JP2004067584A

JP2004067584A - 新規ピリドン誘導体

Info

Publication number: JP2004067584A
Application number: JP2002228811A
Authority: JP
Inventors: Takuro Shimatani; 嶋谷　卓朗; Yoshio Hosoya; 細谷　宜生
Original assignee: Sumitomo Pharmaceuticals Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Pharma Co Ltd
Priority date: 2002-08-06
Filing date: 2002-08-06
Publication date: 2004-03-04

Abstract

【課題】セリンプロテアーゼ阻害活性を有し、前凝固、高血圧症、慢性気管支炎、膵炎、慢性関節リウマチ、心不全、虚血性末梢循環障害、心筋虚血、静脈機能不全、心筋梗塞後の心不全進行、糖尿病性腎症、腎炎、動脈硬化症、高アルドステロン症、強皮症、糸球体硬化症、腎不全、アルツハイマー病、記憶欠乏症、うつ病、知覚機能障害、不安、緊張症状、不快精神状態、緑内障、高眼圧症、ＰＴＣＡ後再狭窄、喘息、鼻炎、またはアレルギー性疾患の治療剤として有用な化合物を提供する。
【解決手段】式（１）
【化１】

（式中、Ｒは水素原子またはカルボキシル基を表す。）
で表される化合物またはその塩。
【選択図】　なし。

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、セリンプロテアーゼに対して阻害作用を有する新規なピリドン誘導体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
セリンプロテアーゼは活性部位にセリン残基を有するペプチダーゼ（ＥＣ３．４．２１群及びＥＣ３．４．１６群）の総称である。セリンプロテアーゼを阻害する物質として、天然物では血漿中に含まれるα１−アンチキモトリプシンや、放線菌の生産するキモスタチンなどが知られており、合成化合物としてはジイソプロピルフルオロホスホリドなどのクロロメチルケトン誘導体や、ジイソプロピルフルオロホスフェートなどが知られているが、医薬品として実用化はされていない。
【０００３】
セリンプロテアーゼは様々な疾患と密接に関係している。
【０００４】
例えば、セリンプロテアーゼの一種であるカテプシンＧは、多形核白血球（ＰＭＮ）の顆粒中に主に発現され、ＰＭＮ脱顆粒の間に放出され、血小板凝集を刺激し、血管壁のプロテオグリカン、糖タンパク質、及びコラーゲンを加水分解するセリンプロテアーゼであり、その阻害剤は、炎症及び前凝固（ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ）症状の治療及び予防に適すると考えられる。
【０００５】
また例えば好中球エラスターゼは、感染や炎症性疾患時に出現する好中球の顆粒から大量に放出されるセリンプロテアーゼであり、肺、軟骨、血管壁、皮膚などの生体内結合組織の間質を構成する蛋白質エラスチン、コラーゲン、プロテオグリカン、フィブロネクチンなどを分解する作用を有する。炎症部位でのエラスターゼの過剰放出による組織障害が関与する疾患として、例えば、慢性気管支炎、喘息、膵炎、腎炎、慢性関節リウマチなどの炎症疾患が知られている。従って、エラスターゼ阻害剤はこれらの疾患の治療あるいは予防に適すると考えられる。
【０００６】
また例えばキマーゼは、肥満細胞分泌顆粒中に見出されたセリンプロテアーゼであり、心臓、皮膚、肺、肝臓、腎皮質に多く分布している。ヒト心臓におけるアンジオテンシンＩＩの産生の８０％以上に関与している。また、エンドセリン生成過程、サブスタンスＰ、バソアクティブ・インテスティナル・ポリペプチド（ＶＩＰ）、アポ蛋白Ｂ等の多くの生理活性物質を基質とし、コラゲナーゼ等の他の生体内プロテアーゼの活性化にも関与している。更にはＡｐｏＡ−Ｉを基質とすることにより、コレステロールの逆転相系の阻害作用や、タイプＩＶコラーゲンやフィブロネクチンの細胞外基質を切断し、ヒスタミン等とともに血管透過性を亢進し、ヒスタミン作用を増強し、血清アルブミンからヒスタミン遊離ペプチドを生成し、また、ＩｇＧを限定分解し、白血球遊走因子を形成し、炎症性サイトカインの一つであるインターロイキン−１βの前駆体を活性化する等の生体内作用をも有する。従って、キマーゼに対する阻害剤は、心血管障害治療剤、動脈硬化治療剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤等治療及び予防に適すると考えられる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
セリンプロテアーゼ阻害剤が上記のような疾患の治療薬として有効であると考えられるため、より効果の高く副作用の少ない化合物を求めて新規なセリンプロテアーゼ阻害剤の探索が行われている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らはこのような背景のもと、セリンプロテアーゼを阻害する低分子化合物を、微生物代謝産物から探索した結果、ペニシリウム属カビの培養液中より、　式（１ａ）
【化２】

