JP2003530870A

JP2003530870A - Ａｐｏ−ＡＩ／ＡＩＩペプチド誘導体

Info

Publication number: JP2003530870A
Application number: JP2001578463A
Authority: JP
Inventors: コウノ，タダヒコ
Original assignee: アムジエン・インコーポレーテツド
Priority date: 2000-04-21
Filing date: 2001-04-23
Publication date: 2003-10-21
Also published as: WO2001081376A3; ATE319737T1; DK1290013T3; EP1290013A2; AU5717301A; DE60117781D1; PT1290013E; US6743778B2; WO2001081376A2; AU2001257173B2; MXPA02010324A; EP1290013B1; CA2407083A1; DE60117781T2; US20030040470A1; ES2260219T3

Abstract

(57)【要約】本発明はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチドの活性に類似する治療剤に関する。本発明によると、本発明の化合物は（ａ）Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメイン、好ましくは配列番号７のアミノ酸配列又はファージディスプレイ、ＲＮＡ−ペプチドスクリーニングもしくは他の上記方法により前記配列から誘導される配列と、（ｂ）例えばポリマー（例えばＰＥＧ又はデキストラン）又は好適例であるＦｃドメイン等のビヒクルを含み、ビヒクル、好ましくはＦｃドメインははＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインに共有結合している。ビヒクルとＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインは以下に詳述するように、Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインのＮ又はＣ末端を介して連結することができる。好適ビヒクルはＦｃドメインであり、好適ＦｃドメインはＩｇＧＦｃドメインである。好適Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインは表１に示すアミノ酸配列を含む。他のＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインはファージディスプレイ、ＲＮＡ−ペプチドスクリーニング及び本明細書に記載する他の方法により作成することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の背景Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド活性をもつ組換え又は改変治療剤が
必要とされている。

【０００２】組換え及び改変タンパク質は新規発展段階クラス治療剤である。タンパク質治
療剤の有用な改変としては、抗体の「Ｆｃ」ドメインとの結合や、ポリエチレン
グリコール（ＰＥＧ）やデキストラン等のポリマーとの結合が挙げられる。この
ような改変はその開示内容全体を参照により本明細書の一部とする特許出願米国
シリアル番号０９／４２８，０８２、ＰＣＴ出願番号ＷＯ９９／２５０４４（発
明の名称「治療剤としての改変ペプチド（ＭｏｄｉｆｉｅｄＰｅｐｔｉｄｅｓ
ａｓＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＡｇｅｎｔｓ）」）に詳細に記載されている
。

【０００３】全く別の治療剤開発アプローチとしてペプチドライブラリースクリーニングが
ある。タンパク質リガンドとそのレセプターの相互作用は比較的広い界面で生じ
ることが多い。しかし、ヒト成長ホルモンとそのレセプターで実証されているよ
うに、結合エネルギーの大部分に関与するのは界面のごく少数の主要残基に限ら
れる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９５），Ｓｃｉｅｎｃｅ２６７：３８３−６
。タンパク質リガンドの大部分は単に正しいトポロジーで結合エピトープを提示
するか、又は結合に無関係の機能を果たすだけである。即ち、所与の大型タンパ
ク質リガンドに結合できるのは「ペプチド」長（２〜４０アミノ酸）のみの分子
である。このようなペプチドは大型タンパク質リガンドの生物活性に類似の機能
を果たす場合と（「ペプチドアゴニスト」）、競合結合を介して大型タンパク質
リガンドの生物活性を阻害する場合がある（「ペプチドアンタゴニスト」）。

【０００４】ファージディスプレイペプチドライブラリーはこのようなペプチドアゴニスト
及びアンタゴニストを同定するのに強力な方法として出現した。例えばＳｃｏｔ
ｔら（１９９０），Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：３８６；Ｄｅｖｌｉｎら（１９９
０），Ｓｃｉｅｎｃｅ２４９：４０４；１９９３年６月２９日発行米国特許第
５，２２３，４０９号、１９９８年３月３１日発行米国特許第５，７３３，７３
１号、１９９６年３月１２日発行米国特許第５，４９８，５３０号、１９９５年
７月１１日発行米国特許第５，４３２，０１８号、１９９４年８月１６日発行米
国特許第５，３３８，６６５号、１９９９年７月１３日発行米国特許第５，９２
２，５４５号、１９９６年１２月１９日公開ＷＯ９６／４０９８７、及び１９９
８年４月１６日公開ＷＯ９８／１５８３３参照（各々その開示内容全体を参照に
より本明細書の一部とする）。このようなライブラリーでは、線維状ファージの
コートタンパク質との融合によりランダムペプチド配列が提示される。一般に、
提示されたペプチドはレセプターの抗体固定化細胞外ドメインに対してアフィニ
ティ溶出される。保持されたファージはアフィニティ精製と再増殖を繰返すこと
により増加することができる。最良結合ペプチドを配列決定し、１種以上の構造
的に関連するファミリーのペプチド内の主要残基を同定することができる。例え
ばＣｗｉｒｌａら（１９９７），Ｓｃｉｅｎｃｅ２７６：１６９６−９では２
種の異なるファミリーが同定されている。ペプチド配列はアラニンスキャニング
又はＤＮＡレベルの変異誘発によりどの残基を安全に置換できるかも示唆するこ
とができる。変異誘発ライブラリーを作成し、スクリーニングして最良バインダ
ーの配列を更に最適化することができる。Ｌｏｗｍａｎ（１９９７），Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｓｔｒｕｃｔ．２６：４０１−２４。

【０００５】タンパク質−タンパク質相互作用の構造分析を使用しても大型タンパク質リガ
ンドの結合活性に類似の機能をもつペプチドを予想することもできる。このよう
な分析では、結晶構造から大型タンパク質リガンドの主要残基の種類と相対方向
を予想し、ペプチドを設計することができる。例えばＴａｋａｓａｋｉら（１９
９７），ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈ．１５：１２６６−７０参照。これらの
分析方法は、レセプタータンパク質とファージディスプレイにより選択したペプ
チドの相互作用を調べるためにも使用することができ、ペプチド親和性を増すた
めにペプチドを更に改変することを示唆しよう。

【０００６】他の方法はペプチド研究でファージディスプレイに競合する。ペプチドライブ
ラリーをｌａｃリプレッサーのカルボキシル末端に融合し、大腸菌で発現させる
ことができる。別の大腸菌を利用する方法は、ペプチドグリカン結合リポタンパ
ク質（ＰＡＬ）との融合により細胞の外膜に提示することができる。以下の文中
ではこれらの方法及び関連方法を総称して「大腸菌ディスプレイ」と言う。別の
方法では、リボソーム放出前にランダムＲＮＡの翻訳を停止し、関連ＲＮＡが結
合したままのポリペプチドのライブラリーを得る。以下の文中では、この方法と
関連方法を総称して「リボソームディスプレイ」と言う。他の方法はＲＮＡに結
合したペプチドを使用している（例えばＰＲＯ融合技術，Ｐｈｙｌｏｓ，Ｉｎｃ
．）。例えばＲｏｂｅｒｔｓ＆Ｓｚｏｓｔａｋ（１９９７），Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９４：１２２９７−３０３参照。以下の文
中ではこの方法と関連方法を総称して「ＲＮＡ−ペプチドスクリーニング」と言
う。ペプチドをポリエチレンロッドや溶媒透過性樹脂等の安定な非生物材料に固
定化する化学誘導ペプチドライブラリーも開発されている。別の化学誘導ペプチ
ドライブラリーはガラススライドに固定化したペプチドを走査するためにフォト
リソグラフィを使用している。以下の文中ではこれらの方法と関連方法を総称し
て「化学ペプチドスクリーニング」と言う。化学ペプチドスクリーニングはＤア
ミノ酸と他の非天然アナログや、非ペプチドエレメントを使用できるという点で
有利であると思われる。生物学的方法と化学的方法のいずれもＷｅｌｌｓ＆
Ｌｏｗｍａｎ（１９９２），Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：
３５５−６２に記載されている。概念上では、ファージディスプレイ、ＲＮＡ−
ペプチドスクリーニング及び他の上記方法を使用して任意タンパク質のペプチド
類似体を発見することができる。

【０００７】発明の要約本発明はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチドに類似の活性をもち、更に
良好な医薬的特徴（例えば半減期）をもつ治療剤に関する。本発明によると、こ
のような化合物は、ａ）Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチドと、又は好ましくはＡｐｏ−ＡＩ
両親媒性ヘリックスペプチド配列をもつか、ファージディスプレイ、ＲＮＡ−ペ
プチドスクリーニングもしくは他の上記方法により前記配列から誘導される配列
をもつＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインと、ｂ）例えばポリマー（例えばＰＥＧ又はデキストラン）又は好適例であるＦｃド
メイン等のビヒクルとを含み、ビヒクルはＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性
ヘリックスペプチド様ドメインに共有結合している。ビヒクルとＡｐｏ−ＡＩ両
親媒性ヘリックスペプチド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメ
インは以下に詳述するように、Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又はＡ
ｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインのＮ末端又はＣ末端を介して
連結することができる。好適ビヒクルはＦｃドメインであり、好適Ｆｃドメイン
はＩｇＧＦｃドメインである。Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメ
インはファージディスプレイ、ＲＮＡ−ペプチドスクリーニング及び本明細書に
記載する他の方法により作成することができる。

【０００８】更に本発明はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド活性をもつ治療剤の製
造方法に関し、前記方法は、ａ．Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド活性をもつ少なくとも１種のペプ
チドを選択すること、およびｂ．前記ペプチドをビヒクルに共有結合することからなる。

【０００９】好適ビヒクルはＦｃドメインである。段階（ａ）は配列番号７又はファージデ
ィスプレイ、ＲＮＡ−ペプチドスクリーニング及び本明細書に記載する他の方法
により前記配列から誘導されるランダム配列を選択して実施することが好ましい
。

【００１０】本発明の化合物は標準合成法、組換えＤＮＡ技術又はペプチド及び融合タンパ
ク質の他の任意製造方法により製造することができる。非ペプチド部分を含む本
発明の化合物は適用可能な場合には標準ペプチド化学反応以外に標準有機化学反
応により合成することができる。

【００１１】本発明の化合物の主要用途は治療剤又は予防剤としての使用である。ビヒクル
に結合したペプチドはペプチドに類似する天然リガンドと同等又はそれ以上の活
性を有するであろう。

【００１２】本発明の化合物は適当な医薬キャリヤー材料と処方し、投与を必要とするヒト
（又は他の動物）等の患者に有効量を投与することにより治療又は予防目的に使
用することができる。他の関連側面も本発明に含まれる。

