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JP2006511490A - Ｐｍｅａおよびそのアナログの新規ホスホン酸系プロドラッグ - Google Patents

Ｐｍｅａおよびそのアナログの新規ホスホン酸系プロドラッグ Download PDF

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JP2006511490A
JP2006511490A JP2004546667A JP2004546667A JP2006511490A JP 2006511490 A JP2006511490 A JP 2006511490A JP 2004546667 A JP2004546667 A JP 2004546667A JP 2004546667 A JP2004546667 A JP 2004546667A JP 2006511490 A JP2006511490 A JP 2006511490A
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Abstract

式Ｉのプロドラッグ、それらの使用、中間体および製造方法を記載する：
式Ｉ：
【化１】
Figure 2006511490

［式中、
ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
で示される化合物、およびその製薬的に許容される塩。

Description

（本発明の分野）
本発明は、抗ウィルス活性および抗癌活性を有する新規ホスホン酸プロドラッグ、それらの製造、合成中間体ならびに使用を目的とする。より詳細には、本発明は、ＰＭＥＡまたは関連するアナログに基づくホスホン酸抗ウィルス薬の、置換されていることもある環状１，３−プロパニル−１−アリールエステル類の分野に関する。
以下の本発明の背景の記載は、本発明の理解を助けるために提供するものであるが、本発明の先行技術であると認めるものでも、またはそれを記載するものでもない。すべての刊行物は、引用によりそのまま包含される。
９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン（ＰＭＥＡ）および関連するアナログ（U.S. 4,808,716; U.S. 5,142,051; De Clercqら, Antiviral Res. 8(5-6):261-72 (1987)）は、抗ウィルス活性、例えばＢ型肝炎およびＨＩＶに対する活性を示すホスホン酸である。ＰＭＥＡのジピバロイルオキシメチレンエステル（「ビスＰＯＭ ＰＭＥＡ」）は、Ｂ型肝炎の処置のための臨床試験に供されている（Benhamouら, Lancet 358(9283):718-23 (2001)）。ＰＭＥＡは、ＨＢＶのＤＮＡポリメラーゼをブロッキングすることにより作用すると考えられる。さらに、これらの化合物はまた、抗癌活性を示すことがいくつかの研究により示されている（Muronoら, Cancer Res., 61(21):7875-7 (2001)）。生物学的に活性な化合物は、ジホスフェート、例えばＰＭＥＡｐｐであると考えられ、これは特異的な哺乳動物細胞内キナーゼを受けてホスホン酸から産生される可能性が高い。
ホスホン酸類を含む化合物およびそれらの塩は、生理学的ｐＨにて帯電性が高く、それゆえ低い経口バイオアベイラビリティー、低い細胞透過性および制限された組織分布（例えばＣＮＳ）を示すことが多い。さらに、これらの酸はまた一般に、薬物としてのそれらの使用を妨害するいくつかの他の性質、例えば急速な腎クリアランスに起因する短い血漿半減期ならびに毒性（例えば、腎臓、胃腸など）を伴う（例えば、Antimicrob Agents Chemother. 42(5): 1146-50 (1998)）。
例えば、ＰＭＥＡは極めて低い分布容積しか示さず、これはおそらくその高い負電荷に起因する。ヒトでは、ＰＭＥＡの腎クリアランスの促進を助ける腎尿細管細胞の基底外側表面（basolateral surface）における有機アニオントランスポーターの存在の結果として、投与量の９８％が腎臓から排泄される。ＰＭＥＡ治療は、ＰＭＥＡおよび関連するホスホリル化された種の腎臓での暴露および蓄積に起因すると思われる重篤な腎毒性を伴う。従って、ＰＭＥＡおよび関連するアナログの毒性を軽減する方法が必要である。
環状ホスホネートエステルもまた、ＰＭＥＡおよび関連するアナログとして記載されている。これらの環状エステルについての番号付けを以下に示す：
Figure 2006511490
 ＰＭＥＡの無置換環状１’，３’−プロパニルエステルが製造されたが、インビボ活性をまったく示さなかった。EP 0 481 214 B1は、ＰＭＥＡの環状プロドラッグの例（ここに、１’および３’位は無置換である）を開示する。発明者（Starrettら, J. Med. Chem. 37:1857-1864 (1994)）による出願およびその後の刊行物はさらに、化合物の研究成果、すなわちこれらの化合物が経口バイオアベイラビリティーおよび生物学的活性をまったく示さなかったことを開示する。それらの化合物は低いｐＨにて不安定であることが示され、例えば環状２’，２’−ジフルオロ−１’，３’−プロパンエステルは、加水分解に対し不安定であり、開環モノエステルが急速に生成されることが報告されている。
１’位にアリール基を有する環状プロドラッグは、グルコース低下活性に特に有用であると知られ、それゆえ糖尿病の処置に有用であるホスホネートとして記載されている（US 5,658,889, WO 98/39344, WO 98/39343およびWO 98/39342）。さらに、US 6,312,662はこの戦略を使用し、肝臓疾患、例えばＢ型肝炎および肝細胞癌の患者の処置のために肝臓に種々の薬物および化合物クラスを肝臓特異的送達することを開示する。
さらに、肝臓疾患、例えば肝炎および肝臓癌は、投与量を制限する肝外副作用または化学療法薬の標的組織への不適切な送達のために、今日の治療での処置は不十分なままである。
（発明の概要）
本発明は、ＭとＶ基の間にてシスの相対的立体化学を有するＰＭＥＡおよび関連するアナログの新規環状１，３−プロパニル−１−アリールホスホネート環状エステル、それらの製造、合成中間体ならびに使用を目的とする。一つの態様において、シス環状エステルは、Ｖが結合している部分にてＳ立体化学を有する。
一つの側面において、本発明は、ウィルス感染を処置するためのこれらの環状エステルの使用を目的とする。本発明の別の側面は、肝臓ならびに類似の組織および細胞への増強された薬物分布から利益を受ける疾患、例えばＢ型肝炎および肝臓癌の処置のための、ＰＭＥＡおよびそのアナログのこれらの環状エステルの使用である。本発明の別の側面は、ＰＭＥＡおよび関連するアナログの経口送達を増強しおよび／または薬力学的半減期を延長するためのこれらの化合物の使用である。
さらに、本発明化合物は、ＰＭＥＡおよび関連するアナログの持続的送達を達成しおよび／または薬物の治療指数を増大するために使用される。
本発明の別の側面において、シスプロドラッグを製造する方法を記載する。別の側面において、Ｖが結合している部分にてＳ立体化学を有する、実質的に鏡像異性的に純粋なシス環状エステルを製造する方法を記載する。
本発明の一つの側面は、インビトロまたはインビボにて対応するＭＰＯ３ ２−、ＭＰ２Ｏ６ ３−およびＭＰ３Ｏ９ ４−に変換され、式Ｉ：
Figure 2006511490
 ［式中、
ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
Ｒ６は、Ｃ１〜３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
で示される化合物、ならびにその製薬的に許容される塩に関する。
本発明に記載する化合物の製造方法を記載し、これはホスホン酸としてのまたは活性形態（例えばジクロリデート（dichloridate））にてのいずれかのＰＭＥＡまたはＰＭＥＡアナログと１，３−プロパンジオールとの、シス立体異性体を優先的に生成する反応に依る。さらに、所望の異性体の単離および精製を可能にする方法および塩形態を記載する。
これらの化合物は不斉中心を有するため、本発明は、これらの化合物のラセミおよびジアステレオマー混合物だけでなく、個々の立体異性体をも目的とする。本発明はまた、製薬的に許容されおよび／または有用な、酸付加塩を含む式Ｉの化合物の塩を含む。
定義
本発明に従い、本明細書にて用いる次の用語は、特に明記されなければ、次の意味を有するものと定義される。
用語「アルキル」は、直鎖、分枝鎖および環状基などの飽和脂肪族基を意味する。適切なアルキル基としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルおよびシクロプロピルが挙げられる。
用語「アリール」は、５〜６つの環原子を有する芳香族基を意味する。適切なアリール基としては、フェニル、フラニル、ピリジルおよびチエニルが挙げられる。アリール基は置換されていてもよい。
用語「製薬的に許容される塩」としては、本発明化合物と有機または無機の酸または塩基との組合せに由来する式Ｉの化合物の塩であって、動物に安全に投与することができる塩が挙げられる。適切な酸としては、酢酸、アジピン酸、ベンゼンスルホン酸、（＋）−７，７−ジメチル−２−オキソビシクロ［２．２．１］ヘプタン−１−メタンスルホン酸、クエン酸、１，２−エタンジスルホン酸、ドデシルスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸（glucoheptonic acid）、グルコン酸、グルコロン酸（glucoronic acid）、馬尿酸、塩酸ヘミエタノール酸（hydrochloride hemiethanolic acid）、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、臭化メチル酸（methylbromide acid）、メチル硫酸、２−ナフタレンスルホン酸、硝酸、オレイン酸、４，４’−メチレンビス［３−ヒドロキシ−２−ナフタレンカルボン酸］、リン酸、ポリガラクツロン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、スルホサリチル酸、タンニン酸、酒石酸、テレフタル酸およびｐ−トルエンスルホン酸が挙げられる。
本明細書にて用いる用語「プロドラッグ」は、生体系に投与されると、自発的化学反応、酵素触媒化学反応および／または代謝化学反応あるいはそれぞれの組合せの結果として生物学的に活性な化合物を生成する任意のＭ化合物を意味する。標準的なプロドラッグは、薬物に関連する官能基、例えばＨＯ−、ＨＳ−、ＨＯＯＣ−、Ｒ２Ｎ−に結合するインビボにて開裂する基を用い、形成される。標準的なプロドラッグとしては、基がアルキル、アリール、アラルキル、アシルオキシアルキル、アルコキシカルボニルオキシアルキルであるカルボン酸エステル、ならびに結合している基がアシル基、アルコキシカルボニル、アミノカルボニル、ホスフェートまたは硫酸塩であるヒドロキシル、チオールおよびアミンのエステルが挙げられるが、これらに限定されない。例示した基は、典型的なものであり、網羅したものではなく、当業者は、他の知られている種々のプロドラッグを製造することができる。そのような式Ｉの化合物のプロドラッグは、本発明の範囲に含まれる。プロドラッグは、ある形態の化学的変換を受けて、生物学的に活性である化合物、または生物学的に活性な化合物の前駆体である化合物を産生しなければならない。場合によって、プロドラッグは、通常、薬物自体より低いが生物学的に活性であり、薬物の有効性または安全性を、改善された経口バイオアベイラビリティー、薬力学的半減期などを通して改善するために提供する。生物学的に活性な化合物としては、例えば抗癌剤および抗ウィルス薬が挙げられる。
用語「環状１’，３’−プロパンエステル」、「環状１，３−プロパンエステル」、「環状１’，３’−プロパニルエステル」および「環状１，３−プロパニルエステル」は、式：
Figure 2006511490
 で示される基を意味する。
用語「シス」立体化学は、６員環上のＶ基とＭ基の位置関係を意味する。以下の式ＩＩは、シス立体化学を示す。
Figure 2006511490
用語「Ｎ６−置換」は、プリン環系の６位に結合しているアミンにおける置換を意味する。Ｎ６−は、一般にジアルキルアミノメチレン基（ここに、Ｒ１基としては、Ｃ１〜Ｃ４非環式アルキル、Ｃ５〜Ｃ６環状アルキル、ベンジル、フェネチルが挙げられるがこれらに限定されず、またはＲ１基は一緒になってピペリジン、モルホリンおよびピロリジンを形成する）で置換されている。
Figure 2006511490
用語「ジアルキルアミノメチレンイミン」は、次の構造：
Figure 2006511490
 ［式中、
Ｒ１基としては、Ｃ１〜Ｃ４非環式アルキル、Ｃ５〜Ｃ６環状アルキル、ベンジル、フェネチルが挙げられるがこれらに限定されず、またはＲ１基は一緒になってピペリジン、モルホリンおよびピロリジンを形成する］
を意味する。
用語「肝臓」は、ＣＹＰ３Ａ４アイソザイムまたは本発明の環状プロドラッグを酸化することが見出されているその他のＰ４５０アイソザイムを含む、肝臓ならびに類似の組織および細胞を意味する。実施例Ｄに基づき、我々は、式Ｉの化合物がシトクロムＰ４５０アイソザイムＣＹＰ３Ａ４により選択的に酸化されることを見出している。DeWaziersら（J. Pharm. Exp. Ther. 253:387-394 (1990)）によれば、ＣＹＰ３Ａ４はヒトの次の組織において見られる（免疫ブロット法および酵素測定により決定）：
組織 肝臓活性％
肝臓 １００
十二指腸 ５０
空腸 ３０
回腸 １０
結腸 ＜５（Ｐ４５０アイソザイムのみ見られる）
胃 ＜５
食道 ＜５
腎臓 検出されず
従って「肝臓」は、より好ましくは、肝臓、十二指腸、空腸、回腸、結腸、胃および食道を意味する。最も好ましくは、肝臓は、肝臓器官を意味する。
用語「増強する」は、特異的性質を増大または改善することを意味する。
用語「肝臓特異性」は、薬物またはプロドラッグで処置された動物において測定される割合：
［肝臓組織中の親ドラッグまたは薬物代謝体］／［血中、尿中または別の非肝臓組織中の親ドラッグまたは薬物代謝体］
を意味する。この割合は、親ドラッグ、または生物学的に活性な薬物代謝体を含む薬物代謝体、あるいはその両方の組織レベルを特定の時間に測定することにより決定することができ、または３つまたはそれより多くの時点にて測定される値に基づくＡＵＣ（曲線下領域）で表わすこともできる。
用語「増大または増強された肝臓特異性」は、親ドラッグで処置された動物に対するプロドラッグで処置された動物における肝臓特異性の割合の増大を意味する。
用語「増強された経口バイオアベイラビリティー」は、親ドラッグまたはプロドラッグ（本発明のものではない）の投与量の胃腸管からの吸収における少なくとも５０％の増大を意味する。より好ましくは、少なくとも１００％である。経口バイオアベイラビリティーの測定は、通常、プロドラッグ、薬物または薬物代謝体の、全身投与後の測定と比較した、経口投与後の血中、組織中または尿中の測定を意味する。
用語「薬物代謝体」は、インビボまたはインビトロにて親ドラッグまたはそのプロドラッグから生成する任意の化合物を意味する。
用語「薬力学的半減期」は、薬物またはプロドラッグの投与後、測定される薬理学的応答の二分の一の減少が観察される時間を意味する。薬力学的半減期は、半減期が好ましくは少なくとも５０％増大するとき増強する。
用語「薬物動態学的半減期」は、薬物またはプロドラッグの投与後、血漿中または組織中の薬物濃度の二分の一の減少が観察される時間を意味する。
用語「治療指数」は、死亡、すなわち毒性の指標となるマーカーの上昇および／または薬理学的副作用のような望ましくない応答を生じる投与量に対する、治療的に有益な応答を生じる薬物またはプロドラッグの投与量の割合を意味する。
用語「持続的送達」は、プロドラッグの存在により、治療的に有効な薬物レベルが持続する期間の増大を意味する。
用語「バイパスする薬物耐性」とは、薬物の生物学的活性を産生および維持するために重要な生化学的経路および細胞活性における変化、ならびに代替経路の使用を通して耐性をバイパスする因子の能力における変化、または該因子が耐性に傾けられた変化を誘発できないことに起因する、薬物の治療的有効性の損失または部分的損失（薬物耐性）を意味する。
用語「治療的に有効な量」は、疾患または状態の処置において何らかの有益な効果を与える量を意味する。
用語「ホスホネート」は、炭素を介してＰＯ３ ２−に結合している化合物を意味する。
用語「親ドラッグ」は、ＭＰＯ３Ｈ２がＰＭＥＡまたはそのアナログであるとき、それぞれＰＭＥＡまたはそのアナログを意味する。
用語「生物学的に活性な薬物または因子」は、生物学的効果を生じる化学物質を意味する。本発明において、生物学的に活性な因子は、Ｍが親ドラッグまたは代謝体におけるＭと同じであることができるＭＰＯ３ ２−、ＭＰ２Ｏ６ ３−またはＭＰ３Ｏ９ ４−を意味する。
用語「ＰＭＥＡアナログ」は、原子の鎖を経由してリン酸に結合したヌクレオチド塩基を有する化合物を意味する。適切なＰＭＥＡアナログとしては、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンが挙げられる。
用語「鏡像体過剰率（％ｅｅ）」は、光学純度を意味する。これは次式：
（［Ｒ］−［Ｓ］）／（［Ｒ］＋［Ｓ］）ｘ１００＝％Ｒ−％Ｓ＝％ｅｅＲ異性体
（式中、［Ｒ］はＲ異性体の量であり、［Ｓ］はＳ異性体の量である）
を用いることにより得られる。
この式は、Ｒが主要な異性体であるとき％ｅｅを提供する。
用語「キラルアルコール」または「キラルジオール」は、％ｅｅが≧５０％である１，３−ジオールを意味する。
用語「胃腸毒性の改善」は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡであれば生じるであろう胃腸組織および器官への毒性に対して毒性がブロッキング、抑圧または軽減することを意味する。
用語「腎毒性の改善」は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡであれば生じるであろう腎臓組織および器官への毒性に対して毒性がブロッキング、抑圧または軽減することを意味する。
用語「肝外毒性の改善」は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡであれば生じるであろう肝臓外の組織および器官への毒性に対して毒性がブロッキング、抑圧または軽減することを意味する。
用語「抗ウィルス治療に耐性」は、抗ウィルス治療処置に完全に応答せず、またはこれにより充分に影響を受けないことを意味する。
用語「同時に投与される」は、ある薬物を別の薬物が投与されるのと同時にまたはほぼ同時に投与することを意味する。好ましい投与は、互いの投与が３０分以内である。
用語「インターフェロン」は、広範なウィルス感染への非特異的耐性を与え、細胞増殖に影響しおよび免疫応答を調節する、種特異的脊椎動物タンパク質のファミリーを意味する。適切なインターフェロンとしては、インターフェロンアルファ、インターフェロンガンマ、オメガインターフェロン、オムインフェロン（Ominferon）、ロフェロン−Ａ、アルブフェロン（Albuferon）、アルフェロン（Alferon）、インフェルゲン（Infergen）、イントロンＡ、ペグイントロン、ペガシス、インターフェロン融合体（interferon fusions）、インターフェロン誘導体および小分子インターフェロン誘導物質が挙げられる。
用語「ペグ化インターフェロン」は、インビボクリアランスを減少し、それによりその作用期間を増大することによりその半減期を増大するために、ポリエチレングリコール分子の結合により改変されているインターフェロンを意味する。
本明細書および特許請求の範囲では次のよく知られた薬物を記載している。略語および一般的名称も示す。
ａｒａ−Ａ； ９−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシルアデニン（ビダラビン）
ＡＺＴ； ３’−アジド−２’，３’−ジデオキシチミジン（ジドブジン）
ｄ４Ｔ； ２’，３’−デオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジン（スタブジン）
ｄｄＩ； ２’，３’−ジデオキシイノシン（ジダノシン）
ｄｄＡ； ２’，３’−ジデオキシアデノシン
ｄｄＣ； ２’，３’−ジデオキシシチジン（ザルシタビン）
Ｌ−ｄｄＣ； Ｌ−２’，３’−ジデオキシシチジン
Ｌ−ＦｄｄＣ； Ｌ−２’，３’−ジデオキシ−５−フルオロシチジン
Ｌ−ｄ４Ｃ； Ｌ−２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン
Ｌ−Ｆｄ４Ｃ； Ｌ−２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロ−５−フルオロシチジン（ＡＣＨ１２６，４４３）
３ＴＣ； （−）−２’，３’−ジデオキシ−３’−チアシチジン；（−）−１−（（２Ｒ，５Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル）シストシン（ラミブジン）
１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド（リバビリン）（ビラゾール）
ＦＩＡＵ； １−（２−デオキシ−２−フルオロ−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウリジン
ＦＩＡＣ； １−（２−デオキシ−２−フルオロ−ｂ−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン
Ｌ−ＦＭＡＵ； ２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノ−フラノシルウラシル（クレブジン）
ＢｖａｒａＵ； １−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル−Ｅ−５−（２−ブロモビニル）ウラシル（ソリブジン）
Ｅ−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン
ＴＦＴ； トリフルオロチミジン（トリフルオロチミジン）
５−プロピニル−１−アラビノシルウラシル（ゾナビル）
ＣＤＧ； 炭素環式２’−デオキシグアノシン
ＤＡＰＤ； ベータ−Ｄ−２−ヒドロキシメチル−５−（２，６−ジアミノプリン−９−イル）−１，３−ドキサラン（doxalane）
ＦＤＯＣ； （−）−ベータ−Ｄ−５−フルオロ−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン］シトシン
ｄ４Ｃ； ２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロシチジン
ＤＸＧ； ジオキソラングアノシン
ＦＥＡＵ； １−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−５−エチルウラシル
ＦＬＧ； ２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオログアノシン
ＦＬＴ； ２’，３’−ジデオキシ−３’−フルオロチミジン
ＦＴＣ； （−）−シス−５−フルオロ−１−［２−（ヒドロキシメチル）−１，３−オキサチオラン−５−イル］シトシン（コヴィラシル）
５−イル−炭素環式２’−デオキシグアノシン（ＢＭＳ−２００４７５）（エンテカビル）
［１−（４’−ヒドロキシ−１’，２’−ブタジエニル）シトシン］（シタレン）
オキセタノシンＡ； ９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ビス（ヒドロキシメチル）−２−オキセタニル）アデニンＮＫ８４−０２１８
オキセタノシンＧ； ９−（（２Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３，４−ビス（ヒドロキシメチル）−２−オキセタニル）グアニン
ｄｄＡＰＲ； ２，６−ジアミノプリン−２’，３’−ジデオキシリボシド
シクロブタＡ； （＋／−）−９−［（１−ベータ，２−アルファ，３−ベータ）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１−シクロブチル］アデニン
