JP2003526672A - 免疫調節ポリヌクレオチド配列を使用し呼吸器系のウィルス感染症を予防及び治療する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、呼吸器系の合胞体ウィルス（ＲＳＶ）のような呼吸器系のウィルスによる感染を、予防及び又は治療する、特に呼吸器系のウィルス感染性の感染及び又は症状を減らす方法を提供する。免疫刺激化配列（いわゆる「ＩＳＳ」）を含んで成るポリヌクレオチドは、呼吸器系のウィルスへ曝露される危険にある、呼吸器系のウィルスに曝露して来た又は呼吸器系のウィルスに感染した個体に対して投与される。当該ＩＳＳは呼吸器系のウィルスのいづれの抗原を伴わない。ＩＳＳの投与は、呼吸器系のウィルス感染性の１又は複数の症状の発生及び／又は苦痛の減少をもたらす。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 関連特許の引用 本出願は、２０００年３月１０日提出された米国仮出願第６０／１８８，５８
３号の優先権を主張し、それはその結果全体に於いて本明細書中に取り込まれた
ものとする。

【０００２】技術分野 本発明は、免疫刺激化ポリヌクレオチドの分野にあり、更に特に、呼吸器系の
ウィルス感染及び呼吸器系のウィルス感染症の症状を改善又は予防することに於
いてそれらの使用がある。

【０００３】技術背景 治療法を見出す為の大規模な研究努力にも関わらず、呼吸器系のウィルス感染
は世界中で主要な健康問題をとどめている。インフルエンザ及びライノウィルス
（ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）は、それぞれインフルエンザ及び一般のカゼの原因物
質であり、毎年相当な生産性の損失並びに苦痛及び、疾患による死でさえ導く。
多くのオバーザカウンター医薬が有効である一方、これらの薬は症状を治療する
に過ぎず、しばしば、限られた成功のみを伴い、患者を尚、感染症由来の衰弱に
導く。呼吸器系の合胞体ウィルス（ＲＳＶ）は、２歳以下の子供に重大な下気道
感染を引き起こす主要なものであり、更に最近、成人に於いて下気道感染の重要
な原因として同定された。現在ＲＳＶの感染症に対する有効なワクチンは無い。
疾患の治療の為に、現在唯一認可されている抗ウィルス性の、リバビリンは連続
した微小な粒子エアロゾルとしての投与のみについて許可され、潜在的な催奇物
質である欠点に悩まされる。これら感染症の治療に直面する挑戦は、ウィルス感
染を効果的に抑え、一方でつまらない、許容し難い副作用を生産しない抗ウィル
ス物質を発見することである。

【０００４】 一般的に免疫刺激化配列又は「ＩＳＳ」として知られているあるＤＮＡ配列の
投与は、Ｔｈ１結合サイトカインの分泌により示されるようなＴｈ１偏りを伴う
免疫応答を誘導する。ヘルパー細胞のＴｈ１サブセットは遅延型過敏性や細胞傷
害性Ｔ細胞の活性化のような古典的な細胞仲介機能の原因である一方、Ｔｈ２サ
ブセットの機能は、Ｂ−細胞活性化の為のヘルパーとして更に有効である。抗原
に対する免疫応答の型は、当該抗原に応答する細胞により生産されるサイトカイ
ンにより影響を受ける。Ｔｈ１及びＴｈ２細胞により分泌されるサイトカインに
於ける差異は、これら２つのサブセットの異なる生物学的機能に反映されると考
えられている、例えば、Romagnani (2000) Ann. Allergy Asthma Immunol. 85:
9-18を参照のこと。

【０００５】 抗原を伴う免疫刺激化ポリヌクレオチドの投与は、投与された抗原に応ずるＴ
ｈ１型免疫応答をもたらす。Roman ら (1997) Nature Med. 3: 849-854。例えば
、塩類溶液又は補助ミョウバン中の大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
）（Ｅ．ｃｏｌｉ）β−カラクトシダーゼ（β−Ｇａｌ）を皮内に注射されたマ
ウスは、特異的なＩｇＧ１及びＩｇＥ抗体並びに、ＩＬ−４及びＩＬ−５を分泌
するがＩＦＮ−γを分泌しないＣＤ４⁺ 細胞の生産により応答し、Ｔ細胞がＴｈ
２サブセットの大部分であったことを示す。しかしながら、β−Ｇａｌをコード
しＩＳＳを含むプラスミドＤＮＡ（塩類溶液中）を皮内（又はタインスキンスク
ラッチ塗布器（ｔｙｎｅ ｓｋｉｎ ｓｃｒａｔｃｈ ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ）
により）に注射されたマウスは、ＩｇＧ２ａ抗体及びＩＦＮ−γを分泌するがＩ
Ｌ４及びＩＬ−５を分泌しないＣＤ４⁺ 細胞の生産に応答し、Ｔ細胞は大部分が
Ｔｈ１サブセットであったことを示す。更に、プラスミドＤＮＡ注射マウスによ
る特異的なＩｇＥ生産は６６−７５％減少した。Raz ら (1996) Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA 93: 5141-5145。概して、裸のＤＮＡの免疫化に対する応答は（Ｔ
ｈ１型の応答を示す）抗原−活性化ＣＤ４細胞によるＩＬ−２，ＴＮＦα及びＩ
ＦＮ−γの生産により特性決定される。ＩｇＥ生産の減少により見られるような
、アレルギー及び喘息の治療に於いてこれは特に重要である。免疫活性化ポリヌ
クレオチドの、Ｔｈ１型免疫応答を刺激する能力は、細菌性の抗原、ウィルス性
の抗原及びアレルゲンにより証明されて来た（ＷＯ ９８／５５４９５を参照の
こと）。

【０００６】 ＩＳＳ等を記述する他の参照は

【表１】

【表２】

【表３】 である。

【０００７】 呼吸器系のウィルスに対する効果的な治療法及び予防戦略を開発する深刻な必
要性が残っている。

【０００８】 本明細書中に於いて引用した全ての刊行物及び特許出願はここに於いて、それ
らの全体を参照とすることにより組み込まれたものとする。

【０００９】発明の開示 本発明は、個体に於いて、呼吸器系のウィルスによるウィルス感染を、免疫活
性化ポリヌクレオチド配列を使用して、曝露又は感染の前後に抑制、改善、及び
／又は妨げる方法を供する。従って、ある局面に於いて、本発明は、呼吸器系の
ウィルス抗原の投与を伴わない、呼吸器系のウィルス感染症の１又は複数の症状
を、妨げ、緩和し、改善し、減少及び／又は取り除く方法を供する。免疫刺激化
配列（「ＩＳＳ」）を含んで成るポリヌクレオチドは、呼吸器系のウィルスに曝
露されている危険性のある、呼吸器系のウィルスに曝露されて来た又は呼吸器系
のウィルスに感染している、個体に投与される。ＩＳＳを含むポリヌクレオチド
は任意の呼吸器系のウィルス抗原を伴わず投与される（即ち、呼吸器系のウィル
ス抗原は共投与されない）。ＩＳＳの投与は、呼吸器系ウィルス感染症の１又は
複数の症状の影響や苦痛の減少をもたらす。

【００１０】 ある実施態様に於いて、本発明は、呼吸器系のウィルスに曝露される危険性に
ある個体に於いて、呼吸器系のウィルスの症状を予防する方法を提供する。本方
法は、個体に対して免疫刺激化配列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドを
含んで成る有効な量の組成物（即ち、呼吸器系のウィルス感染の症状を妨げる為
に十分な量の組成物）を投与することを必要とし、この方法に於いて、当該ＩＳ
Ｓが配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成る。この方法に於いて、呼吸器系のウィ
ルス抗原は、当該組成物の投与と共に投与されない（即ち、抗原はＩＳＳ含有ポ
リヌクレオチドと共に投与されない）。その結果呼吸器系のウィルス感染症の症
状を止める。

【００１１】 本発明の他の実施態様は、個体の為に、ＩＳＳを含んで成るポリヌクレオチド
を含んで成る有効な量の化合物の投与を伴い、個体に於いて、呼吸器系のウィル
ス感染の症状を予防する方法を提供する。この方法に於いて、当該ＩＳＳは配列
５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成る。この方法に於いて呼吸器系のウィルス抗原は
、当該組成物の投与共に投与されない。その結果、呼吸器系ウィルス感染症の症
状を妨げる。個体は呼吸器系のウィルスにより曝露又は感染されている。

【００１２】 本発明の他の実施態様は、個体に於ける呼吸器系のウィルスの感染を抑制する
方法を提供し、その方法は、個体由来の生物学的試料中で、呼吸器系ウィルスの
ウィルス力価を減らす為に十分な量に於いて、個体に対するＩＳＳを含んで成る
ポリヌクレオチドを含んで成る組成物を投与することを必要とする。この方法に
於いて当該ＩＳＳは、配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成り、この方法に於いて
、呼吸器系のウィルス抗原は組成物の投与に伴い投与されず、その結果、呼吸器
系のウィルス感染を抑制する。当該個体は呼吸器系のウィルスにより曝露され又
は感染されうる。

【００１３】 他の実施態様に於いて、個体に於ける呼吸器系のウィルス感染の症状の苦痛を
減らす方法を供する。この方法は、個体に対してＩＳＳを含んで成るポリペプチ
ドを含んで成る有効な量の組成物の投与を必要とし、この方法に於いて当該ＩＳ
Ｓが配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成り、この方法に於いて呼吸器系のウィル
ス抗原は、組成物の投与に伴い投与されない。その結果、呼吸器系のウィルス感
染症の症状を抑制する。個体は、呼吸器系のウィルスにより曝露され、曝露され
うる危険にあり、又は感染されうる。

【００１４】 他の実施態様に於いて、個体に於ける呼吸器系のウィルス感染の症状の進展を
遅らせる方法を提供する。この方法は、個体に対してＩＳＳを含んで成るポリペ
プチドを含んで成る有効な量の組成物の投与を必要とし、この方法に於いて当該
ＩＳＳが配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成り、ここに於いて呼吸器系のウィル
ス抗原は組成物の投与に伴い投与されない。その結果、呼吸器系のウィルスの症
状の進展を遅延する。

【００１５】 他の実施態様に於いて、個体中の呼吸器系のウィルス感染の持続時間を減少す
る方法を提供する。この方法は、個体に対してＩＳＳを含んで成るポリペプチド
を含んで成る有効な量の組成物の投与を必要とし、この方法に於いて、当該ＩＳ
Ｓが配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成り、ここに於いて呼吸器系のウィルス抗
原は組成物の投与に伴い投与されない。その結果、呼吸器系のウィルス感染の持
続時間が減少する。個体は呼吸器系のウィルスにより、曝露され、曝露されうる
危険にあり、感染されうる。

【００１６】 更なる局面に於いて、本発明は本発明の方法に関連するキットを提供する。従
って、本発明の他の実施態様は、呼吸器系のウィルスに感染、曝露、又は曝露さ
れる危険にある個体に於いて、呼吸器系のウィルス感染症の症状を、改善及び／
又は止めることに於いて使用する為のキットを提供する。当該キットは、ＩＳＳ
を含んで成るポリヌクレオチドを含んで成る組成物を含んで成り、ここに於いて
当該ＩＳＳは配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成り、ここに於いて当該キットは
呼吸器系のウィルス抗原を含んで成らず、並びに、当該キットは、呼吸器系のウ
ィルスに感染、曝露又は感染される危険にある人に対する組成物の投与の為の説
明書を含んで成る。