【００１３】本発明の多数の付加側面及び利点は図面と発明の詳細な説明から理解されよう
。

【００１４】図面の簡単な説明図１はＩｇＧ１抗体から誘導することができるＦｃダイマーの例を示す。図面
中の「Ｆｃ」は本明細書で言う「Ｆｃドメイン」の意味に含まれるＦｃ変異体の
任意のものを表す。「Ｘ^１」及び「Ｘ^２」は以下に定義するペプチド又はリンカ
ー−ペプチド組合せを表す。特定ダイマーは以下の通りである。

【００１５】Ａ、Ｄ：単一ジスルフィド結合ダイマー。ＩｇＧ１抗体は一般に定常領域と可
変領域の間のヒンジ領域に２個のジスルフィド結合をもつ。図１Ａ及び１ＤのＦ
ｃドメインはこれらの２個のジスルフィド結合を切断するか又はシステイン残基
を非反応性残基（例えばアラニン残基）で置換することにより形成することがで
きる。図１ＡではＦｃドメインはペプチドのアミノ末端に連結しており、図１Ｄ
ではカルボキシル末端に連結している。

【００１６】Ｂ、Ｅ：二重ジスルフィド結合ダイマー。このＦｃドメインはＦｃドメインの
２つのシステイン残基を維持するように親抗体を切断するか又はこのようなＦｃ
ドメインをコードする配列を含む構築物から発現させることにより形成すること
ができる。図１ＢではＦｃドメインはペプチドのアミノ末端に連結しており、図
１Ｅではカルボキシル末端に連結している。

【００１７】Ｃ、Ｆ：非共有ダイマー。このＦｃドメインは切断又は置換によりシステイン
残基を除去することにより形成することができる。システイン残基と宿主細胞に
存在する他のタンパク質のシステイン残基の反応により形成される不純物を避け
るためにシステイン残基を除去することが望ましいことがある。Ｆｃドメインの
非共有結合はダイマーを保持するのに十分である。

【００１８】他のダイマーは異なる型の抗体（例えばＩｇＧ２、ＩｇＭ）から誘導されるＦ
ｃドメインを使用することにより形成することができる。

【００１９】図２は薬理活性ペプチドのタンデム反復配列をもつ本発明の好適化合物の構造
を示す。図２Ａは単鎖分子を示し、分子のＤＮＡ構築物も示す。図２Ｂはリンカ
ー−ペプチド部分がダイマーの一方の鎖のみに存在するダイマーを示す。図２Ｃ
は両方の鎖にペプチド部分をもつダイマーを示す。図２Ｃのダイマーは図２Ａに
示す単鎖をコードするＤＮＡ構築物が発現されると所定宿主細胞で自然に形成さ
れる。他の宿主細胞では、ダイマーの形成を助長する条件に細胞をおいてもよい
し、ダイマーをｉｎｖｉｔｒｏ形成してもよい。

【００２０】図３は本発明で使用することができるヒトＩｇＧ１Ｆｃの核酸配列とアミノ酸
配列の例（夫々配列番号１及び２）を示す。

【００２１】発明の詳細な説明用語の定義本明細書全体を通して使用する用語は個々の事例で特に限定しない限り、次の
ように定義される。

【００２２】「含む」なる用語は、化合物が所与配列のＮ又はＣ末端の一方又は両方に付加
アミノ酸を含んでいてもよいことを意味する。当然のことながら、これらの付加
アミノ酸は化合物の活性をさほど妨げないものとする。

【００２３】「酸性残基」なる用語は酸性基を含む側鎖をもつＤ又はＬ形アミノ酸残基を意
味する。酸性残基の例としてはＤとＥが挙げられる。

【００２４】「芳香族残基」なる用語は芳香族基を含む側鎖をもつＤ又はＬ形アミノ酸残基
を意味する。芳香族残基の例としてはＦ、Ｙ及びＷが挙げられる。

【００２５】「塩基性残基」なる用語は塩基性基を含む側鎖をもつＤ又はＬ形アミノ酸残基
を意味する。塩基性残基の例としてはＨ、Ｋ及びＲが挙げられる。

【００２６】「親水性残基」なる用語は極性基を含む側鎖をもつＤ又はＬ形アミノ酸残基を
意味する。親水性残基の例としてはＣ、Ｓ、Ｔ、Ｎ及びＱが挙げられる。

【００２７】「非機能性残基」なる用語は酸性、塩基性又は芳香族基を含まない側鎖をもつ
Ｄ又はＬ形アミノ酸残基を意味する。中性アミノ酸残基の例としてはＭ、Ｇ、Ａ
、Ｖ、Ｉ、Ｌ及びノルロイシン（Ｎｌｅ）が挙げられる。

【００２８】「ビヒクル」なる用語は分解を防ぎ、及び／又は半減期を延ばし、毒性を低減
し、免疫原性を低減するか、又は治療タンパク質の生物活性を増進する分子を意
味する。ビヒクルの例としては（好適例である）Ｆｃドメインや直鎖ポリマー（
例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリリジン、デキストラン等）、分
枝鎖ポリマー（例えばＤｅｎｋｅｎｗａｌｔｅｒらの１９８１年９月１５日発行
米国特許第４，２８９，８７２号、Ｔａｍの１９９３年７月２０日発行米国特許
第５，２２９，４９０号、Ｆｒｅｃｈｅｔらの１９９３年１０月２８日公開ＷＯ
９３／２１２５９参照）、脂質、コレステロール基（例えばステロイド）、炭水
化物又はオリゴ糖（例えばデキストラン）、又はサルベージレセプターに結合す
る任意天然もしくは合成タンパク質、ポリペプチドもしくはペプチドが挙げられ
る。ビヒクルについては追って詳述する。

【００２９】「天然Ｆｃ」なる用語はモノマー形であるかマルチマー形であるかを問わず、
完全抗体の消化により得られる非抗原結合フラグメントの配列を含む分子又は配
列を意味する。天然Ｆｃの免役グロブリン源はヒト起源が好ましく、このような
免役グロブリンの任意のものでよいが、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２が好ましい。天然
Ｆｃはモノマーポリペプチドから構成され、共有（即ちジスルフィド結合）又は
非共有結合により連結してダイマー又はマルチマー形とすることができる。天然
Ｆｃ分子のモノマーサブユニット間の分子間ジスルフィド結合数はクラス（例え
ばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）又はサブクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、Ｉｇ
Ｇ３、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２）に応じて１〜４である。天然Ｆｃの１例はＩｇＧ
のパパイン消化により得られるジスルフィド結合ダイマーである（Ｅｌｌｉｓｏ
ｎら（１９８２），ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．１０：４０７１−９
参照）。本明細書で使用する「天然Ｆｃ」なる用語はモノマー、ダイマー及びマ
ルチマー形のすべてに適用される。

【００３０】「Ｆｃ変異体」なる用語は天然Ｆｃから変異しているが、依然としてサルベー
ジレセプターＦｃＲｎとの結合部位を含む分子又は配列を意味する。国際出願Ｗ
Ｏ９７／３４６３１（１９９７年９月２５日公開）及びＷＯ９６／３２４７８は
Ｆｃ変異体の例とサルベージレセプターとの相互作用を記載しており、その開示
内容全体を参照により本明細書の一部とする。即ち、「Ｆｃ変異体」なる用語は
非ヒト天然Ｆｃからヒト化された分子又は配列を含む。更に、天然Ｆｃが本発明
の融合分子には不要な構造特徴又は生物活性を提供する部位を含む場合には、こ
のような部位は除去してもよい。従って、「Ｆｃ変異体」なる用語は（１）ジス
ルフィド結合形成、（２）選択宿主細胞との不適合性、（３）選択宿主細胞で発
現後のＮ末端不均一性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）
サルベージレセプター以外のＦｃレセプターとの結合、又は（７）抗体依存性細
胞毒性（ＡＤＣＣ）に影響するか又はこれに関与する１個以上の天然Ｆｃ部位又
は残基を欠失する分子又は配列を含む。Ｆｃ変異体については追って詳述する。

【００３１】「Ｆｃドメイン」なる用語は上記に定義したような天然Ｆｃ及びＦｃ変異体分
子及び配列を包含する。Ｆｃ変異体及び天然Ｆｃと同様に、「Ｆｃドメイン」な
る用語は完全抗体から消化したか他の手段により生産したかを問わず、モノマー
又はマルチマー形分子を含む。

【００３２】Ｆｃドメイン又はＦｃドメインを含む分子について適用する「マルチマー」な
る用語は共有結合、非共有結合又は共有結合と非共有結合両者の相互作用により
結合した２個以上のポリペプチド鎖をもつ分子を意味する。ＩｇＧ分子は一般に
ダイマーを形成し、ＩｇＭはペンタマー、ＩｇＤはダイマー、ＩｇＡはモノマー
、ダイマー、トリマー又はテトラマーを形成する。マルチマーはＦｃの天然Ｉｇ
源の配列とその活性を利用するか、又はこのような天然Ｆｃを（以下に定義する
ように）誘導体化することにより形成することができる。

【００３３】Ｆｃドメイン又はＦｃドメインを含む分子について適用する「ダイマー」なる
用語は共有又は非共有結合した２個のポリペプチド鎖をもつ分子を意味する。従
って、本発明の範囲に含まれるダイマーの例は図２に示す通りである。

【００３４】「誘導体化する」や「誘導体」又は「誘導体化した」なる用語は夫々次の方法
とそれにより得られる化合物を含む。（１）化合物が環状部分をもち、例えば化
合物内のシステイン残基間が架橋しているか、（２）化合物が架橋しているか又
は架橋部位をもち、例えば化合物がシステイン残基をもち、従って培養中又はｉ
ｎｖｉｖｏで架橋ダイマーを形成するか、（３）１個以上のペプチド結合が非
ペプチド結合で置換されているか、（４）Ｎ末端が−ＮＲＲ^１、ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ^１、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ^１、−ＮＲＳ（Ｏ）_２Ｒ^１、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ、ス
クシンイミド基、又は置換もしくは非置換ベンジルオキシカルボニル−ＮＨ−（
式中、Ｒ及びＲ^１と環置換基は下記に定義する通りである）で置換されているか
、（５）Ｃ末端が−Ｃ（Ｏ）Ｒ^２又は−ＮＲ^３Ｒ^４（式中、Ｒ^２、Ｒ^３及びＲ^４は下記に定義する通りである）で置換されているか、（６）化合物の個々のアミ
ノ酸部分が選択側鎖又は末端残基と反応することが可能な物質で処理することに
より改変されている。誘導体については追って詳述する。