シクロブタＧ； （＋／−）−９−［（１−ベータ，２−アルファ，３−ベータ）−２，３−ビス（ヒドロキシメチル）−１−シクロブチル］グアニン（ロブカビル）
５−フルオロ−２’−デオキシウリジン（フロキシウリジン）
ｄＦｄＣ； ２’，２’−ジフルオロデオキシシチジン（ゲムシタビン）
ａｒａＣ； アラビノシルシトシン（シタラビン）
ＢＵｄＲ； ５−ブロモデオキシウリジン（ブロキシン（Broxine））
ＩＤＵ； ５−ヨード−２’−デオキシウリジン（イドクスウリジン）
ＣｄＡ； ２−クロロ−２’−デオキシアデノシン（クラドリビン）
Ｆ−ａｒａ−Ａ； ２−フルオロアラビノシルアデノシン（フルダラビン）
ＡＣＶ； ９−（２−ヒドロキシエトキシルメチル）グアニン（アシクロビル）
ＧＣＶ； ９−（（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メチル）グアニン（ガンシクロビル）
９−（４−ヒドロキシ−３−（ヒドロキシメチル）ブタ−１−イル）グアニン（ペンシクロビル）
（Ｒ）−９−（３，４−ジヒドロキシブチル）グアニン（ブシクロビル）
ホスホノギ酸（ホスカルネット）
ＰＰＡ； ホスホノ酢酸
ＰＭＥＡ； ９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン（アデフォビル）
ＰＭＥＤＡＰ； ９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン
ＨＰＭＰＣ； （Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン（シドフォビル）
ＨＰＭＰＡ； （Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン
ＦＰＭＰＡ； ９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン
ＰＭＰＡ； （Ｒ）９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン
Ａｒａ−Ｔ； ９−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシルチミジン
ＦＭｄＣ； （Ｅ）−２’−デオキシ−２’（フルオロメチレン）シチジン
ＡＩＣＡＲ； ５−アミノイミダゾール−４−カルボキサミド−１−リボフラノシル
ＡＭ３６５； 非環式グアノシンヌクレオシドアナログ
Ｌ−ｄＴ； ベータ−Ｌ−２’−デオキシチミジン（ＮＶ−０２Ｂ）
Ｌ−ｄＣ； ベータ−Ｌ−２’−デオキシシトシン、ベータ−Ｌ−２’−デオキシシトシンのバリンプロドラッグ誘導体
ＭＣＣ４７８； ２−アミノホスホノメトキシエチルプリンアナログ
インターフェロンアルファ
ペグ化インターフェロン
ファムシクロビル、２−［２−（２−アミノ−９Ｈ−プリン−９−イル）エチル］−１，３−プロパンジオールジアセテート
ＸＴＬ００１； モノクローナル抗体組合せ（ＨｅｐｅＸ−Ｂ）
セラダイム（Theradigm）
ザダシン、チモシンアルファ
ＨＢＶ ＤＮＡワクチン
ＥＨＴ８９９、ウィルスタンパク
ＩＣＮ２００１、ヌクレオシドアナログ
Ｆｌｕｏｒ ＬおよびＤヌクレオシド、ヌクレオシドアナログ
ラシビール
ロブスタフラボン（Robustaflavone）、天然に存在するビフラバノイド（biflavanoid）
（発明の詳細な記載）
本発明は、ＰＭＥＡまたは関連するアナログのシス立体化学の環状１，３−プロパニル−１−アリールエステル類が有効なプロドラッグであるという発見を目的とする。これらのＰＭＥＡおよびＰＭＥＡアナログの環状エステルプロドラッグは、Ｐ４５０酵素の作用を通した活性化を必要とし、生物学的に活性な薬物をインビボにて生成すると考えられる。高レベルのＰ４５０酵素、例えば肝臓中のＣＹＰ３Ａ４により、化合物の活性化が肝臓中にて大きくなることができ、それゆえ生物学的に活性な薬物の肝臓レベルを増大しおよび／または肝臓外の生物学的に活性な薬物のレベルを減少することができる。肝臓特異性は、Ｐ４５０組織分布だけでなく、肝細胞の外および血流中または胆汁中にＰＭＥＡを輸送する経路に関連するプロドラッグ活性化速度およびその後のＰＭＥＡまたはそのアナログのリン酸化に依存する。低い活性化は、肝臓（ならびに肝外組織）中の低いＰＭＥＡレベルを引き起こすだろう。高い活性化、しかし下流キナーゼによるＰＭＥＡジホスフェート（「ＰＭＥＡｐｐ」）への緩やかな変換は、ＰＭＥＡｐｐ産生を制限するだろう。ＰＭＥＡの血流中への急速な輸送は、肝臓特異性を減少し、治療指数の改善を制限するだろう（Mulatoら, J. Pharmacol. Exp. Ther. 295:10-15 (2001); Gilead Sciences, Inc. Press Release (6/22/01) Foster City, CA）。
本発明化合物は、肝臓中にて代謝され、さらに生物学的に活性な薬物に代謝され得るホスホネートを産生する。減少した肝外毒性はまた、より高い投与量を可能にし、それゆえ生物学的に活性な因子の肝臓レベルを肝臓にて増大することができる。
本発明の別の側面において、本発明の環状エステルは、水溶液中にて高い安定性を示し、高い経口バイオアベイラビリティーを示すことを見出した。高い安定性は、プロドラッグが高い経口吸収を確実にするために十分な時間、胃腸環境（ｐＨ１〜９）にて存在することを可能にできる。さらに、経口バイオアベイラビリティーは、酵素に対するＧＩ安定性に依存する。薬物吸収のための主要な部位であり、比較的高レベルのＣＹＰ３Ａ４（肝臓と比較して５０％）を示す小腸で考えるならば、記載の型の化合物は、腸内のプロドラッグ活性化および対応するホスホン酸への変換に起因する低い経口バイオアベイラビリティーに関連し得る。しかし、本発明に記載するように、本発明化合物は高い経口バイオアベイラビリティーを示す。
本発明の別の側面において、本発明の環状エステルはまた、親ドラッグまたはエステラーゼに敏感なプロドラッグエステル［エステラーゼ敏感］に関して薬力学的半減期を増強するために用いることもできる。本発明化合物は、ＰＭＥＡおよび他のホスホン酸アナログと比較して、腎臓によりゆっくりと除去され、それゆえ時間をかけて放出される薬物貯蔵を提供する。従って本発明化合物は、持続した治療効果を生じることができる。一方、プロドラッグエステル、例えばビスＰＯＭのようなアシルオキシアルキルエステルは、インビボにて急速に開裂し、それゆえホスホン酸の薬物動態学に依存する（Noble, S. and Goa, K.L., Drugs 58(3):479-487 (1999)）。
別の側面において、環状ホスホネート化合物の製造方法を記載する。
これらの側面は以下に、より詳細に記載する。
ホスホン酸薬物の増大された治療指数
本発明化合物は、ＰＭＥＡおよびＰＭＥＡアナログの治療指数（「ＴＩ」）を有意に増大することができる。多くの場合において、増大されたＴＩは、生物学的に活性な薬物のより高い肝臓レベルを生じ、それゆえより低い投与量により、同じ治療利益を達成することを可能にする、高い肝臓特異性の結果である。あるいは、増大されたＴＩは、薬物の肝外組織への減少した暴露から生じ得、それゆえ生物学的に活性な薬物の同等のまたはより高い肝臓レベルを達成する投与量における毒性の減少を生じることができる。
腎毒性は、ホスホン酸に関連する一般的な毒性である。この毒性は、例えば腎臓の近位尿細管の側底膜に局在する有機アニオントランスポーターを経由し、負に荷電した薬物の、例えば、薬物の管腔輸送機序を経由した細胞からの同等に効率的な輸送（例えばアニオン交換または促進拡散）が存在しなければ、その後薬物を蓄積して高濃度にする尿細管細胞への輸送から生じる。多くの例が、腎毒性ホスホン酸の文献に報告されている。腎毒性は、動物とヒトの両方におけるビスＰＯＭ ＰＭＥＡに関連する。毒性は、その後腎臓を経由して除去されるＰＭＥＡへのビスＰＯＭ ＰＭＥＡの急速な変換に関連する。実際、ＰＭＥＡの静脈内投与量の９８％は、腎臓から除去される。
腎毒性は、クレアチニン中での血清の増大およびホスフェート中での減少に関連し、究極的に減少した腎臓機能に関連する。ビスＰＯＭ ＰＭＥＡ治療に関連する低い治療指数は、望ましくない組織分布プロファイルの機能、より詳細には、ＰＭＥＡの腎臓に対する肝臓への低い分布である。ＰＭＥＡの望ましくない分布プロファイルは、そのエステラーゼ敏感（ビスＰＯＭ）プロドラッグに起因することができ、それはこれらのユビキタス酵素がＰＭＥＡの高い全身暴露を生じる血漿中および胃腸組織中にて高く発現されるためである。ビスＰＯＭ ＰＭＥＡは、そのような毒性を避け、それによりその潜在的有効性を最小限にする低投与量（１０ｍｇ／日）にてヒトに投与されなければならない（Gilead Sciences, Inc. Press Release (6/22/01) Foster City, CA）。
ビスＰＯＭ ＰＭＥＡと対照的に、本発明化合物は、肝臓への増強されたＰＭＥＡ送達を引き起こすが、全身および腎臓ＰＭＥＡ暴露を最小限にする。化合物５４は、経口投与後よく吸収され、受動拡散を経由した無傷のプロドラッグとしてほとんどの組織に容易に分布する。化合物５４は、肝臓中にてシトクロムＰ４５０酵素、ＣＹＰ３Ａ４により活性化されるまで、血中およびほとんどの組織中にて安定のままであろう。このイソフォームは、すべてのＰ４５０活性の約３０％を占める肝臓中にて豊富に発現される。肝臓特異性は、他の組織がＣＹＰ３Ａ４を高レベルまで発現しないために得られる。化合物５４は、有意に減少した末梢薬物暴露および結果として起こる毒性を伴い、標的器官中にて増大された有効性を生じる。あるいは、化合物５４は、減少した全身ＰＭＥＡ暴露に起因してビスＰＯＭ ＰＭＥＡよりも毒性が低く、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較して改善された有効性を生じるより高い投与量で投与される。ある実験において、ＰＭＥＡおよびＰＭＥＡ関連代謝体のレベルを、化合物４またはビスＰＯＭ ＰＭＥＡのいずれかを投与したラットにおいて測定した（実施例ＮおよびＯ）。これらの実験により、ＰＭＥＡｐｐの肝臓器官レベルは、化合物４で処置された動物においてより高いが、ＰＭＥＡの腎臓レベルおよび尿レベルはより低いことが示された。
ホスホン酸薬物に関連する別の一般的な毒性は、例えばホスホン酸またはその代謝体（例えばリン酸化されたホスホン酸）の内臓上皮細胞中の蓄積に起因する胃腸毒性である。内臓上皮細胞における薬物の蓄積は、多くの因子に依存する。疎水性および低分子量である化合物は、内蔵上皮細胞に急速に拡散し、血流に入る。内臓上皮細胞中の酵素により荷電し、高い極性をもった化合物に急速に代謝された化合物は、細胞内にトラップすることができ、細胞毒性のレベルまで蓄積され得る。薬物代謝は、基質および酵素特異的活性、ならびに滞留時間、すなわち薬物が内臓上皮細胞にさらされる時間を含む他の因子に依存する。滞留時間に影響する因子は、拡散時間を増大するため、薬物の分子量および極性を含む。さらに、他のタンパク質、例えばｐ−グリコプロテインは、薬物を胃腸管に戻すことによって薬物の内臓の横断を阻害することにより、滞留時間を増大することができる。
ヒトにおけるビスＰＯＭ ＰＭＥＡ治療は、ＧＩ有害事象（Deeksら, J. Infect. Dis. 176:1517-1523 (1997)）の有意な発生に関連する。
胃腸管は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡをＰＭＥＡに急速に開裂するエステラーゼを含む。従って、放射性標識ＰＭＥＡおよびＰＭＥＡ代謝体により、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡのラットへの投与後の小腸におけるトラップを見出した（実施例Ｎ）。ＣＹＰ３Ａ４はまた小腸中に発現される。ビスＰＯＭ ＰＭＥＡと対照的に、低レベルのＰＭＥＡおよびＰＭＥＡ代謝体のみが、化合物４の経口投与後の小腸と関連した（実施例Ｎ）。
増大された経口バイオアベイラビリティー
ホスホン酸は、生理的ｐＨにて負に高く帯電した分子である。従って、ほとんどのホスホン酸は低い経口バイオアベイラビリティーを示す。例えばＰＭＥＡは、ラットにおいて１１％、サルにおいて＜１％およびヒトにおいて＜１２％の経口バイオアベイラビリティーを有する（Cundy, K.C., Clin. Pharmacokinet. 36(2):127-143 (1999)）。ＰＭＥＡのあるプロドラッグは、経口バイオアベイラビリティーを増大することが示されている。例えば、エステラーゼ敏感プロドラッグ、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡは、ラット、サルおよびヒトのそれぞれにおいて、３８％、２５％および４１％の経口バイオアベイラビリティーを有する（Shawら, Drug Metab. and Disp. 25(3):362-366 (1997)）。２’および２’，２’二置換１，３−プロパニル環状プロドラッグを含むＰＭＥＡの他のプロドラッグは、ＰＭＥＡへのインビボでの少ない変換または水溶液への不安定性のいずれかに起因し、低い経口バイオアベイラビリティーを示し、それゆえＧＩ管において帯電した代謝体またはＰＭＥＡの産生を示している。
Ｐ４５０基質の経口バイオアベイラビリティーは、内臓におけるＰ４５０の存在に起因して一般に低い。例えばシクロスポリン、ミダゾラムおよびフェロジピンのような薬物はすべて、Ｐ４５０代謝に起因して低い経口バイオアベイラビリティーを示す（Wacher, V.J.ら, Adv. Drug Deliv. Rev. 46:89-102 (2001)）。
本発明のプロドラッグは、ＰＭＥＡの経口バイオアベイラビリティーを増強することが示され、ＣＹＰ３Ａ４のための良い基質であるにもかかわらず、高い経口バイオアベイラビリティーを示すことを見出した（実施例Ｃ）。経口バイオアベイラビリティーは、アリール基およびその置換基に依存し、プロドラッグおよび塩形態を製造するために使用されるジオール立体異性体に依存した。例えば、Ｖ＝３−クロロフェニルは、Ｖ＝フェニルと比較してより高い経口バイオアベイラビリティーを示したようだ（実施例Ｃ）。経口バイオアベイラビリティーはまた、Ｓ−ジオール（Ｖ＝３−クロロフェニル）を用いたときにＲ−ジオールと比較して改善した（実施例Ｉ）。
プロドラッグ活性化
本発明のプロドラッグは、Ｐ４５０、例えばヒトにおけるＣＹＰ３Ａ４により活性化される。活性化は、プロドラッグ部分ならびに親ドラッグの構造的特徴に高く依存する。それぞれの基質についての触媒効率（Ｖｍａｘ／Ｋｍ）は、肝臓ミクロソーム、スーパーソームまたは組み換え酵素を用い、ホスホン酸またはその副生成物の生成あるいはプロドラッグの消失のいずれかをモニターして決定する。実施例Ｐに示すように、触媒反応は、化合物９−｛２−［２，４−トランス−（Ｓ）−（＋）−４−（３−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニンのトランス異性体は弱い阻害物質として作用するが、シス異性体は容易に酸化され、ＰＭＥＡに変換されるという環の立体化学に依存する。
プロドラッグ活性化はまた、ＰＭＥＡｐｐの生成をモニターすることにより肝細胞においてモニターした。実施例Ｂに示すように、Ｖ＝３−クロロフェニル、４−ピリジルおよびフェニルを、ラット肝細胞における最良の活性を有するプロドラッグ部分として同定した。
プロドラッグ活性化はまた、プロドラッグ立体異性体に依存した。Ｓ−ジオールは、低濃度と高濃度のプロドラッグの両方にて、ヒト肝臓ミクロソームにおけるインビトロでの最も容易に活性化された鏡像体であった（実施例Ｈ）。
プロドラッグ活性化は、期間および経口バイオアベイラビリティーならびに有効性、例えば生物学的に活性な薬物の肝臓レベルを含む薬物動態学において重要なパラメーターである。インビボにて効率的に活性化されるプロドラッグは、より高い肝臓レベルのＰＭＥＡｐｐおよびプロドラッグの活性薬物へのより大きな変換を起こすことができる。後者は改善された経口バイオアベイラビリティーを生じ得る。インビボにおけるプロドラッグ活性化は、放射性標識親ドラッグにより容易にモニターされる。プロドラッグ、ＰＭＥＡおよびＰＭＥＡ代謝体を、化合物４のラットへの投与後にモニターした（実施例ＮおよびＯ）。未反応のプロドラッグを便中にて測定したが、肝臓器官または小腸中では検出されなかった。
プロドラッグ安定性
プロドラッグ安定性は、バルクドラッグ（bulk drug）および製品の貯蔵寿命、経口バイオアベイラビリティー、肝臓分布、薬物毒性、ならびに薬物動態学的および薬力学的半減期に影響する重大な因子である。ホスホン酸プロドラッグは、水溶液、特に非中性ｐＨ溶液中にて不安定であることが多い。アシルオキシアルキルエステルは、他の一般的なホスホン酸プロドラッグがそうであるように、不安定性に関連する（Oliyaiら, Nucleosides, Nucleotides, Nucleic Acids 20(4-7):1295-8 (2001)）。環状プロドラッグは、環ひずみから生じる不安定性に関連する。置換されている環状プロドラッグは、水溶液中にて低い安定性を示すことが報告されている（Starrettら, J. Med. Chem. 37(12):1857-64 (1994)）。
プロドラッグの不安定性は、その負電荷により吸収されにくいモノアニオン副生成物の生成を引き起こすことが多い。低いバイオアベイラビリティーは、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡ（Benzariaら, J. Med. Chem. 39(25):4958-65 (1996); Serafinowskaら, J. Med. Chem. 38(8):1372-9 (1995)）とＰＭＥＡの環状プロドラッグ（Starrettら, J. Med. Chem. 37(12):1857-64 (1994))）の両方を含むＧＩ管におけるプロドラッグ不安定性に起因している。エステラーゼへの不安定性は、急速なプロドラッグ開裂を疾患に関連しない部位にて引き起こし得る。エステラーゼは、比較的広範に高レベルで分布していると考えられ、血液、腎臓、胃腸組織および肝臓にて観察されることが多い。それゆえエステラーゼによる急速な開裂は、荷電した中間体を内臓中で吸収の前に生成することにより、経口バイオアベイラビリティーを制限することができる。肝臓外エステラーゼ活性は、その後薬物が荷電される肝外組織（例えば腎臓）中または血中にて荷電された中間体を産生することにより、薬物の肝臓分布を制限することができ、肝細胞に入る薬物の能力に制限してもよくおよび／または腎臓におけるアニオン性トランスポーターを通して増大された薬物クリアランスを示してもよい。
本発明のプロドラッグは、水溶液ならびにラットおよびヒト血漿中において優れた安定性を示した（実施例ＦおよびＧ）。化合物５７および５４の安定性を、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡの安定性とよく比較した（J. Med. Chem. 39:4958-4965 (1996)）。
持続的送達
インビボにて急速に取り除かれる薬物は、薬物の複数回投与を必要とすることが多く、治療的に有効な量の血中レベルを有意な期間にわたって達成する。他の方法はまた、徐放性の製剤およびデバイスを含むことが可能である。時間とともに崩壊するプロドラッグはまた、持続的な薬物レベルを達成するための方法を提供することができる。一般にこの性質は、既知のホスホン酸プロドラッグでは、インビボにおける急速な加水分解（例えばアシルオキシアルキルエステル）または非常に遅い変換（例えばジ−アリールプロドラッグ）のいずれかを受けるため不可能であった。
本発明の環状ホスホン酸プロドラッグは、薬物の経時的な安定した放出を提供することにより、持続した薬物放出を提供することができる。ラットおよびイヌにおける実験（実施例ＲおよびＳ）は、化合物４が、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較して、全身ＰＭＥＡ暴露は最小限である一方で無傷のプロドラッグとしてより長く循環することにより、好ましい薬物動態学的プロファイルを有することを示す。
薬物の持続的送達は、治療的に有効な薬物レベルを時間の経過とともに維持することが可能な速度にてインビボにて加水分解される式Ｉのプロドラッグを選択することにより達成できる。従って本発明のプロドラッグはまた、薬物の薬物動態学的半減期を改善することができる。薬物の開裂速度は、Ｐ４５０酸化速度を含む、種々の因子に依存してよく、これはプロドラッグ部分の置換基、これらの置換基の立体化学および薬物自体の両者に依存する。さらに持続的な薬物産生は、酸化後生成する中間体の除去速度ならびに酸化の主要部位である肝臓に対するプロドラッグの速度およびアベイラビリティーに依存するだろう。所望の性質を有するプロドラッグの同定は、代謝に関わる主要Ｐ４５０酵素の存在下、肝臓ミクロソームまたは肝細胞の存在下にて薬物産生速度をモニターするアッセイにおいてプロドラッグをスクリーニングすることにより容易に達成される。標準的ＰＫアッセイ（例えばミクロソーム代謝、血漿中のプロドラッグレベル）は、「持続的送達」を達成する能力を改善するだろうパラメーターに本発明化合物を選択することができることを示す。
本発明の特異的プロドラッグ
生物学的に活性な因子は、式Ｉの薬物投与後の肝臓中にて検出される。この型のプロドラッグは、酸化され、ホスホン酸、例えばＰＭＥＡおよび以下に示すアリールビニルケトン副生成物を生成する：
Figure 2006511490
本発明におけるエステルは、上記機序により限定されないが、一般に各エステルは、ミクロソーム酸化を受けやすい基または原子を含み、次いで水溶液中にてホスホネート二酸（phosphonate diacid）のβ脱離を経由し、親化合物に分解する中間体を生成する。Ａｒ（アリール）基に対する水素ジェミナルは、ミクロソーム酸化を受けやすいと考えられる。
肝臓癌の処置における使用
ＰＭＥＡは、抗癌活性を示すことが示されている（Hatse, S., Verh K. Acad. Geneeskd Belg. 62(5):373-384 (2000)）。本発明のプロドラッグは、腫瘍細胞がＰ４５０、特にＣＹＰ３Ａ４を発現する癌の処置に有用であると期待される。例えば本発明のプロドラッグは、肝細胞癌腫または他の肝臓に関連する癌の処置に有用である。いくつかの場合において、プロドラッグは、活性および／または特異性を増強するためにＰ４５０、特にＣＹＰ３Ａ４の発現を誘発する因子と組み合わされる。
転移性癌の処置：
本発明のプロドラッグは、別の腫瘍退縮剤と組み合わせて使用してもよい。それらは他の腫瘍退縮剤と別々にまたは同時に投与してよい。この組合せは、肝細胞癌腫瘍のさらなる成長の阻害を助けることができ、および／または該組合せは、肝細胞癌腫瘍（主に本発明化合物による）と肝外転移、特に減少したＣＹＰ３Ａ４発現を有する転移（他の腫瘍退縮剤による）の両方を助けることができる。
プロドラッグの投与は、他の腫瘍退縮剤が投与される時点またはほぼその時点あるいは異なる時点にて実行してもよい。
ウィルス感染の処置：
ＰＭＥＡはＢ型肝炎ウィルスに対する潜在的活性を有する既知の薬物である。ＰＭＥＡの経口投与は、低い経口バイオアベイラビリティー（＜１０％）により特徴付けられるが、ビスアシルオキシアルキルプロドラッグ、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡは、高い経口バイオアベイラビリティーおよび高い抗ウィルス活性を種々の動物モデルならびにＨＢＶ感染したヒトにおいて示す。ヒトにおいて、肝臓組織学における最大のウィルス価の減少および最大の改善ならびに肝臓機能の他のパラメーターを達成するビスＰＯＭ ＰＭＥＡの投与量（例えば３０〜６０ｍｇ／日）は、腎毒性に関連する一方、より低い投与量（例えば１０ｍｇ／日）は、より低い抗ウィルス活性を示すが、治療後１年で腎毒性を示さないことが報告されている。
本発明のプロドラッグは、ＰＭＥＡの等モル投与量でのビスＰＯＭ ＰＭＥＡで処置された動物と比較して、より高レベルのＰＭＥＡの生物学的に活性な形態、すなわちＰＭＥＡｐｐを肝臓において達成する（実施例Ｎ）。これらの投与量にて、本発明のプロドラッグはまた、血漿中、腎臓中および尿中にて有意により低レベルのＰＭＥＡを生じる。従って本発明のプロドラッグは、より少ない腎毒性の危険性でより大きなウィルス価の減少を達成することが期待される。
増大されたウィルス価の減少は、ＨＢＶ感染した患者に、増大されたセロコンバージョンならびに肝臓ダメージおよび慢性的肝臓疾患（例えば肝硬変および肝細胞癌）の減少した危険性を通して有益であると期待される。さらに、増大されたウィルス価の減少は、薬物耐性に関連するウィルス突然変異体の減少した生成に関連する。
