JP2010538019A - 抗インフルエンザ活性を有するオセルタミビル含有ホスホネートコンジナーの合成 - Google Patents

Abstract

新規ホスホネート化合物を記載する。本化合物は、Ｈ１Ｎ１およびＨ５Ｎ１ウイルスの野生型およびＨ２７４Ｙ突然変異体に対するノイラミニダーゼ阻害剤としての活性を有する。本発明はまた、Ｄ−キシロースを介した、既知ノイラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルおよび抗インフルエンザ剤タミフル(登録商標)、ならびに新規ホスホネート化合物へのエナンチオ選択的合成経路も提供する。タミフルおよび非常に強力なノイラミニダーゼ阻害剤タミホスホルの他の効率的で柔軟性のある合成も、１１工程および＞２０％の全体的収率で、容易に入手できる醗酵産物(１Ｓ−ｃｉｓ)−３−ブロモ−３,５−シクロヘキサジエン−１,２−ジオールから達成された。反応中間体のほとんどが、長い精製工程無しで結晶として得られた。重要な変換は、最初のブロモアレーンｃｉｓ−ジヒドロジオールの位置および立体選択的ブロモアミド化、ならびに最後のパラジウム触媒カルボニル化およびホスホニル化を含む。

Description

関連出願
本出願は、２００７年８月３１に出願した米国仮出願番号６０／９６９,４９１；および２００８年４月２８日に出願した米国仮出願番号６１／０４８,５０７を引用により包含し、パリ条約に基づく優先権を主張する。

発明の背景
発明の分野
新規ホスホネート化合物を記載する。この化合物は、Ｈ１Ｎ１およびＨ５Ｎ１ウイルスの野生型およびＨ２７４Ｙ突然変異体に対してノイラミニダーゼ阻害剤としての活性を有する。本明細書はまた、Ｄ−キシロースまたはブロモベンゼンを介する、既知ノイラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルおよび抗インフルエンザ剤タミフル(登録商標)、ならびに新規ホスホネート化合物への２個のエナンチオ選択的合成経路も提供する。

背景
インフルエンザはヒトおよび動物にとって大きな健康問題のままである。(Kaye and Pringle, Clin. Infect. Dis. 2005, 40, 108; およびBeigel et al., N. Engl. J. Med. 2005, 353, 1374)現在、４種の薬剤がインフルエンザ予防および処置に対して承認されている：アマンタジンおよびリマンタジンはＭ２イオンチャネルブロッカーとして働き、一方タミフル(登録商標)(オセルタミビルエチルエステルのリン酸塩、Roche Laboratories, Inc.)およびリレンザ^ＴＭ(ザナミビル、Glaxo Wellcome, Inc.)は、ノイラミニダーゼ(ＮＡ)活性を阻害する。(Moscona, A. N. Engl. J. Med. 2005, 353, 1363; Ward et al., J. Antimicrob. Chemother. 2005, 55, Suppl. Si, 15; およびDe Clercq, E. Nature Rev. Drug Discov. 2006, 5, 1015.)最近の薬剤耐性鳥インフルエンザ感染およびタミフル(登録商標)処置を受けている小児における副作用の報告は、ノイラミニダーゼ阻害剤の新規化学物質がインフルエンザの大流行の脅威と戦うために必要であることを示唆する。安全かつ有効なワクチンが、可能性のある鳥インフルエンザの大流行から防御するために利用可能となる前に、ノイラミニダーゼ阻害剤は、数種の利用可能な治療法の一つである。

ＮＡ阻害剤(ＮＡＩ)は、シアル酸の酵素開裂におけるオキソニウム遷移状態を模倣するために(オキサ)シクロヘキセン骨格を有するようにデザインされている。(von Itzstein, M. et al. Nature 1993, 363, 418; Lew et al., Curr. Med. Chem. 2000, 7, 663; およびRussell et al., Nature 2006, 443, 45)。タミフル(登録商標)(１、スキーム１に示す)は経口投与される抗インフルエンザ剤である。(Kim et al., J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 681; Rohloffet al., J. Org. Chem. 1998, 63, 4545; KarpfおよびTrussardi, J. Org. Chem. 2001, 66, 2044; Harrington et al., Org. Process Res. Dev. 2004, 8, 86; Yeung et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 6310; Fukuta et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 6312; Farina and Brown, Angew. Chem. Int. Ed. 2006, 45, 7330; Mita et al., Org. Lett. 2007, 9, 259; Yamatsugu et al., Tetrahedron Lett. 2007, 48, 1403)肝臓エステラーゼによる加水分解により、活性カルボキシレート、オセルタミビル(２、ＧＳ４０７１としても既知)が現れて、ＮＡの活性部位の３個のアルギニン残基(Ａｒｇ１１８、Ａｒｇ２９２およびＡｒｇ３７１)と相互作用する。(von Itzstein, et al., 1993; Lew et al., 2000, and Russell et al., 2006)。

このホスホネート基は一般にドラッグデザインにおいてカルボキシレートのバイオアイソスターとして使用される。(White et al., J. MoI. Biol. 1995, 245, 623; Streicher et al., Tetrahedron 2001, 57, 8851; Streicher, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004, 14, 361; Schug and Lindner, W. Chem. Rev. 2005, 105, 67; Streicher and Busseb, Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 1047)。既知Ｎ１結晶構造(PDB code: 2HU4)(Russell et al., 2006)を使用した予備的分子ドッキング実験(図１)は、推定ホスホネート阻害剤３ａが、ＮＡ−オセルタミビル複合体に類似する結合ポケットにおいてＣ_３−ペンチルオキシ基、Ｃ_４−アセトアミド基およびＣ_５−アミノ基により発揮される他の相互作用に加えて、ＮＡの３個のアルギニン残基と強く結合することを確認する。カルボキシレート−グアニジニウムイオン対と比較して、ホスホネートイオンは、グアニジニウムイオンと強い静電気相互作用を示す。オセルタミビル／タミフルの合成に関して先に報告された方法(例えば、引用により本明細書に包含させるBischofberger et al.、ＵＳ５,７６３,４８３)は、Ｃ−１カルボキシル基をホスホネート基に変換するのに向かない；それ故、既知および新規両方のノイラミニダーゼ阻害剤を合成するための新規方法が望まれる。

発明の概要
新規ホスホネート化合物を記載する。本化合物は、Ｈ１Ｎ１およびＨ５Ｎ１ウイルスの野生型およびＨ２７４Ｙ突然変異体に対するノイラミニダーゼ阻害剤としての活性を有する。本明細書はまた、Ｄ−キシロースを介する、既知ノイラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルおよび抗インフルエンザ剤タミフル(登録商標)、ならびに新規ホスホネート化合物へのエナンチオ選択的合成経路も提供する。タミフルおよび非常に強力なノイラミニダーゼ阻害剤タミホスホル(Tamiphosphor)の他の効率的で自由度の高い合成法も、１１工程および＞２０％の全体的収率で、容易に入手できる醗酵産物(１Ｓ−ｃｉｓ)−３−ブロモ−３,５−シクロヘキサジエン−１,２−ジオールを原料として達成された。反応中間体のほとんどが、長い精製工程を要せず結晶として得られた。重要な変換は、最初のブロモアレーンｃｉｓ−ジヒドロジオールの位置および立体選択的ブロモアミド化、ならびに最後のパラジウム触媒によるカルボニル化およびホスホニル化を含む。

本発明の一態様によって、治療的有効量の式Ｉ

〔式中、ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
および薬学的担体を含む組成物を開示する。

本発明の一態様によって、治療的有効量の：

の少なくとも１個および薬学的担体を含む組成物が開示される。

本発明の一態様によって、図３−５のスキームの少なくとも１つに従う、式Ｉ：

〔ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
の化合物の製造方法が開示される。この方法の生成物は同様に意図される。

本発明の一態様によって、治療的有効量の式Ｉ：

〔式中、ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
を有する化合物を提供することを含み、ここで、該化合物は、ノイラミニダーゼの活性を阻害するために生物に投与するようにデザインされている。

本発明の一態様によって、治療的有効量の：

の少なくとも１個を含む組成物が開示され、ここで、該組成物は、ノイラミニダーゼの活性を阻害するために生物に投与するようにデザインされている。

一つの実施態様において、本発明は、式(Ｉ)：

〔式中、ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノールアンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
の化合物を提供する。

具体的局面において、本化合物は：

である。

他の具体的局面において、本化合物は：

である。

さらなる具体的局面において、本化合物は：

である。

他の具体的局面において、本化合物は：

である。

他の具体的局面において、本化合物は：

である。

本開示の他の実施態様は、式：

の化合物を提供する。

本開示の他のものは、式：

の化合物を提供する。

一つの実施態様において、本発明は、化合物(Ｉ)〔式中、ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノールアンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕；３、３ａ、３ｂ、１３ａ、および１３ｂの化合物いずれか１個、および薬学的に許容される担体を含む組成物を提供する。

他の実施態様において、本発明は式(Ｉ)：

〔式中、ＡはＣＯ_２Ｒ、またはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
の化合物の製造方法を提供し；該方法は：

(ａ)Ｄ−キシロースをキラル前駆体として使用して中間体化合物(７)：

〔式中、ＥはＣＯ_２ＲまたはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＣ１−Ｃ６アルキルおよびアリールから選択される。〕
を製造し；

(ｂ)中間体化合物(７)を分子内ホーナー・ワズワース・エモンズ反応が起きるように処理して、中間体化合物(８)：

〔式中、ＥはＣＯ_２ＲまたはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＣ１−Ｃ６アルキルおよびアリールから選択される。〕
を形成させ；

(ｃ)中間体(８)をジフェニルホスホリルアジドで処理して、ヒドロキシ基を立体配置の倒置を伴いアジド基に置換して、中間体(９)：

〔式中、ＥはＣＯ_２ＲまたはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＣ１−Ｃ６アルキルおよびアリールから選択される。〕
を形成させ；

(ｄ)中間体化合物(９)をＴｆ_２Ｏ、塩基およびクラウンエーテルで処理してヒドロキシ基を倒置させて、中間体化合物(１０)：

〔式中、ＥはＣＯ_２ＲまたはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ＲおよびＲ'は独立してＣ１−Ｃ６アルキルおよびアリールから選択される。〕
を形成させ；そして

(ｅ)中間体(１０)を処理して、式(Ｉ)の化合物を得る
工程を含む。

本発明の他の実施態様は、化合物(Ｉ)〔式中、ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノールアンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕；３、３ａ、３ｂ、１３ａ、および１３ｂの何れか一つの化合物をノイラミニダーゼと接触させることを含む、該ノイラミニダーゼの活性を阻害する方法を提供する。

一つの局面において、ノイラミニダーゼはインビボでのインフルエンザノイラミニダーゼである。他の局面において、ノイラミニダーゼはインビトロでのインフルエンザノイラミニダーゼである。

他の実施態様において、本発明は、処置を必要とする患者におけるインフルエンザの処置方法を提供し、該方法は治療的有効量の化合物(Ｉ)〔式中、ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして、Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕；３、３ａ、３ｂ、１３ａ、および１３ｂのいずれか一つを含む組成物を投与することを含む。一つの局面において、本組成物は薬学的に−許容される担体をさらに含む。

図面の簡単な説明
本開示の上記特性および目的は添付の図面と組み合わせて以下の記載を参照したときより明白となり、図面においては同様の参照番号が同様の要素を表し、それは次のものを記載する：

インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ(Ｎ１亜型)の活性部位におけるオセルタミビル２(Ａ)およびホスホネート化合物３ａ(Ｂ)の分子モデルを示す； 化合物１、３、３ｂ、３ｃ、１３ｂ、および１３ｃの分子モデルを示す； タミフル(登録商標)１、オセルタミビル２、グアニジンアナログ１３ａ、およびホスホネートコンジナー３、３ｂおよび１３ｂの合成の新規経路を示す； タミフル(登録商標)１およびホスホネートコンジナータミホスホル３の合成の新規経路を示す； タミフル(登録商標)１およびホスホネートコンジナータミホスホル３の合成の新規経路を示す； タミフル(登録商標)１およびホスホネートコンジナータミホスホル３、および１３ｂの合成の新規経路を示す； ホスホネートコンジナー３ｃの合成の新規経路を示す； ホスホネートコンジナー１３ｃの合成の新規経路を示す； １０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、および１０mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、０.１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、０.０１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＮＩＢＲＧ−１４(Ｈ５Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、１０mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＮＩＢＲＧ−１４(Ｈ５Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＮＩＢＲＧ−１４(Ｈ５Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、０.１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＮＩＢＲＧ−１４(Ｈ５Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、０.０１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； マウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す１０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、の薬剤投与量で処置された１０mg／kg／日； １０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、０.１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； １０ＭＬＤ_５０のＡ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルスを接種され、０.０１mg／kg／日の薬剤投与量で処置されたマウスの生存率(パネルａ)および平均体重の変化(パネルｂ)を示す； 化合物５の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物５の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物６の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物６の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物７ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物７ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物８ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物８ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物９ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物９ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１０ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１０ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１０ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１０ｂの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１０ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１１ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１１ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１１ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１１ｂの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１１ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１、タミフル(登録商標)の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１、タミフル(登録商標)の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１、タミフル(登録商標)の^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物２、オセルタミビルの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物２、オセルタミビルの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物３の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物３の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物３の^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１２ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１２ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１２ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１２ｂの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１２ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物１３ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１３ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１３ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１３ｂの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１３ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１４ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１４ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１４ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１４ｂの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１４ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物２０の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２０の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２２の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２２の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２３の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２３の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２４の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２４の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２５の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２５の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２６の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２６の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２７の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２７の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２９の^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物２９の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３１ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３１ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３１ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３１ｂの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３１ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(２０２MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３ｃの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物３ｃの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物３１ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(２４２MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１３ｃの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物１３ｃの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、Ｄ_２Ｏ)を示す； 化合物３ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトル(６００MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３ｂの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトル(１５０MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す； 化合物３ｂの^３１Ｐ ＮＭＲスペクトル(１６２MHz、ＣＤＣｌ_３)を示す。

詳細な記載
本発明の実施態様に対する次の詳細な記載において、添付の図面を引用し、そこでは、同様の参照が同様の要素を表し、本発明を実施し得る一つの特異的実施態様を説明の目的で示す。これらの実施態様は当業者が本発明を実施することができるのに十分詳細に記載されており、他の実施態様を利用してよく、そして、論理学的な、機械的な、電気的な、機能的な、組成的な、および他の変更を本明細書の範囲から逸脱することなく成し得ることは理解すべきである。次の詳細な記載は、それ故、限定の意味で解釈してはならず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ定義される。本明細書で使用する、用語“または”は、論理学的分離として定義されるものであると理解すべきであり、明示的にそのように示されているか、または“xor(排他的または)”として記されていない限り、排他的分離を示すものではない。