【００３５】「ペプチド」なる用語は３〜４０アミノ酸の分子を意味し、５〜６０アミノ酸
の分子が好ましい。ペプチドの例としてはＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプ
チド、Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチドの１個以上のランダム残基をも
つペプチド、又はランダム化配列を含むペプチドが挙げられる。

【００３６】ペプチド配列について使用する「ランダム化」なる用語は（例えばファージデ
ィスプレイ法又はＲＮＡ−ペプチドスクリーニングにより選択される）完全にラ
ンダムな配列と、天然分子の１個以上の残基を天然分子では該当位置に出現しな
いアミノ酸残基で置換した配列を意味する。ペプチド配列同定方法の例としては
、ファージディスプレイ、大腸菌ディスプレイ、リボソームディスプレイ、ＲＮ
Ａ−ペプチドスクリーニング、化学スクリーニング等が挙げられる。

【００３７】「Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様」なる用語はＡｐｏ−ＡＩ両親
媒性ヘリックスペプチドと同様に１種以上のＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペ
プチド活性アッセイパラメーターを増減する分子を意味する。Ａｐｏ−ＡＩ両親
媒性ヘリックスペプチド活性アッセイの１例は実施例２に開示する。

【００３８】「Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチドアンタゴニスト」なる用語はＡｐ
ｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチドと反するように１種以上のアッセイパラメ
ーターを増減する分子を意味する。Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド活
性アッセイの１例は実施例２に開示する。

【００３９】更に、本発明の化合物の生理的に許容可能な塩も本発明に含まれる。「生理的
に許容可能な塩」なる用語は医薬的に許容可能であることが分かっているか又は
後に判明する任意塩を意味する。特定例としては、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩
、ハロゲン化水素酸塩（例えば塩酸塩や臭化水素酸塩）、硫酸塩、クエン酸塩、
酒石酸塩、グリコール酸塩及び蓚酸塩が挙げられる。

【００４０】化合物の構造概論。Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド結合アミノ酸配列はＳｐｉｎ
ｉｖａｓら，１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７６：４８−５７；Ｏｗｅｎｓら
（１９９０），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８６：１１４２−１１５０；Ｍｅ
ｎｄｅｚら（１９９４），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４（４）：１６９８
−１７０５；Ｓｐｒｉｎｉｖａｓら（１９９１），Ｊ．ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅ
ｍ．４５（２）：２２４−２３７に記載されている。これらの文献の各々はその
開示内容全体を参照により本明細書の一部とする。

【００４１】本発明者らは特定の好ましい公知又は天然配列を同定した。これらの配列はペ
プチドの結合親和性を維持するかあるいは改善しながら１個以上のアミノ酸を変
異させることが可能な上記技術によりランダム化することができる。

【００４２】本発明により製造した組成物では、ペプチドのＮ末端又はＣ末端を介してペプ
チドをビヒクルに結合することができる。従って、本発明のビヒクル−ペプチド
分子は次式Ｉ：（Ａ^１）_ａ−Ｆ^１−（Ａ^２）_ｂにより表すことができ、式中、Ｆ^１はビヒクル（好ましくはＦｃドメイン）であり、Ａ^１及びＡ^２は各々独立して−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１、−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２、−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２−（Ｌ^３）_ｅ−Ｐ^３及び−
（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２−（Ｌ^３）_ｅ−Ｐ^３−（Ｌ^４）_ｆ−Ｐ^４か
ら選択され、Ｐ^１、Ｐ^２、Ｐ^３及びＰ^４は各々独立してＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプ
チド又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメインの配列であり、Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３及びＬ^４は各々独立してリンカーであり、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ及びｆは各々独立して０又は１であり、但し、ａとｂの少な
くとも一方は１である。

【００４３】即ち、化合物Ｉは、式ＩＩ：Ａ^１−Ｆ^１（式中、Ｆ^１はＦｃドメインであり、Ａ^１のＣ末端に結合し
ている）の好適化合物とそのマルチマー、式ＩＩＩ：Ｆ^１−Ａ^２（式中、Ｆ^１はＦｃドメインであり、Ａ^２のＮ末端に結合
している）の好適化合物とそのマルチマー、式ＩＶ：Ｆ^１−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１（式中、Ｆ^１はＦｃドメインであり、−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１のＮ末端に結合している）の好適化合物とそのマルチマー、及び式Ｖ：Ｆ^１−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２（式中、Ｆ^１はＦｃドメイン
であり、−Ｌ^１−Ｐ^１−Ｌ^２−Ｐ^２のＮ末端に結合している）の好適化合物とそ
のマルチマーを含む。

【００４４】ペプチド。本発明に関しては任意数のペプチドを使用することができる。ペプ
チドは天然タンパク質の配列の一部を含むものでもよいし、天然タンパク質の配
列から誘導されるランダム化配列でもよいし、完全ランダム化配列でもよい。本
発明で使用するペプチドを作成するにはファージディスプレイ及びＲＮＡ−ペプ
チドスクリーニングが特に有用である。

【００４５】特に有用なペプチド配列は式：ＡｓｐＴｒｐＬｅｕＬｙｓＡｌａＰｈｅＴｙｒＡｓｐＬｙｓ
ＶａｌＡｌａＧｌｕＬｙｓＬｅｕＬｙｓＧｌｕＡｌａＰｈｅ（
配列番号７）で表される。

【００４６】これらのペプチド配列を含む本発明の分子は当分野で公知の方法により製造す
ることができる。リンカーを介して又は介さずにこれらのペプチドの任意のもの
をタンデムに（即ち順次）連結することができ、タンデム結合の数例を表２に示
す。システイン残基を含む任意ペプチドを別のＣｙｓ含有ペプチドと架橋するこ
とができ、これらのペプチドの一方又は両方をビヒクルに結合することができる
。更に、２個以上のＣｙｓ残基をもつ任意ペプチドはペプチド内ジスルフィド結
合を形成することができる。これらのペプチドはいずれも後述するように誘導体
化することができる。

【００４７】配列番号７のアミノ酸配列の保存及び／又は非保存改変により他の有用なペプ
チド配列も得られる。

【００４８】保存改変によると、改変前のペプチドと同様の機能的及び化学的特徴をもつペ
プチドが得られる。他方、（ａ）例えばシート又は螺旋構造等の置換領域の分子
主鎖の構造、（ｂ）標的部位の分子の電荷もしくは疎水性、又は（ｃ）分子の寸
法を維持する効果が相当異なるアミノ酸配列に置換を選択することにより、ペプ
チドの機能的及び／又は化学的特徴の実質的改変が得られる。

【００４９】例えば、「保存アミノ酸置換」により、該当位置のアミノ酸残基の極性又は電
荷に殆ど又は全く影響を与えないように天然アミノ酸残基を非天然残基で置換す
ることができる。更に、「アラニンスキャニング変異誘発」について従来記載さ
れているようにポリペプチドの任意天然残基をアラニンで置換してもよい（アラ
ニンスキャニング変異誘発については、例えばＭｃＬｅｎｎａｎら，１９９８，
ＡｃｔａＰｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５−６７；Ｓ
ａｓａｋｉら，１９９８，Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１−２４参照）。

【００５０】（保存又は非保存を問わず）所望アミノ酸置換はこのような置換が所望される
時点で当業者により決定することができる。例えば、アミノ酸置換を使用してペ
プチド配列の重要な残基を同定したり、本明細書に記載するペプチド又はビヒク
ル−ペプチド分子（上記式参照）の親和性を増減することができる。アミノ酸置
換の例を表１に示す。

【００５１】

【表１】

【００５２】所定態様では、保存アミノ酸置換は生物系での合成ではなく化学的ペプチド合
成により一般に組込まれる非天然アミノ酸残基も包含する。

【００５３】上記「用語の定義」の項に示したように、天然残基は配列改変に有用であると
思われる共通側鎖性質に基づいて分類することができる。例えば、非保存置換で
はこれらの分類の１つのメンバーを別の分類からのメンバーで交換することが考
えられる。このような置換残基は非ヒトオーソログに相同のペプチド領域に導入
してもよいし、分子の非相同領域に導入してもよい。更に、鎖方向を変える目的
でＰ又はＧを使用して改変を行ってもよい。

【００５４】このような改変を行う際には、アミノ酸のハイドロパシーインデックスを考慮
することができる。各アミノ酸はその疎水性及び電荷特徴に基づいてハイドロパ
シーインデックスを割当てられており、これらは、イソロイシン（＋４．５）、
バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、
システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１
．８）、グリシン（−０．４）、スレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）
、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）
、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸（−３．５）、グルタミン（−３．５
）、アスパラギン酸（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リジン（−３．
９）及びアルギニン（−４．５）である。

【００５５】タンパク質に相互作用性生物機能を付与するのにアミノ酸ハイドロパシーイン
デックスが重要であることは当分野で知られている。Ｋｙｔｅら，Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）。類似ハイドロパシーインデ
ックス又はスコアをもつ他のアミノ酸を所定アミノ酸で置換しても類似生物活性
が維持されることは知られている。ハイドロパシーインデックスに基づいて変異
を行う場合、ハイドロパシーインデックスが±２以内のアミノ酸の置換が好まし
く、±１以内が特に好ましく、±０．５以内が更に特に好ましい。

【００５６】親水性に基づいて類似アミノ酸の置換を有効に実施できることも当分野で知ら
れている。タンパク質の最大局所平均親水性はその隣接アミノ酸の親水性に左右
され、その免役原性と抗原性、即ちタンパク質の生物学的性質に相関する。

【００５７】以下の親水性値がアミノ酸残基に割当てられている。アルギニン（＋３．０）
、リジン（＋３．０）、アスパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３
．０１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０
．２）、グリシン（０）、スレオニン（−０．４）、プロリン（−０．５±１）
、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、
メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロ
イシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）、
トリプトファン（−３．４）。類似親水性値に基づいて変異を行う場合、親水性
値が±２以内のアミノ酸の置換が好ましく、±１以内が特に好ましく、±０．５
以内が更に特に好ましい。親水性に基づいて一次アミノ酸配列からエピトープを
同定することもできる。これらの領域は「エピトープコア領域」とも言う。

【００５８】当業者は周知技術を使用して上記配列に記載したようなポリペプチドの適切な
変異体を決定することができよう。活性を損なわずに変異できる分子の適切な領
域を同定するためには、当業者は活性に重要でないとされる領域を変異させれば
よい。例えば、同一種又は他の種からの類似活性をもつ類似ポリペプチドが分か
っている場合には、当業者はあるペプチドと類似ペプチドのアミノ酸配列を比較
すればよい。このような比較により、類似ポリペプチド間で保存されている分子
の残基及び部分を同定することができる。当然のことながら、このような類似ペ
プチドに対して保存されていないペプチド領域を変異させてもペプチドの生物活
性及び／又は構造に悪影響を与える可能性は低い。同様に当業者に自明の通り、
比較的保存された領域でも活性を維持しながら天然残基を化学的に類似のアミノ
酸で置換することができる（保存アミノ酸残基置換）。従って、生物活性又は構
造に重要であると思われる領域であっても生物活性を損なったりペプチド構造に
悪影響を与えることなく保存アミノ酸置換の対象とすることができる。