本発明の別の好ましい側面は、ウィルス価および関連する治療利益のさらにより大きな減少を達成するための本発明のＰＭＥＡプロドラッグと他の抗ウィルス薬との組合せである。ＨＢＶウィルスのＤＮＡは、腎臓を含む肝外組織にて検出されている。肝外ＨＢＶは、肝細胞に感染することができるウィルス粒子を提供してよい。本発明のプロドラッグは肝臓を標的とするため、これらのプロドラッグと他の抗ＨＢＶ薬物を組み合わせる治療は、本発明の好ましい側面であり、これは薬物の組合せがウィルス複製を肝臓ならびに全身の他の部位において阻害するためである。さらに本発明の好ましい側面は、本発明のプロドラッグと、他のよく知られた、ウィルス価減少を引き起こす因子（例えばＨＢＶ抗体療法）およびウィルスへの改善された免疫応答を引き起こす因子、例えばインターフェロンまたはペグ化インターフェロンとの組合せである。その組合せはまた、有効な投与量の減少およびそれゆえ治療に関連する減少した副作用を通し、ＨＢＶ感染した患者に有益であることができる。薬物の組合せは、ＨＢＶ患者に同時にまたは異なる時点にて投与することができる。
組合せに有用な抗ウィルス薬としては、ビダラビン；ジドブジン；スタブジン；ジダノシン；ｄｄＡ；ザルシタビン；Ｌ−ｄｄＣ；Ｌ−ＦｄｄＣ；Ｌ−ｄ４Ｃ；ラミブジン；リバビリン；ＦＩＡＵ；ＦＩＡＣ；ＢＨＣＧ；ＢｖａｒａＵ；Ｅ−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン；ＴＦＴ；ゾナビル；ＣＤＧ；ＤＡＰＤ；ＦＤＯＣ；ｄ４Ｃ；ｄ４Ｔ；ＤＸＧ；ＦＥＡＵ；ＦＬＧ；ＦＬＴ；クレブジン；コヴィラシル；エンテカビル；シタレン；オキセタノシンＡ；オキセタノシンＧ；ＮＫ８４−０２１８；ｄｄＡＰＲ；シクロブタＡ；シクロブタＧ；フロキシウリジン；ｄＦｄＣ；ａｒａＣ；５−ブロモデオキシウリジン；ＩＤＵ；ＣｄＡ；Ｆ−ａｒａ−Ａ；ＡＣＶ；ＧＣＶ；ペンシクロビル；ブシクロビル；ホスカルネット；ＰＰＡ；ＰＭＥＡ；ＰＭＥＤＡＰ；ＨＰＭＰＣ；ＨＰＭＰＡ；ＦＰＭＰＡ；ＰＭＰＡ；ａｒａＴ；ＦＭｄＣ；ＡＩＣＡＲ；ＡＭ３６５；Ｌ−ｄＴ；Ｌ−ｄＣ、ベータ−Ｌ−２’−デオキシシトシン、ベータ−Ｌ−２’−デオキシシトシンのバリンプロドラッグ誘導体；ＡＣＨ１２６，４４３；ｄｄＩ；ｄｄＡ；ｄｄＣ；ＭＣＣ４７８；インターフェロンアルファ；ペグ化インターフェロン；ファムシクロビル；ＸＴＬ００１；ＨＢＶ ＤＮＡワクチン；ＩＣＮ２００１；Ｆｌｕｏｒ ＬおよびＤヌクレオシド；ラシビール；ロブスタフラボン；９−（アラビノフラノシル）−２，６−ジアミノプリン；９−（２’−デオキシリボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン；９−（２’−デオキシ−２’−フルオロリボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン；９−（アラビノフラノシル）グアニン；９−（２’−デオキシリボフラノシル）グアニン；９−（２’−デオキシ２’−フルオロリボフラノシル）グアニン；インターフェロンのすべてのアナログ；ヒトモノクローナル抗体；ならびにセラダイム、チモシンアルファ−１およびＥＨＴ８９９のような非インターフェロンエンハンサーが挙げられる。
本発明のプロドラッグは、別の抗ウィルス薬と組み合わせて使用してもよい。プロドラッグの投与は、他の抗ウィルス薬が投与される時点またはほぼ同時にあるいは異なる時点にて実行してよい。
本発明のプロドラッグは、抗ウィルス治療に耐性を示す動物における肝臓のウィルス感染を、その耐性がＨＢＶポリメラーゼにおける突然変異の結果であるときに処置するために用いてもよい。
毒性を軽減しおよび／または経口バイオアベイラビリティーを増大するためのプロドラッグのＣＹＰ阻害物質との使用
いくつかの場合において、増強されたＣＹＰ活性は、望ましくない薬物代謝を引き起こすことができる。例えば、プロドラッグ活性化が関与しない、増強されたＣＹＰの活性は、薬物代謝の増大およびそれゆえ有効性の低下の原因となり得る。さらに、他の組織における増大されたＣＹＰ活性、例えば胃腸管中のＣＹＰ３Ａ４は、プロドラッグ吸収および肝臓薬物レベルの低下を引き起こし得る。ＣＹＰ活性の阻害物質は、望ましくない薬物代謝を最小限にするときに有用であろうと知られている。例えばグレープフルーツジュースは、胃腸のＣＹＰ３Ａ４を不活性化し、ＣＹＰ３Ａ４により代謝される数多くの薬物の増強された吸収をもたらすことが知られている。薬物の経口バイオアベイラビリティーを増強すると知られているＣＹＰ３Ａ４阻害物質としては、ケトコナゾールおよびエリスロマイシンが挙げられる（Wacher, V.J.ら, Adv. Drug Deliv. Rev. 46:89-102 (2001); US 5,665,386; US 5,716,928; US 5,962,522; US 6,004,927; US 6,028,054; US 6,121,234; US 6,180,666）。また、望ましくない薬物代謝を弱める一方で、プロドラッグの開裂に重要なＣＹＰ活性を維持するために有用であることができるＣＹＰ阻害物質が、多くのＣＹＰサブファミリーについて知られている。例えばＣＹＰ３Ａ４阻害物質ＴＡＯを用い、インビボでのシクロホスファミド代謝を、その抗腫瘍活性に寄与しない毒性代謝体の形成を減少することにより調節した。
本発明化合物
本発明化合物は、式Ｉ：
Figure 2006511490
 ［式中、
ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
で示される、ＰＭＥＡおよびアナログの置換されている６員環状１，３−プロパンジエステルプロドラッグ、ならびにその製薬的に許容される塩である。
本発明の別の側面は、式ＩＩ：
Figure 2006511490
 ［式中、
ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
で示される化合物、およびその製薬的に許容される塩である。
本発明の別の側面は、式ＩＩＩ：
Figure 2006511490
 ［式中、
ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニル−メトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択される、ホスホン酸であり、
Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
で示される化合物、およびその製薬的に許容される塩である。
本発明の別の側面は、式ＩＶ：
Figure 2006511490
 ［式中、
ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンである］
で示される化合物、およびその製薬的に許容される塩である。
別の側面において、本発明は、ＭＰＯ３Ｈ２が９−（２−ホスホニルメチルオキシエチル）アデニンおよび（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸である、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物を目的とする。
別の側面において、本発明は、Ｖがフェニル、３−ピリジルおよび４−ピリジルであり、これらはすべてＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＯＣＨ３およびＣＦ３から選択される１〜２つの置換基で置換されていることもある化合物を目的とする。
別の側面において、本発明は、Ｖが４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルである化合物を目的とする。
別の側面において、本発明は、酢酸、臭化水素酸、塩酸、クエン酸、マレイン酸、硫酸および酒石酸で形成される塩である、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩまたはＩＶの化合物を目的とする。
別の側面は、メタンスルホン酸またはコハク酸で形成される塩を目的とする。
別の側面は、メタンスルホン酸で形成される塩を目的とする。
ある側面において、経口バイオアベイラビリティーは少なくとも５％である。別の側面において、経口バイオアベイラビリティーは少なくとも１０％である。
Ｐ４５０酸化は、芳香族基（Ｖ）を有するリンまたは炭素のいずれかにおける立体化学に敏感であり得る。本発明化合物は、リンのまわりに二つの異性体を有する。ある側面において、立体化学は酸化と脱離反応の両方を可能にする。
Ｐ４５０酸化はまた、Ｖが結合しているＣ１’における立体化学に敏感であり得る。ある側面において、本発明化合物はＶが結合している部位にてＳ立体化学を有する。
ある側面において、Ｍ基としては、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンが挙げられる。より好ましくは、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンおよび（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンである。
ある側面において、式Ｉの化合物との組合せ治療における使用のための抗ウィルス薬としては、ビダラビン、ジドブジン、スタブジン、ジダノシン、ｄｄＡ、ザルシタビン、Ｌ−ｄｄＣ、Ｌ−ＦｄｄＣ、Ｌ−ｄ４Ｃ、ラミブジン、リバビリン、ＦＩＡＵ、ＦＩＡＣ、ＢＨＣＧ、ＢｖａｒａＵ、Ｅ−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン、ＴＦＴ、ゾナビル、ＣＤＧ、ＤＡＰＤ、ＦＤＯＣ、ｄ４Ｃ、ｄ４Ｔ、ＤＸＧ、ＦＥＡＵ、ＦＬＧ、ＦＬＴ、クレブジン、コヴィラシル、エンテカビル、シタレン、オキセタノシンＡ、オキセタノシンＧ、ＮＫ８４−０２１８、ｄｄＡＰＲ、シクロブタＡ、シクロブタＧ、フロキシウリジン、ｄＦｄＣ、ａｒａＣ、５−ブロモデオキシウリジン、ＩＤＵ、ＣｄＡ、Ｆ−ａｒａ−Ａ、ＡＣＶ、ＧＣＶ、ペンシクロビル、ブシクロビル、ホスカルネット、ＰＰＡ、ＰＭＥＡ、ＰＭＥＤＡＰ、ＨＰＭＰＣ、ＨＰＭＰＡ、ＦＰＭＰＡ、ＰＭＰＡ、ａｒａＴ、ＦＭｄＣ、ＡＩＣＡＲ、ＡＭ３６５、Ｌ−ｄＴ、Ｌ−ｄＣ、ベータ−Ｌ−２’−デオキシシトシン、ベータ−Ｌ−２’−デオキシシトシンのバリンプロドラッグ誘導体、ＡＣＨ１２６，４４３、ｄｄＩ、ｄｄＡ、ｄｄＣ、ＭＣＣ４７８、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロン、ファムシクロビル、ベータ−Ｌ−２’−デオキシシトシンのバリンプロドラッグ誘導体、ＸＴＬ００１、ＨＢＶ ＤＮＡワクチン、ＩＣＮ２００１、Ｆｌｕｏｒ ＬおよびＤヌクレオシド、ラシビール、ロブスタフラボン、９−（アラビノフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、９−（２’−デオキシリボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、９−（２’−デオキシ−２’−フルオロリボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、９−（アラビノフラノシル）グアニン、９−（２’−デオキシリボフラノシル）グアニン、９−（２’−デオキシ２’−フルオロリボフラノシル）グアニン、インターフェロンのすべてのアナログ、ヒトモノクローナル抗体、ならびにセラダイム、チモシンアルファ−１およびＥＨＴ８９９のような非インターフェロンエンハンサーが挙げられる。
別の側面において、抗ウィルス薬としては、ラミブジン、エンテカビル、コヴィラシル、ＤＡＰＤ、クレブジン、ＡＭ３６５、Ｌ−ｄＴ、Ｌ−ｄＣ、ＡＣＨ１２６，４４３、ＭＣＣ４７８、ロブカビル、ホスカルネット、ＰＰＡ、インターフェロンアルファ、ペグ化インターフェロンアルファ、ファムシクロビル、ａｒａ−Ａ、ＡＺＴ、ｄ４Ｔ、ｄｄＩ、ｄｄＡ、ｄｄＣ、Ｌ−ｄｄＣ、Ｌ−ＦｄｄＣ、Ｌ−ｄ４Ｃ、ラミブジン、リバビリン、ＦＩＡＵ、ＦＩＡＣ、ＢＨＣＧ、ＢｖａｒａＵ、Ｅ−５−（２−ブロモビニル）−２’−デオキシウリジン、ＴＦＴ、ゾナビル、ＣＤＧ、ＦＤＯＣ、ｄ４Ｃ、ＤＸＧ、ＦＥＡＵ、ＦＬＧ、ＦＬＴ、ＦＴＣ、５−イル−炭素環式２’デオキシグアノシン、オキセタノシンＡ、オキセタノシンＧ、ｄｄＡＰＲ、シクロブタＡ、シクロブタＧ、ｄＦｄＣ、ＩＤＵ、ａｒａＴ、ｄｄＡＰＲ、ホスカルネット；ＰＭＥＤＡＰ、ＨＰＭＰＣ、ＨＰＭＰＡ、ＦＰＭＰＡ、ＰＭＰＡ、ＡＣＶ、ＧＣＶ、ペンシクロビル、９−（アラビノフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、９−（２’−デオキシリボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、９−（２’−デオキシ−２’−フルオロリボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン、９−（アラビノフラノシル）グアニン、９−（２’−デオキシリボフラノシル）グアニンおよび９−（２’−デオキシ２’−フルオロリボフラノシル）グアニンが挙げられる。
別の側面において、抗ウィルス薬としては、ラミブジン、エンテカビル、コヴィラシル、ＤＡＰＤ、クレブジン、ＡＭ３６５、Ｌ−ｄＴ、Ｌ−ｄＣ、ＡＣＨ１２６，４４３、ＭＣＣ４７８、ロブカビル、ホスカルネット、ＰＰＡ、インターフェロンアルファおよびペグ化インターフェロンアルファが挙げられる。
別の側面において、抗ウィルス薬としては、インターフェロンのすべてのアナログ、ヒトモノクローナル抗体ならびにセラダイム、チモシンアルファ−１およびＥＨＴ８９９のような非インターフェロンエンハンサーが挙げられる。
ある側面において、式Ｉの化合物との組合せ治療における使用のための腫瘍退縮剤としては、ブスルファン、カルボプラチン、テモゾロマイド、チオテパ、シスプラチン、ミリプラチンのようなアルキル化剤、ならびにメルファラン、イホスファミド、シクロホスファミド、クロラムブシルおよびネクロルエタミン（nechlorethamine）のようなナイトロジェンマスタードを含むＤＮＡをアルキル化する因子が挙げられる。
腫瘍退縮剤の抗生物質クラス由来の因子としては、ドキソルビシン、デュアノルビシン（duanorubicin）、アクチノマイシンＤ、エピルビシン、イダルビシン、プリカマイシン、ペントスタチン、ミトキサントロン、バルルビシンおよびダクチノマイシンが挙げられる。
腫瘍退縮剤の代謝拮抗物質クラス由来の因子としては、シタラビン、フルダラビン、ゲムシタビン、フロキシウリジン、フルオロウラシル、クラドリビン、メルカプトプリン、チオグアニン、カペシタビン、メトトレキセートおよびマイトマイシンが挙げられる。
他のよく知られた腫瘍退縮剤としては、ダカルバジン、ミトキサントロン、ピロキサントロン（piroxantrone）、ブレオマイシン、エトポシドおよびテニポシド（teniposide）のようなエピポドフィロトキシン類、ビンクリスチンおよびビンブラスチンのようなビンカアルカロイド類、タキソール、ドセタキセルのようなタキサン類、カンプトテシン、イリノテカン、９−アミノカンプトテシン、トポテカンおよびルロテカン（lurotecan）のようなテカン類が挙げられる。
別の側面において、腫瘍退縮剤としては、ブスルファン、カルボプラチン、テモゾロマイド、チオテパ、シスプラチン、ミリプラチンのようなアルキル化剤、ならびにメルファラン、イホスファミド、シクロホスファミドおよびクロラムブシルのようなナイトロジェンマスタードを含むＤＮＡをアルキル化する因子が挙げられる。
腫瘍退縮剤の抗生物質クラス由来の因子としては、ドキソルビシン、デュアノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、プリカマイシン、バルルビシンおよびダクチノマイシンが挙げられる。
腫瘍退縮剤の代謝拮抗物質クラス由来の因子としては、ゲムシタビン、フロキシウリジン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、カペシタビン、メトトレキセートおよびマイトマイシンが挙げられる。
他の腫瘍退縮剤としては、エトポシド、タキソール、ドセタキセル、イリノテカン、トポテカンおよびルロテカンが挙げられる。
別の側面において、腫瘍退縮剤としては、ドキソルビシン、ゲムシタビン、イリノテカンおよびシスプラチンが挙げられる。
式Ｉの化合物の合成
非環式ヌクレオシドホスホネート抗ウィルス薬、例えば（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニル−メトキシプロピル）シトシン（ＨＰＭＰＣ，シドフォビル）、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン（ＰＭＥＡ，アデフォビル）、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン（ＰＭＰＡ，テノフォビル）およびそれらのアナログは、文献中によく記載されている（Naesens and De Clercq, Nucleosides Nucleotides 16:983 (1997); Naesensら, Antiviral Chem Chemother, 8:23, (1997); Bronsonら, Nucleotide Analogues as Antiviral Agents, ACS symposium series 401, Martin, J. C., Ed., American Chemical Society (1989)）。
本発明に包含される化合物の合成は、次の工程を含む：（Ｉ）非環式ヌクレオシドホスホネートのプロドラッグの合成、（ＩＩ）１−（アリール）プロパン−１，３−ジオールの合成。
１．非環式ヌクレオシドホスホネートのプロドラッグの合成：
プロドラッグは、非環式ヌクレオシドホスホネートの合成の異なる段階において導入することができる。ほとんどの場合、それらはその不安定性のために、より後の段階で実行される。有利なことに、化学的安定性がその後の反応条件中の問題点でないとき、プロドラッグは合成のより早い段階で導入することができる。非環式ヌクレオシドホスホネートのプロドラッグの合成は、さらに次のように組織化される：１）親ホスホン酸を経由するプロドラッグの合成、２）トランスエステル化による親ドラッグエステルを経由するプロドラッグの合成および３）環状ホスホネート部分から出発するプロドラッグの合成。
１．１ 親ホスホン酸を経由するプロドラッグの合成：
ホスホン酸プロドラッグは、系中にて生成したジクロロホスホネートとアルコールの反応により合成される。例えばＭＰＯ３Ｈ２ １のジクロロホスホネートと置換されている１，３−ジオールとの塩基（例えばピリジン、トリエチルアミンなど）存在下での反応は、式Ｉ〜ＩＩＩの化合物を与える（Khamneiら, J. Med. Chem. 39:4109 (1996)）。
Figure 2006511490
そのような反応性の高いジクロロホスホネート中間体は、対応するホスホン酸および塩素化剤、例えば塩化チオニル（Starrettら, J. Med. Chem. 1857 (1994)）、塩化オキサリル（Stowellら, Tetrahedron Lett. 31:3261 (1990)）および五塩化リン（Quastら, Synthesis 490 (1974)）から製造することができる。あるいは、これらのジクロロホスホネートはまた、ジシリルホスホネートエステル類（Bhongleら, Synth. Commun. 17: 1071 (1987)）およびジアルキルホスホネートエステル類（Stillら, Tetrahedron Lett. 24: 4405 (1983); Patoisら, Bull. Soc. Chim. Fr. 130: 485 (1993)）から生成することができる。
あるいは、これらのプロドラッグは、ミツノブ反応条件（Mitsunobu, Synthesis 1 (1981); Campbell, J. Org. Chem. 52:6331 (1992)）下、ジオールとのカップリングによりホスホン酸から製造され、ならびにカルボジイミド（Alexanderら, Collect. Czech. Chem. Commun. 59:1853 (1994); Casaraら, Bioorg. Med. Chem. Lett. 2:145 (1992); Ohashiら, Tetrahedron Lett. 29:1189 (1988)）およびベンゾトリアゾリルオキシトリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウム塩（Campagneら, Tetrahedron Lett. 34, 6743 (1993)）を含むが、これらに限定されない他の酸カップリング試薬から製造される。
ホスホン酸はまた、１−置換プロパン−１，３−ジオールの環状アセタールまたは環状オルトエステルとの環状プロドラッグ形成を受け、カルボン酸エステルの場合（Brechbuhlerら, Helv. Chim. Acta. 48:1746 (1965)）のように、プロドラッグをもたらす。あるいは、より反応性の高い環状亜硫酸塩または硫酸塩はまた、ホスホン酸塩との反応の際のカップリング前駆体として適切である。これらの前駆体は、文献中に記載の対応するジオールから製造することができる。
Figure 2006511490
 光学的に純粋なプロドラッグおよび対応する塩はまた、次のセクション２に記載のように合成される光学的に純粋なジオールから出発して製造する。これらのプロドラッグ合成は、親ホスホン酸から３工程で達成される。
最初の工程において、ＰＭＥ、ＰＭＰ、ＨＰＭＰアナログの塩素化を、塩化オキサリルおよびＮ，Ｎ−ジエチルホルムアミドを用いて達成し、Ｎ−保護ジクロリデートを得る。他の種々の塩素化剤、例えば塩化チオニル、五塩化リンをまた、Ｎ，Ｎ−ジアルキルホルムアミドの存在下、目的のために使用する。塩素化の工程において使用されるＮ，Ｎ−ジアルキルホルムアミドは、ヴィルスマイヤー（Vilsmeyer）塩素化剤を形成するだけでなく、ＮＨ２基を保護する。保護されたクロリデート（chloridate）中間体は、生成物の全収率およびジアステレオマー比を改善するために必要な好ましい溶解性を生じる。他の保護基、例えばアシル、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルキルオキシカルボニル、Ｆｍｏｃなどの使用はまた、所望の生成物の回収およびジアステレオマー比を増強することができる。
クロリデート中間体とキラルアルコールの塩基（例えばトリエチルアミン）存在下、ジクロロメタン中、より低温でのカップリングは、保護された中間体を生じる。保護された中間体の穏やかな酸性条件、エタノール−酢酸の存在下での脱保護、その後の酸性化（例えばメタンスルホン酸）は、高い化学純度を有する結晶塩としてプロドラッグを生じる。この物質をトランス異性体からさらに純粋にするための、エタノールのような溶媒中での第二の結晶化は、ジアステレオマー純度＞９６％でプロドラッグを与える。硫酸、硝酸、塩酸、リン酸のような鉱酸、アルキルおよびアリールスルホン酸のようなスルホン酸、ならびに酒石酸、クエン酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、乳酸、シュウ酸などのようなカルボン酸を含むが、これらに限定されない、他の酸の使用は、生成物のより良い回収および異性体比をもたらすことができる。
１．２ 親ドラッグエステルを経由したトランスエステル化によるプロドラッグの合成：
５のようなホスホネートエステルをまた、１−置換プロパンジオールとの適切な条件下でのトランスエステル化反応によるプロドラッグの製造において利用する。適切な条件下、系中にて生成した親ホスホン酸の混合した無水物は、ジオールと反応し、カルボン酸エステルの場合（Inanagaら, Bull. Chem. Soc. Jpn. 52:1989 (1979)）のようにプロドラッグを与える。得られた誘導体を脱マスキングし、必要とするプロドラッグを得る。ホスホネートのアリールエステルはまた、アルコキシ中間体によりトランスエステル化されることが知られている（Moriartyら, Tetrahedron Lett. 38:2597 (1997); Tawfikら, Synthesis 968 (1993)）。プロドラッグのそのような穏やかな条件下での生成は、ジアステレオマー比を改善する点で有利であることができる。
