JP2003530112A

JP2003530112A - 二重特異性ホスファターゼｄｕｓｐ−１０の同定

Info

Publication number: JP2003530112A
Application number: JP2001575194A
Authority: JP
Inventors: クラウスデュエッケル、
Original assignee: Merck Patent GmbH
Current assignee: Merck Patent GmbH
Priority date: 2000-04-10
Filing date: 2001-04-06
Publication date: 2003-10-14
Also published as: CA2405725A1; WO2001077340A1; US20040086859A1; EP1263970A1

Abstract

(57)【要約】ＤＵＳＰ１０のポリペプチドおよびポリヌクレオチド、ならびにかかるポリペプチドを組換え技術によって製造するための方法が開示される。また、診断アッセイにおいて、ＤＵＳＰ１０のポリペプチドおよびポリヌクレオチドを用いるための方法も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明は、以降、時に「二重特異性ホスファターゼ(「ｄｕａｌｓｐｅｃｉ
ｆｉｃｉｔｙｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ」（ＤＵＳＰ１０）)と称する、新たに
同定されたポリペプチド、およびかかるポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チド、診断ならびに、治療において潜在的に有用なアゴニスト、アンタゴニスト
となり得る化合物の同定におけるそれらの使用、ならびにかかるポリペプチドお
よびポリヌクレオチドの製造に関する。

【０００２】（発明の背景）創薬プロセスは現在、「機能ゲノム科学」、すなわちハイ・スループットのゲ
ノムまたは遺伝子に基づく生物学を取り込むことで、根本的な革新を経験しつつ
ある。この方法は、治療の標的として遺伝子および遺伝子産物を同定する手段と
して、急速に、「ポジショナル・クローニング」に基づく従来の方法に取って代
わりつつある。表現型、すなわち、生物学的機能または遺伝子的疾患を同定し、
その後、その遺伝子地図の位置に基づいて、その原因となる遺伝子の探知がなさ
れる。

【０００３】機能ゲノム科学は、ハイ・スループットなＤＮＡ配列決定技術、および現在利
用可能な多くの分子生物学データベースから、潜在的な重要性を有する遺伝子配
列を同定するためのバイオインフォマティクスの様々なツールに大きく依存して
いる。創薬の標的として、さらなる遺伝子およびその関連するポリペプチド／タ
ンパク質を同定し、その特定を行うことが引き続き求められている。

【０００４】（発明の概要）本発明は、二重特異性ホスファターゼ−１０（ＤＵＳＰ１０）、特にはＤＵＳ
Ｐ１０ポリペプチドおよびＤＵＳＰ１０ポリヌクレオチド、組換え体、およびそ
れらの製造方法に関する。かかるポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、ガン
以下に限定されないが、白血病、結腸ガン、肺ガン、前立腺ガンを含む、腫瘍細
胞の転移、心血管形成、てんかん、卒中、ニューロン変性症候群、アルツハイマ
ー病、鬱病、精神分裂病、心筋症、喘息、免疫障害、自己免疫疾患、炎症プロセ
ス、以下に限定されないが、関節炎および腸疾患、Ｉ型糖尿病を含む、骨粗鬆症
、糖尿病および糖尿病関連疾患（これらに限定されない）を含むある種の疾患（
以降、「本発明の疾患」と称する）を治療する方法に関連して注目されている。
さらなる態様において、本発明は、本発明により提供される材料を用いてアゴニ
ストおよびアンタゴニスト（例えば阻害剤）を同定する方法、ならびに同定され
た化合物を用いて、ＤＵＳＰ１０の不均衡に関連する症状を治療するための方法
に関する。さらにさらなる態様において、本発明は、ＤＵＳＰ１０の不適切な活
性および濃度に付随する疾患を検出する診断アッセイに関する。

【０００５】（発明の説明）第１の形態において、本発明はＤＵＳＰ１０ポリペプチドに関する。かかるポ
リペプチドには下記が含まれる：（ａ）配列番号：１の配列を含んでなるポリヌクレオチドによってコードされ
る単離されたポリペプチド；（ｂ）配列番号：２のポリペプチド配列に対して、少なくとも９５％、９６％
、９７％、９８％または９９％の同一性を有するポリペプチド配列を含んでなる
単離されたポリペプチド；（ｃ）配列番号：２のポリペプチド配列を含んでなる単離されたポリペプチド
；（ｄ）配列番号：２のポリペプチド配列に対して、少なくとも９５％、９６％
、９７％、９８％または９９％の同一性を有する単離されたポリペプチド；（ｅ）配列番号：２のポリペプチド配列；ならびに（ｆ）配列番号：２のポリペプチド配列と比較して、０．９５、０．９６、０
．９７、０．９８または０．９９の同一性指標を有するポリペプチド配列を有す
るか、または含んでなる単離されたポリペプチド；（ｇ）（ａ）〜（ｆ）に記載のかかるポリペプチドのフラグメントおよび変異
体。

【０００６】本発明のポリペプチドは、二重特異性ホスファターゼファミリーのポリペプチ
ドのメンバーであると考えられる。増殖因子、サイトカインおよび様々な細胞外
ストレス刺激により、細胞質ゾルの様々なシグナル伝達経路が活性化される。こ
のようなシグナル伝達経路は、非常に多くの場合、マイトジェン因子により活性
化されるプロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）のファミリーのメンバーに集中してい
る。このファミリーは、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ、ＳＡＰＫ／ＪＮＫおよびｐ３８の３
つの主要なサブクラスから構成される（Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｃ．Ｊ．、Ｃｕｒｒ
．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔ．Ｄｅｖ．４：８２〜９、１９９４；Ｋａｒｉｎ，Ｍ．
、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５１：１３９〜４６、１９９８；Ｋｙ
ｒｉａｋｉｓ，Ｊ．Ｍ．他、Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ、１８：５６７〜７７、１９９
６；Ｉｐ，Ｙ．Ｔ．他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１０：２０
５〜１９、１９９８）。ＭＡＰＫ／ＥＲＫサブクラスのキナーゼは、通常、増殖
因子またはホルボールエステルによって活性化されるが、ＳＡＰＫ／ＪＮＫキナ
ーゼおよびｐ３８キナーゼは炎症性サイトカインまたはＵＶ照射もしくは浸透圧
ストレスのような細胞外ストレス刺激によって活性化される（Ｍａｒｓｈａｌｌ
，Ｃ．Ｊ．、Ｃｅｌｌ、８０：１７９〜１８５、１９９５；Ｔｒｅｉｓｍａｎ，
Ｒ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．８：２０５〜２１５、１９９
６）。活性化されたとき、ＭＡＰキナーゼは、次に、核だけでなく、膜／細胞質
ゾル画分に局在化し得る様々な標的タンパク質をリン酸化する。シグナル感知細
胞の応答能に依存して、細胞増殖、新生物形質転換（例えば繊維芽細胞の形質転
換）、分化（例えばＰＣ１２細胞）、ＤＮＡ修復から、細胞レベルでのアポトー
シスの誘導、ならびに例えば、全身レベルでの血小板凝集および免疫系調節作用
にまで及ぶ広範囲の細胞内および細胞外の様々な応答がＭＡＰＫのリン酸化によ
って調節されることが確認されている（Ｓａｋｌａｔｖａｌａ，Ｊ．他、Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：６５８６〜６５８９、１９９６；Ｖｅｒｈｅｉｊ，
Ｍ．他、Ｎａｔｕｒｅ、３８０：７５〜７９、１９９６；Ｐｏｔａｐｏｖａ，Ｏ
．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１４０４１〜１４０４４、１９９７；
ＰｏｒｔｅｒＡ．Ｃ．他、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１７：１３４３〜１３５２、１
９９８；Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｖ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：３１１５
０〜３１１５４、１９９９；Ｃａｎｎｏｎｓ，Ｊ．Ｌ．他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１６３：２９９０〜２９９８、１９９９）。

【０００７】ＭＡＰＫ／ＥＲＫ、ＳＡＰＫ／ＪＮＫおよびｐ３８のサブクラスメンバーの活
性は、キナーゼのサブドメインＶＩＩＩの活性化ループにそれぞれ存在するＴＥ
Ｙモチーフ、ＴＰＹモチーフおよびＴＧＹモチーフにおけるトレオニン残基およ
びチロシン残基の両方でのリン酸化／脱リン酸化によって調節されている。リン
酸化／脱リン酸化は、選択的な二重特異性キナーゼ（Ｄｈａｎａｓｅｋａｒａｎ
，Ｎ．他、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１７：１４４７〜５５、１９９８）および二重特
異性ホスファターゼ（ＤＵＳＰ）（Ｋｅｙｓｅ，Ｓ．Ｍ．、Ｓｅｍｉｎ．Ｃｅｌ
ｌ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．９：１４３〜１４５、１９９８；Ｃａｍｐｓ，Ｍ．他、
ＦＡＳＥＢＪ．１４：６〜１６、２０００）によって媒介される。少なくとも
９個の異なるＤＵＳＰが存在することにより、ＭＡＰＫシグナル伝達経路を調節
する複雑なネットワークが関係している。興味深いことに、これらのＤＵＳＰは
、基質特異性が異なるだけでなく、細胞レベル以下での異なる細胞局在化を示し
ている。従って、所与の細胞においていくつかのＭＡＰＫイソ型を不活性化する
ことは、様々なＤＵＳＰの同時発現を必要とする。