【００５９】更に、当業者は活性又は構造に重要な類似ペプチドの残基を同定する構造−機
能試験を検討することができる。このような比較に鑑み、類似ペプチドで活性又
は構造に重要なアミノ酸残基に対応するペプチドにおけるアミノ酸残基の重要性
を予測することができる。当業者はペプチドのこのような予測される重要なアミ
ノ酸残基を化学的に類似のアミノ酸で置換するように選択することができる。

【００６０】当業者は類似ポリペプチドで三次元構造とその構造に関連するアミノ酸配列を
分析することもできる。この情報に鑑み、当業者はその三次元構造に関してペプ
チドのアミノ酸残基の整列を予測することができる。タンパク質の表面にあると
予測されるアミノ酸残基は他の分子との重要な相互作用に関与していると思われ
るので、当業者はこのような残基に根本的変異を行わないように選択することが
できる。更に、当業者は各所望アミノ酸残基に単一アミノ酸置換を含む試験変異
体を作成することができる。その後、当業者に公知の活性アッセイを使用して変
異体をスクリーニングすることができる。このようなデータを使用すれば適切な
変異体に関する情報を集めることができよう。例えば、特定アミノ酸残基の変異
により活性が喪失、不当に低下又は不適切になったと認められたならば、このよ
うな変異をもつ変異体は避けられる。換言するならば、このような日常実験から
集めた情報に基づき、当業者は単独又は他の突然変異と組合せてそれ以上置換す
べきでないアミノ酸を容易に決定することができる。

【００６１】多数の科学文献が二次構造の予測について記載している。ＭｏｕｌｔＪ．，
Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．ｉｎＢｉｏｔｅｃｈ．，７（４）：４２２−４２７（１９９
６）；Ｃｈｏｕら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３（２）：２２２−２４５（
１９７４）；Ｃｈｏｕら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１３（２）：２１１−
２２２（１９７４）；Ｃｈｏｕら，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒ
ｅａｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４７：４５−１４８（１９７８）；Ｃｈｏｕら，
Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４７：２５１−２７６及びＣｈｏｕら，Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．，２６：３６７−３８４（１９７９）参照。更に、二次構造
の予測を助けるコンピュータープログラムが現在利用できる。二次構造予測方法
の１つは相同性モデル化による。例えば、配列一致度が＞３０％、又は類似度が
＞４０％の２種のポリペプチド又はタンパク質は類似の構造トポロジーをもつこ
とが多い。最近のタンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の増加により、ポリペ
プチド又はタンパク質の構造内の可能フォールド数を含めて二次構造の予測可能
性は増進している。Ｈｏｌｍら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２７（１）：
２４４−２４７（１９９９）参照。所与ポリペプチド又はタンパク質のフォール
ド数は限られており、臨界構造数が分かると、構造予測は著しく正確になること
が示唆されている（Ｂｒｅｎｎｅｒら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏ
ｌ．，７（３）：３６９−３７６（１９９７））。

【００６２】その他の二次構造予測方法としては、「スレディング」（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，
Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３７７−８７（１
９９７）；Ｓｉｐｐｌら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ４（１）：１５−９（１９９６
））、「プロフィル分析」（Ｂｏｗｉｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５３：１６４−
１７０（１９９１）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８３：
１４６−１５９（１９９０）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．，８４（１３）：４３５５−８（１９８７））及び「進化結合」（
Ｈｏｍｅ前出及びＢｒｅｎｎｅｒ前出参照）が挙げられる。

【００６３】ビヒクル。本発明はアミノ酸残基の１個のＮ末端、Ｃ末端又は側鎖を介してペ
プチドに結合した少なくとも１種のビヒクル（Ｆ^１）の存在を必要とする。多重
ビヒクルを使用してもよく、例えば各末端にＦｃを配置してもよいし、一方の末
端にＦｃを配置し、他方の末端又は側鎖にＰＥＧ基を配置してもよい。

【００６４】Ｆｃドメインが好ましいビヒクルである。ＦｃドメインはペプチドのＮ又はＣ
末端に融合してもよいし、Ｎ末端とＣ末端の両方に融合してもよい。Ｎ末端に融
合するのが好ましい。

【００６５】上述のように、本発明の範囲内ではＦｃ変異体が適切なビヒクルである。サル
ベージレセプターとの結合を維持するという条件で天然Ｆｃを高度に改変して本
発明のＦｃ変異体を形成することができる。例えばＷＯ９７／３４６３１及びＷ
Ｏ９６／３２４７８参照。このようなＦｃ変異体では、本発明の融合分子に不要
な構造特徴又は機能活性を提供する天然Ｆｃの１個以上の部位を除去することが
できる。これらの部位は例えば残基の置換もしくは欠失、その部位への残基挿入
、又はその部位を含む部分の切断により除去することができる。挿入又は置換す
る残基はペプチド類似体又はＤ−アミノ酸等の改変アミノ酸でもよい。Ｆｃ変異
体は多数の理由から望ましいと思われ、そのいくつかを以下に述べる。Ｆｃ変異
体の例としては次のような分子及び配列が挙げられる。

【００６６】１．ジスルフィド結合形成に関与する部位を除去する。このような除去により
、本発明の分子を作成するために使用した宿主細胞に存在する他のシステイン含
有タンパク質との反応を避けることができる。このためには、Ｎ末端のシステイ
ン含有セグメントを切断するか、又はシステイン残基を欠失させるかもしくは他
のアミノ酸（例えばアラニン、セリン）で置換すればよい。特に、配列番号２の
Ｎ末端２０アミノ酸セグメントを切断するか、又は配列番号２の７及び１０位の
システイン残基を欠失もしくは置換すればよい。システイン残基を除去しても、
単鎖Ｆｃドメインは非共有結合されるダイマーＦｃドメインを形成することがで
きる。

【００６７】２．選択宿主細胞との適合性を増すように天然Ｆｃを改変する。例えば、プロ
リンイミノペプチダーゼ等の大腸菌での消化酵素により認識可能な典型的天然Ｆ
ｃのＮ末端近傍のＰＡ配列を除去することができる。特に分子が大腸菌等の細菌
細胞で組換えにより発現される場合には、更にＮ末端メチオニン残基を加えても
よい。配列番号２のＦｃドメインはこのようなＦｃ変異体の１例である。

【００６８】３．選択宿主細胞で発現される場合にＮ末端不均一性を防ぐために天然Ｆｃの
Ｎ末端の一部を除去する。このためには、Ｎ末端の最初の２０個のアミノ酸残基
のいずれか、特に１、２、３、４及び５位のアミノ酸残基を欠失させればよい。

【００６９】４．１個以上のグリコシル化部位を除去する。一般にグリコシル化している残
基（例えばアスパラギン）は細胞溶解応答を付与する可能性がある。このような
残基を欠失させるか又は非グリコシル化残基（例えばアラニン）で置換すればよ
い。

【００７０】５．Ｃ１ｑ結合部位等の補体との相互作用に関与する部位を除去する。例えば
、ヒトＩｇＧ１のＥＫＫ配列を欠失又は置換すればよい。補体強化は本発明の分
子には有利でないと思われるので、このようなＦｃ変異体で避けることができる
。

【００７１】６．サルベージレセプター以外のＦｃレセプターとの結合に影響を与える部位
を除去する。天然Ｆｃは本発明の融合分子に不要な所定の白血球細胞との相互作
用部位をもつことがあるので除去してもよい。

【００７２】７．ＡＤＣＣ部位を除去する。ＡＤＣＣ部位は当分野で知られている。例えば
、ＩｇＧ１のＡＤＣＣ部位についてはＭｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（５）
：６３３−９（１９９２）参照。これらの部位も本発明の融合分子には不要であ
るので除去してもよい。

【００７３】８．天然Ｆｃが非ヒト抗体から誘導される場合には、天然Ｆｃをヒト化しても
よい。一般に、天然Ｆｃをヒト化するためには、非ヒト天然Ｆｃの選択残基をヒ
ト天然Ｆｃに一般に存在する残基で置換する。抗体ヒト化技術は当分野で周知で
ある。

【００７４】好ましいＦｃ変異体としては以下のものが挙げられる。配列番号２（図４）中
、１５位ロイシンをグルタミン酸、９９位グルタミン酸をアラニン、１０１位及
び１０３位リジンをアラニンで置換することができる。更に、１個以上のチロシ
ン残基をフェニルアラニン残基で置換してもよい。

【００７５】代替ビヒクルとしてはサルベージレセプターと結合することが可能なタンパク
質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、又は小分子（例えばペ
プチド類似化合物）が挙げられる。例えば、Ｐｒｅｓｔａらの１９９８年４月１
４日発行米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているようなポリペプチド
をビヒクルとして使用することができる。ファージディスプレイ又はＲＮＡ−ペ
プチドスクリーニングによりＦｃＲｎサルベージレセプターと結合するペプチド
を選択することもできる。このようなサルベージレセプター結合化合物も「ビヒ
クル」の意味に含まれ、本発明の範囲に含まれる。このようなビヒクルは（例え
ばプロテアーゼにより認識される配列を避けることにより）半減期を延ばすか又
は（例えば抗体ヒト化のように非免役原性配列を採用することにより）免役原性
を低下させるように選択すべきである。

【００７６】上述のように、ポリマービヒクルもＦ^１に使用できる。ビヒクルとして有用な
化学部分を結合する手段は種々のものが現在利用可能であり、例えばその開示内
容全体を参照により本明細書の一部とする特許協力条約（「ＰＣＴ」）国際公開
第ＷＯ９６／１１９５３号、発明の名称「Ｎ末端化学修飾タンパク質組成物及び
方法（Ｎ−ＴｅｒｍｉｎａｌｌｙＣｈｅｍｉｃａｌｌｙＭｏｄｉｆｉｅｄ
ＰｒｏｔｅｉｎＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓ）」を参
照されたい。このＰＣＴ公開は特にタンパク質のＮ末端への水溶性ポリマーの選
択的結合を開示している。

