６〜３４，１９９８、Ｌｏｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐａｔｈ．１９７：３２２〜３２，２００２）。ＩＬ−１７Ａは、近位尿細管上皮による炎症促進性メディエーターＩＬ−６、ＩＬ−８、補体構成要素Ｃ３、及びＲＡＮＴＥＳの産生を刺激する（Ｖａｎ Ｋｏｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．９：１５２６〜３４，１９９８、Ｗｏｌｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１１：２０４４〜５５，２０００）。これらの因子が次に、他の炎症性細胞タイプの間質への補充を媒介し、これが炎症／免疫反応の維持に寄与し、抑制されない場合には線維症及び慢性同種移植腎症の発症に寄与する（Ｒａｃｕｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．５５：７１３〜２３，１９９９、Ｍａｎｎｏｎ，Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌ．６：８６７〜７５，２００６）。
他の例示的な繊維性の病態としては、肝臓線維症（アルコール性肝硬変、ウイルス性肝硬変、自己免疫性肝炎が挙げられるがこれらに限定されない）；肺線維症（強皮症、特発性肺線維症が挙げられるがこれらに限定されない）；腎臓線維症（強皮症、糖尿病性腎炎、糸球体腎炎、狼瘡腎炎を含むがこれらに限定されない）；皮膚線維症（強皮症、肥厚性及びケロイド瘢痕、火傷を含むがこれらに限定されない）；骨髄線維症；神経線維腫症；線維腫；腸線維症；及び外科手術の結果としての線維症癒着等が挙げられる。線維症は、臓器特異的な線維症又は全身性線維症であり得る。器官特異性線維症は、肺線維症、肝臓線維症、腎臓線維症、心臓線維症、血管線維症、皮膚線維症、眼線維症、又は骨髄線維症に関連し得る。肺線維症は、特発性肺線維症、薬剤誘発性肺線維症、ぜんそく、サルコイドーシス、又は慢性閉塞性肺疾患に関連し得る。肝臓線維症は、肝硬変、住血吸虫症、又は胆管炎に関連し得る。肝硬変は、アルコール性肝硬変、Ｃ型肝炎後肝硬変、原発性胆汁性肝硬変の中から選択され得る。胆管炎は硬化性胆管炎であり得る。腎線維症は、糖尿病性腎障害又はループス糸球体腎炎に伴い得る。心線維症は、心筋梗塞に伴い得る。血管線維症は、血管形成術後動脈再狭窄、又はアテローム性動脈硬化に伴い得る。皮膚線維症は、火傷瘢痕化、肥厚性瘢痕化、ケロイド、又は腎性線維性皮膚症に伴い得る。眼線維症は、後眼窩線維症、白内障手術後又は増殖性硝子体網膜症に伴い得る。骨髄線維症は、特発性骨髄線維症又は薬剤誘発性骨髄線維症に伴い得る。全身性線維症は、全身性硬化症及び移植片体宿主細胞病から選択され得る。
本発明の方法によって予防又は治療し得る他の炎症性状態及び神経障害は、自己免疫疾患によって引き起こされるものである。これらの状態及び神経障害としては、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、並びに、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、双極性疾患、及び筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含む神経変性及び中枢神経系（ＣＮＳ）疾患、原発性胆汁性硬変、原発性硬化性胆管炎、非アルコール性脂肪性肝疾患／脂肪性肝炎、線維症、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、及びＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）等の肝臓疾患、糖尿病及びインスリン抵抗性、アテローム性動脈硬化症、脳出血、脳卒中、及び心筋梗塞等の心血管疾患、関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎及び若年性関節リウマチ（ＪＲＡ）、骨粗鬆症、変形性関節症、膵炎、線維症、脳炎、乾癬、巨細胞動脈炎、強直性脊椎炎、自己免疫性肝炎、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、炎症性皮膚状態、移植、癌、アレルギー、内分泌疾患、創傷治癒、他の自己免疫性疾患、気道過敏症、並びに、細胞、ウイルス又はプリオンによって介在される感染症又は疾患が挙げられる。
投与／医薬組成物
ＩＬ−１７Ａ活性の抑制が所望される状態の治療に有効な薬剤の「治療上の有効量」は、標準的な研究技術によって決定され得る。例えば、ぜんそく、クローン病、潰瘍性大腸炎、又は関節リウマチ等の炎症性状態の治療において有効となる薬剤の投薬量は、本明細書に記載されるモデル等の、関連する動物モデルに薬剤を投与することによって決定され得る。
更に、任意に生体外アッセイを用いて最適な投薬量範囲を特定することができる。特定の有効用量の選択は、当業者であれば幾つかの因子の考慮に基づいて（例えば、臨床試験によって）決定することができる。かかる因子には、治療又は予防しようとする疾患、関与する症状、患者の体重、患者の免疫状態、及び当業者に既知の他の因子が含まれる。製剤に使用される正確な投薬量は、投与経路、及び疾患の重篤度にも依存し、医師の判断及び各患者の状況に基づいて決定されなければならない。有効用量は、生体外又は動物モデル試験系から導出される用量反応曲線から外挿することができる。
本発明の薬剤の治療上の使用のための投与方法は、薬剤を宿主細胞に送達する任意の好適な経路でよい。これらの薬剤の医薬組成物は、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、又は鼻腔内等の非経口投与に特に有用である。
本発明の薬剤は、有効量の薬剤を製薬上許容され得る担体中の有効成分として含有する医薬組成物として調製することができる。「担体」という用語は、活性化合物が一緒に投与される希釈剤、助剤、賦形剤、又は溶媒のことを指す。かかる医薬用溶媒は、落花生油、大豆油、鉱物油、ゴマ油等の、石油、動物、植物又は合成物由来の水及び油等の液体であってよい。例えば、０．４％生理食塩水及び０．３％グリシンを使用することができる。これらの溶液は滅菌され、粒子状物質を含まない。これらの溶液は、従来の周知の滅菌技術（例えば、濾過）によって滅菌することができる。この組成物は、生理学的条件に近づけるために必要とされるｐＨ調整剤及び緩衝剤等の製薬上許容される補助物質を含むことができる。かかる医薬製剤中の本発明の薬剤の濃度は、約０．５重量％未満、通常は約１重量％又は少なくとも約１重量％か、最大で１５又は２０重量％までと大きく異なってよく、選択される投与方法に従って、主として必要とされる用量、液体の体積、粘度等に基づいて選択される。
したがって、筋肉内注射用の本発明の医薬組成物は、１ｍＬの滅菌緩衝水、及び約１ｎｇ〜約１００ｍｇ、例えば、約５０ｎｇ〜約３０ｍｇ、又はより好ましくは約５ｍｇ〜約２５ｍｇの本発明のＩＬ−１７Ａ拮抗物質を含有するように調製することができる。同様に、静脈内注射用の本発明の医薬組成物は、２５０ｍＬの滅菌リンゲル溶液、及び約１ｍｇ〜約３０ｍｇ、好ましくは５ｍｇ〜約２５ｍｇの本発明の拮抗物質を含有するように調製することができる。非経口投与可能な組成物を調製する実際の方法は周知であり、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ」，１５ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ．に、より詳細に記載されている。
本発明の抗体拮抗物質は凍結乾燥して保存することができ、使用前に好適な担体中で再構成することができる。この技術は従来の免疫グロブリン及びタンパクの調製において有効であることが示されており、当該技術分野で既知の凍結乾燥と再構成の技術を用いることができる。
ここで、以下の具体的かつ非限定的な実施例を参照して、本発明を説明する。
（実施例１）
抗ヒトＩＬ−１７Ａ拮抗性ｍＡｂの特定
Ｔｈｅ ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ Ｈｕｍａｎ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌｉｂｒａｒｙ（ＨｕＣＡＬ（登録商標））ゴールドファージディスプレイライブラリー（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ ＡＧ，Ｍａｒｔｉｎｓｒｉｅｄ，Ｇｅｒｍａｎｙ）をヒト抗体フラグメントの源として使用し、溶液のサブプール中でパンニングした。第１回目のパンニングでは、サブライブラリーをビオチン化成熟Ｈｉｓ６タグ付きＩＬ−１７Ａ Ａ１３２Ｑ及びＡ７０Ｑ変異型（ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６）（配列番号１０６）に対して選択した。第２回目では、第１回目の増幅生産物を、ＩＬ−１７Ａに特異的な抗体に反して偏倚した競合物質としての他のＩＬ−１７Ａファミリーメンバーの存在又は不在下で、ビオチン化Ｈｉｓ６タグ付きＩＬ−１７Ａｍｕｔ６に対して選択した。第２回目の増幅生産物を２つのプールに分割した。第１のプールを第１回目と同様にパンニングした。第２のプールのクローンを、最初の選択で使用したサブライブラリーに応じてＨＣＤＲ２又はＬＣＤＲ３のいずれかに更に分散させ、次いでＩＬ−１７Ａｍｕｔ６に対して更に２回のパンニングを行って、スクリーニングのためのクローンの第２の源を得た。クローンライセートからのＦａｂを、ヒツジ抗ヒトＦｄ抗体でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートウェル中に捕捉し、ビオチン化ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６への結合についてスクリーニングした。陽性クローンの粗溶解物を、組み換えヒトＩＬ−１７ＲＡ受容体（配列番号１０７）へのＩＬ−１７Ａｍｕｔ６結合の阻害についてスクリーニングした。
選択されたクローンを、全ての配列ファミリーの配列スコアリング、親和性、及び表現に基づいて精製したＦａｂとして選択して更に特徴付け、ＭＯＲ番号を指定した。ＭＯＲ７７０８、ＭＯＲ７７８５、ＭＯＲ７７０６、ＭＯＲ７７７５、及びＭＯＲ７７００についての更なる変異型を生成して、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、又はＣＤＲ３に常在するＴｒｐ又はＭｅｔを置き換えた。表３は、生成された変異型を示す。
組み換えヒトＩＬ−１７ＲＡ受容体へのＩＬ−１７Ａｍｕｔ６及びｃｙｎｏＩＬ−１７Ａ結合、及びＩＬ−１７Ａｍｕｔ６へのそれらの結合のＦａｂによる阻害について、Ｆａｂを試験した。全ての試験したＦａｂは、ＩＬ−１７ＲＡへのＩＬ−１７Ａｍｕｔ６及びｃｙｎｏＩＬ−１７Ａ結合の両方を阻害した。ＳＥＴアッセイを使用してＩＬ−１７Ａｍｕｔ６へのＦａｂの親和性を測定した（表４）。特定したＦａｂから、ファミリー２、６ａ、６ｂ、１９ａ、及び１９ｂからの候補を選択して更に特徴付けた。
（実施例２）
抗ＩＬ−１７Ａ拮抗性ｍＡｂの誘導、操作、及び特徴付け
選択したＭＯＲ番号Ｆａｂを変換し、ヒトＩｇＧ１形式のｍＡｂとして発現させ、対応するＭＯＲｍＡｂ表記を与えた。生成したＭＯＲｍＡｂを、発現及び凝集、ヒトＩＬ−１７ＲＡへのヒト及びｃｙｎｏ ＩＬ−１７Ａ結合を阻害する、並びにＮＨＤＦ細胞からのＩＬ−８分泌を阻害する、それらの能力について試験した。表５は、ＭＯＲｍＡｂのために選択したアッセイについてのＩＣ５０値を示す。試験したＭＯＲｍＡｂ（ＭＯＲｍＡｂ番号７７０２、７７０８、７７８５、７７８６、７７０６、７７７５、７７００、８０９５、８０９６、８０９７、８０９８、７７６８）のいずれも、他のＩＬ−１７ファミリーメンバーと交差反応しなかった。
抗ＩＬ−１７Ａ拮抗性ｍＡｂのフレームワーク操作