【００１７】 本発明の方法及びキットのある実施態様に於いて、前記ＩＳＳは、配列５′−
プリン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ，Ｇ−３′又は５′−プ
リン、プリン、Ｃ，Ｇ、ピリミジン、ピリミジン、Ｃ，Ｃ−３′を含んで成る。
当該方法及びキットの更なる実施態様に於いて、当該ＩＳＳは、AACGTTCC, AACG
TTCG, GACGTTCC及び、GACGTTCGから成る群から選択される配列を含んで成る。

【００１８】 本発明の方法及びキットのある実施態様に於いて、前記ＩＳＳは、配列５′−
Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含んで成る。本発明の当該方法及びキットのある実施態様に
於いて、当該ＩＳＳは配列

【化３】 を含んで成る。

【００１９】 本発明の方法及びキットのある実施態様に於いて、個体は哺乳動物である。

【００２０】 本発明の方法及びキットのある実施態様に於いて、前記呼吸器系のウィルスは
呼吸器系の合胞体ウィルス（ＲＳＶ）である。本発明の方法及びキットの他の実
施態様に於いて、前記呼吸器系のウィルスはアデノウィルスである。本発明の方
法及びキットの他の実施態様に於いて、前記呼吸器系のウィルスはライノウィル
スである。

【００２１】本発明を実行する為の方法 我々は免疫刺激化ポリペプチド配列（ＩＳＳ）は、呼吸器系のウィルスに対し
て有効な抗−ウィルス剤であることを発見した。免疫刺激化配列（「ＩＳＳ」）
を含んで成るポリヌクレオチドは、呼吸器系のウィルスに曝露される危険にある
、呼吸器系のウィルスに曝露されている又は、呼吸器系のウィルスに感染される
個体に対して投与される。当該ＩＳＳは任意の呼吸器系のウィルス抗原を伴わず
投与される。

【００２２】 本発明は又曝露した個体に於ける呼吸器系のウィルス感染の症状を改善及び／
又は止める為のキットにも関連する。呼吸器系のウィルス抗原を含まない当該キ
ットは、ＩＳＳを含んで成るポリヌクレオチド及び、意図する治療の為の、個体
に対するＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの投与を記述している説明書を含んで成る
。

【００２３】 業界が許容した呼吸器系のウィルスのモデル、即ち呼吸器系の合胞体ウィルス
（ＲＳＶ）により感染されたコットンラットに於いて、我々は、特にウィルスの
感染の前、局所（即ち、感染部位で）及び十分な時間投与したなら、ウィルス力
価を減らすことにより、効果的であることを示す。例えば、ＩＳＳにより非局所
的に予め処理されたラットはより高い投与量は効果的でありうるがウィルス力価
に於いて有意な減少を示さなかった。更に、治療上の投与量で、明らかな毒性は
無い（即ち、ウィルス力価を減らす為に投与量が十分である）。重要なことは、
ＩＳＳによる免疫調節の先の報告とは対照的に、我々は、このウィルスの状況に
於けるＩＳＳの臨床上の有効性を報告する。

【００２４】 一般的な技術 本発明の実施は、当業者に周知であり汎用の分子生物学（組換え技術等）、微
生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の技術を使用し、さもなければ別に示し
た。そのような技術は刊行物に十分説明があり、それは、

【表４】

【表５】 である。

【００２５】 定義 用語「呼吸器系のウィルス」は、呼吸器系の細胞、口腔、鼻咽腔、咽喉、喉頭
、気管支及び細気管支等の細胞の内側に感染するウィルスに言及する。呼吸器系
のウィルスは例を挙げると、インフルエンザウィルス、ライノウィルス、アデノ
ウィルス、呼吸器系の合胞体ウィルス（ＲＳＶ）、はしかウィルス、流行性耳下
腺炎ウィルス、パラインフルエンザウィルス、風疹ウィルス、ポックスウィルス
、パルボウィルス属、ハンタウィルス属及び水痘ウィルスである。用語「呼吸器
系のウィルス」を使う陳述と記述は、本明細書中に列挙した任意の１又は複数の
呼吸器系のウィルスを示し及び言及する。

【００２６】 ウィルスへの「曝露」とは、例えば、感染した個体との接触により、感染を可
能にするウィルスとの遭遇を示す。

【００２７】 もし、ウィルスに対して特異的な抗体が、個体由来の血液又は血清サンプル中
で、当業界に於いて標準的なＥＬＩＳＡのような方法を用いて検出できない時は
、個体はウィルスに対して「セロネガティブ（ｓｅｒｏｎｅｇａｔｉｖｅ）」で
ある。逆に、もし、ウィルスに特異的な抗体が、個体からの血液又は血清サンプ
ル中で、当業界に於いて標準的なＥＬＡＩＳＡのような方法を用いて検出できる
時は、個体はウィルスに対して「セロポジティブ（ｓｅｒｏｐｏｓｉｔｉｖｅ）
」である。ウィルスに対する抗体が、予めセロネガティブであった個体からの血
液又は血清中で検出できうる時は、個体は「セロコンバート（ｓｅｒｏｃｏｎｖ
ｅｒｔ）」と言われる。

【００２８】 ウィルスに対して「曝露される危険にある」個体は、当該ウィルスが個体に感
染する（即ち、ウィルスが細胞に入り複製する）ようなウィルスに、遭遇しうる
個体である。急性感染症を引き起こす呼吸器系のウィルス並びに感染及び症状の
消散との関連で、ウィルスに曝露していてもいなくても良いが個体はしかし、Ｉ
ＳＳ含有ポリヌクレオチドの１回以上の投与の時、当該個体は症状が無く、ＩＳ
Ｓの投与の約５日以内はウィルスに曝露されていないものであると理解されるべ
きである。呼吸器系のウィルスは何処にでもいるので、一般的にいずれの個体も
当該ウィルスに曝露される危険にある。ある状況において、個体は「危険である
」と決定される。その理由はウィルスへの曝露は更に深刻な症状、状態、及び／
又は合併症をもたらすことができる感染症（例えば、免疫不全、年輩及び／又は
とても若い子供、並びに幼児と）へと導くより高い確率があるからである。 ある環境、例えば、限定はしないが、病院、学校、デイケア施設、軍の施設、
看護療養所、及び、回復期の保養所において、個体は、「危険である」と決定さ
れる。その理由は感染している他の個体に極めて接近して時間を過ごすからであ
る。

【００２９】 ウィルス感染症を「抑制すること」は、本発明に係るＩＳＳ含有ポリヌクレオ
チドにより治療した個体及び個体集団に於いて、本発明に係り治療されなかった
個体又は個体集団に於けるウィルス感染症の局面と比較して、例えば、ウィルス
複製、感染症の時間経過、ウィルス量（力価）、変病、及び／又は１又は複数の
症状が減縮され、止められ、又は削減されたウィルス感染のいずれの局面を示す
。ウィルス力価の減少は、感染部位又は個体からのウィルスの除去に限定しない
。ウィルス感染は当業者に周囲の任意の手段、例えば限定はしないが、ウィルス
粒子、ウィルスの核酸又はウィルス抗原の測定、症状の検出、抗ウィルス抗体の
検出及び／又は測定により評価できうる。抗ウィルス抗体は、ウィルス感染を検
出、モニタリングする為に幅広く使用されており、一般的に商業的に入手可能で
ある。

【００３０】 疾患もしくは感染症の疾患もしくは、１又は複数の症状を「緩和すること」は
、本発明に係るＩＳＳにより治療された個体又は個体集団に於いて、疾患状態又
は感染症の望ましくない臨床的な発現の範囲及び／又は時間経過を減らすことを
意味する。

【００３１】 本明細書中で使用したように、呼吸器系の感染症又は呼吸器系の感染症の症状
の「遅延」は、本発明の方法（群）を使用しない場合と比較した時、疾患又は症
状の進展の据え置き、止め、緩慢な、阻止、安定化、及び／又は先送りを意味す
る。この遅延は、治療されている病気の段階及び／又は個体に依存し、時間の長
さが変わりうる。当業者に明らかなように、効果に置いて、十分又は有意義な遅
延は、疾患を進展させない個体における、予防法も包含することができる。

【００３２】 呼吸器系の感染症の「症度の軽減」又は「症状の改善」は、ＩＳＳ含有ポリヌ
クレオチドの投与が無いのと比較して、呼吸器系のウィルス感染症の１又は複数
の症状の減少もしくは改善を意味する。「苦痛の減少」は又症状の持続時間に於
ける短縮又は減少等が挙げられる。呼吸器系のウィルスについて、これら症状は
当業界において周知であり、例えば、呼吸粘膜の炎症、発熱、体の痛み、咳、ゼ
イゼイとする咳、くしゃみ、鼻漏、胸痛に限定されない。

【００３３】 呼吸器系のウィルスによる「感染症の症状を防止すること」は、当該ウィルス
に曝露した後症状が現れないことを意味する。症状の実例を上に記述している。

【００３４】 「ウィルス感染症の持続時間を削減すること」はウィルス感染症の時間の長さ
（通常は症状により示される）が、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを投与しなかっ
た場合と比較して削減され又は短縮されたことを意味する。

【００３５】 本明細書中で使用した用語「感染した個体」は、呼吸器系のウィルスにより感
染されている個体に言及する。

【００３６】 「生物学的試料」は、個体から得た様々な試料の型を包含し、解析的又は、モ
ニタリング評価に於いて使用されうる。定義は、生物学的な起源の血液又は他の
液体試料、顕微鏡標本もしくは培養組織もしくはそれらからの細胞並びにこれら
の子孫のような固体組織試料を包含する。当該定義は又それらを獲得後試薬によ
る処理可溶化、又は、例えばタンパク質もしくはポリヌクレオチドのような特定
の物質の添加のような方法により操作された試料等も挙げられる。用語「生物学
的な試料」は、臨床的な試料を包含し、又培養中の細胞、細胞上清、細胞溶解産
物、血清、血しょう、生物学的な流体、及び組織試料等も挙げられる。

【００３７】 用語「ウィルス力価」は、当業界で周知であり、与えられた生物学的試料中の
ウィルスの量を示すものである。「ウィルス血症」は、当業界に於いて血流中の
ウィルスの存在及び／又は、血流もしくは血清試料中のウィルス力価としてよく
知られる用語である。ウィルスの量は、様々な測定法、例えば限定はされないが
、ウィルスの核酸の量；ウィルス粒子の存在；複製ユニット（ＲＵ）；ファージ
力価（ＰＦＵ）により示される。一般的に、血液及び尿のような試料について、
ウィルスの量は、グラムのような重量単位あたりで決定される。ウィルスの量を
決定する為の方法は、当業者に周知であり、本明細書中に記載されている。

【００３８】 「個体」は脊椎動物、好適には哺乳動物、更に好適にはヒトである。哺乳動物
は、例えば、ヒト、牧場動物、運動動物（ｓｐｏｒｔ ａｎｉｍａｌｓ）、げっ
歯類、霊長類及び一定のペット等を挙げられるが、限定はされない。脊椎動物は
又鳥（即ち、鳥類の個体）及びハチュウ類（即ち、ハチュウ類の個体）を等を挙
げられるが限定されない。