【０００８】これらとともに、本発明者らは、ヒトおよびマウスのそれぞれ、ＤＵＳＰｈ
ＶＨ５およびＮＴＴＰ１に対して非常に高い相同性を有する新規ヒト二重特異性
ホスファターゼ、ＤＵＳＰ−１０の配列を開示する（Ｍａｒｔｅｌｌ，Ｋ．Ｊ．
他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６５：１８２３〜１８３３、１９９５；Ｔｈｅｏ
ｄｏｓｉｏｕ，Ａ．Ｍ．他、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．５：６７５〜６８４
、１９９６）。ｈＶＨ５／ＮＴＴＰ１と比較した場合、ＤＵＳＰ−１０は、タン
パク質配列の類似したドメイン構成および全体的な長さを示す。ＤＵＳＰ−１０
タンパク質配列のＮ末端はＣＨ２（ｃｄｃ２５相同性）ドメインであり、その後
に実際の触媒活性なホスファターゼドメイン、およびこれまでのところ機能が知
られていない長いＣ末端領域が続く。このＣＨ２ドメインは、これまでに知られ
ている二重特異性ホスファターゼのほとんどに存在しており、基質の認識および
結合に関与していると考えられている（Ｋｅｙｅｓ，Ｓ．Ｍ．およびＧｉｎｓｂ
ｕｒｇ，Ｍ．、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍ．１８：３７７〜３７８、１９９
３；Ｋｗａｋ，Ｓ．Ｐ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：３５９６〜３６
０４、１９９４；Ｍｕｄａ，Ｍ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：９３２
３〜９３２９、１９９８）。

【０００９】ＤＵＳＰ−１０は第１２染色体（Ｄ１２Ｓ９９−Ｄ１２Ｓ３５８）に存在する
。この領域には、乳ガン（Ｓｐｉｒｉｎ，Ｋ．Ｓ．他、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．
５６：２４００〜２４０４、１９９６）、急性リンパ性白血病（Ｔａｋｅｕｃｈ
ｉ，Ｓ．他、Ｂｌｏｏｄ、８７：３３６８〜３３７４、１９９６）または非小細
胞肺ガン（Ｔａｋｅｕｃｈｉ，Ｓ．他、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．５６：７３８〜
７４０、１９９６）のような様々なガン形態の病因に関与し得るこれまで知られ
ていない新規な腫瘍抑制因子遺伝子が含まれると主張されている。興味深いこと
に、その発現配列タグ（ＡＩ４２４９５７）は、ＤＵＳＰ−１０遺伝子の予想外
のゲノム異常形態を表し（下記の「実施例」参照）、そして慢性リンパ球性白血
病患者からのＢ細胞から作製されたｃＤＮＡライブラリーに由来している。この
ことは、ＤＵＳＰ−１０がこの新規な腫瘍抑制因子遺伝子を表し得ることを示し
ている。

【００１０】ＭＡＰＫシグナル伝達が関与する生物学的プロセスの主な範囲が示されると、
二重特異性ホスファターゼ活性の調節因子はこれらのシグナル伝達プロセスに対
して非常に大きな影響を及ぼすことができる。

【００１１】該ＤＵＳＰ１０の生物学的性質を、以降、「ＤＵＳＰ１０の生物学的活性」ま
たは「ＤＵＳＰ１０活性」と称する。好ましくは、本発明のポリペプチドは、少
なくとも１つのＤＵＳＰ１０の生物学的活性を示す。

【００１２】本発明のポリペプチドには、全ての対立遺伝子形およびスプライス変異体を含
む上記ポリペプチドの変異体もまた含まれる。かかるポリペプチドは、挿入、欠
失、ならびに保存的または非保存的であってもよい置換、あるいはそれらの任意
の組合せによって、基準ポリペプチドから変異している。特に好ましい変異体は
、いくつかの、例えば、５０〜３０、３０〜２０、２０〜１０、１０〜５、５〜
３、３〜２、２〜１または１個のアミノ酸が、任意の組合せで挿入、置換または
欠失されているものである。

【００１３】本発明のポリペプチドの好ましいフラグメントには、配列番号２のアミノ酸配
列に由来する、少なくとも３０、５０または１００個の連続したアミノ酸を有す
るアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド、あるいは配列番号２のアミノ酸
配列から、少なくとも３０、５０または１００個の連続したアミノ酸が、末端か
ら除去または欠失しているアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドが含まれ
る。好ましいフラグメントは、ＤＵＳＰ１０の生物学的活性をもたらす生物学的
に活性なフラグメントであり、類似する活性または改善された活性を有するか、
あるいは望ましくない活性が低下したものも含まれる。また、動物、特にヒトに
おいて抗原性または免疫原性である、それらのフラグメントも好ましい。

【００１４】本発明のポリペプチドのフラグメントは、対応する完全長型ポリペプチドをペ
プチド合成によって製造するために用いることができ、従って、これらの変異体
は、本発明の完全長型ポリペプチドを製造するための中間体として用いることが
できる。本発明のポリペプチドは、「成熟型」タンパク質の形態であってもよく
、あるいは前駆体または融合タンパク質などのより大きなタンパク質の一部であ
ってもよい。分泌またはリーダー配列、プロ配列、精製に役立つ配列、例えば、
反復するヒスチジン残基、あるいは組換え生産の間の安定性に利する付加配列が
含まれる、付加的なアミノ酸配列を含むことは、しばしば有益である。

【００１５】本発明のポリペプチドは、何れかの好適な方法、例えば、天然に存在する提供
源から発現システム（下記参照）を含む遺伝子操作された宿主細胞からの単離、
または、例えば、自動化されたペプチド合成機を使用した化学合成によって、あ
るいはかかる方法の組合せによって調製することができる。かかるポリペプチド
を調製するための手段は、当該分野では十分に理解されている。

【００１６】さらなる態様において、本発明はＤＵＳＰ１０ポリヌクレオチドに関する。か
かるポリヌクレオチドには下記が含まれる：（ａ）配列番号：１のポリヌクレオチド配列に対して、少なくとも９５％、９
６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含
んでなるポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号：１のポリヌクレオチドを含んでなるポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号：１のポリヌクレオチドに対して、少なくとも９５％、９６％
、９７％、９８％または９９％の同一性を有するポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号：１のポリヌクレオチド；（ｅ）配列番号：２のポリペプチド配列に対して、少なくとも９５％、９６％
、９７％、９８％または９９％の同一性を有するポリペプチド配列をコードする
ポリヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド；（ｆ）配列番号：２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含ん
でなるポリヌクレオチド；（ｇ）配列番号：２のポリペプチド配列に対して、少なくとも９５％、９６％
、９７％、９８％または９９％の同一性を有するポリペプチド配列をコードする
ポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド；（ｈ）配列番号：２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；（ｉ）配列番号：１のポリヌクレオチド配列と比較して、０．９５、０．９６
、０．９７、０．９８または０．９９の同一性指標を有するポリヌクレオチド配
列を有するか、または含んでなるポリヌクレオチド；（ｊ）配列番号：２のポリペプチド配列と比較して、０．９５、０．９６、０
．９７、０．９８または０．９９の同一性指標を有するポリペプチド配列をコー
ドするポリヌクレオチド配列を有するか、または含んでなるポリヌクレオチド；
ならびに上記のポリヌクレオチドのフラグメントおよび変異体である、あるいは上記のポ
リヌクレオチドに対してその全長にわたって相補的であるポリヌクレオチド。

【００１７】本発明のポリヌクレオチドの好ましいフラグメントには、配列番号１の配列に
由来する、少なくとも１５、３０、５０または１００個の連続した塩基を有する
塩基配列を含むポリヌクレオチド、あるいは配列番号１の配列から、少なくとも
３０、５０または１００個の連続した塩基が末端から削除または欠失している配
列を含む単離されたポリヌクレオチドが含まれる。

【００１８】本発明のポリヌクレオチドの好ましい変異体には、スプライス変異体、対立遺
伝子変異体、および１つまたは複数の単一塩基多型（ＳＮＰ）を有するポリヌク
レオチドを含む多型体が含まれる。

【００１９】本発明のポリヌクレオチドには、配列番号２のアミノ酸配列を含み、かついく
つかの、例えば、５０〜３０、３０〜２０、２０〜１０、１０〜５、５〜３、３
〜２、２〜１または１個のアミノ酸残基が、任意の組合せで置換、欠失または付
加されているポリペプチド変異体をコードするポリヌクレオチドも含まれる。

【００２０】さらなる態様において、本発明は、本発明のＤＮＡ配列のＲＮＡ転写物である
ポリヌクレオチドを提供する。従って、下記のＲＮＡポリヌクレオチドが提供さ
れる：（ａ）配列番号２のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列のＲＮＡ転写物を含む
ＲＮＡポリヌクレオチド、（ｂ）配列番号２のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列のＲＮＡ転写物である
ＲＮＡポリヌクレオチド、（ｃ）配列番号１のＤＮＡ配列のＲＮＡ転写物を含むＲＮＡポリヌクレオチド、
あるいは（ｄ）配列番号１のＤＮＡ配列のＲＮＡ転写物であるＲＮＡポリヌクレオチド、
ならびにそれらに対して相補的であるＲＮＡポリヌクレオチド。

【００２１】配列番号１のポリヌクレオチド配列は、ＨＳＵ２７１９３（Ｍａｒｔｅｌｌ，
Ｋ．Ｊ．他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６５（４）、１８２３〜１８３３（１９
９５））との相同性を示す。配列番号１のポリヌクレオチド配列は、配列番号２
のポリペプチドをコードするｃＤＮＡ配列である。配列番号２のポリペプチドを
コードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１の配列をコードするポリペプチ
ドと同一であってもよく、あるいは遺伝暗号の縮退（縮重性）の結果によって、
同じく配列番号２のポリペプチドをコードする、配列番号１以外の配列であって
もよい。配列番号２のポリペプチドは、ＤＵＳ８ＨＵＭＡＮ（Ｍａｒｔｅｌｌ
，Ｋ．Ｊ．他、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６５（４）、１８２３〜１８３３（１
９９５））との相同性および／または構造的類似性を有する二重特異性ホスファ
ターゼファミリーの他のタンパク質との関連性を有する。

【００２２】本発明の好ましいポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、特に、それらの相
同的なポリペプチドおよびポリヌクレオチドと類似する生物学的な機能／性質を
有することが期待される。さらに、本発明の好ましいポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドは少なくとも１つのＤＵＳＰ１０活性を有する。