【００７７】好ましいポリマービヒクルはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥ
Ｇ基は任意の適当な分子量のものでよく、直鎖でも分枝鎖でもよい。ＰＥＧの平
均分子量は約２キロダルトン（「ｋＤ」）〜約１００ｋＤが好ましく、約５ｋＤ
〜約５０ｋＤがより好ましく、約５ｋＤ〜約１０ｋＤが最も好ましい。ＰＥＧ基
は一般にＰＥＧ部分の反応性基（例えばアルデヒド、アミノ、チオール又はエス
テル基）と本発明の化合物上の反応性基（例えばアルデヒド、アミノ又はエステ
ル基）を介してアシル化又は還元アルキル化により本発明の化合物に結合される
。

【００７８】合成ペプチドのＰＥＧ化の有用なストラテジーは溶液中に共役結合を形成する
ことにより、相互に反応性の特殊官能基を各々もつペプチドとＰＥＧ部分を結合
することからなる。ペプチドは従来の固相合成により容易に製造することができ
る（例えば図５及び６とその説明参照）。ペプチドを特定部位で適当な官能基で
「予備活性化」する。ＰＥＧ部分と反応させる前に前駆体を精製し、完全に特性
決定する。ペプチドとＰＥＧの連結は通常は水相で実施し、逆相分析ＨＰＬＣに
より容易にモニターすることができる。ＰＥＧ化ペプチドは分取ＨＰＬＣにより
容易に精製することができ、分析ＨＰＬＣ、アミノ酸分析及びレーザー脱着質量
分析により特性決定することができる。

【００７９】タンパク質修飾に使用可能な別種の水溶性ポリマーとして多糖ポリマーがある
。デキストランはα１−６結合により主に結合した個々のグルコースサブユニッ
トから構成される多糖ポリマーである。デキストラン自体は多数の分子量範囲で
入手可能であり、約１ｋＤ〜約７０ｋＤの分子量で容易に入手可能である。デキ
ストランはそのまま又は別のビヒクル（例えばＦｃ）と組合せて本発明で使用す
るのに適した水溶性ポリマーである。例えばＷＯ９６／１１９５３及びＷＯ９６
／０５３０９参照。治療又は診断用免役グロブリンに結合したデキストランの使
用は報告されており、例えばその開示内容全体を参照により本明細書の一部とす
るヨーロッパ特許公開第０３１５４５６号を参照されたい。デキストランを本発
明によりビヒクルとして使用する場合には約１ｋＤ〜約２０ｋＤのデキストラン
が好ましい。

【００８０】リンカー。任意「リンカー」基を選択できる。リンカーが存在する場合には主
にスペーサーとして機能するのでその化学構造は限定しない。リンカーはペプチ
ド結合により相互に結合したアミノ酸から構成されることが好ましい。即ち、好
適態様では、リンカーはペプチド結合により結合した１〜２０個のアミノ酸から
構成され、アミノ酸は２０種の天然アミノ酸から選択される。当業者に自明の通
り、これらのアミノ酸の一部はグリコシル化していてもよい。より好ましい態様
では、１〜２０個のアミノ酸はグリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、
グルタミン及びリジンから選択される。更により好ましくは、リンカーは立体的
に遮断されない大部分のアミノ酸（例えばグリシンとアラニン）から構成される
。即ち、好ましいリンカーはポリグリシン（特に（Ｇｌｙ）_４、（Ｇｌｙ）_５）
、ポリ（Ｇｌｙ−Ａｌａ）及びポリアラニンである。リンカーの他の特定例は、
（Ｇｌｙ）_３Ｌｙｓ（Ｇｌｙ）_４（配列番号３）、（Ｇｌｙ）_３ＡｓｎＧｌｙＳｅｒ（Ｇｌｙ）_２（配列番号４）、（Ｇｌｙ）_３Ｃｙｓ（Ｇｌｙ）_４（配列番号５）、及びＧｌｙＰｒｏＡｓｎＧｌｙＧｌｙ（配列番号６）である。

【００８１】上記命名を説明すると、例えば（Ｇｌｙ）_３Ｌｙｓ（Ｇｌｙ）_４はＧｌｙ−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号３）を意味
する。単アミノ酸リンカー（例えば−Ａｌａ−又は−Ｇｌｙ−）が好ましいリン
カーであり、ＧｌｙとＡｌａの組合せも好ましい。ここに示すリンカーは例示で
あり、本発明の範囲に含まれるリンカーはもっと著しく長いものでもよいし、他
の残基を含むものでもよい。

【００８２】非ペプチドリンカーも利用できる。例えば、−ＮＨ−（ＣＨ_２）_ｓ−Ｃ（Ｏ）
−（式中、ｓ＝２〜２０）等のアルキルリンカーを使用できる。これらのアルキ
ルリンカーを低級アルキル（例えばＣ_１−Ｃ_６）、低級アシル、ハロゲン（例え
ばＣｌ、Ｂｒ）、ＣＮ、ＮＨ_２、フェニル等の任意非立体障害基で更に置換して
もよい。非ペプチドリンカーの１例はＰＥＧリンカー：

【００８３】

【化１】（式中、ｎはリンカーの分子量が１００〜５０００ｋＤ、好ましくは１００〜５
００ｋＤとなるように選択される）である。ペプチドリンカーは上記と同様に誘
導体を形成するように改変してもよい。

【００８４】誘導体。本発明者らは化合物のペプチド及び／又はビヒクル部分を誘導体化す
ることも意図している。このような誘導体は化合物の溶解度、吸収、生物学的半
減期等を改善すると思われる。あるいは、このような部分は化合物の望ましくな
い副作用等をなくすか又は緩和すると思われる。誘導体の例としては次のような
化合物が挙げられる。

【００８５】１．化合物又はその一部が環状である。例えば、（例えばリンカーに）２個以
上のＣｙｓ残基を含むようにペプチド部分を改変し、ジスルフィド結合形成によ
り環化できるようにする。

【００８６】２．化合物を架橋するか又は分子間で架橋できるようにする。例えば、１個の
Ｃｙｓ残基を含むようにペプチド部分を改変し、類似分子と分子間ジスルフィド
結合を形成できるようにする。化合物は下記分子のようにそのＣ末端を介して架
橋してもよい。

【００８７】

【化２】

【００８８】３．１個以上のペプチド［−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−］結合を非ペプチド結合で置換す
る。非ペプチド結合の例は−ＣＨ_２−カルバミン酸［−ＣＨ_２−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ
−］、ホスホン酸、−ＣＨ_２−スルホンアミド［−ＣＨ_２−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ−］
、尿素［−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−］、−ＣＨ_２−第２アミン及びアルキル化ペプチ
ド［−Ｃ（Ｏ）ＮＲ^６−（式中、Ｒ^６は低級アルキルである）］である。

【００８９】４．Ｎ末端を誘導体化する。一般に、Ｎ末端をアシル化するか又は置換アミン
に改変することができる。Ｎ末端誘導体基の例としては、−ＮＲＲ^１（−ＮＨ_２を除く）、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ^１、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ^１、−ＮＲＳ（Ｏ）_２Ｒ^１、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ^１、スクシンイミド、又はベンジルオキシカルボニル−
ＮＨ−（ＣＢＺ−ＮＨ−）が挙げられ、式中、Ｒ及びＲ^１は各々独立して水素又
は低級アルキルであり、フェニル環はＣ_１−Ｃ_４アルキル、Ｃ_１−Ｃ_４アルコキ
シ、クロロ及びブロモから構成される群から選択される１〜３個の置換基で置換
されていてもよい。

【００９０】５．遊離Ｃ末端を誘導体化する。一般に、Ｃ末端をエステル化又はアミド化す
る。Ｃ末端誘導体基の例としては例えば−Ｃ（Ｏ）Ｒ^２（式中、Ｒ^２は低級アル
コキシである）又は−ＮＲ^３Ｒ^４（式中、Ｒ^３及びＲ^４は独立して水素又はＣ_１ −Ｃ_８アルキル（好ましくはＣ_１−Ｃ_４アルキル）である）が挙げられる。

【００９１】６．ジスルフィド結合を別の好ましくはより安定した架橋部分（例えばアルキ
レン）で置換する。例えばＢｈａｔｎａｇａｒら（１９９６），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃ
ｈｅｍ．３９：３８１４−９；Ａｌｂｅｒｔｓら（１９９３）Ｔｈｉｒｔｅｅｎ
ｔｈＡｍ．Ｐｅｐ．Ｓｙｍｐ．，３５７−９参照。

【００９２】７．１個以上の各アミノ酸残基を修飾する。以下に詳述するように、種々の誘
導体化剤が選択側鎖又は末端残基と特異的に反応することが知られている。

【００９３】リジン剤とアミノ末端残基は無水琥珀酸又は他のカルボン酸と反応し、リジン
残基の電荷を逆転することができる。αアミノ含有残基を誘導体化するのに適し
た他の試薬としてはイミドエステル（例えばピコリンイミド酸メチル）、リン酸
ピリドキサル、ピリドキサル、クロロホウ水素化物、トリニトロベンゼンスルホ
ン酸、Ｏ−メチルイソ尿素、２，４−ペンタンジオン、及びグリチオキサレート
とのトランスアミナーゼ触媒反応が挙げられる。

【００９４】アルギニン残基はフェニルグリオキサル、２，３−ブタンジオン、１，２−シ
クロヘキサンジオン及びニンヒドリン等の数種の慣用試薬の任意１種又は組合せ
との反応により修飾することができる。グアニジン官能基のｐＫａが高いため、
アルギニン残基の誘導体化はアルカリ条件下で反応を実施する必要がある。更に
、これらの試薬はリジンの基やアルギニンεアミノ基と反応することができる。

【００９５】チロシン残基の特定修飾は広く研究されており、芳香族ジアゾニウム化合物又
はテトラニトロメタンとの反応によりチロシン残基にスペクトルラベルを導入す
ることに特に関心が寄せられている。Ｎ−アセチルイミダゾールとテトラニトロ
メタンを使用して夫々Ｏ−アセチルチロシル種と３−ニトロ誘導体を形成するの
が最も一般的である。

【００９６】カルボキシ側鎖基（アスパルチル又はグルタミル）は１−シクロヘキシル−３
−［２−モルホリニル−（４−エチル）］カルボジイミド又は１−エチル−３−
（４−アゾニア−４，４−ジメチルペンチル）カルボジイミド等のカルボジイミ
ド（Ｒ’−Ｎ＝Ｃ＝Ｎ−Ｒ’）との反応により選択的に修飾することができる。
更に、アスパラギン酸残基とグルタミン酸残基はアンモニウムイオンとの反応に
よりアスパラギン残基とグルタミン残基に変換することができる。

【００９７】グルタミン残基とアスパラギン残基は対応するグルタミン酸残基とアスパラギ
ン酸残基に脱アミド化することができる。あるいは、これらの残基を緩酸性条件
下で脱アミド化する。これらの残基のいずれの形態も本発明の範囲に該当する。

