JP2003518507A - 免疫系の活性化および阻害 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ＮＦ−κＢ誘導剤による免疫応答の活性化、ＮＦ−κＢ阻害剤によるアネルギー応答の誘導およびＮＦ−κＢの活性化剤または阻害剤の投与による免疫応答の阻害および活性化を開示する。ＮＦ−κＢ阻害剤の例としては、Ｒｅｌ ＢやＮＦ−κＢ抗体など、ＩκＢα、ＰＳＩ、ＩκＢαをコードするヌクレオチド配列、ＮＦ−κＢ配列をコードするアンチセンス核酸が挙げられる。ＮＦ−κＢ誘導剤の例としては、ＮＩＫ、ＭＥＫＫ、ＩＫＫ２、ＴＦＲＲＦ２およびＲｅｌ Ｂが挙げられる。また、ＮＦ−κＢの誘導剤および阻害剤をコードするベクター、例えば、アデノウイルスベクターを開示する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、ＮＦ−κＢの誘導剤（inducer）および阻害剤（inhibitor）を用い
た免疫系の活性化および阻害、ならびに移植拒絶、自己免疫疾患、アレルギー、
感染性疾患および癌の治療を目的とするそれら誘導剤および阻害剤の使用に関す
る。

【０００２】 抗原提示は免疫応答の開始における重要な段階であり、樹状細胞（ＤＣ）はナ
イーブＴ細胞にとって最も強力な抗原提示細胞であると一般に認められている。
これは、一つには、樹状細胞ではＭＨＣおよび共刺激分子の発現量が高いことに
よる（Ｈａｒｔ（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ９０，３２４５−３２８７）。しかし
、抗原提示機能を調節する生化学的経路については、ＤＣのトランスフェクショ
ンが難しいこともあって、ほとんどわかっていない。本発明者らは、ＩκＢ分解
の阻害剤であり、ＮＦ−κＢ活性化の効果的な阻害をもたらすＰＳＩを用いるこ
とにより、ＤＣの混合リンパ球反応誘導能力が抑止されることを、ここに示す。
ＤＣ機能を抑制し、抗原提示を減少させる機序は、共刺激分子（ＣＤ８６および
ＣＤ８０）、ＨＬＡクラスＩＩ（ＤＱ＞ＤＲ）およびＩＬ−１２などのサイトカ
インを含む、複数の段階のダウンレギュレーションを伴った。さらに、このよう
なＤＣに暴露されたＴ細胞は、後に正常なＤＣと接触させても刺激することはで
きなかった。これらの結果は、ＮＦ−κＢが、抗原提示の遮断（blocking）にと
って効果的な標的であることを示している。

【０００３】 樹状細胞は一次免疫応答におけるナイーブＴ細胞への抗原提示にもっとも重要
な細胞である。樹状細胞は１９７０年代の初期にＳｔｅｉｎｍａｎおよびＣｏｈ
ｎ（１９７３）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ １７９，１１０９によって初めて記載され
た骨髄由来細胞である。樹状細胞に関する研究は、当初、十分な数の樹状細胞を
単離することが困難だったことが障害になったが、この課題は、ＣＤ３４＋細胞
またはヒト単球をＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４と共に培養することによってＤＣ
のサブセットをインビトロで生成させることが可能になったため、ある程度克服
された。これらの培養ＤＣは未成熟ＤＣの表現型を持ち、ＴＮＦαまたはＬＰＳ
と共にインキュベートすることにより、高ＭＨＣ高ＣＤ８０／８６発現細胞に成
熟させることができる（Ｂｅｎｄｅｒら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ １９６，１２１、Ｒｏｍａｎｉら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．Ｍｅｔｈｏｄｓ（１９９６）１９６，１３７、Ｒｅｄｄｙら（１９９７）Ｂｌ
ｏｏｄ ９０，３６４０）。

【０００４】 ＤＣは末梢血中のポストコロニー形成細胞（ｐｏｓｔ ｃｏｌｏｎｙ−ｆｏｒ
ｍｉｎｇ ｕｎｉｔ）ＣＤ１４中間体から派生させることもできる。ＤＣは皮膚
、粘膜、脾臓および胸腺の末梢部位に遊走する。ＤＣは、同種異系移植片拒絶、
アトピー障害、自己免疫および抗腫瘍免疫などの臨床的に重要な種々の過程に関
係するとされている。

【０００５】 ＤＣは、サイトカイン（主にＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４およびＴＮＦα）を使っ
て、ＣＤ３４⁺ 幹細胞またはＣＤ１４⁺ 末梢血単球から、エクスビボで培養する
ことができる。Ｓｃａｂｏｌｓｃら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４，
５６５１−５６６１。これらの供給源に由来するＤＣはどちらも免疫適格であり
、外因的に提示された抗原を取り込み、それをプロセシングした後、それを細胞
傷害性Ｔ細胞に提示することができる（Ｇｒａｂｂｅら（１９９５）Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ １６，１１７−１２１、Ｇｉｒｏｌｏｍｏｎｉおよび
Ｒｉｃｃｉａｒｄｉ−Ｃａｓｔａｇｎｏｌｉ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
Ｔｏｄａｙ １８，１０２−１０４）。ＤＣはインビボで生じた抗原特異的腫
瘍免疫を伝達することができ（Ｋｗａｋら（１９９５）Ｌａｎｃｅｔ ３４５，
１０１６−１０２０）、エクスビボで腫瘍抗原をパルスした自己ＤＣは、測定可
能な抗腫瘍効果を誘導することができる（Ｈｓｕら（１９９６）ＮａｔｕｒｅＭ
ｅｄｉｃｉｎｅ ２，５２−５８）。ＤＣは、粗製腫瘍膜溶解物、精製したペプ
チドまたはペプチド断片を使って、効果的にパルスすることができる。患者から
採取した自己樹状細胞のエクスビボ増殖、ペプチド抗原の負荷および養子免疫治
療としての再注入は、例えばＷＯ００／２６２４９に記載されている。

【０００６】 免疫応答の発生における抗原提示の重要性は、抗原提示の遮断が、免疫応答を
ダウンレギュレートすること、そして疾患動物モデルの処置に有用であることの
実証によって確認された。このように、マウスＭＨＣクラスＩＩに対する抗体を
使って、実験的アレルギー性脳脊髄炎の処置が行われている（Ｓｍｉｔｈら（１
９９４）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８３，１）。また、抗体もしくはＣＴＬＡ４−
Ｉｇ融合タンパク質によるＣＤ８０／８６共刺激分子の遮断は、移植または関節
炎の動物モデルに有益である（Ｌｕら（１９９９）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．６，５
５４−５６３）。このことから、ヒト疾患または移植に役立つであろう新しい抗
原提示ダウンレギュレーション方法の研究が行われるようになった。

【０００７】 ＮＦ−κＢは免疫系に関与すると推測されている。このことは例えばＢａｅｕ
ｅｕｒｌｅ Ｐ．Ａ．およびＨｅｎｋｅｌ Ｔ．の論文（Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ
ｉｅｗｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９４，第１２巻，１４１−１７９
頁）に要約されている。しかし、ＮＦ−κＢの活性化または不活化が抗原提示細
胞に及ぼす効果は今まで研究が困難であったため、ＮＦ−κＢが免疫系の活性化
と阻害に本当に重要であることは、誰も明示していない。本発明者らは、免疫応
答におけるＮＦ−κＢの重要な役割を、初めて実証した。

【０００８】 転写因子ＮＦ−κＢ様タンパク質の活性化は、既成転写因子の細胞質から核内
への移行を可能にする翻訳後修飾によって起こる。この移行は、ＮＦ−κＢと複
合体を形成することによってＮＦ−κＢを細胞質内に留めているＩκＢと呼ばれ
る阻害タンパク質のリン酸化と分解によって制御される。適当なシグナルによる
細胞の刺激はＩκＢの修飾をもたらし、その結果、ＮＦ−κＢからのＩκＢの解
離および／または分解が起こる。

【０００９】 ＮＦ−κＢに対するＩκＢの結合により、ＮＦ−κＢの核局在化シグナル（Ｎ
ＬＳ）の遮蔽が起こる。細胞タイプおよび細胞発生段階に依存する特異的薬剤で
細胞を刺激すると、ＩκＢはＮＦ−κＢへの結合が不可能になるような形で修飾
され、その結果、ＮＦ−κＢとＩκＢとの解離が起こる。

【００１０】 ＮＦ−κＢは、５０ｋＤサブユニット（ｐ５０）と６５ｋＤサブユニット（ｐ
６５）のヘテロ二量体タンパク質である。ｐ５０およびｐ６５のｃＤＮＡはクロ
ーニングされ、両者は３００アミノ酸の領域にわたって相同であることが明らか
にされている。

【００１１】 最近、もう１つのＮＦ−κＢファミリーメンバーＲｅｌＢが、血清刺激した線
維芽細胞由来の極初期応答遺伝子としてクローニングされている。

【００１２】 ｐ５０とｐ６５はどちらもホモ二量体を形成することができる。ただし、その
特性は異なっており、ｐ５０ホモ二量体は強いＤＮＡ結合親和性を持つものの、
転写をトランス活性化することはできないのに対し、ｐ６５ホモ二量体はＤＮＡ
には弱く結合するに過ぎないが、トランス活性化能力を持っている。ｐ５０は、
ＤＮＡ結合活性および二量体化活性を持たない１１０ｋＤ前駆体（ｐ１１０）の
アミノ末端部分として合成される。カルボキシ末端部分には８つのアンキリンリ
ピート（細胞周期制御と分化に関与するいくつかのタンパク質に認められるモチ
ーフ）が含まれている。

【００１３】 ５つのＩκＢファミリーメンバー、すなわちＩκＢα、ＩκＢβ、ｐ１０５／
ＩκＢγ、ｐ１１０／ＩκＢΔおよびＩκＢεが同定されている（Ｂａｅｕｅｒ
ｌｅおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｃｅｌｌ １９９６，第８７巻，１３−２０頁
）。ＩκＢ様ファミリーメンバーはいずれも、ＮＥ−κＢ活性化の阻害に不可欠
な複数のアンキリンリピートを持っている。

【００１４】 本発明者らは、ヒトマクロファージおよびリウマチ滑膜における炎症応答の重
要な特徴の多くが、転写因子ＮＦ−κＢに依存することを見いだした。本発明者
らはプロテオソーム阻害剤ＰＳＩの研究を行った。ＰＳＩは、当初、プロテオソ
ームのキモトリプシン様活性の阻害物質として記載された物質である。ＴＮＦα
、ＩＬ−６、ＩＬ−２など、多くの炎症誘発性（proinflammatory）メディエー
ターの産生がＮＦ−κＢに依存する（ＰＣＴ／ＧＢ９８／０２７５３に開示され
ているＡｄｖＩκＢαによる阻害が可能である）のに対し、抗炎症性サイトカイ
ンおよびメディエーター、すなわちＩＬ−１０、ＩＬ−１レセプターアンタゴニ
スト、ＩＬ−１１は影響を受けないことが分かった。このことから、本出願人ら
は、ＮＦ−κＢはこれら２種類のメディエーターを正確に区別するらしいと考え
、炎症系と免疫系の密接な関係に照らして、免疫の誘導におけるＮＦ−κＢの役
割は何かという疑問を持った。

【００１５】 本発明者らは、まず、遺伝子治療の使用を必要としないプロテオソーム阻害剤
ＰＳＩの効果について調べた。これは、ＩκＢ分解を阻害し、よって一次免疫応
答発生時の重要な初期事象である樹状細胞の免疫賦活機能に対するＮＦ−κＢの
活性化を阻害することが知られている。

【００１６】 本発明者らは、成熟した単球由来ＤＣのＰＳＩ処理により、混合リンパ球反応
におけるそれらのＴ細胞増殖誘導能力が阻害されることを、ここに報告する。こ
の効果の機序を解明するために細胞表面解析、サイトカイン測定および共培養を
行ったところ、ＮＦ−κＢを遮断することにより、樹状細胞とＴ細胞の間の相互
作用に免疫抑制機構が作動するようになることが示唆された。

【００１７】 さらに本発明者らは、これらの変化がアネルギー応答をもたらすことも実証し
た。すなわちこれらの変化により、最初の阻害化合物を除去した後でさえ、免疫
応答を発生させることができなくなる。

【００１８】 また本発明者らは、免疫応答を誘導または調整するための標的としてＮＦ−κ
Ｂを利用できることにも気づいた。これは予想外である。なぜなら、Ｆｅｕｉｌ
ｌａｒｄら（１９９６）Ｅｕｉ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２６，２５４７−２５５
１およびＧｒａｎｅｌｌｉ Ｐｉｐｅｒｎｏら（１９９５）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２，１０９４４−１０９４８には、ＤＣ中のＮ
Ｆ−κＢは既に活性化された状態にあることが示されており、さらなる活性化が
有益であるとは予想されていなかったからである。

【００１９】 本発明は、第１の側面として、哺乳動物（ヒトなど）における抗原提示を阻害
する方法またはアネルギー応答を誘導する方法であって、薬学上有効量の、ＡＰ
Ｃ（例えばＤＣ）機能の細胞内阻害剤を投与することを含む方法を提供する。

【００２０】 「ＡＰＣ機能の細胞内阻害剤」という用語は、ここでは、抗原提示細胞機能の
任意の適切な阻害剤を包含するものとする。「ＡＰＣ機能」という用語は、ここ
では、抗原を提示する能力、ＭＨＣクラスＩＩを発現させる能力、ＣＤ８０およ
びＣＤ８６を含む共刺激分子（costimulatory molecules）などの細胞表面分子
を発現させる能力、サイトカインを産生する能力、および活性化ではなくアネル
ギーを誘導する能力を包含するものとする。通例、ＡＰＣ機能の阻害剤はＤＣ機
能の阻害剤である。本阻害剤はＡＰＣ内での細胞内シグナル伝達の阻害剤である
ことが好ましい。「ＡＰＣ内での細胞内シグナル伝達」という用語は、ここでは
、膜と核の間のコミュニケーション、遺伝子発現（ＣＤ８０およびＣＤ８６の発
現を含む）を制御するシグナル伝達、および細胞骨格構築の制御を包含するもの
とする。細胞内シグナル伝達の阻害には、例えば以下に詳述するようなＮＦ−κ
Ｂの阻害剤が含まれる。

【００２１】 疑義が生じないように述べておくと、サイトカインおよびＣＰＧモチーフを含
む分子は細胞外で作用するので、これらはＡＰＣ機能の細胞内阻害剤ではない。
本阻害剤が細胞を死滅させない阻害剤であることは明らかである。

【００２２】 本発明は、もう１つの側面として、哺乳動物における抗原提示を阻害する方法
またはアネルギー応答を誘導する方法であって、薬学上有効量のＮＦ−κＢ阻害
剤を投与することを含む方法を提供する。

【００２３】 薬学上有効量とは、ここでは、哺乳動物において所望の応答を誘導するのに十
分な量を意味する。この量は、当技術分野で知られた定型的な臨床試験および実
験によって決定することができる。

【００２４】 哺乳動物とは、ここでは、任意の哺乳動物を意味するが、とりわけヒトを意味
する。

【００２５】 アネルギーは、不適当な環境での抗原への暴露後に、リンパ球（この場合はＴ
リンパ球）がそれ以降の随意の免疫原刺激（活性化抗原提示細胞の場合は通常、
免疫原量の抗原の投与）に対して不応答性になるという免疫寛容の一形態である
（Ｒｏｉｔｔ，Ｉ．，Ｂｒｏｓｋｏｆｆ，Ｊ．およびＭａｌｅ，Ｄ．「Ｉｍｍｕ
ｎｏｌｏｇｙ」（１９９８，第５版，Ｍｏｓｂｙ社（ロンドン）を参照されたい
）。したがって本発明は、哺乳動物において免疫寛容誘起応答を誘導する方法を
提供する。

【００２６】 抗原提示とは、抗原が細胞表面のＭＨＣ分子に結合したペプチド断片として提
示されることを表し、Ｔ細胞は、この方法によって抗原が提示された場合にのみ
、その抗原を認識することができる。

【００２７】 本発明は、さらにもう１つの側面として、アレルギーまたは自己免疫疾患を処
置する方法であって、哺乳動物におけるアネルギー応答を誘導するために、薬学
上有効量の、ＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の細胞内阻害剤を投与することを含む方
法を提供する。

【００２８】 本発明は、さらなる一側面として、アレルギーまたは自己免疫疾患を処置する
方法であって、哺乳動物におけるアネルギー応答を誘導するために、薬学上有効
量のＮＦ−κＢ阻害剤を投与することを含む方法を提供する。自己免疫疾患は、
慢性関節リウマチ、Ｉ型糖尿病、多発性硬化症、クローン病、橋本甲状腺炎、セ
リアック（coeliac）病、重症筋無力症、尋常性天疱瘡、全身性エリテマトーデ
スおよびグレーブス病など、任意の自己免疫疾患でありうる。

【００２９】 本明細書に記載する方法で処置することが可能なアレルギーには、以下のアレ
ルゲンに対するアレルギーが含まれる：Ｆｅｌ ｄ １（イエネコＦｅｌｉｓ
ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓの皮膚および唾液腺アレルゲン；そのアミノ酸配列はＷＯ
９１／０６５７１に開示されている）、Ｄｅｒ ｐ Ｉ、Ｄｅｒ ｐ ＩＩ、Ｄ
ｅｒ ｆＩまたはＤｅｒ ｆＩＩ（チリダニ（house dust mite）（ヒョウヒダ
ニ属（dermatophagoides））由来の主要タンパク質アレルゲン；アミノ酸配列は
ＷＯ９４／２４２８１に開示されている）。

【００３０】 本発明は、以下の物質のいずれかに存在するアレルゲンによって起こるものを
含めて、実質上任意のアレルギーに応用することができる：イネ科植物、木およ
び雑草（ブタクサを含む）の花粉；真菌類およびカビ；食品、例えば魚、甲殻類
、カニ、ロブスター、ラッカセイ、堅果、コムギグルテン、卵および乳；刺咬昆
虫、例えばハチ、ジガバチ、スズメバチなど（ｂｅｅ、ｗａｓｐ、ｈｏｒｎｅｔ
）およびユスリカ科（chirnomidae）（非刺咬ユスリカ（ｎｏｎ−ｂｉｔｉｎｇ ｍｉｄｇｅ））；クモおよびチリダニを含むダニ；哺乳動物（ネコ、イヌ、ウ
シ、ブタ、ヒツジ、ウマ、ウサギ、ラット、モルモット、マウスおよびアレチネ
ズミ（ｇｅｒｂｉｌ）など）の鱗屑、尿、唾液、血液、その他の体液に見いださ
れるアレルゲン；空中浮遊粒子全般；ラテックス；およびタンパク質洗剤添加物
。

【００３１】 以下の昆虫に由来するタンパク質に対するアレルギーも処置することができる
：イエバエ、ミバエ、ヒツジキンバエ（ｓｈｅｅｐ ｂｌｏｗ ｆｌｙ）、ラセ
ンウジバエ、コクゾウムシ類（ｇｒａｉｎ ｗｅｅｖｉｌ）、カイコ、ミツバチ
、非刺咬ユスリカ幼虫、ハチミツガ幼虫、ゴミムシダマシ、ゴキブリ、甲虫Ｔｅ
ｎｉｂｒｉｏ ｍｏｌｉｔｏｒの幼虫。

【００３２】 本発明は、さらなる一側面として、ヒトなどの哺乳動物における移植拒絶を防
止（preventing）する方法であって、哺乳動物におけるアネルギー応答を誘導す
るために、薬学上有効量の、ＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の細胞内阻害剤を投与す
ることを含む方法を提供する。