【００３９】 本明細書中で用いる用語「ＩＳＳ」はｉｎ ｖｉｔｒｏ，ｉｎ ｖｉｖｏ及び
／又はｅｘ ｖｉｖｏで測定した時測定可能な免疫応答を奏る、ポリヌクレオチ
ド配列に言及する。測定可能な免疫応答は、抗原特異的抗体生産、サイトカイン
の分泌、リンパ球集団、例えばＮＫ細胞、ＣＤ４⁺ Ｔリンパ球、ＣＤ８⁺ Ｔリン
パ球、βリンパ球等の活性化又は拡張等が挙げられるが、限定はされない。好ま
しくは、当該ＩＳＳ配列は、優先的にＴｈ１型応答を活性化する。本発明の方法
に於いて使用する為のポリヌクレオチドは１つ以上のＩＳＳを含む。

【００４０】 本明細書中で同義で用いる、用語「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオ
チド」は例えば、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）、
一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）及び二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、修飾オリゴヌク
レオチド及びオリゴヌクレオシド又はこれらの組み合わせを挙げる。当該オリゴ
ヌクレオチドは直線状又は環状な形態が可能であり、又は当該オリゴヌクレオチ
ドは、直線状又は環状の部分に含むことが出来る。

【００４１】 「補助剤」は、抗原のような免疫原性の試薬に添加した時、レシピエントホス
ト中で合剤に曝露することにより、非特異的に免疫応答を増強又は相乗的に増す
物質に言及する。

【００４２】 物質の「有効な量」又は「十分な量」は、臨床上の結果等有益又は所望の結果
に十分に作用する量である。有効な量は１又は複数の投与に於いて投与すること
が出来うる。「治療上の効果的な量」は、有益な臨床上の効果、限定されないが
、例えば呼吸器系のウィルス感染症と関連した１又は複数の症状の緩和並びに、
疾患の予防（例えば当該感染症の１又は複数の症状の予防）に至る量である。

【００４３】 ミクロキャリアーは、もし通常の哺乳類の生理学的条件下で分解性又は腐食性
ならば、「生分解性」であると考えられる。一般的に、ミクロキャリアーは、も
しそれが、通常のヒト血清中で３７℃で７２時間に渡りインキュベートされた後
、分解（即ち、それ自体の質量及び／又は平均的な長さの５％以上を失う）され
ていたら、生物解性であると考えられる。反対に、ミクロキャリアーは、もしそ
れが通常の哺乳類の生理学的条件下で、分解又は腐食されないなら、「非生分解
性」であると考えられる。一般的に、ミクロキャリアーは、通常のヒト血清中で
３７℃で７２時間に渡るインキュベーションの後、分解（即ち、その質量及び／
又は平均的なポリマーの長さの５％未満を失う）されないなら、非生物解性であ
ると考えられる。

【００４４】 用語「免疫活性化配列−ミクロキャリアー複合体」又は「ＩＳＳ−ＭＣ複合体
」は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドとミクロキャリアーとの複合体に言及する。
当該複合体の成分は共有又は非共有的に結合されうる。非共有結合は、非共有結
合力、例えば疎水性相互作用、イオン（静電気の）結合、水素結合及び／又はフ
ァン・デルワールス引力により仲介されうる。疎水性結合の場合、一般的に当該
結合は疎水的に一部分（例えばコレステ−ロール）ＩＳＳへの共有結合を介され
る。

【００４５】 本明細書にて使用したように、用語「含んで成る」及びその同語は、それらの
抱括的な意味に於いて用いる；即ち、用語「含む」及びその対応の同語と対応す
る。

【００４６】 発明の方法 本発明は、呼吸器系のウィルス感染症の症状を改善（即ち、症度を軽減するこ
と）及び／又は予防する方法並びに、呼吸器系のウィルスによる感染症の抑制す
る方法を提供する。その方法は、呼吸器系のウィルス抗原の投与を伴わず、個体
へＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを投与することを包含する。呼吸器系のウィルス
抗原を含まないＩＳＳ含有組成物は、呼吸器系のウィルスによる感染症の症状に
曝露される危険にある、曝露した、感染した、及び／又は呈している個体へ投与
される。ＩＳＳを受容する個体は、好適には哺乳動物、更に好適にはヒトである
。注射に従い、呼吸器系のウィルス抗原は、ＩＳＳの投与と共に投与されない（
即ち、当該ＩＳＳの投与の時又はしようとする時、（呼吸器系のウィルス抗原は
、）別々の投与に於いて投与されない）。

【００４７】 呼吸器系のウィルスは気道に感染する任意のウィルスであって良く、限定され
ないが、インフルエンザ、呼吸器系の合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、パラインフル
エンザ３型（ＰＩＶ−３）、アデノウイルス、ライノウィルス、はしかウィルス
、流行性耳下腺炎ウィルス、他のパラインフルエンザウィルス、風疹ウィルス、
ポックスウィルス、パルボ属、ハシタウィルス属、水痘ウィルス、パラミクソウ
ィルス属、ミクソウィルス等が挙げられる。ある実施態様に於いて、当該呼吸器
系のウィルスはＲＳＶである。ある実施態様に於いて、当該呼吸器系のウィルス
はインフルエンザ以外である。

【００４８】 ある実施態様に於いて、個体はウィルスに曝露される危険にある。危険にある
個体の決定は、一般的に熟練した臨床医により周知又は評価されうる疾患の進行
に関連する１又は複数の因子に基づいている。次第にこれらの個体は一般的に、
特に感染症を進行しやすく、感染症が更に又他の感染症へと導くことができうる
ので、危険にある個体は、ＩＳＳを受ける候補者に適切である。例えば、ＲＳＶ
感染症の状況に於いて、およそ２歳以下の年齢及び年輩の群は、危険であると考
えられる。危険にある他の個体は、感染されうる個体、例えば限定されないが、
ヘルスケアワーカー及び病院、学校、デイケア施設、軍の施設、看護療養所及び
回復期の保養所にいるような個体と極めて近い個体である。危険にある個体は、
免疫不全の個体である。

【００４９】 上記留意したが、インフルエンザ感染症の状況に於いて、一般的に年輩（例え
ば、６０歳以上年輩）は危険にあると考えられ、他の多くの条件が個体をこの感
染症の危険に向かわせ、例えば一般的に「インフルエンザの季節（ｆｌｕ ｓｅ
ｃｓｏｎ）」と定義される間（１１月から３月）、条件は、感染した人々の家族
のメンバーのように、並びにオフィスビルディング、学校、飛行機、病院、学校
、デイケア施設、軍の施設、看護療養所及び回復期の保養所に於いて、他の人々
との多くの接触を連坐する。一般的にＲＳＶの季節は冬及び早春の間引き起こる
。同様の一般的な原則は、ライノウィルスの状況にも当てはまる。

【００５０】 他の実施態様に於いて、個体は、もしくは今迄、ウィルスにより曝露及び／又
は感染されている。一般的にウィルスへの曝露は、感染した個体又は感染した場
所との十分な接触により示される。曝露は又ウィルス感染症に関連する１又は複
数の症状の進行により示されうる。ウィルスによる感染は、上記のいづれか並び
に個体からの生物学的な試料中でウィルス又は抗ウィルス抗体（即ち、当該個体
はセロポジティブになる）の検出により示されうる。

【００５１】ＩＳＳ 本発明の方法はＩＳＳ（又はそのようなポリヌクレオチドを含んで成る組成物
）を含んで成るポリヌクレオチドを投与することを包含する。本発明に関連して
免疫活性化ポリヌクレオチドは１つ以上のＩＳＳを含み、多重ＩＳＳを含むこと
ができる。当該ＩＳＳは前記ポリヌクレオチド内に結合でき、又は、ポリヌクレ
オチド内の更なるヌクレオチド塩基により分割できうる。従って多重ＩＳＳは各
々のポリヌクレオチドとして配られうる。

【００５２】 当業界にて記述があり、標準的なアッセイを使用して容易に同定されうるＩＳ
Ｓは、免疫応答の多様な局面、例えばサイトカインの分泌、抗体の生産、ＮＫ細
胞の活性化及びＴ細胞の増殖を示す。例えばＷＯ ９７／２８２５９；ＷＯ ９
８／１６２４７；ＷＯ ９９／１１２７５；Krieg ら (1995); Yamamoto ら (19
92); Ballas ら (1996); Klinman ら (1997); Sato ら (1996); Pisetsky (1996
a); Shimada ら (1986) Jpn. J. Cancer Res. 77: 808-816; Cowdery ら (1996)
J. Immunol. 156: 4570-4575; Roman ら (1997); 及びLipford ら (1997a). を
参照のこと。

【００５３】 前記ＩＳＳは、６塩基又は６塩基対より大きい任意の長さのであり、一般的に
配列５′−シトシン，グアニン−３′を含んで成り、好適には、１５塩基又は塩
基対より大きく更に好適には、長さに於いて２０塩基又は塩基対より大きい。当
業に周知であるように、５′−シトシン，グアニン−３′配列のシトシンはメチ
ル化されない。ＩＳＳは又、配列５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミジン，
ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′を含んで成りうる。ＩＳＳは又配列５′−プリン，プ
リン，Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｃ−３′を含んで成りうる。下に
ポリヌクレオチド配列を示したように、ＩＳＳは、（即ち１又は複数の）配列５
′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含んで成りうる。ある実施態様に於いて、ＩＳＳは、前
記配列５′−Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′（例えば５′−CG
TTCG−３′）を含んで成りうる。ある実施態様に於いて、ＩＳＳは、配列５′−
Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ，プリン，プリン−３′を含んで成り
うる。ある実施態様に於いて、ＩＳＳは、配列５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，
ピリミジン，ピリミジン−３′（例えば、５′−AACGTT−３′）を含んで成りう
る。

【００５４】 ある実施態様に於いて、ＩＳＳは、配列５′−プリン，Ｔ，Ｃ，Ｇ，ピリミジ
ン，ピリミジン−３′を含んで成りうる。

【００５５】 ある実施態様に於いて、ＩＳＳ−含有ポリヌクレオチドはおよそ（塩基又は塩
基対に於いて）次のいづれの長さに満たない：１０，０００；５，０００；２５
００；２０００；１５００；１２５０；１０００；７５０；５００；３００；２
５０；２００；１７５；１５０；１２５；１００；７５；５０；２５；１０。あ
る実施態様に於いて、ＩＳＳ含有ポリペプチドはおよそ（塩基又は塩基対に於い
て）次のいづれの長さを超える８；１０；１５；２０；２５；３０；４０；５０
；６０；７５；１００；１２５；１５０；１７５；２００；２５０；３００；３
５０；４００；５００；７５０；１０００；２０００；５０００；７５００；１
００００；２００００；５００００。代わって当該ＩＳＳは上限１０，０００；
５，０００；２５００；２０００；１５００；１２５０；１０００；７５０；５
００；３００；２５０；２００；１７５；１５０；１２５；１００；７５；５０
；２５；又は１０及び独立して選ばれた下限、８；１０；１５；２０；２５；３
０；４０；５０；６０；７５；１００；１２５；１５０；１７５；２００；２５
０；３００；３５０；４００；５００；７５０；１０００；２０００；５０００
；７５００、を持つ大きさの範囲のいづれかであり、ここに於いて当該下限は上
限に未たない。

