JP2003526669A

JP2003526669A - 低毒性を有するニスタチン製剤

Info

Publication number: JP2003526669A
Application number: JP2001566666A
Authority: JP
Inventors: グレンエスクウォン; ボンケイヨー
Original assignee: ウイスコンシンアラムニリサーチファンデーション
Priority date: 2000-03-10
Filing date: 2001-03-07
Publication date: 2003-09-09
Also published as: US6413537B1; CA2402025A1; AU2001247300A1; WO2001068102A2; WO2001068102A3; EP1261351A2

Abstract

(57)【要約】本発明は、全身の真菌感染を治療するための非経口的投与用新規ニスタチン製剤を提供する。この製剤は、先行技術のニスタチン製剤の毒性及び溶解性の問題を回避する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

関連する出願に対するクロスリファレンス該当なし連邦政府のスポンサーによる研究又は開発に関する記載本発明は、国立衛生研究所によって与えられた許可番号No.1 R29 A143346-01
下の米国政府支援によってなされたものである。米国政府は、本発明に関する所
定の権利を有する。本発明の背景本発明は、抗真菌性薬ニスタチンに関する。特に、新規ニスタチン非経口製剤
であって、既知のニスタチン製剤の非経口的投与に付随する有害な副作用を回避
するものに関する。

【０００２】

【従来の技術】

ニスタチンは、ストレプトマイセスノーセイ(Streptomyces noursei)から最
初に単離された細胞内生成物である。ニスタチンは、ポリエン抗生物質であり、
マイコサミン(3-アミノ-3,6-ジデオキシ-D-マンノ-ピラノース)成分、エポキシ
基、及び全てのトランステトラエン系に結合した、大きな共役二重結合環系を有
する。その構造は、エリスロマイシン及びアンホテリシンＢ、他の大環状ラクト
ンに類似する。その実験式は、Ｃ₄₇Ｈ₇₅ＮＯ₁₇であり、分子量は９２６.１３で
ある。ニスタチンは水にわずかに溶解性である。ニスタチンは、多くの病原性及び非病原性イースト及び真菌の成長を抑制する
こと、及びヒストプラスマ症及びクリプトコッカス症に効果的であることが見出
されている(E. Hazen 及びR. Brown, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1951年, 76,
93-97頁)。ニスタチンは、インビトロにおいて、広範な種類のイースト及び真
菌に対して静真菌性及び殺真菌性である。これは、カンジダアルビカンス(Candi
da albicans)及び他のカンジダ種によって引き起こされる皮膚、口及び腸内感染
の治療に信頼できる効果がある。ニスタチンは、バクテリア、原生動物又はウイ
ルスに対してほとんど活性を示さない。

【０００３】ニスタチン及び他のポリエンマクロライドは、ステロールに結合することによ
って細胞膜レベルで働き、この膜に細孔を形成し、細胞死に導くことで知られる
。哺乳類細胞を越える、真菌細胞に対するニスタチンの選択性は、哺乳類のコレ
ステロールを越える、エルゴステロール、つまり第１の真菌のステロールに好適
な結合性のためであると考えられる。ニスタチンは、経口及び局所形態の双方において許容的であり、一般的に軟膏、経口懸濁液、経口タブレット及び膣タブレットとして投与される。ニスタ
チンＵＳＰは、ｍｇ当たり５０００ユニット以上のニスタチン活性を含む。ニス
タチンは、タブレット当たり５００，０００ユニットの経口タブレットとして、
及び１００，０００ユニット／ｇ軟膏の軟膏として利用できる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】

最近、ニスタチンは、免疫無防備の患者における全身真菌感染を治療するのに
使用される。しかし、これは、非経口的使用にはとても毒性である。ポリエンマ
クロライド、例えば、ニスタチンの全身投与は、重篤な副作用、例えば、溶血毒
性及び腎毒性を引き起こし得る。その高い毒性及び水不溶性のため、ニスタチン
は、従って、非経口製剤として市場で入手できない。これらの特性のため、これ
を全身感染に使用することは、ほぼ不可能である。非経口投与用のニスタチンの毒性は、その低い溶解度に関連すると考えられる
。ニスタチンは、水中で凝集体を形成し、凝集した種は、インビトロ及びインビ
ボにおいて、哺乳類細胞に対する増加した毒性と相関する。界面活性剤は、脱凝
集剤として提案されてきた。しかしながら、凝集体の形成を減少するために概し
て必要な高レベルの界面活性剤は、高い毒性になる。

