JP2005537225A - 子宮の病態治療のためのＦＰレセプターアンタゴニスト又はＰＧＦ２αアンタゴニスト - Google Patents

Abstract

女性個体の子宮の病的状態を治療又は防止する方法であって、ＦＰレセプターに対する効果を有する、ＰＧＦ_２αを阻害する少なくとも１種の作用物質を前記個体に投与することを含む方法。上記病的状態とは一般的に子宮癌、類線維症又は子宮内膜炎である。

Description

本発明は、治療法、特に子宮の病的状態を治療する方法に関するものである。

子宮の病的状態は、女性、特に西側世界の女性たちにとって深刻な健康問題である。このような病的状態は子宮癌及び、子宮内膜又は子宮筋層の病的状態、例えば子宮内膜炎（子宮内膜）及び類線維症（子宮筋層）などを含む。

ＦＰプロスタグランジンレセプターは種々の組織、例えばウシ黄体（シャリフ（Sharif）ら、１９９８、J.Pharmacol.Exp.Ther.２８６巻：１０９４−１１０２ページ）；ヒト子宮（シニア（Senior）ら、１９９２、Br.J.Pharmacol.１０８巻：５０１−５０６ページ）；ウサギ顎静脈（チェン（Chen）ら、１９９５、Br.J.Pharmacol.１１６巻：３０３５−３０４１ページ）；種々のヒト眼組織（デイビス（Davis）＆シャリフ（Sharif）１９９９、J.Ocular Pharmacol.Ther.１５巻：３２３−３３６ページ）；及びマウス スイス３Ｔ３線維芽細胞（グリフィン（Griffin）ら１９９７、J.Pharmacol.Exp.Ther.２８１巻：８４５−８５４ページ）；及びラット血管平滑筋細胞（Ａ７ｒ５）（グリフィンら１９９８、J.Pharmacol.Exp.Ther.２８６巻：４１１−４１８ページ）を含む種々の組織で研究されてきた。

幾つかのプロスタグランジンレセプターにおける強力な選択的合成アゴニスト（作動物質）がインビトロ及びインビボモデルの両方で特徴づけられた（コールマン（Coleman）ら、１９９４、Pharmacol.Rev.４６巻：２０５−２２９ページ）。例えばフルプロステノール又はそのエナンチオマー（例えばＡＬ−５８４８）（シャリフら、１９９９、J.Pharm.Pharmacol.５１巻：６８５−６９４ページ）及びクロプロステノール（コールマンら１９９４；シャリフら１９９８）は強力かつ選択的ＦＰレセプターアゴニストである。大部分の天然プロスタグランジンはこのレセプターファミリー中、それらの好ましいレセプターに対してむしろ制限された選択性を示すので、少数の報告された選択的プロスタグランジンレセプターアゴニスト類は、それらの個々のレセプターと関連するそれぞれの機能的応答を識別するための非常に貴重なツールであった。しかし、特定のレセプター依存性プロスタグランジン刺激−機能性反応の最終的確認には強力かつ選択的アンタゴニストが必要である（ケナキン１９９６、Pharm.Rev.４８巻４１３−４６３ページ）。

眼内圧上昇を治療するための強力な非常に有効な薬剤としての選択的ＦＰレセプターアゴニストが最近同定され、これが商業的に展開された（ビト（Bito）１９９７、Surv.Ophthalmol.４１巻（付録２２）：Ｓ１−Ｓ１４；ヘルベルグ（Helberg）ら、１９９８、Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.３９巻（付録）：１９６１）ことにより、ＦＰレセプター関連薬理作用に関する我々の知識はかなり深まった。しかしＦＰレセプターの機能は、一部には、このレセプターの組織分布に顕著な種間差があるために、完全には理解されていない（オクリンド（Ocklind）ら１９９６、Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.３７巻：７１６−７２６ページ；デイビス＆シャリフ１９９９；シャリフら１９９９）。

グリフィン（Griffin）ら（J.Pharmacol.Exp.Ther.１９９９、２９０巻：１２７８−１２８４ページ）はマイクロモル強度の選択的レセプターアゴニスト（ＡＬ−８８１０）を発見したと報告した。シャリフら（J.Pharm.Pharmaceut.２０００、５２巻：１５２９−１５３９ページ）は、ＰＧＦ_２αのまた別の類似体（ＡＬ−３１３８；Ｒｏ−２２−６６４１；１１−デオキシ−１６−フルオロＰＧＦ２α）を記載している：それは低効率の部分的アゴニストであり、これもＦＰレセプターアンタゴニストとして機能する。相対的に選択的作用物質であるＡＬ−３１３８は種々の生物学的系におけるＦＰレセプターの固有の機能を研究するための貴重なＦＰアンタゴニスト・ツールとなるかも知れない。

シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）酵素（プロスタグランジン・エンドペルオキシド・シンターゼ（ＰＧＨＳ）とも呼ばれる）はアラキドン酸がプロスタグランジンＨ_２（ＰＧＨ_２）に変換する際の速度制限過程を触媒する。ＰＧＨ_２自体は天然プロスタグランジンを合成する特異的プロスタグランジン・シンターゼ酵素の基質として役立つ。これらは、それらが生産するプロスタグランジンによって命名されるている、例えばプロスタグランジンＤ_２はプロスタグランジン−Ｄ−シンターゼによって、プロスタグランジンＥ_２（ＰＧＥ_２）はプロスタグランジン−Ｅ−シンターゼ（ＰＧＥＳ）によって、プロスタグランジンＦ_２αはプロスタグランジン−Ｅ−シンターゼ（ＰＧＥＳ）によって、プロスタグランジンＦ_２α（ＰＧＦ_２α）はプロスタグランジン−Ｆ−シンターゼ（ＰＧＦＳ）によって合成される。現在ではＣＯＸ酵素の２つの確認されたイソフォーム、ＣＯＸ−１及びＣＯＸ−２がある（デウィット（DeWitt、１９９１））。ＣＯＸ−１は多くの組織及び細胞型に構成的に発現し、正常生理機能のためのプロスタグランジンを生成する（ハーシュマン、１９９６）。対照的に、ＣＯＸ−２の発現は、静止細胞が増殖因子、癌遺伝子、発癌物質及び発癌促進性ホルボルエステル類によって刺激された後に速やかに誘導される（ハーシュマン、１９９６；サバラマイア（Subbaramaiah）ら、１９９６）。

ＰＧＥ_２は、セルペンチンレセプターのロドプシン・ファミリに属する７種類の膜間Ｇ蛋白結合レセプター（ＧＰＣＲ）の種々のイソフォームとの相互作用によって、標的細胞に対する影響を媒介する。４種類の主要ＰＧＥ_２レセプターサブタイプが同定された（ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３及びＥＰ４）；これらはある場合には代わって対置する細胞内シグナル経路を利用する（コールマンら、１９９４）。対置作用を有するレセプター類のこの多様性は、合成部位の近くに高濃度で放出されるＰＧＥ_２の作用をホメオスタシス的に制御することができる（アシュビ（Ashby）、１９９８）。現在のところ、種々のＰＧＥ_２レセプター類の役割、それらの多岐にわたる細胞内シグナル経路、並びに、正常な又は腫瘍性に形質転換した子宮内膜上皮細胞に対するＰＧＥ_２効果の媒介に関係する個々の標的遺伝子は依然として明らかにされていない。

ヒト子宮内膜の上皮細胞は腫瘍性形質転換を非常に受けやすい。西側世界では子宮内膜癌が婦人科では最も一般的な悪性腫瘍である。子宮内膜癌は数種の細胞型から生じ得るが、腺上皮は最も一般的な前駆体である（腺癌が子宮癌の８０−９０％を占める）。子宮内皮癌は主に閉経後疾患であり、４０歳未満では稀で、約７０歳でピークに達する。子宮内膜癌の発生は西側世界では最近５０年間に確実に増加しつつあり、これは主として寿命の伸び及び検出法の改良によるものである（ゴードン（Gordon）＆アイランド（Irland）、１９９４；マント（Mant）＆ヴェッセイ（Vessey）１９９４）。

子宮におけるＰＧＦ_２αレセプターの発現を月経周期全体を通して考察し、子宮内膜の増殖期の前記レセプターが、その他の段階に比較してより高レベルであることを我々は示した。子宮内膜組織における発現は正常な子宮組織と比較して著しく高まる。我々は子宮内膜細胞系を使用して、ＰＧＦ_２αが上皮細胞の増殖を誘発することを示した。この増殖はＰＬＣシグナル経路の特異的インヒビターの使用によって阻止できる。

これらの考察は、子宮癌における上皮細胞の増殖を減らすなど、子宮の病的状態を克服するために、ＰＧＦ_２α（ＦＰ）レセプターを拮抗阻害させる可能性があることを示している。

ＦＰレセプターのアンタゴニストは、平滑筋の弛緩メカニズムによって作用し、胎児の早産及び月経困難症を治療又は防止することが示唆された（ＷＯ９９／３２６４０及びＷＯ００／１７３４８）。しかしそれらが子宮癌、子宮内膜炎又は類線維症などの子宮の病的状態の克服に有用であることはこれまで示唆されていない。

子宮病変の現在の治療はＣＯＸ−インヒビター（阻害剤）の使用を含む。ＣＯＸ−インヒビター類はある治療的可能性を示しているが、一方においてそれらは多数のプロスタグランジンの合成を阻害する；これらのプロスタグランジンのうちあるものは有害であり、あるものは有益な効果を有する。このため当業者には、特定のプロスタグランジンの作用を特異的に阻止することによる子宮病変の治療法が必要である。

本発明の第一の態様は、女性における子宮の病的状態を治療又は防止する方法であって、その女性に、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ２αを阻害する少なくとも１種の薬剤を投与することを含む方法を提供する。

本発明の方法によって治療できる子宮の病的状態は、ＰＧＦ_２α（ＦＰ）レセプターが増殖組織においてアップレギュレートされている任意の病的状態である。一般的には子宮の病的状態は子宮癌、腺筋症を含む子宮内膜炎などの子宮内膜の病変、又は類線維腫（平滑筋腫）又は平滑筋肉腫（悪性化した類線維腫である）などの子宮筋層の病的状態のいずれかである。このように、一般的には子宮の病的状態は、子宮筋層又は子宮内膜の細胞の異常増殖と関連するものである。子宮内膜炎は子宮内膜の異所性着床及び増殖であり、そのため子宮内膜細胞の異常増殖と考えることができる。腺筋症は、異所性子宮内膜が子宮筋層に着床する、子宮内膜炎の一つの形である。

本発明は、子宮癌、子宮内膜炎などの子宮内膜の病的状態、又は類線維症などの子宮筋層の病的状態のいずれかを、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤で治療することを含む。