【００９８】システイン残基はアミノ酸残基又は他の部分で置換し、ジスルフィド結合を除
去するか又は逆に架橋を安定化することができる。例えば、Ｂｈａｔｎａｇａｒ
ら（１９９６），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３９：３８１４−９参照。

【００９９】ペプチド又はその機能的誘導体を非水溶性支持マトリックス又は他の高分子ビ
ヒクルに架橋するには二官能剤による誘導体化が有用である。一般に使用されて
いる架橋剤としては例えば１，１−ビス（ジアゾアセチル）−２−フェニルエタ
ン、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（例えば４−
アジドサリチル酸とのエステル）、ホモ二官能性イミドエステル（例えばジスク
シンイミジルエステル、例えば３，３’−ジチオビス（スクシンイミジルプロピ
オネート））、及び二官能性マレイミド（例えばビス−Ｎ−マレイミド−１，８
−オクタン）が挙げられる。メチル−３−［（ｐ−アジドフェニル）ジチオ］プ
ロピオイミデート等の誘導体化剤は光の存在下で架橋を形成することが可能な光
活性化性中間体を生成する。あるいは、臭化シアン活性化炭水化物等の反応性非
水溶性マトリックスや米国特許第３，９６９，２８７号、３，６９１，０１６号
、４，１９５，１２８号、４，２４７，６４２号、４，２２９，５３７号及び４
，３３０，４４０号に記載されている反応性基質をタンパク質固定化に使用して
もよい。

【０１００】炭水化物（オリゴ糖）基はタンパク質中のグリコシル化部位であることが分か
っている部位に簡便に結合することができる。一般に、Ｏ結合オリゴ糖はセリン
（Ｓｅｒ）又はスレオニン（Ｔｈｒ）残基に結合し、Ｎ結合オリゴ糖は配列Ａｓ
ｎ−Ｘ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（式中、Ｘはプロリン以外の任意アミノ酸とすることが
できる）の一部である場合にはアスパラギン（Ａｓｎ）残基に結合する。Ｘはプ
ロリン以外の１９種の天然アミノ酸の１種が好ましい。Ｎ結合及びＯ結合オリゴ
糖の構造と各型に存在する糖残基は異なる。両者に共通して存在する糖の１種は
Ｎ−アセチルノイラミン酸（シアル酸と言う）である。シアル酸は通常、Ｎ結合
オリゴ糖とＯ結合オリゴ糖の両者の末端残基であり、負電荷であるため、グリコ
シル化物に酸性特性を付与することができる。このような部位を本発明の化合物
のリンカーに組込むことができ、（例えばＣＨＯ、ＢＨＫ、ＣＯＳ等の哺乳動物
細胞で）ポリペプチド化合物の組換え生産中に細胞によりグリコシル化すること
が好ましい。他方、このような部位を当分野で公知の合成又は半合成法により更
にグリコシル化してもよい。

【０１０１】他の可能な修飾としては、プロリンとリジンのヒドロキシル化、セリル又はス
レオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、Ｃｙｓ中の硫黄原子の酸化、リジン
、アルギニン及びヒスチジン側鎖のαアミノ基のメチル化が挙げられる。Ｃｒｅ
ｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：ＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄＭｏｌｅｃｕ
ｌｅＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ
Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ），ｐｐ．７９−８６（１９８３）。

【０１０２】本発明の化合物はＤＮＡレベルで改変してもよい。化合物の任意部分のＤＮＡ
配列を選択宿主細胞に適合性の高いコドンに改変してもよい。好適宿主細胞であ
る大腸菌では最適化コドンが当分野で公知である。選択宿主細胞でＤＮＡを処理
し易くできるように、制限部位を除去するかサイレント制限部位を加えるように
コドンを置換してもよい。上記配列変異の任意のものを含むようにビヒクル、リ
ンカー及びペプチドＤＮＡ配列を改変してもよい。

【０１０３】製造方法本発明の化合物は主に組換えＤＮＡ技術を使用して形質転換宿主細胞で製造す
ることができる。このためには、ペプチドをコードする組換えＤＮＡ分子を製造
する。このようなＤＮＡ分子の製造方法は当分野で周知である。例えば、適当な
制限酵素を使用してペプチドをコードする配列をＤＮＡから切出すことができる
。あるいは、ホスホラミデート法等の化学合成技術を使用してＤＮＡ分子を合成
することもできる。あるいは、これらの技術を併用してもよい。

【０１０４】本発明は適当な宿主でペプチドを発現することが可能なベクターも含む。ベク
ターは適当な発現制御配列に作動的に連結したペプチドをコードするＤＮＡ分子
を含む。ＤＮＡ分子をベクターに挿入する前又は後にこの作動的連結を実施する
方法は周知である。発現制御配列としてはプロモーター、アクチベーター、エン
ハンサー、オペレーター、リボソーム結合部位、開始シグナル、停止シグナル、
キャップシグナル、ポリアデニル化シグナル及び転写又は翻訳の制御に関与する
他のシグナルが挙げられる。

【０１０５】こうしてＤＮＡ分子を担持させたベクターを使用して適当な宿主を形質転換す
る。この形質転換は当分野で周知の方法を使用して実施することができる。

【０１０６】本発明の実施には多数の入手可能な周知宿主細胞の任意のものを使用すること
ができる。特定宿主の選択は当分野で認められている多数の因子に依存する。こ
れらの因子は例えば選択発現ベクターとの適合性、ＤＮＡ分子によりコードされ
るペプチドの毒性、形質転換率、ペプチドの回収し易さ、発現特徴、バイオセー
フティ及びコストである。特定ＤＮＡ配列の発現に全宿主が等しく有効ではない
ことを考慮してこれらの因子のバランスをとる必要がある。これらの一般指針内
で有用な微生物宿主として細菌類（例えば大腸菌種）、酵母（例えばＳａｃｃｈ
ａｒｏｍｙｃｅｓ種）及び他の真菌類。昆虫、植物、培養哺乳動物（ヒトを含む
）細胞、又は当分野で公知の他の宿主が挙げられる。

【０１０７】次に、形質転換宿主を培養し、精製する。宿主細胞は所望化合物が発現される
ように慣用発酵条件下で培養することができる。このような発酵条件は当分野で
周知である。最後に、当分野で周知の方法によりペプチドを培養液から精製する
。

【０１０８】化合物は合成法により製造することもできる。例えば、固相合成技術を使用す
ることができる。利用可能な技術は当分野で周知であり、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ
（１９７３），Ｃｈｅｍ．Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ，ｐｐ．３３５−６１（Ｋ
ａｔｓｏｙａｎｎｉｓとＰａｎａｙｏｔｉｓ編）；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９
６３），Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９；Ｄａｖｉｓら（１９８
５），Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．１０：３９４−４１４；ＳｔｅｗａｒｔとＹ
ｏｕｎｇ（１９６９），ＳｏｉｌｄＰｈａｓｅＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ；米国特許第３，９４１，７６３号；Ｆｉｎｎら（１９７６），Ｔｈｅ
Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（第３版）２：１０５−２５３；及びＥｒｉｃｋｓｏｎら（
１９７６），ＴｈｅＰｒｏｔｅｉｎｓ（第３版）２：２５７−５２７に記載さ
れている方法が挙げられる。個々のペプチドの製造方法としては小ペプチドを製
造するのに最も費用効果的な方法であることから固相合成が好ましい方法である
。

【０１０９】誘導体化ペプチドを含むか又は非ペプチド基を含む化合物は周知有機化学技術
により合成することができる。

【０１１０】化合物の使用本発明の化合物はそのＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様活性に起因
する薬理活性をもつ。

【０１１１】Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチドのアゴニスト又は類似体は、・高コレステロール血症・ウイルス感染、特にＨＳＶ及びＨＩＶ感染等の治療に有用である。

【０１１２】医薬組成物概論。本発明は本発明の化合物の医薬組成物の使用方法も提供する。このよう
な医薬組成物は注射投与、又は経口、肺、経鼻、経皮もしくは他の投与形態で使
用できる。一般に、本発明は医薬的に許容可能な希釈剤、防腐剤、溶解補助剤、
乳化剤、アジュバント及び／又はキャリヤーと共に有効量の本発明の化合物を含
む医薬組成物を包含する。このような組成物は種々の緩衝液含量（例えばＴｒｉ
ｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ及びイオン強度の希釈剤；界面活性剤や
溶解補助剤（例えばＴｗｅｅｎ８０、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０）、酸化
防止剤（例えばアスコルビン酸、メタ亜硫酸水素ナトリウム）、防腐剤（例えば
Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ、ベンジルアルコール）及び増量物質（例えばラクトース、
マンニトール）等の添加剤を含み、ポリ乳酸、ポリグリコール酸等のポリマー化
合物の粒状調製物又はリポソームに材料を組込む。ヒアルロン酸も使用すること
ができ、これは循環持続時間を助長する効果があると思われる。このような組成
物は本発明のタンパク質及び誘導体の物理的状態、安定性、ｉｎｖｉｖｏ放出
率及びｉｎｖｉｖｏクリアランス率に影響を与えると思われる。例えばその開
示内容全体を参照により本明細書の一部とするＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａ
ｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（１９９０，Ｍａｃｋ
ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ１８０４２）１４３５−
１７１２頁参照。組成物は液体形態で製造してもよいし、凍結乾燥形態等の乾燥
粉末でもよい。経皮製剤のように埋込型徐放性製剤も考えられる。

【０１１３】経口剤形。本発明で使用するには、その開示内容全体を参照により本明細書の
一部とするＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅ
ｎｃｅｓ，第１８版（１９９０），ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，
Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ１８０４２の第８９章に概説されている経口固体剤形が考
えられる。固体剤形としてはタブレット、カプセル、ピル、トローチ又はロゼン
ジ、カシェ又はペレットが挙げられる。また、リポソーム又はプロテノイド封入
を使用して本発明の組成物を処方することもできる（例えば米国特許第４，９２
５，６７３号に報告されているプロテノイドミクロスフェア）。リポソーム封入
を使用し、リポソームを種々のポリマーで誘導体化してもよい（例えば米国特許
第５，０１３，５５６号）。治療に可能な固体剤形についてはその開示内容全体
を参照により本明細書の一部とするＭａｒｓｈａｌｌ，Ｋ．，ＭｏｄｅｒｎＰ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（１９７９），Ｇ．Ｓ．ＢａｎｋｅｒとＣ．Ｔ．Ｒｈ
ｏｄｅｓ編の第１０章に記載されている。一般に、製剤は本発明の化合物と、胃
環境に対する保護と生物活性材料の腸内放出を可能にする不活性成分を含む。