【００５６】 ある実施態様に於いて、ＩＳＳは次のような配列のいずれかを含んで成る：

【化４】

【化５】 ある実施態様に於いて、免疫刺激化ポリヌクレオチドは配列

【化６】 を含んで成る。

【００５７】 ある実施態様に於いて、ＩＳＳは以下の配列のいづれかを含んで成る：

【化７】

【００５８】 ある実施態様に於いて、ＩＳＳは以下の配列のいづれかを含んで成る：

【化８】 ここに於いてＢは５−ブロモシトシンである。

【００５９】 ある実施態様に於いて、ＩＳＳは以下の配列のいづれかを含んで成る：

【化９】 ここに於いてＢは５−ブロモシトシンである。

【００６０】 他の実施態様に於いて、ＩＳＳは以下の配列のいづれかを含んで成る：

【化１０】

【化１１】

【化１２】 ここに於いてＢは５−ブロモシトシンであり； ここに於いてＢは５−ブロモシトシンである

【化１３】 及び ここに於いてＢは５−ブロモシトシンである。

【化１４】

【００６１】 ＩＳＳ及び／又はＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは修飾体を含みうる。ＩＳＳの
修飾体は当業界で周知のいづれかであり、限定されないが、３′−ＯＨ又は５′
−ＯＨ基の修飾体、ヌクレオチド塩基の修飾体、糖類成分の修飾体及び、リン酸
基の修飾体が挙げられる。このような多様な修飾体は下に記載されてある。

【００６２】 ＩＳＳは一本鎖又は二本鎖ＤＮＡ並びに一本鎖又は二本鎖ＲＮＡ又は他の修飾
されたポリヌクレオチドでありうる。ＩＳＳは１又は複数のパリンドローム領域
を含みもしくは含まず、パリンドロームは、上に記載したモチーフ又は当該モチ
ーフの範囲を超えて存在しうる。ＩＳＳは更なるフランキング領域を含んで成っ
て良くそのあるものは本明細書中で記述された。ＩＳＳは天然又は修飾化、非天
然塩基を含みうり、修飾化された糖類、リン酸、及び／又は終末を含む。例えば
、リン酸修飾体等には、限定はされないが、メチルホスホネート、ホスホロチオ
エート、ホストラミデート（架橋又は非架橋）、ホスホトリエステル及び、ホス
ホロジチオエートが挙げられ、いづれの組み合わせに於いて使用して良い。他の
非リン酸結合も又使用して良い。好適に、本発明のオリゴヌクレオチドは、ホス
ホロジチオエート骨格を含んで成る。２′−アルコキシ−ＲＮＡ−類似体、２′
−アミノ−ＲＮＡ−類似体、及び、２′−アルコキシ−又はアミノ−ＲＮＡ／Ｄ
ＮＡキメラ並びに他のような本明細書に記載され当業界に於いて周知の糖類の修
飾体は又作成され任意のリン酸修飾体と組み合わされて良い。塩基修飾体の例は
、限定されないが、ＩＳＳのシトシンのＣ−５及び／又はＣ−６に対する電子吸
引性成分（例えば、５−ブロモシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシ
トシン、５−イオドシトシン）の添加が挙げられる。

【００６３】 前記ＩＳＳは、当業界で周知の技術及び核酸合成装置、例えば限定されないが
、酵素的方法、化学的方法及びより大きなオリゴヌクレオチド配列の分解を使用
して合成できうる。例えばAusubelら (1987); 及びSambrookら（1989）を参照の
こと。酵素により集成された時、例えば各々のユニットは、Ｔ４ ＤＮＡ又はＲ
ＮＡリガーゼのようなリガーゼによりライゲーションできうる。米国特許第５，
１２４，２４６号。オリゴヌクレオチドの分解は、米国特許第４，６５０，６７
５号に例証されたような、ヌクレアーゼにオリゴヌクレオチドを曝露させること
を通じて達成できうる。

【００６４】 前記ＩＳＳは又、汎用のポリヌクレオチド単離手順を使用して単離できうる。
そのような手順は、限定されないが、共有のヌクレオチド配列を検出する為にゲ
ノム又はｃＤＮＡライブラリーへのプローブのハイブリダイゼーション、共有の
構造的な特性を見出す為に発現ライブラリーの抗体スクリーニング及び、ポリメ
ラーゼ連鎖反応による特異的な自然配列の合成等が挙げられる。

【００６５】 環状ＩＳＳは、組換え法による合成又は化学的に合成されることで、単離でき
うる。環状ＩＳＳが、単離又は組換え法により得られた場合、好適に当該ＩＳＳ
はプラスミドであろう。より小さな環状オリゴヌクレオチドの化学的な合成は、
刊行物中に記載のあるいづれの方法を使用してできうる。例えばGao ら (1995)
Nucleic Acids Res. 23: 2025-2029; 及びWangら (1994) Nucleic Acid Res. 22
: 2326-2333 を参照のこと。

【００６６】 オリゴヌクレオチド及び修飾したオリゴヌクレオチド作成の為の技術は当業界
で周知である。ホスホジエステル結合を含む天然ＤＮＡ又はＲＮＡは、一般的に
、適切なヌクレオシドホスホラミダイトを、３′末端で固相支持体に付着させた
成長オリゴヌクレオチドの５′−水酸基へ連続的に結合、それに続く中間体亜リ
ン酸トリエステルのリン酸トリエステルへの酸化により合成される。一度所望の
オリゴヌクレオチド配列が合成されると、当該オリゴヌクレオチドは支持体から
取り除かれ、前記リン酸トリエステルグループは、リン酸ジエステルへ脱保護さ
れ、そして前記ヌクレオシド塩基は、水性のアンモニア又は他の塩基を用いて脱
保護される。例えばBeaucage (1993)“Oligodeoxyribonucleotide Synthesis”i
n Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties (
Agrawal, ed.) Humana Press, Totowa, NJ; Warner ら (1984) DNA 3: 401 及び
米国特許第４，４５８，０６６号を参照のこと。

【００６７】 ＩＳＳは又リン酸−修飾オリゴヌクレオチドを含むことが出来る。修飾リン酸
結合又は非リン酸結合を含むポリヌクレオチドの合成も又当業界で周知である。
総覧の為にMatteucci (1997)“Oligonucleotide Analogs: an Overview”in Oli
gonucleotides as Therapeutic Agents, (D. J. Chadwick and G. Cardew, ed.)
John Wiley and Sons, New York, NYを参照のこと。本発明のオリゴヌクレオチ
ド中の糖又は糖アナログ成分に結合しうるリンの誘導体は、一リン酸、二リン酸
、三リン酸、アルキルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエー
ト等である。上記のリン酸アナログの調製及び、それらのヌクレオチド、修飾化
ヌクレオチド及びオリゴヌクレオチドへの組み込みはそれぞれ又、周知であり、
本明細書中で詳細に渡り記述する必要がないPeyrottes ら (1996) Nucleic Acid
s Res. 24: 1841-1848; Chaturvedi ら (1996) Nucleic Acids Res. 24: 2318-2
323; and Schultz ら (1996) Nucleic Acids Res. 24: 2966-2973 。例えば、ホ
スホロチオエートオリゴヌクレオチドの合成は、酸化段階が硫化反応段階に置き
換えられていることを除けば類似である。（Zon (1993)“Oligonucleoside Phos
phorothioates”in Protocols for Oligonucleotides and Analogs, Synthesis
and Properties (Agrawal, ed.) Humana Press, pp. 165-190 ）同様に、他のリ
ン酸アナログ、例えば、ホスホトリエステル（Millerら (1971) JACS 93: 6657-
6665）、Ｎ３′からＰ５′ホスホラミデート（Nelsonら (1997) JOC 62: 7278-7
287)非−橋状結合ホスホラミジエート（Jager ら (1988) Biochem. 27: 7247-72
46）及び、ホスホロジチオエート（米国特許第５，４５３，４９６号）の合成は
又記載がある。他のリンを基礎としない修飾化オリゴヌクレオチドも使用できう
る（Stirchakら (1989) Nucleic Acids Res. 17: 6129-6141）。ホスホロチオネ
ート骨格を有するオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステル骨格をもつオリゴヌ
クレオチドより更に免疫原性であり、ホストへ注射した後、分解への更なる耐性
を示す。J. Immunol. 141: 2084-2089; 及びLatimer ら (1995) Mol. Immunol.
32: 1057-1064。

【００６８】 本発明に於いて用いたＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、リボヌクレオチド（単
独又は主要な糖成分としてリボースを含んでいる）、デオキシリボヌクレオチド
（主要な糖成分としてデオキシリボースを含んでいる）を含んで成ることができ
、又当業界で周知であるように、修飾化した糖又は糖アナログを当該ＩＳＳ中に
組み込むことが出来うる。従って、リボース及び、デオキシリボースに加えて、
当該糖成分はペントース、デオキシペントース、ヘキソース、デオキシヘキソー
ス、グルコース、アラビノース、キシロース、リキソース及び、糖「アナログ」
シクロペンチルグループでありうる。当該ＩＳＳに於いて、好適に、リボース、
デオキシリボース、アラビノース又は２′−０−アルキルリボースのフラノシド
であり、当該糖は、α又はβアノマー配置にあるそれぞれの複環状塩基と接着で
きうる。糖修飾体は、限定されないが、２′−アルコキシ−ＲＮＡアナログ、２
′−アミノ−ＲＮＡアナログ及び２′−アルコキシ−又はアミノ−ＲＮＡ／ＤＮ
Ａキメラ等が挙げられる。これら糖類もしくは糖アナログの調製及び、それぞれ
複環状塩基（核酸塩基）へと結着されるような糖もしくはアナログであるそれぞ
れの「ヌクレオシド」は周知であり、そのような調製法がいづれの特異的な実施
例に属することを除いて、本明細書で記述する必要はない。糖修飾体は又、ＩＳ
Ｓの調製法に於いて、任意のリン酸修飾体により作成及び組み合しうる。

【００６９】 複環状塩基、又は核酸塩基はＩＳＳ中に組み込まれており、天然の主要なプリ
ン及びピリミジン塩基（即ち、先に説明したような、ウラシル、チミン、シトシ
ン、アデノシン及びグアニン）並びに、前記主要な塩基の自然発生及び合成の修
飾体でありうる。

【００７０】 当業者は、様々な複環状塩基及び様々な糖成分（及び糖アナログ）を含んで成
る、多数の「合成」非−天然、ヌクレオチドが、当業界に於いて有効であること
及び、本発明の他の基準が満たされている限り、ＩＳＳは、天然の核酸の主要な
５つの塩基成分以外の１又は複数の複環状塩基を含むことができると気付かされ
るであろう。しかしながら、好適には、ＩＳＳ中の複環状塩基は、限定されない
が、ウラシル−５−イル，シトシン−５−イル，アデニン−７−イル，アデニン
８−イル，グアニン−７−イル，グアニン−８−イル，４−アミノピルロロ〔２
．３−ｄ〕ピリミジン−５−イル，２−アミノ−４−オキソピロロ〔２，３−ｄ
〕ピリミジン−５−イル，２−アミノ−４−オキソピルロロ〔２．３−ｄ〕ピリ
ミジン−３−イルグループ等が挙げられ、ここに於いてプリンは、当該ＩＳＳの
糖成分に、９−位を介して結合されており、ピリミジンは１−位を介して、ピル
ロロピリミジンは７位を介して、及び、１−位を介してピラゾロピリミジンに結
合されている。

【００７１】 ＩＳＳは、例えば、共有国際特許出願ＷＯ ９９／６２９２３に共有した記載
の１以上の修飾塩基を含んで成る。本明細書中で用いたように、用語「修飾され
た塩基」は、「シトシンアナログ」と同意語である。同様に、「修飾された」ヌ
クレオシド又はヌクレオチドは本明細書中にてヌクレオシド又はヌクレオチド「
アナログ」と同意語であると定義される。塩基修飾体の例は、限定されないが、
ＩＳＳのシトシンのＣ−５及び／又はＣ−６に対する電子吸引成分の付加等が挙
げられる。好適に当該電子吸引成分はハロゲンである。そのような修飾されたシ
トシンは、限定されないが、アザシトシン、５−ブロモシトシン、ブロモウラシ
ル、５−クロロシトシン、塩素化シトシン、シクロシトシン、シトシンアラビノ
シド、５−フルオロシトシン、フルオロピリミジン、フルオロウラシル、５，６
−ジヒドロシトシン、５−ヨードシトシン、ヒドロキシ尿素、ヨードウラシル、
５−ニトロシトシン、ウラシル及び任意の他のピリミジンアナログ又は修飾され
たピリミジン等が挙げられる。