【００３３】 本発明は、さらなる一側面として、移植拒絶を防止する方法であって、アネル
ギー応答を誘導するために、薬学上有効量のＮＦ−κＢ阻害剤を投与することを
含む方法を提供する。

【００３４】 さらに本発明は、アネルギー応答を誘導するため、移植組織の拒絶を抑制する
ため、または抗自己免疫疾患剤として、またはアレルギーを処置するために、医
薬として使用されるＡＰＣ機能の阻害剤（ＮＦ−κＢ阻害剤など）に関する。

【００３５】 また本発明は、移植拒絶、アレルギーまたは自己免疫疾患を処置するための医
薬の製造に使用されるＮＦ−κＢ阻害剤も提供する。

【００３６】 本ＮＦ−κＢ阻害剤は、タンパク質分解の阻害剤、例えばプロテオソーム阻害
剤であることが好ましい。該阻害剤は、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ社から入手できる
ＰＳＩであってよい。これは、プロテオソームの阻害剤として知られている（Ｔ
ｒａｅｃｈｎｅｒら，ＥＭＢＯ Ｊ．（１９９４），第１３巻，５４３３−４１
頁、Ｇｒｉｓｃａｖａｇｅら，ＰＮＡＳ（１９９６），第９３巻，３３０８−１
２頁、Ｂｏｎｄｅｓｏｎら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９），第１６２巻，
２９３９〜４５頁）。また、ＡＬＬＮ（Ｊｏｂｉｎら，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（
１９９８），第２７巻，１２８５−９５頁）、ラクタシスチン（Ｄｅｌｉｃら（
１９９８）第７７巻，１１０３−０７頁）、ＭＧ−１３２（Ｊｏｂｉｎら，前掲
）、Ｃ−ＬＦＦおよびカルパイン阻害剤（ＮｅａｕｐａｒｆａｎｔおよびＨｉｓ
ｃｏｔｔ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ＆ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗ
ｓ（１９９６），第７巻，１７５−１９０頁）、またはＣＶＴ−１３４（Ｌｕｍ
ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９９８），第５５巻，１３９１−
９７頁）も、阻害剤として使用しうる。

【００３７】 他の阻害剤には以下の物質がある：コーヒー酸フェネチルエステル（Ｎａｔａ
ｒａｊａｎら，ＰＮＡＳ（１９９２），第９３巻，９０９０−９５頁）、ピロリ
ジンジチオカーボネート（Ｓｃｈｒｅｃｋら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（１９９２
），第１７５巻，１１８１−９４頁）、ロバスタチン（Ｇｕｉｊａｒｒｏら，Ｎ
ｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ（１９９６），第１１巻，９９
０−９９６頁）、塩酸アゼラスチン（Ａｓｅｌａｓｔｉｎｅ ＨＣＬ）（Ｙｏｎ
ｅｄａ，Ｊａｐａｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９７），第７３巻，１４
５−１５３頁）、テパキサリン（Ｔｅｐａｘａｌｉｎ）（Ｋａｚｍｉら，Ｊ Ｃ
ｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（１９９５），第５７巻，２９９−３１０頁）、（−
）−エピガロカテキン−３−ガレート（ＬｉｎおよびＬｉｎ，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ．（１９９７），第５２巻，４６５−４７２頁）、デオキシスパガリ
ン（Ｔａｐｐｅｒら，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９５），第１５５巻，２４２
７−３６頁）、フェニル−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルニトロン（Ｋｏｔａｋｅら，Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ（１９９８），第１４４６巻，７７−
８４頁）、ケルセチン（Ｑｕｅｒｃｕｔｉｎ）（Ｓａｔｏら，Ｊ Ｒｈｅｕｍａ
ｔｏｌ．（１９９７），第２４巻，１６８０−８４頁）、クルクミン（ｃｕｃｕ
ｍｉｎ）（Ｃｈａｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９８），第
５５巻，９６５−９７３頁）またはＥ３３３０（Ｇｏｔｏら，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌ（１９９６），第４９巻，８６０−８７３頁）。

【００３８】 本明細書に示すＮＦ−κＢ阻害剤および活性化剤の例から明らかなように、本
阻害剤または活性化剤は細胞内に入って細胞内で作用すること、すなわち細胞内
ＮＦ−κＢ阻害剤または活性化剤〔例えばＮＦ−κＢの阻害または活性化につな
がる細胞内シグナル伝達事象の細胞内調節剤（modulator）〕として作用するこ
とが好ましい。

【００３９】 本発明のもう１つの態様として、ＮＦ−κＢの阻害剤、すなわちＮＦ−κＢの
レベル（量）、細胞内位置または活性に直接作用する阻害剤によって、ＮＦ−κ
Ｂを阻害することもできる。例えば該阻害剤は、ＮＦ−κＢと直接相互作用する
ＮＦ−κＢの天然の調節因子（regulator）（例えばＩκＢ）でありうる。

【００４０】 阻害剤はＩκＢであることが好ましく、特にＩκＢαは、例えばＭａｋａｒｏ
ｖの論文（Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９９７，第４巻，８４６−８５２頁）
およびＰＣＴ／ＧＢ９８／０２７５３に記載されている。他のＮＦ−κＢ阻害剤
として、既知のＮＦ−κＢサブユニット（例えばｐ５０、ｐ６５、ＲｅｌＢ）の
いずれかをコードするアンチセンスｃＤＮＡまたはオリゴヌクレオチドが挙げら
れる。Ｂｏｎｄｅｓｏｎら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ９６，５６６８には、ＩκＢをコードするアデノウイルスが記載され
ている。

【００４１】 さらに阻害剤は、ＮＦ−κＢをコードするｍＲＮＡを選択的に破壊するリボザ
イム、またはＮＦ−κＢの転写を妨げるアンチセンス分子、またはＮＦ−κＢ作
用を遮断する抗体もしくは抗体様分子であってもよい。これらの阻害剤について
以下に詳述する。ＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の阻害剤が、例えばＡＰＣ内で細胞
内シグナル伝達を阻害するリボザイムまたはアンチセンス分子または抗体もしく
は抗体様分子を含有してもよいことは、理解されるだろう。

【００４２】 ＮＦ−κＢ阻害剤の阻害剤がＮＦ−κＢの誘導剤として作用しうることは理解
されるだろう。したがって、ＩκＢαの機能または発現を遮断する抗体またはア
ンチセンス分子またはリボザイムは、ＮＦ−κＢの誘導剤として作用しうる。こ
のような誘導剤の有用性については後述する。

【００４３】 本明細書に開示するウイルスまたはウイルス様粒子のゲノム中にコードされう
るリボザイムは、ＣｅｃｈおよびＨｅｒｓｃｈｌａｇ「一本鎖ＤＮＡの部位特異
的切断」ＵＳ５，１８０，８１８、Ａｌｔｍａｎら「ＲＮアーゼＰによる標的Ｒ
ＮＡの切断」ＵＳ５，１６８，０５３、Ｃａｎｔｉｎら「ＨＩＶ−１ ＲＮＡの
リボザイム切断」ＵＳ５，１４９，７９６、Ｃｅｃｈら「ＲＮＡリボザイム制限
エンドリボヌクレアーゼおよび方法」ＵＳ５，１１６，７４２、Ｂｅｅｎら「Ｒ
ＮＡリボザイムポリメラーゼ、デホスホリラーゼ、制限エンドリボヌクレアーゼ
および方法」ＵＳ５，０９３，２４６、およびＢｅｅｎら「ＲＮＡリボザイムポ
リメラーゼ、デホスホリラーゼ、制限エンドヌクレアーゼおよび方法；エステル
交換反応による特定部位での一本鎖ＲＮＡの切断」ＵＳ４，９８７，０７１に記
載されており、これらは全て参考文献として本明細書の一部を構成する。

【００４４】 本阻害剤は、核酸配列によって、例えばアデノウイルスなどのベクター内にコ
ードされることが好ましい。本阻害剤をコードする核酸配列は、当該配列の発現
に必要な調節配列に、作動的に連結されることが好ましい。このようなベクター
を遺伝子治療に使用することにより、該阻害剤をコードする核酸配列を、哺乳動
物の体内に挿入することが可能になりうる。遺伝子治療の方法は、例えばアデノ
ウイルスを利用する方法など、当技術分野で知られている。ベクターは抗原分子
をコードする核酸配列を含んでもよい。

【００４５】 使用するベクターコンストラクト（construct）は、ＰＣＴ／ＧＢ９８／０２
７５３に開示されているＡｄｖＩκＢαであることが好ましい。

【００４６】 「作動的に連結」とは各成分が正常な機能を果たすことができるように並置す
ることを指す。したがって、調節配列（regulatory elements）に「作動的に連
結」されたコード配列とは、ＮＦ−κＢの阻害剤（または以下に詳述するように
有用な誘導剤）をコードする核酸配列が調節配列の制御下に発現されうるような
相対的配置（configuration）を指す。

【００４７】 「調節配列（regulatory sequences）」とは、特定の宿主生物における作動的
に連結されたコード配列の発現に必要な核酸配列を指す。例えば、真核細胞に適
した調節配列にはプロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーで
ある。

【００４８】 「ベクター」とは一本鎖、二本鎖、環状またはスーパーコイルＤＮＡを包含す
るＤＮＡ分子を意味する。適切なベクターとしてはレトロウイルス、アデノウイ
ルス、アデノ随伴ウイルス、ポックスウイルス、および細菌プラスミドが挙げら
れる。レトロウイルスベクターは、自らのゲノムを宿主のゲノムにランダムに組
み込むことによって複製するレトロウイルスである。適切なレトロウイルスベク
ターはＷＯ９２／０７５７３に記載されている。

【００４９】 アデノウイルスは線状二本鎖ＤＮＡウイルスである。適切なアデノウイルスベ
クターはＲｏｓｅｎｆｅｌｄら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９１，第２５２巻，４３
２頁に記載されている。

【００５０】 アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）はパルボウイルス科に属し、４〜６ＫＢの一本
鎖ＤＮＡから構成される。

【００５１】 ポックスウイルスベクターは大きいウイルスで、遺伝子の挿入が可能な部位を
いくつか持っている。ポックスウイルスベクターは耐熱性であり、室温で保存す
ることができる。ポックスウイルスベクターは複製能欠損性であり、宿主から宿
主または宿主から環境には伝染できないことが、安全性試験によって示されてい
る。

【００５２】 ＮＦ−κＢ阻害剤（または後述するような誘導剤）をコードする核酸を含むベ
クターは、当技術分野で知られた方法により、リポソームの形で哺乳動物に導入
しうる。あるいは、粘膜または肺を介して体内に進入させるために、リポソーム
をエアロゾルの形で使用しうる。このような技術は当技術分野で知られている。

【００５３】 イムノリポソーム（抗体修飾（directed）リポソーム）は抗体の利用が可能な
細胞表面タンパク質を過剰発現させる細胞タイプへの標的化（targeting）にと
りわけ有用であり、樹状細胞または前駆細胞の場合は、例えばＣＤ１、ＣＤ１４
またはＣＤ８３（または上記のような他の樹状細胞もしくは前駆細胞表面分子）
に対する抗体を使って行うことができる。イムノリポソームを作製するには、Ｍ
ａｒｔｉｎおよびＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ（１９８２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．２５７，２８６−２８８の方法に従って、ＭＰＢ−ＰＥ（Ｎ−［４−
（ｐ−マレイミドフェニル）ブチリル］−ホスファチジルエタノールアミン）を
合成する。ＭＰＢ−ＰＥは、抗体またはその断片をリポソーム表面に共有結合さ
せることができるように、リポソーム二重層に組み込まれる。標的細胞への送達
のための本発明のＤＮＡまたは他の遺伝子コンストラクトのリポソームへの負荷
は、例えばＤＮＡまたは他の遺伝子コンストラクトの溶液中で当該リポソームを
形成させた後、０．８ＭＰａまでの窒素圧下に孔径０．６μｍおよび０．２μｍ
のポリカーボネート膜を通して、順次押し出すことによって、都合良く行われる
。押し出した後、封入されたＤＮＡコンストラクトを、遊離のＤＮＡコンストラ
クトから、８００００×ｇで４５分間の超遠心分離によって分離する。酸素を除
去した緩衝液中の新たに調製したＭＰＢ−ＰＥ−リポソームを、新たに調製した
抗体（またはその断片）と混合し、窒素雰囲気下に４℃で一定上下回転（consta
nt end over end rotation）させながらカップリング反応を終夜行う。イムノリ
ポソームを、未結合の抗体から、８０，０００×ｇで４５分間の超遠心分離によ
って分離する。イムノリポソームは例えば腹腔内注射するか、または標的細胞が
存在する部位に直接（例えば皮下）注射しうる。またＤＮＡワクチンの形態で、
ＮＦ−κＢの阻害剤をコードする裸のＤＮＡを、ＮＦ−κＢの阻害剤として使用
しうる。

【００５４】 上記のように、もう１つの阻害剤は、ＮＦ−κＢ配列（例えばＲｅｌＢ）に対
するアンチセンス核酸の使用である。このようなアンチセンス核酸は、ＮＦ−κ
Ｂ核酸配列に結合してＮＦ−κＢ配列の転写を阻害することができる核酸配列を
含む。アンチセンス核酸の製造方法自体は当技術分野で知られている。

【００５５】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは、相補的核酸配列に特異的に結合すること
ができる一本鎖核酸である。適当な標的配列への結合により、ＲＮＡ−ＲＮＡ、
ＤＮＡ−ＤＮＡまたはＲＮＡ−ＤＮＡ二本鎖が形成される。これらの核酸は遺伝
子のセンス（コーディング）鎖に相補的であるので、しばしば「アンチセンス」
と呼ばれる。最近、オリゴヌクレオチドがＤＮＡ二本鎖に結合した三重らせんの
形成が可能であることが明らかになった。オリゴヌクレオチドは、ＤＮＡ二重ら
せんの主溝内の配列を認識できることがわかった。三重らせんはこれによって形
成された。このことから、主溝水素結合部位を認識することによって二本鎖ＤＮ
Ａに特異的に結合する配列特異的分子を合成できることが示唆される。

【００５６】 上記のオリゴヌクレオチドは、標的核酸に結合することにより、標的核酸の機
能を阻害することができる。これは、例えば転写、プロセシング、ポリ（Ａ）付
加、複製、翻訳が遮断されるか、または細胞の阻害機構が促進（例えばＲＮＡ分
解が促進）される結果として起こりうる。

【００５７】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは実験室で調製した後、例えばマイクロイン
ジェクションもしくは細胞培養培地からの細胞への取り込みによって細胞に導入
されるか、またはアンチセンス遺伝子を有するプラスミドもしくはレトロウイル
スまたは他のベクターを使ったトランスフェクション後に、細胞内で発現される
。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、まず、ラウス肉腫ウイルス、水疱性口内
炎ウイルス、単純疱疹ウイルス１型、シミアンウイルスおよびインフルエンザウ
イルスに関して、細胞培養におけるウイルスの複製または発現を阻害することが
見いだされた。それ以来、アンチセンスオリゴヌクレオチドによるｍＲＮＡ翻訳
の阻害は、ウサギ網状赤血球溶解物およびコムギ胚芽抽出物などといった無細胞
系で広範に研究されてきた。アンチセンスオリゴヌクレオチドによるウイルス機
能の阻害は、エイズＨＩＶレトロウイルスＲＮＡに相補的なオリゴヌクレオチド
を使って、インビトロで実証されている（Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ，Ｊ．１９８８「
アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドによるヒト免疫不全ウイルス複製の阻
害」Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８５（１５），５５０
７−１１）。このＧｏｏｄｃｈｉｌｄの研究により、最も有効なオリゴヌクレオ
チドはポリ（Ａ）シグナルに相補的であること、またＲＮＡの５’末端、特にプ
ライマー結合部位に隣接する、およびプライマー結合部位のキャップ領域および
５’非翻訳領域を標的とするオリゴヌクレオチドも有効であることが明らかにな
った。キャップ、５’非翻訳領域およびポリ（Ａ）シグナルは、レトロウイルス
ＲＮＡの末端で反復されている配列（Ｒ領域）内にあり、これらに相補的なオリ
ゴヌクレオチドはＲＮＡに２回結合しうる。

【００５８】 通例、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１５〜３５塩基長である。例えば
上皮成長因子レセプターｍＲＮＡの発現は２０マーのオリゴヌクレオチドによっ
て阻害されることが示され（Ｗｉｔｔｅｒｓら，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ
Ｒｅｓ Ｔｒｅａｔ ５３：４１−５０（１９９９））、また副腎皮質刺激ホル
モンの発現は２５マーのオリゴヌクレオチドによって９０％を超えて減少するこ
とが示されている（Ｆｒａｎｋｅｌら，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ ９１：２６１
−７（１９９９））。しかし、この範囲外の長さを持つオリゴヌクレオチド（例
えば１０、１１、１２、１３もしくは１４塩基長または３６、３７、３８、３９
もしくは４０塩基長のオリゴヌクレオチド）を使用することが望ましい場合もあ
ることは理解される。 アンチセンス核酸は（例えば上述したタイプの）適切なベクターにコードされう
る。

【００５９】 もう１つの選択肢として、阻害剤は、抗ＮＦ−κＢワクチンまたはＮＦ−κＢ
に対する抗体もしくはその断片（Ｆｖなど）であってもよい。ワクチンまたは抗
体は、それがＮＦ−κＢの阻害を引き起す限り、ＮＦ−κＢの任意の適切な部分
に対するものであってもよい。抗体はモノクローナル抗体であることが好ましい
。ワクチンと抗体の製造方法は当技術分野で知られている。もう１つの選択肢と
して、抗体は、その抗ＮＦ−κＢ活性をまだ保っている適切な抗体断片（Ｆａｂ
もしくは（Ｆａｂ）₂ 断片またはＦｖなど）であってもよい。抗体は細胞への侵
入を可能にするポリペプチド配列に連結してもよい。すなわち、抗体（特に抗体
断片）は、細胞（例えばＤＣ）による当該抗体の取り込みを促進する部分と結合
させることができる。例えば抗体は、当業者に知られているように、当該分子ま
たは相互作用するポリペプチドの細胞取り込みを促進する能力を持つ親油性の分
子またはポリペプチドドメインに連結することができる。従って、そのような部
分は、アンテナペディアの第３ヘリックス（Ｄｅｒｏｓｓｉら（１９９８）Ｔｒ
ｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ８，８４−８７）または細胞への侵入を可能に
するＨＩＶの配列（一般的にはｔａｔ）から得ることができる。このような配列
は既知であり、透過（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ）ペプチドおよび細胞への侵入を
可能にするＨＩＶの配列（一般的には改変ｔａｔ）は、これに包含される。もう
１つの選択肢として、上記の抗体（好ましくは抗体断片）をコードするｃＤＮＡ
を上述のようにベクターとして送達することもできる。

【００６０】 本発明は、さらなる一側面として、哺乳動物（ヒトなど）における抗原提示を
刺激する方法または免疫応答を刺激する方法であって、薬学上有効量の、ＡＰＣ
（例えばＤＣ）機能の細胞内誘導剤を投与することを含む方法を提供する。

【００６１】 「ＡＰＣ機能の細胞内増進剤（enhancer）」という用語は、ここでは、抗原提
示細胞機能の任意の適切な増進剤を包含するものとする。通例、本増進剤はＤＣ
機能の増進剤である。本増進剤は、ＡＰＣ内での細胞内シグナル伝達の増進剤で
あることが好ましい。