【００２３】本発明のポリヌクレオチドは、ヒトの血液、脳、結腸、胆嚢、生殖細胞、心臓
、腎臓、肝臓、肺、副甲状腺、胎盤、前立腺、脾臓、胃、胸腺および子宮の細胞
におけるｍＲＮＡに由来するｃＤＮＡライブラリーから標準的なクローニング技
術およびスクリーニング技術を使用して得ることができる（例えば、Ｓａｍｂｒ
ｏｏｋ他、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ、第２版、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａ
ｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１
９８９）参照）。本発明のポリヌクレオチドはまた、ゲノムＤＮＡライブラリー
などの天然の供給源から得ることができ、あるいは、周知の市販の手法を使用し
て合成することもできる。

【００２４】本発明のポリヌクレオチドを本発明のポリペプチドを組換え製造に使用する際
には、該ポリヌクレオチドは成熟型ポリペプチドのコード配列、それ自体、ある
いはリーダーまたは分泌配列、プレ−もしくはプロ−またはプレプロ−タンパク
質配列、あるいは、他の融合ペプチド部分をコードするコード配列などの、他の
コード配列と読み枠を合わせた成熟型ポリペプチドのコード配列を含むことがで
きる。例えば、融合ポリペプチドの精製を容易にする、マーカー配列がコードさ
れていてもよい。本発明のこの態様のいくつかの好ましい実施形態において、該
マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．）において提供され
、そしてＧｅｎｔｚ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、（１
９８９）８６：８２１〜８２４に記載されている、ヘキサ・ヒスチジン・ペプチ
ド、あるいはＨＡタグである。該ポリヌクレオチドはまた、転写される非翻訳配
列、スプライシングならびにポリアデニレーション・シグナル、リボソーム結合
部位、ならびにｍＲＮＡを安定化させる配列などの非コードの５’および３’配
列を含んでもよい。

【００２５】配列番号１のポリヌクレオチド配列に対して同一であるか、または十分な同一
性を有するポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡに対するハイブリ
ダイゼーション・プローブとして、あるいは核酸増幅反応（例えば、ＰＣＲ）用
のプライマーとして利用することができる。かかるプローブおよびプライマーは
、本発明のポリペプチドをコードする完全長型ｃＤＮＡおよびゲノム・クローン
を単離するために、ならびに、配列番号１に対して高い配列類似性、典型的には
少なくとも９５％の同一性を有する他の遺伝子（ヒト供給源に由来するパラログ
ならびにヒト以外の種に由来するオルソログおよびパラログをコードする遺伝子
を含む）のｃＤＮＡクローンおよびゲノム・クローンを単離するために使用して
もよい。好ましいプローブおよびプライマーは、一般には、少なくとも１５塩基
、好ましくは少なくとも３０塩基含み、そして少なくとも１００塩基ではなくと
も、少なくとも５０塩基を有してもよい。特に好ましいプローブは３０〜５０塩
基を有するであろう。特に好ましいプライマーは２０〜２５塩基を有するであろ
う。

【００２６】ヒト以外の種に由来するホモログをも含む、本発明のポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドは、配列番号１の配列またはそのフラグメントを有する、好
ましくは少なくとも１５塩基の標識されたプローブを用いて、厳格なハイブリダ
イゼーション条件下で、ライブラリーをスクリーニングする過程；および前記ポ
リヌクレオチド配列を含有する完全長型ｃＤＮＡクローンおよびゲノム・クロー
ンを単離する過程を含む工程によって得ることができる。かかるハイブリダイゼ
ーション技術は当業者には周知である。好ましい厳格なハイブリダイゼーション
条件は、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭのＮａＣｌ、１５ｍＭの
クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５×デ
ンハルト溶液、１０％のデキストラン硫酸および２０マイクログラム／ｍｌの変
性させた剪断サケ精子ＤＮＡを含む溶液において４２℃で一晩インキュベーショ
ンし、その後、０．１×ＳＳＣにおいて約６５℃でフィルターを洗浄することが
含まれる。従って、本発明はまた、配列番号１の配列、またはそのフラグメント
を有する、好ましくは少なくとも１５塩基の標識されたプローブを用いて、厳格
なハイブリダイゼーション条件下で、ライブラリーをスクリーニングすることに
よって得られる、単離されたポリヌクレオチド、好ましくは少なくとも１００塩
基の塩基配列を有する単離されたポリヌクレオチドも含む。

【００２７】当業者は、多くの場合において、該ポリペプチドをコードする領域は、５’末
端に至るまで完全には伸長していない点で、単離されたｃＤＮＡ配列が不完全で
あることもあることを理解している。これは、第１鎖ｃＤＮＡ合成の際に、ｍＲ
ＮＡテンプレートのＤＮＡコピーを完成させることができない、逆転写酵素、す
なわち、本来、低い「プロセシング能」（ポリメリゼーション反応の間、テンプ
レートに結合した状態を維持する酵素の能力の指標）を有する酵素の結果である
。

【００２８】完全長型ｃＤＮＡを得るために、あるいは短いｃＤＮＡを伸長させるために利
用でき、かつ当業者に周知の方法がいくつかある。例えば、ｃＤＮＡ端の迅速な
増幅（ＲＡＣＥ）方法に基づく方法がある（例えば、Ｆｒｏｈｍａｎ他、Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８５、８９９８〜９００２、１９８８
参照）。例えば、Ｍａｒａｔｈｏｎ（商標）法（ＣｌｏｎｔｅｃｈＬａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓＩｎｃ．）で例示されるこの技術の最近の改良は、より長いｃ
ＤＮＡの探索を著しく単純化している。Ｍａｒａｔｈｏｎ（商標）技術では、選
択された組織から抽出されたｍＲＮＡとその両端に連結された「アダプター」配
列とからｃＤＮＡが調整される。その後、遺伝子特異的なおよびアダプター特異
的なオリゴヌクレオチドプライマーの組合せを使用して、ｃＤＮＡの「失われて
いる」５’端を増幅するために、核酸増幅（ＰＣＲ）を実施する。その後、「ネ
スティッド（入れこ型）」プライマー、すなわち、増幅産物の内部にアニーリン
グするように設計されたプライマー（典型的には、アダプター配列においてさら
に３’側にアニーリングするアダプター特異的プライマー、および既知の遺伝子
配列においてさらに５’側にアニーリングする遺伝子特異的プライマー）を使用
してＰＣＲ反応を繰り返す。その後、この反応の生成物をＤＮＡ配列決定によっ
て分析することができ、また、完全な配列を得るために既存のｃＤＮＡに該生成
物を直接結合させる、あるいは、５’プライマーの設計のために新しい配列情報
を使用して、別途に完全長ＰＣＲを行うことの何れかによって、完全長型のｃＤ
ＮＡを構築することができる。

【００２９】本発明の組換えポリペプチドは、発現システムを含む遺伝子操作された宿主細
胞から、当該分野で周知の方法によって調製することができる。従って、さらな
る形態において、本発明は、本発明のポリヌクレオチドの１つまたは複数を含む
発現システムと、かかる発現システムで遺伝子操作されている宿主細胞と、なら
びに、組換え技術による本発明のポリペプチドの製造とに関する。本発明のＤＮ
Ａ構築物に由来するＲＮＡを用いてかかるタンパク質を製造するために、無細胞
翻訳システムを用いることもできる。

【００３０】組換え製造のために、宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドに対する発現シ
ステムまたはその一部を取り込むように、遺伝子操作することができる。ポリヌ
クレオチドは、Ｄａｖｉｓ他、ＢａｓｉｃＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃ
ｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ（１９８６）およびＳａｍｂｒｏｏｋ他（同上）など
の多くの標準的な実験室マニュアルに記載される方法によって宿主細胞に導入す
ることができる。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入する好ましい方法には、例
えば、リン酸カルシウム・トランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介
トランスフェクション、トランスベクション、マイクロインジェクション、カチ
オン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、トランスダク
ション、スクレイプ負荷、バリスティック導入または感染が含まれる。

【００３１】適切な宿主の代表的な例には、ストレプトコッカス属、スタフィロコッカス属
、大腸菌、ストレプトミセス属および枯草菌細胞などの細菌細胞；酵母細胞やア
スペルギルス属細胞などの菌類細胞；ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ
）Ｓ２細胞やＳｐｏｄｏｐｔｅｒａＳｆ９細胞などの昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯ
Ｓ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ２９３ならびにＢｏｗｅｓメ
ラノーマ細胞などの動物細胞；ならびに植物細胞が含まれる。

【００３２】非常に多様な発現システムを使用することができ、例えば、染色体、エピソー
ムおよびウイルスに由来するシステム、例えば、細菌プラスミド、バクテリオフ
ァージ、トランスポゾン、酵母エピソーム、挿入エレメント、酵母染色体エレメ
ント、バキュロウイルス、パポバウイルス（ＳＶ４０など）、ワクシニアウイル
ス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、偽狂犬病ウイルスやレトロウイルスなどの
ウイルスに由来するベクター、ならびに、コスミドおよびファージミドなどの、
プラスミドおよびバクテリオファージの遺伝子エレメントに由来するベクターな
どのそれらの組合せに由来するベクターを使用することができる。該発現システ
ムは、発現を生じさせるとともに、発現を調節するための制御領域を含有しても
よい。一般に、宿主内において、ポリペプチドを産生させるためのポリヌクレオ
チドを維持、増殖、または発現させることが可能である、システムまたはベクタ
ーはいずれも使用することができる。適切なポリヌクレオチド配列は、例えば、
Ｓａｍｂｒｏｏｋ他（前述）に示されているものなどの、周知で慣用の手法の何
れかによって発現システムに挿入することができる。適切な分泌シグナルを、小
胞体の内腔、細胞周辺腔または細胞外環境への翻訳タンパク質の分泌を可能にす
るために、所望するポリペプチドに組み込むことができる。これらのシグナルは
、該ポリペプチドに対して内因性であってもよくあるいは異種のシグナルであっ
てもよい。

【００３３】スクリーニング・アッセイにおいて使用するために、本発明のポリペプチドを
発現させる際には、該ポリペプチドは細胞の表面で産生させることが一般には好
ましい。この場合、スクリーニング・アッセイにおいて使用するに先立ち、細胞
を集菌してもよい。該ポリペプチドが培地中に分泌される場合には、該ポリペプ
チドの回収および精製を行うため、培地を回収することができる。細胞内で産生
される場合には、ポリペプチドを回収する前に、細胞を予め溶解しなければなら
ない。