【００７２】 塩基修飾ヌクレオチドの調製及び、前記塩基修飾ヌクレオチドを前駆体として
使用する修飾されたオリゴヌクレオシドの合成は、例えば米国特許第４，９１０
，３００号、４，９４８，８８２号及び５，０９３，２３２号に於いて記載があ
る。これら、塩基修飾ヌクレオシドは、それらが、化学的合成によってオリゴヌ
クレオチドの末端又は内側の位置に組み込まれうるように設計された。そのよう
な塩基修飾ヌクレオシドであって、オリゴヌクレオチドの末端もしくは内側の位
置に存在するものは、ペプチドもしくは抗原の付着の為の部位として働く糖成分
に於けるヌクレオシドの修飾は又記載（限定しないが、例えば、米国特許第４，
８４９，５１３号、第５，０１５，７３３号、第５，１１８，８００号、第５，
１１８，８０２号）があり同様に使用されうる。

【００７３】 本発明の方法に於いて使用されるＩＳＳは、ＩＳＳミクロキャリアー複合体と
して生産されうる。ＩＳＳミクロキャリアー複合体は、ミクロキャリアー（ＭＣ
）に結合するＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを含んで成る。ＩＳＳ−ＭＣ複合体は
ミクロキャリアーの表層に結合した（即ち当該ＩＳＳは当該ＭＣ中で被包されて
いない）、ミクロキャリアーへ吸着された（例えばＰＬＧＡビーズへ吸着された
）、又はＭＣに被包された（例えばリポソーム内へ組み込まれた）ＩＳＳを含ん
で成る。

【００７４】 微小粒子（ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）ビーズ）に結合したＩＳＳ−含有
オリゴヌクレオチドはｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫活性の活性を以前から示している
（Liang et al., (1996), J. Clin. Invest. 98: 1119-1129）。しかしながら、
最近の結果は、金、ラテックス及び磁性粒子（ｍａｇｎｅｔｉｃ ｐａｒｔｉｃ
ｌｅｓ）に結合したオリゴヌクレオチドは、ＩＳＳ含有オリゴヌクレオチドに応
答して増殖する７ＴＤ１細胞の増殖を刺激することに於いて、活性は無いと示し
ている（Manzel et al., (1999), Antisense Nucl. Acid Drug Dev. 9: 459-464
）。

【００７５】 ミクロキャリアーは純水中で溶解せず、約５０−６０μｍ未満のサイズであり
、好適には約１０μｍ未満、更に好適には、約１０nmから１０μｍ、２５nmから
約５μｍ、５０nmから約４．５μｍ又は１．０μｍから約２．０μｍのサイズで
ある。ミクロキャリアーはいづれの形、例えば球形、楕円形、棒状等でありうる
が、球形のミクロミクロキャリアーが通常好まれる。好適なミクロキャリアーは
約５０nm，２００nm，１μｍ，１．２μｍ，１．４μｍ，１．５μｍ，１．６μ
ｍ，１．８μｍ，２．０μｍ，２．５μｍ又は４．５μｍのサイズである。ミク
ロキャリアーの「サイズ」は一般的に「設計サイズ」又は、説明書に記載された
粒子の意図されたサイズである。サイズは、平均もしくは最大直径のような寸法
を直接測って良く、又、ろ過スクリーニングアッセイ（ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ
ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｓｓａｙ）のような、間接的なアッセイにより決定され
て良い。ミクロキャリアーサイズの直接的な測定は、慣用に顕微鏡、一般的には
光学顕微鏡又は走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）により、既知の粒子サイズとの比較
又は、ミクロメーターに対する比較により、実行される。製造過程の間、大きさ
に於いてわずかな変動は生じるので、もし測定が、ミクロキャリアーは、一定の
測定値の±５０％であると示すなら、当該ミクロキャリアーは一定のサイズにあ
ると考えられる。サイズ特性は又動的光散乱により決定されうる。代わってミク
ロキャリアーサイズは、ろ過スクリーニングアッセイにより決定されうる。粒子
の９７％以上が、一定の大きさの「スクリーン型」膜（即ち、膜内に引っ掛かっ
た粒子を保持する「深いフィルター（ｄｅｐｔｈ ｆｉｌｔｅｒ）」とは違い、
ポリカーボネート又はポリエーテルスルホン膜のように、保持された粒子が当該
膜の表層上にある膜）を通過するならミクロキャリアーはある一定のサイズに満
たないであろう。もしミクロキャリアーの約９７％以上が、一定のサイズのスク
リーン型の膜により保持されれば、ミクロキャリアーはある一定の大きさを超え
るだろう。即ち、サイズ約１０μｍから約１０nmにある９７％以上のミクロキャ
リアーは、孔１０μｍのスクリーンフィルターを通過し、１０μｍスクリーンフ
ィルターにより保持される。

【００７６】 先の論議が示すように、ミクロキャリアーに対するサイズもしくはサイズの範
囲についての言及は、暗黙のうちに、一定のサイズ及び／又はサイズ範囲の近似
変化及び近似値を含む。これは、用語「約」の使用により、サイズ及び／又はサ
イズ範囲を説明する時、並びにサイズ及び／又はサイズ範囲が厳密であることを
意味しない「約」を伴わないサイズ及び／又はサイズ範囲の説明の時反映される
。

【００７７】 ミクロキャリアーは、固体状態（例えば、ポリスチレンビーズ）又は液体状態
（例えば、油及び水の浮濁液中のリポソーム、ミセル、もしくは、油滴）であっ
て良い。液体状態のミクロキャリアーは、リポソーム、ミセル、油滴及び他の脂
質又は油を基とする粒子である。ある好適な液体状態のミクロキャリアーは、水
中の油乳濁液内の油滴である。好適に、水中の油乳濁液は、スクアレンのような
生物学的に適合する置換物を含んで成るミクロキャリアーとして用いられる。通
常液体状態のミクロキャリアーは非生分解性であると考えられるが、生分解性の
液体状態にあるミクロキャリアーは、液体状態の製剤に於いて１又は複数の生分
解性のポリマーの組み込みにより生産されて良い。他の好ましい実施態様に於い
て、当該ミクロキャリアーは、水性のpHバッファー中で、スクアレン、ソルビタ
ン、トリオレイン酸、ＴＷＥＥＮ８０（登録商標）により調製された水中オイル
浮濁液中の油滴である。

【００７８】 ＩＳＳ−ミクロキャリアー複合体中で使用する為の固体状態のミクロキャリア
ーは、生分解性の材料もしくは非生分解性の材料からできうり、アガロースもし
くは、修飾されたアガロースミクロキャリアーを、例または例外として良い。有
用な固体状態の生分解性ミクロキャリアーは、限定されないが、例えば：ポリ（
乳酸）、ポリ（グリコール酸）及びこれらの共重合体（ブロック共重合体等）、
並びにポリ（乳酸）及びポリ（エチレングリコール）の共重合体のような生分解
性のポリエステル；例えば３，９−ジエチルイデン−２，４，８，１０−テトラ
オキサスピロ〔５．５〕アンデカン（ＤＥＴＯＳＵ）を基とするポリマーのよう
なポリオルトエステル；セバジン酸を基とするポリ（無水物）ポリマー、ｐ−（
カルボキシフェノキシ）プロパン、又はｐ−（カルボキシフェノキシ）ヘキサン
のようなポリ無水物；グリシン又はアラニンのようなアミノ酸を組み込んだセバ
シン酸由来のモノマー（即ち、アミノ末端の窒素を介してイミド結合によりセバ
シン酸に結合した）を基とするポリ無水物ポリマーのような、ポリ無水物イミド
；ポリ無水物エステル；ポリフォスファゼン、特にカルボン酸基の発生を介して
ポリマー骨格の分解を触媒することが出来る、加水分解−感受性エステル基を含
むポリ（フォスファゼン）（Schacht et al. (1996) Biotechnol. Bioeng. 1996
: 102 ）；及びポリ（乳酸−共−リジン）のようなポリアミド等が挙げられる。
ミクロキャリアー作成に対して適切な、様々な非生分解性の材料は又周知であり
、限定されないが、ポリスチレン、ポリエチレン、ラテックス、金、及び、強磁
性又は常磁性材料等が挙げられる。固体状態のミクロキャリアーは、ＩＳＳを結
合する為に使用する１又は複数の成分を、例えばアミノ反応性架橋試薬を使用し
て共有結合する為のアミノ基の付加により組み込む為に共有結合的に修飾されて
良い。

【００７９】 本発明のＩＳＳミクロキャリアー複合体は、共有的又は非共有的に結合されう
る。共有結合したＩＳＳ−ＭＣ複合体は直接結合又は１以上の原子団（一般的に
架橋試薬の残基）の架橋成分により結合されうる。静電的相互作用により又は塩
基対形成（例えばミクロキャリアーに結合する相補的なオリゴヌクレオチドとの
ＩＳＳのある部分以上の塩基対形成により）により未修飾のＩＳＳは、非共有結
合性のＩＳＳ−ＭＣ複合体の形成の為に使われるが、ＩＳＳは、ＭＣへの結合を
可能又は増加させる為に（例えば、共有架橋結合の為に遊離スルフリドリル基の
組み込み又は疎水結合の為の脂質、ステロイド、コレステロールのようなステロ
ール及びテルペンのような疎水性成分の付加により）修飾されて良い。ＩＳＳ含
有ポリヌクレオチドは、固体状態ミクロキャリアー又は他の化学的な成分に対し
て当業界周知である汎用の技術を用いてＩＳＳ−ＭＣ複合体の形成を助長する為
に結合されうる。（汎用の技術は）例えば、入手可能なヘテロ２官能性架橋試薬
（例えば遊離のスルフリドリル基を含む為にアミノ誘導化ミクロキャリアー及び
遊離スルフヒドリルを結合させる為に修飾されたＩＳＳを共有結合する為のスク
シニル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート又
はそのスルホ−誘導体）の使用又は水中油乳濁液中の油滴のような疎水性ミクロ
キャリアーに対する結合を助長する為にコレステロールのような化合物の添加（
例えばGodardらの方法により、 (1995) Eur. J. Biochem. 232: 404-410 ）によ
り（行われる）。代わって、当業界で周知であるが、修飾されたヌクレオシド又
はヌクレオチドは、ＩＳＳに於いて、末端又は内側の位置で組み込まれうる。こ
れらは、ブロック化した官能基を含むことが出来、脱ブロック化した時、ミクロ
キャリアー及び、ミクロキャリアーに対する結合を助長する成分に対して存在又
は結合しうる様々な官能基と反応する。結合対を利用する非共有的に結合したＩ
ＭＭ−ＭＣ複合体の所定の実施態様（例えば抗体及びその同族の抗原もしくはビ
オチン及びストレプトアビジンもしくはアビジン）は、ある結合対のメンバーが
当該ＩＳＳに結合し、ミクロキャリアーは他の結合対のメンバーにより誘導化さ
れる（例えばビオチン化ＩＳＳとストレプトアビジン−誘導化ミクロキャリアー
は共有結合化ＩＳＳ−ＭＣ複合体を形成する為に結合される）。