【００６２】 「ＡＰＣ機能」および「ＡＰＣ内での細胞内シグナル伝達」という用語は上に
定義したとおりである。

【００６３】 疑義が生じないように述べておくと、サイトカインおよびＣＰＧモチーフを含
む分子は細胞外で作用するので、これらはＡＰＣ機能の細胞内誘導剤または増進
剤ではない。

【００６４】 本発明は、さらなる一側面として、薬学上有効量のＮＦ−κＢ誘導剤を投与す
ることによって、哺乳動物における抗原提示を刺激する方法または免疫応答を刺
激する方法を提供する。この方法は、好ましくは、当該哺乳動物の免疫系を刺激
することによる感染性疾患または癌の処置（予防的処置を含む）に使用される。
感染性疾患にはプリオン関連疾患（海綿状脳症を含む）が含まれる。この方法は
、異常型のおよび／または異常に高レベルの（有害）分子（例えばポリペプチド
）（例えば、異常に高レベルの慢性炎症に関係する炎症性メディエーター（例え
ばサイトカイン）、細胞または結合組織マトリックスの分解産物（例えばフィブ
ロネクチン断片）、β−アミロイドペプチド（アルツハイマー病に関係）が体内
に存在することを特徴とする疾患または状態の処置（予防的処置を含む）に使用
しうる。そのような分子に対する免疫応答の刺激は、身体からの当該分子の除去
を補助することによって、当該状態の解消または予防に役立つ。

【００６５】 癌抗原は以下のいずれかであるか、または以下のいずれかに存在する少なくと
も１つのエピトープを持つものであれば、好ましい： ｉ）腫瘍中で異常に高レベルに発現される正常細胞性タンパク質。例えば様々
な腫瘍におけるサイクリンＤ１；乳癌におけるサイクリンＥ；様々な腫瘍におけ
るｍｄｍ２；ＥＧＦ−Ｒ、ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｒｂ−Ｂ３、ＦＧＦ−Ｒ、インシュ
リン様成長因子レセプター、Ｍｅｔ、ｍｙｃ、ｐ５３およびＢＣＬ−２は全て様
々な腫瘍で発現される； ｉｉ）腫瘍中で突然変異した正常細胞性タンパク質；例えば様々な腫瘍におけ
るＲａｓ突然変異；様々な腫瘍におけるｐ５３突然変異；ＣＭＬおよびＡＬＬに
おけるＢＣＲ／ＡＢＬ転座；ＡＭＬおよびＭＤＳにおけるＣＳＦ−１レセプター
突然変異；大腸癌におけるＡＰＣ突然変異；ＭＥＮ２Ａ、２ＢおよびＦＭＴＣに
おけるＲＥＴ突然変異；神経膠腫におけるＥＧＦＲ突然変異；ＰＭＬにおけるＰ
ＭＬ／ＲＡＲＡ転座；プレＢ白血病および小児急性白血病におけるＥ２Ａ−ＰＢ
Ｘ１転座； ｉｉｉ）ウイルス感染に関係する腫瘍における、ウイルスによってコードされ
るタンパク質；例えば子宮頚癌におけるヒトパピローマウイルスタンパク質；Ｂ
細胞リンパ腫およびホジキンリンパ腫におけるエプスタイン・バーウイルスタン
パク質；成人Ｔ細胞白血病におけるＨＴＬＶ−１タンパク質；肝細胞癌腫におけ
るＢ型およびＣ型肝炎ウイルスタンパク質；カポジ肉腫におけるヘルペス様ウイ
ルスタンパク質； ｉｖ）ＨＩＶ感染患者における、ＨＩＶによってコードされるタンパク質。

【００６６】 従って、上記の癌関連抗原は次の３つの大カテゴリーに分類することができる
：（ｉ）腫瘍細胞内で高レベルに発現される正常自己抗原、（ｉｉ）腫瘍細胞中
で発現される突然変異自己抗原、（ｉｉｉ）ウイルス感染に関連して腫瘍内で発
現されるウイルス抗原。カテゴリー（ｉ）が好ましい。

【００６７】 カテゴリー（ｉ）には次の３つのサブタイプが含まれる： ａ）過剰発現される正常細胞性タンパク質、 ｂ）正常細胞で組織特異的に発現されるが腫瘍細胞でも発現されるタンパク質
、および ｃ）胎児性抗原であってほとんどの成人組織ではサイレントであるが、腫瘍で
は異常に発現されるタンパク質。

【００６８】 ｂ）とｃ）の例は以下の通りである： ｂ）腫瘍反応性ＣＴＬの標的たる組織特異的分化抗原、例えばＧＡＴＡ−１、
ＩＫＡＲＯＳ、ＳＣＬ（造血細胞系および白血病で発現される）および免疫グロ
ブリン定常領域（多発性骨髄腫処置用）、および ｃ）白血病処置用のウィルムス腫瘍抗原１（ＷＴ１）ならびに肝臓および腸腫
瘍用のウィルムス腫瘍および癌胎児性抗原（ＣＥＡ、胎児性タンパク質）。

【００６９】 一態様として癌関連抗原は腫瘍試料の粗抽出物によって供給されうる。

【００７０】 癌遺伝子がコードするタンパク質のヒト腫瘍における過剰発現と、ヒト腫瘍で
発現される突然変異型癌遺伝子は、ＳｔａｕｓｓおよびＤａｈｌ（１９９５）が
「Ｔｕｍｏｕｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ／Ｂｒｏｗｎｉ
ｎｇ）の第７章に記載しており、この刊行物は参考文献として本明細書の一部を
構成する。

【００７１】 したがって、処置を受ける患者が癌、より好ましくは乳癌、膀胱癌、肺癌、前
立腺癌、甲状腺癌、ＣＭＬ、ＡＬＬ、ＡＭＬ、ＰＭＬなどの白血病およびリンパ
腫、大腸癌、神経膠腫、セミノーマ、肝癌、膵癌、膀胱癌、腎癌、子宮頚癌、精
巣癌、頭頚部癌、卵巣癌、神経芽細胞腫およびメラノーマのいずれか１つを持つ
のであれば、好ましい。

【００７２】 ＣＭＬは慢性骨髄性白血病、ＡＬＬは急性リンパ性白血病、ＡＭＬは急性骨髄
性白血病、ＰＭＬは前骨髄球性（promyelocytic）白血病である。

【００７３】 あるいは、患者は病原体、特に細菌、酵母、ウイルス、トリパノソーマなどに
よって起こる何らかの疾患を持つか、その危険にさらされている。疾患は病原体
の慢性的感染によって起こるものであれば好ましい。また病原体は、宿主の免疫
系によって容易には除去されないものであることも好ましい。

【００７４】 疾患はウイルス感染であれば好ましく、ＨＩＶ、パピローマウイルス、エプス
タイン・バーウイルス、ＨＴＬＶ−１、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、
ヘルペスウイルスまたは慢性感染を引き起す任意のウイルスのいずれか１つによ
って起こる疾患であれば、より好ましい。ウイルスがＨＩＶであれば、とりわけ
好ましい。

【００７５】 ある種の甲状腺疾患など、一部の疾患では、細胞によるホルモン産生量が異常
に増大する。したがって本発明の方法は、ホルモン産生量が増大している細胞の
除去を促進するために使用しうる。抗原は、当該ホルモン、または細胞が過剰に
産生しているかもしれない、当該ホルモンの合成に関与する生合成酵素を挙げる
ことができる。

【００７６】 細菌感染、特に慢性感染を引き起す感染を持つ患者も、有益に処置することが
できる。細菌感染は細胞内感染細胞であってよい。従って、本方法は結核の処置
に役立ちうる。

【００７７】 本発明者らは、ＮＦ−κＢが持つ中心的役割により、ＮＦ−κＢを刺激するこ
とによって、哺乳動物（例えばヒト）における免疫応答を増大させることが可能
であることに気付いた。

【００７８】 本発明は、さらなる一側面として、医薬（特に免疫応答刺激薬）として使用さ
れるＮＦ−κＢ誘導剤を提供する。ＮＦ−κＢ誘導剤は抗感染性疾患薬または抗
癌薬として、または上述した異常型のおよび／または異常に高レベルの（有害）
分子を特徴とする疾患もしくは状態の処置に使用することができる。

【００７９】 感染性疾患もしくは癌を持つ患者または異常型のおよび／または異常に高レベ
ルの分子が体内に存在することを特徴とする状態にある患者における免疫応答を
増大させることは、その感染性疾患もしくは癌または状態に対する身体自身の免
疫応答を増大させることによる患者の処置に役立つだろう。

【００８０】 本発明は、さらなる一側面として、免疫応答を刺激するための薬物の製造に使
用されるＮＦ−κＢ誘導剤を提供する。本誘導剤は、好ましくは、感染性疾患も
しくは癌または上に定義した状態の処置に使用される。

【００８１】 好ましいＮＦ−κＢ誘導剤には、ＭＥＫＫＩ、ＮＩＫ、ＩＫＫ１、ＩＫＫ２、
ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＴＡＫ、ＴＰＬ−２もしくはＲｅｌＢま
たは他のＮＦ−κＢサブユニット（例えばｐ６５またはｃＲｅｌ）が含まれる。
ＮＦ−κＢを誘導する能力を持つこのような誘導剤の断片および突然変異タンパ
ク質（muteins）も使用することができる。誘導剤は、ＮＦ−κＢ阻害剤に関し
て上述したように、適切なベクターによってコードし、処置すべき患者の細胞に
導入することができる。

【００８２】 好ましいＮＦ−κＢ誘導剤は、ＭｙＤ８８のドミナントネガティブ突然変異体
（dominant negative mutant）（すなわち、例えば野生型ＭｙＤ８８分子と阻害
性ＭｙＤ８８分子とが存在する細胞内で、野生型ＭｙＤ８８分子によるシグナル
伝達を阻害する能力を持つ突然変異体）を挙げることができる。この阻害は、内
因性野生型ＭｙＤ８８と内因性ＭｙＤ８８の結合パートナー（例えばＴｏｌｌ様
レセプター（ＴＬＲ））との相互作用の遮断によって起こりうる。ドミナントネ
ガティブ突然変異体としては、ＭｙＤ８８ｌｐｒ（Ｂｕｒｎｓら（１９９８）Ｊ
Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７３（２０），１２２０３−１２２０９）またはデス
ドメイン（death domain）を欠くＭｙＤ８８の断片（Ｂｕｒｎｓら（１９９８）
とそこに概説されている文献を参照されたい）を挙げることができる。ＭｙＤ８
８（骨髄球分化タンパク質）は、Ｎ−末端のデスドメイン（ＤＤ）が短いリンカ
ーによってＣ末端のＴｏｌｌドメインから分離された分子編成を持つと考えられ
ている（Ｂｕｒｎｓら（１９９８）に概説されている）。Ｎ末端のＤＤは約９０
アミノ酸のモチーフに関係し、このモチーフは他のＤＤ配列とのタンパク質−タ
ンパク質相互作用を媒介してホモ二量体またはヘテロ二量体を形成すると考えら
れている（Ｂｏｌｄｉｎら（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０，３８
７−３９１）。

【００８３】 阻害性ＭｙＤ８８分子としては、ＤＤ（例えばＭｙＤ８８のＤＤまたはＩＲＡ
ＫのＤＤ）に結合する能力がＭｙＤ８８よりも低いか、好ましくは、ＤＤに結合
することが実質上できないＭｙＤ８８分子を挙げることができる。例えば、阻害
性ＭｙＤ８８は、ＤＤを介して二量体化する能力がＭｙＤ８８よりも低いか、好
ましくは、ＤＤを介して二量体化することが実質上できないものでありうる。阻
害性ＭｙＤ８８分子としては、切断型ＭｙＤ８８（例えばデスドメインと呼ばれ
るドメインの全部または一部が欠失しているＭｙＤ８８分子）を挙げることがで
きる。また、突然変異型ＭｙＤ８８分子（例えばＤＤ内の非保存的突然変異で変
異されたＭｙＤ８８分子）も挙げることができる。例えば、完全長マウスＭｙＤ
８８のＰｈｅ５６に相当する位置が、例えばＡｓｎに突然変異しているものを挙
げることができる。また、上述のようにＭｙＤ８８のＮ末端の５３個のアミノ酸
も欠けているＭｙＤ８８ｌｐｒと呼ばれる突然変異型ＭｙＤ８８分子を挙げるこ
とができる。Ｂｕｒｎｓら（１９９８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３，１２
２０３−１２２０９。ＭｙＤ８８ｌｐｒは、野生型ＭｙＤ８８（例えばマウス野
生型ＭｙＤ８８）と比較すると、点突然変異（Ｆ５６Ｎ；マウス配列番号付与法
）を持っている。この点突然変異はＤＤ中にあり、ＤＤの二量体化を妨げる（Ｂ
ｕｒｎｓら（１９９８））。この突然変異は、Ｆａｓの細胞毒性シグナル伝達を
おそらくはＤＤドメインのコンフォメーションを破壊することによって消滅させ
ることが知られているｌｐｒ^cp突然変異に相当する（Ｎａｇａｔａ（１９９４）
Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６，３−８、Ｈｕａｎｇら（１９９６）Ｎａｔｕ
ｒｅ ３８４，６３８−６４１）。

【００８４】 野生型ＭｙＤ８８とドミナントネガティブＭｙＤ８８（ＭｙＤ８８−ｌｐｒ）
のコンストラクトは公表されているが（Ｂｕｒｎｓ Ｋ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃ
ｈｅｍ １９９８）、ＭｙＤ８８−ｌｐｒは、Ｐｈｅ⁵⁶がＡｓｎに突然変異した
デスドメイン中の単一アミノ酸突然変異であるという間違った記載がされている
。この突然変異はＦａｓリガンドのデスドメイン中に存在するｌｐｒ^cp突然変異
（この突然変異はデスドメインのコンフォメーションを破壊することによってＦ
ａｓリガンドの下流で起こるシグナル伝達を消滅させる）に相当する。実際には
、点突然変異に加えて、そのＮ末端ドメインに５３個のアミノ酸の欠失も存在す
る （遺伝子バンク配列の１〜１５９塩基対が欠けている）。この欠失により、
デスドメインの一部が失われている。

【００８５】 阻害性ＭｙＤ８８は、機能的Ｔｏｌｌドメイン、すなわちＴｏｌｌドメイン（
例えば野生型ＭｙＤ８８（例：野生型ヒトもしくはマウスＭｙＤ８８）またはＴ
ＬＲのＴｏｌｌドメイン）と相互作用する能力を持つＴｏｌｌドメインを含むこ
とが好ましい。阻害性ＭｙＤ８８は完全長ＭｙＤ８８ Ｔｏｌｌドメインを含む
ことが好ましい。Ｔｏｌｌ−Ｔｏｌｌドメイン相互作用には完全長Ｔｏｌｌドメ
インが必要かもしれない。

【００８６】 タンパク質−タンパク質相互作用（およびその増進または破壊）を測定する方
法は当業者にはよく知られているだろう。ＤＤおよびＴｏｌｌ−Ｔｏｌｌ相互作
用の適切な測定方法はＢｕｒｎｓら（１９９８）にも記載されている。適切な方
法には、例えば酵母ツーハイブリッド相互作用、同時精製、ＥＬＩＳＡ、免疫共
沈降、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）法および表面プラズモン共鳴法が含
まれうる。従ってＭｙＤ８８分子は、当該ＭｙＤ８８ポリペプチドとＤＤまたは
Ｔｏｌｌドメインを含むポリペプチドとの相互作用を、ＥＬＩＳＡ、免疫共沈降
もしくは表面プラズモン共鳴法によって、または酵母ツーハイブリッド相互作用
もしくは同時精製法によって検出することができる場合は、ＤＤまたはＴｏｌｌ
ドメインと結合または相互作用する能力を持つとみなすことができる。好ましい
方法は表面プラズモン共鳴である。

【００８７】 予備研究によれば、ＭＥＫＫ１はＮＦ−κＢを誘導し、ＡＰＣ（例えばＤＣ）
機能を増進できることが示されている。誘導剤はＤＣまたはその前駆細胞におい
てＮＦ−κＢを誘導する能力を持つことが好ましい。したがってＡＰＣ機能の誘
導剤または増進剤はワクチン製造に役立ちうる。同様に、ＡＰＣ機能の阻害剤は
、細胞が特定の抗原を認識するのを防ぎ、アネルギー状態を誘導するのに役立ち
うる。

【００８８】 したがって本発明は、（１）抗原提示細胞（ＡＰＣ）（例えばＤＣ）機能の細
胞内調節剤（例えば細胞内阻害剤または細胞内増進剤）を含むまたはコードする
部分（調節部分）と、（２）抗原分子を含むまたはコードする部分（抗原部分）
とを含んでなる分子を提供する。特に本発明は、抗原とＤＣ機能の調節剤（例え
ば阻害剤または増進剤）とをコードするポリヌクレオチドを提供する。本分子は
、抗原と、ＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の増進剤とをコードするＤＮＡワクチンで
あるか、またはそのようなＤＮＡワクチンを含むことが好ましい。調節剤、例え
ばＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の増進剤としては、細胞内シグナル伝達分子または
細胞内シグナル伝達活性を保っているもしくは細胞内シグナル伝達活性が強化さ
れているその誘導体を挙げることができる。誘導体はＤＣ機能を保っている誘導
体またはＤＣ機能を増強する誘導体であれば好ましい。これはＮＦ−κＢの活性
化剤（activator）／誘導剤であることが好ましい。これはＮＦ−κＢまたはそ
の成分であってもよい。ＤＮＡワクチンは、ＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の増進剤
をコードする部分と抗原分子をコードする部分とを含む組換えポリヌクレオチド
を含んでなることができる。もう１つの選択肢として、抗原分子は独立したポリ
ヌクレオチド分子にコードされていてもよいが、これはそれほど好ましくない。

【００８９】 上述した好ましい阻害剤を使用できることは理解されるだろう。

【００９０】 好ましい増進剤はＭＥＫＫおよびＭｙＤ８８のドミナントネガティブ突然変異
体（例えばＭｙＤ８８ｌｐｒ）である。

【００９１】 上述した好ましい増進剤／誘導剤を本発明のワクチンに使用できることは理解
されるだろう。

【００９２】 抗原分子は１または複数のエピトープの２以上のコピーを含んでよい。例えば
、抗原分子は、単一エピトープ形成アミノ酸配列（例えば約８〜３０アミノ酸、
好ましくは約１０〜１８アミノ酸、さらに好ましくは約１５アミノ酸長の配列）
の単一コピーを含んでよい。また抗原分子は、上記エピトープ形成配列の複数コ
ピーを含むか、少なくとも２種類のエピトープ形成配列の単一または複数コピー
を含んでもよい。抗原配列はつなぎ合わせてドメイン様構造を形成させてもよい
し、担体ポリペプチド中の異なる点に抗原配列を配置してもよい。ポリヌクレオ
チドは１種類または数種類の抗原分子をコードすることができ、各抗原分子はそ
れぞれ１または複数の抗原部分またはエピトープを持ちうる。