本発明は、既知ノイラミニダーゼ阻害剤オセルタミビルおよび抗インフルエンザ剤タミフル(登録商標)、ならびに新規ホスホネートコンジナー(congers)への新規合成経路を提供する。Ｄ−キシロースを、既知および新規活性ノイラミニダーゼ阻害剤の合成のキラル前駆体として使用した。新規ホスホネートコンジナー(congers)は、Ｈ１Ｎ１およびＨ５Ｎ１ウイルスの野生型およびＨ２７４Ｙ突然変異体ノイラミニダーゼを阻害することにより、タミフル(登録商標)よりも良い抗インフルエンザ活性を有する。

タミフル現在の工業的合成は、出発物質として天然に存在するシキミ酸に頼る。しかしながら、一定純度でのシキミ酸の入手可能性が問題を引き起こし得る。この合成はまた、起爆性アジド試薬および中間体の操作の欠点も有する。タミフルのいくつかの新規合成法は、シキミ酸非依存的方法に着手した。タミフルにおけるシクロヘキセンカルボキシレートの中心構造を確率するために、種々のタイプのディールス・アルダー反応が適用されている。例えば、タミフル合成用キラル中間体を得るために、フランとアクリレートの間のディールス・アルダー反応、続いて酵素的分割が行われている。同様に、１−トリメチルシリルオキシ−１,３−ブタジエンと塩化フマリルのディールス・アルダー反応がこの中心構造を構築するために使用されている；しかしながら、鍵となる中間体のラセミ混合物のキラルＨＰＬＣによる分離がこの一連の合成では必要である。あるいは、触媒的エナンチオ選択的ディールス・アルダー反応が、タミフル合成のための必要なキラルシクロヘキセンカルボキシレートを提供する。

一つの実施態様において、本発明は、タミフル、オセルタミビル、種々のホスホネートコンジナーおよびグアニジンアナログを、合理的な高収率(５.２−１３.５％)でエナンチオ選択的合成する新規合成方法を提供する。本合成経路を図３(スキーム１)に示す。分子内ホーナー・ワズワース・エモンズ反応を行って、シクロヘキセンカルボキシレート８ａおよびホスホネート８ｂを得た。光延の方法に従うジフェニルホスホリルアジドでの処理により、８ａ／８ｂのヒドロキシル基の、立体配置の倒置を伴うアジド基への置換は成功した。一つの局面において、有害なナトリウムアジド試薬をこの方法で避けた。好ましい局面において、本合成スキームは遅い官能基化を可能にし、これは医化学的視点からこのスキームを魅力的とする。

本新規合成スキームを図３に示す。図３に記載する試薬および工程は次の通りである：(ａ)Ｍｅ_３ＣＣＯＣｌ、ピリジン、０℃、８時間；８９％。(ｂ)ＰＤＣ、Ａｃ_２Ｏ、還流、１.５時間；ＨＯＮＨ_２−ＨＣｌ、ピリジン、６０℃、２４時間；８２％。(ｃ)ＬｉＡｌＨ_４、ＴＨＦ、０℃、次いで還流１.５時間；８８％。(ｄ)Ａｃ_２Ｏ、ピリジン、２５℃、３時間；ＨＣｌ／１,４−ジオキサン(４Ｍ)、ＢｎＯＨ、トルエン、０−２５℃、２４時間；８５％。(ｅ)２,２'−ジメトキシプロパン、トルエン、触媒ｐ−ＴｓＯＨ、８０℃、４時間；９０％。(ｆ)Ｔｆ_２Ｏ、ピリジン、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−１５℃、２時間；ＥｔＯ_２ＣＣＨ_２ＰＯ(ＯＥｔ)_２またはＨ_２Ｃ[ＰＯ(ＯＥｔ)_２]_２、ＮａＨ、触媒１５−クラウン−５、ＤＭＦ、２５℃、２４時間；７ａについて８０％および７ｂについて７３％。(ｇ)Ｈ_２、Ｐｄ／Ｃ、ＥｔＯＨ、２５℃、２４時間；ＮａＨ、ＴＨＦ、２５℃、１時間、８ａについて８３％；またはＮａＯＥｔ、ＥｔＯＨ、２５℃、５時間、８ｂについて８０％。(ｈ)(ＰｈＯ)_２ＰＯＮ_３、(ｉ−Ｐｒ)Ｎ＝Ｃ＝Ｎ(ｉ−Ｐｒ)、ＰＰｈ_３、ＴＨＦ、２５℃、４８時間。(ｉ)ＨＣｌ、ＥｔＯＨ、還流、１時間；９ａについて８３％および９ｂについて７４％。(ｊ)Ｔｆ_２Ｏ、ピリジン、ＣＨ_２Ｃｌ_２、−１５乃至−１０℃、２時間；ＫＮＯ_２、１８−クラウン−６、ＤＭＦ、４０℃、２４時間；１０ａについて７０％および１０ｂについて７１％。(ｋ)Ｃｌ_３ＣＣ(＝ＮＨ)ＯＣＨＥｔ_２、ＣＦ_３ＳＯ_３Ｈ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、２５℃、２４時間；１１ａについて７８％および１１ｂについて８２％。(ｌ)Ｈ_２、リンドラー触媒、ＥｔＯＨ、２５℃、１６時間；３ｂについて８５％。(ｍ)Ｈ_３ＰＯ_４、ＥｔＯＨ、４０℃、１時間；１について９１％。(ｎ)ＫＯＨ、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ、０−２５℃、１時間；２について８８％および１４ａについて８１％。(ｏ)ＴＭＳＢｒ、ＣＨＣｌ_３、２５℃、２４時間；水性ＮＨ_４ＨＣＯ_３、凍結乾燥；３について８５％(アンモニウム塩として)、１３ｂについて７２％および１４ｂについて７５％。(ｐ)Ｎ,Ｎ'−ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)チオウレア、ＨｇＣｌ_２、Ｅｔ_３Ｎ、ＤＭＦ、０−２５℃、１０−１６時間；１２ａについて７８％および１２ｂについて５８％。(ｑ)ＴＦＡ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、０℃、１時間；１３ａについて８８％。個々の工程の試薬、反応条件および収率は下記の実験セクションでさらに詳細に記載する。

他の方法において、タミフル合成の基盤となる方法として働く、１,４−シクロヘキサジエンのメソ−アジリジン誘導体を製造し、トリメチルシリルアジドでの触媒的非対称開環反応に付した。置換イソフタル酸ジエステルのＲｕ−Ａｌ_２Ｏ_３触媒水素化は、全ての置換基およびジエステルがｃｉｓ−配置である、シクロヘキサン中心構造を提供する。次いで、このメソ−ジエステルを光学活性一酸に酵素的に加水分解し、これは、タミフル合成の鍵となる中間体として働く。タミフルの合成は、(１Ｒ,２Ｓ)−２−フェニルシクロヘキサノールに由来するジアステレオマーのＨＰＬＣ分離により得られる、シクロヘキサジエンカルボキシレートのキラルカチオン性鉄複合体でのアミノ化で出発することにより証明された。最後に、５−オキサ−ビシクロ[３.２.１]ヘキセン−４−オンのパラジウム触媒非対称アリル位アミノ化が、タミフル合成の鍵となる工程として証明された。

本発明者らは、安価な出発物質としてＤ−キシロースを使用するタミフルおよびタミホスホルの合成を発見した。標的化合物のシクロヘキセン中心構造を、分子内ホーナー・ワズワース・エモンズ反応により構築する。この柔軟性のある合成方法はタミフルおよびタミホスホルの両方を合理的な全体的収率(５−１３％)で提供するが、長い工程(１８−１９反応工程)は大規模合成には理想的ではない。タミフルおよびタミホスホルへの、より簡潔で実際的な合成経路は、図４に示す通りに表された。

この方法において、エナンチオ純粋ブロモアレーンｃｉｓ−１,２−ジヒドロジオール(１７)出発物質は市販されており、大規模でブロモベンゼンの微生物酸化により容易に製造できる。その官能性の独特な組み合わせにより、ハロアレーンｃｉｓ−ジヒドロジオール類は、種々の天然産物および関連分子の合成への適用が成功している。加えて、臭素原子を、合成経路の後の段階で、カルボキシレートおよびホスホネートを含む種々の官能基に変換できる。故に、この合成スキームは、タミフル、タミホスホルおよび他の誘導体に至る重要な点として、一般的中間体、例えば、２６および２９を融通の利くものにする。このような後の官能基化は、医化学の観点から特に魅力的である。

この合成計画に基づき、(１Ｓ,２Ｓ)−ｃｉｓ−ジオール１７のアセトニドを、ＣＨ_３ＣＮ中０℃でのＮ−ブロモアセトアミド(ＮＢＡ)とのＳｎＢｒ_４触媒ブロモアセトアミド化反応に付し、図４に示す通りの位置および立体選択的方法でブロモアミド１９を得た。１９の構造をＸ線回折解析により確認した(実施例３１以下参照)。この反応は、余り立体障害を受けていない面でブロモニウムイオンの形成と、続くアリルのＣ−５位でアセトアミドの選択的背面攻撃により進行するようである。ＬＨＭＤＳ(１.１当量)存在下で、ブロモアミド１９はアジリジン２０に変化し、それは３−ペンタノールとのＢＦ_３介在開環反応を受け、７３％収率で化合物２２を得た。脱保護後、ｃｉｓ−ジオール２３をα−アセトキシイソブチリルブロマイドで処理して、対応するｔｒａｎｓ−２−ブロモシクロヘキシルアセテート２４を得た。先の例と同様にして、この反応は、アセトキソニウムイオンの中間体形成、およびアリルのＣ２位でのブロマイドイオンの背面攻撃を含むはずである。２４と３当量のＬｉＢＨＥｔ_３(Super-Hydride(登録商標))の反応は、Ｃ１およびＣ２位のアセチル基と臭素原子の同時の還元により、綺麗な生成物２５を８２％収率(２３から)で提供した。光延の方法に従うジフェニルホスホリルアジド(ＤＰＰＡ)での処理により、２５におけるヒドロキシル基の立体配置の倒置を伴うアジド基での置換に成功し、２６を８４％収率で得た。少量(２％)のジエン２７もまた水分子の除去により産生される副産物として見られた。中枢の化合物２６を、有機金属カップリング反応に付して、所望のカルボキシルおよびホスホニル基を挿入した。故に、２６とＮｉ(ＣＯ)_２(ＰＰｈ_３)_２のＥｔＯＨ存在下での反応により、エチルエステル２８ａを８１％収率で得た。他方で、２６のジエチルホスファイトでのホスホニル化をＰｄ(ＰＰｈ_３)_４の触媒により達成し、ホスホネート２８ｂを８３％収率で得た。２８ａおよび２８ｂのアジド基のアミンへの還元後、タミフルおよびタミホスホルを、我々の先に報告した方法に従い合成した。

上記合成方法は、無アジド工程によりさらに改善された。我々は、テトラブチルアンモニウムシアネートが、図５に示す通りアミン官能基の良好な供給源であることを発見した。図５に示す通り、アルコール２５をＢｕ_４ＮＯＣＮ／ＰＰｈ_３／ＤＤＱと反応させてイソシアネート中間体を得て、それを続いてｔ−ＢｕＯＨで処理して、カルバメート２９を７８％収率で得た。ジエチルホスファイトとのＰｄ触媒カップリング反応を行い、ホスホネート３１ｂを形成し、そしてタミホスホルを、穏やかな条件下でのＴＭＳＢｒでのＢｏｃ基とエチル基の同時の除去により合成した。化学量論量の毒性Ｎｉ(ＣＯ)_２(ＰＰｈ_３)_２の使用を避けるため、２９のＰｄ触媒カルボニル化を試みたが失敗した。あるいは、ブロマイド２９をより反応性のアイオダイドアナログ３０に変換し、Ｐｄ触媒カルボニル化を高収率で成功させ、カルボキシレート３１ａを得た。最後に、３１ａをＨ_３ＰＯ_４で処理して、ワン・ポット操作でのＢｏｃ基の開裂およびリン酸塩形成を介して、タミフルを得た。

結論として、タミフルおよびタミホスホルを、ブロモベンゼンの微生物酸化により供給できる、容易に入手可能なブロモアレーンｃｉｓ−ジオール１９を使用して、１１工程連続反応を介して、２１−２６％の全体的収率で合成する。全ての反応は、有害な可能性のある中間体または毒性試薬を使用せずに行う。反応のほとんどが、位置および立体選択的方法で行われて結晶生成物をもたらすため、単離工程は相対的に単純かつ費用効果が高い。グラム規模での合成しか本試験では証明されていないが、タミフルおよびタミホスホルの大規模合成は、抗インフルエンザ剤の開発のために将来有望である。

ホスホネートジエステルの塩基性加水分解を使用してホスホネートモノエステル類を得ることは、当分野で既知である。故に、ホスホネートモノエステル類が、本発明の一局面において意図される。モノエステル類の合成は、化合物３ｃについて図７におよび化合物１３ｃについて図８に示す。これらの各々が、化合物３ｃおよび１３ｃの各々について出発化合物３１ｂまたは１２ｂから、ここに記載の他の合成経路を使用して容易に合成される。

本発明の組成物は、所望によりここに記載の化合物の塩、特に、例えば、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、Ｋ^＋、Ｃａ^＋＋およびＭｇ^＋＋を含む薬学的に許容される非毒性塩を含む。かかる塩は、アルカリおよびアルカリ土類金属イオンまたはアンモニウムおよび４級アミノイオンのような適当なカチオンと酸アニオン部分の組み合わせに由来するものを含んでよい。

金属塩は、金属水酸化物と本発明の化合物の反応により製造し得る。この方法で製造される金属の例は、Ｎａ^＋、Ｌｉ^＋、Ｋ^＋を含む塩である。

加えて、塩は、塩基性中心、典型的にアミン類、または酸性基への、ある種の有機および無機酸、例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ_２ＳＯ_４、または有機スルホン酸の酸付加により形成し得る。最後に、ここに記載の組成物は、本発明の化合物を、そのイオン化していない、ならびに双性イオン形態で、および水和物におけるような化学量論量の水との組み合わせで含むことは理解すべきである。本発明の他の局面は、ノイラミニダーゼを含む疑いのあるサンプルを、本発明の化合物で処理する工程を含む、ノイラミニダーゼの活性を阻害する方法に関する。

