JP2003532669A

JP2003532669A - 高濃度グルタチオンを伴う腫瘍の治療における置換アクリロイルディスタマイシン誘導体の使用

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Publication number: JP2003532669A
Application number: JP2001581798A
Authority: JP
Inventors: ジエローニ，マリア・クリステイーナ・ローザ; コツツイ，パオロ; ベリア，イターロ
Original assignee: フアルマシア・イタリア・エツセ・ピー・アー
Priority date: 2000-05-08
Filing date: 2001-04-19
Publication date: 2003-11-05
Also published as: PL365831A1; US20030207794A1; EE200200605A; CZ20023629A3; WO2001085144A3; HK1054193A1; DK1280527T3; GB0011059D0; PT1280527E; CZ300791B6; BR0110628A; AU6022701A; WO2001085144A2; MXPA02010962A; ATE300944T1; NO20025303L; HUP0301882A2; EA007506B1; CA2409664A1; SK286501B6

Abstract

(57)【要約】式（Ｉ）のα−ハロゲノアクリロイルディスタマイシン誘導体（Ｒ_１は臭素もしくは塩素原子であり；Ｒ_２は明細書に示されるディスタマイシンもしくはディスタマイシン様骨格である。）である化合物又は薬学的に許容できるその塩は、特にＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の、従来の抗腫瘍治療に対して応答性が乏しく又は耐性さえ有する腫瘍の治療に有用な、細胞傷害性薬剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、高濃度のグルタチオン及び／又はグルタチオン−Ｓ−トランスフェ
ラーゼファミリーを伴う腫瘍の治療における、置換アクリロイルディスタマイシ
ン誘導体の使用、特に、α−ブロモ−及びα−クロロアクリロイルディスタマイ
シン誘導体の使用に関する。より具体的には、本発明は、前記アクリロイルディ
スタマイシン誘導体を用いた、グルタチオン／グルタチオン−Ｓ−トランスフェ
ラーゼファミリー（本明細書において単にＧＳＨ／ＧＳＴと示す）過剰発現性の
腫瘍と診断されるヒトの治療に関する。

【０００２】ＧＳＨは、いくつかの毒性損傷によって生じる細胞傷害に対して重大な保護的
役割を果たす。前臨床及び臨床研究によって、ＧＳＨ／ＧＳＴ過剰発現と、癌も
しくは化学療法に対する癌応答率の間の相関性が立証されている。ＧＳＨに基づ
く解毒系（これはＧＳＨ及びＧＳＨ関連酵素であるＧＳＴから構成されている）
の変化はまた、いくつかの抗腫瘍剤に対する反応性の変化を伴う。

【０００３】ＧＳＨ及びＧＳＴのどちらも、例えば、血液細胞、血漿、血清、循環系芽球、
及び病的（腫瘍）組織のようないくつかのヒト組織に偏在している。ＧＳＨ及び
ＧＳＴに対する一般的な言及として、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５４：４３１３−
４３２０（１９９４）；Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｓｅｒ７２（２）：３２４−３
２６（１９９５）；ＤＤＴ３：１１３−１２１（１９９８）を参照されたい。
ＧＳＴ、及び最も顕著なものとしてＧＳＴ−πは、腫瘍型に支配されて高濃度で
存在する。正常組織と比較して増強したＧＳＨ／ＧＳＴの活性が、例えば、（食
道、胃、結腸、肝細胞及び膵臓を含む）消化管の腫瘍、子宮及び卵巣癌、頭部及
び頸部の癌、肺及び非小細胞肺癌、同様に、結腸、胃及び膀胱由来の転移性肝腫
瘍を含むいくつかの腫瘍組織に見出されている［ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．４９：
５２２５−５２２９（１９８９）；ＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓｉｎ
ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ２
７（４．５）：３３７−３８６（１９９２）］。