活性並びに生物物理学的及び生化学的特性に基づき、選択されたＭＯＲｍＡｂを、それらの可変領域において、ある種のフレームワーク残基をマッチングヒト生殖細胞系列存在する残基に変更するように、及びコドンを高度に発現した哺乳類タンパク質中で最も頻繁に生じるコドンに変更するように、更に操作した。ファミリー２ ＶＬにおいて、Ｌ１１Ｖ、及びＶ８５Ｔ（直鎖配列）置換を行い、フレームワークをＶＫ−１生殖細胞系列Ｖｂ−Ｌ５（ＩＧＫＶ１−１２*０１）と厳密に一致するように変換した。Ｖ１１Ｖ及びＶ８５Ｔ置換を有する例示の可変領域は、配列番号７６に示されるアミノ酸配列を有する可変領域である。ファミリー６ａ及び６ｂ ＶＬにおいて、Ｄ１Ｅ、Ｖ５９Ｉ、及びＴ８６Ｖ置換を行い（直鎖配列）、フレームワークをＶｋ−３生殖細胞系列Ｖｂ−Ｌ６（ＩＧＫＶ３−１１*０１）と厳密に一致するように変換した。Ｄ１Ｅ、Ｖ５９Ｉ、及びＴ８６Ｖ置換を有する例示の可変領域は、配列番号７７に示されるアミノ酸配列を有する可変領域である。ファミリー６ａ及び６ｂ ＶＨにおいて、Ｇ４４Ｓ置換を行って（直鎖配列）、Ｖｈ−６生殖細胞系列Ｖｂ ６−０１（ＩＧＨＶ６−１*０１）と一致させた。Ｇ４４Ｓ置換を有する例示の可変領域は、配列番号８１に示されるアミノ酸配列を有する可変領域である。ファミリー１９ａ及び１９ｂ ＶＬにおいて、アミノ酸１〜３（ＤＩＥ）をＱＳＶで置換して、人工のカッパＮ末端をラムダ鎖のＮ末端に置き換えた。ＱＳＶ置換を有する例示の可変領域は、配列番号７９に示されるアミノ酸配列を有する可変領域である。ファミリー１９ａ及び１９ｂ ＶＨにおいて、Ｖ５Ｌ置換を行って、Ｖｈ−３生殖細胞系列Ｖｂ３〜２３（ＩＧＨＶ３−２３*０１とほぼ一致させた。また、このプロセスにおいて、重鎖定常領域アミノ酸配列残基３５３〜３５７（ＲＥＥＭＴ）をＲＤＥＬＴで置換した。Ｖ５Ｌ置換を有する例示の可変領域は、配列番号８６に示されるアミノ酸配列を有する可変領域である。定常領域３５３〜３５７ ＲＥＥＭＴ−＞ＲＤＥＬＴ置換を有する例示の重鎖は、配列番号１００に示されるアミノ酸配列を有する重鎖である。操作された抗体にｍＡｂ番号を与えた。
操作された及び元の可変領域並びに完全長抗体の対応する表記及び配列表を表２に列挙する。各ファミリー内のＣＤＲの配列を図１に示す。
操作されたｍＡｂを、ＭＯＲｍＡｂについて上述したように特徴付けた。示されるアッセイを使用して測定したＩＣ５０値（ｐＭ）を表６に示す。
ビアコアを使用して、選択されたｍＡｂの親和性を査定した。測定の結果を表７に示す。
*１つの抗ＩＬ−１７当たりの二量体
抗ＩＬ−１７抗体は、ＮＨＢＥ細胞中のサイトカイン分泌を阻害する。
ＩＬ−１７Ａは、ＩＬ−１７Ａが、好中球動員、生存、及び活性化において重要な因子を誘発する能力を有するため、重症のぜんそく並びにＣＯＰＤの顕著な特徴である肺の好中球性炎症を調節することが示されている（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ）。抗ＩＬ−１７Ａ本発明の抗体が肺常在細胞中のＩＬ−１７Ａ誘発性変化を阻害し得るかどうかを決定するために、正常ヒト気管支上皮（ＮＨＢＥ）細胞を、ｍＡｂ６７８５の存在下で４８時間、ヒトＩＬ−１７Ａで刺激した。ｍＡｂ６７８５は、それぞれ６１９．０±６４．０ｐＭ及び５６４±８６ｐＭのＩＣ５０で、ＮＨＢＥ細胞によるＩＬ−１７Ａ誘発性ＩＬ−６及びＧＭ−ＣＳＦ産生を阻害した。
抗ＩＬ−１７抗体は、ＩＬ−１７Ａの／Ｆヘテロ二量体の生物活性を阻害する。
正常なヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ、Ｌｏｎｚａ）細胞を、４８ウェルの平底組織培養プレートの中に、１ウェル当たり１０，０００細胞でＦＧＭ−2培地（Ｌｏｎｚａ）中に播種し、一晩インキュベートした（３７°、５％ ＣＯ2）。インキュベーション後、ｒｈＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の５０ｎｇ／ｍＬ最終濃度（１．４７ｎＭ）を、ｍＡｂ６７８５又は対照抗体の希釈系（３０μｇ／ｍＬ−０．５ｎｇ／ｍＬ）を用いて室温で１０分間プレインキュベートし、細胞に添加した。細胞を４８時間インキュベートし（３７°、５％ ＣＯ2）、培養物の上清を収集し、製造業者の指示に従って、ヒトＩＬ−６ Ｄｕｏ Ｓｅｔｓ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．）を使用して、ＩＬ−６含量についてＥＬＩＳＡによってアッセイした。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ）を使用して、ＩＣ５０値を非直線回帰によって決定した。ｍＡｂ６７８５は、２±２．５ｎＭのＥＣ５０で、ＮＨＤＦによるＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体誘発型ＩＬ−６産生を阻害した。
方法
溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を使用したピコモル親和性の決定
溶液平衡滴定（ＳＥＴ）によるＫD決定のために、Ｆａｂタンパク質の単量体分画（少なくとも９０％単量体含量、分析用ＳＥＣによって分析、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５カラム、ＧＥ）を使用した。
基本的に、前述のように溶液中の電気化学発光（ＥＣＬ）に基づく親和性決定及びデータ評価を行った（Ｈａｅｎｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ３３９：１８２〜４，２００５）。規定の固定濃度の精製したＦａｂ（約１０〜１００ｐＭ）を、化学的均衡が達成されるまで、溶液中のＩＬ−１７Ａｍｕｔ６（５ｎＭの最大濃度）の濃度を増加させながらインキュベートした。溶液中の結合されていないＦａｂを定量化するために、試料を、コーティングされたビオチン化ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６と共に、ストレプトアビジンＭＳＤの３８４ウェルのマイクロタイタープレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）に移した。検出のために、ルテニウム複合体で標識化された抗ヒトＦａｂ／ＩｇＧ抗体を適用し、プレートをＳｅｃｔｏｒ（商標）Ｉｍａｇｅｒ ６０００（ＭＳＤ）で読み取った。後述されるモデルを使用してＥｘｃｅｌ／ＸＬｆｉｔソフトウェアにより、滴定曲線（抗原濃度の関数としての遊離Ｆａｂの濃度）をプロットし、当てはめた。
Ｆａｂ分子のＫDの決定についてのデータ評価のために、次の当てはめモデルを使用した（Ａｂｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．９：４５６〜４６１，１９９６に従って修正）：
ｙ＝Ｂｍａｘ−（Ｂｍａｘ／（２*ｃＦａｂ）*（ｘ＋ｃＦａｂ＋ＫＤ−ｓｑｒｔ（（ｘ＋ｃＦａｂ＋ＫＤ）*（ｘ＋ｃＦａｂ＋ＫＤ）−４*ｘ*ｃＦａｂ）））
他方では：
Ｂｍａｘ：最大結合シグナル（抗原濃度＝０で）
ｃＦａｂ：適用されたＦａｂ濃度
ｘ：適用された総可溶性抗原濃度（結合部位）
ｓｑｒｔ：平方根
ＫD：均衡解離定常
ＩＬ−１７ＲＡへのＩＬ−１７Ａ結合の阻害（例えば、「ＩＬ−１７ＲＡ阻害」アッセイ
透明のマキシソーププレートを、ｐＨ ９．４の０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液中、１００μＬ／ウェルの２．５μｇ／ｍＬヒトＩＬ−１７ＲＡ−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。ブロッキング及び洗浄後、２５ｎｇ／ｍＬのビオチン化ヒトＩＬ−１７ｍｕｔ６（配列番号１０６）又はカニクイザルＩＬ−１７Ａ（配列番号１０８）を、試験ｍＡｂ又は対照ｍＡｂ（３０〜０μｇ／ｍＬ最終濃度）を用いて、１００μＬの合わせた容量中で５〜１０分間プレインキュベートし、次いでプレートに添加した。シグナルを、１００μＬの１ｍｇ／ｍＬ ＳＡ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）の１：１０，０００希釈を用いて室温（ＲＴ）で２０分間、続いて１００μＬ／ウェルのＯＰＤ基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で検出した。プレートを４９２ｎｍで読み取った（Ｅｎｖｉｓｉｏｎ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）。ＩＬ−１７ＲＡへのＦａｂ結合を、ｍＡｂについて記載されるように試験した。
ＮＨＤＦ細胞からのＩＬ−８及びＩＬ−６産生の阻害（例えば「ＩＬ−８産生」及び「ＩＬ−６産生」アッセイ）
抗ＩＬ−１７ＡｍＡｂの、ＩＬ−８及びＩＬ−６産生に及ぼす阻害の効果を正常なヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）中で査定した。細胞を、４８ウェルの平底組織培養プレート中に、ＦＧＭ−２培地中、１ウェル当たり０．１×１０5細胞、１ウェル当たり２５０μＬでプレートし、一晩インキュベートした（３７°、５％ ＣＯ2）。インキュベーション後、０．１ｎｇ／ｍＬのヒトＴＮＦ−αを全てのウェルに添加した。１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−１７ｍｕｔ６又は２５ｎｇ／ｍＬのカニクイザルＩＬ−１７Ａを、試験ｍＡｂ又は対照ｍＡｂ（３０〜０μｇ／ｍＬ最終濃度）を用いて、２５０μＬの合わせた容量中で、室温で１０分間プレインキュベートし、次いで２５０μＬの細胞に添加した。本アッセイにおいて、抗体を添加していないＩＬ−１７ｍｕｔ６試料を対照試料として含めた一方で、ＴＮＦ−α又は培養培地のみからなる試料を陰性対照として含めた。細胞を２４時間（３７°、５％ ＣＯ2）インキュベートし、調湿した培地を収集し、ヒトＩＬ−６ ＆ ＩＬ−８ ＥＬＩＳＡ Ｄｕｏ Ｓｅｔｓを使用して、製造業者（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）の指示に従って、ＩＬ−６及びＩＬ−８についてＥＬＩＳＡによってアッセイした。Ｆａｂを、ｍＡｂについて記載されるようにアッセイした。
ＮＨＢＥ細胞からのＩＬ−６及びＧ−ＣＳＦ産生の阻害
正常なヒト気管支上皮（ＮＨＢＥ、Ｌｏｎｚａ）細胞を、ＢＥＧＭ培地（Ｌｏｎｚａ）中、１ウェル当たり２０，０００細胞で播種し、一晩インキュベートした（３７°、５％ＣＯ2）。インキュベーション後、細胞をＩＬ−１７Ａｍｕｔ６を用いて、試験した抗体の存在下で、様々な濃度で４８時間刺激した（３０μｇ／ｍＬ〜０．５ｎｇ．ｍＬ）。インキュベーション後、上清を収集し、ヒトＩＬ−６−又はＧ−ＣＳＦ特異的ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、ＩＬ−６又はＧ−ＣＳＦ含量についてアッセイした。ＩＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ）を使用して非直線回帰によって決定した。
ＩＬ−１７Ａファミリーメンバーとの交差反応性