Figure 2006511490
１．３ 環状ホスホネート部分から出発するプロドラッグの合成：
プロドラッグ部分はまた、合成のより早い段階で導入することができる。有利なことに、そのような合成は、合成のより早い段階で、プロドラッグの立体化学の定義付けがされる。脱離基Ｘを含むホスホネート中間体６は、ホスホノメチレンオキシエチル置換されている薬物８の場合（Chuら, J. Het. Chem. 23:289 (1986)）において利用することができる。環状ホスホン酸プロドラッグ部分６は、先のセクションに記載のように、ジオールおよびホスホン酸部分を経由して、または環状ホスファイトのホルミル化、その後のヒドロキシル基の脱離基への変換（Phillionら, Tetrahedron Lett. 27:1477 (1986)）により、合成することができる。そのような立体定義された（stereodefined）中間体は、穏やかな条件下カップリングして適切にマスキングされたヒドロキシエチル置換されている塩基７となり、穏やかな条件下ＰＭＥ、ＰＭＰまたはＨＰＭＰ誘導体のプロドラッグを製造することができる。
そのような収斂型合成はまた、中間体１０を経由して達成することができ、適切にマスキングされた塩基９とのカップリングにより、必要とするプロドラッグ８を生じる。環状プロドラッグ部分を含む中間体１０は、環状アルブゾフ（Arbuzov）クロロホスホネート（Holyら, Antiviral Res. 13:295 (1990)）の対応するクロロメチルエーテル誘導体とのアルブゾフ反応を経由して合成してもよい。
Figure 2006511490
プロドラッグの立体化学（シスおよびトランス）は、プロトンＮＭＲスペクトルにおけるベンジル位のメチンプロトンのケミカルシフトにより定義される。シス異性体のベンジル位のメチンプロトンは、常に、対応するトランス異性体よりも非遮蔽であり、低磁場（０．２ｐｐｍの差）である。その差は、ＤＭＳＯ−ｄ６のような極性ＮＭＲ溶媒中で増強される。異性体はまた、リンＮＭＲケミカルシフトにより区別することができる。
２．１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールの合成：
１，３−ジオールを製造する種々の合成方法が知られている。これらの適切な方法は、次の二つの型に分けられる：１）ラセミ１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールの合成、２）キラル１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールの合成。
２．１．ラセミ１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールの合成：
１，３−ジヒドロキシ化合物は、文献中のいくつかのよく知られた方法により合成することができる。置換されている芳香族アルデヒドを用い、酢酸アルキルのリチウムエノレートの付加後のエステル還元（経路Ａ）を経由してラセミ１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールを合成する（Turner, J. Org. Chem. 55:4744 (1990)）。あるいは、１−ヒドロキシプロパン−３−アールへのアリールグリニヤ（Grignard）付加はまた、１−アリール置換プロパン−１，３−ジオールを与える（経路Ｂ）。この方法は、種々の置換されているハロゲン化アリールの１−アリール置換−１，３−プロパンジオールへの変換を可能とするだろう（Coppiら, J. Org. Chem. 53:911 (1988)）。ハロゲン化アリールをまた用い、１−置換プロパンジオールを、１，３−ジオキサ−４−エンのヘック（Heck）カップリング後の還元および加水分解により合成することができる（Sakamotoら, Tetrahedron Lett. 33:6845 (1992)）。ピリジル、キノリン、イソキノリンプロパン−３−オール誘導体は、Ｎ−オキシド形成後の無水酢酸条件における転位（経路Ｃ）により、１−置換−１，３−ジオールに酸化することができる（Yamamotoら, Tetrahedron 37:1871 (1981)）。種々の芳香族アルデヒドはまた、ビニルグリニヤ付加後のヒドロホウ素化反応（経路Ｄ）により１−置換−１，３−ジオールに変換することができる。
Figure 2006511490
２．２．キラル１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールの合成：
第二級アルコールの化学または酵素試薬を経由したキラル分割についての種々の知られた方法は、ジオール鏡像異性体の製造のために利用することができる（Haradaら, Tetrahedron Lett. 28:4843 (1987)）。置換されている３−アリール−３−オキソプロピオン酸またはエステルの遷移金属触媒水素化は、光学的に純粋なベータヒドロキシ酸またはエステルのＲまたはＳ異性体を製造する効率的な方法である（Comprehensive Asymmetric Catalysis, Jacobsen, E. N., Pfaltz, A., Yamamoto, H. (Eds), Springer, (1999); Asymmetric Catalysis in Organic Synthesis, Noyori, R., John Wiley, (1994)）。これらのベータヒドロキシ酸またはエステル生成物をさらに還元し、必要とするキラル１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールを得ることができる（経路Ａ）。高圧水素化または水素転移反応のためのβ−ケト酸またはエステル基質は、種々の方法、例えば塩基存在下におけるアセトフェノンの炭酸ジメチルとの縮合により製造してもよく（Chuら, J. Het. Chem. 22:1033 (1985)）、エステル縮合により製造してもよく（Turnerら, J. Org. Chem. 54:4229 (1989)）、またはハロゲン化アリールから製造してもよい（Kobayashiら, Tetrahedron Lett. 27:4745 (1986)）。あるいは、鏡像異性的に純粋な１，３−ジオールは、β−ヒドロキシエチルアリールケトン誘導体またはβ−ケト酸誘導体のキラルボラン還元（経路Ｂ）により得ることができる（Ramachandranら, Tetrahedron Lett. 38:761 (1997)）。別の方法において、商業的に入手可能な桂皮アルコールは、触媒的不斉エポキシ化条件下、エポキシアルコールに変換してもよい。これらのエポキシアルコールは、Ｒｅｄ−Ａｌにより還元され、鏡像異性的に純粋な１，３−ジオールを生じる（経路Ｃ）（Gaoら, J. Org. Chem. 53:4081 (1980)）。アルドール縮合は、芳香族アルデヒドから出発するキラル１，３−酸化されている官能基の合成（経路Ｄ）のための別によく記載されている方法である（Mukaiyama, Org. React. 28:203 (1982)）。
Figure 2006511490
製剤
本発明化合物は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／用量から約３０ｍｇ／ｋｇ／用量、好ましくは約０．０５ｍｇ／ｋｇ／用量から１０ｍｇ／ｋｇ／用量の総日用量において経口投与される。最も好ましい用量範囲は、０．１〜３ｍｇ／ｋｇである。徐放性の調製物の活性成分の放出速度を制御する使用が、好ましいであろう。用量は、便利なように、複数回分割投与してもよい。
本発明化合物は、他の抗ウィルス薬または腫瘍退縮剤と組み合わせて使用するとき、日用量または日用量の適切なフラクション（例えば１日２回）として投与してもよい。プロドラッグの投与は、他の抗ウィルス薬または腫瘍退縮剤が投与される時点またはほぼ同時にあるいは異なる時点にて実行してよい。
本発明の目的のために、本化合物は、経口投与、非経口投与、吸入スプレーによる投与、局所投与または直腸投与を含む種々の方法により、製薬的に許容される担体、アジュバントおよびビヒクルを含む製剤にて投与してもよい。本明細書にて使用する用語、非経口は、種々の注入技術を伴った皮下、静脈内、筋肉内および動脈内注入を含む。本明細書にて使用する動脈内および静脈内注入は、カテーテルを通した投与を含む。経口投与が一般に好ましい。
製薬的に許容される塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、ベシレート、臭化物、カンシル酸塩、塩化物、クエン酸塩、エジシル酸塩、エストレート、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルコロン酸塩（glucoranate）、馬尿酸塩、ヒクレート（hyclate）、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヨウ化物、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、マレイン酸塩、メシレート、臭化メチル塩、メチル硫酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、パモ酸塩、リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホサリチル酸塩（sulfosalyicylate）、タンニン酸塩、酒石酸塩、テレフタル酸塩、トシレートおよびトリエチオダイドが挙げられる。
シュウ酸塩は、製薬的に許容されないが、中間体として使用することができる。中間体として、シュウ酸塩は、収率を改善することが多い。
活性成分を含む医薬組成物は、意図する投与方法に適切な任意の形態であってよい。経口使用のために使用するとき、例えば錠剤、トローチ剤、ロゼンジ、水性または油状懸濁剤、飛散性粉剤または顆粒剤、乳剤、硬または軟カプセル剤、シロップ剤またはエリキシル剤を製造してもよい。経口使用のために意図する組成物は、医薬組成物の製造のための当業者に知られた任意の方法により製造してもよく、そのような組成物は、甘味剤、香料、着色剤および保存剤を含む一つ以上の因子を、快い調製物を提供するために含んでもよい。錠剤の製造のために適切な無毒の製薬的に許容される賦形剤との混合物中に活性成分を含む錠剤が許容される。例えばこれらの賦形剤は、炭酸カルシウムまたは炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；トウモロコシデンプンまたはアルギン酸のような顆粒化剤および崩壊剤；デンプン、ゼラチンまたはアカシアのような結合剤；およびステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような滑沢剤であってよい。錠剤は、コーティングしなくてもよく、あるいは胃腸管内での崩壊および吸収を遅らせ、それにより長期間にわたる持続した活性を提供するためのマイクロカプセル化を含む既知の技術によりコーティングしてもよい。例えばモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルのような時間遅延物質を単独で、またはワックスとともに用いてもよい。
経口使用のための製剤はまた、活性成分が不活性固形希釈剤、例えばリン酸カルシウムまたはカオリンと混合されている硬ゼラチンカプセル剤、あるいは活性成分が水または油状媒体、例えばピーナッツ油、流動パラフィンまたはオリーブオイルと混合されている軟ゼラチンカプセル剤として存在することもできる。
本発明の水性懸濁剤は、水性懸濁剤の製造に適切な賦形剤との混合物中に活性物質を含む。そのような賦形剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアカシアゴムのような懸濁化剤、ならびに天然に存在するリン脂質（例えばレシチン）のような分散剤または湿潤剤、アルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えばステアリン酸ポリオキシエチレン）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、エチレンオキシドと、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導される部分的エステルとの縮合生成物（例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）が挙げられる。水性懸濁剤はまた、１つ以上の保存剤、例えばエチルｐ−ヒドロキシ−ベンゾエートまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシ−ベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の香料および１つ以上の甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリンを含んでもよい。
油状懸濁剤は、活性成分を落花生油、オリーブオイル、ゴマ油またはココナッツ油のような植物油、あるいは流動パラフィンのような鉱油中にて懸濁することにより製剤化することができる。経口懸濁剤は、増粘剤、例えば蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含んでもよい。上記のような甘味剤および香料を加えて、快い経口調製物を提供することができる。これらの組成物は、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸を加えることにより保存してもよい。
水の添加による水性懸濁剤の製造に適切な本発明の飛散性粉剤および顆粒剤は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１つ以上の保存剤との混合物中に活性成分を提供する。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は、上記物質により例示される。さらなる賦形剤、例えば甘味剤、香料および着色剤もまた、存在してもよい。
本発明の医薬組成物はまた、水中油型乳剤の形態であってもよい。油状相は、オリーブオイルまたは落花生油のような植物油、流動パラフィンのような鉱油、またはこれらの混合物であってよい。適切な乳化剤としては、アカシアゴムおよびトラガカントゴムのような天然に存在するゴム、大豆レシチンのような天然に存在するリン脂質、モノオレイン酸ソルビタンのような脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導されるエステルまたは部分的エステル、ならびにこれらの部分的エステルのエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（polyoxyethylene sorbitan monooleate）が挙げられる。乳剤はまた、甘味剤および香料を含んでもよい。
シロップ剤およびエリキシル剤は、甘味剤、例えばグリセロール、ソルビトールまたはスクロースとともに製剤化してよい。そのような製剤はまた、粘滑剤、保存剤、香料または着色剤を含んでもよい。
本発明の医薬組成物は、注射可能な滅菌調製物、例えば注射可能な滅菌水性懸濁剤または油性懸濁剤の形態であってよい。この懸濁剤は、上記の適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用い、既知の技術により製剤化してよい。注射可能な滅菌調製物はまた、１，３−ブタンジオール溶液のような無毒の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の注射可能な滅菌溶液または懸濁液であってもよく、あるいは凍結乾燥粉剤として製造してもよい。用いることができる許容されるビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液および生理食塩液がある。さらに、滅菌固定油は、慣習的に、溶媒または懸濁化媒体として用いてもよい。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む、任意の無刺激性固定油を用いてもよい。さらに、脂肪酸、例えばオレイン酸は、注射可能な物質の製造において同様に用いてよい。
単一投与形態を生産するために担体物質と混合してもよい活性成分の量は、処置される宿主および特定の投与様式に依存して変化するだろう。例えば、ヒトへの経口投与を意図した徐放性製剤は、総組成物の約５〜約９５％まで変動し得る適切な都合のよい量の担体物質と混合した２０〜２０００μｍｏｌ（約１０〜１０００ｍｇ）の活性物質を含んでもよい。容易に測定することができる投与量を提供する医薬組成物を製造することが好ましい。例えば、静脈内注入用の水溶液は、約３０ｍＬ／時の速度にて適切な容量を注入することができるように、溶液１ｍＬ当たり約０．０５〜約５０μｍｏｌ（約０．０２５〜２５ｍｇ）の活性成分を含むべきである。
上記のように、経口投与に適切な本発明の製剤は、それぞれあらかじめ決められた量の活性成分を含む個々の単位、例えばカプセル剤、カシェ剤または錠剤として；粉剤または顆粒剤として；水性または非水性液体中の溶液剤または懸濁剤として；あるいは水中油型乳濁液または油中水型乳濁液（water-in-oil liquid emulsion）として存在してもよい。活性成分はまた、ボーラス、舐剤またはペースト剤として投与してもよい。
錠剤は、場合により１つ以上の付属成分とともに、圧縮または成形することにより製造することができる。圧縮錠は、場合により結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えばグリコール酸デンプンナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、界面活性剤または分散剤と混合した自由流動形態、例えば粉末または顆粒の活性成分を、適切な装置中にて圧縮することにより製造することができる。成形錠は、不活性液状希釈剤で湿らせた粉末化された化合物の混合物を適切な装置中にて成形することにより製造することができる。錠剤は場合により、コーティングするか、または錠剤に刻印をつけてよく、および例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースを種々の割合にて用いる活性成分の、持続放出または制御放出を提供するように製剤化し、所望の放出プロファイルを提供してもよい。錠剤は、場合により腸溶性コーティングして提供し、胃ではなく腸の部分における放出を提供してもよい。これは、式１の化合物が酸加水分解を受けやすいときに、該化合物に特に有利である。
口腔における局所投与に適切な製剤としては、香料基剤（flavored base）、通常、スクロースおよびアカシアまたはトラガカント中に活性成分を含むロゼンジ；不活性基剤、例えばゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアカシア中に活性成分を含む芳香錠；ならびに適切な液状担体中に活性成分を含む口腔洗浄剤が挙げられる。
直腸投与用の製剤は、例えばココアバターまたはサリチル酸塩を含む適切な基剤を有する坐剤として存在してよい。
膣投与に適した製剤は、活性成分に加えて、適切であることが当業者に既知である担体を含むペッサリー、タンポン剤、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、泡沫剤またはスプレー剤として存在してよい。
非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、および製剤を目的の患者の血液と等張にする溶質を含んでいてもよい、水性および非水性の等張滅菌注射用溶液剤；ならびに懸濁剤および増粘剤を含んでいてもよい水性および非水性の滅菌懸濁剤が挙げられる。製剤は、単回投与または複数回投与密封容器、例えばアンプルおよびバイアル中に入れてもよく、使用直前に、注射用に滅菌液状担体、例えば水を加えることのみを必要とする凍結乾燥条件下に保存してもよい。注射用溶液および注射用懸濁液は、前記種類の滅菌粉剤、顆粒剤および錠剤から製造してもよい。
好ましい単位投与製剤は、薬物の日用量またはユニット、１日のサブ用量（sub-dose）、またはその適切なフラクションを含む製剤である。
しかし、当業者にはよく理解されているように、いかなる特定の患者に対する具体的な投与量レベルも、用いる具体的な化合物の活性；処置される個人の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食事；投与時間および経路；排泄の頻度；以前投与されていた他の薬物；ならびに治療される具体的な疾患の重篤度を含む種々の要因に依存するだろうことが理解されるだろう。
本発明にて使用する化合物およびそれらの製造は、これらの化合物を製造するいくつかの工程を例示する実施例によりさらに理解することができる。しかし、これらの実施例は、本発明を具体的に限定するものと解釈されるべきではなく、現在既知であるか、または後に開発される化合物のバリエーションは、本明細書中で特許請求されている本発明の範囲内であるものとする。
式Ｉ〜ＩＩＩの化合物は、当業者によりよく理解されている改変および付加を伴い、文献の手順により製造される。与えられたＴＬＣ条件は、Analtech UNIPLATEのプレート、シリカゲルＧＨＬＦ、スコア（scored）１０ｘ２０ｃｍ，２５０ミクロンを用いる。
ラセミ１−（アリール）プロパン−１，３−ジオールの合成：
実施例１：グリニヤ付加およびヒドロホウ素化を経由した１−（２’−フラニル）プロパン−１，３−ジオールの製造：
２−フルアルデヒド３ｇ（３１．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ６０ｍＬ溶液に、１Ｍ臭化ビニルマグネシウム／ＴＨＦ３４ｍＬを０℃にて加えた。１時間撹拌した後、１Ｍ ＢＨ３ ＴＨＦ錯体／ＴＨＦを加えた。反応を３Ｎ水酸化ナトリウム２０ｍＬおよび３０％過酸化水素１０ｍＬで０℃にてクエンチした。有機物のフラクションを分離し、濃縮した。粗生成物を５％メタノール−ジクロロメタンで溶出してクロマトグラフし、１−（２’−フリル）プロパン−１，３−ジオール１ｇ（２２％）を得た。
実施例２：ベンジル酸化を経由した１−（２’−ピリジル）プロパン−１，３−ジオールの製造：
工程Ａ：（J. Org. Chem. 22:589 (1957)）
３−（２’−ピリジル）プロパン−１−オール１０ｇ（７２．９ｍｍｏｌ）の酢酸７５ｍＬ溶液に、３０％過酸化水素をゆっくり加えた。反応混合物を８０℃まで１６時間加熱した。反応物を減圧濃縮し、残渣を無水酢酸１００ｍＬに溶解し、１１０℃にて一晩加熱した。無水酢酸を反応完了後留去した。メタノール−ジクロロメタン（１：９）で溶出した混合物のクロマトグラフィーにより、純粋なジアセテート１０．５ｇ（６０％）を得た。
工程Ｂ：
ジアセテート５ｇ（２１．１ｍｍｏｌ）のメタノール−水（３：１）４０ｍＬ溶液に、炭酸カリウム１４．６ｇ（１０５．５ｍｍｏｌ）を加えた。３時間室温にて撹拌した後、反応混合物を濃縮した。残渣をメタノール−ジクロロメタン（１：９）で溶出してクロマトグラフし、結晶性ジオール２．２ｇ（６８％）を得た。
実施例３：プロパン−１，３−ジオールからのグリニヤ付加を経由した１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールの製造：
工程Ａ：（J. Org. Chem. 53:911 (1988)）
塩化オキサリル５．７ｍＬ（９７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン２００ｍＬ溶液に、−７８℃にてジメチルスルホキシド９．２ｍＬ（１３０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を−７８℃にて２０分間撹拌した後、３−（ベンジルオキシ）プロパン−１−オール１１ｇ（６５ｍｍｏｌ）／ジクロロメタン２５ｍＬを加えた。−７８℃にて１時間後、反応をトリエチルアミン１９ｍＬ（２６０ｍｍｏｌ）でクエンチし、室温まで昇温した。反応を停止させ、ジクロロメタンで溶出したカラムクロマトグラフィーにより、３−（ベンジルオキシ）プロパン−１−アール８ｇ（７５％）を得た。
工程Ｂ：