【０００４】細胞傷害性薬剤に対する腫瘍細胞の不活性及び／又は耐性に対するＧＳＨ／Ｇ
ＳＴの役割を確立するために、２つの主要な実験的取り組みが行われている。そ
の一番目は、ＧＳＨ／ＧＳＴの高められた濃度又は発現及び活性は、薬剤耐性の
レベルの増強に関連しているという研究を含む。この取り組みはまた、薬剤耐性
を回避又は逆転するために、ＢＳＯ（ブチオニンスルホキシミン）のようなＧＳ
Ｈ阻害剤を用いて、ＧＳＨ／ＧＳＴ活性を調節することを含んでいた。二番目の
取り組みは、遺伝子導入研究において行われ、ＧＳＨ／ＧＳＴが薬剤耐性を引き
起こすという直接的で有効な証拠を与えた。

【０００５】アルキル化剤（例えばメルファラン、クロラムブシル、シクロホスファミド、
イフォスファミドマスタード、ＢＣＮＵ）、並びに、例えばシスプラチン、カル
ボプラチン、及びオキサリプラチンのような白金錯体に対する耐性において、Ｇ
ＳＨ／ＧＳＴが主要な役割を果たすという証拠が存在する［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐ
ｈａｒｍａｃｏｌ３５：３４０５−３４０９（１９８６）］。最近の研究では
、薬剤耐性におけるＧＳＨの役割は、アントラサイクリン（例えばドキソルビシ
ン、イダルビシン、エピルビシン及びそれらの誘導体）、エピドフィロトキシン
（例えばエトポシド及びテニポシド）、ビンカアルカロイド（例えばビンブラス
チン及びビンクリスチン）、及び、タキサン（例えばパクリタキセル及びドセタ
キセル）を含む異なる細胞傷害性薬剤に耐性を与える多剤耐性関連タンパク（Ｍ
ＲＰ）の活性の調節に関係している［Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ３２：９４５
−９５７（１９９６）；ＳｅｍｉｎａｒｓｉｎＯｎｃｏｌ．２４（５）：５
８０−５９１，（１９９７）］。

【０００６】周知の他の細胞傷害性ディスタマイシン誘導体と異なり、本発明の以下に示す
α−ブロモもしくはα−クロロアクリロイル基を持つ細胞傷害性ディスタマイシ
ン誘導体は、ＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍（したがって従来の抗腫瘍治療
に対する応答性が乏しい及び／又はひとたび治療上の細胞傷害性薬剤が投与され
ると耐性を引き起こす）の治療において驚くべき効果を有することが今見出され
た。

【０００７】本明細書においてディスタマイシン及びディスタマイシン様誘導体として言及
されるディスタマイシンＡ及びその類似物質は、当該技術分野において、抗腫瘍
治療に有用な細胞傷害性薬剤として知られている。ディスタマイシンＡは、ポリ
ピロール骨格を持ち、抗ウイルス及び抗原虫活性を有する抗生物質である［Ｎａ
ｔｕｒｅ２０３：１０６４（１９６４）；Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２：７７
４−７７８（１９８９）］。国際特許出願ＷＯ９０／１１２７７、ＷＯ９８／０
４５２４、ＷＯ９８／２１２０２、ＷＯ９９／５０２６５、ＷＯ９９／５０２６
６、同様に、同時係属未公開国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ００／１１７１４（２０
００年１１月２３日出願、及び英国特許出願９９２８７０３．９を基礎とする優
先権を主張）（これらはすべて出願人自身の名義であり、本明細書に参照により
取り込まれる）に、ディスタマイシンのアミジノ基が、例えばシアンアミジノ、
Ｎ−メチルアミジノ、グアニジノ、カルバモイル、アミドキシム、シアノ等のよ
うな窒素含有末端基により置換されていてもよい、及び／又はディスタマイシン
のポリピロール骨格もしくはその一部が、様々な炭素環もしくは複素環部分で置
換されている、アクリロイルディスタマイシン誘導体が開示されている。