透明のマキシソーププレートを、ＰＢＳ中の５μｇ／ｍＬのｍＡｂ又はアイソタイプ対照ｍＡｂの１００μＬ／ウェルでコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。プレートを２００μＬ／ウェルで、ＥＬＩＳＡブロック緩衝液（１％ ＢＳＡ、０．０５％ ＮａＮ3を含むＰＢＳ中５％スクロース）を用いて１時間ブロックし、洗浄緩衝液（ＰＢＳ、０．０１％ Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄した。競合サイトカインをアッセイ希釈緩衝液（ＰＢＳ中１％ ＢＳＡ）中で、２倍の最終濃度で滴定し、ビオチン化サイトカインを２倍の最終濃度で調製した。２倍の最終濃度の１００μＬのサイトカインを、アッセイ緩衝液中、２倍の最終濃度の１００μＬのビオチン化ＩＬ−１７ｍｕｔ６（２５ｎｇ／ｍＬ最終濃度）と混合した（３０〜０μｇ／ｍＬ最終濃度）。組み換えヒトＩＬ−２３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を陰性対照として、緩衝液のみの試料を背景対照として、及びＩＬ−１７ｍｕｔ６を陽性対照として使用した。サイトカイン／ビオチン化ＩＬ−１７ｍｕｔ６混合物を複製物した、１ウェル当たり１００μＬを、プレートに添加し、１〜２時間インキュベートした。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、１００μＬの１ｍｇ／ｍＬ ＳＡ−ＨＲＰの１：１０，０００希釈を用いて、室温で２０分間インキュベートした（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）。プレートをＥＬＩＳＡ洗浄緩衝液で３回洗浄した。洗浄後、１００μＬ／ウェルのＯＰＤ基質（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を各ウェルに添加し、適切な色の変化が検出されるまでインキュベートした。反応を５０μＬの２Ｎ硫酸の添加により停止し、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ機器を使用してプレートを４９２ｎｍと読み取った。
親和性測定−ビアコアアッセイ
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いる親和性測定を、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００光バイオセンサ（Ｂｉａｃｏｒｅ）を用いて行った。選択されたＦａｂ（約３０ ＲＵ）又はｍＡｂ（約５０ ＲＵ）を、それぞれＦａｂ又はｍＡｂ捕捉のためのヒツジ抗Ｆｄ抗体又は抗ヒトＦｃ抗体を使用して、センサーチップ表面上に捕捉した。Ｆａｂ又はｍＡｂ捕捉後、溶液中、ｈｕＩＬ−１７ｍｕｔ６又はｃｙｎｏ ＩＬ−１７Ａ（０．２から４９ｎＭ）を注入した。
（実施例４）
エピトープマッピング
抗体エピトープを、競合結合、Ｈ／Ｄ交換分析、及び抗体−ＩＬ−１７Ａ共構造の組み合わせによって推定した（実施例５を参照されたい）。次の抗体を使用した：ｍＡｂ１９２６、ＭＯＲｍＡｂ７７００、ＭＯＲｍＡｂ７７０６、ＭＯＲｍＡｂ７７０８、ｍＡｂ７３５７（ハイブリドーマＣ１８６３に由来するマウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ中和抗体）、ｍＡｂ２８３２（ハイブリドーマＣ１８６１に由来するマウス／ヒトキメラ抗ヒトＩＬ−１７Ａ中和抗体）、ｍＡｂ３１７（マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）及びｍＡｂ３１７１（マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）、並びにｍＡｂｅＢＩＯ１６〜７１７８（マウス抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体、ｅ−Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）。この３つの商業用抗体は、異なる度合いの中和活性を示した。
競合的エピトープ結合
競合ＥＬＩＳＡのために、１ウェル当たり５μＬ（２０μｇ／ｍＬ）ＩＬ−１７Ａのｍｕｔ６タンパク質を、ＭＳＤ ＨｉｇｈＢｉｎｄプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）上に室温で２時間コーティングした。１５０μＬの５％ ＭＳＤ遮断剤Ａ緩衝液（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を各ウェルに添加し、室温で２時間インキュベートした。プレートを０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ ７．４）で洗浄した。１０ｎＭの標識化された抗体（ＭＤＳ蛍光染色）を、競合物質抗体の濃度を増加させながら（１ｎＭ〜２μＭ）インキュベートし、２５μＬの混合物を指定されたウェルに添加した。室温で穏やかに振盪しながら２時間のインキュベートした後、プレートを上記のように洗浄し、１５０μＬ希釈ＭＳＤ読み取り緩衝液Ｔを添加し、プレートをＭＤＳセクターイメージャ６０００で読み取った。
アッセイを、標識化されたｍＡｂ１９２６、ｍＡｂ３１７、ｍＡｂ３１７１、又はｍＡｂ７３５７により行った（図４）。競合アッセイに基づき、抗ＩＬ−１７Ａ抗体を４つの異なるビンに割り当てた。ビンＡ：ｍＡｂ１９２６、ＭＯＲｍＡｂ７７０６、及びＭＯＲｍＡｂ７７０８、ビンＢ：ｅＢｉｏ１６〜７１７８及びｍＡｂ７３５７、ビンＣ：ｍＡｂ３１７、ビンＤ：ｍＡｂ３１７１。
Ｈ／Ｄ交換分析：
Ｈ／Ｄ交換のために、抗体摂動を分析するために使用した手順は、前述の手順と類似していたが（Ｈａｍｕｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１４：１７１〜８２，２００３、Ｈｏｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，４５：８４８８〜９８，２００６）、幾らかの修飾を伴った。組み換えＩＬ−１７Ａｍｕｔ６（Ｃ−末端Ｈｉｓ−タグによりＨＥＫ２９３Ｅ細胞中で発現させた）を、重水素化水溶液中で所定の時間にわたってインキュベートすることにより、交換可能な水素原子における重水素の組み込みを得た。重水素化ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６を、固定化した個々の抗ＩＬ−１７Ａ ｍＡｂを含有するカラム上に捕捉し、次いで水性緩衝液で洗浄した。逆交換したＩＬ−１７Ａｍｕｔ６タンパク質をカラムから溶出し、重水素含有フラグメントの局在性をプロテアーゼ消化及び質量分析によって決定した。抗体に結合した領域は、交換から比較的保護された部位であり、したがって、抗体と複合体化されていないＩＬ−１７Ａｍｕｔ６と比較してより高い分画の重水素を含有すると推定された。ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６のＨ／Ｄ交換摂動マップは、図５に示される。バーの上の番号は、ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６残基を指す。
ＭＯＲｍＡｂ７７００、ＭＯＲｍＡｂ７７０６、及びＭＯＲｍＡｂ７７０８は、ＩＬ−１７Ａの（配列番号１０５）45ＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨ54（配列番号１５９）、56ＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥ68（配列番号１５７）、及び100ＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬ116（配列番号１５８）の３つのセグメントに対して異なる度合いの示差交換を示し、抗体による保護を示唆した。56ＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥ68（配列番号１５７）フラグメントは、ＭＯＲｍＡｂ７７０８によって強力に保護され、ＭＯＲｍＡｂ７７００によってわずかに保護され、ＭＯＲｍＡｂ７７０６によっては保護されなかった。これらの抗体のフラグメント保護パターンにおける重複は、上述の競合アッセイにおけるそれらの交差阻害と一致する。
ｍＡｂ７３５７及びｍＡｂｅＢｉｏ１６〜７１７８の両方について、上述の競合アッセイにおけるそれらの交差阻害と一致して、71ＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭ87（配列番号１６０）に対する強力な保護を観察した。弱い、及びしたがって決定的でない示差交換を、ｍＡｂ７３５７、ｍＡｂ２８３２、ｍＡｂ３１７及びｍＡｂ３１７１を有する他のフラグメントについて観察した。
Ｈ／Ｄ交換研究は、上に記載される４つの競合群のうちの２つについて結合部位の位置を特定した。ビンＡ抗体（ＭＯＲｍＡｂ７７００、ＭＯＲｍＡｂ７７０６、及びＭＯＲｍＡｂ７７０８）は、配列番号１０５のペプチドセグメント45ＮＲＳＴＳＰＷＮＬＨ54、（配列番号１５９）、56ＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥ68（配列番号１５７）、及び100ＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬ116（配列番号１５８）の領域で結合し、ビンＢ抗体（ｍＡｂ７３５７及びｍＡｂｅＢｉｏ１６〜７１７８）は、ペプチドセグメント71ＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹＨＭ87（配列番号１６０）の領域で結合した。ｍＡｂ３１７及びｍＡｂ３１７１は、互いから、並びにビンＡ及びビンＢ抗体から異なる部位に結合した。しかしながら、両方の抗体とのＨ／Ｄ交換研究における弱いシグナルは、ＩＬ−１７Ａ上のそれらのエピトープの位置を特定するのに十分な証拠を提供しなかった。
（実施例５）
ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ａ抗体の共結晶構造
ｍＡｂ６７８５の組み換えＨｉｓ６タグ付きＦａｂである、Ｆａｂ６４６８とのＩＬ−１７Ａｍｕｔ６の共構造をＸ線結晶学によって決定した。Ｆａｂ６４６８の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号９０に示され、重鎖アミノ酸配列は、配列番号１１１に示される。実施例５において、ＩＬ−１７Ａアミノ酸残基は、配列番号１０５に従った残基を示すように参照され、Ｆａｂ６４６８残基は、配列番号７９に従った軽鎖可変領域残基を示すように参照され、重鎖可変領域残基は配列番号８６に従う。組み換えヒトＩＬ−１７Ａｍｕｔ６の発現、再折り畳み、及び精製が記載されている（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ｅＰｕｂ ａｈｅａｄ ｏｆ ｐｒｉｎｔ Ｊｕｌ２９）。ＨＥＫ−２９３Ｆ細胞中でＦａｂ６４６８を発現させ、記載される方法と類似した方法を使用して精製した（Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒ Ｐｕｒｉｆ，６７：１８２〜９，２００９）。
ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８複合体の結晶化
ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８複合体を、ＩＬ−１７Ａｍｕｔ６及びＦａｂ６４６８を、ｐＨ ６．５の２０ｍＭ ＭＥＳ、０．２Ｍ ＮａＣｌ、及び１０％グリセロール中、１：１．１モル比で混合することによって調製し、４℃で一晩インキュベートした。複合体を、ｐＨ ６．５の２０ｍＭ ＭＥＳ、０．２Ｍ ＮａＣｌ、及び１０％グリセロール中、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １０／３００ ＧＬカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）上でのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して、過剰の複合体化されていないＦａｂから精製した。複合体に相当する分画をプールし、Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ １００００ ＭＷＣＯデバイスで４．６ｍｇ／ｍＬにまで濃縮した。