【００９３】 本発明は、本発明で使用されるＮＦ−κＢの誘導剤をコードするＤＮＡワクチ
ンも包含する。このようなワクチンは上述したような病原体（例えばＡ型、Ｂ型
、Ｃ型などの肝炎、ＨＩＶ、ＨＴＬＶ、インフルエンザ、結核菌、マラリアなど
）由来の対象抗原または癌特異的抗原またはβ−アミロイドなどの異常分子また
はプリオンを組み込んだＤＮＡ配列を含むことができるだろう。また、このよう
なワクチンはＮＦκＢの活性化剤（場合によっては最大の効果が得られるように
２以上のＮＦκＢ活性化剤）も含むだろう。抗原と活性化剤の発現を調節するた
めに、抗原と活性化剤はどちらも適切なプロモーター配列の制御下に置かれるだ
ろう。もう１つの免疫応答刺激法は、ＮＦ−κＢ誘導剤をコードする核酸配列が
その配列を発現させるために必要な調節配列に作動的に連結されてなるものを含
むベクターを与えることだろう。このベクターは、ＮＦ−κＢの活性化を増進す
ることによって免疫応答を増進することができるように、誘導性プロモーターを
含んでもよい。

【００９４】 複数のＣＤ８ ＣＴＬエピトープの送達を目的とする組換えポリエピトープワ
クチンの使用はＴｈｏｍｓｏｎら（１９９６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７，８
２２−８２６およびＷＯ９６／０３１４４に記載されており、これらは共に参考
文献として本明細書の一部を構成する。本発明に関して言えば、例えば腫瘍関連
抗原由来の１または複数の抗原アミノ酸配列（例えばそれぞれが約８〜１８アミ
ノ酸長である配列）を任意の順序で含むペプチド（またはペプチドをコードする
核酸）と、ＣＤ４ Ｔ細胞刺激エピトープ（破傷風トキソイドに由来するものな
ど）とを、単一のワクチン中に含むことが望ましいだろう。このような「連珠状
」ワクチンは典型的なＤＮＡワクチンである。

【００９５】 抗原分子は、形質転換細胞または癌細胞（cancerous cell）上に存在するエピ
トープ（すなわち腫瘍関連抗原または腫瘍関連エピトープ、例えば多くのヒトメ
ラノーマ腫瘍が産生するＭＡＧＥ−１抗原（ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎら
（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４，１６４３））を含むことができる。また
、上記のように、病原生物（例えばウイルス）上に存在するエピトープまたは病
原生物に感染した細胞（好ましくはヒト細胞）（例えばウイルス感染細胞）上に
存在するエピトープを含んでもよい。

【００９６】 エピトープはＴ細胞エピトープ、すなわちＴ細胞応答（ＴＨ−１応答）、好ま
しくはＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答、あるいは当業者によく知られているＣＤ
４＋ヘルパーＴ細胞応答（ＴＨ−２応答）を誘導する能力を持つエピトープであ
ることができる。細胞傷害性Ｔ細胞応答は、例えば抗原がミコバクテリア抗原
（例えば結核菌またはらい菌抗原）である場合のように、一定の場合には望まし
くないこともある。

【００９７】 阻害剤または誘導剤または抗原はペプチドミメティック（peptidomimetic）化
合物（例えば上述したポリペプチド阻害剤または誘導剤のペプチドミメティック
化合物）であることができる。

【００９８】 「ペプチドミメティック」という用語は、治療剤として特定のペプチドのコン
フォメーションと望ましい特徴とを模倣しているが、潜在的に望ましくない特徴
は回避している化合物を指す。例えばモルヒネは、ペプチド・エンドルフィンの
ペプチドミメティックであって、経口投与が可能な化合物である。

【００９９】 ペプチドを必要とする治療的応用は、経口バイオアベイラビリティの欠如とタ
ンパク質分解による制限を受ける場合がある。例えば、通例、ペプチドはインビ
ボではエキソペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼによって迅速に分解される
ので、生物学的半減期は一般に極めて短い。潜在的治療剤としてのペプチドのも
う１つの欠点は、経口投与によるバイオアベイラビリティが欠如していることで
ある。胃腸路におけるタンパク質分解酵素によるペプチドの分解がおそらく重大
な原因だろう。しかし問題はさらに複雑である。なぜなら、迅速な代謝的不活化
を受けない小さな環状ペプチドでさえ、不十分な経口バイオアベイラビリティし
か示さないことがわかっているからである。これはおそらく、腸管膜を横切る輸
送が不十分であることと、肝抽出および引き続いて起こる腸への排出による血液
からの迅速なクリアランスによるのだろう。これらの知見から、複数のアミド結
合は経口バイオアベイラビリティの障害になるらしいことが示唆される。ペプチ
ド薬を経口投与すると、ペプチド鎖中のアミノ酸残基をつないでいるペプチド結
合は切り離されると考えられている。

【０１００】 ペプチドミメティックの設計および合成にはいくつかの異なるアプローチがあ
る。ＳｈｅｒｍａｎおよびＳｐａｔｏｌａ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１
１２：４３３（１９９０）に開示されているような１つのアプローチでは、１ま
たは複数のアミド結合が、基本的には等配電子的に、様々な化学官能基で置換さ
れている。この段階的アプローチは、活性類似体が得られたという点で、ある程
度の成功を収めている。いくつかの例では、これらの類似体は、対応する天然物
よりも長い生物学的半減期を持つことが示されている。しかしながらこのアプロ
ーチには限界がある。２以上のアミド結合の置換が成功することはまれであった
。そのため、結果として得られる類似体は、分子中のどこか他の部位が酵素によ
る不活化を受けやすいままだった。ペプチド結合を置換する場合、新しいリンカ
ー部分は、ペプチド結合と実質的に同じ電荷分布および実質的に同じ平面性を持
つことが好ましい。

【０１０１】 ペプチド結合が逆になっているレトロ−インバースペプチドミメティックは、
当技術分野で知られた方法、例えばＭｅｚｉｅｒｅら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ．１５９，３２３０−３２３７に記載の方法などによって合成することが
できる。このアプローチでは、側鎖の向きに変化はないが主鎖が変化している偽
ペプチドが作製される。ＣＯ−ＮＨペプチド結合の代わりにＮＨ−ＣＯ結合を含
有するレトロ−インバースペプチドは、タンパク質分解に対してはるかに高い耐
性を持つ。

【０１０２】 もう１つのアプローチでは、Ｄ−アミノ酸やＮ−メチルアミノ酸など、遺伝暗
号によってコードされない種々のアミノ酸または種々の修飾アミノ酸を使って、
哺乳類ペプチドが修飾されている。もう１つの選択として、例えば環化などの共
有結合的修飾によってまたはγ−ラクタムもしくは他のタイプの架橋の組み込み
によって、推定される生物活性コンフォメーションを安定化することも行われて
いる。例えばＶｅｂｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，
７５：２６３６（１９７８）およびＴｈｕｒｓｅｌｌら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１１１：１６６（１９８３）を参照されたい
。

【０１０３】 合成戦略の多くに共通するテーマは、ペプチドに基づくフレームワークに何ら
かの環状部分を導入することである。環状部分はペプチド構造のコンフォメーシ
ョン空間を制限し、それは多くの場合、特定の生物学的レセプターに対するその
ペプチドの親和性を増大させる。この戦略のもう１つの利点は、ペプチドへの環
状部分の導入により、細胞性ペプチダーゼに対する感受性が低下したペプチドが
得られる可能性もあることである。

【０１０４】 環状安定化ペプチドミメティックを合成する１つのアプローチは、閉環メタセ
シス（ＲＣＭ）である。この方法には、ペプチド前駆体を合成する工程と、それ
をＲＣＭ触媒と接触させてコンフォメーションが制限されたペプチドを得る工程
とが含まれる。適切なペプチド前駆体は２以上の不飽和Ｃ−Ｃ結合を含有するだ
ろう。この方法は固相ペプチド合成法を使って行うことができる。この態様では
、固相に固定された前駆体をＲＣＭ触媒と接触させ、次に生成物を固相から切り
離して、コンフォメーションが制限されたペプチドを得る。

【０１０５】 アミノ酸残基のうち１または複数が、ポリペプチドの合成前または合成後に、
化学的に修飾されたポリペプチドは、そのポリペプチドの機能（すなわちインビ
ボでの特異的免疫応答の発生）が実質的に変化していない限り、抗原として使用
することができる。そのような修飾には、酸または塩基（特に生理学的に許容で
きる有機または無機酸および塩基）との塩の形成、末端カルボキシル基のエステ
ルまたはアミドの形成、およびＮ−ｔ−ブトキシカルボニルなどのアミノ酸保護
基の結合などがある。このような修飾により、ポリペプチドはインビボでの代謝
作用から保護されるだろう。

【０１０６】 本発明は、もう１つの側面として、（１）ＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の細胞内
調節剤（例えば細胞内阻害剤または細胞内増進剤）と、（２）抗原分子を含むま
たは抗原分子をコードする抗原部分とを含んでなる、パーツキット（a kit of p
arts）またはキメラ分子の組成物を提供する。

【０１０７】 本発明のさらなる一側面は、上に定義したように、ＮＦ−κＢ阻害または活性
化／誘導部分と抗原部分とを含んでなる、パーツキット、組成物またはキメラ分
子（例えばキメラポリペプチド）からなる。

【０１０８】 本発明のこれらの側面では、どちらかの部分または両方の部分が、さらに、移
行（translocating）部分および／または細胞結合部分を含んでもよい。細胞結
合部分は樹状細胞またはその前駆細胞への結合能を持つことが好ましい。移行部
分は当該分子または少なくとも抗原部分、そして好ましくはシグナル伝達阻害ま
たは増進部分の内在化を促進するだろう。したがって、外部から適用されるペプ
チドを、ＨＩＶ ｔａｔペプチドに連結することができる。これにより、それら
のペプチドはＭＨＣクラスＩ経路に誘導されて、ＣＴＬに提示されるだろう（例
えば、Ｋｉｍら（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９，１６６６−１６６８
を参照されたい）。本発明に従って適合させることができるキメラ分子はＷＯ９
５／３１４８３に記載されている。

【０１０９】 樹状細胞はＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０、ＣＤ１ａ、ＨＬＡ−ＤＲおよび／
またはＣＤ８３細胞表面分子の発現によって特徴付けることができる。未成熟樹
状細胞はＣＤ３４⁺ またはＣＤ１４⁺ でありうる。したがって、細胞結合部分は
これらの細胞表面分子の１または複数に結合する能力を持つことができる（例え
ばそのような分子に結合する能力を持つ抗体）。

【０１１０】 未成熟ＤＣは増大した抗原捕捉および抗原プロセシングを示す。未成熟ＤＣは
、高レベルの細胞内ＭＨＣクラスＩおよびＩＩの増大したエンドサイトーシスお
よび食作用、高レベルのＣＣＲ１、ＣＣＲ５およびＣＣＲ６、低レベルのＣＣＲ
７、高レベルのＣＤ６８、低レベルのＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ８０、ＣＤ８３
およびＣＤ８６を示し、ＤＣ−ＬＡＭＰは認められない。

【０１１１】 成熟ＤＣは増大した抗原プロセシングを示す。成熟ＤＣは高レベルの表面ＭＨ
ＣクラスＩおよびＩＩ、弱いエンドサイトーシスおよび食作用、低レベルのＣＣ
Ｒ１、ＣＣＲ５およびＣＣＲ６、高レベルのＣＣＲ７、低レベルのＣＤ６８、高
レベルのＣＤ４０、ＣＤ５４、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８３およびＣＤ８６、
高レベルのＤＣ−ＬＡＭＰ、ならびに高レベルのｐ５５ファシン（fascin）を示
す。

【０１１２】 上述の細胞結合部分は、本明細書に記載するような任意の阻害剤または活性化
剤（例えば核酸、ＤＮＡワクチンまたは抗体）を、ＤＣまたは未成熟ＤＣなどの
ＡＰＣに誘導するのに役立つだろう。

【０１１３】 上記ポリヌクレオチドまたはＤＮＡワクチンは、好ましくは患者の体内で、さ
らに好ましくは患者のＡＰＣ（例えばＤＣまたは未成熟ＤＣ）内で、コードされ
たアンチセンス分子または１もしくは複数のポリペプチドを発現させる能力を持
つ。アンチセンス分子または１もしくは複数のポリペプチド（例えばＮＦ−κＢ
阻害剤もしくは誘導剤／活性化剤または抗原）は、適宜、本明細書に記載するよ
うに任意の適切なポリヌクレオチド（遺伝子コンストラクト）から発現させ、患
者に送達することができる。通例、アンチセンス分子またはポリペプチドを発現
させる遺伝子コンストラクトは、プロモーターに作動的に連結された当該ポリペ
プチドをコードする配列を含み、それは患者の細胞内で転写されたポリヌクレオ
チド（例えばｍＲＮＡ）分子を発現させ、それがさらに翻訳されて当該ポリペプ
チドが合成される。適切なプロモーターは当業者にはわかるだろう。適切なプロ
モーターは、当該ポリペプチドを発現させることが望ましい場所（例えば樹状細
胞またはその前駆細胞中）に依存して、遍在的に発現される例えばハウスキーピ
ング遺伝子のプロモーターであっても、組織特異的遺伝子のプロモーターであっ
てもよい。好ましくは、樹状細胞または樹状細胞前駆細胞選択的プロモーターを
使用するが、これは必須ではなく、ポリヌクレオチドの送達または取り込みが選
択された細胞（すなわち樹状細胞または前駆細胞）にターゲティング（targeted
）される場合は特にそうである。

【０１１４】 樹状細胞に選択性を示すであろうプロモーターとして、ＣＤ３６またはＣＤ８
３遺伝子に由来するプロモーターが挙げられる。

【０１１５】 特定の細胞集団（例えば抗原提示細胞）へのワクチンのターゲティングは、例
えば、注射部位によって、ターゲティングベクターおよび送達システムの使用に
よって、または患者からそのような細胞集団を選択的に精製してペプチドもしく
は核酸をエクスビボで投与すること（例えば樹状細胞はＺｈｏｕら（１９９５）
Ｂｌｏｏｄ ８６，３２９５−３３０１、Ｒｏｔｈら（１９９６）Ｓｃａｎｄ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４３，６４６−６５１に記述されているように選別
することができる）によって達成することができる。さらにターゲティングベク
ターは、抗原を適切な場所で発現させる組織または腫瘍特異的プロモーターを含
んでもよい。

【０１１６】 上記のように誘導性プロモーターを使用することは望ましいだろう。細胞内で
の１もしくは複数のポリペプチド（例えばＮＦ−κＢ阻害剤または活性化剤／誘
導剤）の発現を時間的に調節できることが望ましい場合があることは理解される
だろう。したがって、１もしくは複数のポリペプチドの発現は、直接または間接
的（下記参照）に、例えば当該ポリペプチドの発現を、小分子がプロモーターの
活性化または抑制に作用するのに依存して活性化または抑制することが望ましい
時に患者に投与することができる小分子の濃度によって調節することが可能なプ
ロモーターの制御下にあることが望ましいかもしれない。発現コンストラクトが
安定である場合、すなわち発現コンストラクトが当該細胞内で少なくとも１週間
または１、２、３、４、５、６、８ヶ月もしくはそれ以上にわたって（任意の必
要な調節分子の存在下に）ポリペプチドを発現させる能力を持つ場合には、これ
が特に有益でありうることは理解されるだろう。本発明の好ましいコンストラク
トは調節可能なプロモーターを含みうる。調節可能なプロモーターの例には、以
下の論文に挙げられているものがある：Ｒｉｖｅｒａら（１９９９）Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９６（１５），８６５７−６２（経口バ
イオアベイラビリティを持つ薬物であるラパマイシンによる制御；一方が誘導性
ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）ターゲット遺伝子をコードし、他方が二極性ラパマ
イシン調節転写因子をコードする２つの独立したアデノウイルスまたはアデノ随
伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを使用）、Ｍａｇａｒｉら（１９９７）Ｊ Ｃｌ
ｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １００ （１１），２８６５−７２（ラパマイシンによる
制御）、Ｂｕｅｌｅｒ（１９９９）Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ３８０（６），６１３
−２２（アデノ随伴ウイルスベクターの総説）、Ｂｏｈｌら（１９９８）Ｂｌｏ
ｏｄ ９２（５），１５１２−７（アデノ随伴ベクターにおけるドキシサイクリ
ンによる制御）、Ａｂｒｕｚｚｅｓｅら（１９９６）Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ７４
（７），３７９−９２（誘導因子、例えばホルモン、成長因子、サイトカイン、
細胞分裂抑制剤、放射線照射、熱ショック、および関連応答配列の総説）。テト
ラサイクリン誘導性ベクターも使用することができる。これらは、哺乳類細胞培
養における発現の制御に有用であることが示されている比較的毒性の低い抗生物
質によって活性される。ステロイド系誘導剤も役立つだろう。その理由はとりわ
け、ステロイドレセプター複合体は、ＤＮＡベクターが転写に先立って隔離され
なければならない核内に進入するからである。

【０１１７】 この系は、２つのレベルで発現を調節することにより、例えば組織特異的プロ
モーターと、外因性誘導剤／抑制剤（例えば上述したような当業者に知られてい
る小分子）によって制御されるプロモーターとを使用することにより、さらに改
良することができる。したがって、１つの調節レベルとして、適当なポリペプチ
ドコード遺伝子を誘導性プロモーターに連結すると共に、もう１つの調節レベル
として、必要な誘導性転写因子（誘導性プロモーターからのポリペプチドの発現
（例えばＮＦ−κＢ阻害剤または誘導剤／活性化剤コード遺伝子）を制御するも
の）をコードする遺伝子の駆動に、組織特異的プロモーターを使用する。制御は
、遺伝子コンストラクトの細胞タイプ特異的ターゲティングによってさらに改善
することができる。

【０１１８】 本発明の方法またはコンストラクトは、丸ごとの動物で評価する前に、当業者
には知られているように、例えばインビトロで生成したＡＰＣ（樹状細胞など）
で評価することができる。適切な方法を実施例１に説明する。

【０１１９】 本発明の遺伝子コンストラクトは、当技術分野で周知の方法を使って製造する
ことができる。

【０１２０】 本発明は、さらにもう１つの側面として、本発明で使用されるベクター、ワク
チンおよび抗体を提供する。

【０１２１】 本発明のワクチンおよびベクター（本発明の治療用分子）は適切な薬学的に許
容できる担体、充填剤または他の添加剤を使って製剤化することができる。それ
らは、例えば筋肉内投与、静脈内投与、経口投与、直腸内投与、鼻腔内投与など
、任意の適切な手段によって投与することができる。皮下または筋肉内投与は好
ましいだろう。誘導剤、例えば上述したような小分子誘導剤は、好ましくは経口
投与することができることは理解されるだろう。

【０１２２】 標的細胞を含む領域を、治療用分子（例えば遺伝子コンストラクト）を含む適
切な送達媒体（vehicle）で、ある期間にわたって局所的に灌流することが望ま
しいかもしれない。これに加えて、またはこれに代えて、送達媒体または治療用
分子を、標的細胞を含む到達可能な領域に直接注射（例えば皮下注射）すること
もできる。遺伝子コンストラクト（例えばアデノウイルスベクターコンストラク
ト）を患者の細胞に送達する方法は、当業者にはよく知られているだろう。

【０１２３】 特に、養子免疫治療プロトコール（adoptive therapy protocol）を使用する
か、または遺伝子銃を使用して、例えば皮膚中の樹状細胞にコンストラクトを送
達することができる。

【０１２４】 養子免疫治療は、（１）抗原提示細胞またはその前駆細胞（好ましくは樹状細
胞またはその前駆細胞）を患者から得る工程、（２）前記抗原提示細胞を、エク
スビボで、本明細書に記載のＮＦ−κＢ阻害剤または誘導剤／活性化剤と接触さ
せ、また所望により、免疫応答を必要とする抗原または上述したようなキメラ分
子もしくはポリヌクレオチドとも接触させる工程、ならびに（３）そのように処
理した抗原提示細胞を患者に再導入する工程を含みうる。