本発明の方法によって治療できる子宮の病的状態には胎児の早産又は月経異常症は含まれない。

本発明は、胎児の早産又は月経異常症以外の女性の子宮の病的状態を治療又は防止する方法であって、これら女性に、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤を投与することを含む前記方法を含む。

ここに使用する用語「胎児の早産」は、切迫流産又は習慣性流産及び流産を含む。

本発明の方法は子宮内膜癌の治療に使用するのが特に好ましい。

ある種の子宮病変は上皮の過剰増殖と関係があると考えられる。

一般的には上記作用物質（阻害剤）は、ＦＰレセプターのＰＧＦ_２α−媒介性シグナルを阻害又は破壊するものである。

ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２α阻害剤がＰＧＦ_２αとＦＰレセプターとの結合を阻害又は低減することが好ましい。或いは、又はそれに加えて、その作用物質は、ＰＧＦ_２αとＦＰレセプターとの相互作用、又はＦＰレセプターと関連Ｇ_αｑ蛋白との相互作用に影響を与えることができ、それによってＰＧＦ_２α−ＦＰ媒介性シグナル形質導入経路を阻害又は破壊する。

好ましい一実施形態において、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する薬剤はＦＰレセプターのアンタゴニストである。ＦＰレセプターアンタゴニストは、一般的にはＦＰレセプターに結合し、天然リガンドＰＧＦ_２αの結合と競合し、ＰＧＦ_２α−ＦＰ媒介性シグナル形質導入経路を阻害又は破壊する分子類である。

好ましい一実施形態において、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害するということは、プロスタグランジンレセプター上のＰＧＦ_２α結合部位が占有され、その結果、天然リガンド（ＰＧＦ_２α）が、イノシチルホスフェートによってＧｑ／Ｇｑ_ＩＩを介して正常なシグナリングを起こし、その後細胞内カルシウムの移動を起こす、という様態では結合できないという結果を含む。

或いは、上記レセプターアンタゴニストは、ＰＧＦ_２αの結合を阻害することなくＦＰレセプターに結合するが、ＰＧＦ_２αとＦＰレセプターとの相互作用を破壊し、それによってＰＧＦ_２α−ＦＰ媒介性シグナル形質導入経路を阻害又は破壊する分子である。

さらに他には、ＦＰレセプターアンタゴニストはＦＰレセプターに結合する分子であって、ＦＰレセプターと関連Ｇ_αｑ蛋白との相互作用を破壊し、それによってＦＰ媒介性シグナル形質導入経路を阻害又は破壊するという分子である。

また別の好ましい実施形態において、作用物質はＰＧＦ_２αのアンタゴニストでもよい。ＰＧＦ_２αアンタゴニストは一般的には、ＰＧＦ_２αに結合し、ＰＧＦ_２αとそのレセプターとの結合を阻止又は軽減し、それによってＰＧＦ_２α−ＦＰ媒介性シグナル形質導入経路を阻害又は破壊する分子である。これは、一般的には上記レセプター又は抗体のどちらかの一部がＰＧＦ_２αに結合する「可溶性レセプター」のアプローチである。

或いは、ＰＧＦ_２αアンタゴニストは、ＰＧＦ_２αとＦＰレセプターとの結合を阻害又は軽減することなくＰＧＦ_２αに結合するが、ＰＧＦ_２αとＦＰレセプターとの間の相互作用を破壊し、ＰＧＦ_２α−ＦＰ媒介性シグナル形質導入経路を阻害もしくは破壊するような分子でよい。これはＰＧＦ_２αに共有結合で結合し、結合強度には影響を与えないがＧ−蛋白／ＩＰ／Ｃａ^２+メカニズムに影響を与える分子である。

一実施形態において、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２α阻害剤はＦＰレセプターのアンタゴニストを含む。これは患者に適切に投与できる任意のＦＰレセプターアンタゴニストでよい。そのレセプターアンタゴニストは一般的には固有のレセプターに選択的であり、多分ＰＧＦ_２αに比べて同じか又はより高い結合親和性をＦＰレセプターに対して有する。レセプターに対して天然リガンドに比べてより高い親和性を有するアンタゴニストが好ましいとはいえ、より低い親和性を有するアンタゴニストも使用できるが、これらはより高濃度で使用することが必要である。アンタゴニストはＦＰレセプターに可逆的に結合することが好ましい。好ましくはアンタゴニストはある固有のレセプターに選択的であり、その他のレセプターには影響しない；このため一般的にはＦＰレセプターアンタゴニストはＦＰレセプターには結合するがその他の任意のレセプターには実質的に結合しない。

表１に列挙されるペプチド類はＦＰレセプターと関連Ｇ_αｑ蛋白との相互作用を破壊するＦＰレセプターのアンタゴニストであると報告されている（ＷＯ９９／３２６４０及びＷＯ００／１７４３８）。アミノ酸は標準ＩＵＰＡＣ一文字の習慣通り示され、Ｘはシクロヘキシルアラニンである。小文字はＬ-アミノ酸を示し、大文字はＤ−アミノ酸を示す。ＦＰレセプターアンタゴニストのような特定のペプチドに関するＷＯ９９／３２６４０及びＷＯ００／１７４３８の開示の全ては出典明示により本明細書に組み込まれる。

アンタゴニストが表１に記載されるようなペプチドを含む場合、アンタゴニストは蛋白融合体又はそのペプチド類似体も含む。

ケイマン・ケミカル社（Cayman Chemical）、アンアーボル（Ann Arbor）、米国ミシガン州、から提供されるＰＧＦ_２αジメチルアミドはＰＧＦ_２αレセプターアンタゴニストであることが報告された（アーノルド（Arnolud）ら、（２００１）、Am.J.Pathol.１５９巻（１号）：３４５−３５７ページ）。

米国特許第６,４４１,０３３号Ｂ１（シャリフ＆グリフィン、アルコン・マニュファクチュアリングに譲渡）はＦＰレセプターアンタゴニストである１１β−フルオロ１５β−ヒドロキシＰＧＦ_２α類似体を記載している。

アルコン・リサーチ社から入手できるＡＬ−８８１０（（５Ｚ,１３Ｅ）−（９Ｓ,１１Ｓ,１５Ｒ）−９，１５−ジヒドロキシ−１１−フルオロ−１５−（２−インダニル）−１６，１７，１８，１９，２０−ペンタノール−５,１３−プロスタグランジエン酸）はＰＧＦ_２αレセプターの、弱い部分的アゴニストであり、ＰＧＦ_２αレセプターに高度に選択的なアンタゴニストである。ＡＬ−８８１０は１０μＭという高濃度ではプロスタグランジンレセプターＴＰ、ＤＰ、ＥＰ２又はＥＰ４の機能的反応を顕著には阻害しないことが報告された（グリフィンら（１９９９）J.Pharmacol.Exp.Ther.、２６０巻（３号）：１２７８−１２８４ページ）。

ＡＬ−３１３８（１１−デオキシ−１６−フルオロＰＧＦ_２α）はＰＧＦ_２αの弱い部分的アゴニストであり、ＰＧＦ_２αレセプターの高度に選択的アンタゴニストであることが報告された（シャリフら（２０００）J.Pharm.Pharmacol.５２巻（１２号）：１５２９−１５３９ページ）。

フロレチンはＰＧＦ_２αレセプターアンタゴニストであることが報告された（キタナカら（１９９３）J.Neurochem.６０巻（２号）：７０４−７０８ページ）。

スルホニル尿素グリベンクラミドはＰＧＦ_２αレセプターアンタゴニストであることが報告された（ディレイ（Dalaey）及びバン・デ・ヴールデ（Van de Voorde）（１９９５）、Eur.J.Pharmacol.２８０巻（２号）：１７９−１８４ページ）。スルホニル尿素トルブタミド及びトラミドはＦＰレセプターの非常に弱いアンタゴニストであることが報告された（シャリフら（２０００）J.Pharm.Pharmacol.５２巻（１２号）：１５２９−１５３９ページ）。

ＰＧＦ_２αジメチルアミンはＰＧＦ２αレセプターアンタゴニストであることが報告された（スティンガ（Stinger）ら、（１９９２）、J.Pharmacol.Exp.Ther.、２２０巻：５２１−５２５ページ）。

（Ｅ）−５−［［［（３−ピリジニル）［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチレン］アミノ］オキシ］ペンタン酸（ジャンセン・ファーマシューテイカ（Jannsen.Pharmaceutica）から入手できるリドグレルとしても知られている）はＰＧＦ_２αレセプターアンタゴニストであることが報告された（ジャンセンら（１９９０）、血栓症及び止血（Thrombosis and Haemostasis）６４巻（１号）：９１−９６ページ）。

化合物ＰＨＧ１１３は選択的ＰＧＦ_２αレセプターアンタゴニストであることが報告された（キニオ（Quiniou）ら（２００１）Pediatric Research、４９巻（２号）：４５２Ａ）。

ヨーロッパ特許第１２８４７９号は、報告によるとＰＧＦ_２αレセプターアンタゴニストであるピラゾリルーメチルーエルゴリン誘導体類を記載している。ＰＧＦ_２αレセプターインヒビターとしてのピラゾリル−メチル−エルゴリン誘導体に関するヨーロッパ特許第１２８４７９号の全ての開示は出典明示により本明細書に組み込まれる。

さらに好ましい本発明の実施形態において、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する薬剤はＰＧＦ_２αのアンタゴニストであり、それは患者に適切に投与できる任意のＰＧＦ_２αアンタゴニストである。ＰＧＦ_２αアンタゴニストはＰＧＦ_２αに選択的であるのが好ましく、一般的にはＰＧＦ_２αに対し、その他の分子類に対するよりも高い親和性を有する。他の分子類よりＰＧＦ_２αに対してより高い親和性を有するアンタゴニストが好ましいとはいえ、より低い親和性を有するアンタゴニストも使用できる。しかしこれらはより高濃度で使用する必要がある。ＰＧＦ_２αアンタゴニストはＰＧＦ_２αに可逆的に結合するのが好ましい。

ＰＧＦ_２αアンタゴニストは、オックスフォード・ビオメディカル・リサーチ社、オックスフォード、英国（アーノルドら、Am.J.Pathol.２００１，１５９巻（１号）：３４５−３５７ページ）から提供されるウサギポリクローナル抗ＰＧＦ_２α抗体などの抗−ＰＧＦ_２αを含む。アーノルドらは、製造者によると上記抗体の特異性は非常に高く、その他のプロスタノイド誘導体との交差反応は１％未満であると述べている。