および式（１ｂ）
【化３】

で表される新規なピリドン誘導体を見いだし、さらに研究を重ねて本発明を完成するに至った。
【０００９】
即ち、本発明は以下のものに関する。
〔１〕　式（１）
【化４】

（式中、Ｒは水素原子またはカルボキシル基を表す。）
で表される化合物またはその塩。
〔２〕　ペニシリウム属に属する、〔１〕記載の化合物またはその塩生産菌を培養して、その培養物から〔１〕記載の化合物またはその塩を採取する、〔１〕記載の化合物またはその塩の製造方法。
〔３〕　ペニシリウム属に属する、〔１〕記載の化合物またはその塩の生産菌がペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ．）ＳＰＦ−３２６２９株である、〔２〕記載の製造方法。
〔４〕　ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ．）ＳＰＦ−３２６２９株。
〔５〕　〔１〕記載の化合物またはその塩を有効成分として含有するセリンプロテアーゼ阻害剤。
〔６〕　セリンプロテアーゼが、カテプシンＧ、エラスターゼ、およびキマーゼからなる群から選ばれる酵素である、〔５〕記載のセリンプロテアーゼ阻害剤。
〔７〕　〔１〕記載の化合物またはその塩を含有する、前凝固、高血圧症、慢性気管支炎、膵炎、慢性関節リウマチ、心不全、虚血性末梢循環障害、心筋虚血、静脈機能不全、心筋梗塞後の心不全進行、糖尿病性腎症、腎炎、動脈硬化症、高アルドステロン症、強皮症、糸球体硬化症、腎不全、アルツハイマー病、記憶欠乏症、うつ病、知覚機能障害、不安、緊張症状、不快精神状態、緑内障、高眼圧症、ＰＴＣＡ後再狭窄、喘息、鼻炎、またはアレルギー性疾患の治療剤。
【００１０】
式（１ａ）および式（１ｂ）の化合物は、本発明者らが佐賀県鹿島市の土壌より分離したカビＳＰＦ−３２６２９株を培養することにより、得ることができる。
【００１１】
ＳＰＦ−３２６２９株は次のような菌学的性質を有する。
【００１２】
オートミール寒天培地（日本製薬社製放線菌培地Ｎｏ．３「ダイゴ」）上では、コロニーの生育は早く、２７℃、１４日で直径５．４ｃｍ、ビロード状を呈する。コロニー表面には無色の菌糸と緑色の分生子が認められる。コロニー裏面は白色を呈する。分生子果の形成が豊富に認められ、子嚢果の形成、可溶性色素の産生は認められない。コーンミール寒天培地上では、コロニーの生育は比較的早く、２７℃、１４日で直径５．１ｃｍ、ビロード状を呈する。コロニー表面には無色の菌糸と緑色の分生子が認められる。コロニー裏面は白色を呈する。分生子果の形成が豊富に認められ、子嚢果の形成、可溶性色素の産生は認められない。麦芽エキス寒天培地上では、コロニーの生育はやや遅く、２７℃、１４日で直径３．８ｃｍ、やや盛り上がり、菌糸が豊富でビロード状を呈する。コロニー表面の色は中央が薄い黄色、中央を囲むように白くなり、周縁部は黄色である。コロニー裏面の色は中央がクリーム色で、周縁部が黄色である。分生子果の形成が少し認められるが、可溶性色素の産生および子嚢果の形成は認められない。ポテトデキストロース寒天培地上では、コロニーの生育は遅く、２７℃、１４日で直径３．１ｃｍ、やや盛り上がり、菌糸が豊富でビロード状を呈する。コロニー表面の色は中央が薄い黄色、中央を囲むように白くなり、周縁部は黄色である。コロニー裏面の色は中央が橙色で、周縁部が黄色である。分生子果の形成が少し認められるが、可溶性色素の産生および子嚢果の形成は認められない。
【００１３】
麦芽エキス寒天上で２７℃、２０日間培養した時の形態は次の通りである。分生子柄は長さ１００〜３００μｍで、ペニシリは、３〜４本のメトレの先端に３〜７本のフィアライドが生じる複輪生体対称型である。フィアライドの先端から分生子が５０〜１００個の連鎖を形成する。分生子は楕円形で、短径１．０〜１．５μｍ、長径２．０〜２．５μｍ、表面はしわ状である。コロニー周縁部では単輪生体もわずかに認められる。テレオモルフは認められない。
【００１４】
以上の菌学的性質より、本菌株は不完全菌亜門に分類され、ペニシリウム属に属する菌株であると同定し、ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ．）ＳＰＦ−３２６２９と命名し、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託した（受託日：平成１４年６月２５日；受託番号ＦＥＲＭ　Ｐ−１８９０６）。
【００１５】
上記カビの培養に使用される培地は液状でも固体でもよいが、通常は液体培地による振盪培養または通気撹拌培養が有利である。使用する培地は、特に限定されるものではないが、炭素源としては例えばグルコース、ショ糖、グリセリン、デンプン、デキストリン、糖蜜等が用いられ、また窒素源としては、例えばペプトン、カザミノ酸等の蛋白質加水分解物、肉エキス、酵母エキス、大豆粉、綿実粉、コーンスティープリカー、アミノ酸類等の有機窒素源や、アンモニウム塩や硝酸塩等の無機窒素源が用いられる。その他、浸透圧調整、ｐＨ調整、微量成分の補給等のために、各種リン酸塩、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、炭酸カルシウム等の無機塩類を添加することも可能である。さらに菌の生育を促進する目的で、各種ビタミン類、核酸関連化合物等を添加しても良い。なお、培養期間中に、シリコン油、ポリプロピレングリコール誘導体、大豆油等の消泡剤を添加することも可能である。
【００１６】