【００８０】 静電的な結合により結合する非共有結合のＩＳＳ−ＭＣ複合体は、一般的にポ
リヌクレオチド骨格により高い負の電荷を活用する。従って、非共有的に結合し
たＩＳＳ−ＭＣ複合体に於いて使用する為のミクロキャリアーは一般的に、生理
学的なpH（例えば約６．８−７．４）で、正に電荷を帯びている。当該ミクロキ
ャリアーはもとから正の電荷を有して良いが、通常には正の電荷を有していない
ミクロキャリアーは、正に電荷を帯びるよう誘導又は一方で修飾されて良い化合
物から作成される。例えば、ミクロキャリアーを作成する為に用いられるポリマ
ーは、第一アミンのような正に電荷を帯びた基を付加する為に誘導化されて良い
。代わって、正に電荷を帯びた化合物は、生じたミクロキャリアー粒子に対して
正の電荷を付与する為に、共重合体を製造する間、ミクロキャリアーの製剤中に
組み込まれて良い（例えば、正に電荷を帯びた界面活性剤がポリ（乳酸）／ポリ
（グリコール酸）共重合体を製造する間使用されて良い）。

【００８１】 固体状態の微小球は、当業界で周知の技術を用いて調製される。例えば、それ
らは、浮化−溶媒抽出／蒸発技術（emulsion-solvent extraction/evaporation
technique ）により調製できうる。一般的に、本技術に於いて、生分解性ポリマ
ー、例えばポリ無水物、ポリ（アルキル−α−シアノアクリレート）及びポリ（
α−ヒドロキシエステル）、例えばポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ
（Ｄ，Ｌ−乳酸−共−グリコール酸）及びポリ（カプロラクトン）は、浮濁液の
分散層（ＤＰ）を構成する為にメチレンクロライドのような適切な有機溶媒中で
溶解される。ＤＰは、溶解した界面活性剤、例えば、ポリビニルアルコール（Ｐ
ＶＡ）又はポリビニルピロリドンを含む親水性の連続層（ＣＰ）の過剰の体積へ
の高速ホモジナイゼーションにより浮濁化される。ＣＰ中の界面活性剤は、分離
され、サイズが最適化された乳濁滴の形式を保証する。次いで、当該有機溶媒は
、ＣＰ中から抽出され、その後系の温度を上昇することにより蒸発される。次い
で、当該固体状の微細粒子は、遠心もしくはろ過により分離され、４℃で保存さ
れる前に、例えば凍結乾燥もしくは真空の適用により乾燥される。

【００８２】 一般的に、陽イオン性の微小球を調製する為にカチオニック脂質又はポリマー
、例えば１，２−ジオレオイル−１，２，３−トリメチルアンモニオプロパン（
ＤＯＴＡＰ）、セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）又はポリク
ジンが、ＤＰ又はＣＰに、これらの層に於ける溶解度に従い添加される。

【００８３】 乾燥された微小球の平均サイズ、サイズ分布及び表面電荷のような物理−化学
的特性が決定されうる。サイズ特性は、例えば、動的光散乱技術により決定され
、当該表面電荷はゼータ電位を測定することにより決定された。

【００８４】 一般的に、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、ＩＳＳ及び当該粒子の４℃での一
夜に渡る水性のインキュベーション（ａｑｕｅｏｕｓ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ）
により、陽イオン性の微小球上に吸着される。微小球は、ＩＳＳ結合前後のサイ
ズ及び表面電荷により特徴化される。次いで本明細書中に記載されたように、選
定のバッチを活性について評価して良い。

【００８５】投与 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、呼吸器系のウィルスに対して曝露される前、
間及び／又は後に投与されて良い。ＩＳＳポリヌクレオチドも又呼吸器系のウィ
ルスによる感染の前、間及び／又は後に投与されうる。ＩＳＳポリヌクレオチド
は又、呼吸器系のウィルス感染症の症状の発生の前後に投与されて良い。従って
、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの投与は、ウィルスに対する曝露、感染及び／又
は症状の発症に関して、様々な時間にされうる。更に１又は複数の適用があって
良い。もし、当該ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドが、多重な機会で投与されるなら
、当該ＩＳＳは、臨床医により選択された任意のスケジュール例えば、毎日、２
日おき、３日おき、４日おき、５日おき、６日おき、一週間おき、２週間おき、
月に一回又はより長い間隔（治療の経過の間、同様性を保ちうる又は保たない）
で投与される。多重な投与がされた場合、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、２，
３，４，５，６，７，８，９，１０又は以上の別々の適用で与えられて良い。一
般的であるが、必須ではなく、約３日以上の間隔は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチ
ドの作用を可能にするに至り必要である。

【００８６】 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドが、ウィルスへの感染の危険にある（即ち感染前
の）個体に対して投与される時、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、好適にウィル
スへ曝露する前約１４日未満、好適にはウィルスに曝露する前約１０日未満、最
も好適には、ウィルスに曝露する前約７日未満、尚更に好適にはウィルスに曝露
する前約５日未満に投与される。ある好適な実施態様に於いて、ＩＳＳ−含有ポ
リヌクレオチドは、ウィルスに曝露する前約３日で投与される。

【００８７】 更なる実施態様に於いて、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、症状が現われる前
、呼吸器系のウィルスに曝露した後に投与される。好適に、当該ＩＳＳ含有ポリ
ヌクレオチドは、曝露の後約３日未満、更に好適には約１日未満、曝露後１２時
間、６時間又は２時間で、もし曝露の時間が既知又は疑しかったなら、投与され
る。

【００８８】 他の実施態様に於いて、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、呼吸器系のウィルス
感染症の１以上の症状の現れの後投与される。好適には、ＩＳＳ含有ポリヌクレ
オチドは、呼吸器系のウィルス感染症の症状に現れに続いて、約２８，２１，１
４，７，５又は３日以内に投与される。しかしながら、症状を示している感染し
た個体で既に受けた、１又は複数の治療の経過を経ようとする者もある。このよ
うな個体又は、それらの症状の重要性を評価できない個体に於いて、ＩＳＳ含有
ポリヌクレオチドは、引き続く感染症のいづれの時点で投与されて良い。

【００８９】 更に、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを使用する治療は又、他の治療法又は、「
第一線の（ｆｉｒｓｔ ｌｉｎｅ）」治療の失敗の後使用される「第二線の（ｓ
ｅｃｏｎｄ ｌｉｎｅ）」治療と共に使用されて良い。呼吸器系のウィルス感染
症の為の治療法は、当業界で周知である。

【００９０】 ＩＳＳポリヌクレオチドは、乾燥粉体、半固体又は液体製剤のような、当業界
で周知の任意の形態に於いて製剤化されている。非経口の投与について、好適に
ＩＳＳポリヌクレオチドは、固体又は半固体の製剤も又許容されるが、液体製剤
に於いて適用され、特に、ＩＳＳポリヌクレオチドは、徐放する貯蔵形態に於い
て製剤化される。ＩＳＳポリヌクレオチドは、半固体製剤は時として有用であり
うるが、一般的に経口投与の為の液体又は乾燥粉体形態に於いて製剤化される。

【００９１】 ＩＳＳポリヌクレオチド製剤は、当業界で周知であるような、更なる成分例え
ば、塩、バッファー、バルキング試薬、浸透剤、抗酸化物質、洗浄剤、界面活性
剤及び医薬的に許容できる補形薬を含んで良い。一般的に、注射の為に、液体Ｉ
ＳＳポリヌクレオチド製剤は、ＵＳＰ水中で作成され、滅菌され、pH約６．８か
ら７．５のような生理学的に許容できるpHに等張及びpHを緩衝される。

【００９２】 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、リポソーム、油／水浮濁液又は徐放する貯蔵
製剤のような運搬賦形剤（ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｖｅｈｉｃｌｅｓ）中で製剤化さ
れうる。そのような形体に於いてポリヌクレオチドを製剤化する方法は、当業界
で十分周知である。

【００９３】 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド製剤は又、抗原性補強剤及び免疫活性化サイトカ
インのような、当業界でよく知られた免疫調節試薬を含みうる又は含まない。

【００９４】 適切な投与量の範囲又は有効な量は、ウィルス感染症の、所望された症状の削
減及び／又は抑制を供し、数多くの因子、特に呼吸器系のウィルス、ポリヌクレ
オチドのＩＳＳ配列、ポリヌクレオチドの分子量及び投与の経路等に依頼するも
のである。一般に投与量は、症状の深刻さ、患者等の病歴のような、当業界で周
知の様々なパラメーターに従って、医師又は他のヘルスケアの専門家により選択
される。一般的に、約２０塩基のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドについて、投与量
の範囲は、例えば、独自に選択された下限約０．１，０．２５，０．５，１，２
，５，１０，２０，３０，４０，５０，６０，８０，１００，２００，３００，
４００、又は５００μｇ／kgから、下限より大きい独自に選択された上限約６０
，８０，１００，２００，３００，４００，５００，７５０，１０００，１５０
０，２０００，３０００，４０００，５０００，６０００，７０００，８０００
，９０００、又は１０，０００μｇ／kgに至る。例えば、投与はおよそ以下のい
づれかで良い：０．１から１００μｇ／kg、０．１から５０μｇ／kg、０．１か
ら２５μｇ／kg、０．１から１０μｇ／kg、１から５００μｇ／kg、１００から
４００μｇ／kg、２００から３００μｇ／kg、１から１００μｇ／kg、１００か
ら２００μｇ／kg、３００から４００μｇ／kg、４００から５００μｇ／kg、５
００から１０００μｇ／kg、５００から５０００μｇ／kg又は５００から１０，
０００μｇ／kg。一般的に、投与の非経口的な経路は、感染した組織に対する更
なる直接的な適用と比較して成長する長さのＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを投与
するので、ＩＳＳのより高い投与量を要求する。

【００９５】 ＩＳＳを含んで成るポリヌクレオチドは、全身（例えば非経口的）又は局所（
例えば局所的）投与により投与されて良い。

【００９６】 ある実施態様に於いて、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド（群）は、呼吸器系の粘
膜（例えば鼻の通路又は肺）のような感染部位で局所的に投与される。鼻咽頭の
及び肺の投与経路は、限定されないが、鼻の、吸息の、気管支を通る及び肺胞を
通る経路等が挙げられる。従って、当該ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、エアロ
ゾル、噴霧化した液体又は粉体の吸息により投与されうる。ＩＳＳ含有組成物の
吸息による投与に適する装置は、限定されないが、ネブライザ、アトマイザ、気
化器及び定量噴霧吸入器である。ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド（群）を含んで成
る製剤を含むリザーバーを満たされる又は使用するネブライザ、アトマイザ、気
化器及び定量噴霧吸入器は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド（群）の吸入運搬に於
いて使用する為に様々な装置の１つである。呼吸器系の粘膜へ運搬する他の方法
は例えば、鼻滴による液体製剤の運搬等である。

【００９７】 他の実施態様に於いて、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは非経口的に投与される
。投与の非経口的な経路は、限定されないが、皮膚を介する、粘膜を介する及び
直接注射等が挙げられる。注射による非経口的な投与は、限定されないが、例え
ば、静脈内の（ＩＶ）、腹腔内の（ＩＰ）、粘膜内の（ＩＭ）、皮下の（ＳＣ）
及び真皮の（ＩＤ）経路等いづれの非経口的な注射経路である。皮膚を介し及び
粘膜を介する投与は、例えば、キャリアー（例えば、ジメチルスルホキシド、Ｄ
ＭＳＯ）の含有により、電気的刺激（例えばイオン浸透法）又は、これらの組み
合わせにより達成されうる。様々な装置は皮膚投与の為に有用であり、本発明に
従い用いられる。