３−（ベンジルオキシ）プロパン−１−アール１ｇ（６．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液に、０℃にて１Ｍ臭化４−フルオロフェニルマグネシウム／ＴＨＦ６．７ｍＬ（６．７ｍｍｏｌ）溶液を加えた。反応物を室温まで昇温し、１時間撹拌した。反応を停止させ、ジクロロメタンで溶出したカラムクロマトグラフィーにより、アルコール０．７ｇ（４４％）を得た。
工程Ｃ：
ベンジルエーテル５００ｍｇの酢酸エチル１０ｍＬ溶液に、１０％Ｐｄ（ＯＨ）２−カーボン１００ｍｇを加えた。反応物を水素ガス下１６時間撹拌した。反応混合物をセライトろ過し、濃縮した。残渣の酢酸エチル−ジクロロメタン１：１で溶出したクロマトグラフィーにより、生成物３４０ｍｇ（７９％）を得た。
実施例４：１−アリール置換プロパン−１，３−ジオールのアリールアルデヒドからの製造の一般的手順：
工程Ａ：（J. Org. Chem. 55:4744 (1990)）
ジイソプロピルアミン２ｍｍｏｌのＴＨＦ（０．７ｍｌ／ｍｍｏｌジイソプロピルアミン）−７８℃溶液に、ｎ−ブチルリチウム２ｍｍｏｌ（ヘキサン中２．５Ｍ）をゆっくり加えた。次いで反応物を１５分間−７８℃にて撹拌した後、酢酸エチル２ｍｍｏｌ／ＴＨＦ（０．１４ｍｌ／ｍｍｏｌ酢酸エチル）溶液をゆっくり加えた。さらに３０分間−７８℃にて撹拌した後、アリールアルデヒド１．０ｍｍｏｌ／ＴＨＦ０．２８ｍｌ溶液を加えた。次いで反応物を−７８℃にて３０分間撹拌し、室温まで昇温し、さらに２時間撹拌した。水性処理（０．５Ｍ塩酸）により反応を停止させた後、有機層を濃縮し、粗製の油状物（ベータ−ヒドロキシエステル）を得た。
工程Ｂ：
粗製のヒドロキシエステルをエーテル２．８ｍｌ／ｍｍｏｌ中に溶解し、氷浴温度まで冷却し、水素化リチウムアルミニウム３ｍｍｏｌを回分式（batch wise）に加えた。反応物を、冷却バスが溶け、反応物が室温まで昇温するまで撹拌した。室温にて一晩撹拌した後、反応物を氷浴温度まで冷却し、酢酸エチルでクエンチした。水性処理（０．５Ｍ塩酸）により反応を停止させ、粗製のジオールを得、これをクロマトグラフィーまたは蒸留のいずれかにより精製した。
キラル１−（アリール）−プロパン−１，３−ジオールの合成：
実施例５：ラセミ１，３−ジオールの分割の一般的手順：
実施例１〜４のように合成されたラセミジオールを、次の手順に記載のように分割し、キラル形態を得ることができる。
工程Ａ：
ジオール１．０ｍｍｏｌｅのＴＨＦ１．０ｍｌ溶液に、ヘキサメチルジシラジド２．１ｍｍｏｌｅを加え、次いで触媒量のトリメチルシリルトリフレート２〜３滴を加えた。室温にて１時間撹拌した後、反応物をヘキサン４ｍｌで希釈し、氷冷水で反応を停止させた。得られたジシリルエーテルをクロマトグラフィーにより精製するか、または十分に純粋ならば、次の反応に粗生成物を用いた。
工程Ｂ：
ジシリルエーテル１．０ｍｍｏｌｅおよび（−）−メントン１．１ｍｍｏｌｅのジクロロメタン２．０ｍｌ溶液に、−４０℃にてトリメチルシリルトリフレート０．１１ｍｍｏｌｅをゆっくり加えた。次いで反応物を−５０℃〜−６０℃にて４８時間維持し、ピリジンを加えて反応をクエンチした。室温まで昇温した後、粗製の混合物をヘキサン４．０ｍｌで希釈し、水性処理により反応を停止させた。二種のケタールをクロマトグラフィーにより分離した。
工程Ｃ：
分離したケタールを触媒量の濃塩酸をそれぞれのメタノール４．０ｍｌ／ｍｍｏｌｅ溶液に加えることにより加水分解した。室温にて一晩撹拌した後、メタノールを減圧留去し、残渣を水性処理し、反応を停止させた。分割したジオールをクロマトグラフィーまたは蒸留のいずれかにより精製した。
実施例６：シャープレス（Sharpless）不斉エポキシ化を経由したキラル３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパンの合成：
工程Ａ：
ｍ−クロロ−桂皮酸２５ｇ（１３７ｍｍｏｌ）のエタノール２７５ｍＬディスパージョンに、濃硫酸８ｍＬを室温にて加えた。反応物を一晩還流し、濃縮した。氷冷水を粗製物に加え、沈殿した白色固体をろ過し、冷水で洗浄した。沈殿物を一晩減圧乾燥し、エステル２５ｇ（８７％）を得た。
（シリカ上ジクロロメタン中Rf=0.50）
工程Ｂ：
ｍ−クロロ桂皮酸エチルエステル２３ｇ（１０９．５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液に、−７８℃にてジクロロメタン中１Ｍ ＤＩＢＡＬ−Ｈ２２９ｍＬ（２２９ｍｍｏｌ）を１時間にわたって滴加した。反応物を−７８℃にてさらに３時間撹拌した。酢酸エチルを加えて過剰のＤＩＢＡＬ−Ｈをクエンチし、飽和酒石酸ナトリウムカリウム水溶液を加え、反応物を室温にて３時間撹拌した。有機層を分離し、塩を酢酸エチルで洗浄した。集めた有機部分を濃縮し、１２０℃／０．１ｍｍにて蒸留し、純粋なアリルアルコール１４ｇ（７６％）を得た。
（シリカ上１：１酢酸エチル：ヘキサン中Rf=0.38）
工程Ｃ：
ｍ−クロロ桂皮アルコール５ｇ（２９．７６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン２２０ｍＬ溶液に、活性化した４Ａモレキュラーシーブス粉末２．５ｇを加え、混合物を−２０℃まで冷却した。（＋）−酒石酸ジエチル０．６１ｍＬ（３．５７ｍｍｏｌ）を−２０℃にて加え、１５分間撹拌した後、チタニウムテトライソプロポキシド０．８７（２．９７ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をさらに３０分間撹拌し、系中温度を−２０〜−２５℃に維持しながらヘプタン中５〜６Ｍｔ−ブチルヒドロペルオキシド１０ｍＬ（６０ｍｍｏｌ）を滴加した。混合物をさらに３時間−２０℃にて撹拌し、１０％水酸化ナトリウム／飽和塩化ナトリウム水溶液７．５ｍＬ、次いでエーテル２５ｍＬを加えた。反応物を１０℃まで昇温し、１５分間撹拌した後、無水硫酸マグネシウム１０ｇおよびセライト１．５ｇを加えた。混合物をさらに１５分間撹拌し、２５℃にて濃縮し、粗製のエポキシアルコールを得た。
（シリカ上１：１酢酸エチル：ヘキサン中Rf=0.40）
工程Ｄ：
先の反応から得られた粗製のｍ−クロロエポキシ桂皮アルコールのジメトキシエタン３００ｍＬ溶液に、Ｒｅｄ−Ａｌの６５％トルエン１８．６３ｍＬ（６０ｍｍｏｌ）溶液を窒素雰囲気下０℃にて滴加した。室温にて３時間撹拌した後、得られた溶液を酢酸エチル４００ｍＬで希釈し、飽和硫酸ナトリウム水溶液５０ｍＬでクエンチした。室温にて３０分間撹拌した後、得られた白色沈殿物をろ過し、酢酸エチルで洗浄した。ろ液を乾燥し、濃縮した。粗生成物を１２５〜１３０℃／０．１ｍｍにて蒸留し、純粋な（Ｒ）−３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパン３．７５ｇ（６７％）を得た。
（１：１酢酸エチル：ジクロロメタン中Rf=0.40）
光学純度は、ＨＰＬＣ（Regisから購入した(S,S) Whelko-0, 2.5cm X 4.0mm ID）によりジアセテート（ジオールのジクロロメタン中の無水酢酸、トリエチルアミン、触媒量のＤＭＡＰでの処理により製造）として定義した。
（Ｒ）−３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパン：９１％ｅｅ
（＋）酒石酸ジイソプロピルにより、＞９６％ｅｅの（Ｒ）−３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパンを提供した。
（Ｓ）−３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパンはまた、同一条件下、（−）−酒石酸塩を用いた不斉エポキシ化および還元プロトコルにより同様の収率にて製造した。
（Ｓ）−３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパン：７９％ｅｅ
実施例７：水素転移反応を経由したキラル３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパンの合成：
工程Ａ：３−（３’−クロロフェニル）−３−オキソ−プロピオン酸メチルの製造：
２２Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラー、サーモウェル／サーモメーターおよび窒素注入口（インラインバブラー）を備え付けた。フラスコに窒素を流し、続けてＴＨＦ６Ｌ、カリウムｔ−ブトキシド１４５１ｇおよびＴＨＦ０．５Ｌを充填した。得られた混合物を常温にて１５分間撹拌し、２０℃水浴を適用した。３Ｌ丸底フラスコに、３’−クロロアセトフェノン１０００ｇおよび炭酸ジエチル１１６５ｇを充填し、得られた黄色溶液を１６〜３１℃の温度を維持しながら、撹拌したカリウムｔ−ブトキシド溶液にゆっくり加えた。添加が完了（１時間１０分）した後、冷却バスを取り除き、溶液を１時間３０分間撹拌した。ＴＬＣは、反応が完了したことを示した。固定した分液漏斗５ガロンに、氷水４Ｌおよび濃塩酸１．３Ｌ（１２Ｍ溶液）を充填した。暗赤色反応溶液を水性酸中にてクエンチし、混合物を１５分間撹拌した。層を分離し、水相（より低い方）をトルエン４Ｌで再び抽出した。集めた有機抽出物を飽和ブライン（２ｘ３Ｌ、それぞれ１０分間撹拌）で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、減圧濃縮し、茶色油状物１４８０ｇを得た。油状物を高真空（１０ｔｏｒｒ）下に一晩放置し、１４２７ｇを得た。得られた物質を減圧蒸留（ショートパスカラム、フラクションカッターレシーバー（fraction cutter receiver））し、１０８〜１２８℃／１〜０．５ｔｏｒｒにおけるフラクションを集め、黄色油状物１２７３．９ｇ（９２．６％）を得た。
（２０％酢酸エチル／ヘキサン中Rf=0.36）
工程Ｂ：（Ｓ）−３−（３’−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロピオン酸メチルの製造：
１２Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラー、サーモメーター、滴下漏斗５００ｍＬおよび窒素注入口（インラインバブラー）を備え付けた。フラスコに窒素を流し、ギ酸２９２ｍＬ（３５０ｇ）を充填した。トリエチルアミン４２２ｍＬ（３０６ｇ）を、滴下漏斗に充填した後、ゆっくり撹拌し、＜４５℃の温度を維持しながら加えた。添加が完了（１時間３０分間）した後、氷浴を適用し、溶液を２０分間撹拌し、次いで常温にてさらに１時間撹拌した。フラスコに、３−（３’−クロロフェニル）−３−オキソ−プロピオン酸メチル１２６０ｇ、ＤＭＦ２．７７Ｌ（すすいだ容積を含む）および（Ｓ，Ｓ）−Ｔｓ−ＤＰＥＮ−Ｒｕ−Ｃｌ−（ｐ−シメン）３．７７ｇを続けて充填した。フラスコに加熱用マントル（heating mantle）を備え付け、滴下漏斗を冷却器とともに取り付けた（冷却器のために５℃の循環冷却液）。撹拌した反応溶液をゆっくり６０℃まで加熱（６０℃に達するまで９０分）し、内容物を６０℃にて４．２５時間維持した。ＨＰＬＣは、３％の出発物質が残存することを示した。溶液を６０℃にてさらに８時間撹拌した後、徐々に常温まで一晩冷却した。ＨＰＬＣは、０．５％の出発物質が残存することを示した。固定した分液漏斗５ガロンに、水１０ＬおよびＭＴＢＥ１Ｌを充填した。反応溶液を水性混合物に注ぎ、反応フラスコを、さらにＭＴＢＥ１Ｌを加えて分液漏斗にすすいだ。内容物を数分間撹拌し、層を分離した。水相をさらにＭＴＢＥ（２ｘ１Ｌ）で抽出し、集めた有機抽出物をブライン１Ｌで洗浄し、減圧濃縮し、赤色油状物１３３４ｇ（１０５％）を得た。油状物をさらに精製せずに次の工程に用いた。
粗製のヒドロキシエステル１０ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍＬに溶解した。無水酢酸２２μＬ（０．２３ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン２２ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加え、溶液を常温にて１５分間撹拌した。溶液をジクロロメタン１０ｍＬで希釈し、１Ｍ塩酸（３ｘ３ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）し、ろ過し、減圧濃縮した。残った油状物をメタノールに溶解し、キラルＨＰＬＣ（Zorbax Rx-C18, 250 X 4.6mm; 移動相: 65/35 (v/v) 水／アセトニトリル, アイソクラティック; 流速=1.5 mL/分; 注入容積=15μL; 220nmにおけるUV検出. 保持時間: 生成物=9.3分, 出発物質=17.2分）により分析した。ヒドロキシエステルは、キラルＨＰＬＣによる分析のためのアセテートに誘導体化し、９１％ｅｅを得たことを示した。
（HPLC条件: カラム: Pirkle covalent (S,S) Whelk-O 10/100 krom FEC, 250 X 4.6 mm; 移動相: 70/30 (v/v) メタノール／水, アイソクラティック; 流速: 1.5 mL/分; 注入容積=10μL; 220nmにおけるUV検出. 保持時間: Ｓ−ヒドロキシエステル（アセテート）=9.6分, Ｒ−ヒドロキシエステル（アセテート）=7.3分）
工程Ｃ：（Ｓ）−３−（３’−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロパン酸の製造：
１０Ｌロータリーエバポレーターフラスコ中の粗製のヒドロキシエステルに、水酸化ナトリウム溶液２．５Ｌ（２Ｍ溶液）を加えた。得られた溶液をロータリーエバポレーター上、常圧、常温にて２時間撹拌した。ＨＰＬＣは、５％の出発物質が残存していることを示した。
（HPLC条件: カラム: Zorbax Rx-C18, 250 X 4.6 mm; 移動相: 65/35 (v/v) 水／アセトニトリル, アイソクラティック; 流速=1.5mL/分; 注入容積=15μL; 220nmにおけるUV検出. 保持時間: 生成物=3.8分, 出発物質=18.9分）
溶液のｐＨは１１（広範囲のｐＨ紙）であった。さらに２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を加え、ｐＨ１４まで（約１００ｍＬ）調節し、溶液をさらに３０分間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完了したことを示した。溶液を固定した分液漏斗５ガロンに移し、ＭＴＢＥ２Ｌで抽出した。層を分離し、有機抽出物を廃棄した。水相を分液漏斗に戻し、１２Ｍ塩酸溶液６００ｍＬで酸性化した。混合物をＭＴＢＥ（１ｘ２Ｌ、２ｘ１Ｌ）で抽出した。集めた酸性有機抽出物を乾燥（硫酸マグネシウム）し、ろ過し、減圧濃縮し、茶色油状半固体物１２６２ｇを得た。残渣を酢酸エチル１Ｌでスラリー化し、メカニカルスターラー、加熱用マントル、冷却器およびサーモメーターを備えた１２Ｌ三ツ口丸底フラスコに移し替えた。撹拌した混合物を加熱し、すべての固体を溶解（２８℃）し、暗色溶液を１０℃まで冷却（１１℃にて沈殿物を形成）した。混合物をヘキサン（４Ｌを１時間にわたって）でゆっくりと希釈し、得られた混合物を＜１０℃にて２時間撹拌した。混合物をろ過し、集めた固体を冷４／１ヘキサン／酢酸エチル１Ｌで洗浄し、乾燥（-30 in. Hg, 50℃, 4時間）し、一定質量を得た。
回収量=ベージュ色固体８３７ｇ（７０．４％）. mp=94.5-95.5℃
ヒドロキシ酸のサンプル５０ｍｇをボラン−ＴＨＦ（工程Ｄ参照）によりジオールに還元した。得られた粗製のジオールをジアセチル化（工程Ｂに記載のとおり）し、キラルＨＰＬＣにより分析した。
保持時間：Ｓ−ジオール（ジアセテート）=12.4分, Ｒ−ジオール（ジアセテート）=8.8分） ｅｅ=９８％
ヒドロキシ酸の第二クロップを単離した。上記で得られたろ液を減圧濃縮し、茶色泥状物２６０ｇを得た。得られた物質を酢酸エチル２５０ｍＬに溶解し、撹拌した暗色溶液をヘキサン１０００ｍＬでゆっくりと希釈し、得られた混合物を常温にて一晩撹拌した。混合物をろ過し、集めた固体を５／１ヘキサン／酢酸エチル２００ｍＬで洗浄し、乾燥（-30 in. Hg, 50℃, 16時間）し、一定質量を得た。
回収量=ベージュ色固体１３４ｇ（１１．２％）. ｅｅ=９７％
工程Ｄ：（Ｓ）−（−）−１−（３’−クロロフェニル）−１，３−プロパンジオールの製造：
２２Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラー、サーモウェル／サーモメーターおよび窒素注入口（バブラーに排気口）を備え付けた。フラスコに２Ｍボラン−ＴＨＦ３６９７ｇ（４．２Ｌ）を充填し、撹拌した溶液を５℃まで冷却した。（Ｓ）−３−（３−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロパン酸８３０ｇのＴＨＦ１２４５ｍＬ溶液を撹拌しながら製造した（わずかに吸熱性）。反応フラスコに滴下漏斗１Ｌを備え付け、ヒドロキシ酸溶液を、温度＜１６℃を維持しながら、撹拌したボラン溶液にゆっくりと加えた。添加完了（３時間）後、混合物を氷浴温度にて１．５時間撹拌した。水２．５Ｌを注意して加えることにより反応をクエンチした。添加完了（３０分）後、３Ｍ水酸化ナトリウム溶液３．３Ｌを加え（３５℃まで温度上昇）、得られた混合物をさらに２０分間撹拌（温度＝３０℃）した。反応混合物を固定した分液漏斗５ガロンに移し、層を分離した。水相をＭＴＢＥ２．５Ｌで抽出し、集めた有機抽出物（ＴＨＦおよびＭＴＢＥ）を２０重量％塩化ナトリウム溶液２Ｌで洗浄し、硫酸マグネシウム８３０ｇで３０分間撹拌した。混合物をセライトに通してろ過し、減圧濃縮し、粘稠茶色油状物７３５ｇを得た。
油状物を減圧蒸留により精製し、135-140℃/0.2mmHgにおけるフラクションを集め、無色油状物７１２．２ｇ（９２．２％）を得た。
ジオールをジアセチル化し、キラルＨＰＬＣにより分析（e.e.=９８％、工程Ｂ参照）した。
保持時間：Ｓ−ジオール（ジアセテート）=12.4分, Ｒ−ジオール（ジアセテート）=8.9分. [α]D=-51.374（クロロホルム中5mg/mL）
実施例８：（−）−β−クロロジイソピノカンフェニルボラン（ＤＩＰＣｌ）還元を経由したキラル３−（３’−クロロフェニル）−１，３−ジヒドロキシプロパンの合成
工程Ａ：３−（３’−クロロフェニル）−３−オキソ−プロパン酸の製造：
１２Ｌ三ツ口丸底フラスコにメカニカルスターラーおよび滴下漏斗２Ｌを備え付けた。フラスコに窒素を流し、ジイソプロピルアミン６３６ｍＬおよびＴＨＦ１．８０Ｌを充填した。熱電対プローブを反応溶液に浸し、撹拌した内容物を−２０℃まで冷却した。ｎ−ブチルリチウム１．８１Ｌ（２．５Ｍヘキサン溶液）を滴下漏斗に充填し、−２０〜−２８℃の温度を維持しながら、ゆっくりと撹拌しながら加えた。添加完了（３０分）後、滴下漏斗をヘキサン３０ｍＬですすぎ、撹拌した溶液を−６２℃まで冷却した。酢酸トリメチルシリル３００ｇを温度＜−６０℃を維持しながら、ゆっくりと撹拌しながら加えた。添加完了（３０分）後、溶液を−６０℃にて１５分間撹拌した。塩化３−クロロベンゾイル２９５ｍＬを温度＜−６０℃を維持しながら、ゆっくり撹拌しながら加えた。添加完了（６５分）後、冷却バスを取り除き、反応溶液を１．２５時間、徐々に０℃まで昇温しながら撹拌した。反応フラスコを氷浴で冷却した後、水１．８Ｌを撹拌した溶液に加えた。反応混合物を１０分間撹拌した後、ｔ−ブチルメチルエーテル１．０Ｌで希釈した。より低い水相を分離し、メカニカルスターラーを備えた１２Ｌ三ツ口丸底フラスコに移した。ｔ−ブチルメチルエーテルを加え（１．８Ｌ）、撹拌した混合物を＜１０℃（氷浴）まで冷却した。濃塩酸溶液３００ｍＬ（１２Ｍ溶液）を加え、混合物を激しく撹拌した。層を分離し、水相をさらに濃塩酸３０ｍＬで酸性化し、ｔ−ブチルメチルエーテル１．０Ｌで再び抽出した。集めたＭＴＢＥ抽出物をブライン１Ｌで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム、７０ｇ）し、ろ過し、減圧濃縮し、黄色固体８２７ｇを得た。粗製の固体をヘキサン２．２Ｌ中にてスラリー化し、メカニカルスターラーを備えた５Ｌ三ツ口丸底フラスコに移した。混合物を＜１０℃（氷浴）にて１時間撹拌した後、ろ過し、ヘキサン（４ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥（-30 in. Hg, 常温, 14時間）し、一定質量を得た。
回収量=薄黄色粉状物３０９ｇ（６８．６％）
工程Ｂ：（Ｓ）−３−（３’−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロパン酸の製造：
１２Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラーおよび滴下漏斗１Ｌを備え付けた。フラスコに窒素を流し、３−（３’−クロロフェニル）−３−オキソ−プロパン酸２７５．５ｇおよびジクロロメタン２．２Ｌを充填した。熱電対プローブを反応スラリーに浸し、撹拌した内容物を−２０℃まで冷却した。トリエチルアミン２１１ｍＬを５分にわたって撹拌したスラリーに加え、すべての固体を溶解した。（−）−Ｂ−クロロジイソピノカンフェニルボラン１．０４Ｌ（１．６０Ｍ）のジクロロメタン溶液を滴下漏斗に充填した後、温度−２０〜−２５℃を維持しながら、ゆっくり撹拌しながら加えた。添加完了（３５分）後、溶液を氷浴温度（２〜３℃）まで昇温し、４時間撹拌した。製造過程のＮＭＲ分析は、出発物質が＜４％であることを示した。濁った橙色反応混合物に水１．２Ｌ、次いで３Ｍ水酸化ナトリウム溶液１．４４Ｌを加えた。混合物を５分間激しく撹拌した後、分液漏斗に移した。層を分離し、塩基性の水相を酢酸エチル１．０Ｌで洗浄した。水相を濃塩酸３００ｍＬで酸性化し、酢酸エチル（２ｘ１．３Ｌ）で抽出した。二つの酸性の酢酸エチル抽出物を集め、ブライン６００ｍＬで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム、１３０ｇ）し、ろ過し、減圧濃縮し、黄色油状物３２８ｇを得た（油状物は放置すると結晶化した）。固体を酢酸エチル１８０ｍＬ中にてスラリー化し、メカニカルスターラーを備えた２Ｌ三ツ口丸底フラスコに移した。撹拌した混合物を＜１０℃（氷浴）まで冷却した後、ヘキサン８００ｍＬで希釈した。得られた混合物を氷浴温度にて４時間撹拌した後、ろ過した。集めた固体を４：１ヘキサン：酢酸エチル（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（-30 in. Hg, 常温, 12時間）し、一定質量を得た。
回収量=白色粉状物２０７．５ｇ（７４．５％）
工程Ｃ：（Ｓ）−（−）−１−（３’−クロロフェニル）−１，３−プロパンジオールの製造：
１２Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラー、滴下漏斗２Ｌおよびサーモメーターを備え付けた。フラスコに窒素を流し、（Ｓ）−３−（３’−クロロフェニル）−３−ヒドロキシプロパン酸２０６．７ｇおよびＴＨＦ８５０ｍＬを充填し、撹拌した溶液を５℃（氷浴）まで冷却した。ボランの１ＭＴＨＦ溶液２．１４Ｌを滴下漏斗に充填した後、温度＜１０℃を維持しながら、ゆっくり撹拌しながら加えた。添加完了（１時間）後、冷却バスを取り除き、溶液を常温にて１時間撹拌した。反応溶液を水６００ｍＬ、次いで３Ｍ水酸化ナトリウム溶液８５０ｍＬでゆっくりと注意深くクエンチした。混合物を１０分間撹拌した後、分液漏斗に移した。層を分離し、水相を酢酸エチル６００ｍＬで逆抽出した。集めた有機相をブライン５００ｍＬで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム、３２２ｇ）し、ろ過し、減圧濃縮し、薄黄色油状物１８９．０ｇ（１０１％）を得た。油状物を減圧蒸留により精製し、125-155℃/0.15mmHgにおけるフラクションを集め、無色油状物１８０．９ｇ（９４．０％）を得た。
ジオール５．０ｍｇ（０．０２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２．０ｍＬに溶解した。無水酢酸１５μＬ（０．１５ｍｍｏｌ）および４−（ジメチルアミノ）ピリジン１３ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を常温にて１５分間撹拌した。反応溶液を１Ｍ塩酸溶液３ｍＬでクエンチし、より低い有機相を分離し、硫酸マグネシウムプラグに通し、窒素雰囲気下濃縮した。残渣をメタノール１ｍＬに溶解し、キラルＨＰＬＣにより分析した（実施例７；工程Ｂ参照） ee＞９８％.