培養温度としては、好ましくは２０〜３５℃の範囲、さらに好ましくは２５〜３０℃の範囲の温度が挙げられる。培養期間としては例えば、５〜１５日間の範囲が挙げられる。培地のｐＨとして例えば、中性付近の範囲が挙げられる。
【００１７】
培養液から式（１ａ）および式（１ｂ）で表される化合物を単離するには、微生物の生産する二次代謝物の培養液から、通常使用される単離手段が使用できる。培養液上清中からの単離法としては、培養濾液からの通常の単離法、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法または吸着もしくは分配クロマトグラフィーおよびゲル濾過クロマトグラフィー等が挙げられる。これらの単離法は単独または組み合わせて行うことができる。また高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）や薄層クロマトグラフィーなどにより単離精製できる。培養菌体から目的物を単離する場合は、ろ過もしくは遠心分離等の手段で集めた菌体を、アセトン等の水溶性有機溶媒を用いて直接抽出することができる。抽出物は培養上清からの単離精製と同様の方法で、目的物を得ることができる。
【００１８】
前記式（１）で表される化合物またはその塩には水やエタノール等の医薬品として許容される溶媒との溶媒和物も含まれる。
【００１９】
前記式（１）で表される化合物は、常法に従いその薬学的に許容される塩とすることができる。このような塩としては塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等の無機酸との酸付加塩、ギ酸、酢酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、プロピオン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、酪酸、シュウ酸、マロン酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、炭酸、グルタミン酸、アスパラギン酸等の有機酸との酸付加塩、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の無機塩基との塩、トリエチルアミン、ピペリジン、モルホリン、ピリジン、リジン等の有機塩基との塩を挙げることができる。
【００２０】
また、前記式（１）で表される化合物またはその塩は不斉炭素原子を含み立体異性体が存在するが、それらには各異性体の混合物や単離されたものを含む。
【００２１】
前記式（１）で表される化合物またはその塩は、経口的または非経口的に投与することができる。すなわち通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で経口的に投与することができ、あるいは、例えば、その溶液、乳剤、懸濁液等の剤型にしたものを注射の型で非経口投与することができる。スプレー剤の型で鼻孔内投与することもできる。前記の適当な投与剤型は、例えば、許容される通常の担体、賦型剤、結合剤、安定剤、希釈剤等に有効成分を配合することにより製造することができる。また、薬学的に許容される緩衝剤、溶解補助剤、等張剤等を添加することもできる。
【００２２】
投与量および投与回数は、投与法と患者の年齢、体重、病状等によって異なるが、経口投与の場合は、通常、成人の一日当たり投与量は０．１〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜５００ｍｇの範囲で選択すればよい。
【００２３】
【実施例】
実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２４】
実施例１
式（１ａ）および式（１ｂ）で表される化合物の取得
グルコース２％、ショ糖５％、綿実粉２％、硝酸ナトリウム０．１％、Ｌ−ヒスチジン０．１％、リン酸２カリウム０．０５％、塩化カリウム０．０７％および硫酸マグネシウム７水和物０．００１４％を含み、ｐＨ７．０に調整した培地８０ｍＬを５００ｍＬ容量の坂口フラスコに分注しオートクレーブで滅菌した。これに斜面培養したペニシリウム・エスピーＳＰＦ−３２６２９株（独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター；受託日：平成１４年６月２５日；受託番号ＦＥＲＭ　Ｐ−１８９０６）を１白金接種し、２７℃、１３０ｒｐｍにて３日間振盪培養し、前培養液とした。上記と同じ組成の培地３００ｍＬを分注し、オートクレーブ滅菌した２Ｌ容量坂口フラスコ１６本のそれぞれに、前培養液を７ｍＬずつ植菌し、２７℃、１１５ｒｐｍで１１日間振とう培養した。
【００２５】
培養終了後、培養液を集め、アセトン５Ｌを加え、２時間攪拌抽出した。８０００ｒｐｍ、２０分間の遠心分離により得られる上清から、減圧下アセトンを留去して水溶液残渣を得た。この水溶液残渣を、ろ紙を用いたろ過により、ろ上物とろ液に分けた。ろ液をＤＩＡＩＯＮ^ＴＭ　ＨＰ−２０（三菱化学社製５．０φ×２５．０ｃｍ）を用いるカラムクロマトグラフィーに付し、蒸留水１．５Ｌ、２５％メタノール１．５Ｌ、５０％メタノール１．５Ｌ、７５％メタノール１．５Ｌ、１００％メタノール１．５Ｌ、１００％アセトン１．５Ｌを用いて順次溶出した。
【００２６】