日本特許第０４０７７４８０号；日本特許第０８１７６１３４号；日本特許第０１１９９９５８号；日本特許第０１０５０８１８号；及び日本特許第６３０８３０８１号はそれぞれＰＧＦ_２αインヒビターであると報告されたフタリド誘導体類を記載している。ＰＧＦ_２αインヒビターとしてのフタリド誘導体に関連する日本特許第０４０７７４８０号；日本特許第０８１７６１３４号；日本特許０１１９９９５８号；日本特許第０１０５０８１８号；及び日本特許６３０８３０８１号中の全ての開示は出典明示により本明細書に組み込まれる。

ＷＯ９１／１３８７５は、ＰＧＦ_２αインヒビターであると報告された（イソ）キノリン スルホンアミド化合物を記載している。ＰＧＦ_２αインヒビターとしての（イソ）キノリン スルホンアミドに関連するＷＯ９１／１３８７５中の全ての開示は出典明示により本明細書に組み込まれる。

ＰＧＦ_２αのインヒビター又はアンタゴニストであると報告された化合物類の幾つかは実際、ここに使用され定義されるＰＧＦ_２α（ＦＰ）レセプターのアンタゴニストであり得る。したがってＰＧＦ_２αのインヒビター又はアンタゴニストとしての、この種の化合物に関する参考文献はＦＰレセプターアンタゴニストに関する参考文献と考えなければならない。

ここに使われる用語「アンタゴニスト」とはあらゆる種類のアンタゴニズム（拮抗性）を網羅する。プロスタグランジンレセプターなどのＧＰＣＲｓは、所望反応を阻止する結果をもたらす逆のアゴニズム（作動性）を示すことが知られている。このため本発明に使用する適切なＦＰアンタゴニストは、アンタゴニストと称されるものと共に、又はそれを含まずに、放射性標識ＦＰアゴニストとＰＧＦ_２αとの結合を測定することによって確認できる。二番目に、ＦＰアンタゴニストは機能的アッセイ、例えばＦＰアゴニストのＣａ^２+濃度に与える影響が上記アンタゴニストの存在のもとで変化することを示すことによって確認される。第三に、ＦＰアンタゴニストは、細胞培養における上皮細胞増殖の阻害によって確認される。

我々は以前、ＰＧＥＳ発現及びＰＧＥ_２合成がヒト子宮の腺癌の際にもアップレギュレートすることを見いだした。これら因子の発現は子宮癌組織の悪性腫瘍上皮細胞並びに微細血管系の内皮細胞に局所化された。これは癌組織におけるＥＰ２及びＥＰ４レセプターの過剰発現及びシグナリングと関係がある（ジャブール（Jabbour）ら、２００１、British Journal of Cancer、８５巻（７号）、１０２３−１０３１ページ）。ジャブールら（２００１）の開示は全て出典明示により本明細書に組み込まれる。

本発明のさらに別の実施形態において、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＥ_２αを阻害する上記少なくも１つの作用物質に加えて、ＰＧＥ_２αのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストも投与される。

本発明の一実施形態において、前記個体にＰＧＥＳのインヒビターを投与する。ソレン（Thoren）及びジャコブソン（Jakobsson）（２０００）（Eur.J.Biochem.２６７巻、６４２８−６４３４ページ）（出典明示によりここに組み込まれる）は、ＮＳ−３９８、スリンダクスルフィッド及びロイコトリエンＣ_４が２０μＭ、８０μＭ及び５μＭのＩＣ_５０においてそれぞれＰＧＥＳ活性を阻害することを報告した。

本発明のまたさらに別の実施形態において、前記個体にＥＰ２レセプターのアンタゴニスト又はＥＰ４レセプターのアンタゴニストを与える。ＥＰ２レセプターのアンタゴニスト又はＥＰ４レセプターのアンタゴニストは前記ＥＰ２又はＥＰ４レセプターに効果を有するＰＧＥ_２を阻害する作用物質であることが認められる。

プロスタグランジンＥＰ２レセプターアンタゴニストは任意の適切なＥＰ２レセプターアンタゴニストでよい。同様に、プロスタグランジンＥＰ４レセプターアンタゴニストは任意の適切なＥＰ４レセプターアンタゴニストでよい。「適切な」とは、上記アンタゴニストが患者に投与できるものであることを意味する。レセプターアンタゴニスト類はそれらそれぞれのレセプターに結合し、天然リガンド（ＰＧＥ_２）と競合し、固有のレセプター媒介性シグナル形質導入経路の開始を阻止する。レセプターアンタゴニスト類は一般的には特定のレセプターに選択的であり、天然リガンドよりも高い結合親和性をそのレセプターに対して有するのが普通である。天然リガンドより高い親和性を有するアンタゴニストが好ましいとはいえ、より低い親和性を有するアンタゴニストも使用できる。しかしその場合はより高い濃度でそれらを使うことが必要である。上記アンタゴニスト類はそれらの同起源のレセプターに可逆的に結合するのが好ましい。一般的には、アンタゴニストは特定のレセプターに選択的であり、その他のレセプターには影響を与えない；例えば、ＥＰ２レセプターアンタゴニストはＥＰ２レセプターには結合するが、ＥＰ４レセプターとは実質的に結合せず、その一方でＥＰ４レセプターアンタゴニストはＥＰ４レセプターには結合するがＥＰ２レセプターには実質的に結合しない。ＥＰ２又はＥＰ４レセプターアンタゴニストは特定のレセプターサブタイプに選択的であるのが好ましい。これは、そのアンタゴニストが特定のレセプターサブタイプに対し結合親和性を有する、すなわち少なくも１つのその他のＥＰレセプターサブタイプに対するよりも少なくも１０倍高い結合親和性を有することを意味する。例えば選択的ＥＰ４レセプターアンタゴニストは、任意のＥＰ１、ＥＰ２又はＥＰ３レセプターサブタイプよりも少なくも１０倍高い親和性をＥＰ４レセプターに対して有する。

ＥＰ２又はＥＰ４レセプターアンタゴニストはその同起源のレセプターに対して選択的であるのが特に好ましい。

ＥＰ２レセプターアンタゴニストはＡＨ６８０９を含む（ペレチエ（Pelletier）ら（２００１）Br.J.Pharmacol.１３２巻、９９９−１００８ページ）。

ＥＰ４レセプターアンタゴニストはＡＨ２３８４８Ｂ（グラクソ社によって開発された）及びＡＨ２２９２１Ｘ（ペレチエら（２００１）、Br.J.Pharmacol.１３２巻、９９９−１００８）を含む。ＡＨ２３８４８Ｂの化学名は（［１アルファ（ｚ）２ベータ５アルファ］−（＋／−）−７−［５−［［（１、１’−ビフェニル）−４−イル］メトキシ］−２−（４−モルフォリニル）−３−オキソ−シクロペンチル］−４−ヘプテン酸）である（ヒロク（Hillock）＆クランクショー（Crankshaw）（１９９９）Eur.J.Pharmacol.２８巻、９９−１０８ページ）。ＥＰ４ＲＡ（リ（Li）（２０００）Endocrinology 141, 2054-61）は、ＥＰ（４）選択的リガンドである（マックウェイト（Machwate）ら（２００１）Mol.Pharmacol.６０巻：３６−４１ページ）。ＷＯ００／１５６０８に記載されるオメガ置換プロスタグランジンＥ誘導体類（ＥＰ１１１４８１６）（小野薬品（Ono Pharm Co Ltd））はＥＰ４レセプター類に選択的に結合し、ＥＰ４レセプターアンタゴニスト類である。

ＷＯ０１／４２２８１に記載されるペプチド（ホピタル・セイント−ジャスティン（Hopital Sainte-Justine））例えば:ＩＦＴＳＹＬＥＣＬ（配列番号:７）、ＩＦＡＳＹＥＣＬ（配列番号：８）、ＩＦＴＳＡＥＣＬ（配列番号：９）、ＩＦＴＳＹＥＡＬ（配列番号：１０）、ＩＬＡＳＹＥＣＬ（配列番号：１１）、ＩＦＴＳＴＤＣＬ（配列番号：１２）、ＴＳＹＥＡＬ（４−ビフェニルアラニンを有する）（配列番号：１３）、ＴＳＹＥＡＬ（ホモフェニルアラニンを有する）（配列番号：１４）も、ＷＯ００／１８７４４に記載の化合物類の幾つかと同様にＥＰ４レセプターアンタゴニストとして記載されている（フジサワ薬品（Fujisawa Pharm Co Ltd））。ＷＯ００／０３９８０に記載される５−チア−プロスタグランジンＥ誘導体（ＥＰ１０９７９２２）（小野薬品）はＥＰ４レセプターアンタゴニストであるらしい。

ＥＰ４レセプターアンタゴニストはＷＯ０１／１０４２６（グラクソ）、ＷＯ００／２１５３２（メルク）及び英国特許第２３３０３０７号（グラクソ）にも記載されている。

ＷＯ００／２１５３２は下記のものをＥＰ４レセプターアンタゴニストとして記載している：５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−クロロ−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］フェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オンカリウム塩；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−メチル−３−フロイル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル｝−１，２，４−トリアゾール−３−オン；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−メチル−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−トリアゾール−３−オン；
５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−［２−（メチルピロール）カルボニル］スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン。

英国特許第２３３０３０７号は、［１α（Ｚ），２β，５α］−（＋／−）−７−［５−［［（１，１’−ビフェニル）−４−イル］メトキシ］−２−（４−モルホリニル）−３−オキソシクロペンチル］−４−ヘプテン酸及び［１Ｒ［１α（ｚ），２β，５α］］−（−）−７−［５−［［（１，１'-ビフェニル）−４−イル］メトキシ］−２−（４−モルホリニル）−３−オキソシクロペンチル］−４−ヘプテン酸を記載している。

ＷＯ００／１８４０５（ファルマジーン（Pharmagene））はＥＰ４アンタゴニストＡＨ２２９２１及びＡＨ２３８４８を記載している（これらは英国特許第２０２８８０５号及び米国特許第４３４２７５６号にも記載されている。）ＷＯ０１／７２３０２（ファルマジーン）は、例えば参考文献に記載され、８ページ以下を参照して示される一般式（Ｉ）に含まれるものなど、その他のＥＰ４レセプターアンタゴニストを記載している。

一般的には、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する少なくも１つの作用物質に加えて患者に投与する際、各化合物の用量は、上記その他の化合物と関連なく個々人に投与される量である。或いは、より少量を投与することもできる。

本明細書に参照される全ての特許及びその他の参考文献、特にＦＰレセプター、ＰＧＦ_２α、ＦＰ２又はＥＰ４及びＰＧＥＳのアンタゴニスト又はインヒビターを記載しているものは出典明示によりそのまま本明細書に組み込まれる。

ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する１種類以上の作用物質を患者に投与し得ることは当然である。これらは全て本発明の「治療薬」と考えてよい。１種類より多い治療薬を患者に投与する際には、それらは逐次、又は一度にに投与できることは当然である。