実施例９：触媒的不斉水素化を経由した１，３−ジオールの製造：
工程Ａ：
ベータ−ケトエステル出発物質を、実施例７、工程Ａに記載のように合成した。
工程Ｂ：
ベータ−ケトエステル１ｍｍｏｌｅをメタノールまたはエタノール（５〜１０ｍｌ／ｍｍｏｌｅケトエステル）のいずれかにおいて含む溶液を、室温にてポンプ（pump/vent (N2)）で数回脱気した。脱気した溶液をグローブバッグに移動し、窒素雰囲気下、撹拌棒および１．０モル％Ｒｕ−ＢＩＮＡＰ触媒を含むステンレス製ボンベ（stainless steel bomb）に注いだ。ボンベを密封し、グローブバッグから取り出し、水素を充填した後、１８〜２４時間室温、水素１５０ｐｓｉにて撹拌した。水素圧を排気した後、ボンベを開封し、反応混合物を取り出し、濃縮した。粗製のベータ−ヒドロキシエステルを加水分解した。
工程Ｃ：
粗製のベータ−ヒドロキシエステルを、実施例７、工程Ｃに記載のように加水分解した。
工程Ｄ：
光学活性ベータ−ヒドロキシ酸を、実施例７、工程Ｄに記載のように還元した。
ホスホン酸と１−（アリール）プロパン１，３−ジオールのカップリングを経由したプロドラッグの合成：
実施例１０：塩化チオニル反応によるプロドラッグの合成の一般的手順：
ホスホン酸１ｍｍｏｌの塩化チオニル５ｍＬ懸濁液を還流温度にて４時間加熱した。反応混合物を冷却し、溶媒を留去し、乾燥した。得られた残渣に、ジオール１ｍｍｏｌおよびピリジン２．５ｍｍｏｌのジクロロメタン３ｍＬ溶液を加えた。２５℃にて４時間撹拌した後、反応を停止させ、クロマトグラフィーを行った。
実施例１１：ＤＣＣカップリングを経由したプロドラッグの合成の一般的手順：
ＰＭＥＡ４１０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ１５ｍＬおよびピリジン３ｍＬ溶液に、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）９２５ｍｇ（４．５ｍｍｏｌ）、次いで工程Ｂで得られた１（３−クロロフェニル）プロパン−１，３−ジオール２９５ｍｇ（１．５７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を一晩１００℃にて加熱した。混合物を減圧濃縮し、トルエン（２ｘ１０ｍＬ）で共沸した。粗製の化合物をシリカゲルカラム（３：９７〜１０：９０メタノール−ジクロロメタン）でクロマトグラフィーし、純粋な環状プロドラッグ３１０ｍｇを得た。
塩化オキサリル媒介カップリングを経由したプロドラッグの合成：
実施例１２：メタンスルホン酸９−｛２−［２，４−シス−（Ｓ）−（＋）−４−（３’−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニン（１８）の製造
実施例１２．１：ジクロリデート（１１）の形成
Figure 2006511490
 ２Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラー、冷却器、滴下漏斗１２５ｍＬおよび加熱用マントルを備え付けた。フラスコに窒素を流し、ＰＭＥＡ５０．０ｇ、ジクロロメタン６５０ｍＬおよびＮ，Ｎ−ジエチルホルムアルデヒド２２．５ｍＬを充填した。塩化オキサリル５８．０ｍＬを滴下漏斗に充填し、撹拌した反応混合物にゆっくり加えた。添加完了（１５分）後、滴下漏斗を取り除き、激しく撹拌した混合物還流温度にて２時間加熱した。溶液はこの工程中スラリーのままであった。反応混合物をわずかに冷却し、さらに塩化オキサリル１．０ｍＬおよびＮ，Ｎ−ジエチルホルムアミド０．４ｍＬを加えた。Ｎ，Ｎ−ジエチルホルムアルデヒドの添加により、激しい気体発生が起こった。得られた混合物を還流温度にて、すべての固体が溶解するまで（さらに２．５時間、全反応時間は約４．５時間）加熱した。反応溶液のＨＰＬＣ分析は、８３領域％にて生成物１１を示した。反応は、ジクロリデートの形成によりモニターした。反応混合物のサンプル（約５０μＬ）を取り出し、トリエチルアミン１滴を含む無水メタノール１Ｌでクエンチした。得られたメチルホスホネートをＨＰＬＣにより分析した。
ＨＰＬＣ条件：
YMC-Pack R＆D, R-33-5 S-5 120A, 250 X 4.6 mm; 移動相: 溶媒A= 20 mM リン酸カリウム, pH 6.2; 溶媒B= アセトニトリル; 濃度勾配: 10-60%B/ 15分, 60-10%B/ 2分, 10%B/ 3分; 1.4 mL/分; 注入容積= 10μL; 270nmにおけるUV検出.
保持時間：
ジメチルホスホネート１２= 8.5分, モノメチルホスホネート１３= 5.8分
Figure 2006511490
反応溶液をわずかに冷却し、冷却器をサーモメーター、冷却器およびコレクションフラスコ２５０ｍＬを備えた蒸留ヘッド（distillation head）に置き換えた。反応溶液を加熱還流し、蒸留液２５０ｍＬを集めた。ポット溶液（pot solution）をジクロロメタン２５０ｍＬで希釈し、さらに蒸留液２５０ｍＬを集めた。蒸留ヘッドを取り除き、反応フラスコを窒素雰囲気下に置いた。溶液をジクロロメタン１００ｍＬで希釈し、氷浴温度まで冷却した。反応溶液のＨＰＬＣ分析は、８９領域％にて生成物を示した。
ＨＰＬＣ条件：
YMC-Pack R＆D, R-33-5 S-5 120A, 250 X 4.6 mm; 移動相: 溶媒A= 20 mM リン酸カリウム, pH 6.2; 溶媒B= アセトニトリル; 濃度勾配: 10-60%B/ 15分, 60-10%B/ 2分, 10%B/ 3分; 1.4 mL/分; 注入容積= 10μL; 270nmにおけるUV検出
保持時間：生成物１１= 8.5分, 出発物質= 5.9分
ピリジン１８ｍＬを撹拌した溶液にゆっくり加えた。添加完了（５分）後、得られた薄橙色溶液を氷浴温度にて使用するまで（３０分）保存した。
実施例１２．２：カップリング反応
２Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラーおよび滴下漏斗１Ｌを備え付けた。フラスコに窒素を流し、（Ｓ）−（−）−（３’−クロロフェニル）−１，３−プロパンジオール３４．１ｇを、ジクロロメタン５００ｍＬおよびトリエチルアミン１２５ｍｌの溶液として充填した。熱電対プローブを反応溶液に浸し、撹拌した内容物を−７１℃まで（ドライアイス／イソプロパノール）冷却した。ジクロリデート溶液１１を滴下漏斗に充填した後、温度＜−６７℃を維持しながら、ゆっくり撹拌しながら加えた。添加完了（１．２５時間）後、冷却バスを取り除き、撹拌した混合物を０℃まで３０分にわたって昇温した。反応混合物を水５５０ｍＬで洗浄し、層を分離した。ジクロロメタン相を酢酸エチル５００ｍＬで希釈し、５％塩化ナトリウム溶液６００ｍＬで洗浄した。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム、５０ｇ）し、珪藻土（セライト５２１）に通してろ過し、減圧濃縮し、暗赤色泥状物１０８ｇを得た。サンプルをメタノールに溶解した。
ＨＰＬＣ条件：
YMC-Pack R＆D, R-33-5 S-5 120A, 250 X 4.6 mm; 移動相: 溶媒A= 20 mM リン酸カリウム, pH 6.2; 溶媒B= アセトニトリル; 濃度勾配: 10-60%B/ 15分, 60-10%B/ 2分, 10%B/ 3分; 1.4 mL/分; 注入容積= 10μL; 270nmにおけるUV検出
保持時間：シス１４= 12.5分, トランス１５= 13.0分
Figure 2006511490
得られた物質をエタノール５００ｍＬに溶解し、マグネティックスターラー、冷却器および加熱用マントルを備えた２Ｌ丸底フラスコに移した。酢酸５５ｍＬを加え、赤色溶液を還流温度にて８時間加熱した。ＨＰＬＣは、反応が完了したことを示した。サンプルをメタノールに溶解した。
ＨＰＬＣ条件：
YMC-Pack R＆D, R-33-5 S-5 120A, 250 X 4.6 mm; 移動相: 溶媒A= 20 mM リン酸カリウム, pH 6.2; 溶媒B= アセトニトリル; 濃度勾配: 10-60%B/ 15分, 60-10%B/ 2分, 10%B/ 3分; 1.4 mL/分; 注入容積= 10μL; 270nmにおけるUV検出
保持時間：シス１６ = 9.5分, トランス１７ = 9.8分
Figure 2006511490
実施例１２．３：メタンスルホン酸９−｛２−［２，４−シス−（Ｓ）−（＋）−４−（３’−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニン（１８）の結晶化
メタンスルホン酸２１．５ｍＬを加え、１５分後沈殿物を形成した。混合物をエタノール４００ｍＬで希釈し、すべての固体が溶解するまで加熱（ポット温度＝７０℃）した。溶液を撹拌しながら冷却し、沈殿物が４６℃にて形成された。得られた混合物を２時間常温まで冷却しながら撹拌した後、氷浴温度にて２．５時間撹拌した。混合物をろ過し、集めた固体をエタノール（２ｘ１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（-30 in. Hg, 55℃, 14時間）し、一定質量を得た。
回収量＝白色粉状物１８（４９．４ｇ、５１．９％）。固体は６．５領域％のトランスジアステレオマーを含む。
キラルＨＰＬＣ：Pirkle covalent (S,S) Whelk-O 1 10/100 krom FEC 250 X 4.6 mm; 移動相= 55:45, メタノール: 水中0.1%酢酸; アイソクラティック; 1.0 mL/分; 注入容積= 10μL; 260nmにおけるUV検出; サンプル調製= 水中2.0 mg/mL.
保持時間：シス−（Ｒ）−９−（２−ヒドロキシエチル）アデニン = 24.6分, トランス−（Ｒ）−９−（２−ジエチルホスホニルメトキシエチル）アデニン = 27.5分, シス−（Ｓ）−９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン = 18.0分
1H NMR (D2O) を用い、成分の構造を確認した。
Figure 2006511490
実施例１２．４：メタンスルホン酸９−｛２−［２，４−シス−（Ｓ）−（＋）−４−（３’−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニン（１８）の再結晶化
３Ｌ三ツ口丸底フラスコに、メカニカルスターラー、冷却器、加熱用マントルおよびサーモメーターを備え付けた。フラスコに粗製の２回分のメシレート塩１８およびエタノール１．４Ｌを充填した。撹拌した混合物を還流温度にて、すべての固体が溶解するまで（約１０分）加熱（ポット温度は７８℃）した。撹拌した混合物を常温まで１．５時間にわたって徐々に冷却した（５６℃にて沈殿物を形成した）。混合物を常温にてさらに２時間撹拌した後、ろ過した。集めた固体をエタノール（２ｘ１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥（-30 in Hg, 65℃, 60時間）し、一定質量を得た。
色：灰白色粒状固体
純度 = 97% (HPLC)
光学純度 (キラルHPLC) ＞99.5%.
M.P.(℃)：186.5-188
特異的反応 (メタノール, 25℃, 589nm)：＋16.429
組成：C, 41.58; H, 4.56; N, 13.37 [理論値として：C, 41.50; H, 4.53; N, 13.35]
1H NMR (D2O)：δ=1.30-1.60 (m, 1H), 1.80-1.95 (m, 1H), 2.60 (s, 3H), 3.70-3.90 (m, 4H), 4.10-4.50 (m, 2H), 4.60 (s, 3H), 5.15-5.40 (m, 1H), 6.70-6.80 (m, 2H), 7.00-7.10 (m, 2H), 8.00 (s, 1H), 8.10 (s, 1H).
本発明の好ましい化合物は、第Ｉ表に記載する。第Ｉ表は、好ましい化合物についてのＶ基の構造式、命名および物理的データを含む。
本発明の方法の使用の例としては、次が挙げられる。これらの実施例は、例示であり、本発明の方法をこれらの実施例のみに限定するものでないと理解されるだろう。
以下の生物学的実施例において、明瞭および簡潔の目的のために、化合物は化合物番号（上記表に記載）により呼称する。
生物学的実施例
実施例Ａ：ＰＭＥＡプロドラッグアナログのラット肝臓ミクロソームによるインビトロ活性化
ＰＭＥＡプロドラッグアナログは、ラット肝臓のミクロソームフラクションにより触媒された反応においてＰＭＥＡに対する活性化のために試験を行った。
方法：
プロドラッグ（２５および２５０μＭ）を、ＣＹＰ３Ａ４活性を増強するためのデキサメタゾンにより誘発されたラットから単離された肝臓ミクロソームによる活性化のために試験した（Human Biologics Inc., Phoenix AZ）。反応を、２ｍＭ ＮＡＤＰＨおよび肝臓ミクロソーム１ｍｇ／ｍＬの存在下０．１Ｍ ＫＨ２ＰＯ４中、ｐＨ７．４にて行った。反応混合物を５分間エッペンドルフサーモミキサー（Thermomixer）５４３６（３７℃、スピード６）にてインキュベートした。１．５倍の容積のメタノールを加えることにより反応を終了させた。得られた抽出物は、１４，０００ｒｐｍにおける遠心分離によりエッペンドルフマイクロフュージ（２０分間）中にて浄化した。上清２００μＬを減圧濃縮し、加熱乾燥し、ＰＭＥＡ分析のための緩衝液Ａ（以下に示す）８０μＬ中にて再懸濁させた。９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニンのスパイクされた標準物質（spiked standard）（ＰＭＥＡlot 980397, Metabasis Therapeutics）を同じ反応混合物中にて製造し、同様に処理した。再懸濁の後、サンプルを、１０ｍＭリン酸アンモニウム、２．５ｍＭオクチルトリエチルリン酸アンモニウム、ｐＨ５．５からなるイオンペア（ion-pairing）緩衝液（緩衝液Ａ）を用いた逆相ＨＰＬＣ（Altima C-18カラム）により分析した。サンプルを緩衝液Ａ中に充填し、メタノールの濃度勾配４０％〜８０％で２０分にわたり溶出した。検出は２６５ｎｍにて行った。ＰＭＥＡの保持時間は、約１４．７分であった。
結果：
Figure 2006511490
結論：
試験した大多数のプロドラッグは、活性化し、本化合物ＰＭＥＡを形成した。活性化速度は、より低い薬物試験濃度２５μＭにおける＜０．５〜６．２ｎｍｏｌｅｓ／分／ｍｇミクロソームタンパク質の範囲であった。化合物４は、本系においてＰＭＥＡへの最も高い変換速度を有した。
実施例Ｂ：ＰＭＥＡプロドラッグアナログによるインキュベーション後の肝細胞におけるＰＭＥＡｐｐ蓄積
ラット肝臓ミクロソーム（実施例Ａ）において十分に高レベルの活性化を示したＰＭＥＡプロドラッグを、既知のＨＢＶポリメラーゼ阻害物質であるＰＭＥＡｐｐを新たに単離されたラット肝細胞において生成するそれらの能力のために評価した。ＰＭＥＡプロドラッグを試験した。
方法：
肝細胞を、Groen（Groen, A.K.ら, Eur. J. Biochem 122:87-93 (1982)）により改変されたBerryとFriendの手順（Berry, M.N. Friend, D.S., J. Cell Biol. 43:506-520 (1969)）により、食物を与えたスプラーグ・ドーリー（Sprague-Dawley）ラット２５０〜３００ｇから調製した。肝細胞６０ｍｇ／ｍｌ湿重量（＞８５％トリパンブルーバイアビリティー）を、２０ｍＭグルコースおよびＢＳＡ１ｍｇ／ｍｌを含むクレブス（krebs-）二炭酸塩緩衝液２ｍｌ中にて４時間ＰＭＥＡプロドラッグ２５０μＭ（プロドラッグのメタノール中２５ｍＭストック溶液）の存在下インキュベートした。インキュベーション中の適切な時点（０、１、２、４時間）にて、細胞懸濁液のアリコート４００μｌを取り、シリコン／鉱油相に通して遠心分離し、１０％過塩素酸に細胞内ヌクレオチドを抽出した。酸性細胞抽出物を、０．３倍容積の３Ｍ水酸化カリウム／３Ｍ ＫＨ２ＣＯ３で中性化した後、ＰＭＥＡｐｐレベルを、Whatman Partisphere SAX（5μm, 4.6 x 125 mm）カラムを用いたイオン交換ＨＰＬＣ（Hewlett Packard 1050）により評価した。サンプルを０．３Ｍリン酸アンモニウム緩衝液ｐＨ３．５中のカラム上に充填し、０．８Ｍリン酸アンモニウムｐＨ３．５への濃度勾配によりカラムから溶出した。ＰＭＥＡｐｐの保持時間は、１８．６分であった。
結果：
ＰＭＥＡプロドラッグの主要なラット肝細胞でのインキュベーション後、ＰＭＥＡｐｐ形成が０〜４時間にわたって観察された。ＰＭＥＡｐｐレベルのためのＡＵＣ（曲線下の領域）値（０〜４時間）を以下に示す。化合物４、化合物２および化合物１が最も高レベルのＰＭＥＡｐｐを生成した。
Figure 2006511490
結論：
本発明化合物は、新たに単離したラット肝細胞中にてＰＭＥＡｐｐを生成する能力を示す。
実施例Ｃ：ＰＭＥＡプロドラッグアナログの通常に絶食させたラットへの経口投与後の肝臓器官におけるＰＭＥＡｐｐ蓄積：
適切な経口バイオアベイラビリティーおよび好ましい肝内活性化速度を有するプロドラッグを同定するために、インビボにてＰＭＥＡプロドラッグを試験した。
方法：
プロドラッグ３０〜ｍｇ／ｋｇ（ＰＭＥＡ当量）を通常の絶食されたラットへ経口投与した後、肝臓器官サンプルを８時間にて凍結固定（freeze-clamped）した。ＰＭＥＡｐｐ肝臓器官濃度を過塩素酸抽出後に決定し、Whatman Partisphere SAX（5μm, 4.6 x 125 mm）カラムを用いた逆相ＨＰＬＣ（Hewlett Packard 1050）により中性化した。サンプルを０．３Ｍリン酸アンモニウム緩衝液ｐＨ３．５中のカラム上に充填し、０．８Ｍリン酸アンモニウムｐＨ３．５への濃度勾配によりカラムから溶出した。ＰＭＥＡｐｐの保持時間は、１８．６分であった。
結果：
Figure 2006511490
結論：
試験したＰＭＥＡプロドラッグの経口投与後、ＰＭＥＡｐｐを肝臓器官において容易に検出した。
実施例Ｄ：化合物４のヒト肝臓ミクロソームによるインビトロ活性化；反応のＣＹＰ３Ａ４選択性
ヒト肝臓のミクロソームフラクションによる化合物４の活性化速度を決定した。反応のＰ４５０イソフォーム特異性を、既知のＣＹＰ３Ａ４−選択的阻害物質、ケトコナゾールの効果を評価することにより決定した。
方法：
ヒト肝臓ミクロソームをIn Vitro Technologies（IVT）から購入した。Lot 1011を、実証されたＣＹＰ３Ａ４活性（５．７ｎｍｏｌ／ｍｇ／分のテストステロン６ベータ−ヒドロキシル化速度；IVT）を有する１０のオスのドナーのプールから製造した。化合物４（lot 990301）をMetabasis Therapeuticsにて合成し、メタノール中にて溶媒和した。ケトコナゾールをResearch Biochemicals International（lot SJG-597A）から購入し、メタノール中にて溶媒和した。３７℃における２分間のプレインキュベーション後、１００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、ヒト肝臓ミクロソーム２ｍｇ／ｍＬおよび化合物４（０、３０、６０、１００，２００および４００μＭ）を含む反応混合物を２ｍＭまでＮＡＤＰＨを加えることにより開始させた。反応を１０分間エッペンドルフサーモミキサー５４３６中、３７℃、スピード６にて行った。インキュベーション実験を、化合物４（１００μＭ）および０、０．０１、０．１、１、１０および１００μＭの濃度のケトコナゾールにおいて同様に行った。反応を、１．５倍容積のメタノールを加えることにより停止させ、抽出物を１４，０００ｒｐｍにてエッペンドルフマイクロフュージ中２０分間ペレットした。上清２００μｌを減圧濃縮し、加熱乾燥した後、緩衝液Ａ（以下参照）８０μＬ中に再懸濁した。９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニンのスパイクされた標準物質（ＰＭＥＡlot 980397, Metabasis Therapeutics）を同じ反応混合物中にて製造し、同様にクエンチし、処理した。１０ｍＭリン酸アンモニウムおよび２．５ｍＭオクチルトリエチルリン酸アンモニウム、ｐＨ５．５からなるイオンペア緩衝液（緩衝液Ａ）。再懸濁の後、サンプルを、逆相ＨＰＬＣによりＰＭＥＡについて分析した。サンプルをAltima C-18ヌクレオチドカラム上、緩衝液Ａ中に充填し、メタノールの濃度勾配４０％〜８０％で２０分にわたり溶出し、２６５ｎｍにて検出した。この方法を用いたＰＭＥＡの保持時間は、約１４．７分であった。
結果：
化合物４は、時間およびタンパク質濃度に依存し、ヒト肝臓ミクロソームにおいてＰＭＥＡに活性化された。１１１μＭのＫｍおよび１．６ｎｍｏｌ／分／ｍｇのＶｍａｘを、この系における化合物４の活性化について決定した。１μＭの濃度にて、ケトコナゾールが化合物４のＰＭＥＡへの変換の９７％を阻害することを見出した（図１）。
結論：
従ってその結果は、ヒト肝臓ミクロソームにおける化合物４のターンオーバーが主にＣＹＰ３Ａ４により触媒され、プロドラッグがこのアイソザイムのための良い基質であることを示す。
比較の実験を、化合物４の単一鏡像異性体（化合物５７および化合物５４）について、物理化学的性質、ヒト肝臓ミクロソームにおける活性化およびラットへの経口または静脈内投与後の肝臓ＰＭＥＡｐｐのインビボ蓄積を有する鏡像異性体を選択するために行った。
実施例Ｅ：化合物４鏡像異性体の溶解性
鏡像異性体化合物５７および化合物５４の溶解性を水中にて分析した。
方法：
５ｍｇの各鏡像異性体を、４回検量し、適切な容積の水を各サンプルに加え、最終濃度５０ｍｇ／ｍＬを達成した。サンプルを激しく撹拌し、室温にて１５分間超音波に当てた。室温にて１時間放置した後、サンプルをテーブル・トップ（table-top）マイクロフュージ（エッペンドルフ）上、最高速度にて２分間室温にて遠心分離した。次いで上清を０．４５μＭフィルターに通し、ろ液を希釈し、既知の標準物質に対しＨＰＬＣにより分析し、薬物濃度を分析した。ＨＰＬＣ分析を、ＨＰ１０９０系上、Beckman Ultrasphereカラム（4.6 x 150 mm, 5μＭ）を用い、４０℃にて行った。カラムを１．５ｍＬ／分にて２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液ｐＨ６．２から８０％アセトニトリルまでの直線的濃度勾配により１５分にわたって溶出した。カラム流出物を２６０ｎｍにてモニターした。
結果：
化合物４のＲおよびＳ鏡像異性体、すなわち化合物５７および化合物５４は、ほぼ等量で水にて高い溶解性を有する。
化合物５７および化合物５４の水における溶解性
化合物 溶解性（水）
５７ １４ｍｇ／ｍｌ
５４ １６ｍｇ／ｍｌ
結論：
結果は、溶解性が鏡像異性体により影響されないことを示す。
実施例Ｆ：化合物４鏡像異性体のリン酸緩衝液中での安定性
鏡像異性体化合物５７および化合物５４の安定性を、リン酸緩衝液中ｐＨ３、７および９（室温）にて分析した。
方法：
鏡像異性体の安定性を、室温にて１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液中ｐＨ３、７および９にて決定した。鏡像異性体の溶液２００μｇ／ｍＬを各ｐＨにて調製し、プロドラッグ濃度をＨＰＬＣにより正規の間隔にて７５時間モニターすることにより安定性を分析した。ＨＰＬＣ条件は、実施例Ｅに記載のものと同一にした。
結果：