【０００５】いくつかの先行技術は、これらの問題が、ニスタチンをリン脂質(phopholipid
)ビヒクルまたはリポソーム中で調剤することによって克服できることを示唆す
る(例えば、Lopez-Bernsteinらによる米国特許第４８１２３１２号明細書、Alde
r-Mooreらによる米国特許第５８７４１０４号明細書参照)。改良されたリポソー
ム製剤は、Lenkらによる米国特許第５８３０４９８号明細書に開示されている。
しかしながら、リポソームは、バルク中で再現的に調製することが困難であり、
不安定であり得る。他の者は、液体分散形態が非経口的に投与し得ることを示唆
する(Sekiらによる米国特許第５７７６９０４号明細書参照)。このような分散形
態は、安定性の問題を受ける。ニスタチンの非経口的使用についての既知の問題にもかかわらず、先行技術は
、適切な有効性を維持しつつ、比較的調製するのが容易で、ニスタチンだけより
も非経口的投与において低毒性を有する、全身真菌感染の治療に好適なニスタチ
ンの製剤の約束(date)に適切に応答していない。

【０００６】

【課題を解決するための手段】

本発明の概要本発明は、凍結乾燥し、固体分散形態で、水で容易に元に戻って非経口投与に
好適なニスタチン製剤を提供する。この新規製剤は、適切な抗真菌特性を維持し
つつ、従来のニスタチン製剤よりも低毒性かつ水溶性である。本発明の前記及び他の利点は、１質量％〜１０質量％のニスタチン、１０〜９
８質量％の分散剤、０〜１質量％の補助溶剤及び水を含む凍結乾燥した均質混合
物である固体分散体を含む製剤に、その一つの態様が認められる。この分散剤は、好ましくは、エチレンオキサイド及びプロピレンオキサイドの
ノニオンブロックコポリマーである界面活性剤であり、一般的に、ポロキサマー
(poloxamer)、例えばポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８または好適なソ
ルビタンエステル、一般なポリソルベート、例えばポリソルベート８０と呼ばれ
る。分散剤は、水溶液中のニスタチンの凝集体形成を減少させるために効果的な
量で存在する。補助溶剤は、好ましくは、極性有機溶媒であり、これはニスタチ
ンの水溶性を増加するのに効果的な量で製剤中に存在する。好ましくは、補助溶
剤は、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド及
びメタノールからなる群より選択される。任意に、他の不活性賦形剤が、この製
剤中に好ましくは存在する。

【０００７】他の態様において、本発明は、ニスタチン製剤を調製するための方法を提供す
る。この方法は、(a)ニスタチンを分散剤及び補助溶剤の水溶液に溶解する工程
、(b)工程(a)の溶液を超音波処理して実質的に均質な分散体とする工程、及び(c
) 工程(b)の分散体をフリーズドライして固体分散体を形成する工程、を含む。
好ましくは、このように形成した固体分散体は、長期間、好適には数ヶ月間安定
である。凍結乾燥した形態または粉末の固体分散体は、好適には、水性溶媒で、
好ましくは、水または生理食塩水で元に戻り、被検者、例えばこれを必要とする
人又は動物に対する非経口投与に好適なニスタチン溶液を形成する。更に他の態様において、本発明は、ニスタチンの固体分散体製剤及び無菌水性
ビヒクルを含む組成物を提供する。好ましくは、組成物は、ニスタチンを約１０
０μＭ〜約１０００μＭの濃度で含有する。更なる態様として、本発明は、人又は動物被検者における真菌感染を治療する
方法であって、これを必要とする人又は動物に、本発明に従うニスタチン組成物
の抗真菌に効果的な量を投与する工程を含む方法を提供する。本発明の他の利点及び特定の性質のより完全な理解は、以下の図面、好ましい
態様の説明、及び添付した請求の範囲の精査によって獲得されるだろう。

【０００８】

【発明の実施の形態】

好ましい態様の説明本発明は、元に戻って、人又は動物に非経口投与するために好適な溶液を形成
し得る、新規なフリーズドライまたは凍結乾燥したニスタチン製剤(Nys)に関す
る。本発明は、ニスタチンの抗真菌特性を保持するが、低下した毒性と、ニスタ
チン水溶液と比較して向上した溶解度を有するニスタチン製剤を提供する。これ
らの特性は、物理的及び化学的特性の新規組み合わせを通じて達成される。以下の本発明の方法の記載において、プロセス工程は、特に断らない限り、室
温及び大気圧で行われる。ここで使用する「超音波処理する」または「超音波処
理」は、サンプルを超音波エネルギーで処理することを意味する。「脱凝集した
」または「脱凝集」は、凝集していない、単量体のまたは低下した凝集形態のニ
スタチンまたはこれらの形態を作る方法を意味する。「ノニオン界面活性剤」は
、正味のイオンチャージを欠き、水性培地においてかなりの範囲で解離していな
い界面活性剤を意味する。ノニオン界面活性剤の性質は、分子の親水性及び疎水
性の基の割合に大きく依存する。「固体分散体」は、その中に実質的に均質に分
散したその成分を有する固体媒体を意味する。「凍結乾燥」は、それによって物
質が、急速凍結及び脱水及び蒸発によって、乾燥形態、例えば、粉末または薄膜
に調製される方法を意味する。