等容量のタンパク質及びリザーバ溶液を、Ｃｏｒｎｉｎｇプレート３５５０（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）を使用するシッティングドロップ形式で分注するＯｒｙｘ４自動タンパク質結晶化ロボット（Ｄｏｕｇｌａｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｅａｓｔ Ｇａｒｓｔｏｎ，ＵＫ）を使用して、自動化結晶化スクリーニングを行った。最初のスクリーニングを、Ｈａｍｐｔｏｎ結晶スクリーンＨＴ（ＨＲ２−１３０，Ｈａｍｐｔｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いて行い、ｐＨ ４．５〜４．６の硫酸アンモニウム、ＰＥＧを含有する複数の条件から針様の結晶を産生した。これらの小さい結晶を使用して、マイクロシードマトリックススクリーニング（ＭＭＳ）（Ｄ’Ａｒｃｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｄ，６３：５５０〜４，２００７）のためのシードストックを産生した。回折品質の結晶を、ｐＨ ５．５の０．１Ｍ酢酸ナトリウム、１２％ＰＥＧ ＭＭＥ ５０００、及び０．２Ｍ硫酸リチウム中のＭＭＳスクリーンから得た。
ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８複合体のＸ線データ収集
Ｘ線データ収集のために、結晶を、２４％グリセロールを補充した母液に数秒間浸漬し、９５°Ｋの窒素流中で急速冷凍した。Ｘ線回折データを収集し、Ｏｓｍｉｃ（商標）ＶａｒｉＭａｘ（商標）共焦光学系、Ｓａｔｕｒｎ ９４４ ＣＣＤ検出器、及びＸ−ｓｔｒｅａｍ（商標）２０００低温冷却システムを備えたＲｉｇａｋｕ ＭｉｃｒｏＭａｘ（商標）−００７ＨＦ微小焦点Ｘ線発生装置（Ｒｉｇａｋｕ，Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ，ＴＸ）を使用して処理した。回折強度を、１／２度の像当たり３分の露出時間から２．２Åの最大分解能で、２５４°結晶回転にわたって検出した。Ｘ線データをｐｒｏｇｒａｍ Ｄ*ＴＲＥＫ（Ｐｆｌｕｇｒａｔｈ，Ｊ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｄ，５５：１７１８〜２５，１９９９）により処理した。結晶は、単斜晶空間群Ｐ２1に属し、ａ＝７３．４０Å、ｂ＝６４．０４Å、ｃ＝１４５．６１Å、及びβ＝９５．３９°であった。Ｘ線データ統計値を表８に示す。
*最外郭についての値は、（）内にある。
構造決定
ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８の結晶構造を、Ｐｈａｓｅｒ（Ｒｅａｄ，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｒｇ Ｄ Ｂｉｏｌ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｒｇ，５７：１３７３〜８２，２００１）を使用して分子置換によって決定した。検索モデルは、ＩＬ−１７Ｆ（ＰＤＢ ＩＤ １ＪＰＹ）（Ｈｙｍｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，２０：５３３２〜４１，２００１）及びＦｖ（ＶＨ／ＶＬ）についての相同性モデルであり、それはＭｏｄｅｌｌｅｒ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，ＣＡ）を使用して、ＶＨ及びＶＬの両方について、抗ＩＬ−１３抗体ＣＮＴＯ６０７（ＰＤＢ ＩＤ ３Ｇ６Ａ）（Ｔｅｐｌｙａｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３８９：１１５〜２３．２００９）に基づいて構築された。２つの定常ドメインＣＬ／ＣＨ１をＰＤＢ ＩＤ ８ＦＡＢから得た（Ｓｔｒｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：３７３９〜４８，１９９１）。構造精密化を、ＰＨＥＮＩＸ（Ａｄａｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ．Ｒａｄｉａｔ．１１：５３〜５，２００４）を用いて行った。二回転非結晶学的対対称を、早期段階の精密化において最初に課したが、Ｒフリーに基づいて最終段階において緩めた。モデル調整及び手動の再構築を、ＣＯＯＴを使用して行った（Ｅｍｓｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．Ｄ．Ｂｉｏｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ．６０：２１２６〜３２，２００４）。最終のＲ結晶及びＲフリーは、２．２Åに対する全６１，７０６個の独立の反射のそれぞれについて２３．４％及び２９．７％であった。精密化統計を表９に提供する。
ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８複合体構造
複合体の構造を高分解能（約２．２Å）に対して決定した。ＩＬ−１７Ａは、結晶中ほぼ対称のホモ−二量体であり、２つのＦａｂ分子に結合していた。抗体−抗原相互作用は、大部分が疎水性であり、ほとんどの抗体とは対照的に、軽鎖ＣＤＲは、幾つかの重要な接触を行った。ＩＬ−１７Ａ／Ｆａｂ６４６８複合体の全体的な分子構造を図６Ａに示す。ＩＬ−１７Ａ二量体の単量体は、シスチンノットの全体的なトポロジーを採用した（図６Ｂ）。２つの単量体は、７７骨格鎖Ｃα原子についての０．５４ÅのＣα ＲＭＳＤと非常に類似していた。ＩＬ−１７Ａ単量体シスチンノットの全体的な構築は、７６ Ｃα原子についての０．７１Åのｒｍｓｄを有するＩＬ−１７Ｆの構築と非常に類似していた（図６Ｂ）。各ＩＬ−１７Ａ単量体は、３つのジスルフィド結合によって安定化していた。鎖Ｂについて、３つの鎖間ジスルフィド結合が観察された一方で（Ｃ10〜Ｃ106、Ｃ71〜Ｃ121、Ｃ76〜Ｃ123）、鎖Ａについては、Ｃ10〜Ｃ106ジスルフィド結合は、単量体のこれらのセグメントにおける無秩序に起因して観察されなかった。後者の２つのジスルフィド結合（Ｃ71〜Ｃ121、Ｃ76〜Ｃ123）は、ＩＬ−１７Ｆ及びＮＧＦに類似したシスチンノット構築を安定化した。ＩＬ−１７Ａの鎖Ｂについての構造的モデルには、全ての残基１０〜１２８（残基１〜９は無秩序であった）が含まれ一方で、鎖Ａ残基については、残基２１〜２９、４１〜１０４及び１０９〜１２７のみが観察され、その他の残基１〜２０、３０〜４０、１０５〜１０８、及び１２８は、構造における無秩序に起因して欠失していた。２つのＦａｂについて、両方の軽鎖の残基１〜２は、無秩序であったか、又は乏しい電子密度を有した。鎖内ジスルフィド結合並びに重鎖上のＨｉｓタグ含む、重鎖及び軽鎖の両方のＣ−末端３残基は、無秩序であった。
ＩＬ−１７Ａ（鎖Ｂ）の秩序化Ｎ末端セグメントは、短いヘリカル要素を含有した（残基８〜１２）。それは、同じ単量体のループ３〜４に向かって再び折り畳み、鎖間ジスルフィド結合（Ｃ10〜Ｃ106）を形成した。対照的に、ＩＬ−１７Ｆの同等のセグメントは、二量体の他方の単量体へと到達し、鎖内ジスルフィド結合を形成し、２つの単量体を共有結合で連結した。２つのＩＬ−１７Ａ単量体のセグメント１７〜３９の秩序化部分を、ＩＬ−１７Ｆにおいてと同様にスワップした。このスワッピングは、ＩＬ−１７Ａ二量体のこれらの部分についての交差をもたらした。分子内ジスルフィド結合（Ｃ10〜Ｃ106）と組み合わせて、ＩＬ−１７Ａの２つのＮ末端セグメントは、２つの連鎖単量体を形成し、それはまた、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ上で２６ｋＤの見かけの二量体ももたらした。
ＩＬ−１７Ａの二量体は、４つの主なβ−ストランド（ストランド１〜４）についてほぼ対称であった（図６Ｃ）。７６個の残基についてのＣα ｒｍｓｄは、０．７１Åである。若干の不斉は、２つの源に由来した。第１に、鎖Ａは、主にＮ末端において、幾つかの無秩序セグメントを含有した。短いβ−ストランド（ストランド０、残基２２〜２６）のみが見かけ上、秩序化されていた一方で、鎖Ｂの残基１０〜４０は、ヘリカルセグメント（残基１２〜１６）及びβ−ストランド（ストランド０、残基２１〜２５）で秩序化されていた。第２に、ＩＬ−１７Ａの２つの単量体（４０〜１２８）の、シスチンノットの４つの主なβ−ストランドが、二回転対称によって関連させられた一方で、ストランド０の秩序化部分は、主体が重ねられるとき、完全に重ね合わさらなかった（図示されず）。これがタンパク質再折り畳みのアーチファクトであるか、又はかかる配列が天然に存在するかどうかは、更なる調査なしには明確でない。この種の生物活性は、商業的供給源の参照ＩＬ−１７Ａ（大腸菌においても産生される）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）の生物活性に類似しており、Ｃ10〜Ｃ106についての鎖間又は鎖内ジスルフィド結合がその受容体結合に重要でないことが示唆された。それにもかかわらず、現在の構造は、Ｎ末端セグメント（１〜２０）及び（３０〜３９）は、非常に柔軟であり、それらの構造は、折り畳まれたＩＬ−１７Ａ二量体の活性に影響を及ぼさない。
エピトープ及びパラトープ
ＩＬ−１７ＡとＦａｂ６４６８との間の結合に関与する残基を表１０に列挙する。ＩＬ−１７ＡのプロトマーＡにおいて欠失した残基及びＩＬ−１７Ａ二量体の若干の不斉性質に起因して、２つの接触部位からの全てのエピトープ残基は、同一でなかった（表１０及び図７）。しかしながら、同一であるコアな一組の残基並びにそれらの相互作用が存在した。これらの残基は、ＩＬ−１７Ａ配列番号１０５のＬ２６、Ｒ５５、Ｅ５７、Ｐ５９、Ｅ６０、Ｒ６１、Ｙ６２、Ｓ６４、Ｖ６５、Ｗ６７、Ｒ１０１、Ｅ１０２、Ｐ１０３、及びＦ１１０であり（表１０に黒色で強調表示される）、それらはＦａｂ６４６８に対するコアエピトープを構成する。
表１０コアエピトープ残基は、黒色で強調表示される。コアパラトープ残基は、太字にされている。拡張されたパラトープ残基は、括弧内に示される。
同様に、２つの部位における抗体からの接触残基は、完全に同一ではなかった。コアエピトープ残基への同一の接触に関与する残基は、「コアパラトープ」と称され、それは次の残基から成っていた：軽鎖（ＬＣ）：Ｙ３１、Ｄ４９、Ｙ９０、Ｆ９２、Ｆ９３（配列番号７９）；並びに重鎖（ＨＣ）：Ｓ５２、Ｔ５４、Ｆ５７、Ｙ５９、Ｑ９９、Ｌ１００、及びＴ１０１（配列番号８６）（表１０）。コアパラトープ残基は、表１０に太字で示される。特異的ＩＬ−１７Ａ残基に結合する１つの単量体において特定された更なる「拡張されたパラトープ」残基は、括弧内に示される。
共結晶構造で特定されたＬ２６を除く全てのコアエピトープ残基は、ＭＯＲｍＡｂ７７００についてのＨ／Ｄ交換、56ＮＥＤＰＥＲＹＰＳＶＩＷＥ68（配列番号１５７）及び100ＲＲＥＰＰＨＣＰＮＳＦＲＬＥＫＩＬ116（配列番号１５８）によって特定された、保護されたセグメントのうちの２つの境界内又は境界にあったため、ＭＯＲｍＡｂ７７００についてのＨ／Ｄ保護データは、共結晶研究に一致していた。ＭＯＲｍＡｂ８３０２及びｍＡｂ１９２６を含むＭＯＲｍＡｂ７７００抗体誘導体の全ては、それらが多くてもＶＨのＮ末端領域における１つの残基（実施例１を参照されたい）、ＶＬのＮ末端における３つの残基（実施例１を参照されたい）、及び３つのＣＤＲ残基（Ｈ２、Ｈ３、及びＬ３において１つずつ、表１ａ）分だけ異なるのみで、それらのうちのいずれも抗体パラトープの一部でないため、Ｆａｂ６４６８と同じ結合特異性を有することが想定される。