１００％アセトン溶出画分をろ上物と混合して減圧濃縮し、５００ｍｇの黄色粗精製物を得た。これを５０ｍＬのクロロホルムに溶解し、シリカゲル（メルク社製キーゼルゲル６０、７０〜２３０メッシュ、３．５φ×２５ｃｍ）を用いるカラムクロマトグラフィーに付した。クロロホルム３００ｍＬ、クロロホルムとメタノールの９７：３混合液３００ｍＬ、クロロホルムとメタノールの９５：５混合液３００ｍＬ、クロロホルムとメタノールの９０：１０混合液３００ｍＬ、クロロホルムとメタノールの８０：２０混合液３００ｍＬ、クロロホルムとメタノールの７０：３０混合液３００ｍＬを用いて順次溶出した。クロロホルムとメタノールの８０：２０混合液と７０：３０混合液を併せ、減圧濃縮し粗精製物１０９ｍｇを得た。これをジメチルスルホキシドとメタノールの等量混合液３ｍＬに溶解し、１ｍＬを逆相ＨＰＬＣに付す操作を３回行った。逆相ＨＰＬＣの条件は、カラム：Ｗａｋｏｐａｋ^ＴＭ　Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ　５Ｃ１８ＨＧｐｒｅｐ（３０φ×５０ｍｍと３０φ×２５０ｍｍを連結、和光純薬工業製）、溶出液Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液、溶出液Ｂ：アセトニトリル、Ｂ液割合５５％一定、流速：１０ｍＬ／分、検出：２５４ｎｍにおける吸光度、とした。保持時間８１分から８７分の溶出画分を分取した。これを減圧濃縮することによって、ＳＰＦ−３２６２９−１（２１．６ｍｇ）を得た。
【００２７】
一方、上記ＤＩＡＩＯＮ^ＴＭ　ＨＰ−２０（三菱化学社製５．０φ×２５．０ｃｍ）を用いたカラムクロマトグラフィーの１００％メタノール溶出画分１．５Ｌを減圧濃縮し、４ｇの黄色粗精製物を得た。これを５０ｍＬのメタノールに溶解して、Ｓｅｐｈａｄｅｘ^ＴＭ　ＬＨ−２０（アマシャムファルマシアバイオテク社）（４．６φ×４８ｃｍ）を用いるカラムクロマトグラフィーに付し、メタノールで溶出した。１フラクションあたり３０ｍＬとなるように分画し、フラクション１１から１５を減圧濃縮し、１．５ｇの黄色粗精製物を得た。これを１５ｍＬのクロロホルムに溶解し、シリカゲル（メルク社製キーゼルゲル６０、７０〜２３０メッシュ、３．５φ×２２ｃｍ）を用いるカラムクロマトグラフィーに付した。クロロホルム１００ｍＬ、クロロホルムとメタノールの９８：２混合液３００ｍＬ、クロロホルムとメタノールの９５：５混合液３００ｍＬを用いて順次溶出し、１フラクションが２０ｍＬとなるように分取した。クロロホルムとメタノールの９５：５混合液の溶出画分１から溶出画分１５のうち、溶出画分１１から溶出画分１５までを集め、減圧濃縮して薄黄色の粗精製物を１５０ｍｇ得た。これをメタノール２ｍＬに溶解し、１ｍＬを逆相ＨＰＬＣに付す操作を２回行った。逆相ＨＰＬＣの条件は、カラム：Ｗａｋｏｐａｋ^ＴＭ　Ｗａｋｏｓｉｌ−ＩＩ　５Ｃ１８ＨＧｐｒｅｐ（３０φ×５０ｍｍと３０φ×２５０ｍｍを連結、和光純薬工業製）、溶出液Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸水溶液、溶出液Ｂ：アセトニトリル、Ｂ液割合３７％一定、流速：１０ｍＬ／分、検出：２５４ｎｍにおける吸光度、とした。保持時間６６分から７３分の溶出画分を分取した。これを減圧濃縮することによって、ＳＰＦ−３２６２９−２（２９．８ｍｇ）を得た。
【００２８】
化合物ＳＰＦ−３２６２９−１の物理化学的性状は以下のようであった。
【表１】
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
外観：淡黄色粉末
分子量：３４５
分子式：Ｃ_１８Ｈ_１９ＮＯ_６
高速電子衝撃質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）ｍ／ｚ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）：３４６（Ｍ＋Ｈ）^＋
高速電子衝撃質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）ｍ／ｚ（ｎｅｇａｔｉｖｅ）：３４４（Ｍ−Ｈ）⁻
高分解能高速電子衝撃質量スペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋：
実測値：３４６．１２９１
計算値：３４６．１２９１（Ｃ_１８Ｈ_２０ＮＯ_６）
紫外可視吸収スペクトルλｍａｘ（メタノール中）ｎｍ（ε）：
２０３（１６５００）、２１５ｓｈ（１３９００）、３０３（６３００）
赤外吸収スペクトルνｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：
３２４７、３０９３、２９６４、１７４８、１６４３、１６１７、１４６６
^１Ｈ―ＮＭＲ（アセトン−ｄ_６）δｐｐｍ：
０．９２（６Ｈ，ｄ，６．５）、２．１５（１Ｈ，ｍ）、２．４１（２Ｈ，ｄ，６．８）、６．３８（１Ｈ，ｓ）、６．７６（１Ｈ，ｓ）、７．４３（３Ｈ，ｄ，６．３）、７．５７（２Ｈ，ｄ，６．３）、１３．５１（１Ｈ，ｂｒｓ）
^１３Ｃ―ＮＭＲ（アセトン−ｄ_６）δｐｐｍ：
２２．５（２Ｃ）、２６．３、４３．３、７３．４、９６．７、１００．２、１２８．１（２Ｃ）、１２９．５（２Ｃ）、１２９．８、１３６．８、１５３．２、１６６．４、１７１．４、１７２．８、１７５．１
溶解性：水、ヘキサンに不溶、メタノール、ＤＭＳＯに可溶
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
これらから化合物ＳＰＦ−３２６２９−１の構造式を：
【化５】