【００３４】本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、
アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィ、ホスホセルロース・クロマトグ
ラフィ、疎水性相互作用クロマトグラフィ、アフィニティー・クロマトグラフィ
、ヒドロキシルアパタイト・クロマトグラフィおよびレクチン・クロマトグラフ
ィを含む、周知の方法によって組換え細胞培養物から回収および精製することが
できる。最も好ましくは、ハイ・パフォーマンス・液体クロマトグラフィが精製
のために用いられる。該ポリペプチドが、細胞内合成、単離および／または精製
の間に変性する際には、周知のタンパク質のリフォールディング方法を、活性な
立体配座を再生させるために使用することができる。

【００３５】本発明のポリヌクレオチドは、関連する遺伝子における変異を検出することに
よって診断試薬として使用することができる。ｃＤＮＡ配列またはゲノム配列に
おいて、配列番号１のポリヌクレオチドにより特定され、また、機能不全に関連
している、変異体型遺伝子の検出は、その遺伝子の過少発現、過剰発現あるいは
変更された空間的または時間的な発現に起因する、疾患または疾患に対する感受
性の診断も付加、あるいは確定させることができる診断ツールを提供する。遺伝
子に変異を有する個体を、当該分野で周知な様々な技術によって、ＤＮＡレベル
で検出することができる。

【００３６】診断に供する核酸は、対象の細胞、例えば、血液、尿、唾液、組織生検または
剖検資料などから得ることできる。ゲノムＤＮＡを検出のために直接使用するこ
とができ、あるいは分析に先立ってＰＣＲ、好ましくはＲＴ−ＰＣＲ、または他
の増幅技術を使用して酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡもまた、
同様な手順で使用することができる。欠失および挿入は、正常な遺伝子型と比較
して、増幅産物のサイズにおける変化によって検出することができる。点変異は
、増幅されたＤＮＡを標識されたＤＵＳＰ１０の塩基配列に対して、ハイブリダ
イゼーションさせることによって同定することができる。完全に一致する配列は
、ＲＮａｓｅ消化によって、あるいは融解温度の差によってミスマッチした二重
鎖から区別することができる。ＤＮＡ配列の違いはまた、変性剤の存在下または
非存在下での、ゲルにおけるＤＮＡフラグメントの電気泳動移動度の変化によっ
て、あるいは、直接的なＤＮＡ配列決定によって検出してもよい（例えば、Ｍｙ
ｅｒｓ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、（１９８５）２３０：１２４２参照）。特定の位置
における配列の変化もまた、ＲＮａｓｅならびにＳ１保護などの、ヌクレアーゼ
保護アッセイ、あるいは化学的な切断方法によって明らかにすることができる（
Ｃｏｔｔｏｎ他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、（１９８５
）８５：４３９７〜４４０１参照）。

【００３７】ＤＵＳＰ１０ポリヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含むオリゴヌク
レオチド・プローブのアレイを、例えば、遺伝子変異の効率的なスクリーニング
を行うために構築することができる。かかるアレイは、好ましくは高密度のアレ
イまたは格子状である。アレイ化技術は、周知であり、一般的な適用性を有し、
また、遺伝子発現、遺伝子連鎖および遺伝子変動性を含む分子遺伝学における様
々な問題を検討するために使用することができ、例えば、Ｍ．Ｃｈｅｅ他、Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ、２７４、６１０〜６１３（１９９６）およびそれに引用されている
他の参考文献を参照する。

【００３８】異常に低下または増大しているポリペプチドまたはｍＲＮＡの発現レベルの検
出もまた、本発明の疾患に対する被験体の感受性を診断または決定するために使
用することができる。低下または増大した発現は、例えば、核酸増幅、例えば、
ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮａｓｅ保護、ノーザン・ブロットおよび他のハイブ
リダイゼーション法などの、当該分野で周知の、ポリヌクレオチドの定量方法い
ずれかを使用して、ＲＮＡレベルで測定することができる。宿主に由来するサン
プルにおける、本発明のポリペプチドなどのタンパク質のレベルを決定するため
に使用され得るアッセイ手法は当業者には周知である。かかるアッセイ方法には
、放射免疫アッセイ、競合的結合アッセイ、ウエスタン・ブロット分析およびＥ
ＬＩＳＡアッセイが含まれる。

【００３９】したがって、別の態様において、本発明は、下記を含む診断キットに関する：
（ａ）本発明のポリヌクレオチド、好ましくは、配列番号１のヌクレオチド配列
またはそのフラグメントもしくはＲＮＡ転写物；（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、（ｃ）本発明のポリペプチド、好ましくは、配列番号２のポリペプチドまたはそ
のフラグメント、あるいは（ｄ）本発明のポリペプチド、好ましくは、配列番号２のポリペプチドに対する
抗体。

【００４０】かかるキットの何れにおいても、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）は実質
的な成分を構成することができることは理解される。かかるキットは、疾患また
は疾患に対する感受性、中でも特に本発明の疾患を診断する際に有用である。

【００４１】本発明のポリヌクレオチド配列は、染色体局在化研究に有益である。該配列は
、個々のヒト染色体上の特定位置に対して特異的に標的化されており、そしてハ
イブリダイゼーションすることができる。本発明に従って関連する配列を染色体
にマッピングすることは、それらの配列を遺伝子関連疾患と相関させる際の重要
な最初の過程である。一度、配列が正確な染色体位置にマッピングされると、染
色体上における該配列の物理的な位置を、遺伝地図データと相関させることがで
きる。かかるデータは、例えば、Ｖ．ＭｃＫｕｓｉｃｋの「ヒトにおけるメンデ
ル遺伝」において見出される（これはＪｏｈｎｓＨｏｐｋｉｎｓ大学Ｗｅｌｃ
ｈＭｅｄｉｃａｌＬｉｂｒａｒｙからオンラインで入手可能である）。同じ
染色体領域にマッピングされている、遺伝子と疾患との関係が、その後、連鎖解
析（物理的に隣り合う遺伝子の同時遺伝）によって同定される。ゲノム配列（遺
伝子フラグメントなど）に関する、正確なヒト染色体局在化は、放射ハイブリッ
ド（ＲＨ）マッピングを使用して決定することができる（Ｗａｌｔｅｒ，Ｍ．、
Ｓｐｉｌｌｅｔｔ，Ｄ．、Ｔｈｏｍａｓ，Ｐ．、Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ，Ｊ．
およびＧｏｏｄｆｅｌｌｏｗ，Ｐ．（１９９４）、ゲノム全体の放射ハイブリッ
ドマップを構築するための方法、ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ、７、２２〜
２８）。多数のＲＨパネルをＲｅｓｅａｒｃｈＧｅｎｅｔｉｃｓ（Ｈｕｎｔｓ
ｖｉｌｌｅ、ＡＬ、米国）から得ることができる。例えば、ＧｅｎｅＢｒｉｄｇ
ｅ４ＲＨパネル（ＨｕｍＭｏｌＧｅｎｅｔ、１９９６、Ｍａｒ；５（３）
：３３９〜４６、ヒトゲノムの放射ハイブリッドマップ。ＧｙａｐａｙＧ．、
ＳｃｈｍｉｔｔＫ．、ＦｉｚａｍｅｓＣ．、ＪｏｎｅｓＨ．、Ｖｅｇａ−
ＣｚａｒｎｙＮ．、ＳｐｉｌｌｅｔｔＤ．、ＭｕｓｅｌｅｔＤ．、Ｐｒｕ
ｄ’ＨｏｍｍｅＪＦ、ＤｉｂＣ．、ＡｕｆｆｒａｙＣ．、Ｍｏｒｉｓｓｅ
ｔｔｅＪ．、Ｗｅｉｓｓｅｎｂａｃｈ，Ｊ．、Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏｗ，ＰＮ）
。このパネルを使用して遺伝子の染色体上の位置を決定するためには、ＲＨＤ
ＮＡ上の関心のある遺伝子から設計されたプライマーを使用して、９３回のＰＣ
Ｒが行われる。これらのＤＮＡのそれぞれは、ハムスターのバックグラウンド（
ヒト／ハムスターのハイブリッド細胞株）中に維持されたランダムなヒト・ゲノ
ム・フラグメントを含んでいる。このようなＰＣＲは、目的とする遺伝子のＰＣ
Ｒ産物の存在または非存在を示す、９３のスコアをもたらす。これらのスコアは
、既知の位置のゲノム配列に由来するＰＣＲ産物を使用して作製されたスコアと
比較される。この比較は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｏｍｅ．ｗｉ．ｍｉｔ
．ｅｄｕ／において行われる。本発明の遺伝子はヒトの第２０番染色体（Ｄ２０
Ｓ９９−Ｄ２０Ｓ３５８）にマッピングされる。

【００４２】本発明のポリヌクレオチド配列はまた、組織発現の研究に対する有益なツール
である。かかる研究では、それらをコードするｍＲＮＡを検出することによって
、コードされたポリペプチドの組織内の発現パターンに関する指標を与える、本
発明のポリヌクレオチドの発現パターンの決定を可能とする。使用される技術は
、当該分野では周知であり、また、ｃＤＮＡマイクロアレイ・ハイブリダイゼー
ション（Ｓｃｈｅｎａ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２７０、４６７〜４７０、１９９５
およびＳｈａｌｏｎ他、ＧｅｎｏｍｅＲｅｓ、６、６３９〜６４５、１９９６
）などの、格子上に配列されたクローンに対するインサイチュー（ｉｎｓｉｔ
ｕ）・ハイブリダイゼーション技術、ならびにＰＣＲなどの塩基増幅技術を含む
。好ましい方法では、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒから入手可能なＴＡＱＭＡＮ（
商標）法を使用する。これらの研究による結果は、生物におけるポリペプチドの
正常な機能の指標を提供する。さらに、ｍＲＮＡの正常な発現パターンと、同じ
遺伝子の別の形態（例えば、潜在的または調節的な変異をコードするポリペプチ
ドにおける変化を有するもの）によってコードされるｍＲＮＡの発現パターンと
の比較研究により、本発明のポリペプチドの役割、または疾患におけるその不適
切な発現の役割に対する有益な見識を提供することができる。かかる不適切な発
現は、時間的、空間的または単に量的な性質のものであってもよい。