鏡像異性体の安定性は同一であった；それらは、酸性（３）および中性（７）ｐＨにおける高い安定性を示した。プロドラッグ分解（加水分解）は、塩基性条件（ｐＨ９）下においてのみ起こった。
緩衝液中（ｐＨ３、７、９）の化合物５７および化合物５４の安定性
緩衝液（ｐＨ３） 緩衝液（ｐＨ７） 緩衝液（ｐＨ９）
化合物 安定性（室温） 安定性（室温） 安定性（室温）
５７ Ｔ９０％＞７５ｈ Ｔ９０％＞７５ｈ Ｔ１／２＝１１．６ｈ
５４ Ｔ９０％＞７５ｈ Ｔ９０％＞７５ｈ Ｔ１／２＝１１．６ｈ
結論：
結果は、安定性は鏡像異性体により影響されないことを示す。
実施例Ｇ：ラットおよびヒト血漿における安定性
鏡像異性体化合物５７および化合物５４の安定性をラットおよびヒト血漿中３７℃にて分析した。
方法：
鏡像異性体の安定性をヘパリン添加したラットおよびヒト血漿中３７℃にて２つのサンプルで決定した。ｔ＝０にて、ブランク血漿サンプル（〜１ｍＬ）を各鏡像異性体に別々にスパイク（spiked）し、最終薬物濃度５０μｇ／ｍＬとし、３７℃にてインキュベートした。予め選択した時点にて、血漿サンプルの１００μＬのアリコートを９８％ｖ／ｖアセトニトリルおよび２％ｖ／ｖ酢酸からなるクエンチカクテル１５０μＬと混合した。抽出物を撹拌し、遠心分離し、沈殿物を除去した。実施例Ｅに記載のＨＰＬＣ法により、薬物について上清を分析した。
結果：
化合物４鏡像異性体のヘパリン添加したラットまたはヒト血漿中３７℃における安定性は、同様であることを見出した。
化合物５７および化合物５４のラットおよびヒト血漿中における安定性
ヒト血漿 ラット血漿
化合物 安定性（３７℃） 安定性（３７℃）
５７ Ｔ１／２＝８．２ｈ Ｔ１／２＝４．９ｈ
５４ Ｔ１／２＝８．６ｈ Ｔ１／２＝３．９ｈ
結論：
これらの化合物の安定性は、急速にヒト血清において分解し、半減期が＜５分であると知られているビスＰＯＭ ＰＭＥＡ（J. Med. Chem. 39:4958-4965 (1996)）のものと良く匹敵する。
実施例Ｈ：ヒト肝臓ミクロソームにおけるインビトロ活性化
二種の鏡像異性体をヒト肝臓ミクロソームにおける活性化について比較した。
方法：
ヒト肝臓ミクロソームをIn Vitro Technologies（IVT1032）から購入した。比較実験を、２ｍｇ／ｍＬヒト肝臓ミクロソーム、１００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１０ｍＭグルタチオン、２５μＭまたは２５０μＭ化合物および２ｍＭ ＮＡＤＰＨにて０〜７．５分間エッペンドルフサーモミキサー５４３６中３７℃スピード６にて行った。反応を２分間のプレインキュベーション後にＮＡＤＰＨを加えることにより開始した。反応を６０％メタノールで０、２．５、５、７．５分にてクエンチした。Ｌ−グルタミル−Ｌ−（Ｓ−（３−オキソ−３−（３−クロロフェニル）プロピル）システイニルグリシン、プロドラッグ活性化の副生成物のグルタチオン付加物、３−Ｃｌ−フェニルビニルケトンを、反応物の１．５倍容積のメタノールで抽出した後、定量した。抽出したサンプルを１４，０００ｒｐｍにてエッペンドルフマイクロフュージ中、遠心分離し、上清をＨＰＬＣによりＬ−グルタミル−Ｌ−（Ｓ−（３−オキソ−３−（３−クロロフェニル）プロピル）システイニルグリシン内容量について分析した。スパイクされたＬ−グルタミル−Ｌ−（Ｓ−（３−オキソ−３−（３−クロロフェニル）プロピル）システイニルグリシン（lot 20000127）標準物質１〜３０μＭを、２ｍｇ／ｍｌミクロソーム中反応条件下にて製造した後、未知のサンプルと同様の方法によりクエンチし、処理した。ＨＰＬＣ分析について、充填した移動相緩衝液（緩衝液Ａ）は、２０ｍＭリン酸カリウム、ｐＨ６．２およびアセトニトリルの９：１比（ｖ／ｖ）からなる。抽出物１００μＬは、Beckman Ultrasphere ODSカラム（4.6 x 250 mM, part# 235329）上に注入した。カラムを６０％アセトニトリルまでの濃度勾配で溶出した。Ｌ−グルタミル−Ｌ−（Ｓ−（３−オキソ−３−（３−クロロフェニル）プロピル）システイニルグリシンの溶出（保持時間１０．４分）を２４５ｎｍにてモニターした。
結果：
ヒト肝臓ミクロソームにおける化合物４鏡像異性体の活性化：
活性化（２５μＭ） 活性化（２５μＭ）
化合物 （ｐｍｏｌ／ｍｇ／分） （ｐｍｏｌ／ｍｇ／分）
４（ラセミ） ３８ ２８３
５７ １６ １５９
５４ ６２ ３８３
結論：
生成物Ｌ−グルタミル−Ｌ−（Ｓ−（３−オキソ−３−（３−クロロフェニル）プロピル）システイニルグリシンの形成は、タンパク質濃度およびこれらの測定時間に関して直線的であった。Ｓ−鏡像異性体、化合物５４は、ヒト肝臓ミクロソーム中インビトロにて低濃度２５μＭおよび高濃度２５０μＭのプロドラッグの両方において最も容易に活性化される鏡像異性体であった。
実施例Ｉ：ラット肝臓器官における化合物５７および化合物５４によるＰＭＥＡｐｐ蓄積の分析
化合物５４（化合物４のＳ鏡像異性体）および化合物５７（化合物４のＲ鏡像異性体）の静脈内および経口投与後の肝臓のＰＭＥＡｐｐ蓄積の比較を行い、最も高い経口バイオアベイラビリティーを有する鏡像異性体を同定した。
方法：
３０ｍｇ／ｋｇ（ＰＭＥＡ当量において）のいずれかの鏡像異性体の通常の絶食されたラットへの静脈内または経口投与後、肝臓器官サンプルを投与後２０分、１、３、５、８、１２および２４時間にて凍結固定した。過塩素酸抽出および中性化後、肝臓器官サンプルをWhatman Partisphere SAXカラム（5μｍ, 4.6 x 125 mm）を用いたアニオン交換ＨＰＬＣ（Hewlett Packard 1050）により分析した。カラムを０．３Ｍリン酸アンモニウム緩衝液ｐＨ３．５から０．８Ｍリン酸アンモニウムｐＨ３．５までの濃度勾配で発展させた。
検出を２５４ｎｍにて行った。ＰＭＥＡｐｐの保持時間は１８．６分であった。
結果：
ラット肝臓器官におけるＰＭＥＡｐｐへの変換（３０ｍｇ／ｋｇＰＭＥＡ当量）
化合物 経路 ＡＵＣ ＰＭＥＡｐｐ０〜２４ｈ ＯＢＡＶ
５７ 静脈内 ４３５．１ｎｍｏｌ＊ｈ／ｇ
５７ 経口 ９３．０ｎｍｏｌ＊ｈ／ｇ ２１％
５４ 静脈内 ６８４．６ｎｍｏｌ＊ｈ／ｇ
５４ 経口 ２１３．２ｎｍｏｌ＊ｈ／ｇ ３１％
結論：
静脈内投与および経口投与後の肝臓器官において、化合物５４は、ＰＭＥＡｐｐ蓄積（ＡＵＣ）が化合物５７（図２ａおよび２ｂ）と比較してそれぞれ１．５７倍および２．２９倍高いことを示した。化合物５４は、化合物５７よりも肝臓器官ＰＭＥＡｐｐのＡＵＣに基づき、より高い経口バイオアベイラビリティーを有した。
実施例Ｊ：化合物５４塩形態の選択
適切な化合物５４の塩形態の選択は、プロドラッグカップリング後のシス−ジアステレオマーの選択的結晶化において助けるのに必要であった。
方法：
十種の化合物５４塩形態（Ｌ−酒石酸、コハク酸、マレイン酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｄ−リンゴ酸、クエン酸、塩酸、リン酸、硝酸、メタンスルホン酸）を評価し、プロドラッグカップリング手順に従い、シス：トランス混合物から選択的に結晶化する最善の塩形態を同定した。化合物５４のメシレートの溶解性および安定性を水中にて分析した。
結果：
化合物５６として指定されているメタンスルホン酸形態を、始め７５（シス）：２５（トランス）混合物からシス−ジアステレオマーを選択的に結晶化する最善の塩形態として同定した。メシレート塩による単一の結晶化は、コハク酸塩について８２（シス）：１８（トランス）または残りの塩形態については全く改善が見られないのと比較して、９３（シス）：７（トランス）混合物の比まで改善した。水中にて、化合物５６は、高い溶解性（＞３００ｍｇ／ｍｌ）を有し、投与溶液３０および３００ｍｇ／ｍｌは、室温にて５日にわたり安定（分解＜１０％）であることを見出した。
結論：
メタンスルホン酸塩が、シス−ジアステレオマーを選択的に結晶化する最善の塩であった。
実施例Ｋ：種々の種からの肝臓ミクロソームにおける化合物５６速度論的パラメーターの決定
化合物５６、ＰＭＥＡのプロドラッグの活性化の速度論的パラメーターを、オスおよびメスマウス（ＣＤ−１）、ラット（スプラーグ・ドーリー）、イヌ（ビーグル）、サル（カニクイザル）、ウッドチャックおよびヒトプールからの肝臓ミクロソームを比較した。
方法：
化合物５６のＰ４５０に触媒されたＰＭＥＡへの活性化を、実施例Ｈに記載のグルタチオン副生成物捕捉ＨＰＬＣアッセイによりモニターした。ＫｍおよびＶｍａｘの速度論的パラメーターをSigmaPlot Enzyme Kinetics Module v.1.1を用いて計算した。固有のクリアランス（Ｖｍａｘ／Ｋｍ）、触媒的効率の測定もまた評価した。タンパク質濃度を商業的に入手可能なBradford法により決定した。
結果：
速度論的実験は、マウス、ラット、イヌ、サル、ヒトおよびウッドチャックを含む種々の種における化合物５６の活性化を示す。例えば、（Ｖｍａｘ／Ｋｍ）［μＬ／分／ｍｇ］値は、サルにおいて７４．８＋／−７．７（オス）および７７．５＋／−１３．０（メス）；ヒトにおいて１０．８＋／−１．２（オス）および２３．２＋／−１．０（メス）；およびウッドチャックにおいて３１．５＋／−０．８（オス）であった。
結論：
ミクロソーム製造におけるプロドラッグ化合物５６のその親化合物ＰＭＥＡへの活性化の速度論的パラメーターは、種により変化する；それはサルにおいて最も高い。プロドラッグのサルミクロソームによる高い活性化は、毒物学的実験におけるこの種の使用を正当化する。ウッドチャックにおける速度論的パラメーターは、ヒトと類似し、臨床前効率実験のためのウッドチャックの潜在的使用を支持した。
実施例Ｌ：通常のオスラットにおける化合物５６の経口バイオアベイラビリティーの分析
化合物４のシス体のＳ鏡像異性体の高水溶性メシレート塩、すなわち化合物５６の経口バイオアベイラビリティー（ＯＢＡＶ）を、通常のオスラットにおいて評価した。
方法：
化合物５６を静脈内および経口投与のために水に可溶化した。３０ｍｇ／ｋｇ（ＰＭＥＡ当量において）の化合物５６の４ラットの群への経口および静脈内投与後のＰＭＥＡｐｐｊの肝臓器官濃度−時間プロファイルのＡＵＣ値の比を計算することにより、ＯＢＡＶを分析した。肝臓器官サンプルを投与後２０分および１、３、５、８、１２および２４時間にて取った。ＰＭＥＡｐｐの肝臓器官濃度を実施例Ｉに記載のように決定した。
結果：
ＰＭＥＡｐｐの肝臓器官濃度−時間プロファイルを図３に示す。ＯＢＡＶを上記定義あたり４２％と見積もった。この値は、実施例Ｉにおける遊離塩基３１％について決定されたＯＢＡＶより最小当量における。
結論：
化合物５６は高いバイオアベイラビリティーを示した。
実施例Ｍ：化合物５６およびＰＭＥＡによるインキュベーション後の肝細胞におけるＰＭＥＡｐｐ蓄積
化合物５６およびＰＭＥＡ、親抗ウィルス薬を、既知のＨＢＶポリメラーゼ阻害物質、ＰＭＥＡｐｐを新たに単離したラット肝細胞にて生成するそれらの能力について評価した。
方法：
肝細胞を、Groen（Groen, A.K.ら, Eur. J. Biochem 122:87-93 (1982)）により改変されたBerryとFriendの手順（Berry, M.N. Friend, D.S., J. Cell Biol. 43:506-520 (1969)）により、食物を与えたスプラーグ・ドーリーラット２５０〜３００ｇから調製した。肝細胞２０ｍｇ／ｍｌ湿重量（＞８５％トリパンブルーバイアビリティー）を、２０ｍＭグルコースおよびＢＳＡ１ｍｇ／ｍｌを含むクレブス二炭酸塩緩衝液２ｍｌ中にて４時間ＰＭＥＡプロドラッグ２５μＭ（プロドラッグのメタノール中２５ｍＭストック溶液より）の存在下インキュベートした。インキュベーション中の適切な時点（０、１、２、４時間）にて、細胞懸濁液のアリコート１６００〜μｌを取り、遠心分離し、肝細胞をペレット状にした。肝細胞ペレットを氷冷アセトニトリル３００μｌ中にてすぐに超音波を当てた後、水２００μｌを加えた。肝細胞抽出物を２０分間エッペンドルフ遠心分離機中４℃にて遠心分離し、抽出物からの上清を新しいチューブに移した。肝細胞抽出上清を濃縮し、減圧乾燥した後、水２００μｌ中にて再懸濁した。ＰＭＥＡｐｐ濃度を、肝細胞抽出物中にスパイクされた真正ＰＭＥＡｐｐ標準物質に基づくＬＣ−ＭＳ／ＭＳ（負イオンモード）により定量化した。サンプル１０μｌをPhenomenex Luna 5μ C8 カラム（50x2 mm）上２０ｍＭ Ｎ−Ｎ−ジメチルヘキシルアミン、１０ｍＭプロピオン酸中にて充填し、濃度勾配２０〜６４％のメタノールの濃度勾配で５．５分にわたり溶出した。空気圧補助エレクトロスプレーインターフェースにより適合したＡＰＩ２０００三連四重極質量分析計を用い、マルチプル・リアクション・モニタリング（Multiple Reaction Monitoring, MRM）法を用いて負イオン（ＰＯ３ −）を定量化した。
結果：
ＰＭＥＡｐｐレベルについてのＡＵＣ０〜４時間（曲線下領域）値は、ＰＭＥＡによるインキュベーション後の８４ｎｍｏｌｅｓ＊ｈ／ｇに対し、化合物５６によるインキュベーション後７５６ｎｍｏｌｅｓ＊ｈ／ｇであった（図４）。
結論：
これらの結果は、化合物５６が、単離されたラット肝細胞においてＰＭＥＡｐｐをＰＭＥＡよりも効率的に生成することを示唆する。
実施例Ｎ：化合物４およびビスＰＯＭ ＰＭＥＡの経口投与後のＰＭＥＡの組織分布
化合物４［アデニン−２，８−３Ｈ］の肝臓特異性を、腎臓および小腸、すなわちＰＭＥＡ毒性が報告されている器官中のビスＰＯＭ ＰＭＥＡ［アデニン−８−３Ｈ］に関して比較した。
方法：
化合物４［アデニン−２，８−３Ｈ］またはビスＰＯＭ ＰＭＥＡ［アデニン−８−３Ｈ］を、３０ｍｇ／ｋｇＰＭＥＡ当量にて絶食したラットに強制経口投与した。総トリチウム数を、２４時間にわたる種々の時点にて得られた肝臓器官、腎臓、血漿、尿、赤血球、小腸、ならびに小腸内容物および便の可溶化したサンプルにて分析した。肝臓器官特異性を、腎臓、小腸、血漿および赤血球に対する肝臓器官における総トリチウムの時間的プロファイルの比較により分析した。肝臓器官、腎臓、小腸、便および尿の過塩素酸抽出物中の代謝体プロファイルを、ＨＰＬＣにより分析した。
結果：
化合物４は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較して肝臓器官におけるＰＭＥＡ当量の３．１倍高いＡＵＣを生成し、腎臓（３．８倍）および小腸（２５倍）におけるＰＭＥＡ当量の暴露を軽減した（図５ａ、５ｂおよび５ｃ）。化合物４およびビスＰＯＭ ＰＭＥＡは、試験した組織中において類似の割合のＰＭＥＡ：ＰＭＥＡモノホスフェート：ＰＭＥＡジホスフェートを生成した；しかし、無傷のプロドラッグはこれらの組織中にて検出されなかった。化合物４投与量の大半（〜６０％）は、無傷のプロドラッグとして２４時間後便中にて見られた。一方、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡは、腸管中にて容易に代謝された；投与量の４３％は、ＰＭＥＡの形態にて便中に排泄された。
化合物４およびビスＰＯＭ ＰＭＥＡの肝臓器官標的インデックス
Figure 2006511490
 結論：
これらの結果は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較した化合物４についての肝臓器官標的インデックスにおける有意の改善（上表参照）を示す。従って化合物４は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡよりも安全で効果的なプロファイルを有するようである。
実施例Ｏ：化合物４およびビスＰＯＭ ＰＭＥＡの経口投与後のＰＭＥＡの血漿および尿分布
類似の実験において、ＰＭＥＡレベルを血漿および尿中にて、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡに対する化合物４の投与後、定量化した。
方法：
化合物４またはビスＰＯＭ ＰＭＥＡを、３０ｍｇ／ｋｇＰＭＥＡ当量にて、絶食したラットに強制経口投与した。ＰＭＥＡレベル（０〜１２時間）を、クロロアセトアルデヒド誘導体化後、蛍光ＨＰＬＣにより血漿中にて定量化した。尿中のＰＭＥＡレベルを処置後４８時間に定量化した。
血漿薬物レベル：ＰＭＥＡを文献記載の手順（Shaw JP, Louie MS, Krishnamurthy VV, Arimilli MN, Jones RJ, Bidgood AM, Lee WA, & Cundy KC, Drug Metabolism and Disposition, 25:362-366 (1997)）の改変により血漿中にて決定した。血漿１００μＬサンプルを２倍容積の０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルで抽出した。遠心分離し、沈殿物を取り除いた後、上清を濃縮し、乾燥した。乾燥した血漿を、０．３４％クロロアセトアルデヒド／１００ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５からなる誘導体化カクテル２００μＬで再構成し、９５℃にて４０分間インキュベートした。サンプルを濃縮し、乾燥し、移動相でＨＰＬＣ分析のために再構成した。誘導体化されたＰＭＥＡを０〜３０％アセトニトリル／２０ｍＭリン酸カリウムｐＨ６．２の２０分の濃度勾配で展開させたBeckman Ultrasphere ODS 4.6 x 150 mm（5μｍ）カラムからなるＨＰＬＣ系（Hewlett Packard 1090）により分析した。蛍光を励起および発光波長のそれぞれ２４０および４２０ｎｍにてモニターした。カラム温度は４０℃であり、流速は１．５ｍＬ／分であった。誘導体化したＰＭＥＡを検出し、血漿中にて製造した真正標準物質と比較して定量化し、約６分にて溶出した。ＰＭＥＡの定量化の限界は０．２５μｇ／ｍＬであった。
尿中排泄実験：ＰＭＥＡの尿中のパーセント排出量を先に記載の手順（Russell JW, Marrero D, Whiterock VJ, & Klunk LJ, J Chromatog, 572:321-326 (1991)）の改変により分析した。尿サンプルのアリコート（０．２５〜０．５ｍＬ）およびスパイクされた標準物質を等容積の５０％クロロアセトアルデヒド／１００ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４．５の１７％（ｖ／ｖ）で５０℃にて４時間インキュベートした。遠心分離後、上清を先のセクションに記載のＨＰＬＣ法により分析した。
結果：
化合物４投与後の血漿中のＰＭＥＡのＡＵＣ０〜１２時間は、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡ投与後よりも６倍低かった（２１．３ｎｍｏｌ＊ｈ／ｍＬに対して３．５）。化合物４投与後の血漿中のＰＭＥＡのＣｍａｘは、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡ投与後よりも１３倍低かった（４．１ｎｍｏｌｅｓ／ｍＬに対して０．３）。軽減されたＰＭＥＡの腎臓レベルと一致して、化合物４投与後の尿中レベルは、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡ投与後よりも５倍低かった（２０．６％投与量に対して４．１％投与量）。
結論：
従って、化合物４による軽減された全身ＰＭＥＡ暴露は、ＰＭＥＡの尿レベルにより分析されたように、腎臓における軽減されたＰＭＥＡ暴露をもたらし、それゆえ軽減されたＰＭＥＡ関連毒性をもたらすと期待される。
実施例Ｐ：シス（化合物５６）およびトランス（９−｛２−［２，４−トランス−（Ｓ）−（＋）−４−（３−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニン）プロドラッグのヒト肝臓ミクロソームにおける活性化についての比較
シス（化合物５６, lot #20010093）およびトランス（９−｛２−［２，４−トランス−（Ｓ）−（＋）−４−（３−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニン（lot 20010195）ＰＭＥＡプロドラッグの活性化速度を、いずれのプロドラッグジアステレオマーがヒト肝臓ミクロソームにおいて最も効率的に活性化されるかを確立するために比較した。
方法：
ヒト肝臓ミクロソーム（混合したプール）をIn Vitro Technologies（Lot RQX）から購入した。比較実験を２ｍｇ／ｍＬヒト肝臓ミクロソーム、１００ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１０ｍＭグルタチオン、１００μＭプロドラッグおよび２ｍＭ ＮＡＤＰＨ（反応の開始に用いた）にて５分間エッペンドルフサーモミキサー５４３６中３７℃スピード６にて行った。反応を６０％メタノールでクエンチした。Ｌ−グルタミル−Ｌ−（Ｓ−（３−オキソ−３−（３−クロロフェニル）プロピル）システイニルグリシン、副生成物のグルタチオン付加物、３−Ｃｌ−フェニルビニルケトンを、実施例８に概略されている手順（ヒト肝臓ミクロソームにおけるインビトロ活性化）により定量化した。
結果：
シス（化合物５６）およびトランス（９−｛２−［２，４−トランス−（Ｓ）−（＋）−４−（３−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニン）プロドラッグコンフィギュレーションについての立体化学純度および活性化を以下の表に示す。結果は、シス（化合物５６）プロドラッグ体がトランス体よりも効率的にヒト肝臓ミクロソームにおいて活性化されることを示す。トランス体（９−｛２−［２，４−トランス−（Ｓ）−（＋）−４−（３−クロロフェニル）−２−オキソ−１，３，２−ジオキサホスホリナン−２−イル］メトキシエチル｝アデニン）の活性化は、以下のように測定可能な検出限界であった（．０５ｎｍｏｌ／ｍｇ／分）。
化合物 立体化学純度 活性化速度（ｎｍｏｌ／ｍｇ／分）
シス 98.6％シス／1.4％トランス 0.45±0.01
トランス 1.6％シス／98.4％トランス ≦0.05
結論：
従って化合物５６を、ヒト肝臓ミクロソームにおけるそのより高い生物活性化速度に基づき、優れたプロドラッグジアステレオマーとして選択した。
実施例Ｑ：単離したラット肝細胞における無毒のプロドラッグ副生成物
単離したラット肝細胞において実験を行い、化合物４およびその代謝体の、通常およびＣＹＰ３Ａ４誘起の主要ラット肝細胞における肝毒性パラメーターへの効果を、アセトアミノフェン、すなわち肝臓におけるそのミクロソーム代謝の結果として急性損傷を引き起こすことが知られている薬物と比較して評価した。
方法：
新たに単離した肝細胞を、通常のラットまたはデキサメタゾンで前処置したラットから製造（実施例１３記載の方法による）した。オススプラーグ・ドーリーラットをデキサメタゾンで誘発し、ＣＹＰ３Ａ４酵素内容物を増大し、その結果化合物４代謝を最大化した。通常の食物を与えた重量２８０〜３１０ｇのスプラーグ・ドーリーラットに、デキサメタゾンを５０ｍｇ／ｋｇにて１日１回４日間、腹腔内投与した。デキサメタゾンをSigma（lot#119H1328）から購入し、トウモロコシ油（Sigma lot#107H1649）中の懸濁剤として５０ｍｇ／ｍＬにて製剤化した。５日目に、ラットを肝細胞単離のために使用した。新たに単離した肝細胞を化合物４（２５０μＭおよび１ｍＭ）またはアセトアミノフェン（１〜１０ｍＭ）で懸濁アッセイ中６時間まで処理した。グルタチオンレベルへの効果をＤＴＮＢ（エルマン試薬）法により分析し、バイアビリティーをトリパンブルー排除アッセイおよび肝酵素漏出量アッセイ（ＬＤＨ、ＡＳＴ）により決定した。乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）の上清への漏出量を、Sigma（#500および#505）から購入した比色分析アッセイキットを用いて測定した。両方のアッセイは、試験チューブアッセイのためのプロトコルインサート（protocol insert）からマイクロタイタープレートアッセイへ適応させた。