本発明で特徴付けられるＩＬ−１７Ａ構造は、以前に公開された構造に非常に類似しているが、欠失したセグメントに起因して、Ｐ２ポケット空洞（下記を参照されたい）が以前の研究（構造２ＶＸＳ、Ｐｒｏｔｅｉｎ ＤａｔａＢａｎｋ ｈｔｔｐ＿／／ｗｗｗ＿ｒｃｓｂ＿ｏｒｇ／ｐｄｂ／ｈｏｍｅ／ｈｏｍｅ＿ｄｏ；Ｇｅｒｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９４：９０５〜２１，２００９において入手可能）では特定されなかったことを除く。
ＩＬ−１７ＲＡとの複合体におけるヒトＩＬ−１７Ｆの結晶構造が報告されている（Ｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０：１２４５〜５１，２００９）。ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆとの間の配列及び構造的類似性のため、ＩＬ−１７Ａは、ＩＬ−１７Ｆと類似した様態でＩＬ−１７ＲＡと相互作用する可能性が高い。この研究で得られたＦａｂ６４６８との複合体におけるＩＬ−１７Ａ構造を、報告されたＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＲＡ複合体におけるＩＬ−１７Ｆ上に重ねることによる分子モデリングにより、Ｆａｂ６４６８のセグメントがＩＬ−１７ＲＡとの立体障害を有するであろうことが示された。これらのセグメントのうちの１つは、Ｆａｂ６４６８の軽鎖ＣＤＲ３におけるＦＦモチーフの周囲に局在化する（配列番号７９の残基９２及び９３）。したがって、特定の理論に決して束縛されるものではないが、Ｆａｂ６４６８が、ＩＬ−１７ＲＡ及び類推して、ＩＬ−１７ＲＣとの、その相互作用を遮断することによって、ＩＬ−１７Ａ機能を阻害することが示唆されるが、ＩＬ−１７ＲＣとＩＬ−１７Ａとの間の相互作用の様式は、分子レベルでは知られていない。
ＩＬ−１７ＲＡに対するＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの親和性における有意な差異は、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＲＡの相互作用の詳細において有意な差異が存在し得ることを示唆するが、その程度は、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７ＲＡの共結晶構造が決定されるとき初めて得られるであろう。これには、この研究におけるＰ２ポケット空洞の特定が関連するが、それは報告されたＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＲＡ結晶構造におけるＩＬ−１７Ｆ類似領域において部分的に特定されているのみである（Ｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１０：１２４５〜５１，２００９）。
２つの深い、大部分が疎水性のポケットを、二量体境界面に沿ってＩＬ−１７Ａの表面上で特定した（図８Ａ、５Ｂ）。ＩＬ−１７Ｆにおいて最初に発見された（Ｈｙｍｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，２０：５３３２〜４１，２００１）ポケットに類似したＰ１ポケットは、単量体Ａの残基Ｑ９４、Ｅ９５、Ｌ９７、及びＫ１１４、並びに単量体ＢのＬ５３、Ｙ６２、Ｐ６３、Ｖ６５、Ｉ６６、Ｗ６７、Ｉ９６、Ｖ１１７、及びＶ１１９から成り、逆もまた同様である。二量体の一方の側で、Ｐ１ポケットは、セグメント３０〜４０によって部分的にカバーされる一方で、他方の側では、セグメントが無秩序であることに起因してそれは完全に開いている。このセグメントは柔軟であると考えられるため、他の分子がＰ１ポケットにアクセス可能であろう。Ｐ２ポケットもまた、単量体ＡのＶ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２、並びに単量体ＢのＶ２２、Ｖ２４、及びＬ１１２の両方の鎖からの残基から成り、逆もまた同様である。
Ｐ２ポケットの詳細は、上述のようにＩＬ−１７Ａ二量体の不斉に起因して若干異なるが、２つのＰ２ポケットの全体的な形状は、非常に類似している。Ｐ１及びＰ２ポケットを裏打ちする２組の残基は、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆとの間で非常に良好に保存されている（図８Ｃ）。しかしながら、ＩＬ−１７Ｆ構造において、Ｐ２ポケットは、残基Ｆ１０及びＦ１１（Ｆ10Ｆ11モチーフ）によって占領されている（図８Ｂ）（Ｈｙｍｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，２０：５３３２〜４１，２００１）。ＦＦモチーフは、ヒトＩＬ−１７Ａにおいて不在であり、代わりに、対応するアミノ酸残基は、Ｉ４及びＰ５（配列番号１０５における残基４及び５）である（図８Ｃ）。これらの残基は、それらがフェニルアラニン残基よりもはるかに小さいため、Ｐ２ポケット並びにＦＦモチーフにおいて結合する可能性が低く、Ｐ２ポケットに対して十分な親和性を有さない可能性が最も高い。したがって、ＩＬ−１７ＦのＦＦモチーフは恐らく、受容体ＩＬ−１７ＲＡ及びＩＬ−１７ＲＣとのヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ相互作用についての構造的判別子である。これらの大部分の疎水性のポケット（Ｐ１及びＰ２）の両方は、ＩＬ−１７ＲＡへのＩＬ−１７Ａ結合に必要とされる可能性が高い。ＩＬ−１７Ｆ／ＩＬ−１７ＲＡ複合体の近年の結晶構造は、ＦＦモチーフがＩＬ−１７ＲＡによって置換されていることを示す（Ｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０：１２４５〜５１，２００９）。Ｐ２からのＦＦモチーフ排除によるエネルギー損失は、より低い結合親和性をもたらす可能性が高い。これは、ＩＬ−１７ＲＡが、ヒトにおいて、ＩＬ−１７Ａに高い親和性で結合するが、ＩＬ−１７Ｆには低い親和性で結合するという観察と一致し（Ｋｕｅｓｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７９：５４６２〜７３，２００７）、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆ効力における差異を潜在的に説明し得る。マウスにおいて、ＦＦモチーフは、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方で不在であり、それぞれ残基ＩＰ及びＡＬによって置き換えられている。ＡＬ及びＩＰ残基の対は、小さく、Ｐ２ポケットに対して低い親和性を有する可能性が高い。したがって、Ｐ２は、マウスＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＦにおいてＩＬ−１７ＲＡ結合のために有効であろう。マウスＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの両方は、類似した親和性でマウスＩＬ−１７ＲＡに結合し（Ｋｕｅｓｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７９：５４６２〜７３，２００７）、これは、結合のためのＰ２ポケットの有効性がリガンドの親和性を増加させるという本発明の示唆と一致する。
全体的に、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆとの間で観察した構造的差異は、それぞれの受容体とのそれらの相互作用を詳細に分析するための基盤を提供する。更に、ペプチド、ペプチド模倣体、及び小分子がいずれか又は両方のポケットにおいて結合して、ＩＬ−１７Ａ及び／又はＩＬ−１７Ｆがそれらの受容体と相互作用することを遮断するように設計され得ることが考えられる。Ｆａｂ６４６８（配列番号７９における残基Ｆ９２及びＦ９３）に存在するＦＦモチーフは、Ｐ２ポケット残基Ｌ２６、Ｒ６１、Ｌ９９、Ｒ１０１、及びＲ１０２に結合するため、Ｆａｂ ６４６８構造を使用して、ファージディスプレイを使用して無作為化又は設計したペプチドライブラリーからのペプチド等の、更なるＩＬ−１７Ａ拮抗物質を選択及び最適化することが可能である。
Ｐ１及びＰ２ポケットを裏打ちする残基は、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆとの間で良好に保存されており、分子モデリングにより、ＩＬ−１７Ａホモ二量体のみと比較したとき、ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体が、ほぼ同一の全体的構造を採用するであろうとことが示唆される。したがって、Ｐ１及びＰ２ポケットは、類似した全体的なトポロジーによりＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体中に存在し、その受容体結合部位を構成する可能性が高い。したがって、Ｐ２ポケット残基に結合するＩＬ−１７Ａ拮抗物質は、ＩＬ−１７Ａ／Ｆヘテロ二量体に結合し、拮抗する可能性がある。
（実施例６）
交差種結合特異性
ｍＡｂｔｒ１９２６の交差種結合特異性を評価するために、マイクロタイタープレート上にコーティングした異なるＩＬ−１７Ａタンパク質を用いて結合ＥＬＩＳＡを行った。ヒト、マウス、及びラットＩＬ−１７Ａタンパク質をマイクロタイタープレート上にコーティングした。標識化されたｍＡｂ１９２６の連続希釈液を３７℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後、マイクロタイタープレートを完全に洗浄し、結合した標識化ｍＡｂ１９２６を検出した。ｍＡｂ１９２６は、ラット又はマウスＩＬ−１７Ａタンパク質よりもはるかに強力に、ヒトＩＬ−１７Ａに結合した（図９）。ラット及びマウスＩＬ−１７Ａへのこの低減された結合は、タンパク質の両方がＦａｂ６４６８拡張型エピトープの７位においてヒトＩＬ−１７Ａから異なることと一致する（表１０）。更に、Ｆａｂ６４６８エピトープの一部に近い位置である、ヒトＩＬ−１７Ａの残基４０と４１との間のラット及びマウスＩＬ−１７Ａにおいて、１つのアミノ酸挿入が存在する。

Claims (48)

  1. 単離された抗体又はそのフラグメントであって、前記抗体が、アミノ酸残基５６〜６８（配列番号１５７）及び１００〜１１６（配列番号１５８）において、又は残基Ｌ２６、Ｒ５５、Ｅ５７、Ｐ５９、Ｅ６０、Ｒ６１、Ｙ６２、Ｓ６４、Ｖ６５、Ｗ６７、Ｒ１０１、Ｅ１０２、Ｐ１０３、及びＦ１１０において、配列番号１０５に示される配列を有するヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する、単離された抗体又はそのフラグメント。
  2. 単離された抗体又はそのフラグメントであって、前記抗体が、ヒトＩＬ−１７Ａ上のＰ２ポケット空洞に特異的に結合し、前記Ｐ２ポケット空洞が、配列番号１０５のアミノ酸残基Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２を含む、単離された抗体又はそのフラグメント。
  3. それぞれ配列番号２５、４３、及び６０に示される重鎖ＣＤＲ１、２、及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３）アミノ酸配列、並びにそれぞれ配列番号３、６、及び１８に示される軽鎖ＣＤＲ１、２、及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３）アミノ酸配列を含むモノクローナル抗体と、ヒトＩＬ−１７Ａ結合をめぐって競合する、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメント。
  4. 配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１７Ａの残基と相互作用する、重鎖可変領域パラトープアミノ酸残基を含み、
    ａ．ヒトＩＬ−１７ＡのＲ５５又はＥ５７と相互作用する第１のスレオニン残基と、