【００４３】本発明のポリペプチドは、血液、脳、結腸、胆嚢、生殖細胞、心臓、腎臓、肝
臓、肺、副甲状腺、胎盤、前立腺、脾臓、胃、胸腺および子宮において発現して
いる。

【００４４】本発明のさらなる態様は抗体に関する。本発明のポリペプチドまたはそのフラ
グメント、あるいはそれらを発現している細胞は、本発明のポリペプチドに対し
て免疫特異的である抗体を産生させるための免疫原として使用することができる
。用語「免疫特異的」は、抗体が、先行技術における他の関連するポリペプチド
に対するその親和性よりも、本発明のポリペプチドに対して、実質的に大きい親
和性を有することを意味する。

【００４５】本発明のポリペプチドに対して生成される抗体は、慣用的なプロトコルを使用
して、該ポリペプチドまたはエピトープ保持したフラグメント、あるいは細胞を
動物、好ましくは非ヒト動物に投与することによって得ることができる。モノク
ローナル抗体を調製する場合、継代的な細胞株培養物によって産生される抗体を
提供する技術はいずれも使用することができる。例には、ハイブリドーマ技術（
Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．、Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）
、２５６：４９５〜４９７）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術
（Ｋｏｚｂｏｒ他、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ（１９８３）、４：７２
）、およびＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ他、ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓａｎｄＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ、７７〜９６、Ａ
ｌａｎＲ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８５）が含まれる。

【００４６】米国特許第４，９４６，７７８号に記載されているものなどの、一本鎖抗体を
製造するための技術もまた、本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体を製造す
る上で応用することができる。また、トランスジェニック・マウスあるいは他の
哺乳動物を含む他の生物を使用してヒト化抗体を発現させることができる。

【００４７】上記の抗体は、該ポリペプチドを発現するクローンを単離または同定するため
に、あるいはアフィニティー・クロマトグラフィによって該ポリペプチドを精製
するために使用してもよい。本発明のポリペプチドに対する抗体は、また、特に
本発明の疾患を治療するために用いることができる。

【００４８】本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドはまた、ワクチンとして使用す
ることができる。従って、さらなる形態において、本発明は、その疾患が個体に
おいて既に慢性化しているか否かに関わらず、前記動物を疾患から保護するため
に、抗体および／またはＴ細胞免疫応答（例えば、サイトカイン産生Ｔ細胞また
は細胞傷害性Ｔ細胞を含む）を生じさせるのに適する、本発明のポリペプチドを
哺乳動物に接種することを含んでなる、哺乳動物における免疫学的応答を誘導す
るための方法に関する。哺乳動物における免疫学的応答はまた、本発明にかかる
疾患から前記動物を保護するための抗体を産生するような、かかる免疫学的応答
を誘導するために、ｉｎｖｉｖｏで、該ポリヌクレオチドの発現を支配し、か
つ該ポリペプチドをコードしているベクターによって、本発明のポリペプチドを
送達することを含んでなる方法によって誘導してもよい。該ベクターを投与する
１つの方法は、粒子またはそれ以外のものの上へのコーティング物として、所望
する細胞中へのそれを促進することによる。かかる核酸ベクターは、ＤＮＡ、Ｒ
ＮＡ、修飾型核酸またはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを含むことができる。用途
によって、ワクチン、ポリペプチドまたは核酸ベクターは、通常、ワクチン配合
物（組成物）として提供される。該配合物はさらに適合するキャリアを含むこと
ができる。ポリペプチドは胃において分解されることもあるため、それは好まし
くは非経口的に投与される（例えば、皮下、筋肉内、静脈内、あるいは皮内注射
）。非経口投与に好適な配合物には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、ならびに配合
物を接種者の血液と等張性にする溶質を含んでもよい、水性および非水性の無菌
注射液；ならびに懸濁剤または増粘剤を含んでもよい、水性および非水性の無菌
懸濁剤が含まれる。該配合物は、単位用量または多回用量容器、例えば、密封さ
れたアンプルならびにバイアルに入れて提供することができ、また、使用直前に
無菌の液体キャリアを添加するだけでよい、凍結乾燥状態で保存することができ
る。該ワクチン配合物はまた、水中油型システムや当該分野で既知のその他のシ
ステムなどの、配合物の免疫原性を増強するためのアジュバント・システムを含
むことができる。投与量は、該ワクチンの比活性に依存し、型どおりの実験によ
って容易に決定することができる。

【００４９】本発明のポリペプチドは、１つまたはそれ以上の疾患状態、特に、既に記載さ
れた本発明の疾患に関連する、１つまたはそれ以上の生物学的機能を有する。従
って、該ポリペプチドの機能または濃度を刺激または阻害する化合物を同定する
ことは有用である。従って、さらなる態様において、本発明は、該ポリペプチド
の機能または濃度を刺激または阻害する化合物を同定するために化合物をスクリ
ーニングする方法を提供する。かかる方法は、上に記載されるような本発明のそ
のような疾患に対する治療および予防目的のために用いることができるアゴニス
トまたはアンタゴニストが同定される。化合物は、様々な供給源、例えば、細胞
、無細胞調製物、化学ライブラリー、化学化合物のコレクション、および天然産
物の混合物から同定することができる。そのようにして同定される、かかるアゴ
ニストまたはアンタゴニストは、場合によっては、ポリペプチド自体の、天然ま
たは修飾された基質、リガンド、受容体、酵素など；その構造的または機能的な
模倣体（Ｃｏｌｉｇａｎ他、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍ
ｍｕｎｏｌｏｇｙ、１（２）：５章（１９９１）参照）あるいは小分子であって
もよい。

【００５０】該スクリーニング方法は、候補化合物に直接的または間接的に結合している標
識によって、該ポリペプチドあるいは該ポリペプチドまたはその融合タンパク質
を表出している細胞または膜に対する候補化合物の結合を単に測定することでも
よい。あるいは、該スクリーニング方法は、標識された競合剤（例えば、アゴニ
ストまたはアンタゴニスト）に対して、候補化合物のポリペプチドに対する競合
的な結合の（定性的または定量的に）測定または検出を含んでもよい。さらに、
これらのスクリーニング方法では、該ポリペプチドを表出している細胞に適する
検出システムを使用して、候補化合物がポリペプチドの活性化または阻害によっ
て誘起されるシグナルをもたらすか否かを調べることでもよい。活性化の阻害剤
は、一般には既知のアゴニストの存在下でアッセイされ、そして候補化合物が存
在による、アゴニストによる活性化に対する作用を観測する。さらに、該スクリ
ーニング方法は、候補化合物を、本発明のポリペプチドを含有する溶液と混合し
て、混合体を形成させる工程、混合物におけるＤＵＳＰ１０活性を測定する工程
、および混合物のＤＵＳＰ１０活性を、候補化合物を含有しないコントロール混
合物と比較する工程を単に含み得る。

【００５１】本発明のポリペプチドは、従来の低い容量のスクリーニング方法、そしてまた
、ハイ・スループットなスクリーニング（ＨＴＳ）形態においても使用すること
ができる。かかるＨＴＳ形態には、十分に確立された、９６−、また、最近には
３８４−ウエル・マイクロ・タイター（ｍｉｃｏｔｉｔｅｒ）・プレートの使用
のみでなく、Ｓｃｈｕｌｌｅｋ他、ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ．、２４６、２０
〜２９（１９９７）に記載される、ナノウエル法などの開発途上の方法もまた含
まれる。

【００５２】既に記載したような、Ｆｃ部分およびＤＵＳＰ１０ポリペプチドから作製され
る融合タンパク質などの融合タンパク質もまた、本発明のポリペプチドに対する
アンタゴニストを同定するための、ハイ・スループットなスクリーニング・アッ
セイのために使用することができる（Ｄ．Ｂｅｎｎｅｔｔ他、ＪＭｏｌＲｅ
ｃｏｇｎｉｔｉｏｎ、８：５２〜５８（１９９５）；Ｋ．Ｊｏｈａｎｓｏｎ他、
ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ、２７０（１６）：９４５９〜９４７１（１９９５）参
照）。

【００５３】スクリーニング技術本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、および該ポリペプチドに対する抗
体はまた、細胞内におけるｍＲＮＡおよびポリペプチドの産生に対する、添加さ
れた化合物の影響を検出するためのスクリーニング方法を形成するために使用す
ることができる。例えば、当該分野で公知の標準的な方法によって、モノクロー
ナルおよびポリクローナル抗体を使用して、ポリペプチドの分泌または細胞結合
している濃度を測定するために、ＥＬＩＳＡアッセイを構築することができる。
これは、適当に操作された細胞または組織からのポリペプチドの産生を阻害また
は増強することができる薬剤（また、それぞれアンタゴニストまたはアゴニスト
とも呼ばれる）を発見するために使用することができる。

【００５４】本発明のポリペプチドは、当該分野で公知の標準的な受容体結合手法を通して
、存在する場合には、膜結合型または可溶性の受容体を同定するために使用する
ことができる。これらには、これらに限定されないものの、ポリペプチドを放射
性同位体（例えば、¹²⁵Ｉ）で標識、化学修飾（例えば、ビオチン化）、あるい
は検出または精製に好適なペプチド配列と融合して、そして推定される受容体の
供給源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液）とインキュベーションす
る、リガンド結合およびクロスリンク・アッセイリガンドが含まれる。他の方法
には、表面プラズモン共鳴および分光測定法などの生物物理学的技術が含まれる
。これらのスクリーニング方法はまた、存在する場合には、ポリペプチドのその
受容体に対する結合と競合する該ポリペプチドのアゴニストおよびアンタゴニス
トを同定するために使用することができる。かかるアッセイを行うための標準的
な方法は、当該分野では十分に理解されている。