【０００９】本発明に従う製剤は、分散剤、補助溶剤及びニスタチンを含む水性溶液から調
製された固体分散体である。ニスタチンUSPは、Paddock Laboratories またはGe
neva Genericsから市場で入手できる非無菌の黄色乃至明淡褐色粉末である。ノニオンコポリマー界面活性剤は、本発明に従う好適な分散剤である。本発明
の特に好適な態様は、エチレンオキサイド及びプロピレンオキサイドのブロック
コポリマー、一般にポロキサマーと呼ばれるものを分散剤として使用することで
ある。ポロキサマーは、本製剤においてニスタチンの溶解度を改善する。ポロキ
サマーは、以下の構造で表されるノニオン界面活性剤のシリーズである。ＨＯ(Ｃ₂Ｈ₄Ｏ)_a(Ｃ₃Ｈ₆Ｏ)_b(Ｃ₂Ｈ₄Ｏ)_aＨ式中、ポリオキシプロピレンセグメント(Ｃ₃Ｈ₆Ｏ)_bは疎水性であり、ポリオキ
シエチレンセグメント(Ｃ₂Ｈ₄Ｏ)_aは親水性である。このポロキサマーは、ａが
約５０〜１００、より好ましくは、７５〜９８の整数であり、及びｂが約２０〜
７０、好ましくは３０〜６７の整数であることが好適である。このポロキサマー
は、ニュージャージー州Mount OliveのBASF CorporationからPluronicの商標で
入手できる。特に、ポロキサマー188(Pluronic F68(登録商標))及びポロキサマ
ー407(Pluronic F127(登録商標))が有用である。本発明で価値があり得る他のポ
ロキサマーは、ポロキサマー237(Pluronic F87(登録商標)) 、ポロキサマー238(
Pluronic F88(登録商標)) 、ポロキサマー288(Pluronic F98(登録商標))、及び
ポロキサマー338(Pluronic F108(登録商標))である。これら本発明のポロキサマ
ーは、約６６００ドルトン〜約１４，０００ドルトンの範囲の分子量及び約４９
℃〜約５７℃の範囲の融点を有する。

【００１０】 Pluronic F68(登録商標)は、８，４００ｇ／モルの分子量、及び５２℃の融点
を有する。Pluronic F68(登録商標)は、平均７５ユニットのエチレンオキサイド
(Ａブロック)、３０ユニットのプロピレンオキサイド(Ｂブロック)、及び７５ユ
ニットのエチレンオキサイド(Ａブロック)を有する。好ましいPluronic F127(登
録商標)は、１２，６００ｇ／モルの分子量、及び５６℃の融点を有する。これ
は、平均９８ユニットのエチレンオキサイド(Ａブロック)、６７ユニットのプロ
ピレンオキサイド(Ｂブロック)、及び９８ユニットのエチレンオキサイド(Ａブ
ロック)を有する。好ましくは、本製剤中のニスタチン対Pluronic F127(登録商
標)のモル比は、好適には約１：１０〜約２：１の範囲である。ニスタチン対Plu
ronic F68(登録商標)のモル比は、好適には約１：１００〜約２：１の範囲であ
る。本発明に従う他の好ましい界面活性剤または分散剤は、ポリソルベート、例え
ば、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０及びポリソ
ルベート６０及び他のソルビタンエステル、例えば、ソルビタンモノラウレート
、ソルビタンモノオレアート、ソルビタンモノパルミテート及びソルビタンモノ
ステアレートを含む、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである。好
ましくは、ポリソルベート８０(ソルビタンモノ-9-オクタデカノエート)が、
好ましくはニスタチンを有する製剤中に、約０.１ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲の
モル濃度で存在する。ニスタチン対ポリソルベート８０のモル比は、好適には約
１：２〜約１：１００の範囲である。ポリソルベートは、米国デラウエア州Wilm
ingtonのICI Americas, Inc.から、Tweenの商標で市場から入手できる。ポリソ
ルベート８０は、Tween ８０(登録商標)として入手できる。