本発明の化合物を、慣例に従い選択される、慣用の担体および賦形剤と製剤する。錠剤は賦形剤、流動促進剤、増量剤、結合剤などを含む。水性製剤は滅菌形態で製造し、経口投与以外での送達が意図されるときは等張である。全ての製剤は、所望により、明示によりその全体を本明細書に包含させる“Handbook of Pharmaceutical Excipients”(1986)に記載のもののような賦形剤を含む。賦形剤は、アスコルビン酸および他の抗酸化剤、ＥＤＴＡのようなキレート化剤、デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロースのような炭水化物、ステアリン酸などを含む。製剤のｐＨは、約ｐＨ３〜約ｐＨ１１の範囲であるが、通常約ｐＨ７〜ｐＨ１０である。

１種以上の本発明の化合物(以後活性成分と呼ぶ)を、処置する状態に適当な任意の経路で投与する。適当な経路は、経口、直腸、経鼻、局所(バッカルおよび舌下を含む)、膣および非経腸(皮下、筋肉内、静脈内、皮内、期間内および硬膜外を含む)などを含む。好ましい経路は、例えば受け手の状態により変わり得ることは認識されよう。

本活性成分を単独で投与することは可能であるが、それらを医薬製剤として提供することが好ましい。本発明の製剤は、獣医学的およびヒト使用の両方のためであるが、少なくとも１種の上記で定義の活性成分を、１種以上の許容される担体および所望により他のと共に含む。担体は、製剤中の他の成分と融和性であり、そして受け手に生理学的に無害である点で、“許容される”ものでなければならない。

本製剤は、上記投与経路に適するものを含む。本製剤は、簡便には単位投与形態で提供されてよく、そして薬学の分野で既知の任意の方法により製造され得る。技術および製剤は、一般に、Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, Pa.)に見られる。かかる方法は、活性成分と、１種以上の補助的成分から成る担体を混合させる工程を含む。一般に、本製剤は、活性成分と液体担体または粉砕した固体担体または両方を混合させ、次いで、必要であれば、製品を成形することにより製造する。

経口投与に適する本発明の製剤は、各々予定量の活性成分を含むカプセル剤、カシェ剤または錠剤のような分離した単位として；散剤または顆粒剤として；水性液体または非水性液体中の溶液または懸濁液として；または水中油型液体エマルジョンまたは油中水型液体エマルジョンとして製造する。活性成分はまたボーラス、舐剤またはペーストとして提供してもよい。

錠剤は、所望により１種以上の補助的成分と共に、圧縮または鋳造することにより製造する。圧縮錠剤は、所望により結合、平滑剤、不活性希釈剤、防腐剤、表面活性剤または分散剤と混合した、粉末または顆粒のような自由に流動する形の活性成分を、適当な機械で圧縮することにより製造し得る。鋳造された錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末活性成分の混合物を適当な機械で鋳造することにより製造し得る。錠剤は、所望によりコーティングしてよく、または割線を入れてよく、そして所望により活性成分の遅延または制御放出を提供するように製剤する。

眼または他の外部組織、例えば口腔および皮膚の感染に対して、本製剤は、好ましくは、例えば、０.０７５〜２０％ｗ／ｗ(０.１％〜２０％の範囲の活性成分を、０.６％ｗ／ｗ、０.７％ｗ／ｗなどのように０.１％ｗ／ｗずつ増加させたものを含む)、好ましくは０.２〜１５％ｗ／ｗおよび最も好ましくは０.５〜１０％ｗ／ｗの量の、活性成分を含む、局所軟膏剤またはクリーム剤として適用する。軟膏剤として製剤するとき、活性成分を、パラフィン性または水混和性軟膏基剤と共に用い得る。あるいは、活性成分を、水中油型クリーム基剤と共にクリーム剤として製剤し得る。

望むならば、クリーム基剤の水性相は、例えば、少なくとも３０％ｗ／ｗの多価アルコール、すなわちプロピレングリコール、ブタン１,３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール(ＰＥＧ ４００を含む)およびその混合物のような２個以上のヒドロキシル基を含むアルコールである。局所製剤は、望ましくは、皮膚または他の患部への活性成分の吸収または浸透を促進する化合物を含み得る。かかる皮膚浸透促進剤の例は、ジメチルスルホキシドおよび関連アナログを含む。

本発明のエマルジョンの油相は、既知方法で既知成分から構成され得る。本相は乳化剤(エマルジェントとしても既知)のみを含み得るが、少なくとも１種の乳化剤と、脂肪または油との、または脂肪と油の両方との混合物を含むことが望ましい。好ましくは、親水性乳化剤は、安定化剤として働く親油性乳化剤と共に包含される。油および脂肪の両方を含むことも好ましい。合わせて、安定化剤(複数も可)を伴ってまたは伴わないで乳化剤(複数も可)は、いわゆる乳化蝋を構成し、この蝋は油および脂肪と共に、クリーム製剤の油性分散相を形成するいわゆる乳化軟膏(emulsifying ointment)基剤を構成する。

本発明の製剤への使用に適するエマルジェントおよびエマルジョン安定化剤は、Ｔｗｅｅｎ^ＴＭ ６０、Ｓｐａｎ^ＴＭ ８０、セトステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリルおよびラウリル硫酸ナトリウムを含む。

本製剤のための適当な油または脂肪の選択は、所望の美容特性の達成に基づく。クリーム剤は好ましくは、チューブまたは他の容器からの漏れを避けるために適当な稠度の、ベタベタせず、染色されておらず、そして洗える製品であるべきである。直鎖または分枝鎖、一または二塩基性アルキルエステル類、例えばジイソアジペート、ステアリン酸イソセチル、ココナッツ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、ミリスチン酸イソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２−エチルヘキシルまたはCrodamol CAPとして既知の分枝鎖エステル類の混合物を使用してよく、後三者が好ましいエステル類である。これらを必要な特性によって、単独でまたは組合せで使用してよい。あるいは、高融点脂質、例えば白色軟パラフィンおよび／または液体パラフィンまたは他の鉱油を使用する。

眼への局所投与に適当な製剤は、活性成分が適当な担体、特に活性成分用水性溶媒に溶解または懸濁された点眼剤を含む。活性成分は、好ましくはかかる製剤中に０.５〜２０％、有利には０.５〜１０％、特に約１.５％ｗ／ｗの濃度で存在する。

口腔への局所投与に適当な製剤は、香味基剤、通常スクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ剤；活性成分を不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア中に含むトローチ剤；および適当な液体担体中に活性成分を含む口腔洗浄剤を含む。

直腸投与用製剤は、例えばカカオバターまたはサリチレートを含む適当な基剤との坐薬として提供し得る。

肺内または経鼻投与に適当な製剤は、例えば０.１〜５００ミクロンの粒子径(０.５、１、３０ミクロン、３５ミクロンなどのように数ミクロンずつ増える、０.１〜５００ミクロンの範囲の粒子径を含む)を有し、これを、鼻道を通した急速吸入により、または肺胞嚢に到達するように口腔を通した吸入により投与する。適当な製剤は、活性成分の水性または油性溶液を含む。エアロゾルまたは乾燥粉末投与に適当な製剤は、慣用法に従い製造でき、そして、現在までＡ型またはＢ型インフルエンザ感染の処置または予防に使用される化合物のような他の治療剤と共に送達してよい。

膣投与に適当な製剤は、活性成分に加えて、適当であることが当分野で既知のような担体を含む、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡沫剤またはスプレー製剤として提供し得る。

非経腸投与に適当な製剤は、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤(bacteriostats)および製剤を意図される受け手の血液と等張にする溶質を含み得る水性および非水性滅菌注射溶液；および懸濁化剤および濃化剤を含み得る水性および非水性滅菌懸濁液を含み得る。

製剤は、単位投与量または多回投与量容器、例えば密閉アンプルおよびバイアルで提供され、使用直前に注射用の滅菌液体担体、例えば水の添加のみを必要とするフリーズドライ(凍結乾燥)条件で貯蔵し得る。即時の注射溶液および懸濁液が、先に記載の性質の滅菌粉末、顆粒および錠剤から製造される。好ましい単位投与量製剤は、上記のような、活性成分の１日量または１日量の分割単位(unit daily sub-dose)を含むもの、またはその適当な画分である。

上に特に記載した成文に加えて、本発明の製剤は、当該製剤の種類を考慮して当分野で慣用の多の成分を含んでよく、例えば、経口投与に適するものは香味剤を含み得ることは理解すべきである。

本発明は、少なくとも１種の上記で定義の活性成分を獣医学担体と共に含む獣医学組成物を提供する。獣医学担体は本組成物の投与の目的で有用な物質であり、他の点で不活性であるか、または獣医学分野で許容され、活性成分と融和性の固体、液体またはガス状物質であり得る。これらの獣医学組成物は、経口的、非経腸的または任意の他の所望の経路で投与してよい。本発明の化合物は、活性成分として１種以上の本発明の化合物を含む制御放出医薬製剤(“制御放出製剤”)を提供し、ここで、該活性成分の放出は、少ない頻度での投与を可能にするため、またはある活性成分の薬物動態学的または毒性プロファイルを改善するために調節および制御される。活性成分の有効な用量は、少なくとも処置する状態の性質、毒性、本化合物を予防的に(低用量)使用するのか能動的インフルエンザ感染に対して使用するか、送達方法、および医薬製剤に依存し、慣用の用量漸増試験を使用して医師により決定される。約０.０００１〜約１００mg／kg体重／日が予測できる。典型的に、約０.０１〜約１０mg／kg体重／日である。より典型的に、約０.０１〜約５mg／kg体重／日である。より典型的に、約０.０５〜約０.５mg／kg体重／日である。例えば、吸入について、体重約７０kgの成人についての候補１日量は、１mg〜１０００mg、好ましくは５mg〜５００mgであり、１回または複数回投与量により摂取し得る。

一つの実施態様において、本発明の活性成分を他の活性成分と組み合わせても使用する。かかる組み合わせは、処置すべき状態、複数成分の交差反応性および組合せの薬特性(pharmaco-properties)に基づき選択する。例えば、呼吸器系のウイルス感染、特にインフルエンザ感染を処置するとき、本発明の組成物を抗ウイルス剤(例えばアマンタジン、リマンタジンおよびリバビリン)、粘液溶解剤、去痰剤、気管支拡張剤(bronchialdilators)、抗生物質、解熱剤、または鎮痛剤と組み合わせる。通常、抗生物質、解熱剤、および鎮痛剤を本発明の化合物と共に投与する。

本発明の他の実施態様は、ここに記載の化合物のインビボ代謝産物を、かかる産物が新規であり、先行文献から明白でない範囲において含む。かかる産物は、投与化合物の、主に酵素処理による、例えば酸化、還元、加水分解、アミド化、エステル化などに由来し得る。従って、本発明は、本発明の化合物を哺乳動物とその代謝産物が生じるのに十分な時間接触させることを含む工程により製造される、新規で明白ではない化合物を含む。かかる産物は、典型的に放射標識された(例えば^１４Ｃまたは^３Ｈ)本発明の化合物により、それを非経腸的に検出可能な用量で(例えば約０.５mg／kgより多い)、ラット、マウス、モルモット、サルのような動物、またはヒトに投与し、代謝が起こるのに十分な時間を与え(典型的に約３０秒〜３０時間)、そしてその変換産物を尿、血液または他の生物学的サンプルから単離することにより同定する。これらの産物は、それらが標識されているため(他のものは代謝産物中に残るエピトープと結合できる抗体の使用により単離される)、単離が容易である。代謝産物構造を通常の方法で、例えばＭＳまたはＮＭＲ分析により行う。一般に、代謝産物の分析は、当業者に周知の慣用の薬剤代謝試験と同じ方法で行う。変換された産物は、それらが他にインビボで見られない限り、それら自体がノイラミニダーゼ阻害活性を有していなくてさえ、本発明の化合物の治療投与量の診断的アッセイに有用である。

新規ホスホネートコンジナーのプロドラッグが意図される。極性ホスホネートおよびグアニジニウム基の両方を、所望により当分野で既知の技術によりさらに官能化して、薬物動態学的および／または薬力学的特性を増強し得る。例えば、プロドラッグ、例えばアシルオキシメチル−およびアリールホスホネートエステル類の製剤および使用は、バイオアベイラビリティの増強のために利用し得る(Krise and Stella, Adv. Drug Deliv. Rev. 1996, 19, 287)。

本発明の一局面において、ノイラミニダーゼを含む疑いのあるサンプルは、生存生物；組織または細胞培養；生物学的物質サンプル(血液、血清、尿、脳脊髄液、涙、痰、唾液、組織サンプルなど)のような生物学的サンプル；研究室サンプル；食物、水、または空気サンプル；細胞、特に所望の糖タンパク質を合成する組み換え細胞の抽出物のようなバイオプロダクト(bioproduct)サンプル；などのような天然のまたは人工の物質を含む。典型的に、サンプルは、ノイラミニダーゼを産生する生物を、しばしばウイルスのような病原生物を含むことが疑われる。サンプルは、水および有機溶媒／水混合物を含む任意の媒体に含まれていてよい。サンプルは、ヒトのような生存生物、および細胞培養のような人工物質を含む。

本発明の処置工程は、本発明の組成物をサンプルに添加することを含むか、または組成物の前駆体をサンプルに添加することを含む。本添加工程は、上記の任意の投与方法を含む。望むならば、組成物投与後のノイラミニダーゼ活性を、ノイラミニダーゼ活性の検出の直接的または間接的方法を含む任意の方法により観察できる。ノイラミニダーゼ活性を検出する定量的、定質的、および半定量的方法が全て意図される。典型的に上記のスクリーニング方法の一つを適用するが、しかしながら、生存生物の生理学的特性の観察のような任意の他の方法も適用可能である。

ノイラミニダーゼを含む生物は、細菌(ビブリオ・コレラエ、クロストリジウム・パーフリンジェンス、ストレプトコッカス・ニューモニエ、およびアルスロバクター・シアロフィルス)およびウイルス(特にオルトミクソウイルスまたはパラミクソウイルス、例えばＡ型インフルエンザウイルス(例えばＨ１Ｎ１、Ｈ５Ｎ１)、およびＢ型インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、ニューカッスル病ウイルス、家禽ペストウイルス、およびセンダイウイルス)を含む。これらの生物のいずれかから得たまたは生物内に見られるノイラミニダーゼ活性の阻害は本発明の目的の範囲内である。インフルエンザウイルスのウイルス学は、“Fundamental Virology”(Raven Press, New York, 1986), Chapter 24に記載されている。本発明の化合物は、アヒルおよび他の鳥類、齧歯類、ブタのような動物における、またはヒトにおけるインフルエンザ感染の予防にまたは存在するインフルエンザ感染の処置に有用である。