    ｂ．ヒトＩＬ−１７ＡのＲ５５又はＥ５７と相互作用するグルタミン残基と、
    ｃ．ヒトＩＬ−１７ＡのＥ５７と相互作用するリジン残基と、
    ｄ．ヒトＩＬ−１７ＡのＰ５９、Ｅ６０、又はＲ１０１と相互作用するチロシン残基と、
    ｅ．ヒトＩＬ−１７ＡのＥ６０、Ｒ１０１、Ｅ１０２、又はＰ１０３と相互作用するフェニルアラニン残基と、
    ｆ．ヒトＩＬ−１７ＡのＥ６０と相互作用するセリン残基と、
    ｇ．ヒトＩＬ−１７ＡのＥ６０と相互作用する第２のスレオニン残基と、を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメント。
  5. 配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１７Ａの残基と相互作用する、軽鎖可変領域パラトープアミノ酸残基を含み、
    ａ．ヒトＩＬ−１７ＡのＬ２６と相互作用する第１のフェニルアラニン残基と、
    ｂ．ヒトＩＬ−１７ＡのＲ５５又はＷ６７と相互作用するアスパラギン酸残基と、
    ｃ．ヒトＩＬ−１７ＡのＰ５９、Ｓ６４、又はＲ１０１と相互作用する第１のチロシン残基と、
    ｄ．ヒトＩＬ−１７ＡのＰ５９、Ｅ６０、Ｒ６１、Ｙ６２、Ｒ１０１、又はＦ１１０と相互作用する第２のフェニルアラニン残基と、
    ｅ．ヒトＩＬ−１７ＡのＶ６５と相互作用する第２のチロシン残基と、を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメント。
  6. 請求項４に記載の重鎖可変領域パラトープ及び請求項５に記載の軽鎖可変領域パラトープを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメント。
  7. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｓ５１、Ｔ５３、Ｆ５６、Ｙ５８、Ｑ９５、Ｌ９６、及びＴ９７から選択される重鎖可変領域パラトープか、
    ｂ．Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｙ３２、Ｄ５０、Ｙ９１、Ｆ９３、及びＦ９４から選択される軽鎖可変領域パラトープか、
    ｃ．Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｓ５１、Ｔ５３、Ｆ５６、Ｙ５８、Ｑ９５、Ｌ９６、及びＴ９７から選択される重鎖可変領域パラトープと、
    ｄ．Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｙ３２、Ｄ５０、Ｙ９１、Ｆ９３、及びＦ９４から選択される軽鎖可変領域パラトープと、
    を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  8. 配列番号１０５に示されるアミノ酸配列を有するヒトＩＬ−１７Ａの残基と相互作用する、重鎖可変領域パラトープアミノ酸残基及び軽鎖可変領域パラトープアミノ酸残基を含み、
    ａ．ヒトＩＬ−１７ＡのＲ１０１と相互作用する前記重鎖可変領域におけるチロシン残基と、
    ｂ．ヒトＩＬ−１７ＡのＲ１０１と相互作用する前記重鎖可変領域におけるフェニルアラニン残基と、
    ｃ．ヒトＩＬ−１７ＡのＹ６２及びＲ１０１と相互作用する前記軽鎖可変領域における第１のフェニルアラニン残基と、
    ｄ．ヒトＩＬ−１７ＡのＬ２６及びＦ１１０と相互作用する前記軽鎖可変領域における第２のフェニルアラニン残基と、
    ｅ．ヒトＩＬ−１７ＡのＲ１０１と相互作用する前記軽鎖可変領域におけるチロシン残基と、を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメント。
  9. 重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｆ５６及びＹ５８から選択される重鎖可変領域パラトープと、
    ｂ．Ｃｈｏｔｈｉａ残基Ｙ９１、Ｆ９３、及びＦ９４から選択される軽鎖可変領域パラトープと、
    を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  10. 重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はそのフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２３、３５、及び５２に示される重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）アミノ酸配列であって、配列番号３５の前記ＨＣＤＲ２が更に、式（Ｉ）：
    Ｘａａ1−Ｉ−Ｉ−Ｐ−Ｗ−Ｆ−Ｇ−Ｘａａ2−Ｔ−Ｘａａ3−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ、（Ｉ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ1が、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ2が、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ3が、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、又はＡｓｐであり得る、アミノ酸配列か、
    ｂ．それぞれ配列番号２３、３５、及び５２に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号３５の前記ＨＣＤＲ２が更に、式（Ｉ）：
    Ｘａａ1−Ｉ−Ｉ−Ｐ−Ｗ−Ｆ−Ｇ−Ｘａａ2−Ｔ−Ｘａａ3−Ｙ−Ａ−Ｑ−Ｋ−Ｆ−Ｑ−Ｇ、（Ｉ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ1が、Ｈｉｓ、Ｍｅｔ、Ａｒｇ、Ｓｅｒ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ2が、Ｔｒｐ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ3が、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、又はＡｓｐであり得る、アミノ酸配列、及び
    それぞれ配列番号１、４、及び７に示される軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）１、２、及び３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）アミノ酸配列か、
    ｃ．それぞれ配列番号２、５、及び１１に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号１１の前記ＬＣＤＲ３が更に、式（ＩＩ）：
    Ｘａａ4−Ｑ−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10、（ＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ4が、Ｈｉｓ又はＧｌｎであり得、
    Ｘａａ5が、Ｐｈｅ又はＧｌｙであり得、
    Ｘａａ6が、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、又はＡｓｎであり得、
    Ｘａａ7が、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ8が、Ｐｒｏ又はＡｒｇであり得、
    Ｘａａ9が、Ｓｅｒ又はＰｒｏであり得、
    Ｘａａ10が、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、又はＬｅｕであり得る、アミノ酸配列か、
    ｄ．それぞれ配列番号２、５、及び１１に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号１１の前記ＬＣＤＲ３が更に、式（ＩＩ）：
    Ｘａａ4−Ｑ−Ｘａａ5−Ｘａａ6−Ｘａａ7−Ｘａａ8−Ｘａａ9−Ｘａａ10、（ＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ4が、Ｈｉｓ又はＧｌｎであり得、
    Ｘａａ5が、Ｐｈｅ又はＧｌｙであり得、
    Ｘａａ6が、Ｔｈｒ、Ｖａｌ、又はＡｓｎであり得、
    Ｘａａ7が、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ8が、Ｐｒｏ又はＡｒｇであり得、
    Ｘａａ9が、Ｓｅｒ又はＰｒｏであり得、
    Ｘａａ10が、Ｈｉｓ、Ｐｈｅ、又はＬｅｕであり得る、アミノ酸配列、及び
    それぞれ配列番号２４、３６、及び５３に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列か、
    ｅ．それぞれ配列番号２４、３６、及び５７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号５７の前記ＨＣＤＲ３が更に、式（ＩＶ）：
    Ｅ−Ｖ−Ｄ−Ｓ−Ｘａａ19−Ｙ−Ｙ−Ｓ−Ｙ−Ｆ−Ｄ−Ｉ、（ＩＶ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ19が、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、又はＴｈｒである、アミノ酸配列か、
    ｆ．それぞれ配列番号２、５、及び１７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号１７の前記ＬＣＤＲ３が更に、式（ＩＩＩ）：
    Ｘａａ11−Ｑ−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ｘａａ18−Ｔ、（ＩＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ11が、Ｇｌｎ又はＴｈｒであり得、
    Ｘａａ12が、Ｓｅｒ又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ13が、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ14が、Ｈｉｓ又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ15が、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ16が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ17が、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、又はＬｅｕであり得、
    Ｘａａ18が、Ａｌａ、Ｌｅｕ、又はＡｓｐであり得る、アミノ酸配列か、
    ｇ．それぞれ配列番号２４、３６、及び５７に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号５７の前記ＨＣＤＲ３が更に、式（ＩＶ）：
    Ｅ−Ｖ−Ｄ−Ｓ−Ｘａａ19−Ｙ−Ｙ−Ｓ−Ｙ−Ｆ−Ｄ−Ｉ、（ＩＶ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ19が、Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、又はＴｈｒである、アミノ酸配列、及び
    それぞれ配列番号２、５、及び１７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号１７の前記ＬＣＤＲ３が更に、式（ＩＩＩ）：