１種類又は複数種類の治療薬の有効量を患者に投与し、子宮の好ましくない病的状態を治療する。例えばこれら治療薬を用いて症状を緩和し（すなわち一時的緩和のために使用）又は病気を治療し、又はその病気を阻止するために予防的に使用することができる。治療剤は任意の適した経路で、任意の適切な形で投与できる。

一般的には、本発明に使用するための前記の治療薬は、ＦＰレセプターの少なくも９０％に有効量が運搬されるような量（ＥＤ_９０）及び頻度で投与される。

本発明に使用するための上記の治療薬又はその組成物は経口及び非経口（例えば皮下又は筋肉内）注射を含む一般的方法によって投与できる。治療は単一量の投与又はある期間にわたる複数回の投与からなる。投与すべき用量は年齢、体重、投与法、治療期間、及び治療薬（１種類又は複数種類）の薬物動態及び毒物学的特性を考慮して決められる。治療薬は患者に好ましい治療効果をもたらす量（又は複数回用量）が投与される。一般に、この治療薬は、別の適応症に使用する量と同じか類似の用量が用いられる。とにかく、患者の治療に適した用量は医者によって決められるのがよい。

本発明の治療薬はそれだけで、又はその他の治療薬と組み合わせて使用することができるが、一方ではそれ（又はそれら）を１種類以上の容認できる賦形剤と組み合わせて医薬組成物として提供するのが好ましい。賦形剤は本発明の治療薬と適合し、またそれを受ける人にとって有害でない、という点で、「容認でき」なければならない。一般的にはそれら賦形剤は、無菌性及び無パイロジェン性である水又は食塩液である。

上記組成物は単位投与型で提供されるのが都合がよく、薬学の当業者に公知の任意の方法によって作られる。このような方法は、１種類又は複数種類の治療薬を１種類以上の付属成分を構成する担体と組み合わせる工程を含む。概してこれら組成物は活性成分（すなわち１種類以上の治療薬）を液体担体又は微粉状固体担体又はそれら両方と均質によく混ぜ合わせ、必要ならばその生成物を形作ることによって作られる。

経口投与に適する本発明による組成物はカプセル、カシェ剤又は錠剤などのあらかじめ決められた活性成分量を含む個々の単位として、粉末又は顆粒として；水性液又は非水性液中の溶液又は懸濁液として；又は水中油液体エマルション又は油中水液体エマルションとして提供される。活性成分はボール、舐剤、又はペーストとしても提供される。

錠剤は任意に１種類以上の付属成分と共に圧縮又は成形によって作られる。圧縮錠剤は、任意に結合剤（例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、滑剤、不活性希釈剤、保存料、崩壊剤（グリコール酸ナトリウム澱粉、架橋ポビドン、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロースなど）、界面活性剤又は分散剤と混合した粉末又は顆粒などの流動性の形の活性成分を適切な機械で圧縮することによって作られる。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らせた粉末状化合物の混合物を適切な機械で成形することによって作られる。錠剤は任意にコーティングしたり溝をつけたるすることができ、所望の放出プロフィールを得るためにヒドロキシプロピルメチルセルロースなどを種々の比率で使用して、活性成分を徐々に又はコントロールして放出させることができる。

口に適切に局所適用できる組成物には、通常はスクロース及びアカシア又はトラガントなどで風味を効かせた活性成分を含むトローチ剤；不活性ゼラチン及びグリセリンなど、又はスクロース及びアカシアをベースにした活性成分を含むパステル；及び適切な液体担体中に活性成分を含むマウスーウォッシュがある。バッカル錠も好ましい。

非経口投与に適する組成物には、抗酸化剤、緩衝液、殺菌剤及び、組成物を投与予定患者の血液と等張にする溶質を含む水性及び非水性滅菌注射溶液；及び懸濁剤及び濃化剤を含むことができる水性及び非水性無菌懸濁液がある。これら組成物は単位用量又は多数回用量の容器、例えば密封アンプル及びバイアルで提供され、凍結乾燥状態で保存し、使用直前に注射用水などの無菌液体担体を添加するだけで使用できる。即座に使用する注射溶液及び懸濁液を、上に記載した種類の無菌粉末、顆粒及び錠剤から作ることができる。

好ましい単位用量組成物は活性成分を１日量又は単位、１日分服量（サブ用量）又はそれらの適切な部分を含むものである。

上に詳細に記載した成分類に加えて、本発明の組成物は、問題の組成物の種類に関心のある当業者には一般的な、その他の作用物質も含むことができることは当然である。例えば経口投与に適する組成物は香味剤を含むことができる。

治療薬の幾つかは蛋白又はペプチドである。蛋白及びペプチドは、注射可能の持続的放出性ドラッグ・デリバリー・システムを使用して運搬できる。これらは特に注射回数を減らすために設計される。このようなシステムの一例は、組換えヒト成長ホルモン（rhＧＨ）を生体内分解性ミクロスフェアに包み込んだニュートロピン・デポ（Nutropin Depot）であり、これは１回の注射で rhＧＨ を長時間にわたってゆっくりと放出する。

上記蛋白及びペプチドは、その薬剤を必要な部位に直接放出する外科的に移植されたデバイスによって投与できる。例えばヴィトラサート（Vitrasert）はガンシクロヴィルを眼に直接放出し、ＣＭＶ網膜炎を治療する。この毒性作用物質の疾患部位への直接適用は、この薬の顕著な全身的副作用を起こさずに、効果的治療を可能とする。

エレクトロポレーション治療（ＥＰＴ）装置も蛋白及びペプチドの投与に使用できる。パルスド電場を細胞に与えるデバイスはその薬に対する細胞膜の透過性を高め、細胞内ドラッグ・デリバリーを顕著に高める。

蛋白及びペプチドはエレクトロインコーポレーション（ＥＩ）によって運搬することができる。ＥＩは、皮膚表面の直径３０ミクロンまでの小粒子が、エレクトロポレーションに使用するものと同じか又は類似の電気的パルスを経験する際に起きる。ＥＩにおいて、これらの粒子は角質層を通過して皮膚のより深い層に押し込まれる。これら粒子は薬剤又は遺伝子を担うことができ、又は薬剤又は遺伝子でコーティングすることもでき、又は単に、薬剤が入るための孔を皮膚にあける「銃弾」として作用することができる。

蛋白及びペプチドを運搬するための、また別の方法は、感熱性のＲｅＧｅｌ注射システムである。体温より低い温度では、ＲｅＧｅｌは注射可能の液体であるが、体温ではそれは直ちにゲルリザーバ（ゲルため）を形成する。これは徐々に侵食され、溶解して公知の安全な生体内分解性ポリマーになる。治療薬は生体ポリマーが溶解するにつれて、時間をかけて運搬される。

蛋白及びペプチド医薬品は経口的に運搬することもできる。そのプロセスは、体内にビタミンＢ_１２を経口摂取するための自然のプロセスを利用し、蛋白及びペプチドを同時運搬する。ビタミンＢ_１２摂取システムに乗ることによって、蛋白及びペプチドは腸壁を通過して移動することができる。ビタミンＢ_１２類似体と、複合体のビタミンＢ_１２部分の固有因子（ＩＦ）に対する顕著な親和性及び複合体の薬剤部分の顕著な生体内活性を両方保有する薬剤との間で複合体を合成する。

蛋白及びポリペプチドは「トロジャン（Trojan）ペプチド」によって細胞に導入される。これらはペネトラチンと呼ばれるポリペプチドのクラスに属し、移動特性を有し、親水性化合物を形質膜を経て運ぶことができる。このシステムはオリゴヌクレオチド類を細胞質及び核に直接ターゲティングすることができ、非細胞型特異的で高度に効率的である。デロッシ（Derossi）ら（１９９８）、Trebds Cell Biol ８巻、８４−８７ページを参照されたい。

上記の治療薬又は組成物は経皮的に、例えばパッチ、ゲル、ローション、クリーム又はオイルとして投与することもできる。

治療薬（１種類又は複数種類）は経口的に投与されるのが好ましい。

治療薬（１種類又は複数種類）が女性の生殖系に投与されるならばさらに好ましい。例えば１種類又は複数種類の治療薬は、例えばゲル又はクリーム又は膣リング又はタンポンを使用して膣内に適切に投与できる。その治療薬は例えば当業者には公知の、子宮内デバイスなどの方法をを使用して、子宮内デリバリーによっても好都合に投与できる。

一般的には、上記ゲル又はクリームは膣に投与するために処方されるものである。それは油性でも水性でもよい。一般的には１種類又は複数種類の治療薬がクリーム又はゲル内に、１回の（又は反復）投与で有効量が十分に投与されるような濃度で含まれる。

一般的には、膣リングは膣にフィットする「ドーナツ」形に成形されたポリマーを含んでなる。１種類又は複数種類の治療薬がポリマー内に、一般的にはコアとして存在し、それはポリマーから放出され、コントロールされた仕方で膣及び／又は頸部に入る。膣リングは当業者には公知である。

一般的にはタンポンに１種類又は複数種類の治療薬をしみ込ませ、十分な量の治療薬（１種類又は複数種類）がタンポンに存在するようにする。

一般的には子宮内デバイスは子宮内に長期間、例えば１ないし５年間置くためのものである。一般的には子宮内デバイスはプラスチック製フレーム（「Ｔ」形であることが多い）を有し、使用期間中放出するのに十分な量の治療薬（類）を含む。一般的にその薬剤は、そのデバイスの部分を構成している除放性ポリマー内に存在し、又は前記除放性ポリマーに封入される。上記デバイスの部分は、普通は除放性膜で覆われている「Ｔ」字形の長い方のアームの周囲を包む「ソーセージ」形薬剤のような形に構成されている。子宮内デバイスは当業者には公知である。

治療すべき個体はこのような治療から利益を受ける任意の女性である。一般的にはそして好ましくは、治療すべき個体は人間の女性である。しかし、本発明の方法は雌哺乳動物、例えばウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ネコ及びイヌなどの種の雌の治療にも使用できる。このため本発明の方法はヒト医療及び動物医療両方に有用である。

本発明の第二の態様は女性個体の子宮の病的状態を治療又は防止するための医薬品の製造における、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤の使用を提供する。

本発明は、胎児の早産又は月経困難を除く女性の子宮の病的状態を治療又は防止するための医薬品の製造における、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する少なくとも１種の薬剤の使用を含む。

本発明の第三の態様は、女性個体の子宮の病的状態を治療又は防止するための作用物質の製造におけるＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する少なくとも１種の薬剤の使用を提供する。その際その女性個体にはＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストが投与される。一般的には、女性には薬剤としてＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストが同時に投与される。ただし、ＰＧＥＳインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する少なくとも１種の薬を含む薬剤を投与する前（又は投与後）に上記女性に投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。