【０００８】従って本発明の第一の目的は、下記式（Ｉ）

【０００９】

【化６】［式中：Ｒ_１は臭素もしくは塩素原子であり；Ｒ_２はディスタマイシンもしくはディスタマイシン様骨格である。］のα−ハロ
ゲノアクリロイルディスタマイシン誘導体又は薬学的に許容できるそれらの塩の、ＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍の治
療のための医薬の製造における使用である。本発明の好ましい実施態様によれば、前記式（Ｉ）化合物は、ＧＳＨ／ＧＳＴ
系過剰発現性の、並びに、食道、胃、結腸、肝細胞及び膵臓癌を含む消化管の腫
瘍、子宮及び卵巣癌、頭部及び頸部の癌、肺及び非小細胞肺癌、同様に、消化管
、子宮、卵巣及び肺癌由来の転移性肝腫瘍を含む腫瘍の治療に有用である。本発
明のさらなる実施態様は、例えばアルキル化剤、白金誘導体又はアントラサイク
リンを用いる初回化学療法治療といった以前の化学療法治療の結果としてＧＳＨ
／ＧＳＴ系が過剰発現した腫瘍の治療における式（Ｉ）の化合物の使用である。
より具体的には、以前の化学療法治療は、アルキル化剤、例えばメルファラン、
クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミドマスタード、及びＢＣ
ＮＵ；白金錯体、例えばシスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチン
；アントラサイクリン、例えばドキソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、
及びそれらの誘導体；エピドフィロトキシン、例えばエトポシド及びテニポシド
；ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン及びビンクリスチン；タキサン、
例えばパクリタキセル及びドセタキセルを含んでいてもよい。

【００１０】本発明は、単独又は混合物も考慮して、式（Ｉ）の化合物によって網羅される
すべての可能な異性体、同様に式（Ｉ）の化合物の代謝物及び薬学的に許容でき
る生体前駆体（別名プロドラッグ）の使用をその範囲内に含む。

【００１１】式（Ｉ）の化合物において他に特別の定めの無い限り、ディスタマイシン又は
ディスタマイシン様骨格Ｒ_２という用語は、例えばディスタマイシン及び／又は
そのポリピロール骨格もしくはその一部の末端アミジノ基を置換する、ディスタ
マイシンそのものと構造的に近い関係にある任意の部分を意味する。

【００１２】本発明の好ましい実施態様は、Ｒ_１が上に記載された意味を持ち、Ｒ_２が下記
式（ＩＩ）の基である、前記式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。

【００１３】

【化７】式中：ｍは０から２の整数であり；ｎは２から５の整数であり；ｒは０又は１であり；Ｘ及びＹは、同一であるか又は異なり、独立してそれぞれ複素環、窒素原子又は
ＣＨ基であり；Ｇは、フェニレン、窒素、酸素もしくは硫黄の中から選ばれる１から３のヘテロ
原子を持つ５もしくは６員環である飽和もしくは不飽和の複素環、又は、下記式
（ＩＩＩ）で表される基である

【００１４】

【化８】［式中、Ｑは、窒素原子もしくはＣＨ基であり、及び、Ｗは、酸素もしくは硫黄
原子、又はＲ_３が水素もしくはＣ_１−Ｃ_４アルキルであるＮＲ_３基であり；Ｂは下記の群から選ばれる

【００１５】

【化９】式中、Ｒ_４は、シアノ、アミノ、ヒドロキシ、もしくはＣ_１−Ｃ_４アルコキシで
あり；Ｒ_５、Ｒ_６及びＲ_７は、同一であるか又は異なり、水素もしくはＣ_１−Ｃ_４アルキルである。）。］。

【００１６】本明細書において他に特別の定めの無い限り、Ｃ_１−Ｃ_４アルキル又はアルコ
キシ基という用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチ
ル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、メトキシ、エトキシ、ｎ
−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキ
シ、又はｔｅｒｔ−ブトキシから選ばれる、直鎖又は分枝鎖の基を意味する。

【００１７】本発明のより好ましい実施態様は、Ｒ_１が臭素もしくは塩素であり；Ｒ_２がｒ
が０であり、ｍが０もしくは１であり、ｎが４であり、Ｂが前に報告された意味
を持つ前記式（ＩＩ）の基である、前記の式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。

【００１８】よりさらに好ましくは、Ｒ_１が臭素もしくは塩素であり；Ｒ_２が、ｒが０であ
り、ｍが０もしくは１であり、ｎが４であり、Ｘ及びＹの両方がＣＨ基であり、
及びＢが下記：