結果：
３ｍＭまたは１０ｍＭアセトアミノフェンで処理した後、グルタチオン貯蔵を枯渇し、バイアビリティーをトリパンブルー排除基準により約５％まで軽減させ、酵素漏出量を通常およびデキサメタゾン誘起ラットの両方から単離した肝細胞において２倍増大させた。通常の肝細胞において、化合物４による処置（１ｍＭ）は、グルタチオンレベルにおける有意の減少およびバイアビリティーまたは肝酵素漏出量に関する有意の変化をまったく引き起こさなかった。デキサメタゾン前処置ラットから単離した肝細胞において、化合物４による処置（２５０μＭおよび１ｍＭ）は、２時間のインキュベーション後、有意のグルタチオン減少（２５０μＭ＝５０％減少、１ｍＭ化合物４＞９５％減少）を引き起こしたが、グルタチオン枯渇後のバイアビリティーまたは肝酵素漏出量に関して有意の変化は観察されなかった。
結論：
これらの実験は、極端に高い化合物４の投与後、化合物４副生成物は、ＣＹＰ３Ａ４誘起ラット肝細胞において細胞内グルタチオン内容物をインビトロにて軽減することができる。しかしアセトアミノフェンと違い、化合物４副生成物／代謝体は、グルタチオン枯渇肝細胞に直接的に細胞毒性ではない。
実施例Ｒ：化合物４のラットにおける薬物動態学
化合物４の薬物動態学プロファイル、ＰＭＥＡの環状プロドラッグをラットに経口投与後のビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較した。
方法：
ラット（時点あたりｎ＝４）に、化合物４のプロドラッグおよびビスＰＯＭ ＰＭＥＡ３０ｍｇ／ｋｇ（ＰＭＥＡ当量において）を強制経口投与した。無傷のプロドラッグおよび代謝体９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン（ＰＭＥＡ）およびそれぞれのモノ酸を血漿中にて０（投与前）、投与後０．３３、１、３、５、８および１２時間にて蛍光検出を用いたＨＰＬＣにより測定した。薬物動態学的パラメーターを濃度−時間プロファイルの包括的な分析に基づき計算した。
結果：
化合物４（３０ｍｇ／ｋｇ）（ＰＭＥＡ当量において）のラットへの経口投与後、無傷のプロドラッグ、化合物４およびその崩壊生成物９−｛２−［１−｛（３−クロロフェニル）−１−プロピル−３−ヒドロキシ｝ホスホノメトキシ］エチル｝アデニンおよび９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニン（ＰＭＥＡ）は血漿中にて検出可能であった。化合物４、９−｛２−［１−｛（３−クロロフェニル）−１−プロピル−３−ヒドロキシ｝ホスホノメトキシ］エチル｝アデニンおよび９−［２−（ホスホノメトキシ）エチル］アデニンの血漿半減期は、それぞれ約３．２、２．１および５．５時間であった。ＰＭＥＡのＣｍａｘは、５時間のＴｍａｘにて０．１１μｇ／ｍＬであった。１２時間までのＡＵＣは、０．９４ｍｇ＊ｈｒ／ｍＬであった。ビスＰＯＭ ＰＭＥＡ３０ｍｇ／ｋｇ（ＰＭＥＡ当量において）のラットへの経口投与後、ＰＭＥＡのみが６．１時間の半減期で血漿中にて検出可能であった。ＰＭＥＡのＣｍａｘは、２０分のＴｍａｘにて１．１１μｇ／ｍＬであった。１２時間までのＡＵＣは、５．８３ｍｇ＊ｈｒ／ｍＬであった。
結論：
ビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較して、血漿ＡＵＣおよびＣｍａｘにより測定されるＰＭＥＡの全身暴露は、化合物４プロドラッグとして送達されたときのラットにおいてかなり減少した。無傷の化合物４が血漿中にて観察されたが、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡは、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡが急速に加水分解され、インビボにて検出されなかったと主張する文献の報告（Nobleら, Drugs 58:3 (1999)）と一致し、検出されなかった。これらの結果は、化合物４がビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較してより長く循環するが、全身ＰＭＥＡ暴露を最小化したことにより好ましい薬物動態学的プロファイルを有したことを示す。
実施例Ｓ：イヌにおける化合物４の薬物動態学
化合物４の薬物動態学（ＰＫ）および経口バイオアベイラビリティー（ＯＢＡＶ）をビーグル犬において決定し、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡについての文献報告と比較した。
方法：
ＰＥＧ−４００におけるオスビーグル犬（ｎ＝４）へのそれぞれ８および４０ｍｇ／ｋｇ（プロドラッグ当量投与量）の化合物４の静脈内ボーラスおよび経口投与後、血液サンプルを次の時間にて集めた：各投与後５、１５、３０、４５分および１、２、４、６、８、１２および２４時間。さらに、次の間隔にわたり尿を集めた：０〜１２、１２〜２４、２４〜４８および４８〜７２時間。無傷の化合物４およびＰＭＥＡを血漿および尿サンプル中にて、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ法を用いて測定した。ＰＫパラメーターを非コンパートメント（non-compartmental）分析により決定した。健康障害および死亡のサインについて動物を観察した。
結果：
化合物４は、ビーグル犬により健康障害または死亡のサインをまったく示さずによく許容された。化合物４の静脈内投与後、無傷の化合物４の血漿濃度は、０．８時間の平均最終排除半減期ｔ１／２で単指数関数的に（mono-exponentially）下降した。化合物４を１．７７Ｌ／ｈｒ／ｋｇにて血漿から除去し、１．７０Ｌ／ｋｇの分布容積(Ｖｓｓ)で広く分配した。平均居留時間（ＭＲＴｉｖ）を１．０時間に見積もった。静脈投与量の約３０％は無傷の化合物４として尿中に排泄されたが、２％だけはＰＭＥＡとして排泄された。経口投与後、化合物４は０．８時間（Ｔｍａｘ）後に達成された平均ピーク血漿濃度（Ｃｍａｘ）の１０．２μｇ／ｍＬ（〜２４μＭ）で急速に吸収された。経口投与後の最終ｔ１／２は１．０時間であった。経口投与の４０％は、無傷のプロドラッグとして尿中に排泄され、１．７％はＰＭＥＡとして排泄された。化合物４の経口投与後のＰＭＥＡの平均血漿Ｃｍａｘは、１．４時間のＴｍａｘにおける０．２４μｇ／ｍＬ（〜０．８８μＭ）であった。プロドラッグの経口投与後のＰＭＥＡの半減期は５．４時間であった。化合物４のＯＢＡＶを、標準化された経口−静脈内投与量のＡＵＣ比および化合物４の尿中排泄量に基づき、それぞれ１１２％および８２％となるように見積もった。
結論：
化合物４は、急速に吸収され（Ｔｍａｘ＝０．８１時間）、ビーグル犬にて非常に経口的にバイオアベイラブル（％Ｆ＝〜１００％）であった。イヌにおけるビスＰＯＭ ＰＭＥＡについての文献報告（Cundyら, J. Pharm Sci. 86:12 (1997)）と比較して、標準化された投与量の血漿ＡＵＣにより測定したＰＭＥＡの全身暴露は、化合物４プロドラッグとして送達されたとき、１８．８倍減少した（化合物についての０．５８に対し、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡについてＰＭＥＡ ＡＵＣ＝１０．９）。無傷の化合物４は血漿中にて観察されたが、ビスＰＯＭ ＰＭＥＡは報告的に検出されなかった。これらの結果は、化合物４がビスＰＯＭ ＰＭＥＡと比較して、無傷のプロドラッグとしてより長く循環するが、全身ＰＭＥＡ暴露を最小化することにより、好ましい薬物動態学的プロファイルを有することを示す。
ヒト肝臓ミクロソームにおける化合物４活性化のケトコナゾール依存阻害を示す。 静脈投与後の肝臓ＰＭＥＡｐｐレベルを示す。 経口投与後の肝臓ＰＭＥＡｐｐレベルを示す。 ＰＭＥＡｐｐの肝臓濃度−時間プロファイルの使用を通した化合物５６の経口バイオアベイラビリティーを示す。 化合物５６およびＰＭＥＡによるラット肝細胞におけるＰＭＥＡｐｐ蓄積を示す。 化合物４およびビスＰＯＭ ＰＭＥＡの肝臓組織分布を示す。 化合物４およびビスＰＯＭ ＰＭＥＡの腎臓組織分布を示す。 化合物４およびビスＰＯＭ ＰＭＥＡの小腸組織分布を示す。

Claims (46)

  1. 式Ｉ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
    Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
    Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
    で示される化合物、およびその製薬的に許容される塩。
  2. ＭＰＯ３Ｈ２が、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンおよび（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
  3. Ｖが、フェニル、３−ピリジルおよび４−ピリジルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＯＣＨ３およびＣＦ３からなる群から選択される１〜２つの置換基で置換されていることもある、請求項１記載の化合物。
  4. Ｖが、４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルからなる群から選択される、請求項２記載の化合物。
  5. 式ＩＩ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
    Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
    Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
    で示される化合物、およびその製薬的に許容される塩。
  6. ＭＰＯ３Ｈ２が、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンおよび（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択される、請求項５記載の化合物。
  7. Ｖが、フェニル、３−ピリジルおよび４−ピリジルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＯＣＨ３およびＣＦ３からなる群から選択される１〜２つの置換基で置換されていることもある、請求項５記載の化合物。
  8. Ｖが、４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルからなる群から選択される、請求項６記載の化合物。
  9. 式ＩＩＩ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニル−メトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択される、ホスホン酸であり、
    Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
    Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
    で示される化合物、およびその製薬的に許容される塩。
  10. ＭＰＯ３Ｈ２が、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンおよび（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択される、請求項９記載の化合物。
  11. Ｖが、フェニル、３−ピリジルおよび４−ピリジルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｂｒ、Ｃｌ、ＣＨ３、ＯＣＨ３およびＣＦ３からなる群から選択される１〜２つの置換基で置換されていることもある、請求項９記載の化合物。
  12. Ｖが、４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルからなる群から選択される、請求項１０記載の化合物。
  13. 式ＩＶ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンである］
    で示される、請求項１２記載の化合物、およびその製薬的に許容される塩。
  14. 酢酸、臭化水素酸、塩酸、クエン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、硝酸、リン酸、コハク酸、硫酸および酒石酸からなる群から選択される酸と形成される、製薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１３記載の化合物。
  15. メタンスルホン酸およびコハク酸からなる群から選択される酸と形成される、製薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項１４記載の化合物。
  16. 上記塩がメタンスルホン酸と形成される、請求項１５記載の化合物。
  17. 式Ｉ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
    Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
    Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
    で示される化合物またはその製薬的に許容される塩を投与することにより、動物の肝臓疾患を処置する方法。
  18. 式ＩＩＩ：
    Figure 2006511490
     で示される化合物またはその製薬的に許容される塩を動物に投与する、請求項１７記載の方法。
  19. 上記肝臓疾患が、ウィルス感染および肝臓癌からなる群から選択される、請求項１７記載の方法。
  20. 上記肝臓疾患がＢ型肝炎である、請求項１９記載の方法。
  21. ＭＰＯ３Ｈ２が９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンであり、Ｖが４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルからなる群から選択される、請求項２０記載の方法。
  22. 上記肝臓疾患がＣ型肝炎である、請求項１９記載の方法。
  23. ＭＰＯ３Ｈ２が９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンであり、Ｖが４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルからなる群から選択される、請求項２２記載の方法。
  24. 上記肝臓疾患が肝細胞癌である、請求項１９記載の方法。
  25. ＭＰＯ３Ｈ２が９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンであり、Ｖが４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルからなる群から選択される、請求項２４記載の方法。
  26. 上記肝臓疾患が大腸癌である、請求項１８記載の方法。
  27. ＭＰＯ３Ｈ２が９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンであり、Ｖが４−ピリジル、２−ブロモフェニルおよび３−クロロフェニルからなる群から選択される、請求項２６記載の方法。
  28. 式Ｉ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニル−メトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
    Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
    Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
    で示される化合物またはその製薬的に許容される塩を投与することにより、薬物の治療指数を増大する方法。
  29. 上記化合物が式ＩＩＩ：
    Figure 2006511490
     で示される化合物またはその製薬的に許容される塩である、請求項２８記載の方法。
  30. 式Ｉ：
    Figure 2006511490
     で示される化合物またはその製薬的に許容される塩、および別の抗ウィルス薬を投与することにより、肝臓のウィルス感染を処置する方法。
  31. 上記抗ウィルス薬が、ラミブジン、エンテカビル、コヴィラシル、ＤＡＰＤ、クレブジン、ＡＭ３６５、Ｌ−ｄＴ、Ｌ−ｄＣ、ＡＣＨ１２６，４４３、ＭＣＣ４７８、ロブカビル、ホスカルネット、ＰＰＡ、インターフェロンアルファおよびペグ化インターフェロンアルファからなる群から選択される、請求項３０記載の方法。
  32. 上記ウィルス感染がＢ型肝炎である、請求項３０記載の方法。
  33. 式ＩＶ：
    Figure 2006511490
     で示される化合物またはその製薬的に許容される塩、およびラミブジン、エンテカビル、コヴィラシル、ＤＡＰＤ、クレブジン、ＡＭ３６５、Ｌ−ｄＴ、Ｌ−ｄＣ、ＡＣＨ１２６，４４３、ＭＣＣ４７８、ロブカビル、ホスカルネット、ＰＰＡ、インターフェロンアルファおよびペグ化インターフェロンアルファからなる群から選択される別の抗ウィルス薬を投与することにより、肝臓のウィルス感染を処置する方法。
  34. 上記ウィルス感染がＢ型肝炎であり、抗ウィルス薬がラミブジン、エンテカビル、コヴィラシル、ＤＡＰＤ、クレブジン、ＡＭ３６５、Ｌ−ｄＴ、Ｌ−ｄＣおよびＡＣＨ１２６，４４３ならびにそれらの製薬的に許容される塩からなる群から選択される、請求項３３記載の方法。
  35. 式ＩＶで示される化合物が：
    Figure 2006511490
     であり、上記抗ウィルス薬がラミブジンまたはその製薬的に許容される塩である、請求項３４記載の方法。
  36. 抗ウィルス薬がインターフェロンアルファおよびペグ化インターフェロンアルファからなる群から選択される、請求項３３記載の方法。
  37. 式Ｉ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
    Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
    Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
    で示される化合物またはその製薬的に許容される塩の製薬的に有効な量、製薬的に有効な量の抗ウィルス薬またはその塩、および製薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
  38. 上記抗ウィルス薬および式ＩＶで示される化合物が別々に投与される、請求項３３記載の方法。
  39. 上記抗ウィルス薬および式ＩＶで示される化合物が同時に投与される、請求項３３記載の方法。
  40. 式Ｉ：
    Figure 2006511490
     ［式中、
    ＭおよびＶは、互いにシスにあり、
    ＭＰＯ３Ｈ２は、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニン、（Ｒ）−９−（２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）グアニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチルオキシ）アデニン、９−（２−ホスホニルメトキシエチル）−２，６−ジアミノプリン、（Ｓ）−１−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）シトシン、（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニン、９−（３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル）グアニンおよび（Ｓ）−９−（３−フルオロ−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンからなる群から選択されるホスホン酸であり、
    Ｖは、フェニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−フラニル、３−フラニル、２−チエニルおよび３−チエニルからなる群から選択され、これらはすべてＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ＣＦ３およびＯＲ６からなる群から選択される１〜３つの置換基で置換されていることもあり、
    Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルおよびＣＦ３からなる群から選択される］
    で示される化合物またはその製薬的に許容される塩の製薬的に有効な量、製薬的に有効な量の腫瘍退縮剤またはその塩、および製薬的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
  41. 上記式Ｉの化合物が式ＩＶ：
    Figure 2006511490
     で示される化合物またはその製薬的に許容される塩である、請求項４０記載の医薬組成物。
  42. 式ＩＶ：
    Figure 2006511490
     で示される化合物またはその製薬的に許容される塩、および別の腫瘍退縮剤を投与することにより、肝臓癌を処置する方法。
  43. 上記腫瘍退縮剤が、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ミリプラチン、テモゾロマイド、チオテパ、メルファラン、イホスファミド、シクロホスファミド、クロラムブシル、ドキソルビシン、デュアノルビシン、エピルビシン、イダルビシン、プリカマイシン、バルルビシン、ダクチノマイシン、ゲムシタビン、フロキシウリジン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、チオグアニン、メトトレキセート、マイトマイシン、エトポシド、タキソール、ドセタキセル、イリノテカン、トポテカンおよびルロテカンからなる群から選択される、請求項４２記載の方法。
  44. 上記癌が肝細胞癌である、請求項４２記載の方法。
  45. 上記腫瘍退縮剤が、ドキソルビシン、ゲムシタビン、イリノテカンおよびシスプラチンからなる群から選択される、請求項４４記載の方法。
  46. 式ＩＶで示される化合物が：
    Figure 2006511490
     およびその製薬的に許容される塩である、請求項４２記載の方法。
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