【００１１】本発明の製剤中のさらなる成分は、補助溶剤であり、これはニスタチンを溶解
する製剤と相溶性の全ての好適な水溶性物質であり、好ましくは、極性有機溶媒
、例えば、ジメチルスルホキシド(DMSO)、ジメチルアセトアミド(DMAC)、ジメチ
ルホルムアミド(DMF)及びメタノールである。任意に、賦形剤が水ベースの製剤に添加されても良く、例えば、分散保護剤(l
yoprotectant)、例えば、スクロースまたはマンニトール、及び／または酸化防
止剤、例えばブチル化ヒドロキシアニソールがある。本発明のニスタチン製剤は、特にここで記載された方法によって調製される場
合、ニスタチンのみの場合と比べ、溶解度が向上し、毒性が低下し、抗真菌活性
の有意な減少のない固体分散体が提供される。

【００１２】本発明の方法は、ニスタチンを補助溶剤及び分散剤に溶解すること、得られた
溶液を適当な温度及び周波数で超音波処理して実質的に均質な分散体を形成する
こと、この分散体をフリーズドライして凍結乾燥形態または固体分散体を形成す
ること、及びこの凍結乾燥形態を好適な使用条件下で元に戻すことを含む。特に
、この方法は、ニスタチンを分散剤の水溶液、例えば、Pluronic 127(登録商標)
、及び補助溶剤、例えば、ジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解する工程を含む。
得られた溶液は、加熱され、及びその後典型的な超音波処理装置を使用して、約
４５ＫＨｚの周波数で、実質的に均質な分散体を得るのに十分な時間、超音波処
理する。加熱温度は、約４℃〜約６０℃の範囲にあるのが好適であり、加熱時間
に依存する。好ましくは、溶液は、約３７℃の温度で約１０分間加熱される。超
音波処理の後、実質的に均質な分散体を典型的な手段、例えば、Peter Cameron
発行のGood Pharmaceutical Freeze-Drying Practice (イリノイ州；Interpharm
Press, Inc. 1997年)に記載されている(これはここで参考として取り入れる)
手段に従ってフリーズドライされる。分散体は、低温で、分散保護剤のような賦
形剤の存在または不存在下で凍結される。好ましくは、分散体は、−４０℃より
低い温度で凍結される。減圧は、水及び補助溶剤を分散体から抜いて製品を濃縮
するために利用しても良い。他の蒸発の手段を使用してもよく、これは、上昇し
た温度で製剤をスプレードライして水及び溶媒を追い出すことを含むと思料する
。

【００１３】フリーズドライ前の好ましい成分の典型的配合を以下に示す。％Ｗ／Ｖ(範囲) ニスタチン 0.1〜10％分散剤、例えば Pluronic F127(登録商標) 1.0〜10％補助溶剤、例えばジメチルスルホキシド 0.1〜10％(v/v) 無菌水（残りの体積）

【００１４】フリーズドライまたは凍結乾燥において、固体分散体は、安定な粉末であるア
モルファス状態にある。固体分散体は、典型的に、約１質量％〜約１０質量％の
ニスタチン、約１０質量％〜約９８質量％の分散剤、０〜約１質量％の補助溶剤
及び水を含む。固体分散体は、ニスタチンの粉末形態がゆるやかな溶解であるの
に比べ、容易に溶解する。固体分散体は、室温より低い温度、好適には２℃〜８
℃、好ましくは、４℃より低い温度で、長期間、一般に数ヶ月間保存しても良い
。フリーズドライまたは凍結乾燥したニスタチン製剤は、無菌の水性ビヒクル、
例えば、無菌化水、注射用水(USP)または生理食塩水中で好適に元に戻り、非経
口投与に好適な抗真菌性溶液を形成する。典型的に、元に戻った溶液中のニスタ
チンの濃度は、約１００μＭ〜約１０００μＭである。本発明の元に戻ったニス
タチン製剤は、抗真菌活性を保持し、ニスタチンを水または生理食塩水に溶解す
ることによって作成したニスタチン製剤と比べて低下した毒性を有する。

【００１５】本発明の方法によって調製されたニスタチン製剤は、低下した毒性及び向上し
た溶解度を有するのみならず、水または生理食塩水中のニスタチン、または、分
散剤及び補助溶剤と単に混合したニスタチンと比較した場合、脱凝集する。脱凝
集特性は、前述の通り、ニスタチンが、インビトロ及びインビボでの哺乳類細胞
に対する毒性の原因であると考えられる、水中で凝集体を容易に形成するとの事
実に照らして重要である。この製剤の抗真菌活性は、水または生理食塩水中のニ
スタチンのそれと比較して同等または向上している。本発明は、ニスタチンの治
療係数の向上を提供する。本発明のニスタチン製剤は、人及び動物の多くの真菌感染を治療するために好
適に使用される。ニスタチン製剤は、従来技術によって投与されてもよいが、好
ましくは、非経口的に、例えば、静脈内注入によって、または静脈内、皮下また
は筋肉内注射によって投与される。典型的に、本発明のニスタチンの一日投与量
は、約１.０mg／日／体重kg〜約１０mg／日／体重kgである。各特定の患者に対
するニスタチンの具体的投与量は、もちろん、広範な種類の要因、例えば、年齢
、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与のタイミング、排泄の割合、組み合
わせて使用する投薬、及び治療すべき疾病または状態の重症度に依存する。本発明は、実例となる以下の実施例によって更に説明されるが、本発明の範囲
を限定するために構成されるべきものではない。