【０１２５】 樹状細胞は１もしくは複数のポリペプチド（例えばＮＦ−κＢ活性化剤および
抗原）をパルスした自己樹状細胞であるとよい。腫瘍関連抗原由来のペプチドを
パルスした自己樹状細胞を用いるＴ細胞治療は、Ｍｕｒｐｈｙら（１９９６）Ｔ
ｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ２９，３７１−３８０およびＴｊｕａら（１９９７）
Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ３２，２７２−２７８に開示されている。

【０１２６】 さらなる一態様では、抗原提示細胞（例えば樹状細胞）を、ＮＦ−κＢ阻害剤
または活性化剤／誘導剤をコードするポリヌクレオチドと接触させる。このポリ
ペプチドは任意の適切なポリヌクレオチドであってよいが、樹状細胞を形質導入
して抗原提示細胞による抗原提示の活性化または阻害をそれぞれもたらす能力を
持つことが好ましい。

【０１２７】 好都合なことに、本ポリヌクレオチドは、上記のようにウイルスポリヌクレオ
チドまたはウイルスに含ませることができる。例えば、アデノウイルスで形質導
入した樹状細胞は抗原特異的抗腫瘍免疫を誘導することが、ＭＵＣ１に関して示
されている（Ｇｏｎｇら（１９９７）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４，１０２３−１０
２８を参照されたい）。同様に、アデノウイルスに基づく系を使用することがで
きる（例えばＷａｎら（１９９７）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８，１３５５
−１３６３を参照されたい）。また、レトロウイルス系も使用することできる
（Ｓｐｅｃｈｔら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６，１２１３−１２２
１およびＳｚａｂｏｌｃｓら（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ９０，２１６０−２１６
７）。また、粒子を使った樹状細胞への導入も使用することができる（Ｔｕｔｉ
ｎｇら（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７，２７０２−２７０７）
。また、ＲＮＡも使用することができる（Ａｓｈｌｅｙら（１９９７）Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１８６，１１７７−１１８２）。

【０１２８】 樹状細胞などのＡＰＣを患者から得るか（すなわち自己樹状細胞）、または健
康な１または複数の個体（ＭＨＣ適合者またはＭＨＣ非適合者）から得て、上記
のようにインビトロで処理した後、養子免疫治療（すなわち、そのように操作し
た樹状細胞を生体内に導入すること）を行うことによって、ＣＴＬ応答を活性化
することができる。「健康な個体」という用語は、ここでは、その個体が概して
良好な健康状態にあり、好ましくはコンピテントな免疫系を持ち、より好ましく
は容易に検査し検出することができる疾患にはかかっていないことを意味する。

【０１２９】 したがって本発明の方法には、養子免疫治療の方法が含まれる。

【０１３０】 患者には約１０³ 〜１０¹¹個のＤＣを投与すれば好ましく、１０⁶ 〜１０⁷ 個
のＤＣを投与すれば、より好ましい。

【０１３１】 ＤＣなどのＡＰＣは任意の簡便な経路で投与することができる。ＤＣを静脈内
投与すれば好ましい。また、ＤＣを疾患（例えば腫瘍または局所ウイルスもしく
は細菌感染）部位に局所的に投与することも好ましい。局所投与は癌にはとりわ
け好ましい。ＤＣは疾患部位または疾患が存在する組織に注ぎ込んでいる動脈中
に投与すると便利である。

【０１３２】 上記の細胞（またはワクチン）は、他の何らかの方法による疾患の処置を受け
ている患者に与えることができる。したがって、上記処置方法は単独でも使用で
きるが、これを補助療法として使用することは望ましい。

【０１３３】 ＤＣなどのＡＰＣまたはワクチンは、他の治療の前に、または他の治療中に、
または他の治療後に投与することができる。

【０１３４】 処置すべき疾患が癌である場合は、本発明の方法による処置に加えて、その癌
が従来の治療法または外科手術によって既に処置されているか、現在処置中であ
るか、または後に処置される予定であれば好ましい。治療法によっては癌を放射
線療法または化学療法によって処置すると好都合である。

【０１３５】 処置すべき疾患が病原体による感染である場合は、その感染が従来の治療法ま
たは外科手術によって既に処置されているか、現在処置中であるか、または後に
処置される予定であれば好ましい。

【０１３６】 処置すべき患者がＨＩＶに感染している場合は、他の処置（例えば、ＡＺＴも
しくは３ＴＣなどの逆転写酵素阻害剤による処置、またはＨＡＲＴ（高活性レト
ロウイルス療法）などの複合療法）に対する補助治療として本発明の方法を使用
すれば好ましい。

【０１３７】 本発明の方法を固形（solid）腫瘍の処置に使用する場合は、ＤＣなどのＡＰ
Ｃまたはワクチンを最初の手術後処置として投与すれば望ましい。

【０１３８】 本発明の方法を白血病の処置に使用する場合は、ＤＣなどのＡＰＣまたはワク
チンを放射線療法後または化学療法後に投与すれば好ましい。また、白血病患者
には骨髄移植と組み合わせてＤＣによる処置も行えば好ましい。

【０１３９】 癌治療、例えば養子免疫療法は、塊状病変の縮小ではなくむしろ微小残存病変
の管理または除去に最も効果的だろう。免疫療法は、細胞傷害性Ｔ細胞の流入に
より、塊状病変の寸法を一時的に増加させるかもしれないと考えられる。治療後
に病変の程度と嵩を監視することはできるが、正式なエンドポイントとしては使
用できない。長期有害事象が発現しないことを保証するために、定型的な方法で
患者を長期間にわたって追跡する。

【０１４０】 他の送達またはターゲティング法として以下の方法を挙げることができる。培
養細胞または生体内の細胞への圧縮空気によるＤＮＡ／タンパク質被覆ナノ粒子
の射撃貫入（例えばＢｉｏＲａｄの装置を用いる方法）を使用することができる
。送達用コンストラクトは好ましくは細胞タイプ特異的プロモーターを持つべき
である。

【０１４１】 非経口投与に適した製剤には、水性および非水性滅菌注射溶液（抗酸化剤、緩
衝液、静菌剤および当該製剤を意図する受容者の血液と等張性にする溶質を含み
うる）ならびに水性および非水性滅菌懸濁液（懸濁化剤および増粘剤を含みうる
）が含まれる。製剤は１回量または多用量容器、例えば密封したアンプルおよび
バイアルに入れて提供することができ、使用直前に滅菌液状担体（例えば注射用
水）を添加するだけでよい凍結乾燥状態で保存することができる。即時調製注射
溶液および懸濁液は、当業者によく知られている種類の滅菌粉末、滅菌顆粒およ
び滅菌錠剤から調製することができる。鼻スプレーは有用な形式である。

【０１４２】 例えばコンストラクトの用量は、コンストラクトのサイズや、それを投与する
目的などに依存する。一般的には処置すべき組織の表面積に基づいて用量範囲を
計算することができる。コンストラクトの有効量はコンストラクトのサイズおよ
び使用する送達媒体／ターゲティング法およびオリゴヌクレオチドの化学組成に
依存するだろうが、当業者は、例えば上記の動物試験系およびインビトロ試験系
から得られるデータなどを利用して、適切な用量を決定することができる。

【０１４３】 例えばコンストラクトは、治療目的でも予防目的でも、患者に全身投与するこ
とができる。例えばコンストラクトは、上述したように任意の有効な方法により
、例えば非経口（例：静脈内、皮下、筋肉内）投与によって、または経口投与、
鼻腔内投与、または例えばコンストラクトが患者の血流に到達し循環することを
可能にする他の手段によって投与することができる。コンストラクトの全身投与
はコンストラクトの局所投与と共に行われることが好ましいが、局所投与を行わ
ない場合でもコンストラクトの全身投与は有益である。

【０１４４】 樹状細胞による核酸の取り込みおよびその核酸によってコードされるポリペプ
チドの発現は、免疫応答の開始（priming）の機序であると考えられる。トラン
スフェクションされない樹状細胞もあるだろうが、それらの樹状細胞も重要であ
る。なぜなら、それらの樹状細胞は組織中のトランスフェクト細胞から発現され
たペプチドを拾い上げることができるからである。

【０１４５】 ＤＮＡワクチンなどのワクチンは筋肉に投与すれば好ましい。また、ワクチン
を皮膚上または皮膚中に投与することも好ましい。

【０１４６】 上記のように本発明は、（１）ＮＦ−κＢ阻害剤または誘導剤を含むまたはコ
ードする調節部分と（２）抗原分子を含むまたはコードする抗原部分とを含む、
パーツキットまたは組成物またはキメラ分子を提供する。

【０１４７】 上述した本発明の任意の側面、特に上述したワクチンまたは上述のキット、キ
メラ分子または組成物に関して、抗原分子は、形質転換細胞もしくは癌細胞上ま
たは病原生物上または病原生物に感染した細胞上に存在するエピトープを含むこ
とが好ましい。

【０１４８】 したがって本発明は、上述したようなＮＦ−κＢ誘導剤もしくは他のＡＰＣ機
能誘導剤またはＮＦ−κＢ誘導剤もしくは他のＡＰＣ機能誘導剤をコードするポ
リヌクレオチドの有効量を含む、癌または癌もしくは腫瘍細胞または病原生物も
しくは病原生物に感染した細胞に対して有効なワクチンを提供する。本ワクチン
は、好ましくは、癌もしくは腫瘍細胞または病原生物または病原生物に感染した
細胞上に存在するエピトープを持つ抗原または抗原をコードするポリヌクレオチ
ドをさらに含む。本ワクチンは好ましくは核酸ワクチンである。

【０１４９】 本発明は、さらなる一側面として、本発明の上記側面のいずれかのＮＦ−κＢ
誘導剤、ＮＦ−κＢ阻害剤、ワクチン、分子、ポリヌクレオチド、パーツキット
、組成物またはキメラ分子と薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物を提供
する。

【０１５０】 さらに本発明は、医薬用の、本発明の上記側面のワクチン、分子、ポリヌクレ
オチド、パーツキット、組成物またはキメラ分子を提供する。さらに本発明は、
抗原提示の調節を必要とする患者を処置するための医薬の製造における、本発明
の上記側面のいずれかのワクチン、分子、ポリヌクレオチド、パーツキット、組
成物またはキメラ分子の使用を提供する。

【０１５１】 患者内の、第１エピトープ（first epitope）を異常に発現させる標的細胞を
死滅させる方法であって、（１）前記患者からＡＰＣ（樹状細胞など）を得る工
程、（２）前記ＡＰＣ（樹状細胞など）をＡＰＣ（例えばＤＣ）機能の増進剤と
エクスビボで接触させる工程、（３）所望により、前記細胞を前記エピトープま
たは前記エピトープをコードするポリヌクレオチドもしくは発現ベクターと接触
させる工程、および（４）そのように処理したＡＰＣ（樹状細胞など）を患者に
再導入する工程を含む方法を、本発明が提供することは明らかだろう。

【０１５２】 患者内の、第１エピトープを異常に発現させる標的細胞を死滅させる方法であ
って、（１）前記患者から樹状細胞を得る工程、（２）前記樹状細胞をＮＦ−κ
Ｂ誘導剤とエクスビボで接触させる工程、（３）所望により、前記細胞を前記エ
ピトープまたは前記エピトープをコードするポリヌクレオチドもしくは発現ベク
ターと接触させる工程、および（４）そのように処理した樹状細胞を患者に再導
入する工程を含む方法を、本発明が提供することも明らかだろう。

【０１５３】 標的細胞は癌細胞であってよい。

【０１５４】 また本発明は、有効量のＮＦ−κＢ阻害剤またはＮＦ−κＢ誘導剤を投与する
ことからなる、樹状細胞の成熟および活性化をインビボまたはインビトロで阻害
または刺激する方法も提供する。

【０１５５】 阻害剤または誘導剤は上に定義した通りであってよい。

【０１５６】 疑義が生じないように述べておくと、１もしくは複数の「樹状細胞」という用
語を使用する場合、この用語は、文脈上別段の示唆がない限り、任意の適切な抗
原提示細胞を包含する。抗原提示細胞は樹状細胞であることが好ましい。

【０１５７】 本発明の好ましい態様を以下に説明する。

【０１５８】 材料と方法 １．試薬類 ヒト組換えＧＭ−ＣＳＦおよびＴＮＦαはそれぞれＧｌｅｎｎ Ｌａｒｓｅｎ
博士（ＧＩ）およびＤ．Ｔｒａｃｅｙ博士（ＢＡＳＦ）のご厚意によりいただい
たものである。ヒト組換えＩＬ−４はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（米国、ミネアポ
リス）から購入した。ＰＭＡ、ＬＰＳおよびイオノマイシンはＳｉｇｍａ Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（米国、セントルイス）から入手した。プロテアソーム阻
害剤Ｃｂｚ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ａｌａ−セレマール（ｃ
ｅｒｅｍａｌ）（ＰＳＩ）はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ（英国、ノッティンガム）か
ら入手した。Ｍ−ＣＳＦはＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（米国、ボス
トン）から入手した。

【０１５９】 ２．末梢血単核細胞の調製 健康なボランティアから得られる白血球分離残渣の密度遠心分離によって、末
梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を得た（Ｎｏｒｔｈ Ｌｏｎｄｏｎ Ｂｌｏｏｄ Ｔ
ｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ（英国コリンデール））。ヘパリン処理
した残渣をＨＢＳＳで２倍希釈し、そのうちの２５ｍｌを、５０ｍｌ滅菌チュー
ブに入った等体積のフィコール−ハイパックリンフォプレップ（Ｎｙｃｏｍｅｄ
（ノルウェー・オスロ））に注意深く重層した後、室温にて２０００ｒｐｍで３
０分間遠心分離した。遠心分離後、界面層を収集し、ＨＢＳＳで２回洗浄（２０
００ｒｐｍで１０分間遠心分離）した。次にＰＢＭＣを収集し、５％ＦＣＳを含
む３０ｍｌのＲＰＭＩに再懸濁した。

【０１６０】 ３．末梢血Ｔ細胞および単球の単離およびＨｅＬａ細胞の培養 Ｂｅｃｋｍａｎ ＪＥ６エルトリエーターでの細胞間分離後、ＰＢＭＣから末
梢血Ｔ細胞および単球を得た。エルトリエーションは１％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ
（エルトリエーション培地）で行った。リンパ球と単球の純度は、ＣＤ４５、Ｃ
Ｄ３、ＣＤ１４およびＣＤ１９に対する蛍光団結合抗ヒトモノクローナル抗体を
使ったフローサイトメトリーによって評価した（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓ
ｏｎ（英国、オックスフォード））。Ｔリンパ球画分は通例、約８０％のＣＤ３
発現細胞、約６％のＣＤ１９発現細胞および１％未満のＣＤ１４発現細胞を含有
した。単球画分は常に８５％を超えるＣＤ１４発現細胞、０．５％未満のＣＤ１
９細胞および３％未満のＣＤ３発現細胞から構成された。ＨｅＬａ細胞は５％Ｆ
ＣＳ、１％ペニシリン／ストレプトマイシンＤＭＥＭ中に維持した。

【０１６１】 ４．アデノウイルス感染のためのＭ−ＣＳＦによる単球の分化 アデノウイルス感染を最適化するために、エルトリエーションを行ったばかり
の単球を、１０ｃｍペトリ皿（Ｆａｌｃｏｎ（英国））中、１００ｎｇ／ｍｌの
Ｍ−ＣＳＦ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（米国ボストン））と共に
、１×１０⁶ 細胞／ｍｌで培養した。２〜３日後にそれらをＰＢＳで洗浄して非
付着細胞を除去し、残りの付着単球を１０ｍｌの細胞解離液（Ｓｉｇｍａ（英国
））と共に３７℃で１時間インキュベートした。５％ＦＣＳを含むＲＰＭＩで細
胞懸濁液を２回洗浄し、トリパンブルー排除法によって細胞生存度（９０％）を
評価した。この段階の細胞はＦＡＣＳ染色で９９％ＣＤ１４陽性だった。これを
、さらなる実験のために、２４穴または４８穴平底組織培養プレート（Ｆａｌｃ
ｏｎ（英国））中、１×１０⁶ ／ｍｌで培養した。

【０１６２】 ５．単球から樹状細胞への分化 エルトリエーションを行ったばかりの単球を、１０ｃｍペトリ皿（Ｆａｌｃｏ
ｎ（英国））中、５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−
４を補足した５％ＦＣＳ ＲＰＭＩで、５〜６日間培養した。３日目にサイトカ
インを補給した。この方法には、血液または骨髄前駆細胞から直接的に樹状細胞
を分化させる方法と比較して、いくつかの利点がある。容易であり多数の細胞が
得られるだけでなく、この方法では安定な「未成熟ＤＣ」表現型を持つ均一な細
胞集団が得られる。この表現型は、ＴＮＦα（１０ｎｇ／ｍｌ）、ＬＰＳ（１０
０ｎｇ／ｍｌ）または単球調整培地（５０％ｖ／ｖ）をさらに２〜３日間ＤＣに
添加することによって、成熟させることができる。

【０１６３】 ６．単球調整培地 Ｉｇ被覆プレート（１００ｍｍ、Ｆａｌｃｏｎ）を、５ｍｌのヒトγ−グロブ
リン（１０ｍｇ／ｍｌ、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）を１０分間添
加することにより、使用直前に調製した。そのプレートを使用前にＲＰＭＩ１６
４０培地（無血清）で３回洗浄した。エルトリエーションにかけた単球（３×１
０⁷ 個）を７ｍｌの液量でＩｇ被覆プレートに１時間重層した。非付着細胞を洗
い流し、γ−グロブリン付着細胞を、新鮮な完全ＲＰＭＩ１６４０培地中、３７
℃で２４時間インキュベートした。

【０１６４】 ７．アデノウイルスベクターとその増殖 大腸菌β−ガラクトシダーゼをコードする組換え複製欠損アデノウイルスベク
ター（Ａｄβ−ｇａｌ）またはインサートを持たない組換え複製欠損アデノウイ
ルスベクター（Ａｄ０）はＡ．Ｂｙｒｎｅｓ博士とＭ．Ｗｏｏｄ博士（英国オッ
クスフォード大学）から提供された。ＧＦＰ発現アデノウイルス（ＡｄＧＦＰ）
は、Ｂ．Ｖｏｇｅｌｓｔｅｉｎ教授（Ｈｏｗａｒｄ Ｈｕｇｅｓ Ｍｅｄｉｃａ
ｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（メリーランド州バルチモア））によって提供されたＡ
ｄＥａｓｙ−１アデノウイルスプラスミドによるＡｄＴｒａｃｋの二重組換えに
よって作製した。ＡｄＭｙＤ８８ｗｔおよびＡｄＭｙＤ８８ｌｐｒはＸｕ博士
（テキサス大学サウスウェスタン）およびＫ．Ｂｕｒｎｓ博士（スイス・ローザ
ンヌ）によって提供されたプラスミドから作製した。具体的には、ＡｄＭＥＫＫ
−１ｗｔにはｐＡｄＴｒａｃｋＣＭＶを使用し、ＡｄＭｙＤ８８ｗｔおよびＡｄ
ＭｙＤ８８ｌｐｒには、ＡｄＴｒａｃｋ．ＣＭＶＫＳ１７と呼ばれるｐＡｄＴｒ
ａｃｋ．ＣＭＶベクター誘導体を使用した。ｐＡｄＴｒａｃｋ．ＣＭＶＫＳ１７
は、ＡｄＴｒａｃｋ．ＣＭＶのＥｃｏＲＩとマルチクローニング部位（ＭＣＳ）
とを除去し、かつベクターｐＢＣＳＫ（＋）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）の大きい
マルチクローニング部位を挿入することによって構築した。組換えウイルスは、
熱ショック法により１μｇの直線化ｐＡｄＴｒａｃｋ．ＣＭＶ−ＭＥＫＫ１ｗｔ
、ＡｄＴｒａｃｋ．ＣＭＶＫＳ１７−ＭｙＤ８８ｗｔまたはＡｄＴｒａｃｋ．Ｃ
ＭＶＫＳ１７−Ｍｙ８８ｌｐｒコンストラクトおよび１００ｎｇの複製欠損アデ
ノウイルスベクターｐＡｄＥａｓｙ−１で形質転換したＢＪ５１８３細菌細胞中
で生成させた。陽性組換えクローンをカナマイシンに対するそれらの耐性によっ
て選択した。選択に続いて、抽出したＤＮＡを、２９３ヒト胎児腎細胞における
ウイルス増殖に使用した。ウイルスは、Ｈｅら（Ｈｅ Ｔ．Ｃ．ら（１９９８）
Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８１：１５０９−１２）に記載されているように、２つの塩
化セシウム勾配を通した超遠心分離によって精製した。ウイルス保存液の力価は
、ＨＥＫ２９３細胞でのプラーク測定法により、無血清ＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃ
ｏ ＢＲＬ）中で１時間暴露した後、（１．５％）アガロース／（４％ＦＣＳを
含む２×ＤＭＥＭ）混合物（１：１ｖ／ｖ）を重層し、１０〜１４日間培養する
ことによって決定した。（Ｈｅ Ｔ．Ｃ．ら（１９９８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８
１：１５０９−１２）。