【００１９】

【化１０】（式中、Ｒ_４は、シアノもしくはヒドロキシであり、及び、Ｒ_５、Ｒ_６及びＲ_７は、同一であるか又は異なり、水素原子もしくはＣ_１−Ｃ_４アルキルである。）
からなる群から選ばれる、前記式（ＩＩ）の基である、式（Ｉ）の化合物の使用
である。

【００２０】式（Ｉ）の化合物の薬学的に許容できる塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫
酸、硝酸、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、マロン酸、クエン酸、酒石酸、メタ
ンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のような薬学的に許容できる無機又は
有機酸の塩である。

【００２１】ＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍の治療のための医薬の製造における式（Ｉ
）の化合物の好ましい例は、薬学的に許容できる塩、好ましくは塩酸塩であって
もよい、下記１から１０の化合物である：１．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］
アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イ
ル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］
カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモ
アクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド塩
酸塩；２．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］
アミノ｝プロピル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−
イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ
］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロ
モアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド
塩酸塩；３．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド塩酸塩；４．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボキサミド塩酸塩；５．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−３−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド塩酸塩；６．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−オキソプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−３−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド；７．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］
アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イ
ル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］
カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−クロロ
アクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド塩
酸塩；８．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（３−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝プ
ロピル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミ
ノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブ
ロモアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミ
ド塩酸塩；９．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）アミノ］カ
ルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−
１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）
アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド塩酸塩；及び、１０．Ｎ−｛５−［（｛５−［（｛５−［（｛３−［（アミノカルボニル）アミ
ノ］プロピル｝アミノ）カルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル
｝アミノ）カルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝アミノ）カ
ルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝−４−［（２−ブロモア
クリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド。

【００２２】上のようにまたは一般式により具体的に特定された前記式（Ｉ）の化合物は、
既知であるか、又は例えば前述の国際特許出願ＷＯ９０／１１２７７、ＷＯ９８
／０４５２４、ＷＯ９８／２１２０２、ＷＯ９９／５０２６５、及びＷＯ９９／
５０２６６、同様に、同時係属国際特許出願ＰＣＴ／ＥＰ００／１１７１４にお
いて報告されたような既知の方法によって容易に調製される。

【００２３】薬理学本発明の式（Ｉ）の化合物は、高濃度のＧＳＨ／ＧＳＴを伴う腫瘍の治療にお
いて高い効果を有し、従来の化学療法剤に対してほとんど応答しないもしくは感
受性さえ持たないいくつかの腫瘍の治療における用途を見出すものである。

【００２４】式（Ｉ）の化合物の細胞傷害活性におけるＧＳＨの役割は、親細胞系のそれよ
りも高いＧＳＨ／ＧＳＴの濃度を示す化学耐性腫瘍細胞サブライン上で、化合物
を試験することによって研究された。使用したモデルは、正常Ｌ１２１０（７．
７ｎｍｏｌｅ／１０^６細胞）細胞系に対して３倍増加したＧＳＨの量（２５．８
ｎｍｏｌｅ／１０^６細胞）を示す、メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ）耐性マウス白血
病（Ｌ１２１０／Ｌ−ＰＡＭ）である（表Ｉ）。試験した式（Ｉ）の化合物を以下に示す：Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミ
ノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアク
リロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド塩酸塩
−内部番号ＰＮＵ１６６１９６；及びＮ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）アミ
ノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニ
ル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メ
チル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）アミノ
］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド塩酸塩−内部番号ＰＮＵ
１５１８０７。タリムスチンとしてより知られているディスタマイシン誘導体、３−［１−メチ
ル−４−［１−メチル−４−［１−メチル−４−［１−メチル−４−［Ｎ，Ｎ−
ビス（２−クロロエチル）アミノ］ベンゼンカルボキサミド］ピロール−２−カ
ルボキサミド］ピロール−２−カルボキサミド］ピロール−２−カルボキサミド
］プロピオンアミジン、及び、Ｌ−ＰＡＭを、同じ試験条件における対照として
試験した。