【０１１４】特に上記本発明の化合物の経口剤形も考えられる。必要に応じて経口送達を有
効にするように化合物を化学的に修飾してもよい。一般に考えられる化学修飾は
、（ａ）タンパク分解の抑制と（ｂ）胃又は腸からの血流への吸収を可能にする
少なくとも１部分を化合物分子自体に結合する。化合物の総安定性の増加と体内
循環時間の増加も望ましい。本発明で共有結合ビヒクルに有用な部分をこの目的
に使用してもよい。このような部分の例としてはＰＥＧ、エチレングリコールと
プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラ
ン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン及びポリプロリンが挙げられ
る。例えばＡｂｕｃｈｏｗｓｋｉとＤａｖｉｓ，ＳｏｌｕｂｌｅＰｏｌｙｍｅ
ｒ−ＥｎｚｙｍｅＡｄｄｕｃｔｓ，ＥｎｚｙｍｅｓａｓＤｒｕｇｓ（１９
８１），ＨｏｃｅｎｂｅｒｇとＲｏｂｅｒｔｓ編，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃ
ｉｅｎｃｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ，ｐｐ．３６７−８３；Ｎｅｗｍａｒｋら
（１９８２），Ｊ．Ｂｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５−９参照。使用可能
な他のポリマーはポリ−１，３−ジオキソランとポリ−１，３，６−トリオキソ
ランである。医薬用途に好ましいのは上述のようにＰＥＧ部分である。

【０１１５】経口送達剤形には、本発明の治療化合物の吸収を高めるためのキャリヤーとし
てＮ−（８−［２−ヒドロキシベンゾイル］アミノ）カプリン酸ナトリウム（Ｓ
ＮＡＣ）等の修飾脂肪族アミノ酸の塩を使用することも可能である。ＳＮＡＣを
使用するヘパリン製剤の臨床効力はＥｍｉｓｐｈｅｒｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉ
ｅｓにより実施されたフェーズＩＩ試験で立証されている。米国特許第５，７９
２，４５１号「経口薬剤送達組成物及び方法（Ｏｒａｌｄｒｕｇｄｅｌｉｖ
ｅｒｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｍｅｔｈｏｄｓ）」参照。

【０１１６】本発明の化合物は粒度約１ｍｍの顆粒剤又はペレット形態の多重微粒子として
製剤に加えてもよい。カプセル投与用材料の製剤は粉末、軟圧縮プラグ又はタブ
レットでもよい。治療剤は圧縮により製造することができる。

【０１１７】着色剤や香料も加えてもよい。例えば、タンパク質（又は誘導体）を（例えば
リポソーム又はミクロスフェア封入により）処方した後、更に着色剤や香料を加
えた冷蔵飲料等の食品に添加してもよい。

【０１１８】不活性材料で本発明の化合物を希釈又は増量してもよい。これらの希釈剤とし
ては炭水化物、特にマンニトール、αラクトース、無水ラクトース、セルロース
、スクロース、修飾デキストラン及び澱粉を挙げることができる。三リン酸カル
シウム、炭酸マグネシウム及び塩化ナトリウム等の無機塩を充填剤として使用し
てもよい。市販希釈剤としてはＦａｓｔ−Ｆｌｏ、Ｅｍｄｅｘ、ＳＴＡ−Ｒｘ１
５００、Ｅｍｂｏｍｐｒｅｓｓ及びＡｖｉｃｅｌｌがある。

【０１１９】固体剤形の治療剤の製剤に崩壊剤を加えてもよい。崩壊剤として使用される材
料としては、澱粉系市販崩壊剤Ｅｘｐｌｏｔａｂ等の澱粉が挙げられるが、これ
に限定されない。澱粉グリコール酸ナトリウム、アンバーライト、ナトリウムカ
ルボキシメチルセルロース、ウルトラミロペクチン、アルギン酸ナトリウム、ゼ
ラチン、オレンジピール、酸カルボキシメチルセルロース、天然スポンジ及びベ
ントナイトもいずれも使用できる。別の形態の崩壊剤は不溶性カチオン交換樹脂
である。粉末ガムもを崩壊剤及び結合剤として使用することができ、寒天、カラ
ヤガム又はトラガカントガム等の粉末ガムでもよい。アルギン酸とそのナトリウ
ム塩も崩壊剤として有用である。

【０１２０】治療剤を結着して硬質タブレットを形成するために結合剤を使用してもよく、
アラビアガム、トラガカントガム、澱粉及びゼラチン等の天然物からの材料が挙
げられる。更に、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）及びカ
ルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）も挙げられる。ポリビニルピロリドン（Ｐ
ＶＰ）とヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）はいずれも治療剤を
顆粒化するためにアルコール溶液中で使用することができる。

【０１２１】処方工程中に粘着を防ぐために治療剤の製剤に減摩剤を加えてもよい。治療剤
とダイ壁の間の層として潤滑剤を使用してもよく、ステアリン酸とそのマグネシ
ウム塩及びカルシウム塩、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、液体パラ
フィン、植物油及びロウが挙げられるが、これらに限定されない。ラウリル硫酸
ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、種々の分子量のポリエチレングリコー
ル、Ｃａｒｂｏｗａｘ４０００及び６０００等の可溶性潤滑剤も使用できる。

【０１２２】処方中の薬剤の流動性を改善し、圧縮中の再配置を助長する滑剤を加えてもよ
い。滑剤としては澱粉、タルク、熱分解法シリカ及び水和アルミノケイ酸塩が挙
げられる。

【０１２３】本発明の化合物の水性環境溶解を助長するために、界面活性剤を湿潤剤として
加えてもよい。界面活性剤としてはラウリル硫酸ナトリウム、スルホ琥珀酸ジオ
クチルナトリウム及びスルホン酸ジオクチルナトリウム等のアニオン界面活性剤
が挙げられる。塩化ベンズアルコニウムや塩化ベンズエトニウム等のカチオン界
面活性剤を使用してもよい。界面活性剤として製剤に加えることができるノニオ
ン界面活性剤はラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポ
リオキシエチレン水素化ひまし油１０、５０及び６０、モノステアリン酸グリセ
ロール、ポリソルベート４０、６０、６５及び８０、スクロース脂肪酸エステル
、メチルセルロース及びカルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性
剤はタンパク質又は誘導体の製剤中に単独で加えてもよいし、種々の比の混合物
として加えてもよい。

【０１２４】化合物の吸収を強化するための添加剤を製剤に加えてもよい。潜在的にこの性
質をもつ添加剤は例えばオレイン酸、リノール酸及びリノレン酸等の脂肪酸であ
る。

【０１２５】制御放出製剤が望ましい場合もある。拡散又は浸出メカニズムにより放出する
ことができる不活性マトリックス（例えばガム）に本発明の化合物を組込んでも
よい。アルギン酸塩、多糖等の遅延分解性マトリックスを製剤に組込んでもよい
。本発明の化合物の別の制御放出形態はＯｒｏｓ治療剤システム（ＡｌｚａＣ
ｏｒｐ．）に基づく方法であり、即ち、水を侵入させて浸透効果により単一小孔
から薬剤を押出す半透膜に薬剤を封入する。所定の腸溶性コーティングも遅延放
出効果をもつ。

【０１２６】他のコーティングを製剤に使用してもよい。例えば、コーティングパンで塗布
可能な種々の糖が挙げられる。治療剤をフィルムコーテッドタブレットとしても
よく、この場合に使用される材料は２分類される。第１群は非腸溶材料であり、
メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒ
ドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、プロビドン及び
ポリエチレングリコールが挙げられる。第２群は腸溶材料から構成され、一般に
フタル酸エステルである。

【０１２７】最適フィルムコーティングを提供するような材料混合物を使用することができ
る。フィルムコーティングはパンコーター又は流動層で実施してもよいし、圧縮
コーティングにより実施してもよい。

【０１２８】肺送達形態。本発明では本発明のタンパク質（又はその誘導体）の肺送達も考
えられる。タンパク質（又は誘導体）を吸入しながら哺乳動物の肺に送達し、肺
上皮内面を通って血流に送達する。（これに関する他の報告としては、Ａｄｊｅ
ｉら，Ｐｈａｒｍａ．Ｒｅｓ．（１９９０）７：５６５−９；Ａｄｊｅｉら（１
９９０），Ｉｎｔｅｒｎａｔｌ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ６３：１３
５−４４（酢酸ロイプロリド）；Ｂｒａｑｕｅｔら（１９８９），Ｊ．Ｃａｒｄ
ｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３（ｓｕｐｐｌ．５）：ｓ．１４３−１
４６（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄら（１９８９），ＡｎｎａｌｓＩ
ｎｔ．Ｍｅｄ．３：２０６−１２（α１−アンチトリプシン）；Ｓｍｉｔｈら（
１９８９），Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１１４５−６（α１−プロテ
イナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎら（Ｍａｒｃｈ１９９０），“Ａｅｒｏｓｏｌｉｚ
ａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｓｙｍｐ．Ｒｅｓｐ．Ｄｒ
ｕｇ．ＤｅｌｉｖｅｒｙＩＩ，Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ（組換え
ヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓら（１９８８），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：
３４８２−８（インターフェロン−γ及び腫瘍壊死因子α）及びＰｌａｔｚら，
米国特許第５，２８４，６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）が挙げられる。

【０１２９】治療剤の肺送達用に設計された広範な機械的装置が本発明の実施で使用でき、
ネブライザー、計量式吸入器及び粉末吸入器等が挙げられるが、これらに限定さ
れず、また、これらはいずれも当業者に周知である。本発明の実施に適した市販
装置の特定例をいくつか挙げると、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ
．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ製Ｕｌｔｒａｖｅｎｔネブライザー、Ｍａｒｑ
ｕｅｓｔＭｅｄｉｃａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ，Ｃｏｌｏ
ｒａｄｏ製ＡｃｏｒｎＩＩネブライザー、ＧｌａｘｏＩｎｃ．，Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈＴｒｉａｎｇｌｅＰａｒｋ，ＮｏｒｔｈＣａｒｏｌｉｎａ製Ｖｅｎ
ｔｏｌｉｎ計量式吸入器、ＦｉｓｏｎｓＣｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓ
ｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ製Ｓｐｉｎｈａｌｅｒ粉末吸入器がある。

【０１３０】このような全装置は本発明の化合物の分配に適した製剤を使用する必要がある
。一般に、各製剤は使用する装置の型に固有であり、治療に有用な希釈剤、アジ
ュバント及び／又はキャリヤーに加えて適当な噴射剤を使用する必要がある。