【００１６】

【実施例】

例１：フリーズドライしたニスタチン製剤(NF)の調製ニスタチン製剤を、以下に示す表１に記載したモル比で調製した。各製剤に対
し、適切な量のニスタチンUSPを光保護下でジメチルアセトアミド(DMAC)０.５０
ｍＬに溶解した。この溶液のアリコート(０.３５ｍＬ)をとり、５％Pluronic F1
27(登録商標)溶液１０ｍＬに加えた。完全に混合した後、溶液を１０分間４５Ｋ
Ｈｚの周波数及び３０℃で超音波処理し、液体窒素またはドライアイスチャンバ
ーを用いて急速に凍結した。水及びDMACを高真空及び極低温(−７０℃、フリー
ズドライが推奨される)下で少なくとも２４時間蒸発させた。種々の製剤及びそ
の特徴を以下の表１に示す。

【００１７】表１．フリーズドライニスタチン製剤(NF)

【００１８】例２：Pluronic F127(登録商標)を含む蒸留水中のニスタチンの臨界凝集濃度(Ｃ
ＡＣ)の測定ニスタチン(１６mg)を光保護下でジメチルスルホキシド(DMSO) ０.３ｍＬに溶
解し、０．１％〜２．０％の種々の水性Pluronic F127(登録商標)溶液１５ｍＬ
に加え、１１００μＭニスタチン溶液を作成した。各溶液を、関連するPluronic
F127(登録商標)溶液と、３.８μＭニスタチン濃度が得られるまで連続的に希釈
した。３７℃で３０分インキュベーションした後、各溶液を、蛍光計を４５０nm
の固定励起波長で使用して光散乱にかけた。励起及び発光のバンド幅は、それぞ
れ３nm及び１.５nmにセットした。散乱光の強度を図６に示すようにニスタチン
の対数濃度の関数としてプロットした。２つの直線ラインの交点が臨界凝集濃度
(CAC)であり、ここでニスタチン分子の自己凝集が始まり、散乱した光の強度が
急激に増加する。計算したCACを以下の表２に示す。

【００１９】表２．種々のレベルのPluronic F127(登録商標)を含む蒸留水中のニスタチンの
臨界凝集濃度(CAC) 蒸留水のみの中のCACは、５２．８μＭである。この結果は、ポロキサマーを使用すると、濃度依存的な態様でCACが上昇する
ことを示す。ポリキサマーは、ニスタチンを、無毒だが真菌細胞に対して活性な
、単量体で高度に脱凝集した形態に脱凝集し得る。従って、本発明のニスタチン
製剤は、散乱光の強度によって測定された低下した凝集によって実証されるよう
な低毒性を有する。

【００２０】例３：種々の界面活性剤の単量化(monomerizig)効果種々の界面活性剤、ナトリウムデオキシコレート(ＮａＤＣ)及びラウリル硫酸
ナトリウム(ＳＬＳ)の単量化または光散乱効果は、好適な界面活性剤と比較され
る。ニスタチン製剤を種々の界面活性剤と例１と同様の方法で調製した。薬剤の
濃度を２００μＭに一定に保った。散乱光の強度は、蛍光計を４５０ｍｍの固定
提起波長で使用して測定した。典型的な光散乱試験の結果を図７に示す。図７を見ると、界面活性剤のレベルが増加するに従い、光散乱強度は劇的に減
少する。Pluronic F127(登録商標)及びTween 80(登録商標)は、他の試験界面活
性剤の約１０００μＭと比べ、約１００μＭで脱凝縮活性を示す。

【００２１】例４：フリーズドライされたニスタチン製剤(NF)の溶解度測定過剰量の例１の各NF製剤を０．５ｍＬ蒸留水に入れ、５分間ボルテックスミキ
サーで勢いよく混合した。スラリーを０．４５μｍシリンジフィルターで濾過し
た後、濾液を分析用ジメチルホルムアミド(DMF)で希釈した。各NF組成物中のニ
スタチンの量を吸収分光法によって３０７nmで算出した。溶解度の結果を表１に示す。この結果は、本発明のPluronic F127(登録商標)
とともに固体分散体として調製されたニスタチンの溶解度が、純粋なニスタチン
よりも大きな溶解度を有することを示す(例えば、１：４ニスタチン−Pluronic
F127製剤は、純粋なニスタチンの０.5mg／ｍＬに比べて＞２mg／ｍＬの溶解度を
有する)。溶解度の増加は、Pluronic F127(登録商標)及び固体分散体を調製する
ために使用された本発明の方法のためである。