【００２５】表Ｉで報告されたデーターは、式（Ｉ）の化合物の細胞傷害性が、Ｌ１２１０
／Ｌ−ＰＡＭ細胞上で、Ｌ１２１０細胞に対して３倍増加したことを明確に示す
（ＰＮＵ１６６１９６＝それぞれＩＣ_５００．４９及び１．６２ｎｇ／ｍｌ；Ｐ
ＮＵ１５１８０７＝それぞれＩＣ_５００．２６及び０．８６ｎｇ／ｍｌ）。タリ
ムスチンの細胞傷害性は、２つの細胞系上で同等であった；逆に、Ｌ−ＰＡＭの
細胞傷害性は、Ｌ１２１０細胞上よりもＬ１２１０／Ｌ−ＰＡＭ細胞上で低かっ
た。

【００２６】

【表１】

【００２７】式（Ｉ）の化合物の細胞傷害性に対するＧＳＨ濃度が関連するさらなる証拠は
、ＢＳＯ（Ｌ−Ｓ，Ｒブチオニンスルホキシミン）を用いた前処置が、細胞傷害
性及びアポトーシス作用に対するＡ２７８０ヒト卵巣細胞の感受性に及ぼす影響
を測定することにより得られた。ＢＳＯは、強力かつ特異的な、ＧＳＨ生合成に
おける律速段階であるγ−グルタミルシステイン合成酵素の阻害剤である。ＢＳ
Ｏによる細胞内ＧＳＨの枯渇は、主にメルファラン及びクロラムブシルのような
アルキル化剤、並びにシスプラチン、カルボプラチン及びオキサリプラチンのよ
うな白金化合物といった多くの抗腫瘍剤の細胞傷害性を著しく高める［Ｃｈｅｍ
ｉｃｏ−ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ１１１：２３９−２
５４（１９９８）］。表ＩＩに示すように、式（Ｉ）の化合物の代表であるＰＮ
Ｕ１６６１９６の細胞傷害性（成長阻害のパーセンテージ）及びアポトーシス作
用（アポトーシス形態を有する細胞のパーセンテージ）は、ＢＳＯで処置してい
ない細胞に対して、ＢＳＯで前処置したＡ２７８０細胞において著しく減少した
。

【００２８】

【表２】

【００２９】ＰＮＵ１６６９６は、ＢＳＯで前処置したＡ２７８０細胞において、未処置の
細胞に対して、減少した細胞傷害活性を示した（３０００ｎｇ／ｍｌにおいて、
それぞれ３８及び７７．５％の成長阻害）。ＢＳＯで前処置した腫瘍細胞におけ
るＰＮＵ１６６１９６の効力の減少は、また、＋／−ＢＳＯでの、アポトーシス
形態を有する細胞のパーセンテージを試験することによって確認された（３００
０ｎｇ／ｍｌにおいて、それぞれ１１．５及び７４．５％）。

【００３０】前記の結果は、式（Ｉ）のα−ブロモ及びα−クロロアクリロイルディスタマ
イシン誘導体の試験管内での活性は、高濃度のＧＳＨの存在により大いに影響さ
れ、したがってこれらの化合物はＧＳＨ／ＧＳＴ過剰発現性の腫瘍の治療におい
て特に有用であるという証拠を支持している。

【００３１】本発明の化合物は、通常の経路、例えば静脈注射もしくは注入、筋肉注射、皮
下注射による非経口、局所又は経口で投与することができる。投与量は、患者の
年齢、体重及び容態、及び投与経路に依存する。例えば、成人のヒトの適当な投
与は、約０．０５から約１００ｍｇの範囲の１回量で、１日に１から４回であろ
う。薬剤組成物は、１又は２以上の薬学的に許容できる賦形剤と共に、活性物質
として有効量の式（Ｉ）の化合物を含んでいよう。これは通常、従来の方法に従
って調製される。例えば、静脈注射用もしくは注入用の溶液は、担体として滅菌
水を含んでも良く、好ましくは、それらは滅菌生理食塩水溶液の形状であって良
い。筋肉注射用の懸濁液又は溶液は、活性成分と共に、例えば滅菌水、オリーブ
油、オレイン酸エチル、例えばプロピレングリコールのようなグリコールといっ
た薬学的に許容できる担体、及び、所望ならば、適当量の塩酸リドカインを含ん
でいても良い。例えば皮膚治療用のクリーム、ローション、ペーストといった局
所投与用の形状においては、活性成分を、従来の油性もしくは乳化賦形剤と混合
しても良い。例えば錠剤及びカプセル剤といった固形経口剤は、活性成分と共に
、賦形剤、例えば乳糖、デキストロース、ショ糖、セルロース、トウモロコシデ
ンプン、及びバレイショデンプン；滑沢剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン
酸、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウム、及び／又はポ
リエチレングリコール；結合剤、例えばデンプン、アラビアゴム、ゼラチン、メ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン；崩壊剤
、例えばデンプン、アルギン酸、アルギン酸塩、デンプングリコール酸ナトリウ
ム；発泡混合物；着色剤；甘味剤；湿潤剤、例えばレシチン、ポリソルベート、
ラウリル硫酸；及び、一般的に医薬の調製に使用される無毒で薬理学的に不活性
な物質を含んでも良い。該医薬製剤は、既知の方法、例えば混合、造粒、錠剤化
、糖衣、もしくはフィルムコーティング工程によって製造することができる。さ
らに、本発明は、治療を必要とする患者において、該患者に本発明の組成物を投
与することを含む、ＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍を治療する方法を提供す
る。