【００５５】本発明のポリペプチドのアンタゴニストの例には、抗体、あるいは、ある場合
には、該ポリペプチド自体のリガンド、基質、受容体、酵素などに密接に関連す
るオリゴヌクレオチドまたはタンパク質、場合により、例えば、該リガンド、基
質、受容体、酵素などのフラグメント；あるいは本発明のポリペプチドに結合す
るものの、応答を誘発せず、その結果、ポリペプチドの活性が妨げられる、小分
子が含まれる。

【００５６】スクリーニング方法はまた、トランスジェニック技術およびＤＵＳＰ１０遺伝
子の使用を含んでもよい。トランスジェニック動物を構築する手法は十分に確立
されている。例えば、受精した卵母細胞の雄性前核へのマイクロインジェクショ
ン、移植前または移植後の胚へのレトロウイルス移入、エレクトロポレーション
などによって、遺伝子操作された胚性幹細胞の宿主胚盤胞への注入を通して、Ｄ
ＵＳＰ１０遺伝子を導入することができる。特に有用なトランスジェニック動物
は、その動物のゲノム内において、動物の遺伝子がヒトの等価体によって置き換
えられている、所謂「ノック・イン」動物である。ノック・イン・トランスジェ
ニック動物は、創薬プロセスにおいて、化合物はヒトの標的に対して特異的であ
るという、標的の妥当性検証用に有用である。他の有用なトランスジェニック動
物は、内因性ＤＮＡ配列によってコードされている、本発明のポリペプチドに対
する動物オルソログの発現が細胞内で部分的または完全に無効とされている、所
謂「ノック・アウト」動物である。遺伝子のノック・アウトは、技術の限界の結
果として、特異的な細胞または組織を対象とする、特定の細胞または組織におい
てのみ起きていてもよく、あるいは、動物内の全て、または実質的に全ての細胞
において生じてもよい。トランスジェニック動物の手法はまた、導入された遺伝
子が、本発明のポリペプチドを大量に供するために発現させられる動物全体の発
現−クローニング・システムを提供する。

【００５７】上記に記載された方法において使用されるスクリーニングキットは、本発明の
さらなる態様をなす。そのようなスクリーニング・キットは下記のものを含む：
（ａ）本発明のポリペプチド、（ｂ）本発明のポリペプチドを発現している組換え細胞、（ｃ）本発明のポリペプチドを発現している細胞膜、または（ｄ）本発明のポリペプチドに対する抗体、好ましくは配列番号２のポリペプチドである。

【００５８】かかるキットの何れの中においても、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）は
実質的な構成要素を構成することが理解される。

【００５９】（用語集）下記の定義は、本明細書中で既に頻繁に使用されているいくつかの用語の理解
を容易にするために提供される。

【００６０】本明細書中に用いられる「抗体」は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗
体、キメラ、一本鎖、ならびにヒト化抗体、同様にＦａｂフラグメントをも包含
し、Ｆａｂまたは他の免疫グロブリンの発現ライブラリー生成物を包含する。

【００６１】「単離（された）」は、その天然の状態から「ヒトの手によって」変化してい
ること、すなわち、自然界に存在する場合、その本来の環境から変化、または移
動されているか、あるいはその両方であることを意味する。例えば、生きた生物
中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離」されていな
いが、その天然状態の共存物質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドは、この用語の本明細書中での用法に従うと「単離」されている。さら
に、形質転換、遺伝子操作、または何らかの他の組換え方法によって生物に導入
されているポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、その生物が生存または非生
存のいずれでも、前記生物中に依然として存在している場合でさえ、「単離」さ
れている。

【００６２】「ポリヌクレオチド」は、一般には、非改変型または改変型のＲＮＡまたはＤ
ＮＡであってもよい、任意のポリリボヌクレオチド（ＲＮＡ）またはポリデオキ
シリボヌクレオチド（ＤＮＡ）をいう。「ポリヌクレオチド」には限定されない
ものの、一本鎖および二本鎖のＤＮＡ、一本鎖と二本鎖の領域の混合物であるＤ
ＮＡ、一本鎖および二本鎖のＲＮＡ、ならびに一本鎖と二本鎖領域の混合である
ＲＮＡ、一本鎖、または、より典型的には二本鎖の、または一本鎖と二本鎖の領
域の混合であってもよい、ＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子が含まれ
る。さらに、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮＡ、あるいはＲＮＡと
ＤＮＡとの両方を含む三重鎖領域をもいう。用語「ポリヌクレオチド」はまた、
１つまたは複数の修飾された塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性
または他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡを含む。「
修飾（された）」塩基には、例えば、トリチル化された塩基、ならびにイノシン
などの非通常型の塩基が含まれる。様々な修飾をＤＮＡおよびＲＮＡに対して行
うことができる。従って、「ポリヌクレオチド」は、ウイルスおよび細胞に特徴
的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態と同様に、自然界に典型的に見出されるよ
うな、ポリヌクレオチの化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、をも包
含する。「ポリヌクレオチド」はまた、オリゴヌクレオチドとしばしば呼ばれる
比較的短いポリヌクレオチドをも包含する。

【００６３】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合（すなわち
、ペプチド等配電子体）によって互いに連結された２つ以上のアミノ酸を含むポ
リペプチドのいずれをもいう。「ポリペプチド」は、ペプチド、オリゴペプチド
またはオリゴマーと広く呼ばれる短い鎖、ならびに一般にはタンパク質と呼ばれ
るそれよりも長い鎖の両方をいう。ポリペプチドは、遺伝子によってコードされ
る２０個のアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有することができる。「ポリペプチ
ド」は、翻訳後プロセシングなどの天然のプロセス、あるいは当該分野で周知の
化学的な修飾方法のいずれかによって、修飾がされたアミノ酸配列を含む。かか
る修飾は、基本的な教本、およびより詳細な専門書、ならびに数多くの研究文献
中に、広く記載されている。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノ
末端またはカルボキシル末端を含む、ポリペプチド内のいずれの位置に存在させ
ることができる。同じタイプの修飾が、所与ポリペプチド内のいくつかの部位に
同じ程度または異なる程度で存在してもよいことが理解される。また、所与ポリ
ペプチドは多くのタイプの修飾を含有することができる。ポリペプチドは、ユビ
キチン化の結果として分枝状であってもよく、また、分枝を有する、または有し
ていない、環状であってもよい。環状、分枝状および分枝した環状ポリペプチド
は、翻訳後の天然のプロセスに起因しても、あるいは合成的方法によって作製さ
れてもよい。修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化
、ビオチン化、フラビンの共有結合、ヘム成分の共有結合、ヌクレオチドまたは
ヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジ
ルイノシトールの共有結合、クロス・リンク形成、環化、ジスルフィド結合の形
成、脱メチル化、共有結合架橋の形成、システインの形成、ピログルタミン酸の
形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカーの形成
、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分
解的プロセシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、
アルギニル化などのアミノ酸のタンパク質へのトランスファー・ＲＮＡ媒介付加
、ならびユビキチン化が含まれる（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ−Ｓｔｒｕｃｔｕ
ｒｅａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、第２版、Ｔ．Ｅ．
Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｗ．Ｈ．ＦｒｅｅｍａｎａｎｄＣｏｍｐａｎｙ、Ｎｅ
ｗＹｏｒｋ、１９９３；Ｗｏｌｄ，Ｆ．、翻訳後のタンパク質修飾：全体像お
よび展望、１〜１２、Ｐｏｓｔ−ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌＣｏｖａｌｅｎ
ｔＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓ、Ｂ．Ｃ．Ｊｏｈｎｓ
ｏｎ編、ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、１９８３；Ｓｅｉ
ｆｔｅｒ他、「タンパク質修飾および非タンパク質補助因子の分析」、Ｍｅｔｈ
Ｅｎｚｙｍｏｌ、１８２、６２６〜６４６、１９９０；Ｒａｔｔａｎ他、「タ
ンパク質合成：翻訳後修飾およびエージング」、ＡｎｎＮＹＡｃａｄＳｃ
ｉ、６６３、４８〜６２、１９９２参照）。

【００６４】ポリペプチド配列の「フラグメント」は、基準の配列よりも短いものの、基準
ポリペプチドと同じ生物学的な機能または活性を本質的に保持しているポリペプ
チド配列をいう。ポリヌクレオチド配列の「フラグメント」は、配列番号１の基
準配列よりも短いポリヌクレオチド配列をいう。

【００６５】「変異体」は、基準となるポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異なるも
のの、その本質的な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリペプチドを
いう。ポリヌクレオチドの典型的な変異体は、基準となるポリヌクレオチドに対
して、塩基配列に相違がある。変異体の塩基配列における差異は、基準ポリヌク
レオチドによってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させても、さ
せなくてもよい。ヌクレオチドの変化は、下に説明するように、基準配列によっ
てコードされるポリペプチドにおけるアミノ酸の置換、付加、欠失、融合および
末端の短縮化を引き起こしてもよい。ポリペプチドの典型的な変異体は、基準と
なるポリペプチドに対して、アミノ酸配列に相違がある。一般に、改変は、基準
ポリペプチドおよび変異体の配列が全体的には非常に類似し、そして多くの領域
において同一であるように制限される。変異体ならびに基準となるポリペプチド
は、アミノ酸配列において、１つまたは複数の置換、挿入、欠失の任意の組合せ
によって相違してもよい。置換または挿入されるアミノ酸残基は、遺伝子コード
によってコードされるアミノ酸残基であっても、なくてもよい。典型的な保存的
置換には、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ
、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；ならびにＰｈｅおよびＴｙｒが含
まれる。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変異体は、対立遺伝子などの天
然に存在するものであってもよく、あるいは天然に存在することが知られていな
い変異体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの天然に存在し
ない変異体は、変異誘発技術によって、あるいは直接合成によって作製すること
ができる。また、１つまたは複数の翻訳後の修飾、例えば、グリコシル化、リン
酸化、メチル化、ＡＤＰリボシル化などを有するポリペプチドもまた変異体とし
て含まれる。実施形態には、Ｎ末端アミノ酸のメチル化、セリンおよびトレオニ
ンのリン酸化、ならびにＣ末端グリシンの修飾が含まれる。