と決定した。
【００２９】
また、化合物ＳＰＦ−３２６２９−２の物理化学的性状は以下のようであった。
【表２】
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
外観：淡黄色粉末
分子量：３０１
分子式：Ｃ_１７Ｈ_１９ＮＯ_４
高速電子衝撃質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）ｍ／ｚ（ｐｏｓｉｔｉｖｅ）：３０２（Ｍ＋Ｈ）^＋
高速電子衝撃質量スペクトル（ＦＡＢ−ＭＳ）ｍ／ｚ（ｎｅｇａｔｉｖｅ）：３００（Ｍ−Ｈ）⁻
高分解能高速電子衝撃質量スペクトル（ＨＲＦＡＢ−ＭＳ）ｍ／ｚ（Ｍ＋Ｈ）^＋：
実測値：３０２．１３９２
計算値：３０２．１３９２（Ｃ_１７Ｈ_２０ＮＯ_４）
紫外可視吸収スペクトルλｍａｘ（メタノール中）ｎｍ（ε）：
２０６（２２２００）、２８６（４３００）
赤外吸収スペクトルνｍａｘ（ＫＢｒ）ｃｍ^−１：
３２４７、３０９９、２９６４、１７４８、１６４３、１６２４、１４５８
^１Ｈ―ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δｐｐｍ：
０．８８（３Ｈ，ｄ，６．７）、０．８９（３Ｈ，ｄ，６．７）、２．０８（１Ｈ，ｍ）、２．３２（２Ｈ，ｄ，７．０）、６．０９（１Ｈ，ｓ）、６．２３（１Ｈ，ｓ）、６．６３（１Ｈ，ｓ）、７．３２（１Ｈ，ｍ）、７．３３（２Ｈ，ｍ）、７．３４（２Ｈ，ｍ）
^１３Ｃ―ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δｐｐｍ：
２２．２、２２．３、２５．６、４３．０、７２．８、９７．７、１０４．１、１２７．２（２Ｃ）、１２９．１（２Ｃ）、１２９．５、１３５．３、１４８．４、１６４．４、１７１．４、１７２．１
溶解性：水、ヘキサンに不溶、メタノール、ＤＭＳＯに可溶
―――――――――――――――――――――――――――――――――――
これらから化合物ＳＰＦ−３２６２９−２の構造式を：
【化６】