【００３２】以下の実施例は、本発明をより具体的に示すことを意図するものであって、本
発明にいかなる限定も及ぼそうとするものではない。

【００３３】実施例１高濃度ＧＳＨ関連の腫瘍に対する式（Ｉ）化合物の細胞傷害活性化合物Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル
］アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−
イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ
］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロ
モアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド
塩酸塩（ＰＮＵ１６６１９６）、及び、Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（
３−アミノ−３−イミノプロピル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−
ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３
−イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４
−［（２−ブロモアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−
カルボキサミド塩酸塩（ＰＮＵ１５１８０７）を、それぞれ、ＷＯ９８／０４２
５４及びＷＯ９０／１１２７７に記載されたように調製し、滅菌水に溶解して直
ちに実験に使用した。細胞傷害活性を、Ｌ１２１０マウスリンパ性白血病細胞系
上で、及び、Ｌ−ＰＡＭ耐性細胞サブラインＬ１２１０／Ｌ−ＰＡＭ上で測定し
た。細胞をインビトロで安定懸濁培養物として増殖させた。Ｌ１２１０細胞を、
β−メルカプトエタノール（１０μＭ）を含むＲＰＭＩ１６４０培地中に保持し
た。Ｌ１２１０／Ｌ−ＰＡＭ細胞を、β−メルカプトエタノール（５０μＭ）を
含むＲＰＭＩ１６４０培地中に保持した。すべての培地（Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋ
ｅｒ、英国）に、１０％のウシ胎仔血清（ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｄｕｓｔ
ｒｉｅｓ、イスラエル）及び２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅ
ｒ、英国）を加えた。指数関数的に増殖している細胞に対して細胞傷害活性を測
定した。Ｌ１２１０及びＬ１２１０／Ｌ−ＰＡＭ細胞を、２４穴プレートに５０
，０００細胞／ｍｌの濃度で接種し、直ちに薬物を用いて４８時間処置した。細
胞増殖の阻害を、コールターカウンターを用いて生存細胞をカウントすることに
よって評価した。薬物の抗増殖活性を、用量−応答曲線から算出し、ＩＣ_５０（
未処置の対照に対して、処置した培地中の細胞増殖を５０％阻害する濃度）とし
て表した。すべての実験を２回行った。結果を添付の表Ｉ及びその注釈において
報告する。