【００２２】例５：溶血試験 Pluronic F127(登録商標)中のニスタチンの溶血特性を試験するため、濃縮赤
血球(red blood cell)を、７．０のｐＨを有し、０.１％〜２.0％の範囲の濃度
でPluronic F127(登録商標)を含む、アイソトニックリン酸緩衝溶液(PBS)に希釈
した。ニスタチン溶液を、７０ｍｇのニスタチンを２ｍＬのDMSOに、溶液が透明
になるまで溶解することによって調製し、第１ニスタチンストック溶液を形成し
た。この第１ストック溶液０.２ｍＬをPluronic F127(登録商標)／PBS溶液のそ
れぞれ５ｍＬに加え、第２ニスタチンストック溶液を形成した。種々の量の第２
ストック溶液を、ニスタチンの変化したレベルのPluronic F127(登録商標)／PBS
溶液に添加した。種々のレベルのニスタチンを含む希釈した赤血球のアリコート(２.５ｍＬ)を
穏やかに振とうし、均質にした。この溶液を、その後、３７℃でインキュベート
し、２００ストローク／分で３０分間振とうした。溶解しない赤血球を遠心分離
(１２０００ｇ、２０秒)によって除去した。上澄みを集め、吸収分光法を用い、
５７６nmでヘモグロビンについて分析した。溶解した赤血球のパーセントを、以
下の式を用いて決定した。％溶血＝１００(Abs−Abs₀)／(Abs₁₀₀−Abs₀) Abs、Abs₀、Abs₁₀₀は、それぞれサンプル、ニスタチンのないコントロール、及
び２０μｇ／ｍＬアンホテリシンＢ存在下のコントロールの吸収を意味する。結
果を図４に示す。図４を見ると、５０％溶血を引き起こすニスタチンの濃度が、Pluronic F127(
登録商標)濃度が増加するにつれて向上している(例えば、２％のPluronic F127(
登録商標)で〜２７０μｇ／ｍＬと比べ、０．１％のPluronic F127(登録商標)で
〜１２０μｇ／ｍＬ)。

【００２３】本発明のNF組成物(１：２)及び(１：１)の溶血活性を、ニスタチンとPluronic
F127(登録商標)との物理的混合物の活性及びニスタチンのみの活性と対比した
。赤血球をアイソトニックPBSのみ、NF組成物との混合物、純粋なニスタチンま
たはニスタチンとPluronic F127(登録商標)との物理的混合物(インキュベーショ
ン及びフリーズドライなし)中に希釈し、上述したように処理した。結果を図５
に示す。図５は、物理的混合物において、ニスタチンは約７５〜９０μｇ／ｍＬ
のレベルで５０％溶血を引き起こすことを示す。本発明のPluronic F127(登録商
標)を含む固体分散体として調製されたニスタチン、即ち、NF組成物は、約１７
５〜１８０μｇ／ｍＬで５０％溶血を引き起こす。同様の方法によって、本発明のNF組成物の溶血活性を、アイソトニックPBS溶
液中のニスタチンの活性とさらに比較した。結果を図３に示す。図３は、純粋な
ニスタチンが、約５５μｇ／ｍＬで５０％溶血を引き起こすことを示す。NF組成
物は、約１２５μｇ／ｍＬ〜約１７５μｇ／ｍＬの範囲の、非常に高い濃度で５
０％溶血を引き起こす。

【００２４】前記結果は、本発明のニスタチン製剤が、ニスタチンとポロキサマーとの単な
る物理的混合物またはニスタチンのみよりも、赤血球の減少した溶解ついて測定
したときに、低い毒性を有することを示す。種々の界面活性剤のみの溶血活性も測定され、その結果を図１及び２にそれぞ
れ示す。図１は、界面活性剤、ラウリル硫酸ナトリウム(ＳＬＳ)、Tween 80(登
録商標)及びＮａＤＣ(ナトリウムデオキシコレート)の％溶血を示す。図１に示
すように、ＳＬＳ及びTween 80(登録商標)は、５０μｇ／ｍＬよりも低い濃度で
５０％溶血を引き起こすことを示す。一方、ＮａＤＣは、約２００μｇ／ｍＬで
５０％溶血を引き起こす。図２は、好ましい界面活性剤、Pluronic F68(登録商
標)(F68)及びPluronic F127(登録商標)(F127)の％溶血を示す。図２に示すよう
に、これらの界面活性剤は、溶血を実質的に引き起こさない。