本発明の第四は、女性個体の子宮の病的状態を治療又は阻止するための医薬の製造におけるＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストの使用を提供する。その際上記個体にはＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻止する少なくとも１種の薬が投与される。この場合、一般的には上記女性にはＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻害する少なくとも１種の薬を、薬剤と同時に投与する。ただし女性にはＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを含む薬剤を投与する前（又は投与した後）にＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤を投与しておいてもよい（又は投与してもよい）。

本発明の第五の態様において、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤と、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストとの組み合わせを、女性の子宮の病的状態を治療又は防止するための薬剤の製造に使用する。

本発明の第六の態様は、子宮の病的状態を治療又は防止するための、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤を含む医薬組成物を提供する。

本発明は、月経異常又は胎児の早産を除く子宮の病的状態を治療又は防止するための、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤を含む医薬組成物を含む。

任意に、上記医薬組成物はＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストも含むことができる。

本発明の第二、第三、第四、第五及び第六の態様において、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２α阻害剤が本発明の第一の態様に関して定義されたものであることが好ましい。

本発明の第二、第三、第四、第五及び第六の態様において、子宮の病的状態が本発明の第一の態様に関して定義されたものであることが好ましい。

子宮の病的状態は好ましくは子宮癌又は子宮内膜又は子宮筋層の病的状態である。

実施形態において、前記子宮の病的状態は月経異常又は胎児の早産を含まない。

ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤及びＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを含む組成物の記載はこれまでになかったと考えられる。さらに、このような組成物を使用して任意の医学的状態を治療できることはこれまで示唆されなかったと考えられる。

そのため、さらに別の態様において本発明は、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２αを阻止する少なくとも１種の作用物質とＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストとを含む組成物を含む。

また別の態様において、本発明はＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを含む、医療に使用するための医薬組成物を含む。

本発明は下記の図面及び実施例を参照してより詳細に説明される。

プロスタグランジン（ＰＧ）Ｆ_２αレセプターの発現及びヒト子宮内膜及び子宮内膜腺癌における局所化：上皮細胞増殖におけるＰＧＦ_２αの役割。

概要
ＰＧＦ_２αはヒト子宮内膜によって生成するプロスタグランジンの一つであり、月経液において、又はインビトロ培養された子宮内膜外植片から測定できる。ＰＧＦ_２α産生はエストロゲンによって刺激され、これはＣＯＸ発現のアップレギュレーションを誘発し、プロゲステロンによって阻害され、これはＣＯＸ発現を低下させＰＧＤＨ発現を高める。高められたＣＯＸ発現が多数の種々の癌において証明されており、ラット腸上皮（ＲＩＥ）細胞における過剰発現は、インビボ増殖及び侵襲性の高まった変化した細胞型を誘発する。この研究の目的は、ヒト子宮内膜及び子宮内膜腺癌におけるＰＧＦ_２αの標的細胞を確認し、これら組織におけるＦＰレセプター発現を定量することである。上皮細胞増殖におけるＰＧＦ_２αの役割、及び関係する特異的シグナル経路を子宮内膜腺癌細胞系（イシカワ）で測定した。子宮内膜腺癌でさらに増加した中期ないし後期増殖組織においてＦＰｍＲＮＡ発現の顕著な増加が認められた。ＦＰｍＲＮＡの局在が、中期及び後期増殖組織試料からの上皮細胞だけに確認された。子宮腺癌組織において、ＦＰ発現は一貫して上皮細胞に局所化し、分化期には無関係であった。隣接支質細胞に些細なＦＰｍＲＮＡ発現が見られた。ＰＧＦ_２αに反応したイノシトール動員が正常子宮内膜及び子宮内膜腺癌において確認され、ＰＧＦ_２α後の全試料で顕著に増加した、しかし腺癌試料に付加的イノシトール動員は見つからなかった。イシカワ細胞いおいて、ＰＧＦ_２αはイノシトール動員を誘発し、細胞増殖の濃度依存性増加をもたらした。この増加はＰＬＣ依存的に阻止されたが、ｐ３８又はｐ４２／ｐ４４ ＭＡＰＫインヒビターによる影響は受けなかった。これらの結果は、増殖性子宮内膜上皮細胞がＰＧＦ_２αに反応することを明らかにし、子宮内膜上皮細胞増殖におけるＰＧＦ_２αの役割を示すものである。

序文
プロスタグランジン（ＰＧ）Ｆ_２αは生物学的活性脂質のエイコサノイド・ファミリに属するプロスタノイドである（１）。このプロスタノイド・ファミリのその他のメンバーはＰＧＤ_２、ＰＧＥ_２、プロスタサイクリン（ＰＧＩ_２）及びトロンボキサンＡ_２（ＴｘＡ_２）を含む。これらは全てアラキドン酸から、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）と特異的シンターゼ酵素との組み合わせによって合成される（２）。現在、ＣＯＸ酵素の２つのイソフォーム、すなわち、正常な生理的機能のためのＰＧを生成する、構成的に発現するＣＯＸ−１と、初期反応遺伝子の発現を速やかに誘発するＣＯＸ−２とが確認されている（３）。ＣＯＸはアラキドン酸を不安定な中間体ＰＧＨ２に代謝し、その後特異的シンターゼ酵素がＰＧＨ_２をＰＧ分子に変換する（４−８）。ＰＧシンターゼ酵素は、それらが産生するプロスタグランジンによって命名され、例えばＰＧＦ_２αはプロスタグランジン−Ｆ−シンターゼの代謝産物である。合成されたＰＧはそれらの作用を、各プロスタノイドに特異的な７つの経膜的Ｇ−蛋白結合レセプター（ＧＰＣＲ）によって媒介する。ＰＧＦ_２αレセプター（ＦＰ）はヒトにおいてクローン化され、Ｇ−蛋白Ｇｑ、ＰＬＣ活性化及びイノシトール三リン酸の生成（これ自体は細胞内Ｃａ^２+を移動させる）によってその反応を変換する。

ＣＯＸ酵素及びＰＧは、上皮細胞増殖及び血管新生を調節することが最近証明された。ラット腸内皮細胞において、ＣＯＸ−２発現及びＰＧＥ_２合成は細胞増殖及びアポトーシス耐性の増加と関連がある（９、１０）。同じグループによって、上皮細胞におけるＣＯＸ−２の発現が血管新生因子類の発現を高めることも示された。この血管新生因子類はパラクリン様に作用し、内皮細胞移動及び微小血管チューブ形成を誘発する（９）。ヒト子宮内膜において、ＣＯＸ−２酵素発現は増殖期で最大であり、上皮細胞及び血管周辺細胞に限局される（１０−１４）。

我々は増殖中の子宮内膜及びヒト腺癌においてＰＧＥ２及びＥＰレセプターの過剰発現及びシグナリングの増加を証明した。これらの知見は正常な子宮内膜機能におけるＰＧＥ２の役割を実証し、上皮細胞の悪性腫瘍性形質転換にＣＯＸが関連していることを示唆する。

ＰＧＦ_２αはヒト子宮内膜機能におけるＣＯＸの主要代謝産物でもあり、月経液中に存在し、培養中のヒト子宮内膜外植片によって放出される（１５）。しかしＰＧＦ_２αの強力な黄体融解活性及びＰＧＦ_２α後に明らかにされる子宮筋層の収縮性の増加により、大部分の研究はＦＰレセプターの発現及び卵巣の調節に焦点を当てている。ＦＰレセプターの発現及びヒト子宮内膜の機能層内のＰＧＦ２αの役割は完全には研究されていない。

当初の研究によれば、インビトロ培養された分離ウシ子宮内膜細胞において、内皮細胞は、主としてＰＧＥ２を分泌する間質細胞とは対照的に、ＰＧＦ_２αを優先的に放出することが確認された（１６）。さらに、非霊長類の種においてＦＰｍＲＮＡを測定した研究は、エストロゲンでＦＰレセプター発現が増加することを証明し、その一方で、卵巣切除した動物ではプロゲステロンがＦＰレセプター発現を減らすことが判明した（１７−１９）。

この研究の目的はヒト子宮内膜及び異なる病期のヒト子宮腺癌の両方におけるＦＰレセプター発現を限局化して定量し、ＰＧＦ_２α応答細胞を確認することであった。イノシトールリン酸の移動及びＭＡＲＫ細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化を使用して、インビトロ増殖アッセイとして、イシカワ細胞における機能性ＦＰレセプターの存在及びＢｒｄＵ取込みを確認した。この研究のデータにより、ＦＰｍＲＮＡが実質的に増加している増殖組織のみにＦＰの上皮発現があり、子宮内膜腺癌には明らかに上皮細胞が局在していることが証明される。その上、イシカワ細胞のＰＧＦ_２α処理は、イノシトールの動員、ＥＲＫリン酸化及び細胞増殖の濃度依存性増加を起こした。

ここに報告するデータはヒト子宮内膜におけるＦＰ発現の最初の報告であり、子宮上皮細胞増殖におけるＰＧＦ_２αの潜在的役割を明らかにするものである。

方法
患者及び組織採集
月経周期の種々の段階の子宮内膜バイオプシー（ｎ＝１２）を子宮内膜吸引キュレット（ピペット、ラボラトワレＣＣＤ（Laboratoire CCD）、フランス）を使って、月経周期が規則的な（２５−３５日）女性から集めた。その他に、月経周期の全段階における（初期、中期及び後期増殖期からｎ＝３、及び初期、中期及び後期分泌期からｎ＝３）全厚の子宮内膜バイオプシー（ｎ＝１８）を、婦人科的良性疾患のために子宮摘出を受けた女性から集めた。ピペット吸引又は子宮摘出後間もなく、組織をドライアイス中で急速に凍結し、−７０℃で保存し（ＲＮＡ抽出のため）、中性緩衝ホルマリン（ＮＢＦ）中で固定し、ワックスに埋め込むか（インサイツハイブリダイゼーション試験のため）、又はＲＰＭＩ１６４０（２ｍｍｏｌ／１Ｌ−グルタミン、１００Ｕペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含む）中に置き、研究室に移してインビトロ培養を行った。全ての被験者は規則的月経周期を申告しており（長さ２５−３５日の周期）、バイオプシー採集の前３カ月間にホルモン製剤を受けた女性はいなかった。バイオプシーは申告された最終月経期（ＬＭＰ）によって日付が入れられ、ノイズ（Noyes）らの基準による組織検査によって確認された（２０）。さらにバイオプシー時の循環エストラジオール及びプロゲステロン濃度は、申告されたＬＭＰと月経周期段階の組織検査との両方で一致した。ロジアン・リサーチ倫理委員会（Lothian Research Ethics Committee）から倫理的承認を得、組織の採集前に全被験者から書面によるインフォームド・コンセントを得た。

インサイツハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）
ＦＰレセプターのために特別に合成されたオリゴヌクレオチド二重ＦＩＴＣ標識ｃＤＮＡプローブをビオグノスティク（Biognostik）社から入手した。切片（５μｍ）をゼラチン被覆スーパーフロストスライド（ＢＤＨラボラトリー・サプライス、英国）上で、月経周期全体から集めた全厚ヒト子宮バイオプシー（ｎ＝１８）から切り取った。キシレン中で組織のワックス除去を行い、漸増濃度のエタノールを使用して再水和し、その後プロテイナーゼＫ処理（ＥＤＴＡ５０ｍＭを含むトリス−ＨＣｌｐＨ７.６１００ｍＭ中、１００μｇ／ｍｌ）を３７℃で１５分間行い、ｃＤＮＡプローブのアクセスを高めた。ＤＥＰＣ−Ｈ_２Ｏ中で洗浄後、ハイブリダイゼーション混合物（５０μｌ；プローブと共に供給される）を各切片に加え、スライドを３０℃で４時間インキュベートし、それからｃＤＮＡプローブ（６Ｕ／ｍｌハイブリダイゼーション・ミックス）を加え、３０℃で一晩インキュベートした。ハイブリダイゼーション後、１×ＳＳＣで５分間（２回）及び０.１×ＳＳＣで４２℃、１５分間（２回）の洗浄を完了した後、標準ＩＣＣ試薬（ＴＳＡビオチン系、ＮＥＮライフ・サイエンシス、ＵＫ）を使用してＦＩＴＣ標的プローブを検出する。最初に内因性ペルオキシダーゼ活性をメタノール中３％Ｈ_２Ｏ_２でブロックし、その後切片をブロッキング緩衝液と共に３０分間インキュベートする。共役抗−ＦＩＴＣ−ＨＲＰ（ベーリンガー−マンハイム、チェック）をブロッキング緩衝液に加え、切片を６０分間インキュベートした。洗浄後、ビオチニルチラミド増幅試薬を各スライドに加え、１５分間インキュベートした。洗浄後ストレプトアビジン−ＨＲＰを加え、３０分間インキュベートし、プローブの局在をＤＡＢで可視化した。同じ比率のシステイン（Ｃ）及びグアニン（Ｇ）塩基をＦＰレセプタープローブとして含む対照のオリゴヌクレオチド二重ＦＩＴＣ標識ｃＤＮＡプローブを、バックグラウンドハイブリダイゼーションを評価するために含めた。全処理は特に記載のない限り室温で行われた。

タックマン（Taqman）の定量ＲＴ−ＰＣＲ
製造者のガイドラインにしたがって、トリ（Tri）−試薬（シグマ社、ＵＫ）を使用して子宮内膜ＲＮＡ試料を子宮内膜バイオプシー（n＝３３）から抽出した。抽出し、定量した後、ＭｇＣｌ_２（５.５ｍＭ）、ｄＮＴＰｓ（各０.５ｍＭ）、ランダムヘキサマー類（２.５μＭ）、ＲＮＡａｓｅインヒビター（０.４Ｕ／μｌ）及びマルチスクライブ（multiscribe）逆転写酵素（１.２５Ｕ／μｌ；全てはＰＥビオシステムズ、ウォリントン、英国、から入手）を使ってＲＮＡ試料を逆転写した。この混合物を等分して個々のチューブに入れ（１６μｌ／チューブ）、鋳型ＲＮＡを加えた（１００ｎｇ／μｌＲＮＡの４μｌ／チューブ）。短時間の遠心分離によって混合した後、試料を２５℃で９０分間、４８℃で４５分間及び９５℃で５分間インキュベートした。その後ｃＤＮＡ試料を−２０℃で保存した。ＤＮＡ汚染をコントロールするために、逆転写酵素を含まないチューブを含ませた。

ｃＤＮＡ発現を測定するために、タックマン緩衝液（５.５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２００μＭ ｄＡＴＰ、２００μＭ ｄＣＴＰ、２００μＭ ｄＧＴＰ、４００μＭ ｄＵＴＰ）、リボソーム１８Ｓ前向き及び逆向きプライマー及びプローブ（全て５０ｎＭ）、ＥＰレセプターのための前向き及び逆向きプライマー類（３００ｎＭ）、ＥＰレセプタープローブ（１００ｎＭ）、ＡｍｐＥｒａｓｅＵＮＧ（０.０１Ｕ／μｌ）及びＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ ＤＮＡポリメラーゼ（０.０２５Ｕ／μｌ；全てＰＥビオシステムズ社から）を含む反応混合物を調製した。混合後、４８μｌを等分して別々のチューブに入れ、２μｌ／レプリケート（４０ｎｇ）のｃＤＮＡを加え、混合し、その後二重の２４μｌ試料をＰＣＲプレートに入れた。また鋳型なしの対照（水を含む）を含ませて三重にした。ウェルを光学的キャップで封止し、ＡＢＩプリズム７７００を用いてＰＣＲ反応を実施した。定量的ＰＣＲのためのＦＰレセプタープライマー及びプローブを、ＰＲＩＭＥＲ発現プログラム（ＰＥビオシステムズ社）を用いて設計した。ＦＰレセプタープライマー及びプローブの配列は次のようであった；前向き５’−ＧＣＡ ＧＣＴ ＧＣＧ ＣＴＴ ＣＴＴ ＴＣＡ Ａ−３’；逆向き５’−ＣＡＣ ＴＧＴ ＣＡＴ ＧＡＡ ＧＡＴ ＴＡＣ ＴＧＡ ＡＡＡ ＡＡＡ ＴＡＣ−３’；プローブ（ＦＡＭ標識化）５’−ＣＡＣ ＡＡＣ ＣＴＧ ＣＣＡ ＧＡＣ ＧＧＡ ＡＡＡ ＣＣＧ−３’（配列番号：それぞれ１５−１７）。

リボソーム性１８Ｓプライマー及びプローブ配列は次のようであった；前向き５’−ＣＧＧ ＣＴＡ ＣＣＡ ＣＡＴ ＣＣＡ ＡＧＧ ＡＡ−３’；逆向き５’−ＧＣＴ ＧＧＡ ＡＴＴ ＡＣＣ ＧＣＧ ＧＣＴ−３’；プローブ（ＶＩＣ標識）５’−ＴＧＣ ＴＧＧ ＣＡＣ ＣＡＧ ＡＣＴ ＴＧＣ ＣＣＴ Ｃ−３’（配列番号：それぞれ１８−２０）。データを分析し、配列検知器ｖ１.６３（ＰＥビオシステムズ社）を使用し、製造者の指示通り処理した。つまり、ソフトウェアが、１８Ｓ対照及びＦＰレセプター両方について、蛍光が所定のレベルに到達する反応サイクル数を計算する。これは各試料におけるＦＰレセプターの相対的発生量であり、内部陽性対照に比較することによって相対的発現が測定できる。結果は内部陽性標準に対する相対的発現としてあらわされる。

総イノシトールリン酸（ＩｎｓＰ）アッセイ
総ＩｎｓＰ産生のＰＧＦ_２α刺激は報告されたものと同様であった（２１）。つまり、組織試料又はイシカワ細胞を、１％透析ずみ加熱不活性化ＦＣＳ及び０.５μＣｉ／ウェルのｍｙｏ−［^３Ｈ］イノシトール（アマーシャム・ファルマシア・ビオテク（Amersham Pharmacia Biotech））を含む無イノシトールＤＭＥＭと共に４８時間インキュベートした。培地を除去し、細胞を、１０ｍＭ ＬｉＣｌを含む１ｍｌの緩衝液（１４０ｍＭ ＮａＣｌ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、４ｍＭ ＫＣｌ、８ｍＭグルコース、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン）で洗った。その後細胞をインヒビター類を含む又は含まない１ｍｌ緩衝液中において３７℃で１時間インキュベートした。インキュベーション後、アゴニストを必要濃度に加え、細胞を１時間インキュベートした。アゴニストを除去し、氷冷１０ｍＭ蟻酸５００μｌの添加によって反応を停止し、それを４℃で３０分間インキュベーとした。総［^３Ｈ］イノシトールリン酸を、ＡＧ１−Ｘ８アニオン交換樹脂（ビオーラド社）上で蟻酸細胞抽出物から分離し、１Ｍ蟻酸アンモニウム／０.１Ｍ蟻酸溶液で溶出した。関連放射能を液体シンチレーション計数によって測定し、改良ロウリー法によって測定した蛋白濃度に対してプロットした。

増殖アッセイ
イシカワ細胞の増殖を、ＢｒｄＵ取込みＥＬＩＳＡ（ロッシュ・ディアグノスティック社、マンハイム、ドイツ）を使用して測定した。つまり、イシカワ細胞を９６−ウェルプレートに５×１０^３細胞／ウェルを接種し、一晩接着させた。次に細胞をインドメタシン１.５μｇ／ｍｌで２４時間、欠乏状態にし、その後インドメタシンを含む無血清培地中で２４時間ＰＧＦ_２α処理（１ｎＭ−１μＭ）をした。ＰＧＦ_２α添加の６０分前にインヒビター類を細胞に加えた。対照ウェルには同濃度のビヒクルを加えた。２４時間の処理後、細胞をＢｒｄＵで４時間標識化し、固定し、ＢｒｄＵ取込みを標準免疫組織化学的方法によって分析した。結果を未処理細胞のパーセンテージとしてプロットした。

統計
適切な場合は、データをＡＮＯＶＡ統計分析及びフィッシャーＰＬＳＤ検定にかけ（Statview 4.0；アバカス・コンセプト社、ＵＳＡ）、ｐ＜０.０５の際に統計的に有意であるとした。

結果
ヒト子宮内膜におけるＦＰレセプター発現は、周期全体で明白な局在パターンを示した。ＦＰレセプターは月経周期の中期−及び後期増殖段階においてのみ、腺上皮細胞に局在し、試験したその他の全てのバイオプシーにはなかった。血管周囲細胞には時々発現が認められるに過ぎず、月経周期の段階とは無関係であった。子宮腺癌バイオプシーにおいてもＦＰレセプター発現は上皮細胞に局在していた。ＦＰレセプターの上皮細胞発現は全ての分化型に認められ、低程度、中程度又は十分に分化した試料間でパターン変化は識別されなかった。

子宮内膜試料及び腺癌試料両方におけるＦＰレセプターｍＲＮＡ発現の定量をタックマン定量ＲＴ−ＰＣＲによって測定した。初期増殖期（０.０６±０.０２）に比較して、及び月経周期の全ての分泌期（０.０７±０.０１）に比較して、相対的ＦＰレセプター発現の有意な増加が中期ないし後期の増殖性子宮内膜に認められた（０.４０±０.０２；ｐ≦０.０５）。ヒト腺癌試料内では、相対的ＦＰレセプターｍＲＮＡ発現はサイクル子宮内膜（０.１５±０.０４）に比較して有意に増加した（１１６.３±６３.６）。腺癌の異なる病期の間に相関関係は認められなかったが、これらの組織内では大きい変動が認められた。