【００３４】実施例２ＢＳＯ前処置Ａ２７８０細胞上のＰＮＵ１６６１９６の細胞傷害性及びアポト
ーシス作用化合物ＰＮＵ１６６１９６（前記実施例１を参照）を、滅菌水に溶解して直ち
に実験に使用した。ＢＳＯを滅菌水に溶解し、０．２μフィルターを用いて濾過
した。細胞傷害活性を、Ａ２７８０ヒト卵巣癌細胞系上で測定した。細胞を、イ
ンビトロで、１０％のウシ胎仔血清（ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｉ
ｅｓ、イスラエル）及び２ｍＭのＬ−グルタミン（Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ、
英国）を加えたＲＰＭＩ１６４０培地（Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ、英国）中の
単層培養物として増殖させた。指数関数的に増殖している細胞に対して細胞傷害
活性を測定した。Ａ２７８０細胞を、６穴プレート中に１００，０００細胞／ｍ
ｌの濃度で２ｍｌ接種し、ＧＳＨ阻害剤であるＢＳＯと共に２４時間インキュベ
ートして、最終的に、異なる濃度のＰＮＵ１６６１９６に暴露した（未処置の細
胞を培地のみと共にインキュベートした）。細胞の増殖阻害を、２４時間の薬物
による処置の後、形態学的評価のために浮遊した細胞を使用するところの単層細
胞で評価した。蛍光顕微鏡によってアポトーシスを評価した。処置の最後に、浮
遊した細胞を回収しＰＢＳで洗浄して、７０％氷冷エタノールに固定し、分析ま
で−２０℃で保存した（最長で５日）。その後、細胞を遠心分離して、小球を５
０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム、０．００１％のノニデットＰ４０及び６０
Ｕ／ｍｌのＲｎａｓｅで染色して、３７℃で３０分間、暗所で保存した。細胞を
遠心分離して、小球を５０μＭのＰＢＳ中に再分散した。別個に調製した２つの
塗抹標本から無作為に選択した少なくとも６００の細胞を、それらの核形態学的
変化（染色体の凝縮及びＤＮＡの断片化）について、蛍光顕微鏡を用いて調べた
［Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ６５：４９１−４９７（１９９６）を参照］。すべ
ての実験を２回行った。結果を添付の表ＩＩ及びその注釈において報告する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 35/04 35/04 Ｃ０７Ｄ 207/34 Ｃ０７Ｄ 207/34 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ベリア，イターロイタリー国、イ−20014・ネルビアーノ、ビア・スツド・アンナ・16 Ｆターム(参考） 4C069 AC06 AC07 BC24 BD06 4C086 AA01 AA02 BC05 GA07 MA01 MA04 NA06 NA14 ZA59 ZA66 ZA81 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）【化１】［式中、Ｒ_１は臭素もしくは塩素原子であり、及び、Ｒ_２はディスタマイシンまたはディスタマイシン様骨格である。］のα−ハロゲ
ノアクリロイルディスタマイシン誘導体又は薬学的に許容できるその塩の、ＧＳ
Ｈ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍の治療のための医薬の製造における使用。
【請求項２】ＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍が、食道、胃、結腸、肝
細胞及び膵臓の腫瘍を含む消化管の腫瘍、子宮及び卵巣癌、頭部及び頸部の癌、
肺及び非小細胞肺癌、並びに消化管、子宮、卵巣及び肺癌由来の転移性肝腫瘍か
ら選ばれる請求項１に記載の使用。
【請求項３】ＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現が、細胞傷害性薬剤を用いた以前
の初回化学療法による治療の結果である請求項１に記載の使用。
【請求項４】細胞傷害性薬剤が、メルファラン、クロラムブシル、シクロ
ホスファミド、イフォスファミドマスタード、及びＢＣＮＵを含むアルキル化剤
；シスプラチン、カルボプラチン、及びオキサリプラチンを含む白金錯体；ドキ
ソルビシン、イダルビシン、エピルビシン、及びそれらの誘導体を含むアントラ
サイクリン；エトポシド及びテニポシドを含むエピドフィロトキシン；ビンブラ
スチン及びビンクリスチンを含むビンカアルカロイド；及び、パクリタキセル及
びドセタキセルを含むタキサンから選ばれる請求項３に記載の使用。
【請求項５】式（Ｉ）のα−ハロゲノアクリロイルディスタマイシン誘導
体において、Ｒ_２が下記式（ＩＩ）で表される基であり：【化２】［式中、ｍは０から２の整数であり；ｎは２から５の整数であり；ｒは０又は１であり；Ｘ及びＹは、同一であるか又は異なっていて、独立にそれぞれ、複素環、窒素原
子又はＣＨ基であり；Ｇは、フェニレン、窒素、酸素もしくは硫黄の中から選ばれる１から３のヘテロ
原子を持つ５もしくは６員環である飽和もしくは不飽和の複素環、又は下記式（
ＩＩＩ）で表される基である：【化３】（式中、Ｑは、窒素原子もしくはＣＨ基であり、及びＷは、酸素もしくは硫黄原
子、又はＲ_３が水素もしくはＣ_１−Ｃ_４アルキルであるＮＲ_３基である。）Ｂは下記の群から選ばれる【化４】（式中、Ｒ_４は、シアノ、アミノ、ヒドロキシ、もしくはＣ_１−Ｃ_４アルコキシ
であり；Ｒ_５、Ｒ_６及びＲ_７は、同一であるか又は異なっていて、水素もしくは
Ｃ_１−Ｃ_４アルキルである。）。］請求項１に記載の使用。
【請求項６】式（Ｉ）のα−ハロゲノアクリロイルディスタマイシン誘導
体において、Ｒ^１が臭素もしくは塩素であり；及び、Ｒ_２が、式（ＩＩ）で表さ
れる基である（式中、ｒは０であり、ｍは０もしくは１であり、ｎは４であり、
及びＢは請求項５で定義されている。）、請求項５に記載の使用。
【請求項７】式（Ｉ）のα−ハロゲノアクリロイルディスタマイシン誘導
体において、Ｒ_１が臭素もしくは塩素であり；Ｒ_２が、請求項５で定義される式
（ＩＩ）で表される基である［式中、ｒは０であり、ｍは０もしくは１であり、
ｎは４であり、Ｘ及びＹの両方がＣＨ基であり、及びＢは下記から選ばれる：【化５】（式中、Ｒ_４は、シアノもしくはヒドロキシであり、及びＲ_５、Ｒ_６及びＲ_７は