【０１３１】遠位肺への最も有効に送達には、本発明の化合物を平均粒度１０μｍ（即ちミ
クロン）未満、最も好ましくは０．５〜５μｍの粒状形態で製造すると最も有利
である。

【０１３２】医薬的に許容可能なキャリヤーとしてはトレハロース、マンニトール、キシリ
トール、スクロース、ラクトース及びソルビトール等の炭水化物が挙げられる。
製剤に使用する他の成分としてはＤＰＰＣ、ＤＯＰＥ、ＤＳＰＣ及びＤＯＰＣが
挙げられる。天然又は合成界面活性剤を使用してもよい。（タンパク質又はアナ
ログを誘導体化するのに使用する以外に）ＰＥＧを使用してもよい。シクロデキ
ストラン等のデキストランを使用してもよい。胆汁酸塩と他の関連エンサンハー
を使用してもよい。セルロースとセルロース誘導体を使用してもよい。緩衝液処
方で使用するようなアミノ酸を使用してもよい。

【０１３３】更に、リポソーム、マイクロカプセルもしくはミクロスフェア、包接複合体、
又は他の型のキャリヤーの使用も考えられる。

【０１３４】ジェット又は超音波ネブライザーで使用するのに適した製剤は溶液１ｍＬ当た
り生物学的に活性なタンパク質約０．１〜２５ｍｇの濃度で水に溶かした本発明
の化合物を含む。製剤は更に（例えばタンパク質安定化と浸透圧調節のために）
緩衝液と単糖を加えてもよい。ネブライザー製剤は更にエアゾールを形成する際
に溶液の噴霧により生じるタンパク質の表面誘導凝集を低減又は防止するために
界面活性剤を加えてもよい。

【０１３５】計量式吸入器で使用する製剤は一般に界面活性剤により噴射剤に懸濁した本発
明の化合物を含む微粉末を含む。噴射剤はこの目的に使用されている任意慣用材
料とすることができ、例えばクロロフルオロカーボン、ハイドロクロロフルオロ
カーボン、ハイドロフルオロカーボン、もしくは炭化水素（例えばトリクロロフ
ルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール
、及び１，１，１，２−テトラフルオロエタン）又はその組合せが挙げられる。
利用可能な界面活性剤としてはソルビタントリオレエート及びダイズレシチンが
挙げられる。オレイン酸も界面活性剤として有用であり得る。

【０１３６】粉末吸入器から分配する製剤は本発明の化合物を含む乾燥微粉末を含み、更に
装置から粉末を分散し易くする量、例えば製剤の５０〜９０重量％のラクトース
、ソルビトール、スクロース、マンニトール、トレハロース又はキシリトール等
の増量剤を加えてもよい。

【０１３７】経鼻送達形態。本発明の化合物の経鼻送達も考えられる。経鼻送達は治療剤を
肺に保留する必要なく、治療剤を鼻に投与後にタンパク質を直接血流に移送でき
る。経鼻送達製剤としてはデキストラン又はシクロデキストランを加えたものが
挙げられる。他の粘膜輸送による送達も考えられる。

【０１３８】用量。上記状態の治療方法で使用する用量は薬剤の作用を左右する種々の因子
、例えば患者の年齢、状態、体重、性別及び食事、任意感染の重篤度、投与時間
及び他の臨床因子等を考慮して主治医により決定される。一般に、１日用量は本
発明の化合物０．１〜１０００μｇ／ｋｇ体重、好ましくは０．１〜１５０μｇ
／ｋｇである。

【０１３９】特定好適態様本発明者らは下表２に示す好適ペプチドの好適構造を決定した。記号「Ａ」は
本明細書に記載するリンカーの任意のものでもよいし、又は単に正常ペプチド結
合でもよい（即ちリンカーは存在しない）。タンデム反復配列とリンカーは分か
り易くするためにダッシュで離して示した。

【０１４０】

【表２】

【０１４１】「Ｆ^１」は上記に定義したようなＦｃドメインである。表２に示したもの以外
に、本発明者らは更にＦｃダイマーの各鎖が別のペプチド配列に連結したヘテロ
ダイマー、例えば各Ｆｃが表１から選択される別の配列に連結したヘテロダイマ
ーも予想している。

【０１４２】本発明の全化合物はＰＣＴ出願第ＷＯ９９／２５０４４号に記載の方法により
製造することができる。

【０１４３】以上、本発明を詳細に説明したが、当業者に自明の通り、本明細書に記載する
本発明の精神と範囲から逸脱することなく多数の変更及び変形を加えることがで
きる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＩｇＧ１抗体から誘導することができるＦｃダイマーの例を示す。

【図２】薬理活性ペプチドのタンデム反復配列をもつ本発明の好適化合物の構造を示す
。

【図３Ａ】本発明で使用することができるヒトＩｇＧ１Ｆｃの核酸配列とアミノ酸配列の
例（夫々配列番号１及び２）を示す。

【図３Ｂ】本発明で使用することができるヒトＩｇＧ１Ｆｃの核酸配列とアミノ酸配列の
例（夫々配列番号１及び２）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/22 Ｃ０７Ｋ 14/00 Ｃ０７Ｋ 7/00 Ｃ１２Ｎ 1/21 14/00 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA04 CA07 DA06 EA04 FA02 GA11 HA01 4B064 AG01 CA02 CA19 CC24 DA01 4B065 AA26X AA90Y AB01 BA01 CA24 CA44 4C084 AA02 AA07 MA52 MA59 MA63 MA66 NA14 ZB33 ZC33 ZC55 4H045 AA10 AA30 BA17 BA18 BA41 CA40 DA75 EA20 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式：（Ａ^１）_ａ−Ｆ^１−（Ａ^２）_ｂ［式中、Ｆ^１はビヒクルであり、Ａ^１及びＡ^２は各々独立して−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１、−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２、−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２−（Ｌ^３）_ｅ−Ｐ^３及び−
（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２−（Ｌ^３）_ｅ−Ｐ^３−（Ｌ^４）_ｆ−Ｐ^４か
ら選択され、Ｐ^１、Ｐ^２、Ｐ^３及びＰ^４は各々独立してＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプ
チド配列又はＡｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメイン配列であり、
Ｌ^１、Ｌ^２、Ｌ^３及びＬ^４は各々独立してリンカーであり、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ及びｆは各々独立して０又は１であり、但し、ａとｂの少な
くとも一方は１である。］の組成物及びそのマルチマー。
【請求項２】式：Ａ^１−Ｆ^１又はＦ^１−Ａ^２の請求項１に記載の組成物。
【請求項３】式：Ｆ^１−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１の請求項１に記載の組成物。
【請求項４】式：Ｆ^１−（Ｌ^１）_ｃ−Ｐ^１−（Ｌ^２）_ｄ−Ｐ^２の請求項１
に記載の組成物。
【請求項５】Ｆ^１がＦｃドメインである請求項１に記載の組成物。
【請求項６】Ｆ^１がＩｇＧＦｃドメインである請求項１に記載の組成物。
【請求項７】Ｆ^１がＩｇＧ１Ｆｃドメインである請求項１に記載の組成物
。
【請求項８】Ｆ^１が配列番号２の配列を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項９】Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド配列又はＡｐｏ−
ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様ドメイン配列が式：ＡｓｐＴｒｐＬｅｕ
ＬｙｓＡｌａＰｈｅＴｙｒＡｓｐＬｙｓＶａｌＡｌａＧｌｕ
ＬｙｓＬｅｕＬｙｓＧｌｕＡｌａＰｈｅ（配列番号７）である請求
項１に記載の組成物。
【請求項１０】Ｆ^１がＦｃドメインである請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】Ｆ^１がＩｇＧＦｃドメインである請求項９に記載の組成物
。
【請求項１２】Ｆ^１がＩｇＧ１Ｆｃドメインである請求項１１に記載の組
成物。
【請求項１３】表２（配列番号８〜１１）から選択される配列をもつ請求
項５に記載の組成物。
【請求項１４】請求項５に記載の組成物をコードするＤＮＡ。
【請求項１５】請求項１０に記載の組成物をコードするＤＮＡ。
【請求項１６】請求項１４に記載のＤＮＡを含む発現ベクター。
【請求項１７】請求項１５に記載のＤＮＡを含む発現ベクター。
【請求項１８】請求項１６に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１９】請求項１７に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項２０】細胞が大腸菌細胞である請求項１８に記載の細胞。
【請求項２１】細胞が大腸菌細胞である請求項１９に記載の細胞。
【請求項２２】Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド様化合物の製造
方法であって、ａ）Ａｐｏ−ＡＩ両親媒性ヘリックスペプチド又は少なくとも１種のＡｐｏ−Ａ
Ｉ両親媒性ヘリックスペプチド様ペプチドを選択すること、およびｂ）段階ａ）からの選択ペプチドの少なくとも１種のアミノ酸配列に共有結合し
た少なくとも１個のＦｃドメインを含む薬理剤を調製すること、を含む前記方法
。
【請求項２３】ペプチドが配列番号７から選択される請求項２２に記載の
方法。
【請求項２４】ペプチドがファージディスプレイライブラリー、大腸菌デ
ィスプレイライブラリー、リボソームライブラリー、ＲＮＡ−ペプチドライブラ
リー又は化学ペプチドライブラリーを探索する方法で選択される請求項２２に記
載の方法。
【請求項２５】薬理剤の調製が、ａ）選択ペプチドをコードする核酸配列とＦｃドメインをコードする核酸配列を
含む遺伝子構築物を作製すること、およびｂ）遺伝子構築物を発現させること、により実施される請求項２２に記載の方法
。
【請求項２６】遺伝子構築物が大腸菌細胞で発現される請求項２５に記載
の方法。
【請求項２７】ペプチドの選択が、ａ）第１の選択ペプチドをコードする核酸配列とＦｃドメインをコードする核酸
配列を含む遺伝子構築物を作製すること、ｂ）遺伝子構築物と突然変異誘発プライマーを使用してポリメラーゼ連鎖反応を
行うこと、を含む方法により実施され、ｉ）第１の変異誘発プライマーが遺伝子構築物のコーディング鎖の５’末端又は
その近傍の配列に相補的な核酸配列を含み、ｉｉ）第２の変異誘発プライマーが遺伝子構築物の非コーディング鎖の３’末端
に相補的な核酸配列を含む、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】請求項１に記載の組成物を投与する高コレステロール血症
の治療方法。
【請求項２９】請求項１に記載の組成物を投与するウイルス感染の治療方
法。
【請求項３０】ウイルス感染がＨＳＶ感染である請求項２９に記載の方法
。
【請求項３１】ウイルス感染がＨＩＶ感染である請求項２９に記載の方法
。