ヒト子宮内膜では、ＰＧＦ_２α処理後、総ＩｎｓＰ産生が濃度依存的に増加する。最大ＩｎｓＰ動員はＰＧＦ_２α１００ｎＭで認められ、Ｕ７３１２２ ２μＭ（ＰＬＣのインヒビター）によって抑制される。総イノシトールリン酸の産生はＰＧＦ_２α処理後のイシカワ細胞においても測定された。ＰＧＦ_２αは総ＩｎｓＰの濃度依存性増加をもたらし、ＰＧＦ_２α１００ｎＭが２９ｃｐｍ／ｍｇ蛋白という最大値をもたらす。

イシカワ細胞をＰＧＦ_２α１００ｎＭで処理すると、イシカワ細胞の細胞外調節キナーゼ（ＥＲＫ）のリン酸化が起きた。ＰＧＦ_２α１００ｎＭで１０分間処理すると、天然ＥＲＫに比較してリン酸化ＥＲＫ強度の６.６±０.７倍の増加が起きた。

イシカワ細胞におけるＰＧＦ_２αの増殖効果を、ＢｒｄＵの取込みの測定によって確認した。ＰＧＦ_２αはＢｒｄＵ取込みを濃度依存的に増加させ、１００ｎＭでそれは最大になった（１３６.３±７.４８％）。細胞をＥＲＫ１／２インヒビター（ＰＤ９８０５９ ５０μＭ）で前処理すると、基礎的増殖の減少が起きた（８４.０±５.８％）；ただしＰＧＦ_２αはＰＤ９８０５９ ５０μＭの存在下で依然として増殖を濃度依存的に増加させた（１００ｎＭ ＰＧＦ_２α誘起性１１９.４±１１.２％対照ＢｒｄＵ取込み）。ＰＬＣβのインヒビター（Ｕ７３１２２ ２μＭ）と共に予備的インキュベーションを行った場合も基礎的増殖はわずかに減少し（９３.９±１.９％）、それに加えて、ＰＧＦ_２α処理後は増殖の濃度依存的増加が抑制された（１００ｎＭ ＰＧＦ_２αによるＢｒｄＵ取込みは１０６.１±６.６％）。

検討
我々は増殖性子宮内膜及び種々の病期の腺癌からの上皮細胞のＦＰレセプターの発現増加を明らかにした。さらに我々はヒト子宮内膜腺癌由来のイシカワ細胞における機能性ＦＰレセプター発現を定量し、明らかにした。イシカワ細胞において、ＰＧＦ_２αはＩＰ３産生及びｐ４２／ｐ４４ＭＡＰＫ（ＥＲＫ）のリン酸化を誘起した。さらに、ＰＧＦ_２αと共に一晩インキュベーション後、イシカワ細胞の細胞増殖は増加し、それはＰＬＣ阻害によって抑制された。

ＰＧＦ_２αが哺乳動物組織の細胞増殖に役割を演ずることはこれまで証明されていなかった。ＰＧＦ_２αが結腸腺癌に関係しているかどうかを確認する諸研究は、ＨＣＴ−８及びＨＴ−２９ヒト結腸腺癌細胞系にＰＧＦ_２αによる増殖が起きないことを証明した。ＦＰレセプターノックアウトマウスは子宮内膜の生理学に何ら異常を示さないが、その代わり子宮筋層の機能不全が明らかにされる：雌が子マウスを満期に分娩することができない（２２）。

ここに開示したデータはヒト子宮内膜上皮細胞におけるＰＧＦ_２αの増殖効果の最初の証明である。最大ＦＰレセプター発現は、エストロゲン濃度が上昇している中期−後期の増殖性子宮内膜に認められる。

理論によって束縛されるものではないが、腺癌試料に認められる高いＦＰレセプター発現はプロゲステロンレセプターのレベルに関連すると考えられる；この際ＰＲ_Ａ：ＰＲ_Ｂの比率が子宮内膜癌において重要であるらしい（２３）。乳癌、子宮内膜及び卵巣など生殖組織の癌においてはエストロゲンが細胞増殖を促進し、疾患の進行に関係している（２４）。子宮内膜において、プロゲステロンは、細胞分化を促進することによってエストロゲン効果に対抗し、プロゲスチン治療は子宮内膜癌の治療に有効であることが判明した（２３、２５）。しかし、治療効果はこれらの腫瘍が機能性プロゲステロンレセプター（ＰＲ）を発現する場合のみであり（２５）、ホルモン補充療法（ＨＲＴ）においてプロゲスチンとエストロゲンとを組み合わせてＰＲ発現を高めると、子宮内膜癌のリスクが減少することが判明している（２６、２７）。例えば、プロゲステロンに対する反応性の喪失はプロゲステロン阻害の喪失を起こすことができるし、子宮腺癌に認められるＦＰレセプター発現の増加が観察されたことを説明できる。

イシカワ、子宮内膜上皮細胞、は正常子宮内膜より高い濃度のＦＰレセプターを発現し、ＰＧＦ_２αには反応性である。我々はこれまでに確認されているように（２８、２９）、ＰＧＦ_２α処理後のこれら細胞においてＩｎｓＰの動員とＥＲＫのリン酸化を観察した。さらに、ＰＧＦ_２αは、ＰＬＣ阻害に敏感なイシカワ細胞の増殖の増加を誘発した。これはＰＧＦ_２αに反応する上皮細胞増殖を示した最初の証明された報告である。これらの考察は正常上皮細胞増殖及び子宮内膜腺癌（この際ＦＰレセプター発現が増加する）におけるＰＧＦ_２αの役割を支持するものである。

要するに、これはＦＰレセプター発現及び局在をヒト子宮内膜組織及びヒト子宮内膜腺癌で証明した最初の特許公報である。我々は、ＦＰレセプターの上皮細胞発現を証明し、ＰＧＦ_２α処理後の子宮内膜上皮細胞、イシカワ、の増殖の増加を証明した。これらの研究は上皮細胞増殖におけるＰＧＦ_２αの役割を明らかに示し、これが、ＮＳＡＩＤ治療によって子宮内膜細胞増殖及び子宮内膜癌の亢進が抑制される一つのメカニズムであることを示唆する。

ＦＰレセプターアンタゴニストによる子宮癌の治療。
子宮癌にかかった患者にＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、あるいはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストによる子宮癌の治療。
子宮癌にかかった患者にＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０、及びＡＨ６８０９を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストによる子宮癌の治療。
子宮癌にかかった患者にＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０、及びＡＨ２３８４８Ｂを、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニストによる類線維症の治療。
類線維症にかかった患者に、ＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストによる類線維症の治療。
類線維症にかかった患者にＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０、及びＡｈ６８０９を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストによる類線維症の治療。
類線維症にかかった患者にＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０、及びＡＨ２２９２１を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニストによる子宮内膜炎の治療。
子宮内膜炎にかかった患者にＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ２レセプターアンタゴニストによる子宮内膜炎の治療。
子宮内膜炎にかかった患者に、ＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０、及びＡＨ６８０９を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

ＦＰレセプターアンタゴニスト及びＥＰ４レセプターアンタゴニストによる子宮内膜炎の治療。
子宮内膜炎にかかった患者に、ＡＬ−３１３８又はＡＬ−８８１０、及びＡＨ２２９２１を、治療部位の活性作用物質の治療的濃度が治療期間を通じて理想的にはＥＣ９０の濃度に維持され、好ましくはＥＣ５０以下にならないような用量及び頻度で投与する。この治療は、患者の容認性、副作用の回避及び全身的バイオアベイラビリティに応じて、経口的に、或いはより局所的に行われる。

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29. Stocco, C. 0., Lau, L. F., and Gibori, G. A calcium/calmodulin-dependent activation of ERK1/2 mediates JunD phosphorylation and induction of nur77 and 20alpha-hsd genes by prostaglandin F2alpha in ovarian cells. J Biol Chem, 277. 3293-3302., 2002.

その他参考文献
Ashby, B. (1998) Co-expression of prostaglandin receptors with opposite effects: a model for homeostatic control of autocrine and paracrine signalling. Biochem Pharmacol 55: 239-246.
Coleman, RA, Smith, WL, Narumiya, S. (1994) International Union of Pharmacology classification of prostanoid receptors: properties, distribution, and structure of the receptors and their subtypes. Pharmacol Rev 46: 205-229.
DeWitt, DL. (1991) Prostaglandin endoperoxide synthase: regulation of enzyme expression. Biochim Biophys Acta 1083: 121-134.
Herschman, HR. (1996) Prostaglandin synthase 2. Biochirn Biophys Acta 1299: 125-140.
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ＦＰレセプターのインサイツハイブリダイゼーションを示す図である。パネルａ−ｆは初期増殖期（ａ）、中期増殖期（ｂ）、後期増殖期（ｃ）、初期分泌期（ｄ）、中期分泌期（ｅ）及び後期分泌期（ｆ）における正常ヒト子宮内膜である。パネルｇ−ｉは、腺癌組織の分化が乏しい（ｇ）、中程度の（ｈ）、及び十分な試料である。 ａ）正常ヒト子宮内膜及びｂ）腺癌組織におけるＦＰレセプターの定量ＲＴ−ＰＣＲ発現の図である（ｐ＜０.０５）。ａ）において、ＥＰは初期増殖期であり、ＭＰ／ＬＰは中期／後期増殖期であり、ＥＳは初期分泌期で、ＬＳは後期分泌期である。ｂ）において、「サイクル」はａ）からのＥＰ、ＭＰ／ＬＰ、ＥＳ及びＬＳの平均値である。 ヒト子宮内膜における総イノシトールリン酸産生を示す図である（ｎ＝２）。 イシカワ細胞におけるＰＧＦ_２α誘導ＥＲＫリン酸化の図である。ＰＧＦ_２α１００ｎＭを１０及び３０分間インキュベートした。ＰＧＦ_２α処理の前にＵ７３１２２ ２μＭを６０分間、予備的にインキュベートした。 ＰＧＦ_２α誘導ＢｒｄＵ取り込みの図である。ＰＧＦ_２α処理後のイシカワ細胞の増殖。細胞を一晩ＰＧＦ_２αで処理した。ＰＧＦ_２αを添加する６０分前に全てのインヒビターを加えた（ｎ≧４；ｐ＜０.０５）。

Claims (31)