【００２５】例６：NF組成物の最小抑制濃度(MIC) NFサンプルをDMSOに溶解し、Bacto(登録商標)ＹＰＤブロス培地(２００ｍＬ蒸
留水中、Bacto(登録商標)ＹＰＤを１０ｇ、及び１２１℃〜１２４℃で無菌化)で
希釈し、８μｇ／ｍＬのレベルのニスタチンを得た。ニスタチンレベルをブロス
培地を連続希釈することによって０.１μｇ／ｍＬのレベルに変化させた。各ニ
スタチンサンプルのアリコート(８００μＬ)をマイクロ遠心分離チューブに入れ
た。無菌蒸留水中、サッカロマイセスセレビシエ(Saccharomyces cerevisiae) A
TCC 4921を５×１０³cfu/ｍＬ含む種菌５０μＬを各チューブに加えて全容量８
５０μＬ／チューブを得た。このチューブを３０℃２４時間インキュベートした
。溶媒コントロール、Pluronic F127(登録商標)コントロール、及び培地コント
ロールを同時に実施し、DMSO及びPluronic F127(登録商標)の成長抑制活性並び
にブロス培地の無菌性をチェックした。最小抑制濃度(MIC)は、チューブ中のサ
ッカロマイセスセレビシエの完全な抑制を示すニスタチンの最小濃度で定義され
、６００nmでの光学密度を測定することによって試験した。本発明のニスタチン
製剤におけるMICは、３μｇ／ｍＬと測定された。サッカロマイセスセレビシエ
に対するニスタチンのみのMICは、約３μｇ／ｍＬである。

【００２６】例７：ニスタチン製剤(NF)の最小殺真菌性濃度(MFC) 最小殺真菌性濃度(MFC)の測定につき、MIC測定と同一の方法をインキュベーシ
ョンステップまで使用した。サッカロマイセスセレビシエ含有チューブを３７℃
で２時間インキュベーターにおき、細胞を死滅させた。２時間後、サンプルと接
触し、生存する細胞を、遠心分離(１２０００ｇ、２０秒)によってチューブの底
に沈殿させ、上澄みをデカンテーションした。この細胞を無菌の蒸留水及びボル
テックス混合物１ｍＬで洗浄した。混合した細胞０.１ｍＬを、ＹＰＤ寒天プレ
ート上に均一にひろげ、３０℃で２４時間インキュベートした。その後、サッカ
ロマイセスセレビシエのコロニーをカウントし、寒天プレート上にコロニーを示
さない濃度をＭＦＣで定義した。全ての実験は、３回繰り返した。本発明の組成
物に対するＭＦＣは、３μｇ／ｍＬと決定された。ニスタチンのみのＭＦＣは、
１２μｇ／ｍＬである。

【００２７】例８：インビボ試験カンディダアルビカンス(Candida albicans)に感染したマウスの群を、感染後
５時間、無菌水中の本発明のニスタチン製剤の再生溶液の単一投与によって、静
脈内に接種した。カンディダアルビカンスに感染した他のマウス群は、感染後５
時間、生理食塩水で希釈されたニスタチンUSPのDMSO溶液によって、静脈内に接
種した。結果は、かなり大きな数のマウスが、ニスタチンUSP溶液を与えられた
ものよりも、ニスタチン製剤の投与によって死から守られていた。

【００２８】

【発明の効果】

まとめると、本発明は、非経口的投与用のニスタチンの新規性剤を提供して全
身の真菌感染を治療する。この製剤は、先行技術のニスタチン製剤の毒性及び溶
解度の問題を回避する。本発明のニスタチン製剤は、例えば、インビトロにおけ
る赤血球の減少した溶解度によって測定されるように、低い毒性を有し、光散乱
測定、例えば、臨界凝集濃度(CAC)が水中のニスタチンのみのものよりも大きい
ことによって測定されるように、溶液中での減少した凝集を有し、及び、ニスタ
チンのみと比べて増加した水溶液における溶解度、例えば０．５４mg／ｍＬより
も大きい溶解度を有する。同時に、この製剤は、例えば、ニスタチンのみと同じ
最小抑制濃度(MIC)と、ニスタチンのみのときよりも低い最小殺真菌性濃度(MFC)
によって測定されるように、ニスタチンのみよりも同等または大きな凝集活性を
保持する。本発明は、いくらかの特異性をもってここに記載されかつ例証されているが、
当業者は、変化、追加及び省略を含む種々の改良であって、記載されたものとみ
なされるものを認識するだろう。従って、これらの改良も本発明に包含され、本
発明の範囲は、添付した請求の範囲に合法的に従う広い解釈によってもっぱら限
定されるものとされる。