【００９８】 気道の呼吸器系のウィルス感染細胞の為に、ＩＳＳポリヌクレオチドを気道へ
運搬する経路、例えば吸息及び鼻の内の運搬（先に議論した）は、通常そのよう
な経路を通過する運搬は投与の非経口的、全身的な経路とみなされるが、投与の
全身的な経路よりむしろ、投与の局所経路とみなされる。

【００９９】 ＩＶ，ＩＰ，ＩＭ及びＩＤ投与は、ボーラス又は注入投与により行われて良い
。ＳＣ投与について、投与は、ボーラス、注入もしくは、移植可能な装置例えば
、移植可能な小ポンプ（例えば浸透圧又は機械的なミニポンプ）もしくは徐放移
植片による投与でありうる。ＩＳＳポリヌクレオチド（群）は、又ＩＶ，ＩＰ，
ＩＭ，ＩＤ、又はＳＣ投与に適した徐方製剤中で運搬される。好適に吸息による
投与は運搬がネブライザの使用を通じて適成されうる注入に類似するが、不連続
の投与（例えば定量吸入噴霧器を介して）に於いて達成されうる。皮膚を介す及
び粘膜を介する経路を介する投与は、連続又は拍動性であって良い。

【０１００】 呼吸器系の合胞体ウィルス（ＲＳＶ） もし呼吸器系のウィルスがＲＳＶならば、好適に投与（少なくとも第１投与）
は、ウィルスに曝露する前約１０日未満、好適に約７日未満、好適に約３日で行
う。更に好適に、投与は、鼻及び／又は気管支の通路に対するエアロゾルの投与
のように、局所的である。ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ
−３′を含んで成る。好適に、用いられるＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、配列
５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジンＣ，Ｇ−３′更に好適
に５′−AACGTTCG−３′を含んで成り、及び更に好適に配列

【化１５】 を含んで成る（又はから成る）。

【０１０１】評価 ある実施態様に於いて、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの投与は、ＲＳＶウィル
ス感染症のような呼吸器系のウィルス感染症の１又は複数の症状に於いて、予防
、緩和、及び／又は改善をもたらす。予防、緩和又は改善の的確な形態は、特定
の呼吸器系のウィルスに従属するだろう。ある実施態様に於いて、ＩＳＳ含有ポ
リヌクレオチドの投与は、ウィルスの力価に於ける減少をもたらす（力価の減少
はウィルス感染症の停滞を示す）。他の実施態様に於いて、ウィルス感染症の持
続時間は減少される。他の実施態様に於いて、ウィルス感染が抑制され、それは
、例えば限定されないが１又は複数の症状及びウィルス力価等のいづれの１又は
複数のパラメーターにより示されて良い。

【０１０２】 感染症の症状は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの前及び／又は後個体もしくは
臨床医により評価されて良い。呼吸器系のウィルス感染症の鼻炎、鼻の粘炎の生
産、咳の深刻さ、筋肉の痛み、体温の上昇及び他の症状は、当業界で周知である
簡素な試験及び／又は測定を使用し簡単に測定されうる。

【０１０３】 ウィルス力価は生物学的な試料中で当業界の標準的な方法を使用して評価され
うる。ウィルスの核酸のレベルは当該試料から核酸を単離すること及び、ウィル
スのポリヌクレオチド配列をプローブとして使用するブロット解析又はＰＣＲ解
析により評価されうる。他のアッセイは当該試料に於いてウィルス粒子の試験で
ある。他のアッセイはプラーク形成単位（ＰＦＵ）について行われる。他のアッ
セイはウィルスが誘導した、実施例に於いて記述した合胞体の形成のような、ウ
ィルス誘導細胞変性効果（ＣＰＥ）を測定する。ウィルス粒子の程度もしくは相
当量は、感染した組織もしくは粘膜の分泌（ｍｕｃｏｓａｌ ｄｉｓｃｈａｒｇ
ｅ）のような感染したいづれの領域から測定されうる。試料が液体である時、ウ
ィルス力価は、単位体積当りのウィルス又はウィルス粒子の数（例えば感染粒子
、プラーク形成単位、感染用量、又は中央値組織培養感染用量（ＴＣＩＤ₅₀））
のある指標に於いて算定される。ある固体試料、例えば組織試料に於いて、ウィ
ルス力価は単位重量当りのウィルス粒子に於いて算定される。減少量は、（例え
ば、動物、臨床的研究に基づいた）未治療の感染症を示す、見積った力価及び／
又は早い時点で測定した力価と治療後測定したウィルス力価を比較することによ
り示される。

【０１０４】 本発明のキット 本発明は、本発明の方法を実行する為のキットを提供する。従って、様々なキ
ットが供される。当該キットは以下に続く１又は複数いづれの為に使用されて良
い（従って及び、以下に続く１又は複数の用途の為の教示を含んで良い）。呼吸
器系のウィルスにより曝露される危険にある、曝露した、又は感染した個体に於
いて、呼吸器系のウィルス感染症の症状の症度を削減すること；呼吸器系のウィ
ルスにより曝露される危険にある、曝露した又は感染した個体に於いて感染症を
抑えること；呼吸器系のウィルスにより曝露される危険にある、曝露した又は感
染した個体に於いて呼吸器系のウィルス感染症の症状を予防すること；呼吸器系
のウィルスにより曝露される危険にある、曝露した又は感染した個体に於いて呼
吸器系のウィルス感染症の症状の進展を遅延すること；呼吸器系のウィルスによ
り曝露される危険にある、曝露した又は感染した個体に於いて呼吸器系のウィル
ス感染症の持続時間を削減すること。当業界に於いて理解されるように、いづれ
の１又は複数のこれらの用途は、呼吸器系のウィルス感染症を治療すること又は
予防することを指示する説明書中に包含されたであろう。

【０１０５】 本発明のキットは、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド及び一連の説明書を含んで成
る１又は複数のコンテナを含んで成り、意図した治療（例えば、呼吸器系のウィ
ルスにより、曝露される危険にある、曝露した又は感染した個体に於いて、呼吸
器系のウィルス感染症の症状の症度を軽減すること、呼吸器系のウィルスにより
、曝露される危険にある、曝露した又は感染した個体に於いて感染症を抑制する
こと、呼吸器系のウィルスにより曝露される危険にある、曝露した又は感染した
個体に於いて、呼吸器系のウィルス感染症の症状を予防すること、呼吸器系のウ
ィルスにより曝露される危険にある、曝露した又は感染した個体に於いて、呼吸
器系のウィルス感染症の症状の進展を遅延すること、及び／又は、呼吸器系のウ
ィルスにより曝露される危険にある、曝露した又は感染した個体に於いて、呼吸
器系のウィルス感染症の持続時間を削減する）に対するＩＳＳ含有ポリヌクレオ
チドの使用及び量に関して一般的に、教示を含む電子的に保存する媒体（例えば
磁気ディスク又は光ディスク）である書かれた説明も又許容できる。当該説明書
は、一般的に意図した治療の為の投与量、投与計画及び投与の経路についての情
報等を含むキットに含まれた。ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドのコンテナは、単位
投与量バルク包み（ｂｕｌｋ ｐａｃｋａｇｅ）（例えば複合投量バイアル）又
はサブユニット投量（ｓｕｂ−ｕｎｉｔ ｄｏｓｅｓ）であって良い。

【０１０６】 本発明のキットは、呼吸器系のウィルス（群）由来のウィルス抗原を含むいづ
れの包み又はコンテナを含んでおらず、当該キットは治療に使用することを意図
された。例えば、ＲＳＶの予防、抑制、改善又は治療を意図するキットに於いて
、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを含んで成るコンテナも、キット中にＲＳＶ由来
のウィルス抗原を含むコンテナいづれもない。

【０１０７】 前記キットのＩＳＳ含有ポリヌクレオチド成分は、いづれの都合に於いて、適
切なパッケージングで包まれうる。例えば、もし、当該ＩＳＳが凍結乾燥製剤な
ら、薬剤が、弾性のあるストッパー（ｒｅｓｉｌｉｅｎｔ ｓｔｏｐｐｅｒ）を
通じて流体を注射することにより、容易に再構築されうる。弾性のあるストッパ
ーを有するバイアルが通常使用される。非弾性の、覆い（例えば、密閉ガラス）
を取り除くことができる、又は、弾性のあるストッパーを有するアンプルは、最
も便利に、ＩＳＳの注射形体に対して使われる。又充填済注射器は、ＩＳＳ含有
ポリヌクレオチドの液体製剤により当該キットが満たされた時、使われうる。当
該キットは、適切な充填法に於いて、局所的な製剤の為に軟膏中にＩＳＳを含ん
で良い。又、企図したものは、吸入器、鼻へ投与する装置（例えばアトマイザ）
のような特異的な装置、又は、ミニポンプもしくは皮膚を介する投与装置のよう
な注入装置との組み合わせに於いて使用する為のパッケージングである。

【０１０８】 上で述べたように、本明細書中で記載のあるいづれのＩＳＳ含有ポリヌクレオ
チドが使用されて良く、例えばそのような以下のいづれのＩＳＳ：配列５′−シ
トシン，グアニン−３′，配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′、配列５′−Ｃ，Ｇ，ピ
リミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′、配列５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピ
リミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′、配列５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピ
リミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｃ−３′；配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１；配列５′
−プリン，プリン，Ｂ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン−３′（ここに於いてＢは
５−ブロモシトシンである）又は配列５′−プリン，プリン，Ｂ，Ｇ，ピリミジ
ン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′（ここに於いてＢは、５−ブロモシトシンである
）配列を含んで成る任意のポリヌクレオチドである。

【０１０９】 以下の実施例は、限定ではないが、本発明を例示する為に用意された。

【０１１０】 実施例実施例１：呼吸器系のウィルスに対する動物モデル及び実験方法 ＲＳＶ感染症に対するラットモデル及びＩＳＳ投与 これらの研究に於いて、両方の性の５０−１００ｇ及び４−１２週齢コットン
ラット（シグモダンヒスピディス（Ｓｉｇｍｏｄｅｒｎ ｈｉｓｐｉｄｉｓ））
を用いた。全ての動物は、１９８４年にSmall Animal Section of the Veterina
ry Research Branch, Devision of Research Services, National Institute of
Health から得た２組のコットンラットの子孫である。

【０１１１】 ＲＳＶ株Ａ２はATCC（ＡＴＣＣ ＶＲ２６）から購入した。このウィルスの有
効株はWydeら (1995) Pediatr. Res. 38: 543-550 に詳細な記載があるように、
調製した。ＲＳＶ試験の為に試験したＩＳＳ配列は、