1. 女性個体における子宮の病的状態を治療又は防止する方法であって、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１種のＰＧＦ_２α阻害剤を前記個体に投与することを含む方法。
2. 子宮の病的状態が子宮筋層又は子宮内膜の細胞の異常増殖と関連する請求項１記載の方法。
3. 子宮の病的状態が子宮癌又は子宮内膜又は子宮筋層の病的状態である請求項１又は請求項２記載の方法。
4. 子宮内膜の病的状態が子宮内膜炎である請求項３記載の方法。
5. 子宮筋層の病的状態が類線維症である請求項３記載の方法。
6. ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２α阻害剤がＰＧＦ_２αとＦＰレセプターとの結合を阻止又は低減する請求項１ないし５のいずれか１項に記載の方法。
7. ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ_２α阻害剤がＰＧＦ_２αとＦＰレセプターとの相互作用、又はＦＰレセプターと関連Ｇ_ａｑ蛋白との相互作用に影響を及ぼし、それによってＰＧＦ_２α−ＦＰ媒介性シグナル伝達経路を阻害又は破壊する請求項１ないし６のいずれか１項に記載の方法。
8. 阻害剤がＦＰレセプターのアンタゴニストである請求項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。
9. ＦＰレセプターアンタゴニストが、ＰＧＦ_２αジメチルアミド；ＰＧＦ_２αジメチルアミン；ＡＬ−８８１０（（５Ｚ，１３Ｅ）−（９Ｓ，１１Ｓ，１５Ｒ）−９，１５−ジヒドロキシ−１１−フルオロ−１５−（２−インダニル）−１６，１７，１８，１９，２０−ペンタノル−５，１３−プロスタジエン酸）；ＡＬ−３１３８（１１−デオキシ−１６−フルオロＰＧＦ_２α）；フロレチン；グリベンクラミド；リドグレル；ＰＨＧ１１３；ＰＣＰ−１（ｒｖｋｆｋｓｑｑｈｒｑｇｒｓｈｈｌｅｍ）；ＰＣＰ−２（ｒｋａｖｌｋｎｌｙｋｌａｓｑｃｃｇｖｈｖｉｓｌｈｉｗｅｌｓｓｉｋｎｓｌｋｖａａｉｓｅｓｐｖａｅｋｓａｓｔ）；ＰＣＰ−３（ｃｌｓｅｅａｋｅａｒｒｉｎｄｅｉｅｒｑｌｒｒｄｋｒｄａｒｒｅ−ＮＨ_２）；ＰＣＰ−４（ｋｄｔｉｌｑｌｎｌｋｅｙｎｌｖ−ＮＨ_２）；ＰＣＰ−８（ｉｌｇｈｒｄｙｋ）；ＰＣＰ−１０（ｗｅｄｒｆｙｌｌ）；ＰＣＰ−１３（ＩＬＧＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１４（ＹＱＤＲＦＹＬＬ）；（ＩＬＡＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.７（ＩＬＡＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.８（ＩＬａＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１１（ＩＬＧＦＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１３（ＩＬＧＨＫＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１４（ＩＬＧＨＲＮＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１８（ＩＬＧＨＱＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.２０（ＩＬＧＨＲＤＹ−アミド）；ＰＣＰ−１３.２１（ＩＬＧＨＲＤＹＫ−アミド）；ＰＣＰ−１３.２２（ＩＬＧＷＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.２４（ＩＬＧＸＲＤＹＫ）；及びＰＣＰ−１５（ＳＮＶＬＣＳＩＦ）の任意の１種類以上である請求項８記載の方法。
10. 阻害剤がＰＧＦ_２αのアンタゴニストである請求項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。
11. ＰＧＦ_２αアンタゴニストが抗ＰＧＦ_２α抗体である請求項１０記載の方法。
12. ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストも前記個体に投与される請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の方法。
13. ＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストがＡＨ６８０９、ＷＯ００／１５６０８に記載されるオメガ置換プロスタグランジンＥ誘導体（小野薬品）、ＡＨ２３８４８Ｂ、ＡＨ２２９２１Ｘ、ＩＦＴＳＹＬＥＣＬ、ＩＦＡＳＹＥＣＬ、ＩＦＴＳＡＥＣＬ、ＩＦＴＳＹＥＡＬ、ＩＬＡＳＹＥＣＬ、ＩＦＴＳＴＤＣＬ、ＴＳＹＥＡＬ（４−ビフェニルアラニンを含む）、ＴＳＹＥＡＬ（ホモフェニルアラニンを含む）、ＷＯ００／０３９８０に記載される５−チア−プロスタグランジンＥ誘導体（小野薬品）、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−クロロ−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オンカリウム塩、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−メチル−３−フロイル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−メチル−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−トリアゾール−３−オン、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−［２−（メチルピロール）カルボニル］スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オンの１種類以上である請求項１２記載の方法。
14. 女性個体における子宮の病的状態を治療又は防止する医薬の製造における、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１種のＰＧＦ_２α阻害剤の使用。
15. 前記個体にＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストが投与される請求項１４記載の使用。
16. 女性個体の子宮の病的状態を治療又は防止する医薬の製造におけるＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストの使用であって、ＦＰレセプターに対する効果を有するＰＧＦ２αを阻害する少なくとも１種の薬剤が前記女性個体に投与される使用。
17. 女性個体の子宮の病的状態を治療又は防止するための薬剤の製造における、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤と、ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストとの組み合わせの使用。
18. 子宮の病的状態が子宮癌また子宮内膜又は子宮筋層の病的状態である請求項１４ないし１７のいずれか１項に記載の使用。
19. 女性個体における子宮の病的状態を治療又は防止するための、ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１種のＰＧＦ_２α阻害剤を含有する医薬組成物。
20. ＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストも含有する請求項１９記載の医薬組成物。
21. 子宮の病的状態が子宮癌又は子宮内膜又は子宮筋層の病的状態である請求項１９又は請求項２０記載の医薬組成物。
22. ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤を含んでなる膣リング又はタンポン又は子宮内デバイス。
23. 阻害剤がＦＰレセプターのアンタゴニストを含んでなる請求項２２記載の膣リング又はタンポン又は子宮内デバイス。
24. ＦＰレセプターアンタゴニストが、ＰＧＦ_２αジメチルアミド；ＰＧＦ_２αジメチルアミン；ＡＬ−８８１０（（５Ｚ，１３Ｅ）−（９Ｓ，１１Ｓ，１５Ｒ）−９，１５−ジヒドロキシ−１１−フルオロ−１５−（２−インダニル）−１６，１７，１８，１９，２０−ペンタノル−５，１３−プロスタジエン酸）；ＡＬ−３１３８（１１−デオキシ−１６−フルオロＰＧＦ２α）；フロレチン；グリベンクラミド；リドグレル；ＰＨＧ１１３；ＰＣＰ−１（ｒｖｋｆｋｓｑｑｈｒｑｇｒｓｈｈｌｅｍ）；ＰＣＰ−２（ｒｋａｖｌｋｎｌｙｋｌａｓｑｃｃｇｖｈｖｉｓｌｈｉｗｅｌｓｓｉｋｎｓｌｋｖａａｉｓｅｓｐｖａｅｋｓａｓｔ）；ＰＣＰ−３（ｃｌｓｅｅａｋｅａｒｒｉｎｄｅｉｅｒｑｌｒｒｄｋｒｄａｒｒｅ−ＮＨ_２）；ＰＣＰ−４（ｋｄｔｉｌｑｌｎｌｋｅｙｎｌｖ−ＮＨ_２）；ＰＣＰ−８（ｉｌｇｈｒｄｙｋ）；ＰＣＰ−１０（ｗｅｄｒｆｙｌｌ）；ＰＣＰ−１３（ＩＬＧＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１４（ＹＱＤＲＦＹＬＬ）；（ＩＬＡＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.７（ＩＬＡＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.８（ＩＬａＨＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１１（ＩＬＧＦＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１３（ＩＬＧＨＫＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１４（ＩＬＧＨＲＮＹＫ）；ＰＣＰ−１３.１８（ＩＬＧＨＱＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.２０（ＩＬＧＨＲＤＹ−アミド）；ＰＣＰ−１３.２１（ＩＬＧＨＲＤＹＫ−アミド）；ＰＣＰ−１３.２２（ＩＬＧＷＲＤＹＫ）；ＰＣＰ−１３.２４（ＩＬＧＸＲＤＹＫ）；及びＰＣＰ−１５（ＳＮＶＬＣＳＩＦ）の任意の１種類以上を含んでなる請求項２３記載の膣リング又はタンポン又は子宮内デバイス。
25. 阻害剤がＰＧＦ_２αのアンタゴニストを含んでなる請求項２２記載の膣リング又はタンポン又は子宮内デバイス。
26. ＰＧＦ_２αアンタゴニストが抗ＰＧＦ_２α抗体を含んでなる請求項２５記載の膣リング又はタンポン又は子宮内デバイス。
27. さらにＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを含んでなる請求項２２ないし２６のいずれか１項に記載の膣リング又はタンポン又は子宮内デバイス。
28. ＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストが、ＡＨ６８０９、ＷＯ００／１５６０８に記載されるオメガ置換プロスタグランジンＥ誘導体（小野薬品）、ＡＨ２３８４８Ｂ、ＡＨ２２９２１Ｘ、ＩＦＴＳＹＬＥＣＬ、ＩＦＡＳＹＥＣＬ、ＩＦＴＳＡＥＣＬ、ＩＦＴＳＹＥＡＬ、ＩＬＡＳＹＥＣＬ、ＩＦＴＳＴＤＣＬ、ＴＳＹＥＡＬ（４−ビフェニルアラニンを含む）、ＴＳＹＥＡＬ（ホモフェニルアラニンを含む）、ＷＯ００／０３９８０に記載される５−チア−プロスタグランジンＥ誘導体（小野薬品）、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−クロロ−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］フェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン カリウム塩、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−メチル−３−フロイル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（３−メチル−２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オン、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−（２−チオフェンカルボニル）スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］１，２，４−トリアゾール−３−オン、５−ブチル−２，４−ジヒドロ−４−［［２’−［Ｎ−［２−（メチルピロール）カルボニル］スルファモイル］ビフェニル−４−イル］メチル］−２−｛２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，２，４−トリアゾール−３−オンの１種類以上である請求項２７記載の膣リング又はタンポン又は子宮内デバイス。
29. ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１種のＰＧＦ２α阻害剤及びＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニストを含有する組成物。
30. ＦＰレセプターに対する効果を有する少なくとも１つのＰＧＦ_２α阻害剤及びＰＧＥＳのインヒビター及び／又はＥＰ２又はＥＰ４のアンタゴニスト、及び薬物学的に容認される担体を含有する医薬組成物。
31. 医療に使用するための請求項２９記載の組成物。

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