本発明の組成物を、酵素活性を評価するための既知の技術のいずれかによりノイラミニダーゼに対する阻害活性をスクリーニングする。本発明の文脈内で、典型的に組成物を最初にインビトロでノイラミニダーゼの阻害についてスクリーニングし、阻害活性を示す組成物をインビボで活性についてスクリーニングする。約５×１０^−６Ｍ未満、典型的に約１×１０^−７Ｍ未満および好ましくは約５×１０^−８Ｍ未満のインビトロＫ_ｉ(阻害定数)を有する組成物は、インビボでの使用に好ましい。

有用なインビトロスクリーニングは詳述されており、ここには詳述しない。(Itzstein, M. von et al.; “Nature”, 363(6428): 418-423(1993); Potier, M.; et al.; “Analyt. Biochem.”, 94: 287-296(1979); Chong, A. K. J.; et al.; “Biochem. Biophys. Acta”, 1077: 65-71(1991); およびColman, P. M.; et al.; 国際公開番号ＷＯ９２／０６６９１(国際出願番号ＰＣＴ／ＡＵ９０／００５０１、公開日１９９２年４月３０日)。

インビボスクリーニングも詳述されており、例えば、Itzstein, et al., 1993の、特に４２１頁、カラム２の最初の完全な段落から４２３頁、カラム２の最初の完全な段落まで、およびColman, p. 36を参照のこと。本発明のＮＡＩを、種々のインフルエンザウイルスノイラミニダーゼに対する阻害活性について試験した。表１は、野生型および突然変異体インフルエンザウイルスノイラミニダーゼに対する阻害活性を示す。

表ｌ：^ａ Ａ型インフルエンザウイルス／ＷＳＮ／１９３３(Ｈ１Ｎ１)からのノイラミニダーゼ(ＮＡ)。^ｂ Ａ型インフルエンザウイルス／ＷＳＮ／１９３３(Ｈ１Ｎ１)からのＮＡ(Ｈ２７４Ｙ)。^ｃ Ａ型インフルエンザウイルス／Ｈａｎｏｉ／３０４０８／２００５(Ｈ５Ｎ１)からのＮＡ。^ｄ Ａ型インフルエンザウイルス／Ｈａｎｏｉ／３０４０８／２００５(Ｈ５Ｎ１)からのＮＡ(Ｈ２７４Ｙ)。^ｅ アンモニウム塩として図３に示す。^ｆ 測定せず。

より強い効果のホスホネートコンジナー、３(タミホスホル)対オセルタミビル２およびグアニジン１３ｂ対１３ａを、Ｈ１Ｎ１およびＨ５Ｎ１インフルエンザウイルスの野生型ノイラミニダーゼにおいて観察した(表１)。化合物３および２の両方とも、野生型酵素よりもＨ２７４Ｙ７のＮＡＩ耐性突然変異体に対して顕著に効果が低かった。それにも関わらず、ホスホネート化合物１３ｂは、低nM濃度で両方の突然変異体酵素を阻害する有効な阻害剤である。２および３と比較してＣ−３ヒドロキシル位にペンチルオキシ基を欠く化合物１４ａおよび１４ｂは、ＮＡＩ活性が劣った。表２は、オセルタミビル２、ホスホネートコンジナー３および関連アナログのノイラミニダーゼ阻害、抗インフルエンザ、および細胞毒性活性を示す。

表２：^ａ Ａ型インフルエンザウイルス／ＷＳＮ／１９３３(Ｈ１Ｎ１)に対するノイラミニダーゼ阻害。Ｋ_ｉ値を、チェン・プルソフ方程式を使用して決定した。^ｂ インフルエンザ(Ａ／ＷＳＮ／１９３３)感染によるＣＰＥ効果の５０％保護のためのＮＡ阻害剤の濃度。^ｃ 使用した最高濃度はＭＤＣＫ細胞に対する細胞毒性のアッセイにおける１００μMである。^ｄ 選択性指数、ＣＣ_５０対ＥＣ_５０比。^ｅ アンモニウム塩として図３に記載。

本発明の一つの実施態様において、ホスホネート３は、０.１５および４.６７nMのＫ_ｉおよびＥＣ_５０値を有し、インフルエンザＨ１Ｎ１ウイルスに対する強力なＮＡ阻害剤および抗インフルエンザ剤である(表２)。比較して、ホスホネート３は、オセルタミビルの活性よりＮＡ阻害および抗インフルエンザアッセイで各々１９倍および７倍活性である。ホスホネート３を、さらに種々の濃度で評価し、宿主ＭＤＣＫ細胞に対する成長阻害を測定した。ホスホネート３の概算されるＣＣ_５０値は７４μMであった。１５８００を超える最高の選択性指数を示すホスホネート３は、故に、宿主ＭＤＣＫ細胞に対する毒性なく、Ｈ１Ｎ１ウイルスに対する強力な抗ウイルス剤である。３におけるアミノ基をグアニジノ基に置換することにより、ホスホネート１３ｂは増強されたＮＡ阻害(Ｋ_ｉ＝０.０６nM)および抗インフルエンザ活性(ＥＣ_５０＝０.０９nM)を示す。先の報告と同様にして、グアニジニウム基は、Ｇｌｕ１１９、Ａｓｐ１５１およびＧｌＵ２２７の残基と強い静電気相互作用を示し得る。

一つの局面において、本明細書に記載のホスホネートコンジナーは、Ｈ１Ｎ１およびＨ５Ｎ１の野生型ノイラミニダーゼに対して顕著に強力なカルボキシレートコンジナーである。加えて、化合物１３ｂは、Ｈ５Ｎ１ノイラミニダーゼのＨ２７４Ｙ突然変異体に対して１９nMで有効な阻害剤である。

本発明の他の実施態様において、本発明の化合物を使用してインビボでインフルエンザ感染を処置する。本発明のＮＡＩを、インビボでマウスで試験した。マウスを、記載の投与量の薬剤で、１日２回５日間胃管栄養法により処置することにより処理した。最初の薬剤投与４時間後、感染性インフルエンザウイルス[Ａ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)またはＮＩＢＲＧ−１４(Ｈ５Ｎ１)]の２５μLを１０ＭＬＤ_５０で鼻腔内接種した。マウスを毎日１４日間、生存および体重について観察した。表３は、Ａ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)インフルエンザウイルス感染に対するマウスの化合物３および３ｂ、およびタミフルでの処置の効果を示す。

表３。
^ａ 化合物を、指示したインフルエンザウイルスでの感染の４時間前に開始して、１日２回５日間経口投与した。
^ｂ 生存数／全処置数。最初の数は、１４日目の生存％を示し、括弧内の数は７日目の生存％を示す。
^ｃ １４日目より前に死亡したマウスの平均死亡日数。

マウスにおけるＮＩＢＲＧ−１４(Ｈ５Ｎ１)Ａ型インフルエンザウイルス感染に対する化合物３および３ｂ、およびタミフルでの処置の生存に対する効果を表４に示す。

表４。
^ａ 化合物を、指示したインフルエンザウイルスでの感染の４時間前に開始して、１日２回５日間経口投与した。
^ｂ 生存数／全処置数。最初の数は、１４日目の生存％を示し、括弧内の数は７日目の生存％を示す。
^ｃ １４日目より前に死亡したマウスの平均死亡日数。

ＮＡと複合体の化合物３の分子モデリングを、化合物３のインフルエンザウイルスノイラミニダーゼ(Ｎ１亜型、ＰＤＢコード：２ＨＵ４)の結晶学的構造へのドッキングを介して構築した。化合物３の３次元構造を、SYBYL 7.3でオセルタミビル２(また２ＨＵ４から)の３次元構造を修飾することにより構築した。本発明の一局面において、ノイラミニダーゼ−ホスホネート複合体の分子モデリングは、ホスホネートと活性部位の３個のアルギニン残基の適切な結合モードを示す。既知Ｎ１結晶構造(ＰＤＢコード：２ＨＵ４)を使用した予備的分子ドッキング実験(図１)は、推定ホスホネート阻害剤３ａが、ＮＡ−オセルタミビル複合体に類似する結合ポケットにおけるＣ_３−ペンチルオキシ基、Ｃ_４−アセトアミド基およびＣ_５−アミノ基により発揮される他の相互作用に加えて、実際にＮＡのトリ−アルギニン残基に強く結合することを確認する。図１は、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ(Ｎ１亜型)の活性部位におけるオセルタミビル２(Ａ)およびホスホネート化合物３ａ(Ｂ)の分子モデルを示す。ホスホネート化合物３ａの複合体は、オセルタミビル−ＮＡ複合体(６対リガンド−ＮＡ Ｈ−結合)と比較して、より多くの、ＮＡ活性部位における鍵となる残基との水素結合相互作用(８対リガンド−ＮＡ Ｈ−結合)を有する。

またここに記載されているのは、タミフル(登録商標)および非常に強力なノイラミニダーゼ阻害剤タミホスホルの新規で改善された合成法である。先に記載の通り、インフルエンザ処置に一般的な薬剤であるタミフル(登録商標)(オセルタミビルリン酸塩、１５・Ｈ_３ＰＯ_４)は経口で投与されるプロドラッグであり、それは肝臓エステラーゼで直ぐに加水分解されて、インフルエンザウイルスのノイラミニダーゼの活性阻害剤として対応するカルボン酸(１６、図６)をもたらす。１０代の患者の精神障害の原因となる副作用、および、鳥インフルエンザの薬剤耐性株出現のため、インフルエンザウイルスに対する新規化学物質の開発は、インフルエンザの大流行との戦いのために緊急に必要である。下記に略記する合成は、図４に完全に示す：

タミホスホル(３)は、鳥インフルエンザおよびヒトインフルエンザの両方と戦うために将来有望な薬剤である。オセルタミビルのカルボキシル基をホスホネート基で置換することにより、タミホスホルはノイラミニダーゼのトリ−アルギニン残基と強く相互作用し、Ｈ１Ｎ１およびＨ５Ｎ１ウイルスの野生型ノイラミニダーゼに対してより強力である。加えて、グアニジンアナログ３ｂは、Ｈ５Ｎ１ノイラミニダーゼのＨ２７４Ｙ突然変異体の有効な阻害剤(Ｋ_ｉ＝１９nM)である。さらに、予備的試験は、タミホスホルがまた、インフルエンザウイルスの致死量攻撃に対してマウスを保護し、経口的に生物が利用可能であることを示す。マウスの生存率および平均生存時間の比較により(データは示していない)、タミホスホルは、Ｈ１Ｎ１ヒトインフルエンザウイルスに対してタミフルより強力であり、そして、組み換えＨ５Ｎ１(ＮＩＢＲＧ１４)ウイルスに対して少なくとも同程度に有効である。

化合物３および１３のモノエステル誘導体は、インフルエンザへの取り組みにおいて特に有効である。表５に示す通り、マウス試験は、モノエステル化合物３ｃおよび１３ｃが、インフルエンザを有するマウスの処置に有効であることを示した。表４は、マウスにおけるＡ型インフルエンザ[Ａ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)]ウイルス感染に対するタミフル(１)、タミホスホル(３)、タミホスホルモノエステル(３ｃ)、タミホスホルグアニジン(１３ｂ)およびタミホスホルグアニジンモノエステル(１３ｃ)での鼻腔内処置の効果を示す。モノエステル３ｃおよび１３ｃは、生存率を改善し、低濃度で有効であり、特に有効であることが示される。

表５。
^ａ 化合物を、指示したインフルエンザウイルスでの感染の４時間前に開始して、１日２回５日間経口投与した。
^ｂ 生存数／全処置数(１０匹のマウス)。最初の数は、１４日目の生存％を示し、括弧内の数は７日目の生存％を示す。
^ｃ １４日目より前に死亡したマウスの平均死亡日数。

図１７−２０は、モノエステル化合物３ｃおよび１３ｃの効果を、化合物３および１３ｂと比較してグラフ的に示す。本化合物は、生存率の改善および体重維持の改善を示す。この経口は、１０mg／kg／日〜０.１mg／kg／日の濃度範囲にわたり観察される。低濃度で(図２０)、モノエステル類は化合物３および１３ｂと同様に無効であり、対照の結果と非常に類似し、かかる低濃度ではホスホネートコンジナーの有益な効果が恐らく無くなることを示唆する。

全ての試薬は市販されており、特記しない限りさらに精製することなく使用した。全ての溶媒は特記しない限り無水グレードであった。ジイソプロピルアジドカルボキシレート(ＤＩＡＤ)を、Ｎａ_２ＳＯ_４減圧下で蒸留した。全ての非水性反応は、特記されない限り、わずかに陽圧のアルゴン下に、オーブン乾燥させたガラス容器で行った。反応を磁気撹拌し、シリカゲル薄層クロマトグラフィーでモニターした。フラッシュクロマトグラフィーを、６０−２００μm粒子径のシリカゲルで行った。収率は、分光的に純粋な化合物について報告する。融点を、Electrothermal MEL-TEMP(登録商標)1101D融点装置で記録し、補正していない。ＮＭＲスペクトをBruker AVANCE 600および400分光計で記録した。化学シフトは、テトラメチルシラン(ＴＭＳ)に対するδ値をもたらす；カップリング定数ＪはHzで示す。内部標準は^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルについてＣＤＣｌ_３(δ_Ｈ＝７.２４)またはＤ_２Ｏ(δ_Ｈ＝４.７９)、^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルについてＣＤＣｌ_３(δ_Ｈ＝７７.０)、および^３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルについてＤ_２Ｏ(δｐ＝０.００)のＨ_３ＰＯ_４であった。分裂パターンをｓ(１重項)、ｄ(２重項)、ｔ(３重項)、ｑ(４重項)、ｍ(多重項)、ｂｒ(ブロード)およびｄｄ(２個の２重項)として報告する。ＩＲスペクトルをThermo Nicolet 380 FT-IR分光計で記録した。光学回転をPerkin-ElmerModel 341偏光計で記録し、[α]およびｃの単位は、各々deg cm³ g^-1 dm^-1およびgcm³である。高解像度ＥＳＩマススペクトルをBruker Daltonics分光計で記録した。

合成方法および生成物特徴付け。

実施例１。１,２−Ｏ−イソプロピリデン−３−アミノ−３−デオキシ−α−Ｄ−リボフラノシド(５).(Nair, and Emanuel, J. Am. Chem. Soc. 1977, 99, 1571-1576.)