【化１６】 （ホスホロチオエート）であった。コントロールで、用いた非ＩＳＳ配列は

【化１７】 （ホスホロチオエート）及び

【化１８】 （ホスホロチオエート）、並びにＰＢＳであった。

【０１１２】ＲＳＶウィルス力価に対するアッセイ ウィルスプール及び肺の洗浄流体（Ｌ．Ｆ）中のＲＳＶレベルは、以前に詳細
な記述（Wyde et al. 1995）滅菌９６ウェル、平底組織培養プレート（Ｆａｌｃ
ｏｎ３０７２）、一連の３倍の希釈及び２％ ＦＣＳ−ＭＥＮを用いて決定され
た。これらのアッセイプレートに於いて当該ウェルは、合胞体の形成等、ウィル
ス誘導細胞変性効果（ＣＰＥ）について観察した。繰り返しの列のウィルス誘導
ＣＰＥを示している最後のウェルに於ける希釈数の決定の後、平均ウィルス力価
を、Karber, Rhodes and Van Rhodes and Van Rooyen (1953) Textbook of Viro
logy (2nd ed. Williams and Wilkins pp 66-69 ）の方法を用いて算定した。ウ
ィルスプールに於けるウィルスの量は、中央値組織培養感染用量（ＴＩＣＤ₅₀／
ml，ｌｏｇ₁₀）で表わされた。Ｌ．Ｆに於けるウィルスの力価は、ＴＩＣＤ₅₀／
ｇ肺組織（ｌｏｇ₁₀）で表われされた。これらのアッセイにおいて最小検出可能
ウィルス濃度は、１．３ｌｏｇ₁₀ＴＩＣＤ₅₀／ml（ウィルスプール）又は１．６
ｌｏｇ₁₀ＴＩＣＤ₅₀／ｇ肺であった。

【０１１３】実施例２：ＲＳＶウィルス力価を減らすＩＳＳの局所投与 これらの実験は、コットンラットに於いて、ＲＳウィルス（ＲＳＶ）に対する
抗ウィルス活性に関して、ＩＳＳの局所投与の作用を試験する為に行われた。

【０１１４】 ３日目に（即ち、ウィルスに感染する３日前）、２０匹のコットンラット（Ｃ
Ｒｓ）は選択され、４匹の動物の５つの群に分けられた。群１に於ける当該動物
は、軽く麻酔され、リン酸バッファー食塩水（ＰＢＳ）５０μＬが鼻孔内（ＩＮ
）に投与された。グループ２に於けるＣＲｓは同様に、ＩＳＳ

【化１９】 １５０μｇを投与され、一方で、群３に於ける動物は同様コントロール非ＩＳＳ
配列

【化２０】 １５０μｇを投与された。３日後、０日目に、群４に於ける各ＣＲｓは麻酔され
、ＩＮに１５０μｇのＩＳＳが投与され、同様の方法で、コントロールの非ＩＳ
Ｓ

【化２１】 １５０μｇが投与された。

【０１１５】 ３０分後、全ＣＲｓは、ＲＳＶＡ２の１００中央値組織培養感染用量（ＴＣＩ
Ｄ₅₀）によりＩＮに接種された。４日後（Ｄａｙ４）、全ての動物は犠牲にされ
、各動物の肺が除かれ、洗浄されＲＳＶレベルを評価された。実験の要約を表１
に示す。結果は、図１及び表２に示す。

【表６】

【表７】

【０１１６】 これらの結果は、ＰＢＳ又は非ＩＳＳ投与と比較してＩＳＳの投与が、感染し
た組織に於いて、ウィルス力価を減らしたことを示す。結果は又、ウィルス力価
を減少することに於いて感染の当日に対するＩＳＳの第１投与は、有効ではなか
った一方で、感染前の投与（本実験では３日間）は有効であった。

【０１１７】実施例３：ＩＳＳの非局所投与及びＲＳＶウィルス力価 これらの実験は、コットンラットに於いてＲＳウィルス（ＲＳＶ）に対する抗
ウィルス活性に関してＩＳＳの非局所投与の作用を試験する為に行われた。２０
匹のコットンラットは４匹の動物の５つの群に分けられた。これらの動物に対す
る、腹膜内（ＩＰ）又は皮下（ＳＣ）投与は、ＰＢＳ、各配列１５０μｇ／注射
で免疫刺激化配列（ＩＳＳ）

【化２２】 又は非ＩＳＳ配列

【化２３】 であった。０日目に、ＲＳＶＡ２の１００ ＴＣＩＤ₅₀によりこれらの動物の各
々はＩＮに接種された。４日後、各コットンラットは、犠牲になった。各々の動
物の肺は、取り除かれ、洗浄され、ＲＳＶを評価した。実験を表３に要約した。
ＩＰ投与由来の結果は、表４に示してある。ＳＣ投与由来の結果は、表５に示し
てある。

【表８】

【表９】

【表１０】

【０１１８】 各実験に於いて、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの１５０μｇのＩＰ及びＳＣ投
与は、ＰＢＳ投与と比較してウィルス力価に於ける有意な統計学上の減少を引き
起こすことがない。

【０１１９】実施例４：ＩＳＳの局所投与及びインフルエンザウィルス力価 これらの実験は、マウスに於いて、インフルエンザウィルスに対する、抗ウィ
ルス活性に関してＩＳＳの局所投与の作用を試験する為に行われた。

【０１２０】 ２５匹のネズミは各々７匹の動物の５つの群に分けられた。３日（ウィルス接
種に関連して）に、ＰＢＳ（５０μｌ）は、群１に於ける当該動物に鼻孔内（Ｉ
Ｎ）に投与され、一方ＩＳＳ

【化２４】 は、群２に於ける動物へＩＮに投与（５０μｌ／マウス中５０μｇ）され、群３
に於ける動物に、非ＩＳＳコントロール配列

【化２５】 はＩＮに投与（５０μｌ／マウス中５０μｇ）された。これらの３日後（０日）
、配列のＩＳＳ（５０μｇ／マウス）又は非ＩＳＳコントロール（５０μｇ／マ
ウス）は、それぞれ群４及び５に於けるマウスへＩＮ投与された。０日に、５０
μｌ ＰＢＳは群１に於ける当該動物にＩＮ投与された。０日でのこれらの投与
後間もなく、全てのマウスは、インフルエンザＡ／ミシシッピ（Ｈ３Ｎ２）ウィ
ルスの約１００中央値組織培養感染用量（ＴＣＩＤ）によりＩＮ投与された。４
日後全てのマウスは、犠牲になり、各々の肺は、インフルエンザウィルス力価に
対する試験がされた。実験は表６に要約した。結果は表７に要約した。ウィルス
感染の前、ＩＳＳのこの量のＩＮ投与は、ＰＢＳ投与と比較して、ウィルス力価
に於いて満足な程に大きな減少を引き起こさない。

【表１１】

【表１２】

【０１２１】実施例５：ＩＳＳの非局所投与及びインフルエンザウィルス力価 これらの実験は、マウスに於いてインフルエンザウィルスに対する抗ウィルス
活性に関してＩＳＳの局所投与の作用を試験する為に行われた。

【０１２２】 ２５匹のマウスは各々５匹の動物の５つの群に分けられた。３日に（ウィルス
接種に関連して）、ＰＢＳは群１に於ける当該動物ヘ腹腔内（ＩＰ）へ投与され
、一方、ＩＳＳ

【化２６】 は群３に於ける当該動物へＩＰ（５０μｇ／マウス）に投与され、非ＩＳＳコン
トロール配列

【化２７】 は群５に於ける当該動物へＩＰ（５０μｇ／マウス）投与された。１日に、配列
のＩＳＳ（５０μｇ／マウス）又は非ＩＳＳコントロール（５０μｇ／マウス）
がそれぞれ群２及び４に於ける当該動物にＩＰ投与された。次の日（０日）全て
のマウスは、インフルエンザＡ／ミシシッピ（Ｈ３Ｎ２）ウィルスの約１００中
央値ＴＣＩＤ₅₀により鼻腔内（ＩＮ）に接種された。４日後、全てのマウスは犠
牲になり、各々の肺は、インフルエンザウィルス力価に対して試験された。実験
は表８に要約してある。結果は表９に要約してある。ウィルス感染の前、ＩＳＳ
のこの量のＩＰ投与は、ＰＢＳ投与と比較してウィルス力価に於いて満足な程に
大きな減少を引き起こさない。

【表１３】

【表１４】

【０１２３】 本発明は、直接の記載及び実施例により委細を尽くした。本発明の同等及び改
良は当業者に明白になるであろうし、それらは、本発明の範囲に包含される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ラットに於ける肺ＲＳＶ力価を示す棒グラフである。ラットは、鼻孔内に：Ｐ
ＢＳ（第１棒）；ウィルス感染の３日前にＩＳＳ（第２棒）；ウィルス感染の３
日前に非ＩＳＳコントロール配列（第３棒）；ウィルス感染３０分前にＩＳＳ（
第４棒）；ウィルス感染の３０分前に非ＩＳＳコントロール配列を接種された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＲＳＶに曝露した個体に於いて、呼吸器系の合胞体ウィルス
   （ＲＳＶ）感染症を抑制する方法であって、呼吸器系の合胞体ウィルスに感染し
   ている個体に対して免疫刺激化配列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドを
   含んで成る組成物を投与することを含んで成り、ここで当該ＩＳＳは配列５′−
   Ｃ，Ｇ−３′を含んで成り、ここに於いてＲＳＶ抗原は前記組成物の投与と共に
   投与されず、前記組成物がＲＳＶ感染症を抑制する為に十分な量に於いて投与さ
   れる方法。
2. 【請求項２】 前記ＩＳＳが、配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含んで成る請
   求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 前記ＩＳＳが、配列５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミ
   ジン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′又は５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミジ
   ン，ピリミジン，Ｃ，Ｃ−３′を含んで成る請求項１記載の方法。
4. 【請求項４】 前記ＩＳＳが、５′−AACGTTCC−３′、５′−AACGTTCG−３
   ′、５′−GACGTTCC−３′、及び５′−GACGTTCG−３′からなる群から選択され
   る配列を含んで成る請求項３記載の方法。
5. 【請求項５】 前記ＩＳＳが、配列 【化１】 を含んで成る請求項１記載の方法。
6. 【請求項６】 前記個体が、哺乳動物である請求項１記載の方法。
7. 【請求項７】 投与が、曝露部位でなされる請求項１記載の方法。
8. 【請求項８】 前記曝露部位が、呼吸粘膜である請求項７記載の方法。
9. 【請求項９】 前記曝露部位が、鼻の通路である請求項７記載の方法。
10. 【請求項１０】 抑制が前記個体由来の生物学的な試料中でＲＳＶ力価の減
    少を含んで成る請求項１記載の方法。
11. 【請求項１１】 免疫刺激化配列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチド
    を含んで成る組成物であって、当該ＩＳＳが配列５′−Ｃ，Ｇ−３′を含んで成
    り、並びにキットがＲＳＶ抗原を含んで成らず、ＲＳＶウィルスに感染した又は
    曝露した個体へＲＳＶ感染症を抑制する為に、前記成分を投与する為の説明書を
    含んで成る、ＲＳＶに感染した又は曝露した個体に於けるＲＳウィルス（ＲＳＶ
    ）感染症抑制に於いて用いる為のキット。
12. 【請求項１２】 前記ＩＳＳが、配列５′−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３′を含んで成る
    請求項１１記載のキット。
13. 【請求項１３】 前記ＩＳＳが、配列５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリ
    ミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′又は５′−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミ
    ジン，ピリミジン，Ｃ，Ｇ−３′を含んで成る請求項１１記載の方法。
14. 【請求項１４】 前記ＩＳＳが、５′−AACGTTCC−３′、５′−AACGTTCG−
    ３′、５′−GACGTTCC−３′及び５′−GACGTTCG−３′からなる群から選択され
    る配列を含んで成る請求項１３記載のキット。
15. 【請求項１５】 前記ＩＳＳが、配列 【化２】 を含んで成る請求項１１記載のキット。