【図面の簡単な説明】

【図１】種々の界面活性剤のみの溶血活性を示すグラフである。

【図２】Pluronic F68(登録商標)及びPluronic F127(登録商標)の溶血活性を
示すグラフである。

【図３】アイソトニックPBS中、ニスタチン製剤(NF)及びニスタチンのみの溶
血活性を示すグラフである。

【図４】ニスタチン濃度の関数として、PBS中、ニスタチン／Pluronic F127(
登録商標)の溶血活性を示すグラフである。

【図５】本発明に従う、ニスタチン／Pluronic F127(登録商標)の物理的混合
物、ニスタチン製剤(NF)及びニスタチンのみの比較溶血活性を示すグラフである
。

【図６】Pluronic F127(登録商標)中のニスタチンの光散乱の結果を示すグラ
フである。

【図７】種々の界面活性剤中のニスタチンの光散乱の結果を示すグラフである
。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 17/00 １０１Ａ６１Ｐ 17/00 １０１ 31/10 31/10 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ヨーボンケイアメリカ合衆国ウィスコンシン州 53719 マディソンモレイヌビュードライヴ 1124 ＃305 Ｆターム(参考） 4C076 AA12 AA32 BB05 BB22 BB31 CC32 DD08 EE23 FF16 FF67 FF68 GG06 GG47 4C086 AA01 AA02 EA15 MA02 MA03 MA05 MA17 MA22 MA44 MA55 MA63 NA06 NA07 NA10 NA12 ZA90 ZB35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ニスタチン約１質量％〜約１０質量％、ポロキサマー及びポリ
ソルベートから選択される少なくとも１種の分散剤約１０〜約９８質量％、及び
補助溶剤０〜１質量％を含む、凍結乾燥した固体分散体を含有することを特徴と
する抗真菌性組成物。
【請求項２】分散剤が、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８、及びポ
リソルベート８０からなる群より選択される、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】補助溶剤が、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、
ジメチルホルムアミド及びメタノールからなる群より選択される、請求項１に記
載の製剤。
【請求項４】ニスタチン対分散剤のモル比が、約１：１００〜約２：１の範
囲である、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】凍結乾燥したニスタチン固体分散体及び医薬的に許容されるキ
ャリアーを含み、該凍結乾燥したニスタチン固体分散体が、ニスタチン及び分散
剤を含む、静脈内、皮下及び筋肉内注射に好適な医薬製剤。
【請求項６】ニスタチンが、約１００μＭ〜約１０００μＭの濃度で存在す
る、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項７】分散剤が、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８及びポリ
ソルベート８０からなる群より選択される、請求項５に記載の医薬製剤。
【請求項８】(a) ニスタチンを分散剤及び補助溶剤の水溶液に溶解する工程
； (b) 工程(a)の溶液をある温度及びある周波数で十分な時間超音波処理して実質
的に均質な分散体とする工程；及び (c) 工程(b)の分散体をフリーズドライして固体分散体を形成する工程、を含む、ニスタチンの固体分散体の調製方法。
【請求項９】分散剤が、ポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８及びポリ
ソルベート８０からなる群より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】補助溶剤が、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド
、ジメチルホルムアミド及びメタノールからなる群より選択される、請求項８に
記載の方法。
【請求項１１】ニスタチン非経口製剤の調製方法であって、該製剤が、ニス
タチンを水に懸濁することによって調製したニスタチン組成物と比べて増加した
溶解度と低下した毒性を有し、請求項８に記載の方法によって調製した固体分散
体を好適な水性ビヒクルで元に戻すことを含む方法。
【請求項１２】改良されたニスタチン組成物であって、殺真菌性に効果的な
量の凍結乾燥したニスタチン製剤及び医薬的に許容されるキャリアーを含み、該
ニスタチン製剤が、分散剤及びニスタチンを含み、ニスタチン対分散剤のモル比
が、約１：１００〜約２：１の範囲であり、該組成物が、減少した光散乱によっ
て測定される減少した凝集と、インビトロにおける赤血球の減少した溶解度によ
って測定される低い毒性と、水に分散したニスタチンの溶解度よりも大きな溶解
度とを有することを特徴とするニスタチン組成物。
【請求項１３】動物に、殺真菌性に効果的な量の請求項１２に記載のニスタ
チン組成物を投与する工程を含む、動物の真菌感染を治療する方法。
【請求項１４】組成物を、約１mg／日／体重kg〜１０mg／日／体重kgのニス
タチンの投与量で投与する請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】ニスタチン組成物が、非経口的に投与される、請求項１３に
記載の方法。