【０１６５】 ９．細胞のアデノウイルス感染 Ｍ−ＣＳＦ分化マクロファージおよび未成熟または成熟樹状細胞を収集し、計
数し、再播種した。次に、それらを無血清ＲＰＭＩ中で、目的遺伝子を過剰発現
させる複製欠損アデノウイルスに感染させた。マクロファージと未成熟ＤＣには
１００、成熟ＤＣには３００の感染多重度を使用した。２時間後に、ウイルスを
取り除き、細胞を完全培地でさらに１〜２日間培養することにより、目的遺伝子
を過剰発現させた。次に、それらを使ってさらなる実験を行った。

【０１６６】 １０．抗原特異的Ｔ細胞系の樹立 緑色蛍光タンパク質はＣｌｏｎｔｅｃｈから購入した。抗原特異的ポリクロー
ナルＴ細胞系を樹立するために、１ｍｌあたり１×１０⁶ 個のＰＢＭＣを抗原（
緑色蛍光タンパク質の場合は１μｇ／ｍｌ、破傷風トキソイドの場合は５μｇ／
ｍｌ）と共に７日間培養した後、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２と共に、さらに１０
〜１４日間培養した。４日毎にＩＬ−２を補給した。これにより、抗原特異的Ｔ
細胞の増殖と、ＰＢＭＣ中に存在する他の大半の細胞集団の細胞死が起こった。
１７〜２１日間の培養後に、Ｔ細胞を自己照射ＰＢＭＣ（比率１：１）および新
しい抗原と共にＩＬ−２の不在下で培養することによる再刺激工程を含めた。４
日後に、ＩＬ−２をさらに１０〜１４日間加えた。この再刺激サイクルを少なく
とも４回繰り返した後、抗原特異的Ｔ細胞を以降の実験に使用した。

【０１６７】 １１．抗原特異的Ｔ細胞の増殖測定 抗原特異的Ｔ細胞系の特異性を評価するために、９６穴平底マイクロタイター
プレートで１×１０⁵ 個の抗原特異的Ｔ細胞を１×１０⁵ 個の自己照射ＰＢＭＣ
および様々な濃度の抗原と共に培養した。３日後に細胞に［³ Ｈ］チミジンを一
晩パルスし、翌日収集した。

【０１６８】 樹状細胞が誘導する抗原特異的Ｔ細胞増殖を測定するために、１×１０⁵ 個の
抗原特異的Ｔ細胞を、段階的な量の照射樹状細胞またはマイトマイシン処理樹状
細胞（未パルス、抗原パルス、未感染またはアデノウイルス感染細胞）と共に培
養した。［³ Ｈ］−チミジン取り込みを２日後に測定した。抗原特異的増殖測定
は全て３重に行った。

【０１６９】 １２．混合リンパ球反応（ＭＬＲ） 非照射または照射（¹³⁷ Ｃｓ線源からの３０００ｒａｄ）ＤＣの免疫賦活能（
immunostimulatory capacity）を測定するために、未感染、アデノウイルス感染
、ＬＰＳ処理または単球調整培地処理ＤＣを、段階的な量で、エルトリエーショ
ンによって分離した１×１０⁵ 個の同種異系Ｔ細胞と共に、９６穴平底マイクロ
タイタープレート（Ｆａｌｃｏｎ）中で４重に培養した。５日目に、［³ Ｈ］チ
ミジン（０．５μＣｉ／ウェル；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ
（英国））を１６時間パルスした後のチミジン取り込みによって、増殖を測定し
た。

【０１７０】 １３．サイトカイン分析 細胞を賦形剤または１μＭのＰＳＩで４時間前処理するか、アデノウイルスベ
クターに２時間感染させた。次にＰＳＩ処理ＤＣはそのまま直接実験に使用した
が、感染細胞の場合は関連タンパク質の過剰発現が起こるようにさらに２日間培
養した。細胞刺激の２４時間後に、培養上清を収集し、凍結保存した。ＴＮＦα
、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＩＦＮγに特異的なモノク
ローナルおよびポリクローナル抗体を使って、細胞培養上清中のサイトカインレ
ベルを、標準的な２または３層サンドイッチＥＬＩＳＡ法で測定した。これらの
アッセイ用の抗体ペアおよび標品は、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ
（米国ボストン）から寄贈されたＩＬ−１２試薬を除いて、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅ
ｎから購入した。

【０１７１】 １４．免疫蛍光染色およびフローサイトメトリー ＦＡＣＳ染色のために、まず細胞を収集した。表面レセプターが無傷である必
要がある付着細胞の場合は、温かい２％ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液を３７℃で２０分
間使用した。細胞を溶液中に移した後、氷冷ＦＡＣＳ洗浄緩衝液で１回洗浄し、
同緩衝液に再懸濁した。その後のインキュベーションは全て４℃で行った。各分
析につき５×１０⁵ 細胞を、関連抗原特異的抗体またはイソタイプ対照と共に３
０分間インキュベートしてから、ＦＡＣＳ洗浄緩衝液で２回洗浄した。次に細胞
をフローサイトメトリーによって調べた。細胞は、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ（Ｂｅｃ
ｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使ったＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（
Ｂｅｃｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）での解析にそのままかけられた。
ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ３、ＣＤ１４お
よびＣＤ２５に対する直接結合モノクローナル抗体はＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ（米
国、サンディエゴ）から購入した。

【０１７２】 １５．細胞質ゾルタンパク質抽出物の調製 シグナル変換に関与する生化学的事象をウェスタンブロット法で調べるために
、細胞質ゾル抽出物を調製した。付着細胞を組織培養プレート／フラスコから掻
き落として新しいＰＢＳに入れ、遠心分離（４℃、１３０００ｇで１０秒間）に
よって収集した。非付着細胞も同様に遠心分離でペレット状にして、新しいＰＢ
Ｓで１回洗浄した。上清を捨てた後、溶解しようとする細胞数に応じて（１×１
０⁶ 細胞につき５０〜１００μｌ）、適量の氷冷低張溶解緩衝液（Ｗｈｉｔｅｓ
ｉｄｅ Ｓ．Ｔ．ら （１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ ２０
：１５３１−８）を加えた。氷上で１０分間インキュベートした後、核および細
胞片を除去するために溶解物を遠心分離（１３０００ｇ、５分間、４℃）した。
次に、清澄化した溶解物を新しいチューブに取り出し、凍結し、タンパク質濃度
の見積もりとウェスタンブロット法での使用に備えて、−２０℃で保存した。

【０１７３】 １６．核タンパク質抽出物の調製 ＮＦ−κＢの活性化と細胞質ゾルから核への移行およびそのＤＮＡ結合能を研
究するために、核タンパク質抽出物を調製した。低張溶解緩衝液中で細胞を溶解
（第１５節参照）した後、核を遠心分離（４℃、１３０００ｇで５分間）でペレ
ットにし、混入している細胞質ゾルタンパク質を除去するために低張溶解緩衝液
中で１回洗浄し、次に高張抽出緩衝液に、撹拌しながら４℃で１〜２時間再懸濁
した。低張溶解緩衝液は溶解中にタンパク質が核外に浸出するのを防ぐ。これに
対し、高張抽出緩衝液は核膜を多孔性にして、核タンパク質を溶液中に流出させ
る。

【０１７４】 遠心分離後（４℃、１３０００ｇで１０分間）に、核タンパク質を含む上清を
新しいチューブに取り出し、−７０℃で保存した。この核抽出物調製法はＷｈｉ
ｔｅｓｉｄｅ Ｓ．Ｔ．ら（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
２０：１５３１−８に基づいている。

【０１７５】 １７．免疫沈降 ＩＲＡＫを免疫沈降させるために、細胞質ゾル抽出物を、穏やかに振とうしな
がら、３μｇの抗ＩＲＡＫ抗体と共に４℃で１時間インキュベートした。次に５
０μｌの５０％スラリープロテインＧセファロース（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を加え
、さらに２時間振とう放置した。次に、プロテインＧセファロースに結合したＩ
ＲＡＫを収集し、４回洗浄し、ウェスタンブロットローディング緩衝液に再懸濁
し、５分間煮沸した後、直ちにウェスタンブロッティングに使用した。

【０１７６】 １８．タンパク質濃度測定 以降の実験操作（例えばウェスタンブロッティング、電気泳動移動度シフト測
定など）では、細胞質ゾルまたは核抽出物の使用に先だって、各試料中に等量の
タンパク質が存在することを保証するために、タンパク質濃度を測定しておく必
要があった。タンパク質濃度はブラッドフォード法で評価した。簡単に述べると
、適当に希釈した抽出物２０μｌを、標品として使用する１０〜１０００μｇ／
ｍｌの範囲の一連のＢＳＡ濃度２０μｌ（Ｓｉｇｍａ（英国））と共に、９６穴
組織培養プレートに３重に添加した。次に２００μｌのブラッドフォード試薬を
各ウェルに加え、分光光度計（Ｍｕｌｔｉｓｃａｎ Ｂｉｃｈｒｏｍａｔｉｃ、
Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ）で、５９５ｎｍの吸光度を測定した。上記の範囲のＢＳ
Ａ濃度によって形成される直線的標準曲線から、細胞質ゾルおよび核抽出物中の
タンパク質量を決定した。

【０１７７】 １９．ウェスタンブロット法および電気泳動移動度シフト測定 １０％（ｗ／ｖ）ポリアクリルアミドゲルでのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって細胞
質ゾルタンパク質を分離した後、ニトロセルロース膜に電気転写した。ＩκＢα
とＩＲＡＫは、それぞれＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
（米国サンタクルーズ）およびＵｐｓｔａｔｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
（米国）から購入した抗体を使って検出し、リン酸化型のＩκＢα、ｐ３８およ
びｐ４２／４４ＭＡＰＫはＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓから入手し
た抗体によって検出した。

【０１７８】 結果 １．ＰＳＩはＤＣの免疫賦活機能を阻害する ＰＳＩはプロテオソーム活性の阻害剤であり、よって誘導されたＩκＢ分解と
続いて起こるＮＦ−κＢ活性化とを阻害する能力を持つ。我々は、ＰＳＩを使っ
て、樹状細胞（ＤＣ）活性におけるＮＦκＢの機能を、特に抗原提示およびＴ細
胞の活性化に関して調べた。我々は、ＰＳＩが１μＭまでの濃度でＮＦκＢの活
性化を阻害できることを先に示している。ＤＣ生存度に対するＰＳＩの効果を調
べるために、成熟ＤＣを０．１μＭ〜５μＭのＰＳＩ濃度でインキュベートした
。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色法によって判断すると、５μＭを超える濃度
では多少の毒性が認められたので（図１）、機能研究は０．１〜２μＭの範囲で
のみ行い、ほとんどの実験では１μＭを使用した。ＤＣ機能におけるＮＦκＢの
役割を評価するために、成熟ＤＣを０．３μＭ、０．５μＭまたは１μＭのＰＳ
Ｉと共に３時間インキュベートし、細胞を洗浄した。ＰＳＩはプロテオソームに
不可逆的に結合する活性型ペプチドであるので、薬物暴露は短時間であるにもか
かわらず、ＤＣの機能は６日間のＭＬＲ期間中ずっと評価することができる。

【０１７９】 同種異系ＭＬＲ測定法におけるＰＳＩ処理ＤＣ（ＰＳＩ−ＤＣ）へのＴ細胞の
暴露は、リンパ球の応答に対して、ＰＳＩ濃度で滴定することができる甚大な効
果を持った。０．１μＭのＰＳＩによるＤＣの前処理は検出可能な効果を持たな
いが、０．５μＭおよび１μＭでは、Ｔ細胞は、活性化に反応して増殖すること
ができなくなることがわかった（図２）。

【０１８０】 ２．ＰＳＩは抗原提示に関与する分子の表面発現を減少させる ＭＬＲ中のＴ細胞はＨＬＡクラスＩＩ抗原を認識する。そのうちＨＬＡ−ＤＲ
が最も豊富なので、ＰＳＩ処理の６日後にその発現を評価した。ＤＲに対する最
小の効果（ＦＡＣＳによる）は０．１μ ＰＳＩで認められたが、大きな減少は
１μＭで観察された（図３）。ＣＤ８６はＤＣ上に発現される主要共刺激分子で
あり、その発現も１μＭ ＰＳＩで事実上バックグラウンドレベルまで減少した
（図３）。

【０１８１】 ３．ＰＳＩ処理樹状細胞によって阻害されたＭＬＲはＩＬ−２または抗ＣＤ２
８抗体では救出されない ＰＳＩ−ＤＣに対するＴ細胞の低い増殖応答の機序については、大きく見て２
つの可能性が考えられる。１つの可能性は、これらのＤＣが刺激性を持たず、そ
のためにＴ細胞が反応に応答しないというものである。もう１つの可能性は、Ｔ
細胞が、耐容または能動的免疫調節の過程により、能動的に「スイッチオフ」さ
れているというものである。これらの可能性の識別に着手するため、我々はＴ細
胞をＩＬ−２（２ｎｇ／ｍｌ）または抗ＣＤ２８（１０μｇ／ｍｌ）で刺激しよ
うとした。

【０１８２】 Ｔ細胞とＤＣをプレートにまく時に、ＩＬ−２または抗ＣＤ２８を同時に加え
た。６日目に増殖を評価したところ、ＩＬ−２は増殖の回復に極めてわずかな効
果しか持たないことが明らかになったが、これはＤＣの数には依存せず、ＰＳＩ
処理とも無関係だった（図４ａ）。

【０１８３】 同程度の免疫賦活は無処理ＤＣで認められた（図４ｂ）。抗ＣＤ２８は回復効
果を持たなかったが、これはＰＳＩによる主要ＣＤ２８リガンドＣＤ８６のダウ
ンレギュレーションに照らして予想されたことだった（図３）。これらの結果は
複数の機序と合致するため、さらに実験を行うことにした。

【０１８４】 ４．ＰＳＩで前処理したＤＣによるＤＣ誘導性ＭＬＲの阻害 ＰＳＩ−ＤＣが阻害効果を生じているかどうかを検出する一手段は、ＰＳＩ処
理ＤＣおよびＰＳＩ無処理ＤＣの混合物と共にＴ細胞を培養することである。Ｐ
ＳＩ−ＤＣが単に非刺激性である場合は、ＰＳＩ処理ＤＣは増殖応答に対して最
小限の効果しか持たないはずである。しかしわずか１／８または１／４のＰＳＩ
−ＤＣが存在するだけで、増殖応答曲線の傾斜から判断して、３〜５倍の低下応
答がおこった（図５）。次に我々は、ＰＳＩ−ＤＣへの暴露がＴ細胞における長
期不応答性を誘導するかどうかを調べた。先に述べたようにＴ細胞を正常ＤＣま
たはＰＳＩ−ＤＣに暴露した後、Ｔ細胞を収集し、再びＤＣで処理し、増殖応答
を測定した（図６）。２回とも正常ＤＣに暴露したＴ細胞は応答し、２回のＰＳ
Ｉ−ＤＣ暴露には予想通りＴ細胞は応答しなかった。しかしＰＳＩ−ＤＣで刺激
してから正常ＤＣで刺激したＴ細胞も応答することができなかった（図６）。こ
れは、ＰＳＩ−ＤＣへの暴露の効果が持続し、Ｔ細胞は不応答性またはアネルギ
ー状態を獲得することを示しているのだろう。正常ＤＣに暴露した後に２回目は
ＰＳＩ−ＤＣに暴露したＴ細胞も、予想通り、増殖できなかった。

【０１８５】 ５．ＰＳＩ処理樹状細胞に暴露したＴリンパ球の細胞表面抗原分析 ＰＳＩ処理ＤＣの効果の機序を探求するために、６日間の培養後にＴリンパ球
を分析した。予想通りＴ細胞の収量は低くなった。ＣＤ３の細胞表面発現は減少
した。しかし、最も劇的だったのはＣＤ２５発現の著しい減少であり、これは対
照と比較して事実上消滅した（図７）。

【０１８６】 ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）およびそのレセプターの１つＩＣＡＭ−１ ＣＤ５
４など、細胞表面接着に関与する分子の発現を分析した。ＰＳＩ処理リンパ球で
はどちらも減少し、ＣＤ５４はＣＤ３と同程度に減少したが、ＣＤ１１ａ発現は
わずかしか減少しなかった（図７）。

【０１８７】 ６．ＰＳＩ−ＤＣへのＴ細胞の暴露はＩＬ−４の産生をもたらすが、ＩＬ−２
またはＩＦＮγの産生はもたらさない サイトカインの産生は、ＤＣによる刺激に対するＴ細胞による重要な応答の一
つであり、ＩＬ−２、ＩＦＮγおよびＩＬ−４が発現される（図８）。そこで我
々は、ＰＳＩ−ＤＣへの暴露によってどのタイプの応答が起こるかを調べた。Ｉ
Ｌ−２および重要なＴｈ１サイトカインＩＦＮγはＰＳＩ−ＤＣに応答して産生
されなかった。しかしＩＬ−４の産生は影響を受けなかった。このデータから、
ＰＳＩ−ＤＣがＴ細胞に何らかのシグナルを送達できることが示唆される。この
ことは、ＰＳＩ−ＤＣがＴ細胞において、能動的シグナルが必要と考えられるあ
るタイプの不応答性状態を誘導する、という我々の先の観察を裏付けている。

【０１８８】 ７．ＤＣによるＴＮＦの産生はＰＳＩによって阻害されるが、ＩＬ−８の産生
は阻害されない ＭＬＲに続いてＤＣが産生するサイトカインに対するＰＳＩの効果も調べた。
ＰＳＩ−ＤＣからのＴＮＦ発現はＭＬＲ中に阻害され、ＩＬ−６発現阻害の程度
はこれより低かった。これに対し、ＩＬ−８産生は影響を受けなかった（図９）
。Ｔ細胞に関する結果と同様に、これも、ＰＳＩ処理の特徴的な性質を示してお
り、ＮＦκＢはＴＮＦおよびＩＬ−６発現に何らかの役割を持っているが、ＩＬ
−８の発現には役割を持っていないことを示している。