    Ｘａａ11−Ｑ−Ｘａａ12−Ｘａａ13−Ｘａａ14−Ｘａａ15−Ｘａａ16−Ｘａａ17−Ｘａａ18−Ｔ、（ＩＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ11が、Ｇｌｎ又はＴｈｒであり得、
    Ｘａａ12が、Ｓｅｒ又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ13が、Ａｓｎ、Ａｒｇ、Ｖａｌ、又はＴｙｒであり得、
    Ｘａａ14が、Ｈｉｓ又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ15が、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ、Ｌｅｕ、Ａｌａ、又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ16が、Ｐｒｏ、Ｌｅｕ、又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ17が、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｐｈｅ、又はＬｅｕであり得、
    Ｘａａ18が、Ａｌａ、Ｌｅｕ、又はＡｓｐであり得る、アミノ酸配列か、
    ｈ．それぞれ配列番号２５、４６、及び６１に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号４６の前記ＨＣＤＲ２が更に、式（ＶＩ）：
    Ｘａａ21−Ｉ−Ｘａａ22−Ｘａａ23−Ｘａａ24−Ｘａａ25−Ｘａａ26−Ｘａａ27−Ｘａａ28−Ｘａａ29−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ、（ＶＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ21が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、又はＶａｌであり得、
    Ｘａａ22が、Ａｓｎ又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ23が、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、又はＨｉｓであり得、
    Ｘａａ24が、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり得；
    Ｘａａ25が、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ26が、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、又はＡｓｐであり得、
    Ｘａａ27が、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、又はＰｈｅであり得、
    Ｘａａ28が、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、又はＩｌｅであり得、
    Ｘａａ29が、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、又はＡｓｎであり得、
    配列番号６１の前記ＨＣＤＲ３が更に、式（ＶＩＩ）：
    Ｑ−Ｌ−Ｘａａ30−Ｌ−Ｄ−Ｖ、（ＶＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ30が、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、又はＴｈｒであり得る、アミノ酸配列か、
    ｉ．それぞれ配列番号３、６、及び２２に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号２２の前記ＬＣＤＲ３が更に、式（Ｖ）：
    Ｇ−Ｓ−Ｙ−Ｄ−Ｆ−Ｆ−Ｌ−Ｇ−Ｘａａ20−Ｉ−Ｖ、（Ｖ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ20が、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒである、アミノ酸配列か、
    ｊ．それぞれ配列番号２５、４６、及び６１に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号４６の前記ＨＣＤＲ２が更に、式（ＶＩ）：
    Ｘａａ21−Ｉ−Ｘａａ22−Ｘａａ23−Ｘａａ24−Ｘａａ25−Ｘａａ26−Ｘａａ27−Ｘａａ28−Ｘａａ29−Ｙ−Ａ−Ｄ−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ、（ＶＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ21が、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｔｈｒ、又はＶａｌであり得、
    Ｘａａ22が、Ａｓｎ又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ23が、Ｇｌｙ、Ｍｅｔ、Ｌｙｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、又はＨｉｓであり得、
    Ｘａａ24が、Ｌｅｕ、Ａｓｐ、Ａｌａ、Ｈｉｓ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ25が、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり得、
    Ｘａａ26が、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｔｙｒ、又はＡｓｐであり得、
    Ｘａａ27が、Ｈｉｓ、Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、又はＰｈｅであり得、
    Ｘａａ28が、Ｌｙｓ、Ｔｈｒ、又はＩｌｅであり得、
    Ｘａａ29が、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、又はＡｓｎであり得、
    配列番号６１のＨＣＤＲ３が更に、式（ＶＩＩ）：
    Ｑ−Ｌ−Ｘａａ30−Ｌ−Ｄ−Ｖ、（ＶＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ30が、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、又はＴｈｒであり得る、アミノ酸配列、及び
    それぞれ配列番号３、６、及び２２に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号２２の前記ＬＣＤＲ３が更に、式（Ｖ）：
    Ｇ−Ｓ−Ｙ−Ｄ−Ｆ−Ｆ−Ｌ−Ｇ−Ｘａａ20−Ｉ−Ｖ、（Ｖ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ20が、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｔｈｒ、又はＴｙｒである、アミノ酸配列か、
    ｋ．それぞれ配列番号２５、５１、及び５８に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号５１の前記ＨＣＤＲ２が更に、式（ＶＩＩＩ）：
    Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｘａａ31−Ｘａａ32−Ｘａａ33−Ｘａａ34−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｘａａ35−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ、（ＶＩＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ31が、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、又はＨｉｓであり得、
    Ｘａａ32が、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、又はＡｒｇであり得、
    Ｘａａ33が、Ｇｌｙ又はＡｓｐであり得、
    Ｘａａ34が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、又はＡｓｎであり得、
    Ｘａａ35が、Ａｓｐ又はＧｌｙであり得る、アミノ酸配列か、
    ｌ．それぞれ配列番号２５、５１、及び５８に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列であって、配列番号５１の前記ＨＣＤＲ２が更に、式（ＶＩＩＩ）：
    Ｖ−Ｔ−Ｓ−Ｘａａ31−Ｘａａ32−Ｘａａ33−Ｘａａ34−Ｔ−Ｙ−Ｙ−Ａ−Ｘａａ35−Ｓ−Ｖ−Ｋ−Ｇ、（ＶＩＩＩ）に示すように記載され、
    式中、
    Ｘａａ31が、Ａｌａ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、又はＨｉｓであり得、
    Ｘａａ32が、Ａｓｎ、Ｍｅｔ、Ｔｈｒ、又はＡｒｇであり得、
    Ｘａａ33が、Ｇｌｙ又はＡｓｐであり得、
    Ｘａａ34が、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、又はＡｓｎであり得、
    Ｘａａ35が、Ａｓｐ又はＧｌｙであり得る、アミノ酸配列、及び
    それぞれ配列番号３、６、及び１８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列、を含む、単離された抗体又はそのフラグメント。
  11. ＶＨ及びＶＬ領域を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はそのフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２３、２６、及び５２か、
    ｂ．それぞれ配列番号２３、２７、及び５２か、
    ｃ．それぞれ配列番号２３、２８、及び５２か、
    ｄ．それぞれ配列番号２３、２９、及び５２か、
    ｅ．それぞれ配列番号２３、３０、及び５２か、
    ｆ．それぞれ配列番号２３、３１、及び５２か、
    ｇ．それぞれ配列番号２３、３２、及び５２か、
    ｈ．それぞれ配列番号２３、３３、及び５２か
    ｉ．それぞれ配列番号２３、３４、及び５２か、に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はそのフラグメント。
  12. 前記抗体が更に、それぞれ配列番号１、４、及び７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１１に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  13. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、それぞれ配列番号１、４、及び７に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  14. Ｖｈ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２、５、及び８か、
    ｂ．それぞれ配列番号２、５、及び９か、