と決定した。
【００３０】
実施例２　　ヒト好中球由来カテプシンＧ阻害活性の測定
カテプシンＧ阻害活性の測定には、ヒト好中球由来カテプシンＧ（ＩＣＮ　Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製、カタログ番号１９１３４４）を用いた。基質としては、Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＭＣＡ（式中、Ｓｕｃはスクシニル基を、ＭＣＡは４−メチルクマリン−７−イルアミノ基を表す。以下同じ。）（ペプチド研究所社製、カタログ番号３１１４−ｖ）を用いた。即ち、１００ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）、１．６Ｍ塩化ナトリウム、１００μＭＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＭＣＡ、１μｇ／ｍＬヒト好中球由来カテプシンＧおよびジメチルスルホキシド１．０μＬまたは供試阻害剤を含むジメチルスルホキシド１．０μＬを添加した反応系１００μＬで３７℃、１２０分間反応をおこなった。ヒト好中球由来カテプシンＧにより切断を受けて基質から遊離される７−アミノ−４−メチルクマリンの量を、励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍにおける蛍光強度を測定することで阻害活性を測定し、酵素活性を５０％阻害するのに要する阻害剤の濃度（ＩＣ_５０）を求めた。結果は次の通りであった。
【表３】

【００３１】
実施例３　　ヒト好中球由来エラスターゼ阻害活性の測定
エラスターゼ阻害活性の測定には、ヒト好中球由来エラスターゼ（Ａｔｈｅｎｓ研究所社製、製品番号１６−１４−０５１２００）を用いた。基質としては、Ｓｕｃ（ＯＭｅ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＭＣＡ（式中、Ｓｕｃ（ＯＭｅ）はメトキシスクシニル基を表す。以下同じ。）（ペプチド研究所社製、カタログ番号３１５３−ｖ）を用いた。即ち、５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．０）、２ｍＭ塩化カルシウム、１００μＭＳｕｃ（ＯＭｅ）−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＭＣＡ、０．３μｇ／ｍＬヒト好中球由来エラスターゼおよびジメチルスルホキシド１．０μＬまたは供試阻害剤を含むジメチルスルホキシド１．０μＬを添加した反応系１００μＬで３７℃、１２０分間反応をおこなった。ヒト好中球由来エラスターゼにより切断を受けて基質から遊離される７−アミノ−４−メチルクマリンの量を、励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍにおける蛍光強度を測定することで阻害活性を測定し、酵素活性を５０％阻害するのに要する阻害剤の濃度（ＩＣ_５０）を求めた。結果は次の通りであった。
【表４】