【０１８９】 ８．ＭＥＫＫ１でＤＣを活性化するとＭＬＲ応答の増進が起こる ＮＦκＢの阻害はＤＣの機能を阻害するので、ＮＦκＢ刺激性のＭＥＫＫを使
ったＤＣの潜在的活性化の効果を調べた。ＭＥＫＫ１をコードする活性化を使用
し、１５０：１のｍ．ｏ．ｉで、ＤＣを感染させた。ＭＬＲに使用した場合、上
記ＭＥＫＫ１ ＤＣは正常ＤＣよりも４倍活性が大きかった（図１０）。

【０１９０】 ９．Ｍｙｄ８８ｌｐｒはＮＦ−κＢを活性化する ＮＦ−κＢの強力な誘導剤が、最初の５３アミノ酸の欠失と点突然変異Ｐｈｅ
５６Ａｓｎとを含むＭｙｄ８８ｌｐｒと呼ばれるＭｙｄ８８の突然変異タンパク
質（mutein）であることを、我々は見いだした。Ｍｙｄ８８ｌｐｒは通常はＴｏ
ｌｌ関連レセプターシグナル伝達（例えばＩＬ−１レセプター）に対して阻害性
である（１）。しかし我々は、アデノウイルスベクターによって未成熟ＤＣにＭ
ｙｄ８８ｌｐｒを導入すると、Ａｄｍｙｄ８８による感染の６時間後には検出可
能であり、感染後２４時間ではさらに強く検出することができる核ＮＦ−κＢ活
性の強力な活性化が誘導されることを観察した（図１１）。

【０１９１】 １０．Ｍｙｄ８８ｌｐｒは未成熟ＤＣによるＴＮＦ産生を誘導する ＭＥＫＫ１の場合と同様に、我々はＭｙｄ８８ｌｐｒもＤＣ機能を活性化する
かどうか知りたいと思った。ＡｄＭｙｄ８８ｌｐｒによる未成熟ＤＣの感染は、
感染２４時間後には、それらの細胞によるＴＮＦの自発的産生をもたらした。そ
の上、Ｍｙｄ８８ｌｐｒは、ＬＰＳ誘導性ＴＮＦ産生に対して阻害効果を持たな
かった。Ｍｙｄ８８ｗｔはＤＣにおけるＴＮＦ産生を誘導しなかった（図１２）
。

【０１９２】 １１．Ｍｙｄ８８ｌｐｒはＤＣによる抗原提示を増進させる ＮＦ−κＢの阻害はＤＣの機能を阻害するので、ＮＦ−κＢ刺激性のＭｙｄ８
８ｌｐｒを使ったＤＣの強力な活性化の効果を調べた。未成熟ＤＣをＡｄＭｙｄ
８８ｌｐｒ（ＧＦＰも発現させるもの）、Ａｄ０またはＡｄＧＦＰ（緑色蛍光タ
ンパク質）に感染させた。２４時間後に、様々な濃度の感染ＤＣを２×１０⁴ 個
のＧＦＰ抗原特異的Ｔ細胞と共に培養し、応答を、３日後のＴ細胞増殖として測
定した。樹状細胞へのＧＦＰの送達は抗原特異的Ｔ細胞増殖を誘導し、その増殖
はＭｙｄ８８ｌｐｒによって増進された（図１４）。この結果は、先の図（図１
１および１２）に示したＭｙｄ８８ｌｐｒによるＮＦ−κＢおよびＴＮＦ産生の
活性化と合致する。

【０１９３】 １２．Ｍｙｄ８８ｌｐｒはＤＣ誘導性同種異系混合リンパ球反応（ＭＬＲ）も
増進する ＮＦ−κＢ機能の活性化がＤＣに及ぼす効果のもう１つの試験としてＭＬＲ応
答を調べた。未成熟ＤＣをＡｄ０およびＡｄｍｙｄ８８ｌｐｒに感染させ、４８
時間後に、段階的な量の感染ＤＣを１０⁵ 個の同種異系Ｔ細胞と共に培養し、応
答を、培養６日後の増殖として測定した。ＡｄＭｙｄ８８ｌｐｒによる感染は、
Ａｄ０または未感染細胞の場合よりも、ＭＬＲ応答を増進させた。これは低ＤＣ
数で最も顕著であり、この場合、対照の応答はＴ細胞のみの場合に等しく、Ｍｙ
ｄ８８ｌｐｒ発現ＤＣの応答は、それより高かった（図１５）。

【０１９４】 １３．Ｍｙｄ８８ｌｐｒ発現は共刺激分子ＣＤ８０およびＣＤ８６の発現を増
進させる 細胞表面分子ＣＤ８０およびＣＤ８６の発現は、ＤＣの抗原提示機能にとって
重要である。ＤＣにおける（アデノウイルス感染による）Ｍｙｄ８８ｌｐｒの発
現により、未感染ＤＣの場合または対照ウイルスに感染させた細胞の場合と比較
して、ＣＤ８０の発現もＣＤ８６の発現も共に増進したことを、図１６に示す。

【０１９５】 １４．Ｍｙｄ８８ｌｐｒはＮＦ−κＢだけでなく他のシグナル伝達分子も活性
化する 我々は、Ｍｙｄ８８ｌｐｒがＮＦ−κＢの強力な誘導剤であることを示した。
また我々は、この分子が、（今回はマクロファージにおける）他のシグナル伝達
経路、例えばサイトカイン発現の制御などといった細胞機構に関与することが知
られているキナーゼであるｐ３８ ＭＡＰＫなどを活性化できることにも気付い
た（図１７）。さらにマクロファージでは、Ｍｙｄ８８ｌｐｒは、ＴＬＲおよび
ＩＬ−１Ｒシグナル伝達機構の重要な要素であるＩＲＡＫ１も活性化した（図１
８）。

【０１９６】 参考文献 １．Ｂｕｒｎｓ，Ｋ．，Ｆ．Ｍａｒｔｉｎｏｎ，Ｃ．Ｅｓｓｌｉｎｇｅｒ，Ｈ
．Ｐａｈｌ，Ｐ．Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｊ．Ｌ．Ｂｏｄｍｅｒ，Ｆ．Ｄｉ Ｍａ
ｒｃｏ，Ｌ．ＦｒｅｎｃｈおよびＪ．Ｔｓｃｈｏｐｐ，１９９８「インターロイ
キン−１シグナル伝達に関与するアダプタータンパク質ＭｙＤ８８」Ｊ Ｂｉｏ
ｌ Ｃｈｅｍ ２７３ ２０：１２２０３。

【０１９７】 考察 ＮＦκＢの誘導を遮断することができる濃度のプロテアソーム阻害剤ＰＳＩに
よるＤＣの処理は、ＭＬＲにおける増殖応答を低下させることが明らかになった
。このことから、ＮＦκＢ機能はＭＬＲにおける未感作Ｔ細胞の刺激に関与する
ことが示唆される。ＰＳＩの特異性はプロテアソームに対するものなので、これ
は他の転写因子の機能にも潜在的に影響を及ぼしうるが、このことは、この薬剤
の作用を記載する原報には報告されていなかった（Ｔｒａｅｎｃｋｎｅｒら（１
９９４）ＥＭＢＯ Ｊ．１３，５４３３−５４４１、Ｔｒａｅｎｃｋｎｅｒおよ
びＢａｅｕｅｒｌｅ（１９９５）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．Ｓｕｐｐｌ．１９，７
９−８４ならびにＨａａｓら（１９９８）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６３，
３９５−４０４）。他のアプローチを使ってＮＦκＢの役割を確認するために他
の独立した実験を行う必要があるだろう。我々は、ＣＭＶプロモーターの制御下
でＩκＢαを過剰発現させるアデノウイルスによるＤＣの感染を使った研究を開
始した。このＩκＢα過剰発現はＮＦκＢを阻害し、樹状細胞の抗原提示機能も
阻害する（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａら、未公表データ）。これは本明細書に記載のデ
ータと合致する。

【０１９８】 ＰＳＩ処理ＤＣが免疫原性を低下させる機序を様々なレベルで評価したところ
、ＤＣにおける抗原提示細胞機能の複数の側面がダウンレギュレートされること
が判明した。まず、ＤＣがＴ細胞の刺激に利用する細胞表面分子の発現に対する
効果を調べたところ、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ８６（どちらも抗原認識とＣＤ２
８活性化の両方に重要な分子）の発現に著しい減少が認められた。ＩＬ−１２お
よびＴＮＦα（どちらもＴ細胞の初期活性化に重要であることがわかっている）
などのＤＣ由来サイトカインの減少も認められた。これに対し、Ｔ細胞／ＤＣ共
培養物におけるＩＬ−６またはＩＬ−８などの他のサイトカインの産生には変化
がなかった。これらの結果は、ＰＳＩ処理ＤＣが抗原提示に関与する３つ全ての
主要な分子クラス、すなわちＴ細胞認識の標的（ＨＬＡ−ＤＲ）、共刺激分子（
ＣＤ８６）および免疫賦活サイトカイン（ＩＬ−１２およびＴＮＦα）の発現を
減少させたことを示している。

【０１９９】 Ｔ細胞増殖応答の欠如の機序に関するさらなる疑問に取り組んだ。これは、単
にＤＣの免疫原性の欠如によるのかもしれないし、あるいは免疫寛容または免疫
調節の一形態の誘導によるのかもしれない。ＰＳＩ処理ＤＣを無処理ＤＣに加え
て、ＭＬＲで未感作Ｔ細胞に対するその混合物の効果を解析する共培養実験によ
り、その機序をさらに解析した。わずか１／８（１２．５％）のＰＳＩ処理ＤＣ
を無処理ＤＣに添加しただけで、増殖用量応答曲線には、３〜５倍の活性ＤＣに
相当する有意な低下が起こることを見出した。この結果は、ＩＬ−２および抗Ｃ
Ｄ２８がこれらのＴ細胞を刺激できなかったという事実（データを示さず）と共
に、Ｔ細胞機能に対してＰＳＩ処理ＤＣの阻害（免疫調節）効果があることを示
している。さらに、Ｔ細胞をＰＳＩ前処理ＤＣに暴露すると、共培養６日目に分
析されるＴ細胞表面マーカーの発現に大きな変化が誘導された。すなわち、ＣＤ
３の発現は減少し、ＣＤ２５は事実上消滅し、ＩＣＡＭ−１およびＬＦＡ−１は
多少減少した。同様の効果は様々な寛容モデルでも報告されている（Ｚａｎｄｅ
ｒｓら （１９８３）Ｎａｔｕｒｅ ３０３，６２５−６２７、Ｚａｎｄｅｒｓ
ら（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５，３０２−３０５、Ｐａｒｋら（１９
９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５，３０２−３０５ならびにＷａｌｄｍ
ａｎｎおよびＣｕｂｂｏｌｄ（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
６，６１９−６４４）。そこで我々はＰＳＩ処理ＤＣが免疫寛容を誘導するかど
うかを調べた。これは、まず同種異系Ｔ細胞をＰＳＩ処理ＤＣに２日間暴露した
後、抗ＣＤ８３および抗ＣＤ８６を使った選別によってそれらを取り出すことに
よって評価した。次に、Ｔ細胞を同じドナーから得た正常ＤＣまたはＰＳＩ処理
ＤＣに４日間暴露した。応答の欠如は、少なくとも「持続性」（４〜６日）の免
疫寛容が誘導されている証拠である。寛容の正式な定義にはこの種の実験では正
式には試験できない「抗原特異性」が含まれるが、これは後に、可溶性抗原破傷
風トキソイドに応答するＴ細胞系を用いる独立した一連の実験で立証された（Ｃ
ａｌｄｅｒら、未公表データ）。しかし、この文脈における「免疫寛容」という
用語は適切な用語である。なぜなら、再チャレンジは同じドナーから得たＤＣで
行ったからである。

【０２００】 もう１組の実験では、ＰＳＩ処理ＤＣに暴露したＴ細胞の機能をさらに評価し
た。Ｔ細胞のサイトカイン産生は著しく変化した。例えばＩＬ−２産生は９０％
以上阻害され、ＩＦＮγ産生も同様だった。これは耐容の誘導とも合致する知見
である。ＩＬ−２およびＩＦＮγは「Ｔｈ１」サイトカインである。興味深いこ
とに「Ｔｈ２」サイトカインＩＬ−４の発現は変化しなかった。このことは、Ｐ
ＳＩ処理ＤＣによって誘導される免疫抑制効果／寛容誘導がＴｈ１サブセットに
限定されるらしいことを示唆している。この点に取り組むには、精製したＴｈ１
およびＴｈ２を使ったさらなる研究が必要である。

【０２０１】 本明細書に記載の研究と、内因性ＮＦκＢ阻害剤ＩκＢαを過剰発現させるア
デノウイルスを用いた他の実験（Ｙｏｓｈｉｍｕｒａら，未公表データ）は、Ｎ
ＦκＢが抗原提示の調節に重要な役割を持つことを示している。これは、ＮＦκ
ＢがＤＣの成熟にとって不可欠であるという先の知見とよく一致する（Ｒｅｓｃ
ｉｚｎｏら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ １８８，２１７５−２１８０）。
またこれは、ＮＦκＢは先天免疫を獲得免疫に翻訳する主要機構であるという概
念とも合致する。このように、多種多様な微生物または他の有害物質によって活
性化される免疫系を活性化するいわゆる「危険信号」（Ｍａｔｚｉｎｇｅｒ（１
９９４）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １２，９９１−１０４５、Ｊａｎｅ
ｗａｙら（１１９６）Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．６，５１９−５２２）は、ＮＦκＢ
の活性化を必要とするようである。このことは、ＮＦκＢの活性化を誘導するた
めにＴＬＲ４を必要とするＬＰＳに関して、既に実証されている（Ｃｈｏｗら
（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，１０６８９−１０６９２）。

【０２０２】 抗原提示の調節については、３つの側面の全て、すなわちＴ細胞にとっての標
的（ＭＨＣ）の発現、共刺激分子（ＣＤ８６）の発現およびサイトカイン（ＩＬ
−１２、ＴＮＦα）の誘導が、いずれもＮＦκＢによって協調的に調節されるこ
とが注目に値する。このことから、ＮＦκＢを遮断する薬物（例えばＰＳＩ）は
、（明らかにその毒性プロフィールに依存するが）生体内で有用な免疫抑制剤に
なるかもしれないという、自明な予測がなりたつ。ＰＳＩは全身的に使用するに
は毒性が強すぎるだろうが、それでも移植に先立ってＡＰＣ機能を遮断する目的
で腎臓などの標的器官を灌流するには有用であるかもしれない。この研究から導
き出すことができる興味深い推論は、ＮＦκＢの意図的な活性化は、ワクチンに
対する有用な補助効果を得るための良い戦略を提供するかもしれないということ
である。現在、この仮説を検証するための実験を行っている。

【０２０３】 ＰＳＩ処理ＤＣがＴ細胞機能に影響を及ぼす正確な機序をさらに解析するため
に、さらなる研究も現在行っている。 １．ＰＳＩもしくは他のプロテオソーム阻害剤、例えば、または他のＮＦ−κ
Ｂ阻害剤、例えばＩκＢなどのｃＤＮＡ阻害剤、などの薬物阻害剤を構成するＮ
Ｆ−κＢに対するアンチセンスを使った、抗原提示細胞中のＮＦ−κＢの遮断は
、Ｔ細胞機能に対して阻害的である。 ２．ＤＣ中のＮＦ−κＢの遮断はＴ細胞における寛容を誘導する。 ３．自己免疫、移植およびアレルギーにおけるＮＦ−κＢ阻害剤の使用。 ４．推論−ＮＦ−κＢ阻害が抗原提示を遮断し寛容を促進するのであれば、Ｎ
Ｆ−κＢ刺激は抗原提示をアップレギュレートするだろう。これは、ワクチン接
種を強化するために、ＮＦ−κＢを刺激する経路を活性化するいくつかの可能性
のある方法によって達成することができる。これらの方法には、ＭＥＫＫ１、Ｎ
ＩＫ、ＩＫＫ２、ＭｙＤ８８のドミナントネガティブ突然変異体、ＴＲＡＦ２、
ＴＲＡＦ６のアデノウイルスまたは他の遺伝子導入を用いることが含まれる。こ
れらの配列は、免疫化が望まれる抗原をコードするものと同じ遺伝子コンストラ
クトに組み込むことができるだろう。ＮＦ−κＢ刺激は、アレルギー患者におけ
る免疫応答を調節してＴＨ１：ＴＨ２応答バランスをＴＨ１応答側に変化させる
のにも役立つだろう。

【０２０４】 これらの結果は、ＰＳＩがＤＣにアネルギー状態をもたらすことを示している
と、我々は考える。すなわち、この薬物は、抗原に対するＤＣの長期不応答状態
を誘導する。

【０２０５】 上記の観察結果から導くことができる推論は、ＤＣ内のＮＦ−κＢなどの細胞
内シグナル伝達経路を活性化することにより、その細胞が活性化され、抗原提示
機能が増進されるだろうということである。ＮＦ−κＢを活性化する細胞内シグ
ナル伝達分子ＭＥＫＫ１およびＭｙｄ８８ｌｐｒを使って、これを検証した。Ｍ
ＥＫＫ１は、先に、数ある経路の中でもとりわけＮＦ−κＢの活性化剤として記
載されており、アデノウイルスベクターを使ってＭＥＫＫ１をＤＣに導入するこ
とにより、ＤＣ機能の活性化が誘導されることが、ＭＬＲによって測定された。

【０２０６】 Ｍｙｄ８８の突然変異タンパク質、Ｍｙｄ８８ｌｐｒ（通常はＴＬＲおよびＩ
Ｌ−１レセプターによるシグナル伝達の阻害剤）が、ＤＣ中のＮＦ−κＢを活性
化することも観察された。ＤＣ中で発現させた場合、ＭＬＲまたは抗原特異的Ｔ
細胞を使って測定すると、Ｍｙｄ８８ｌｐｒはＤＣ抗原提示機能を増進させると
共に、サイトカイン産生を誘導した。これらの結果から、ＮＦ−κＢなどの細胞
内シグナル伝達分子は、抗原と組み合わせると、強力なアジュバントとして働く
ことができるという可能性が生じる。これは、ワクチン設計の新しいアプローチ
を提供する。Ｍｙｄ８８ｌｐｒがｐ３８ＭＡＰＫも活性化するという事実は、Ｄ
Ｃを活性化する他のシグナル伝達分子もこの目的に使用できることを暗示してい
るのだろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】 ＰＳＩで処理したＤＣの細胞生存度。成熟ＤＣを無処理のままにしておくか、
様々な用量のＰＳＩで４時間処理した。洗浄後に、細胞を、記載のように補足し
たＲＰＭＩ１６４０中、単球調整培地なしで、培養した。 処理の６日後に、細
胞を１０μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含むＰＢＳに再懸濁し、Ｆ
ＡＣＳスキャンで解析した。

【図２】 プロテオソーム阻害剤Ｃｂｚ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ（Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル）−Ａ
ｌａ−ロイシナール（ＰＳＩ）で処理したＤＣの免疫賦活能。成熟ＤＣをＰＳＩ
（０．１μＭ：黒三角）（０．５μＭ：黒四角）（１μＭ：黒丸）またはＰＳＩ
なし（白丸）で４時間処理した。洗浄後、様々な数の各カテゴリーのＤＣと、１
０⁵ 細胞のアロリンパ球とを、９６穴プレートにまいた。³ Ｈ−ＴｄＲ取り込み
測定法により増殖を６日目に決定した。（各点は５回の独立した実験から得た平
均±ＳＥＭを表す）。