報告された方法に従い(Suhara et al., J. Org. Chem. 2001, 66, 8760-8771)、アセトン(１Ｌ)中のＤ−キシロース(５０ｇ)、無水ＣｕＳＯ_４(７０ｇ)および濃Ｈ_２ＳＯ_４(５mL)の懸濁液を、室温で２４時間撹拌し、続いて水性ＨＣｌ溶液(１１０mL、０.１Ｍ)で４０℃で２時間部分的に加水分解し、１,２−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｄ−キシロフラノース(４、６１ｇ)を無色シロップとして得た。化合物４(１０ｇ、５２.６mmol)を塩化ピバロイル(６.６ｇ、５４.８mmol)でピリジン(５０mL)中、０℃で８時間処理して、１,２−Ｏ−イソプロピリデン−５−Ｏ−ピバロイル−α−Ｄ−キシロフラノシド(１３ｇ、Ｄ−キシロースから８５％収率)を無色油状物として得た。

重クロム酸ピリジニウム(ＰＤＣ、８.９２ｇ、２３.７mmol)およびＡｃ_２Ｏ(１２.２mL、１３０mmol)をＣＨ_２Ｃｌ_２(１６０mL)中のピバロイルエステル(１０.８ｇ、３９.４mmol)に添加した。混合物を還流下で１.５時間加熱し、次いで減圧下濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ(３０mL)に溶解し、ＥｔＯＡｃでの溶出によりシリカゲルパッドを通して濾過した。濾液を濃縮し、トルエンと共蒸発させて(２×)、Ａｃ_２Ｏを除去した。粗ケトン生成物(１０.２ｇ)を、無水ピリジン(７５mL)中、ヒドロキシルアミンヒドロクロライド(１８.１５ｇ、２６０mmol)と６０℃で２４時間撹拌した。混合物を減圧下濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶解した。有機層を水で洗浄し、水性層をＥｔＯＡｃ(３×)で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残存油状物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：３)、対応するオキシム(９.２７ｇ、２工程で８２％収率)をｓｙｎ／ａｎｔｉ異性体(７０：３０)の混合物として得た。無色油状物；

オキシム(２.８８ｇ、１０mmol)を冷(０℃)ＴＨＦ(６０mL)中で撹拌し、ＬｉＡｌＨ_４(ＴＨＦ中１.０Ｍ溶液、２５mL、２５mmol)を添加した。混合物を３時間還流し、室温で１２時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃでクエンチした。混合物をセライトで濾過した。濾液を濃縮し、残存油状物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：９)、アミン５(１.６７ｇ、８８％)を黄色シロップとして得た。

実施例２。Ｏ−ベンジル−２,３−Ｏ,Ｎ−イソプロピリデン−３−アセトアミド−３−デオキシ−α−Ｄ−リボフラノシド(６)。

アミン５(１.６７ｇ、８.８mmol)を、ピリジン(１０mL)中Ａｃ_２Ｏ(５mL)と室温で３時間撹拌した。反応をＭｅＯＨ(５mL)の添加によりクエンチした。混合物を濃縮し、トルエンと共蒸発させて(３×)、Ａｃ_２Ｏおよびピリジンを除去した。残存固体サンプルをＥｔＯＡｃから再結晶させて、アセチル化生成物(２.３５ｇ)を得た。トルエン(１６mL)中のアセチル化生成物およびベンジルアルコール(５.８４ｇ、５４mmol)の冷溶液(０℃)を、１,４−ジオキサン(７.５mL、３０mmol)中ＨＣｌ(４.０Ｍ)溶液で処理し、２４時間、室温で撹拌した。反応混合物をＥｔ_２Ｏ(１００mL)に注ぎ、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液(８０mL)で０℃で中和した。有機層を分離し、水(３×)および塩水で洗浄した。合わせた水性洗液をＥｔ_２Ｏ(６×)で抽出した。有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮した。残存油状物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：１９)、２.１０ｇ(２工程で８５％収率)のジオール生成物Ｏ−ベンジル−３−アセトアミド−３−デオキシ−α−Ｄ−リボフラノシドを^１Ｈ ＮＭＲ分析により示される通り、アノマーの混合物(α／β＝７：３)として得た。α−アノマーの分析サンプルを再シリカゲルクロマトグラフィー(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：９９)により得た、Ｒ_ｆ＝０.２。無色固体、ｍｐ ９５−９７℃；

トルエン(２０mL)中のジオール(２.１０ｇ、α／βアノマーの混合物として７.５mmol)、２,２−ジメトキシプロパン(１０mL)およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物(〜０.２ｇ)の溶液を８０℃で４時間撹拌した。混合物を減圧下濃縮し、残渣をＥｔ_２Ｏから再結晶して、^１Ｈ ＮＭＲ分析により示す通りアノマーの混合物(α／β＝７：３)として、アルコール６(２.１７ｇ、９０％)を得た。α−アノマーの分析サンプルを再シリカゲルクロマトグラフィーにより得た(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：９)。無色結晶、ｍｐ ８２−８５℃；

実施例３。エチル(Ｏ−ベンジル−２,３−Ｏ,Ｎ−イソプロピリデン−３−アセトアミド−３,５,６−トリデオキシ−６−ジエトキシホスホリル−Ｄ−リボ−ヘプトフラノシド)ウロネート(７ａ)。

ＣＨ_２Ｃｌ_２(２０mL)中のアルコール６(２.１７ｇ、６.７６mmol)およびピリジン(１.２mL、１４.７３mmol)の溶液を、−１５℃で撹拌し、その間トリフルオロメタン硫酸無水物(Ｔｆ_２Ｏ、１.４９mL、８.８６mmol)を３０分間にわたり滴下した。混合物をさらに２時間、−１５℃で撹拌し、ＭｅＯＨ(１mL)でクエンチし、連続的に氷水および冷水性ＫＨ_２ＰＯ_４溶液(１Ｍ)で洗浄した。水性層をＥｔＯＡｃ(３×)で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮し、トルエンと共蒸発させて、ピリジンを除去した。粗トリフレート生成物(３.０６ｇ)をさらに精製することなく次工程に使用した。

ＮａＨ(０.４１ｇ、１０.２mmol；油中６０％分散)を窒素雰囲気下無水ヘキサン(３×)で洗浄し、ＤＭＦ(３０mL)を添加し、０℃で氷浴中、撹拌した。ＤＭＦ(１０mL)中のトリエチルホスホノアセテート(１.９５ｇ、１０.９mmol)溶液を３０分間にわたり滴下した。氷浴を除き、混合物を２時間撹拌し、透明黄色溶液を得た。次いでＤＭＦ(１０mL)中の上で製造したトリフレート(３.０６ｇ、−６.７６mmol)、続いて２滴の１５−クラウン−５を添加した。得られた溶液を室温で２４時間撹拌し、０℃に冷却し、水性ＫＨ_２ＰＯ_４(ｌＭ溶液)でクエンチした。混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２(５×)で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮した。残存褐色油状物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配、１：４〜１：１)、生成物７ａ(２.８５ｇ、６から８０％収率)をα／βアノマー混合物として得た。

α−アノマーの分析サンプルを再シリカゲルクロマトグラフィーにより調製した(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：４)。ＴＬＣ(ＭｅＯＨ／ＣＦｋＣＬ、１：１９)Ｒ_ｆ＝０.２；

実施例４。Ｏ−ベンジル−２,３−Ｏ,Ｎ−イソプロピリデン−３−アセトアミド−３,５,６−トリデオキシ−６,６−ビス(ジエトキシホスホリル)−Ｄ−リボ−ヘキソフラノース(７ｂ)。

７ａに類似した方法により、テトラエチルメチレンジホスホネート(３.１４ｇ、１０.９mmol)を、ＤＭＦ(３５mL)中ＮａＨ(０.３１ｇ、７.７５mmol；油中６０％分散)で２時間処理し、次いで、アルコール６のトリフレート(ＤＭＦ８mL中２.２６ｇ)で、１５−クラウン−５(２滴)の存在下処理した。反応混合物を２４時間、室温で撹拌し、後処理(worked up)し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配、１：４〜１：１)、生成物７ｂ(２.１６ｇ、６から７３％収率)をα／βアノマー混合物として得た。α−アノマーの分析サンプルを再シリカゲルクロマトグラフィーにより調製した(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：９９)。ＴＬＣ(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：１９)Ｒ_ｆ＝０.１４；

実施例５。エチル(３Ｓ,４Ｒ,５Ｒ)−３,４−Ｏ,Ｎ−イソプロピリデン−４−アセトアミド−３,５−ジヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−カルボキシレート(８ａ)。

ホスホネート７ａ(２.８５ｇ、５.４mmol)を、２４時間、室温で水素雰囲気下、エタノール(３０mL)中Ｐｄ／Ｃ(０.５ｇ)と撹拌することにより水素化分解に付した。混合物をセライトで濾過し、濾液を濃縮し、所望のラクトール(２.３６ｇ)を薄黄色シロップとして得た。窒素雰囲気下、ＴＨＦ(１０mL)中のラクトール(２.３６ｇ)溶液を、ＴＨＦ(２０mL)中のＮａＨ(７.０mmol、ヘキサンで３回予洗した、０.２８ｇの６０％油分散)の懸濁液に滴下した。混合物を室温で１時間撹拌して、分子内ウィッティヒ・ホーナー・エモンズ反応を完了させた。混合物を０℃に冷却し、水性ＫＨ_２ＰＯ_４(１Ｍ溶液)でクエンチし、ＣＨ_２Ｃｌ_２(５×)で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、減圧下濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：１)、シクロヘキセンカルボキシレート８ａ(１.２７ｇ、７ａから８３％収率)を無色油状物として得た。ＴＬＣ(ＥｔＯＡｃ)Ｒ_ｆ＝０.３；

実施例６。ジエチル(３Ｓ,４Ｒ,５Ｒ)−３,４−Ｏ,Ｎ−イソプロピリデン−４−アセトアミド−３,５−ジヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(８ｂ)。

ビスホスホネート７ｂ(３.５５ｇ、６mmol)を、室温で２４時間、水素雰囲気下、エタノール(３５mL)中Ｐｄ／Ｃ(１ｇ)と撹拌した。混合物をセライトで濾過し、ナトリウムエトキシド(２５mL、エタノール中２１％)を濾液に添加した。反応混合物を５時間撹拌し、飽和水性ＮＨ_４Ｃｌ溶液でクエンチし、減圧下濃縮した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、飽和水性ＮＨ_４Ｃｌ溶液で洗浄した。水性層をＣＨ_２Ｃｌ_２(３×)で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：９９)、シクロヘキセンホスホネート８ｂ(１.６７ｇ、８０％)を無色油状物として得た。

実施例７。エチル(３Ｓ,４Ｒ,５５)−４−アセトアミド−５−アジド−３−ヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−カルボキシレート(９ａ)。

ＴＨＦ(４０mL)中の８ａ(１.２７ｇ、４.５mmol)、トリフェニルホスフィン(２.３６ｇ、９.０mmol)、ジイソプロピルアジドカルボキシレート(ＤＩＡＤ、１.８２ｇ、９.０mmol、新たに蒸留)およびジフェニルホスホリルアジド(ＤＰＰＡ、２.４８ｇ、９.０mmol)の溶液を、室温で４８時間撹拌した。溶媒を減圧下回転蒸発により除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：３)、５Ｓ立体配置の対応するアジド生成物を得た(１.２１ｇ、８７％収率)。無色固体、ｍｐ ９１−９３℃；

エタノール(２０mL)中のアジド化合物(１.２１ｇ、３.９３mmol)を、水性ＨＣｌ溶液(５mL、１Ｍ)と１時間加熱還流した。混合物を減圧下濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ)、生成物９ａ(１.０１ｇ、９５％収率)を得た。無色固体、ｍｐ ５１−５３℃；

実施例８。ジエチル(３Ｓ,４Ｒ,５５)−４−アセトアミド−５−アジド−３−ヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(９ｂ)。

９ａに類似の方法により、化合物８ｂ(１.６７ｇ、４.８mmol)を、ＴＨＦ(４５mL)中、Ｐｈ_３Ｐ(２.４２ｇ、９.２mmol)、新たに蒸留したＤＩＡＤ(１.８６ｇ、９.２mmol)およびＤＰＰＡ(２.５４ｇ、９.２mmol)で４８時間、室温で処理して、フラッシュカラムクロマトグラフィー(６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：２)精製後対応するアジド生成物(１.３９ｇ、７８％収率)を得た。ＥｔＯＨ／ＨＣｌ(１Ｍ 水性溶液)中での還流による続く加水分解により、所望の生成物９ｂ(１.１８ｇ、９５％収率)を得て、それを１０ｂの製造に直接使用した。

実施例９。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アジド−３−ヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−カルボキシレート(１０ａ)。

ＣＨ_２Ｃｌ_２(１０mL)中の９ａ(５３.７mg、２mmol)およびピリジン(１.３mL、１６mmol)の冷(−１５℃)溶液に、ＣＨ_２Ｃｌ_２(５mL)中のＴｆ_２Ｏ(０.６７mL、４mmol)を滴下し、−１５〜−１０℃で２時間撹拌した。混合物を水性ＫＨ_２ＰＯ_４(１Ｍ溶液、２×)、飽和水性ＮａＨＣＯ_３、水および塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮して、対応するトリフラート(０.８２ｇ)を得た。トリフレートを、無水ＤＭＦ(４０mL)中、ＫＮＯ_２(８５.６mg、１０mmol)および１８−クラウン−６(３滴)と２４時間、４０℃で撹拌した。反応の最後に、混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、塩水で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、減圧下濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、４：１)で精製して、３Ｒ立体配置の生成物１０ａ(０.３７５２ｇ、７０％収率)を得た。無色固体、ｍｐ ４０−４２℃；

実施例１０。ジエチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アジド−３−ヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(１０ｂ)。

１０ａに類似の方法により、上で製造した化合物９ｂ(１.１８ｇ、３.５５mmol)を、ＣＨ_２Ｃｌ_２(１０mL)中、Ｔｆ_２Ｏ(１.２mL、７.１mmol)およびピリジン(２.３mL、２８.５mmol)と２時間、−１５〜−１０℃で撹拌して、対応するトリフラート(１.６５ｇ)を得て、それを続いて無水ＤＭＦ(５０mL)中ＫＮＯ_２(１.５２ｇ、１７.３mmol)および１８−クラウン−６(３滴)で、４０℃で２４時間処理して、３Ｒ立体配置を有する生成物１０ｂ(８３.８mg、７１％収率)を得た。無色油状物；

実施例１１。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アジド−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−カルボキシレート(１１ａ).(Rohloff et al., J. Org. Chem. 1998, 63, 4545-4550.)