【００３２】
実施例４
ヒトキマーゼ阻害活性の測定
ヒトキマーゼ阻害活性の測定には、ヒト皮膚由来キマーゼ（Ｅｌａｓｔｉｎ　Ｐｒｏｄｕｃｔ社製、カタログ番号ＨＳ２１４）を用いた。基質としては、Ｓｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＭＣＡ（ペプチド研究所社製、カタログ番号３１１４−ｖ）を用いた。即ち、５０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）、３Ｍ塩化ナトリウム、１００μＭＳｕｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ＭＣＡ、１５０ｎｇ／ｍＬ　ヒト皮膚由来キマーゼおよびジメチルスルホキシド０．５μＬまたは供試阻害剤を含むジメチルスルホキシド０．５μＬを添加した反応系５０μＬで室温、５時間反応をおこなった。ヒト皮膚由来キマーゼにより切断を受けて基質から遊離される７−アミノ−４−メチルクマリンの量を、励起波長３５５ｎｍ、蛍光波長４６０ｎｍにおける蛍光強度を測定することで阻害活性を測定し、酵素活性を５０％阻害するのに要する阻害剤の濃度（ＩＣ_５０）を求めた。結果は次の通りであった。
【表５】

【００３３】
【発明の効果】
前記式（１）で表される化合物またはその塩は、セリンプロテアーゼ阻害活性を有し、前凝固、高血圧症、慢性気管支炎、膵炎、慢性関節リウマチ、心不全、虚血性末梢循環障害、心筋虚血、静脈機能不全、心筋梗塞後の心不全進行、糖尿病性腎症、腎炎、動脈硬化症、高アルドステロン症、強皮症、糸球体硬化症、腎不全、アルツハイマー病、記憶欠乏症、うつ病、知覚機能障害、不安、緊張症状、不快精神状態、緑内障、高眼圧症、ＰＴＣＡ後再狭窄、喘息、鼻炎、またはアレルギー性疾患の治療剤として有用である。

Claims

式（１）

（式中、Ｒは水素原子またはカルボキシル基を表す。）
で表される化合物またはその塩。
ペニシリウム属に属する、請求項１記載の化合物またはその塩生産菌を培養して、その培養物から請求項１記載の化合物またはその塩を採取する、請求項１記載の化合物またはその塩の製造方法。
ペニシリウム属に属する、請求項１記載の化合物またはその塩の生産菌がペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ．）ＳＰＦ−３２６２９株である、請求項２記載の製造方法。
ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ．）ＳＰＦ−３２６２９株。
請求項１記載の化合物またはその塩を有効成分として含有するセリンプロテアーゼ阻害剤。
セリンプロテアーゼが、カテプシンＧ、エラスターゼ、およびキマーゼからなる群から選ばれる酵素である、請求項５記載のセリンプロテアーゼ阻害剤。
請求項１記載の化合物またはその塩を含有する、前凝固、高血圧症、慢性気管支炎、膵炎、慢性関節リウマチ、心不全、虚血性末梢循環障害、心筋虚血、静脈機能不全、心筋梗塞後の心不全進行、糖尿病性腎症、腎炎、動脈硬化症、高アルドステロン症、強皮症、糸球体硬化症、腎不全、アルツハイマー病、記憶欠乏症、うつ病、知覚機能障害、不安、緊張症状、不快精神状態、緑内障、高眼圧症、ＰＴＣＡ後再狭窄、喘息、鼻炎、またはアレルギー性疾患の治療剤。