、同一であるか又は異なっている、水素原子もしくはＣ_１−Ｃ_４アルキルである
。）。］、請求項６に記載の使用。
【請求項８】式（Ｉ）のα−ハロゲノアクリロイルディスタマイシン誘導
体が、薬学的に許容できる塩の形態であってもよい、１．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］
アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イ
ル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］
カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモ
アクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド；
２．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］
アミノ｝プロピル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−
イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ
］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロ
モアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド
；３．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド；４．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボキサミド；５．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−３−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド；６．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−オキソプロピル）
アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カル
ボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−１
−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−３−［（２−ブロモアクリロイル）ア
ミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−５−カルボキサミド；７．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル］
アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イ
ル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］
カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−クロロ
アクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド；
８．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（３−｛［アミノ（イミノ）メチル］アミノ｝プ
ロピル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミ
ノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブ
ロモアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミ
ド；９．Ｎ−（５−｛［（５−｛［（３−アミノ−３−イミノプロピル）アミノ］カ
ルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ］カルボニル｝−
１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロモアクリロイル）
アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド；及び、１０．Ｎ−｛５−［（｛５−［（｛５−［（｛３−［（アミノカルボニル）アミ
ノ］プロピル｝アミノ）カルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル
｝アミノ）カルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝アミノ）カ
ルボニル］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル｝−４−［（２−ブロモア
クリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミドから
選ばれる、請求項１に記載の使用。
【請求項９】式（Ｉ）のα−ハロゲノアクリロイルディスタマイシン誘導
体が、Ｎ−（５−｛［（５−｛［（５−｛［（２−｛［アミノ（イミノ）メチル
］アミノ｝エチル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−
イル）アミノ］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）アミノ
］カルボニル｝−１−メチル−１Ｈ−ピロール−３−イル）−４−［（２−ブロ
モアクリロイル）アミノ］−１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルボキサミド
塩酸塩である請求項８に記載の使用。
【請求項１０】請求項１に記載の化合物を治療を必要とする患者に投与す
ること含むＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍の治療方法。
【請求項１１】ＧＳＨ／ＧＳＴ系過剰発現性の腫瘍が、食道、胃、結腸、
肝細胞及び膵臓の腫瘍を含む消化管の腫瘍、子宮及び卵巣癌、頭部及び頸部の癌
、肺及び非小細胞肺癌、並びに消化管、子宮、卵巣及び肺癌由来の転移性肝腫瘍
を含む請求項１０に記載の方法。