３−ペンチルトリクロロアセトイミデートを次の通り製造した。窒素雰囲気下、無水Ｅｔ_２Ｏ(１４mL)中の３−ペンタノール(８.８１５ｇ、１００mmol)の溶液を、Ｅｔ_２Ｏ(１０mL)に懸濁させたＮａＨ(０.４ｇ、１０mmol；ヘキサンで予洗した６０％油分散)に滴下した。混合物を１０分間、室温で撹拌し、２０分間にわたり、Ｅｔ_２Ｏ(２０mL)中のトリクロロアセトニトリル(１５mL、１５０mmol)の冷(−５℃)溶液に窒素雰囲気下滴下した。反応混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶媒除去後、残渣を、沈殿を得るために１分間激しく撹拌しながらＭｅＯＨ／ヘキサン(１：１９、１０mL)でトリチュレートし、それを濾取し、冷ヘキサンで洗浄した。濾液を減圧下蒸発乾固し、３−ペンチルトリクロロアセトイミデート(１６ｇ、７０％収率)を明褐色油状物として得た。ＴＬＣ(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：４)

窒素雰囲気下、新たに調製した３−ペンチルトリクロロアセトイミデート(３５０mg、１.５mmol)およびＣＦ_３ＳＯ_３Ｈ(１３μL、０.１５mmol)を、ＣＨ_２Ｃｌ_２(１５mL)中のアルコール１０ａ(３２１mg、１.２mmol)の溶液に添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、その間にさらにイミデートおよびＣＦ_３ＳＯ_３Ｈ(３５０mgおよび１３μLmmol)を４時間毎に５回添加した。反応を水性ＮａＨＣＯ_３溶液(５％)でクエンチした。水性層をＣＨ_２Ｃｌ_２(２×)で抽出した。合わせた有機相を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：７)、アルキル化生成物１１ａ(３１７mg、７８％収率)を得た。無色固体、ｍｐ １１５−１１７℃；

実施例１２。ジエチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アジド−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(１１ｂ)。

１１ａに類似の方法により、ＣＦ_３ＳＯ_３Ｈ(１５.６μL、０.１８mmol)、続いて他のバッチのイミデートおよびＣＦ_３ＳＯ_３Ｈの存在下でのアルコール１０ｂ(４９８mg、１.５mmol)と３−ペンチルトリクロロアセトイミデート(４２０mg、１.８mmol)の反応により、アルキル化生成物１１ｂ(４９５mg、８２％収率)を得た。無色油状物；

実施例１３。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−カルボキシレートホスフェート(１、タミフル(登録商標))。

エタノール(２０mL)中のアジド１１ａ(１７０mg、０.５mmol)を、リンドラー触媒(１００mg)で、水素雰囲気下、１６時間、室温で処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(１５５mg)を得て、それをエタノール(３mL)に溶解し、ゆっくりと少しずつ、エタノール(５mL)中リン酸(８５％、１１５mg、０.６mmol)の熱(５５℃)溶液に添加した。結晶化が数分以内で起こった。０℃に冷却後、沈殿を濾過により回収し、冷アセトン(２×)で濯いで、１(１８７mg、９１％収率)を得た。白色結晶、ｍｐ １８９−１９１℃[lit. (Fukuta et al., J. Am. Chem. Soc. 2006,128, 6312-6313)ｍｐ １８４−１８６℃]；

実施例１４。(３Ｒ,４Ｒ,５５)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−カルボン酸(２、オセルタミビル)。

エタノール(１５mL)中のアジド１１ａ(１１０mg、０.３mmolの溶液を、リンドラー触媒(７０mg)で、水素雰囲気下、１６時間、室温で処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(９５mg)を得て、それをＴＨＦ(１０mL)に溶解し、水性ＫＯＨ溶液(１Ｍ、０.５mL、０.５mmol)で０℃で処理した。反応混合物を室温に温め、１時間撹拌した。その後、混合物をAmberlite IR-120でｐＨ５に酸性化し、濾過し、水性エタノール(９５％)で濯いだ。濾液を減圧下濃縮した。残渣をＣ１８カラムで精製して(ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ、１：１９)、２(７５mg、８８％収率)を得た。白色固体、ｍｐ １８５−１８７℃；[α]_Ｄ ^２０＝−１４３.２(ｃ＝０.４、Ｈ_２Ｏ)；

実施例１５。アンモニウム(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(３、タミホスホル)。

エタノール(１８mL)中のアジド１１ｂ(２０３mg、０.５mmol)の溶液を、リンドラー触媒(８０mg)で、水素雰囲気下、１６時間、室温で処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(１８５mg)を得て、それをＣＨＣｌ_３(１５mL)に溶解し、ブロモトリメチルシラン(２mL、１５mmol)で０℃で処理した。反応混合物を室温に温め、２４時間撹拌した。その後、混合物を減圧下濃縮した。残渣を水(１０mL)に取り込み、２時間、室温で撹拌し、凍結乾燥に付した。残存薄黄色固体を、水性ＮＨ_４ＨＣＯ_３(０.１Ｍ溶液)で溶出することによりＣ１８カラムで精製して、アンモニウムホスホネート３(１５０mg、８５％収率)を得た。白色固体、ｍｐ ２４０℃(分解)；

実施例１６。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−[Ｎ_２,Ｎ_３−ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)グアニジノ]−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−カルボキシレート(１２ａ)。

エタノール(２０mL)中のアジド１１ａ(１５０mg、０.４１mmol)の溶液を、リンドラー触媒(８０mg)で、水素雰囲気下、１６時間、室温で処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(１１０mg)を得て、それを無水ＤＭＦ(２０mL)に溶解し、Ｎ,Ｎ−ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)チオウレア(１４８mg、０.５１mmol)およびＥｔ_３Ｎ(１４８μL、１.０３mmol)で処理した。混合物を０℃に冷却し、ＨｇＣｌ_２(１３８mg、０.５１mmol)をゆっくり添加した。懸濁液を室温に温め、１０時間撹拌した。その後、反応をＥｔＯＡｃで希釈し、セライトのパッドを通して濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：７)、グアニジン１２ａ(１７７mg、７８％収率)を得た。無色泡状物；

実施例１７。ジエチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−[Ｎ_２,Ｎ_３−ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)グアニジノ]−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(１２ｂ)。

エタノール(２５mL)中のアジド１１ｂ(３２０mg、０.８mmol)の溶液を、リンドラー触媒(８５mg)で、水素雰囲気下、１６時間、室温で処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(２５５mg)を得て、それを無水ＤＭＦ(３０mL)に溶解し、Ｎ,Ｎ−ビス(ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル)チオウレア(２７８mg、０.９６mmol)およびＥｔ_３Ｎ(２６７μL、１.９２mmol)で処理した。混合物を０℃に冷却し、ＨｇＣｌ_２(２６０mg、０.９６mmol)をゆっくり添加した。懸濁液を室温に温め、１６時間撹拌した。その後、反応をＥｔＯＡｃで希釈し、セライトのパッドを通して濾過した。濾液を濃縮し、フラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、３：９７)、グアニジン１２ｂ(２８７mg、５８％収率)を得た。無色泡状物；

実施例１８。(３Ｒ,４Ｒ,５５)−４−アセトアミド−５−グアニジニル−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−カルボン酸(１３ａ)(Kim et al., J. Med. Chem. 1998, 41, 2451-2460.)。

水性ＫＯＨ(１Ｍ溶液０.５mL)を、ＴＨＦ(１０mL)中の１２ａ(１７７mg、０.３２mmol)の溶液に０℃で添加した。混合物を室温に温め、１時間撹拌し、続いてAmberlite IR-120(酸性樹脂)で処理した。混合物を濾過し、水性エタノール(９５％)で濯いだ。濾液を能週した；残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２(１０mL)に溶解し、０℃に冷却した。トリフルオロ酢酸(５mL)を滴下し、混合物を０℃で１時間撹拌した。その後、混合物を減圧下濃縮し、残渣をＣ１８カラムで精製して(ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ、１：１９)、酸１３ａ(９２mg、８８％収率)を得た。オフホワイト色固体、ｍｐ ９０−９２℃；

実施例１９。アンモニウム(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−グアニジニル−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(１３ｂ)。

ブロモトリメチルシラン(５mL、３８mmol)を、ＣＨＣｌ_３(２０mL)中の１２ｂ(２８７mg、０.４６mmol)の冷(０℃)溶液に添加した。混合物を２４時間、室温で撹拌し、次いで減圧下濃縮した。残渣を水(１５mL)に取り込み、２時間、室温で撹拌し、凍結乾燥に付した。残渣をＣ１８カラムで精製して(０.１Ｍ 水性ＮＨ_４ＨＣＯ_３溶液)、アンモニウムホスホネート１３ｂ(１３２mg、７２％収率)を得た。白色固体、ｍｐ ２２０−２２３℃；

実施例２０。(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−ヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−カルボン酸(１４ａ)(Kim et al., J. Med. Chem. 1998, 41, 2451-2460)。

エタノール(１５mL)中のアジド１０ａ(８１mg、０.３mmol)を、リンドラー触媒(７５mg)、水素雰囲気下で、１６時間、室温で処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(９５mg)を得て、それをＴＨＦ(１０mL)に溶解し、水性ＫＯＨ溶液(１Ｍ溶液０.５mL)で０℃で処理した。混合物を室温に温め、１時間撹拌し、Amberlite IR-120でｐＨ５に酸性化した。混合物を濾過し、水性エタノール(９５％)で濯いだ。濾液を濃縮し、残渣をＣ_１８カラムで精製して(ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ、１：１９)、酸１４ａ(５２mg、８１％収率)を得た。白色固体、ｍｐ ２２０℃(分解)；

実施例２１。アンモニウム(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−ヒドロキシ−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(１４ｂ)。

エタノール(１５mL)中のアジド１０ｂ(１０１mg、０.３mmol)の溶液を、リンドラー触媒(５０mg)で、水素雰囲気下で１６時間、室温処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(９０mg)を得て、それをＣＨＣｌ_３(１０mL)に溶解し、ブロモトリメチルシラン(１mL、７.６mmol)で０℃で処理した。混合物を室温に温め、２４時間撹拌し、減圧下濃縮した。残渣を水(１０mL)に取り込み、２時間、室温で撹拌し、凍結乾燥に付した。残渣をＣ１８カラムで精製して(０.１Ｍ 水性ＮＨ_４ＨＣＯ_３溶液)、アンモニウムホスホネート１４ｂ(６４mg、８５％収率)をえ多。無色固体、ｍｐ １９０−１９２℃；

実施例２２。ウイルス。
Ａ型インフルエンザ／ＷＳＮ／１９３３(Ｈ１Ｎ１)(Dr. Shin-Ru Shih, Chang Gung University, Taiwanから)を、１０日齢有胚鶏卵の尿膜腔で７２時間培養し、スクロース勾配遠心により精製した。

実施例２３。細胞。
メイディン・ダービー・イヌ腎臓(ＭＤＣＫ)および２９３Ｔ細胞をAmerican Type Culture Collection(Manassas, Va)から得て、１０％ウシ胎児血清(Gibco BRL)およびペニシリン−ストレプトマイシン(Gibco BRL)含有ＤＭＥＭ(ダルベッコ修飾イーグル培地、Gibco BRL)で、３７℃で５％ＣＯ_２下に増殖させた。

実施例２４。インフルエンザウイルスＴＣＩＤ_５０の測定。
ＴＣＩＤ_５０(５０％組織培養感染性用量)を、インフルエンザウイルス・ストックを、９６ウェルマイクロプレート中、１×１０^５細胞／mLの１００μL ＭＤＣＫ細胞上に連続希釈することにより測定した。感染細胞を、３７℃で５.０％ＣＯ_２下、４８時間インキュベートし、各ウェルに１００μL／ウェルのCellTiter 96(登録商標)AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay試薬(Promega)を添加した。３７℃で１５分間インキュベーション後、４９０nmでの吸光度をプレート・リーダーで読んだ。インフルエンザウイルスＴＣＩＤ_５０を、Reed-Muench法を使用して決定した. (ReedおよびMuench, H. Am. J. Hyg. 1938, 27, 493-497)。

実施例２５。ＮＡＩ評価のための組み換えノイラミニダーゼ酵素調製。
２種のＮ１群ノイラミニダーゼおよびそのＨ２７４Ｙ突然変異体形態を製造した。各々Ａ／ＷＳＮ／１９３３(Ｈ１Ｎ１)およびＡ／Ｈａｎｏｉ／３０４０８／２００５(Ｈ５Ｎ１)由来のＮＡ(ＷＮＳ)およびＮＡ(Ｈａｎｏｉ)のｃＤＮＡを、それぞれDr. King-Song Jeng(Institute of Molecular Biology, Academia Sinica)およびDr. Po-Huang Liang(Institute of Biological Chemistry, Academia Sinica)から得た。ＮＡ遺伝子をさらに変異誘発して、製造者の指示に従うGeneTailor Site-Directed Mutagenesis System(Invitrogen, CaI, USA)によりＨ２７４Ｙ変異を導入した。ＮＡ(ＷＳＮ)およびその突然変異体遺伝子をｐＣ１ｎｅｏ(Promega, Wis, USA)にクローン化し、ＮＡ(Ｈａｎｏｉ)およびその突然変異体遺伝子をｐＣＤＮＡ６(Invitrogen)にクローン化した。ＮＡ遺伝子のプラスミドＤＮＡを２９３Ｔ細胞に感染させて、細胞表面に組み換えノイラミニダーゼを発現させた。トランスフェクト細胞を４８時間目に集め、２回ＰＢＳ(ｐＨ７.４)で洗浄し、ノイラミニダーゼ阻害剤の評価のために使用した。

実施例２６。ＮＡ活性の決定。
ノイラミニダーゼ活性を、Ａ型インフルエンザ／ＷＳＮ／１９３３(Ｈ１Ｎ１)感染有胚卵の希釈尿膜液を使用して測定した。蛍光アッセイを使用して、蛍光性基質２'−(４−メチルウンベリフェリル)−α−Ｄ−Ｎ−アセチルノイラミン酸(ＭＵＮＡＮＡ；Sigma)でＮＡ活性を測定した。遊離４−メチルウンベリフェロンの蛍光を、それぞれ３６５および４６０nmの励起および放出波長を使用して、Envisionプレート・リーダー(Perkin-Elmer, Wellesley, MA)で測定した。ノイラミニダーゼ活性を２００μMのＭＵＮＡＮＡで測定した。酵素活性を、１５分間、室温でインキュベーション中の蛍光の増加として示した。

実施例２７。ＮＡ阻害剤のＩＣ_５０およびＫ_ｉの測定。
ＮＡ阻害を、阻害剤とノイラミニダーゼを１０分間、室温で混合し、続いて２００μMの基質を添加することにより測定した。阻害剤ＩＣ_５０値を、Graph Pad Prism 4を使用してＮＡ活性阻害パーセントを阻害剤濃度に対してプロットすることによる用量応答曲線から決定した。阻害剤Ｋ_ｉ値を式Ｋ_ｉ＝ＩＣ_５０／(１＋［Ｓ］／Ｋ_ｍ)(Cheng, Y-C; Prusoff, W. H. Biochem. Pharmacol. 1973, 22, 3099-3108)により決定した(式中、[Ｓ]はＩＣ_５０測定実験に使用した基質(ＭＵＮＡＮＡ；Sigma)濃度であり、Ｋ_ｍは、最大の半分の速度を生じる基質濃度である)。Ｋ_ｍは、ミカエリス・メンテン式を使用したプロットにより決定した。