【００６６】「対立遺伝子」は、ゲノム内の所与遺伝子座に存在する遺伝子の２つまたはそ
れ以上の選択的な形態の１つをいう。

【００６７】「多型」は、集団内のゲノムにおける所与の位置での塩基配列（関連する場合
にはコードされるポリペプチド配列）の変動をいう。

【００６８】「単一塩基多型」（ＳＮＰ）は、集団内においてゲノム内の１つの塩基位置に
おける塩基変動の発生をいう。ＳＮＰは、遺伝子内またはゲノムの遺伝子間領域
内で起こってもよい。ＳＮＰは、対立遺伝子特異的増幅（ＡＳＡ）を使用してア
ッセイすることができる。該プロセスには少なくとも３つのプライマーが必要で
ある。共通プライマーが、アッセイされる多型に対して、逆方向に相補となるよ
うに使用される。共通プライマーは、多型な塩基から５０ｂｐから１５００ｂｐ
の間で隔たったものとできる。それ以外の２つ（またはそれ以上）のプライマー
は、最後の３’塩基が、多型を構成する２つ（またはそれ以上）の対立遺伝子の
１つと一致するように変化している点を除いて互いに同一である。そして、２つ
（またはそれ以上）のＰＣＲ反応がサンプルＤＮＡについて行われる。このとき
、それぞれのＰＣＲには共通プライマーおよび１つの対立遺伝子特異的プライマ
ーが使用される。

【００６９】本明細書中で使用されている「スプライス変異体」は、同じゲノムＤＮＡ配列
から一旦転写され、ただし、選択的ＲＮＡスプライシングを受けている、ＲＮＡ
分子から作製されたｃＤＮＡ分子をいう。択一的なＲＮＡスプライシングは、一
般にはイントロンを除くために一次ＲＮＡ転写物がスプライシングを受ける際に
生じ、それぞれ、異なるアミノ酸配列をコードしてもよい、２つ以上のｍＲＮＡ
分子が生じる。スプライス変異体の用語はまた、上記のｃＤＮＡ分子によってコ
ードされるタンパク質をも示す。

【００７０】「同一性」は、その配列を比較することによって決定される、２つ以上のポリ
ペプチド配列または２つ以上のポリヌクレオチド配列の間における相互関係を反
映する。一般に、同一性は、対比がなされている配列の長さにわたって２つのポ
リヌクレオチド配列または２つのポリペプチド配列のそれぞれの塩基毎またはア
ミノ酸毎の厳密な一致をいう。

【００７１】「％同一性」−正確な一致が存在しない配列については、「％同一性」を決定
することができる。一般に、対比すべき２つの配列を、配列間で最大の相関が得
られるようにアラインメントされる。これには、アラインメントの程度を高める
ために、「ギャップ」をいずれか一方の配列または両方の配列に挿入することが
含まれ得る。％同一性は、比較されている配列のそれぞれの全長にわたって決定
することができる（いわゆる全体的なアラインメント）：これは同じ長さまたは
非常に類似する長さの配列の場合には特に好適である；あるいは、より短い限定
された長さにわたって決定することができる（いわゆる局所的アラインメント）
：これは不揃いな長さの配列の場合にはより好適である。

【００７２】「類似性」は、２つのポリペプチド配列の間における関係に対するより精巧な
さらなる尺度である。一般に、「類似性」は、残基毎に基づき、（同一性に関し
てと、同様に）比較されている配列それぞれからの、相互に対をなす残基間にお
ける正確な一致だけでなく、正確な一致が存在しない場合にも、進化的な基準に
基づいて、１つの残基は、他方に対する適当な置換であるかどうかをも考慮する
、２つのポリペプチド鎖のアミノ酸間での比較を意味する。この蓋然性は、付随
した「スコア」を有し、２つの配列の「％類似性」は、それに基づき決定するこ
とができる。

【００７３】２つ以上の配列の同一性および類似性を比較するための方法は、当該分野では
周知となっている。従って、例えば、ウイスコンシン配列分析パッケージ（バー
ジョン９．１；ＤｅｖｅｒｅｕｘＪ．他、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅ
ｓ．１２、３８７〜３９５、１９８４；ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒ
Ｇｒｏｕｐ（Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、米国）から入手可能）にお
いて利用可能なプログラム、例えば、ＢＥＳＴＦＩＴおよびＧＡＰプログラ
ムを使用して、２つのポリヌクレオチド間の％同一性ならびに２つのポリペプチ
ド配列間の％同一性および％類似性を決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴで
は、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎの「局所的相同性」アルゴリズム（Ｊ
ＭｏｌＢｉｏｌ、１４７、１９５〜１９７、１９８１、Ａｄｖａｎｃｅｓｉ
ｎＡｐｐｌｉｅｄＭａｔｈｅｍａｔｉｃｓ、２、４８２〜４８９、１９８１
）が使用され、２つの配列間における類似性の最も良い単一領域が見出される。
ＢＥＳＴＦＩＴは、長さが類似していない２つのポリヌクレオチド配列または２
つのポリペプチド配列の比較に対してより適している。該プログラムは、より短
い方の配列は、より長いものの一部を表すことが仮定されている。一方、ＧＡＰ
は、ＮｅｄｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（ＪＭｏｌＢｉ
ｏｌ、４８、４４３〜４５３、１９７０）に従って、「最大の類似性」を見出し
つつ、２つの配列をアラインメントする。ＧＡＰは、ほぼ同じ長さであり、また
アラインメントが長さ全体にわたって期待される配列を比較することに対してよ
り適している。好ましくは、比較されるものを、最適にアラインメントするため
の、各プログラムにおいて使用される「ギャップ加重」および「長さ加重」のパ
ラメーターは、それぞれ、ポリヌクレオチド配列に対しては、５０および３であ
り、ポリペプチド配列に対しては、１２および４である。好ましくは、比較され
ている２つの配列を最適にアラインメントした上で、％同一性および類似性を決
定する。

【００７４】配列間の同一性および／または類似性を決定するための他のプログラムもまた
当該分野では知られている：例えば、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラム（Ａｌ
ｔｓｃｈｕｌＳＦ他、ＪＭｏｌＢｉｏｌ、２１５、４０３〜４１０、１９
９０；ＡｌｔｓｃｈｕｌＳＦ他、ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．、２
５：３８９〜３４０２、１９９７；これはＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆ
ｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｂ
ｅｔｈｅｓｄａ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、米国）から入手可能であり、ｗｗｗ．ｎｃ
ｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖにおけるＮＣＢＩのホームページからアクセス可
能である）、およびＦＡＳＴＡ（ＰｅａｒｓｏｎＷＲ、Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１８３、６３〜９９、１９９０；ＰｅａｒｓｏｎＷ
ＲおよびＬｉｐｍａｎＤＪ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、
８５、２４４４〜２４４８、１９８８；これはウイスコンシン配列分析パッケー
ジの一部として入手可能である）。

【００７５】好ましくは、ＢＬＯＳＵＭ６２アミノ酸置換行列（ＨｅｎｉｋｏｆｆＳおよ
びＨｅｎｉｋｏｆｆＪＧ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８
９、１０９１５〜１０９１９、１９９２）が、比較前にヌクレオチド配列がアミ
ノ酸配列に最初に翻訳される場合を含むポリペプチド配列比較において使用され
る。

【００７６】好ましくは、プログラムＢＥＳＴＦＩＴが、基準とするポリヌクレオチドまた
はポリペプチド配列に関して、検討するポリヌクレオチドまたはポリペプチド配
列の％同一性を決定するために使用され、前に記載したように、検討と基準とす
る配列とは、最適にアラインメントされ、そしてプログラムのパラメーターは暫
定の値に設定されている。

【００７７】「同一性指標」は、候補配列（ポリヌクレオチドまたはポリペプチド）と基準
の配列とを比較するために使用することができる配列関連性の尺度である。すな
わち、例えば、基準とするポリヌクレオチド配列と比較して、例えば０．９５の
同一性指標を有する候補ポリヌクレオチド配列は、該候補ポリヌクレオチド配列
は、基準の配列の各１００塩基あたり平均して５個までの相違を含んでもよい点
を除いて基準配列と同一である。かかる相違は、少なくとも１つの塩基欠失、ト
ランジションおよびトランスバージョンを含む置換、または挿入からなる群から
選択される。これらの相違は、基準ポリヌクレオチド配列の５’または３’末端
部位に、あるいはこれらの末端部位の間の任意の位置で、基準配列内の塩基間に
個々に、あるいは基準配列内に１つまたは複数の連続した群で点在して起こって
もよい。すなわち、基準ポリヌクレオチド配列と比較したときに０．９５の同一
性指標を有するポリヌクレオチド配列を得るためには、既に記載のように基準配
列内の塩基１００個毎に平均して５個までが、任意の組合せで欠失、置換または
挿入されていてもよい。同じことは、同一性指標の他の値、例えば０．９６、０
．９７、０．９８および０．９９についても必要に応じて変更して適用される。

【００７８】同様に、ポリペプチドの場合、基準ポリペプチド配列と比較したときに、例え
ば、０．９５の同一性指標を有する候補ポリペプチド配列は、基準配列の各１０
０アミノ酸あたり平均して５個までの違いを該ポリペプチド配列が含んでもよい
ことを除いて基準配列と同一である。かかる違いは、少なくとも１つのアミノ酸
の欠失、保存的ならびに非保存的置換を含む置換、または挿入からなる群から選
択される。これらの相違は、基準ポリペプチド配列のアミノ末端部位もしくはカ
ルボキシ末端部位に、あるいはこれら末端部位間の任意の位置に、基準配列内の
アミノ酸間に個々に、あるいは基準配列内において１つまたは複数の連続した群
で点在して存在し得る。すなわち、基準ポリペプチド配列と比較した際、０．９
５の同一性指標を有するポリペプチド配列を得るためには、既に記載したように
、基準配列内においてアミノ酸の１００個毎に平均して５個まで、任意の組合せ
で欠失、置換または挿入がなされてもよい。同じことが、同一性指標の他の値、
例えば、０．９６、０．９７、０．９８および０．９９についても必要に応じて
変更して適用される。