    ｃ．それぞれ配列番号２、５、及び１０か、に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  15. 請求項１４に記載の単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が更に、それぞれ配列番号２４、３６、及び５３に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  16. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２４、３６、及び５３か、
    ｂ．それぞれ配列番号２４、３６、及び５４か、
    ｃ．それぞれ配列番号２４、３６、及び５５か、
    ｄ．それぞれ配列番号２４、３６、及び５６か、に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  17. 前記抗体が更に、
    ａ．それぞれ配列番号２、５、及び１２か、
    ｂ．それぞれ配列番号２、５、及び１３か、
    ｃ．それぞれ配列番号２、５、及び１４か、
    ｄ．それぞれ配列番号２、５、及び１５か、
    ｅ．それぞれ配列番号２、５、及び１６か、に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１６に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  18. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２、５、及び１２、
    ｂ．それぞれ配列番号２、５、及び１３、
    ｃ．それぞれ配列番号２、５、及び１４、
    ｄ．それぞれ配列番号２、５、及び１５、
    ｅ．それぞれ配列番号２、５、及び１６、に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  19. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２５、３７、及び５８か、
    ｂ．それぞれ配列番号２５、３８、及び５８か、
    ｃ．それぞれ配列番号２５、３９、及び５８か、
    ｄ．それぞれ配列番号２５、４０、及び５８か、
    ｅ．それぞれ配列番号２５、４１、及び５８か、
    ｆ．それぞれ配列番号２５、４２、及び５８か、
    ｇ．それぞれ配列番号２５、４３、及び５８か、
    ｈ．それぞれ配列番号２５、４１、及び５９か、
    ｉ．それぞれ配列番号２５、４１、及び６０か、
    ｊ．それぞれ配列番号２５、４３、及び６０か、
    ｋ．それぞれ配列番号２５、４４、及び５８か、
    ｌ．それぞれ配列番号２５、４５、及び５８か、に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  20. 前記抗体が更に、
    ａ．それぞれ配列番号３、６、及び１８と、
    ｂ．それぞれ配列番号３、６、及び１９と、
    ｃ．それぞれ配列番号３、６、及び２０と、
    ｄ．それぞれ配列番号３、６、及び２１と、に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１９に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  21. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号３、６、及び１８か、
    ｂ．それぞれ配列番号３、６、及び１９か、
    ｃ．それぞれ配列番号３、６、及び２０か、
    ｄ．それぞれ配列番号３、６、及び２１か、に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  22. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２５、４７、及び５８か、
    ｂ．それぞれ配列番号２５、４８、及び５８か、
    ｃ．それぞれ配列番号２５、４９、及び５８か、
    ｄ．それぞれ配列番号２５、５０、及び５８か、に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  23. 前記抗体が更に、それぞれ配列番号３、６、及び１８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項２２に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  24. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、
    ａ．それぞれ配列番号２５、４３、及び６０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列か、
    ｂ．それぞれ配列番号３、６、及び１８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列か、
    ｃ．それぞれ配列番号２５、４３、及び６０に示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列と、
    それぞれ配列番号３、６、及び１８に示されるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列か、
    ｄ．配列番号８６のＶＨか、
    ｅ．配列番号７９のＶＬか、
    ｆ．配列番号８６のＶＨと、
    配列番号７９のＶＬと、を含む、単離された抗体又はフラグメント。
  25. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、配列番号６７、６８、６９、８１、８２、８３、８４、８５、又は８６に示されるアミノ酸配列を有する前記ＶＨを含む、単離された抗体又はフラグメント。
  26. 前記抗体が更に、配列番号７６、７７、７８、７９、又は８０に示されるアミノ酸配列を有する前記ＶＬを含む、請求項２５に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  27. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、配列番号７６、７７、７８、７９、又は８０に示されるアミノ酸配列を有する前記ＶＬを含む、単離された抗体又はフラグメント。
  28. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、配列番号６７、６８、６９、８１、８２、８３、８４、８５、又は８６に示されるアミノ酸配列を有するＶＨと少なくとも９０％同一である前記ＶＨを含む、単離された抗体又はフラグメント。
  29. ＶＨ及びＶＬを含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメントであって、前記抗体が、配列番号７６、７７、７８、７９、又は８０に示されるアミノ酸配列を有する可変領域と少なくとも９０％同一である前記ＶＬを含む、単離された抗体又はフラグメント。
  30. 配列番号９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００に示されるアミノ酸配列を有する抗体重鎖を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメント。
  31. 配列番号８７、８８、８９、９０、又は９１に示されるアミノ酸配列を有する抗体軽鎖を含む、ＩＬ−１７Ａに特異的に結合する単離された抗体又はフラグメント。
  32. 前記抗体が完全なヒト型（human）である、請求項３又は７に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  33. 前記抗体がポリエチレングリコールと結合されている、請求項３又は７に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  34. ＩｇＧ１又はＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項３又は７に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  35. 前記Ｆｃドメインが、前記ＦｃドメインにおけるＳ２２９Ｐ、Ｐ２３５Ａ、又はＬ２３６Ａ突然変異を含む、請求項３又は７に記載の単離された抗体又はフラグメント。
  36. 請求項３又は７に記載の単離された抗体又はフラグメント及び製薬上許容され得る担体を含む、医薬組成物。
  37. 配列番号６７、６８、６９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体重鎖。
  38. 配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８７、８８、８９、９０、又は９１に示されるアミノ酸配列を含む、単離された抗体軽鎖。
  39. 配列番号６７、６８、６９、８１、８２、８３、８４、８５、８６、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００に示されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
  40. 配列番号７６、７７、７８、７９、８０、８７、８８、８９、９０、又は９１に示されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
  41. 請求項３９又は４０に記載の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、ベクター。
  42. 請求項４０に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  43. ａ．ヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７ＲＡを提供する工程と、
    ｂ．ヒトＩＬ−１７Ａを、Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２から成る群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基におけるヒトＩＬ−１７Ａに結合する拮抗物質と接触させる工程と、を含む、ヒトＩＬ−１７ＡのＩＬ−１７ＲＡとの相互作用を阻害する方法。
  44. ａ．ヒトＩＬ１７−Ａ及びＩＬ−１７ＲＡを提供する工程と、
    ｂ．ヒトＩＬ−１７Ａを、Ｖ２２、Ｖ２４、Ｌ２６、Ｉ２８、Ｙ６２、Ｌ９９、Ｒ１０１、Ｆ１１０、及びＬ１１２から成る群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基におけるヒトＩＬ−１７Ａに結合する拮抗物質と接触させる工程と、を含む、ＩＬ−１７Ａ生物活性を阻害する方法。
  45. 前記拮抗物質が、抗体、ペプチド、又は小分子である、請求項４３又は４４に記載の方法。
  46. 請求項３又は７に記載の単離された抗体の治療上の有効量を、炎症性状態の治療を必要とする患者に炎症性状態を治療するうえで充分な時間にわたって投与する工程を含む、炎症性状態を治療する方法。
  47. 前記炎症性状態が、気道、肺、胃腸管、小腸、大腸、結腸、直腸、関節、骨及び滑膜組織、軟骨、上皮、内皮、肝組織、又は皮膚を侵す、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記炎症性状態が、炎症性肺状態、ぜんそく、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性腸疾患、自己免疫疾患、関節リウマチ、乾癬、又は全身性硬化症である、請求項４６に記載の方法。
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