実施例２８。ＮＡ阻害剤のＥＣ_５０およびＣＣ_５０の測定。
ノイラミニダーゼ阻害剤の抗インフルエンザ活性を、Ｈ１Ｎ１ ＣＰＥ活性の５０％保護のためのＮＡ阻害剤濃度であるＥＣ_５０値により測定した。１００ ＴＣＩＤ_５０の５０μL希釈Ｈ１Ｎ１を、種々の濃度の等量のＮＡ阻害剤と混合した。混合物を使用して、９６ウェル中１×１０^５細胞／mLの１００μLのＭＤＣＫ細胞を感染させた。４８時間、３７℃で５.０％ＣＯ_２下にインキュベーション後、細胞変性効果を、上記の通りCellTiter 96(登録商標)AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay試薬で測定した。阻害剤ＥＣ_５０をＣＰＥパーセント対ＮＡ阻害剤濃度の曲線をGraph Pad Prism 4を使用してフィットさせることにより決定した。ＣＣ_５０値は、ＮＡ阻害剤のＭＤＣＫ細胞に対する毒性を測定し、ウイルス感染がない以外、ＥＣ_５０決定に準じて決定した。

実施例２９。インビボアッセイ
雌ＢＡＬＢ／ｃマウス(４−５週齢)をゾレチルで麻酔し、２５μLの感染性インフルエンザウイルスを経鼻的に接種した。ホスホネート化合物３および３ｂおよびタミフルを、１０匹のマウスの群に０.０１、０.１、１.０および１０mg／体重kg／日で、１日２回、５日間胃管栄養法により投与した。対照(プラセボ)マウスには、同じスケジュールで滅菌水を投与した。薬剤の最初の投与４時間後、マウスに１０ ＭＬＤ_５０のインフルエンザウイルス[Ａ／ＷＳＮ／３３(Ｈ１Ｎ１)またはＮＩＢＲＧ−１４(Ｈ５Ｎ１)]を接種した。マウスを、毎日１４日間、生存および体重について観察した。平均生存率および平均体重の結果を表３および４に示す。個々の生存率および平均体重の結果を図９〜２０に示す。

実施例３０。Ｎ１ノイラミニダーゼ阻害のコンピューターモデリング。
ＮＡと複合体の化合物３のモデルを、化合物のインフルエンザウイルスノイラミニダーゼ(Ｎ１亜型、ＰＤＢコード：２ＨＵ４)結晶学的構造へのドッキングを介して構築した(Russell et al., Nature 2006, 443, 45-49)。化合物３の３次元構造を、SYBYL 7.3プログラムでオセルタミビル２(また２ＨＵ４から)の３次元構造を修飾することにより構築した。(SYBYL 7.3; The Tripos Associates: St. Louis, MO. SYBYL computation was conducted at the National Center for High Performance Computing, Taiwan.)。GOLD 3.1.1(Jones et al., J. MoI. Biol. 1995, 245, 43-53; Jones et al., J. MoI. Biol. 1997, 267, 727-748)を、柔軟性のあるドッキング・オプションを開始してタンパク質上に化合物３をドッキングさせるのに使用した。Kollmann−全原子電荷(Cornell et al., J. Am. Chem. Soc. 1995, 117, 5179-5197.)をこのタンパク質原子に割り当て、Gasteiger-Hueckel(Gasteiger and Marsili, Tetrahedron 1980, 36, 3219-3228.; MarsiliおよびGasteiger, Croat. Chem. Acta 1980, 53, 601-614; PurcellおよびSinger, J. Chem. Eng. Data 1967, 12, 235-246)電荷を、SYBYL 7.3プログラムを使用してリガンド原子に割り当てた(Jones et al., J. MoI. Biol. 1997, 267, 727-748)。計算の最初の１０００個の独立した遺伝的アルゴリズムサイクルを、−１８０〜１８０度で変わるリガンドねじれ角で行った。検索効率を、ドッキング立体配座空間についての最も徹底的な検索を確実にするためにに設定した。他の全てのパラメータはデフォルトのセッティングと同じものを維持した。ドッキング・プロセスを、Intel(R)Xeon(TM)CPU 3.00 GHz CPU 40プロセッサーLinuxクラスターに分配した。得られたリガンド−タンパク質複合体構造を、GOLDSCORE構造スコアリング関数によりランク付けし、上位１０００ヒットを決定した。上位配置の目視検査は、図１ｂに示す一致した構造が明白であることを確認した。この結果は、ＮＡの鍵となるアルギニンと化合物３のホスフェート基の間の強い相補的静電気相互作用から判断して期待された。分子モデルをPyMOLソフトウェア(DeLano WL(2002)The PyMOL molecular graphics system San Carlos(California): DeLano Scientific)で表示させた。図１において、リガンドの７Å半径中心内のＮＡ残基の側鎖における炭素原子を明確に示す。仮の水素結合ドナー−アクセプター対点線で繋ぐ。ホスホネート化合物３ａの複合体は、オセルタミビル−ＮＡ複合体(６対リガンド−ＮＡ Ｈ−結合)と比較して、より多くの、ＮＡ活性部位における鍵となる残基との水素結合相互作用(８対リガンド−ＮＡ Ｈ−結合)を有する。

実施例３１。次の実施例合成法のための材料および生成物特徴付け
次の実施例について、全ての試薬は市販されており、特記しない限りさらに精製することなく使用した。全ての溶媒は特記しない限り無水グレードであった。ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(ＤＩＡＤ)を、Ｎａ_２ＳＯ_４減圧下で蒸留した。全ての非水性反応は、特記されない限り、わずかに陽圧のアルゴン下に、オーブン乾燥させたガラス容器で行った。反応を磁気撹拌し、シリカゲル薄層クロマトグラフィーでモニターした。フラッシュクロマトグラフィーを、６０−２００μm粒子径のシリカゲルで行った。収率は、分光的に純粋な化合物について報告する。を、Electrothermal MEL-TEMP(登録商標)1101D融点装置で記録し、補正していない。ＮＭＲスペクトルをBruker AVANCE 600および400分光計で記録した。化学シフトは、テトラメチルシラン(ＴＭＳ)に対するδ値をもたらす；カップリング定数ＪはHzで示す。内部標準は^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルについてＣＤＣｌ_３(δ_Ｈ＝７.２４)、ＣＤ_３ＯＤ(δ_Ｈ＝３.３１)またはＤ_２Ｏ(δＨ＝４.７９)、^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルについてＣＤＣｌ_３(δ_ｃ＝７７.０)またはＣＤ_３ＯＤ(δｃ＝４９.１５)、および^３１Ｐ−ＮＭＲスペクトルについてＤ_２Ｏ(δ_ｐ＝０.００)のＨ_３ＰＯ_４であった。分裂をｓ(１重項)、ｄ(２重項)、ｔ(３重項)、ｑ(４重項)、ｍ(多重項)、ｂｒ(ブロード)およびｄｄ(２個の２重項)として報告する。ＩＲスペクトルをThermo Nicolet 380 FT-IR分光計で記録した。回転をPerkin-ElmerModel 341偏光計で記録した。[α]Ｄ値は、10-1 deg cm2 g-iの単位で示す。高解像度ＥＳＩマススペクトルをBruker Daltonics分光計で記録した。

添付文書Ａを、それが完全にここに記載されているように引用により包含させ、それは次の実施例に関連する。

実施例３１。Ｎ−[(１Ｓ,４５,５Ｒ,６Ｒ)−３,６−ジブロモ−４,５−(イソプロピリデン−ジオキシ)シクロヘキシ−２−エン−１−イル]アセトアミド(１９)。

アセトン(２０mL)と２,２−ジメトキシプロパン(４０mL)の混合物中のｃｉｓ−ジヒドロジオール１７(８.０ｇ、４２.１mmol)の冷(０℃)溶液を、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物(１００mg、０.５２mmol)で処理した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、その後それをＮａＨＣＯ_３の飽和水性溶液(６０mL)に添加することによりクエンチした。有機溶媒を減圧下除去し、残存水性相をＥｔ_２Ｏ(３×１００mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水(１００mL)で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し(加熱せず)、粗アセトニドを明黄色油状物として得た(８.９２ｇ)。

乾燥アセトニトリル(２５０mL)中のＮ−ブロモアセトアミド(ＮＢＡ、６.４９ｇ、４７mmol)の溶液に、ＳｎＢｒ_４(４.７mLのＣＨ_２Ｃｌ_２中１Ｍ溶液、４.７mmol)および水(０.７２mL、４０mmol)を０℃で暗所で添加した。アセトニトリル(１５０mL)中の上で製造したアセトアミド(８.９２ｇ、３８.８mmol)を１時間にわたりＮＢＡ−ＳｎＢｒ_４混合物に同じ温度で滴下した。反応を８時間、０℃で激しく撹拌し、次いで飽和水性ＮａＨＣＯ_３(１００mL)およびＮａ_２ＳＯ_３(１００mL)でクエンチした。得られた混合物を室温で３０分間温めた。有機相の分離後、水性相をＣＨ_２Ｃｌ_２(３×３００mL)で抽出した。合わせた有機層を水(３×２００mL)および塩水(３００mL)で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をＥｔ_２Ｏ／ＣＨ_２Ｃｌ_２から再結晶して、ブロモアセトアミド１９(１１.６６ｇ、ｃｉｓ−ジヒドロジオール１７から７５％)を無色結晶固体として得た；ｍ.ｐ. １５０−１５２℃(分解)；

実施例３２。(１Ｓ,４５,５Ｓ,６Ｓ)−７−アセチル−３−ブロモ−４,５−イソプロピリデン−ジオキシ−７−アザビシクロ[４.１.０]ヘプト−２−エン(２０)。

リチウムビス(トリメチルシリル)アミド(３５mLのＴＨＦ中１.０Ｍ溶液、３５mmol)を、ＴＨＦ(１５０mL)中のブロモアセトアミド１９(１１.６６ｇ、３１.８mmol)の撹拌している溶液に、−１０℃で窒素雰囲気下滴下した。得られた溶液をを０℃に温め、３０分間撹拌して、褐色懸濁液を得た。緩衝溶液(１００mL、ｐＨ７)添加後、混合物をＥｔ_２Ｏ(４×１５０mL)で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗アジリジン２０(８.３２ｇ)をさらに精製することなく次工程に使用した。

分析用の純粋サンプル２０を、粗生成物のシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２：３)により製造した。無色固体；ｍ.ｐ. １１０−１１２℃；

実施例３３。Ｎ−[(１Ｓ,２Ｒ,５Ｓ,６Ｓ)−４−ブロモ−２−(１−エチルプロポキシ)−５,６−(イソプロピリデンジオキシ)シクロヘキシ−３−エン−１−イル]アセトアミド(２２)。

３−ペンタノール(５０mL)中の粗アジリジン２０(８.３２ｇ、２８.８mmol)の溶液に、ホウ素トリフルオライドエーテラート(４.６８mL、３６mmol)を−１０℃で滴下した。反応混合物を０℃に温め、６時間撹拌し、減圧下濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ(２００mL)に溶解し、有機層を飽和水性ＮａＨＣＯ_３(５０mL)で洗浄した。水性層をＥｔＯＡｃ(３×１００mL)で抽出し、合わせた有機層を水(２００mL)および塩水(２００mL)で洗浄した。有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残存油状物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：７)、エーテル生成物２２(８.８２ｇ、２０から７３％)を無色泡状物として得た。

実施例３４。Ｎ−[(１Ｒ,２Ｒ,５Ｓ,６Ｓ)−４−ブロモ−２−(１−エチルプロポキシ)−５,６−ジヒドロキシシクロヘキシ−３−エン−１−イル]アセトアミド(２３)。

メタノール(１００mL)中のアセトニド２２(８.８２ｇ、２３.４mmol)の溶液に、濃ＨＣｌ溶液(２mL)を添加した。反応混合物を５０℃で約６時間、ＴＬＣ分析で完全な脱保護が示されるまで撹拌した。混合物を室温に冷却し、溶媒を減圧下蒸発させ、残存固体をＥｔ_２Ｏ／ＴＨＦから再結晶して、ジヒドロキシアセトアミド２３(７.４２ｇ、９４％)を、無色結晶固体として得た；ｍ.ｐ. １３１−１３３℃(分解)；

実施例３５。(１Ｓ,２Ｒ,５Ｒ,６Ｓ)−６−アセトアミド−２,３−ジブロモ−５−(１−エチル−プロポキシ)−シクロヘキシ−３−エン−１−イルアセテート(２４)。

ＴＨＦ(１５０mL)中のジオール２３(７.４２ｇ、２２.１mmol)の撹拌している溶液に、０℃で窒素雰囲気下、α−アセトキシイソブチリルブロマイド(４.１mL、２７.８mmol)を１０分間にわたり滴下した。反応混合物を同じ温度で３０分間撹拌し、撹拌しながら３.５時間室温に温めた。溶媒を蒸発させ、残存油状物をＥｔＯＡｃ(２００mL)および５％水性ＮａＨＣＯ_３(５０mL)に分配した。有機層を水(１００mL)で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、粗ブロモアセテート２４(９.０５ｇ)を得た。粗生成物をさらに精製することなく次工程に使用した。

分析用純粋サンプル２４を、粗生成物のシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィー(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、２：１)により得た。明黄色泡状物；

実施例３６。Ｎ−[(１Ｒ,２Ｒ,６Ｒ)−４−ブロモ−２−(１−エチルプロポキシ)−６−ヒドロキシシクロヘキシ−３−エン−１−イル]アセトアミド(２５)。

Super-Hydride(登録商標)(ＬｉＢＨＥｔ_３、６１.５mLのＴＨＦ中１Ｍ溶液、６１.５mmol)を、ＴＨＦ(１００mL)のブロモアセテート２４(９.０５ｇ、２０.５mmol)の撹拌している溶液に、０℃で窒素雰囲気に添加した。得られた溶液を室温に温め、２時間撹拌し、飽和水性ＮＨ_４Ｃｌ(５０mL)で処理した。水性層を分離し、ＥｔＯＡｃ(６×１００mL)で抽出した。合わせた有機層を水(２×２００mL)および塩水(２００mL)で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濾過し、濃縮して、明黄色泡状物の残渣を得た。粗生成物をＥｔ_２Ｏからの再結晶により精製して、ヒドロキシアセトアミド２５(５.７８ｇ、ジオール２３から８２％)を白色結晶固体として得た；ｍ.ｐ. １０２−１０４℃；