【００７９】塩基またはアミノ酸の相違数と同一性指標との関係は下記の式で表すことがで
きる：ｎ_a≦ｘ_a−（ｘ_a・Ｉ）式中、ｎ_aは塩基またはアミノ酸の相違数であり、ｘ_aは配列番号１または配列番号２における塩基またはアミノ酸のそれぞれの
総数であり、Ｉは同一性指標であり、・は乗算演算子に対する記号であり、その際、ｘ_aとＩとの非整数の積は、最も近い整数に切り捨てられ、その後、そ
の値がｘ_aから引かれる。

【００８０】「ホモログ」は、基準配列に対して高度の配列関連性を有するポリヌクレオチ
ド配列またはポリペプチド配列を示すために、当該分野で使用されている一般的
な用語である。かかる関連性は、既に定義されているように、２つの配列間の同
一性および／または類似性の程度を決定することによって定量化することもでき
る。この総称的な用語には、「オルソログ」および「パラログ」の用語が含まれ
る。「オルソログ」は、別の種中における、該ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの機能的等価体であるポリヌクレオチドまたはポリペプチドをいう。「パラ
ログ」は、機能的に類似している同じ種におけるポリヌクレオチドまたはポリペ
プチドをいう。

【００８１】「融合タンパク質」は、２つの、関連しない、融合された遺伝子またはそのフ
ラグメントによってコードされるタンパク質をいう。その例が、米国特許第５５
４１０８７号、米国特許第５７２６０４４号に開示されている。Ｆｃ−ＤＵＳＰ
１０の場合、融合タンパク質の一部として免疫グロブリンのＦｃ領域を使用する
ことは、治療に用いる際のかかる融合タンパク質の薬物動態学的性質を改善する
ために、そして二量体のＤＵＳＰ１０を生成させるために、Ｆｃ−ＤＵＳＰ１０
またはＤＵＳＰ１０の断片の機能的発現を行う上で好都合である。Ｆｃ−ＤＵＳ
Ｐ１０のＤＮＡ構築物は、５’から３’の方向に、分泌カセット、すなわち、哺
乳動物細胞からの細胞外への輸送を引き起こすシグナル配列、融合パートナーと
して免疫グロブリンのＦｃ領域フラグメントをコードするＤＮＡ、およびＤＵＳ
Ｐ１０をコードするＤＮＡまたはそのフラグメントを含む。ある用途では、融合
タンパク質の残部には手を触れることなく、機能的なＦｃ側を変異させ、その固
有的な機能的性質（補体結合、Ｆｃ受容体結合）を変える、あるいは発現後にＦ
ｃ部分を完全に除くことを可能とすることが望ましい。

【００８２】特許および特許出願に限らず、これらを含む、本明細書中で引用されている刊
行物および参考文献の全ては、十分に述べているように、個々の刊行物または参
考文献を、参照して組み込むために、明示的かつ個別的に示唆されているように
、その全部を、参照することで、本明細書中に組み込まれる。本出願が優先権を
主張する特許出願はいずれも、先に刊行物および参考文献に関して記載したと同
様に、その全部を、参照することで、本明細書中に組み込まれる。

【００８３】（さらなる実施例）ＥＳＴＡＩ４２４９５７（配列番号３参照）とＤＵＳＰ−１０との間の部分
的な配列同一性をより詳細に調べた。この特定のＥＳＴ配列は、慢性リンパ球性
白血病患者に由来するＢ細胞から作製されたｃＤＮＡライブラリーから得られた
。ＤＵＳＰ−１０（位置２０５〜４２１）とＡＩ４２４９５７（位置２０５〜４
２１）との間での一致は完全であったが、その領域の外側ではこの相同性が突然
なくなっており、そこではＥＳＴ配列はもはや相同性を示していなかったことが
明らかにされ得る。このことは、予想外のゲノム異常がＤＵＳＰ−１０遺伝子内
にまさに存在すること、そしてホスファターゼタンパク質の機能に加えて、この
遺伝子の再編成に関連した他の機能的局面が存在することを示している。ＣＬＬ
における遺伝子の再編成は、これが診断的重要性を有し、そして新規な腫瘍抑制
因子遺伝子としてのＤＵＳＰ−１０の関連性をまさに示すので、知ろうとする臨
床医にとっては価値があると考えられる。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 9/16 Ｂ４Ｈ０４５ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 9/16 1/42 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/68 Ａ 1/42 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/68 33/50 ＺＧ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 5/00 Ａ (71)出願人ＦｒａｎｋｆｕｒｔｅｒＳｔｒ． 250，Ｄ−64293 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，ＦｅｄｅｒａｌＲｅｐｕｂｌｉｃｏｆＧｅｒｍａｎｙ (72)発明者デュエッケル、クラウスドイツ連邦共和国 64291 ダルムシュタットエッテステルシュトラーセ５Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BA13 BB03 BB20 CB01 CB21 DA12 DA13 DA14 DA36 DA37 FB03 FB04 FB06 4B024 AA01 AA11 BA11 CA02 CA07 CA09 CA12 CA20 DA01 DA02 DA05 DA11 DA12 GA11 HA11 HA13 HA14 4B050 CC01 CC03 CC05 DD11 EE01 LL01 LL03 LL05 4B063 QA01 QA05 QA13 QA18 QQ21 QQ33 QQ41 QQ43 QQ53 QQ61 QQ89 QR08 QR13 QR32 QR35 QR40 QR42 QR48 QR56 QR62 QR77 QR80 QS16 QS25 QS33 QS34 QS36 QX01 QX02 QX10 4B065 AA01X AA58X AA72X AA87X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA31 CA44 CA46 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 CA40 DA75 DA89 EA20 EA50 FA71 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】（ａ）配列番号１の配列を含むポリヌクレオチドによってコ
ードされるポリペプチド、（ｂ）配列番号２のポリペプチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有
するポリペプチド配列を含むポリペプチド、（ｃ）配列番号２のポリペプチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有
するポリペプチド、（ｄ）配列番号２のポリペプチド配列、および（ｅ）（ａ）〜（ｄ）に記載のかかるポリペプチドのフラグメントおよび変異
体からなる群から選択されるポリペプチド。
【請求項２】配列番号２のポリペプチド配列を含む、請求項１に記載のポ
リペプチド。
【請求項３】配列番号２のポリペプチド配列である、請求項１に記載のポ
リペプチド。
【請求項４】（ａ）配列番号１のポリヌクレオチド配列に対して少なくと
も９５％の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、（ｂ）配列番号１のポリヌクレオチドに対して少なくとも９５％の同一性を有
するポリヌクレオチド、（ｃ）配列番号２のポリペプチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有
するポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチ
ド、（ｄ）配列番号２のポリペプチド配列に対して少なくとも９５％の同一性を有
するポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオ
チド、（ｅ）配列番号１の配列または少なくとも１５塩基長を有するそのフラグメン
トを有する標識されたプローブを用いた厳格なハイブリダイゼーション条件下で
ライブラリーをスクリーニングすることにより得られる少なくとも１００塩基長
の塩基配列を有するポリヌクレオチド、（ｆ）（ａ）〜（ｅ）のポリヌクレオチドのＲＮＡ等価体であるポリヌクレオ
チド、（ｇ）（ａ）〜（ｆ）のいずれかの前記ポリヌクレオチドに対して相補的なポ
リヌクレオチド配列、および（ｈ）（ａ）〜（ｇ）のいずれかのポリヌクレオチドの変異体またはフラグメ
ントであるか、あるいは前記のポリヌクレオチドに対してその全長にわたって相
補的であるポリヌクレオチドからなる群から選択されるポリヌクレオチド。
【請求項５】（ａ）配列番号１のポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチ
ド、（ｂ）配列番号１のポリヌクレオチド、（ｃ）配列番号２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含むポ
リヌクレオチド、および（ｄ）配列番号２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドからなる群から選択される、請求項４に記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】該発現ベクターが適合性宿主細胞に存在する際、請求項１〜
３のいずれかに記載のポリペプチドを産生し得るポリヌクレオチドを含む発現シ
ステム。
【請求項７】請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチドを発現する、
請求項６に記載される発現ベクターを含む組換え宿主細胞またはその膜。
【請求項８】請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチドを製造する方
法であって、請求項７に記載の宿主細胞を前記ポリペプチドの産生に十分な条件
下で培養して、該ポリペプチドを該培養培地から回収する工程を含む方法。
【請求項９】免疫グロブリンのＦｃ領域と請求項１〜３のいずれかに記載
のポリペプチドとからなる融合タンパク質。
【請求項１０】請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチドに対して免
疫特異的な抗体。
【請求項１１】請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチドの機能また
は濃度を刺激または阻害する化合物を同定するためのスクリーニング方法であっ
て、（ａ）該ポリペプチド（または該ポリペプチドを発現する細胞もしくは膜）ま
たはその融合タンパク質に対する候補化合物の結合を、該候補化合物に直接的ま
たは間接的に結合している標識によって定量的または定性的に測定または検出す
ること、（ｂ）該ポリペプチド（または該ポリペプチドを発現する細胞もしくは膜）あ
るいはその融合タンパク質に対する候補化合物の結合の競合を、標識された競合
剤の存在下で測定すること、（ｃ）該ポリペプチドの活性化または阻害により発生するシグナルを該候補化
合物がもたらすか否かを、該ポリペプチドを発現する細胞または細胞膜に適切な
検出システムを使用して試験すること、（ｄ）候補化合物を、請求項１〜３のいずれかに記載のポリペプチドを含有す
る溶液と混合して混合物を作製し、該混合物中の該ポリペプチドの活性を測定し
、そして、何らの候補化合物を含有しない対照混合物に対して、該混合物の活性
を比較すること、または（ｅ）細胞中における前記ポリペプチドをコードするｍＲＮＡまたは前記ポリ
ペプチドの産生に対する候補化合物の作用を、例えばＥＬＩＳＡアッセイを使用
して検出すること、からなる群から選択される方法と、（ｆ）生物工学的または化学的な標準的な技術に従って前記化合物を製造する
こと、を含む方法。