実施例３７。Ｎ−[(１Ｒ,２Ｒ,６Ｓ)−４−ブロモ−２−(１−エチルプロポキシ)−６−アジド−シクロヘキシ−３−エン−１−イル]アセトアミド(２６)およびＮ−[(１Ｒ,６Ｒ)−４−ブロモ−６−(１−エチルプロポキシ)シクロヘキサ−２,４−ジエン−１−イル]アセトアミド(２７)。

ＴＨＦ(１２０mL)中の２５(５.７８ｇ、１８.１mmol)、トリフェニルホスフィン(９.９６ｇ、３８.０mmol)、新たに蒸留したジイソプロピルアゾジカルボキシレート(７.６８ｇ、３８.０mmol)およびジフェニルホスホリルアジド(１０.５１ｇ、３８.０mmol)の溶液を、４０℃で２４時間撹拌した。溶媒を減圧下回転蒸発により除去し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：２)、６Ｓ立体配置の対応するアジド生成物２６(５.２３ｇ、８４％収率)を、２％のジエン２７の副生成物(１０８mg、０.３６mmol)と共に得た。

アジド２６：白色固体、ｍ.ｐ. １３８−１４０℃；

ジエン２７：無色固体、ｍ.ｐ. ６８−７０℃；

実施例３８。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセチルアミノ−５−アジド−３−(１−エチル−プロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−カルボキシレート(２８ａ)。

エタノール(３mL)およびＴＨＦ(１５mL)中の２６(３４９mg、１mmol)、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン(２.５mL、１５.２mmol)およびビス(トリフェニルホスフィン)ジカルボニルニッケル(ｏ)(９６０mg、１.５mmol)の溶液を、２４時間、８０℃で窒素雰囲気下に撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。残存油状物をＥｔＯＡｃ(２０mL)で希釈し、混合物をセライトのパッドを通して濾過した。濾液を蒸発させて、明黄色油状物を得て、それをフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：７)、エステル２８ａ(２７４mg、８１％)を無色固体として得た；ｍ.ｐ. １１５−１１７℃；

実施例３９。ジエチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アジド−３−(１−エチル−プロポキシ)−１−シクロヘキセンホスホネート(２８ｂ)。

無水トルエン(５０mL)中の２６(１.７２ｇ、１０mmol)、ジエチルホスファイト(２.０７ｇ、１５mmol)および１,４−ジアザビシクロ[２.２.２]オクタン(３.３７ｇ、３０mmol)の混合物を、窒素で１０分間バブリングすることにより脱酸素し、次いで、窒素雰囲気下、丸底フラスコに入れられたテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(ｏ)(８６７mg、０.７５mmol)に添加した。得られた溶液を９０まで徐々に加熱し、この温度を１２時間維持した。反応混合物をセライトで濾過し、濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(３.９１ｇ)、それをフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：１〜２：１)、ホスホネート２８ｂ(３.３３ｇ、８３％)を無色油状物として得た。

実施例４０。Ｔｅｒｔ−ブチル(１Ｓ,５Ｒ,６Ｒ)−６−アセトアミド−３−ブロモ−５−(１−エチルプロポキシ)シクロヘキシ−３−エン−１−イルカルバメート(２９)。

無水アセトニトリル(３０mL)中の２,３−ジクロロ−５,６−ジシアノ−１,４−ベンゾキノン(１.３７ｇ、６mmol)およびトリフェニルホスフィン(１.５７ｇ、６mmol)の混合物に、室温で、テトラブチルアンモニウムシアネート(１.７１ｇ、６mmol)を添加し、続いてアルコール２５(１.５８ｇ、５mmol)を添加した。混合物を１８時間、室温で、反応が完了するまで撹拌した。溶媒を蒸発させ、黒色残渣をｔｅｒｔ−ブタノール(２０mL)に溶解した。得られた溶液を２４時間加熱還流した。溶媒を減圧下蒸発させ、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：７)、カルバメート２９(１.６３ｇ、７８％)を白色固体として得た；ｍ.ｐ. １５３−１５５℃；

実施例４１。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニルアミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセンカルボキシレート(３１ａ)。

ｎ−ブタノール(３５mL)中のビニルブロマイド２９(２.１１ｇ、５mmol)、カリウムアイオダイド(１.６６ｇ、１０mmol)およびヨウ化銅(Ｉ)(４７７mg、２.５mmol)の混合物を窒素で１０分間バブリングすることにより脱酸素し、次いで窒素雰囲気下、丸底フラスコに入れられたＮ,Ｎ'−ジメチルエチレン(ethyene)ジアミン(５４μL、０.５mmol)に添加した。反応混合物を２４時間、１２０℃で撹拌した。室温に冷却後、溶媒を減圧下蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ(５０mL)および希水性アンモニア溶液(５０mL)に分配した。有機相を水(３×３０mL)で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。残渣をシリカゲルの短カラムを通して濾過し(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、１：１)、粗ビニルアイオダイドの無色固体サンプルを得て、その３０(２.２９ｇ)をさらに精製することなく次工程に使用した。

酢酸パラジウム(II)(９０mg、０.４mmol)を、無水エタノール(５０mL)中の上で製造したビニルアイオダイド３０(２.２９ｇ、４.９mmol)およびナトリウムアセテート(１.６４ｇ、２０mmol)の溶液に添加した。反応混合物を２４時間、室温で、一酸化炭素の雰囲気下に撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、３：７)、３１ａ(１.６９ｇ、２９から８２％)を白色固体として得た；ｍ.ｐ. １４２−１４４℃ [lit. ^ｓ３ ｍ.ｐ. １３８−１３９℃]；

実施例４２。ジエチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−ｔｅｒｔ−ブトキシ−カルボニルアミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセンホスホネート(３１ｂ)。

２８ｂに類似の方法により、無水トルエン(５０mL)およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(ｏ)(８７２mg、０.７５mmol)中のビニルブロマイド２９(４.２１ｇ、１０mmol)、ジエチルホスファイト(２.１２ｇ、１５mmol)、１,４−ジアザビシクロ[２.２.２]オクタン(３.４３ｇ、３０mmol)の混合物を、９０℃で１２時間加熱した。反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、濾液をＥｔＯＡｃ(５０mL)および水(３０mL)に分配した。有機相を再び水(３０mL)および塩水(３０mL)で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して、粗生成物を得て、それをＥｔ_２Ｏ／ＣＨ_２Ｃｌ_２からの再結晶により精製して、ホスホネート３１ｂ(４.０５ｇ、８５％)を白色結晶固体として得た；ｍ.ｐ. １６７−１６９℃；

実施例４３。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−(１−エチル−プロポキシ)−１−シクロヘキセンカルボキシレートホスフェート(１５・Ｈ_３ＰＯ_４、タミフル(登録商標))。

化合物３１ａ(１.２４ｇ、３mmol)をエタノール(２０mL)に溶解し、少しずつ、ゆっくり、リン酸(１０mLのエタノール中１Ｍ溶液、１０mmol)の熱(５０℃)溶液に添加した。溶液を６時間、５０℃で撹拌した。０℃に冷却後、沈殿を濾過により回収し、冷アセトン(３×５mL)で濯いで、タミフル(９９８mg、８１％)を白色結晶として得た；ｍ.ｐ. １８７−１９０℃ [lit. ｍ.ｐ. １８４−１８６℃]；

実施例４４。アンモニウム(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセンホスホネート(３、タミホスホル)。

ジエチル(Diethy)ホスホネート３１ｂ(２.３８ｇ、５mmol)をＣＨ_２Ｃｌ_２(５０mL)に溶解し、ブロモトリメチルシラン(６.６７mL、５０mmol)で０℃で処理した。反応混合物を室温に温め、１８時間撹拌し、減圧下濃縮した。残渣を水(１０mL)に取り込み、２時間、室温で撹拌し、凍結乾燥に付した。残存薄黄色固体残渣をＥｔ_２Ｏ(３×２０mL)で洗浄し、白色固体を得て、それを水性ＮＨ_４ＨＣＯ_３(０.１Ｍ溶液、２０mL)に溶解し、１時間、室温で撹拌し、次いで凍結乾燥して、タミホスホル３(１.５６ｇ、８８％収率)を白色固体として得た；ｍ.ｐ. ２３８−２４０℃(分解)；

実施例４５。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−ホスホネートアンモニウム塩(３ｃ)。

エタノール(５０mL)中のジエチルエステル３１ｂ(１.４３ｇ、３mmol)の溶液を、エタノール中のナトリウムエタノエート(４.５mmol、４.５mLの１Ｍ溶液)で、窒素雰囲気下に処理した。混合物を１６時間、室温で撹拌し、次いでAmberlite IR-120(Ｈ^＋形)で酸性化した。不均質溶液を４０℃で２時間撹拌し、濾過し、真空で濃縮した。残存油状物を水(１５mL)に取り込み、凍結乾燥に付した。残存無色固体を冷アセトン(２０mL×３)で洗浄し、水性ＮＨ_４ＨＣＯ_３(１５mLの０.１Ｍ溶液)に溶解し、１時間、室温で撹拌し、次いで凍結乾燥して、タミホスホルモノエステルのアンモニウム塩３ｃ(８９８mg、８２％)を白色固体として得た。

実施例４６。エチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−グアニジニル−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−ホスホネートアンモニウム塩(１３ｃ)。

エタノール(６０mL)中のジエチルエステル１２ｂ(２.７３ｇ、４mmol)の溶液を、エタノール中のナトリウムエタノエート(６mmol、６mLの１Ｍ溶液)で、窒素雰囲気下に処理した。混合物を１８時間、室温で処理し、次いでAmberlite IR-120(Ｈ^＋形)で酸性化した。不均質溶液を４０℃で３時間撹拌し、濾過し、真空で濃縮した。残存油状物を水(１５mL)に取り込み、凍結乾燥に付した。残存無色固体を冷アセトン(２０mL×３)で洗浄し、水性ＮＨ_４ＨＣＯ_３(１５mLの０.１Ｍ溶液)に溶解し、１時間、室温で撹拌し、次いで凍結乾燥して、タミホスホルグアニジンモノエステルのアンモニウム塩１３ｃ(１.２２ｇ、７５％)を白色固体として得た。

実施例４７。ジエチル(３Ｒ,４Ｒ,５Ｓ)−４−アセトアミド−５−アミノ−３−(１−エチルプロポキシ)−１−シクロヘキセン−１−ホスホネート(３ｂ)。

エタノール(１８mL)中のアジド１１ｂ(２０４mg、０.５mmol)を、リンドラー触媒(８０mg)で、水素雰囲気下で１６時間、室温で処理した。反応混合物をセライトで濾過し、エタノールで濯いだ。濾液を減圧下蒸発させて、無色泡状物(１８３mg)、それをフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製して(ＭｅＯＨ／ＣＨ_２Ｃｌ_２、１：４)、ジエチルホスホネート３ｂ(１４１mg、７５％収率)を得た、明黄色油状物；

本組成物および方法を、現在最も実際的で、好ましい実施態様と考えられているものの観点で記載しているが、本発明は、開示の実施態様に限定される必要がないことは理解されるべきである。特許請求の範囲の精神および範囲内に包含される種々の修飾および類似の配置を包含することを意図し、特許請求の範囲の範囲は全てのかかる修飾および類似の構造が包含されるように最も広い解釈を与えるべきである。本開示は、添付の特許請求の範囲の任意のおよび全ての態様を包含する。

Claims (26)

1. 治療的有効量の式Ｉ：
   

   

   〔式中、
   ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして
   Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
   および薬学的担体を含む、組成物。
2. 式Ｉが：
   

   
3. 式Ｉが：
   

   

   である、請求項１に記載の組成物。
4. 式Ｉが：
   

   

   である、請求項１に記載の組成物。
5. 式Ｉが：
   

   

   である、請求項１に記載の組成物。
6. 式Ｉが：
   

   

   である、請求項１に記載の組成物。
7. 式Ｉが：
   

   

   である、請求項１に記載の組成物。
8. 式Ｉが：
   

   

   である、請求項１に記載の組成物。
9. 治療的有効量の少なくとも１種の：
   

   

   の少なくとも１個および薬学的担体を含む組成物。
10. 式Ｉ：
    

    

    〔式中、
    ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして
    Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４−、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
    の組成物を、少なくとも図３〜８のスキームの一つに従い製造する、方法。
11. 請求項１０に記載の方法による生成物。
12. 治療的有効量の式Ｉ：
    

    

    〔式中、
    ＡはＰＯ(ＯＲ)(ＯＲ')であって、ここで、ＲおよびＲ'は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アリールおよびＸから選択され、ここで、Ｘはアンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、エタノール−アンモニウム、ジシクロヘキシルアンモニウム、グアニジニウム、エチレンジアンモニウムカチオン、リチウムカチオン、ナトリウムカチオン、カリウムカチオン、セシウムカチオン、ベリリウムカチオン、マグネシウムカチオン、およびカルシウムカチオン、亜鉛カチオンから成る群から選択されるカチオン性カウンターイオンであり；そして
    Ｒ_１はＮＨ_２、ＮＨ_３ ^＋Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻、またはＮＨ(Ｃ＝ＮＨ)ＮＨ_２である。〕
    の組成物を提供する方法であって、ここで、該組成物は、ノイラミニダーゼの活性を阻害するために生物に投与するようにデザインされている、方法。
13. 生物が動物である、請求項１２に記載の方法。
14. 生物がヒトである、請求項１３に記載の方法。
15. 生物がインフルエンザ様症状を示す、請求項１２に記載の方法。
16. 式Ｉが
    

    

    である、請求項１２に記載の方法。
17. 式Ｉが
    

    

    である、請求項１２に記載の方法。
18. 式Ｉが
    

    

    である、請求項１２に記載の方法。
19. 式Ｉが
    

    

    である、請求項１２に記載の方法。
20. 式Ｉが
    

    

    である、請求項１２に記載の方法。
21. 式Ｉが
    

    

    である、請求項１２に記載の方法。
22. 式Ｉが
    

    

    である、請求項１２に記載の方法。
23. 治療的有効量の：
    

    

    の少なくとも１個を提供することを含む方法であって、ここで、該組成物は、ノイラミニダーゼの活性を阻害するために生物に投与するようにデザインされている、方法。
24. 生物が動物である、請求項２３に記載の方法。
25. 生物がヒトである、請求項２４に記載の方法。
26. 生物がインフルエンザ様症状を示す、請求項２３に記載の方法。

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