【図３】 表面抗原の発現に対するＰＳＩの効果を、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ８６（ＰＥ結合
型）（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（カリフォルニア州サンディエゴ））に対するモノ
クローナル抗体を用いて、ＰＳＩ処理後６日目に調べた。無処理群（緑線）、Ｐ
ＳＩ（０．１μＭ）処理群（青色点線）、ＰＳＩ（１μＭ）処理群（赤色点線）
の表現型を、上記モノクローナル抗体で分類し、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ
Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で解析した。

【図４】 アロＭＬＲにおける増殖応答の回復の欠如。成熟ＤＣを賦形剤（Ａ）またはＰ
ＳＩ（１μＭ）（Ｂ）で４時間処理した。洗浄後、段階的な数の各処理ＤＣおよ
び１０⁵ 細胞のアロリンパ球を９６穴プレートに賦形剤（白丸、黒丸）、２ｎｇ
／ｍｌのＩＬ−２（白四角、黒四角）または１０ｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８抗体（白
三角、黒三角）と共にまいた。³ Ｈ−ＴｄＲ取り込み測定法により増殖を６日目
に決定した。（各点は３回の独立した実験から得た平均±ＳＥＭを表す）。

【図５】 ＰＳＩ前処理ＤＣはアロＭＬＲにおけるリンパ球の成長能を阻害する。成熟Ｄ
Ｃを上述のようにＰＳＩで処理した。洗浄後、各ＤＣを混合して様々な組成物、
すなわち賦形剤処理ＤＣのみ（白丸）、３／４数の賦形剤処理ＤＣと混合した１
／４数のＰＳＩ処理ＤＣ（黒丸）、７／８数の賦形剤処理ＤＣと混合した１／８
数のＰＳＩ処理ＤＣ（黒四角）、またはＰＳＩ処理ＤＣのみ（黒三角）を調製し
た。段階的な数の各混合物と１０⁵ 細胞のアロリンパ球とを９６穴プレートにま
いた。³ Ｈ−ＴｄＲ取り込み測定法により増殖を６日目に決定した。

【図６】 ＰＳＩ処理または非処理ＤＣと共に前培養したアロリンパ球の損なわれた応答
。リンパ球を１／１０数のＰＳＩ処理（黒丸、黒三角）または無処理（白丸、白
三角）ＤＣと共培養した。２日後に、各ＤＣをＣＤ８３、ＣＤ８６被覆プレート
によって除去した。賦形剤処理ＤＣ（白丸、黒丸）またはＰＳＩ（１μＭ）処理
ＤＣ（白三角、黒三角）を用いて、リンパ球をさらに４日間培養した。³ Ｈ−Ｔ
ｄＲ取り込み測定法によって増殖を決定した（各点は３回の独立した実験から得
た平均±ＳＥＭを表す）。

【図７】 ＰＳＩ前処理ＤＣによるアロリンパ球（allo-lymphocytes）上の表面抗原の発
現量の減少。アロＭＬＲ実験の場合と同じ条件で、賦形剤（vehicle）処理ＤＣ
（緑線）またはＰＳＩ（１μＭ）処理ＤＣ（赤線）を使って、リンパ球を６日間
培養した。各リンパ球の表現型を、ＣＤ３、ＣＤ２５（ＰＥ結合型；Ｐｈａｒｍ
ｉｎｇｅｎ）（ＣＤ５４）（ＰＥ結合型；Ｓｅｒｏｔｅｃ）、ＣＤ５０（ＦＩＴ
Ｃ結合型；Ｓｅｒｏｔｅｃ）に対するモノクローナル抗体を使って分類し、ＦＡ
ＣＳｃａｎで解析した。

【図８】 賦形剤処理ＤＣまたはＰＳＩ処理ＤＣと共培養したアロリンパ球のサイトカイ
ン産生。成熟ＤＣを上述のように賦形剤またはＰＳＩ（１μＭ）で処理した。ア
ロリンパ球と各ＤＣを２×１０⁵ 細胞／ウェルの密度で９６穴プレートにまき、
４９時間にわたってＰＭＡ（１０ｎＭ）で刺激するか、または無刺激のままにし
ておいた。上清をＥＬＩＳＡによりＩＬ−２、ＩＬ−４およびインターフェロン
−γについて分析した。

【図９】 賦形剤またはＰＳＩで処理したＤＣのサイトカイン産生。成熟ＤＣを上述のよ
うに賦形剤またはＰＳＩ（１μＭ）で処理した。各ＤＣおよびアロリンパ球を９
６穴プレートに１ウェルあたり２×１０⁵ 細胞の密度でまき、４８時間にわたっ
てＰＭＡ（１０ｎＭ）で刺激するか、または無処理のままにしておいた。上清を
ＥＬＩＳＡによりＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦαについて分析
した。

【図１０】 ＭＥＫＫ−１の発現は、同種異系（allogeneic）ＭＬＲにおける単球由来樹状
細胞の抗原提示を著しく増大させる。簡単に述べると、末梢血単球を５０ｎｇ／
ｍｌのＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｍｇ／ｍｌのＩＬ−４と共に培養することにより
、樹状細胞を生成させた。５日目に、それらをインサートを含まないアデノウイ
ルスまたはＭＥＫＫ−１をコードするアデノウイルス（ｍ．ｏ．ｉ＝１００：１
）に２時間感染させるか、または未感染のまま放置した。２日後に、１０⁴ 個の
樹状細胞を１０⁵ 個の精製同種異系Ｔ細胞と共に９６穴平底プレート中で５日間
培養し、０．５μＣｉ／ウェルを一晩パルスし、翌日に収集した。ＭＥＫＫ−１
をコードする樹状細胞は未感染のＤＣと比べてＴ細胞増殖を４倍強力に誘導した
が、インサートを含まないアデノウイルスに感染させた樹状細胞ではそうならな
かった。

【図１１】 樹状細胞におけるＭｙＤ８８のドミナントネガティブ阻害剤（ＭｙＤ８８ｌｐ
ｒ）の発現はＮＦ−κＢ活性化を誘導する。 ５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４と共に５日間
培養することにより、末梢血単球から未成熟ＤＣを生成させた。次にそれらを未
感染のまま放置するか、無血清培地中で、インサートを含まない対照アデノウイ
ルス（Ａｄ０）およびドミナントネガティブＭｙＤ８８をコードするアデノウイ
ルス（ＡｄＭｙＤ８８−ｌｐｒ）に感染させた。１００の感染多重度を使用した
。６時間および２４時間発現させた後、細胞を溶解し、それらの核抽出物をＥＭ
ＳＡによりＮＦ−κＢ ＤＮＡ結合活性について調べた。驚いたことに、ＭｙＤ
８８ｌｐｒの発現はそれだけでＮＦ−κＢ活性化を誘導することができた。この
ことは過去の知見とは全く対照的である。

【図１２】 野生型ＭｙＤ８８とは異なりドミナントネガティブ（阻害剤）ＭｙＤ８８の発
現はそれだけで樹状細胞におけるＴＮＦα産生を誘導し、ＬＰＳ誘導性ＴＮＦα
産生を阻害しない。 ５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４と共に５日間
培養することにより、末梢血単球から未成熟ＤＣを生成させた。次に、それらを
未感染のままにしておくか、または無血清培地中で、β−ｇａｌをコードする対
照アデノウイルス（Ａｄβ−ｇａｌ）、ドミナントネガティブＭｙＤ８８をコー
ドするアデノウイルス（Ａｄｌｐｒ）および野生型ＭｙＤ８８をコードするアデ
ノウイルス（ＡｄＭｙＤ８８ｗｔ）に感染させた。Ａｄｔｏｌｌは非機能的であ
ることが示されているので無視する。１００の感染多重度を使用した。２４時間
後に、細胞を１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した。驚いたことに、ドミナント
ネガティブＭｙＤ８８の発現は、他の刺激が無くてもそれだけで、樹状細胞ＴＮ
Ｆα産生を誘導することができた。さらに、これはＬＰＳ誘導性ＴＮＦα産生を
阻害しなかった。これは過去の知見とは対照的な知見である。

【図１３】 野生型ＭｙＤ８８の発現は樹状細胞におけるＭｙＤ８８−ｌｐｒ（ドミナント
ネガティブ）誘導性ＴＮＦα産生を抑止する。 ５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４と共に５日間
培養することにより、末梢血単球から未成熟ＤＣを生成させた。次に、それらを
未感染のままにしておくか、無血清培地中で、β−ｇａｌをコードする対照アデ
ノウイルス（Ａｄβ−ｇａｌ）、野生型ＭｙＤ８８をコードするアデノウイルス
（ＡｄＭｙＤ８８ｗｔ）およびドミナントネガティブＭｙＤ８８をコードするア
デノウイルス（ＡｄＭｙＤ８８ｌｐｒ）に感染させた。場合により、比率１：１
および１：５のＡｄｌｐｒとＡｄβ−ｇａｌまたはＡｄＭｙＤ８８ｗｔとによる
二重感染を用いた。単一感染には１００の感染多重度を用いた。２４時間後に上
清を取り出し、分析した。驚いたことに、ドミナントネガティブＭｙＤ８８の発
現は、他の刺激が無くてもそれだけで、樹状細胞ＴＮＦα産生を誘導することが
できた。野生型Ｍｙｄ８８はＭｙｄ８８ｌｐｒによって誘導されるＴＮＦ産生を
阻害することができた。

【図１４】 樹状細胞におけるドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現は抗原特異的Ｔ細胞
増殖を増大させる。 ５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４と共に５日間
培養することにより、末梢血単球から未成熟ＤＣを生成させた。次に、それらを
未感染のままにしておくか、無血清培地中で、インサートを含まない対照アデノ
ウイルス（Ａｄ０）、プロトタイプ抗原として緑色蛍光タンパク質をコードする
アデノウイルス（ＡｄＧＦＰ）およびドミナントネガティブＭｙＤ８８に連結さ
れたＧＦＰをコードするアデノウイルス（ＡｄＧＦＰ−ｌｐｒ）に感染させた。
４８時間後に、段階的な量の樹状細胞を２×１０⁴ 個の抗原特異的Ｔ細胞と共に
培養し、３日目に増殖を測定した。樹状細胞への抗原ＧＦＰの送達は抗原特異的
Ｔ細胞増殖を誘導し、それはドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現によって増
大された。これは、樹状細胞中のＭｙＤ８８活性の阻害が樹状細胞の活性化を誘
導するという、我々の予想外の結果と合致している。

【図１５】 樹状細胞におけるドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現は同種異系混合リン
パ球反応（ＭＬＲ）を増大する。 ５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４と共に５日間
培養することにより、末梢血単球から未成熟ＤＣを生成させた。次に、それらを
未感染のままにしておくか、無血清培地中で、インサートを含まない対照アデノ
ウイルス（Ａｄ０）、およびドミナントネガティブ型のＭｙＤ８８をコードする
アデノウイルス（Ａｄｌｐｒ）に感染させた。４８時間後に、段階的な量の樹状
細胞を１×１０⁵ 個の同種異系Ｔ細胞と共に培養し、６日目に増殖を測定した。
ドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現は、同種異系Ｔ細胞増殖を増大させる。
これはＤＣ抗原提示の増加を示す知見である。

【図１６】 樹状細胞におけるドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現は共刺激分子（ＣＤ
８０、ＣＤ８６）の発現を増大する。 ５０ｎｇ／ｍｌ ＧＭ−ＣＳＦおよび１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−４と共に５日間
培養することにより、末梢血単球から未成熟ＤＣを生成させた。次に、それらを
未感染のままにしておくか、無血清培地中で、ＧＦＰをコードする対照アデノウ
イルおよびドミナントネガティブＭｙＤ８８をコードするアデノウイルス（Ａｄ
ｌｐｒ）に感染させた。４８時間後に樹状細胞を収集し、効率のよい抗原提示機
能に必要とされる極めて重要な２つの共刺激分子ＣＤ８０およびＣＤ８６につい
て染色した。ドミナントネガティブ型のＭｙＤ８８の発現はＣＤ８０およびＣＤ
８６細胞表面発現を増大させた。これは樹状細胞抗原提示機能の増大を示す。

【図１７】 マクロファージにおけるドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現はｐ３８ＭＡ
ＰＫリン酸化を誘導する。 １００ｎｇ／ｍｌ Ｍ−ＣＳＦを５％ＦＣＳ ＲＰＭＩに２〜３日間添加する
ことにより、末梢血単球からヒトマクロファージを分化させた。次にそれらを未
感染のままにしておくか、または無血清培地中で、β−ｇａｌをコードする対照
アデノウイルスに感染させるか、またはドミナントネガティブＭｙＤ８８をコー
ドするアデノウイルス（Ａｄｌｐｒ）に感染させた。表記のように１００（１例
では５０）の感染多重度を使用した。６、２４および４８時間後に細胞を溶解し
、ウェスタンブロット法とホスホｐ３８ＭＡＰＫ特異的抗体とを使って、抽出物
をｐ３８ＭＡＲＫ活性について測定した。意外にも、ドミナントネガティブＭｙ
Ｄ８８の発現は、ヒトマクロファージにおけるｐ３８ＭＡＰＫ活性を誘導した。

【図１８】 マクロファージにおけるドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現はＩＲＡＫリ
ン酸化を誘導する。 １００ｎｇ／ｍｌ Ｍ−ＣＳＦを５％ＦＣＳ ＲＰＭＩに２〜３日間添加する
ことにより、末梢血単球からヒトマクロファージを分化させた。５％ＦＣＳ Ｄ
ＭＥＭ中で培養したＨＥＬＡ細胞も使用した。両細胞タイプを未感染のままにし
ておくか、または無血清培地中で、β−ｇａｌをコードする対照アデノウイルス
、野生型ＭｙＤ８８をコードするアデノウイルス、もしくはドミナントネガティ
ブＭｙＤ８８をコードするアデノウイルス（ＡｄＭｙＤ８８ｌｐｒ）に感染させ
た。１００の感染多重度を使用した。５分または１２時間後に細胞を溶解し、抽
出物をウェスタンブロット法を使ってＩＲＡＫとホスホＩＲＡＫについて測定し
た。ＨＥＬＡ細胞では、ドミナントネガティブＭｙＤ８８（ＭｙＤ８８−ｌｐｒ
）の発現により、ＩＬ−１によって誘導されるＩＲＡＫの活性化が阻害されるこ
とがわかった。しかし意外にも、ドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現はヒト
マクロファージ中のＩＲＡＫ活性を誘導し、その活性はＬＰＳの添加によって増
大しない。この知見から、ＭｙＤ８８活性は、マクロファージ中でＩＲＡＫリン
酸化を阻害する阻害シグナルにとっても必要であり（しかしＨＥＬＡ細胞では必
要でない）、その遮断（blockade）によりＩＲＡＫの活性化が起こることが示唆
される。

【図１９】 マクロファージにおけるドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現はＩκＢαリ
ン酸化を誘導する。 １００ｎｇ／ｍｌ Ｍ−ＣＳＦを５％ＦＣＳ ＲＰＭＩに２〜３日間添加する
ことにより、末梢血単球からヒトマクロファージを分化させた。細胞を、無血清
培地中で、β−ｇａｌをコードする対照アデノウイルスまたはドミナントネガテ
ィブＭｙＤ８８をコードするアデノウイルス（Ａｄｌｐｒ）に感染させた。１０
０の感染多重度を使用した。２４時間後に細胞を溶解し、抽出物をウェスタンブ
ロット法を使って、ホスホＩκＢαについて測定した。意外にも、ドミナントネ
ガティブＭｙＤ８８の発現は、ヒトマクロファージにおけるＩκＢαリン酸化を
誘導する。

【図２０】 マクロファージにおけるドミナントネガティブＭｙＤ８８の発現は、野生型Ｍ
ｙＤ８８の発現とは異なり、何も刺激がない状態で、ＴＮＦα、ＩＬ−６および
ＩＬ−８の産生を誘導する。 １００ｎｇ／ｍｌ Ｍ−ＣＳＦを５％ＦＣＳ ＲＰＭＩに２〜３日間添加する
ことにより、末梢血単球からヒトマクロファージを分化させた。次にそれらを未
感染のままにしておくか、または無血清培地中で、β−ｇａｌをコードする対照
アデノウイルスに感染させるか、野生型ＭｙＤ８８をコードするアデノウイルス
に感染させるか、またはドミナントネガティブＭｙＤ８８をコードするアデノウ
イルス （Ａｄｌｐｒ）に感染させた。１００の感染多重度（moi）を使用した
。（ａ）４８時間後に上清を収集し、他の刺激が存在しない状態でのＴＮＦα、
ＩＬ−６およびＩＬ−８サイトカイン産生について測定した。サイトカイン産生
は、ドミナントネガティブＭｙＤ８８をコードする細胞では検出できたが、野生
型ＭｙＤ８８をコードする細胞または対照細胞では検出できなかった。このこと
から、マクロファージにおけるＭｙＤ８８活性の遮断は、樹状細胞の場合と同様
に、しかしＨＳＦまたはＨＵＶＥＣの場合とは異なり、細胞の活性化および炎症
性サイトカインの放出をもたらすことが示唆された。（ｂ）発現０時間、４時間
、２４時間および４８時間の時点で上清を収集し、ＥＬＩＳＡにより、ＴＮＦ、
ＩＬ−６およびＩＬ−８について測定した。対照細胞または野生型ＭｙＤ８８を
コードする細胞ではサイトカイン産生はバックグラウンドレベルであったので、
ドミナントネガティブＭｙＤ８８（ＭｙＤ８８−ｌｐｒ）をコードする細胞から
得られた結果だけを示す。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１４年２月２７日（２００２．２．２７）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/00 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ ４Ｈ０４５ 39/395 Ｈ 48/00 48/00 Ａ６１Ｐ 25/28 Ａ６１Ｐ 25/28 31/00 31/00 35/00 35/00 37/02 37/02 37/04 37/04 37/08 37/08 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 16/18 16/18 19/00 19/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ Ｃ１２Ｎ 15/09 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 フェルドマン，マーク イギリス国 ロンドン ダブリュ６ ８エ ルエイチ ハマースミス，アスペンリー ロード １，インペリアル カレッジ ス クール オブ メディシン，ケネディー インスティチュート オブ リューマトロ ジー ディビジョン Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA31 BA80 CA04 CA07 DA03 EA02 HA17 4C084 AA02 AA13 AA14 AA17 BA44 DA01 DC50 ZA022 ZA162 ZB072 ZB082 ZB132 ZB262 ZB352 4C085 AA13 AA14 BB11 BB22 DD63 DD88 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA02 MA03 MA04 ZA02 ZA16 ZB07 ZB08 ZB13 ZB26 ZB35 4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 ZA02 ZA16 ZB07 ZB08 ZB13 ZB26 ZB35 4H045 AA11 CA40 DA75 DA86 EA22 FA74

Claims (57)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ＤＣなどのＡＰＣの機能の細胞内阻害剤を薬学上有効量投与
   する工程を含む、ヒトなどの哺乳動物において抗原提示を阻害するまたはアネル
   ギー応答を誘導する方法。
2. 【請求項２】 ＮＦ−κＢ阻害剤を薬学上有効量投与する工程を含む、ヒト
   などの哺乳動物において抗原提示を阻害するまたはアネルギー応答を誘導する方
   法。
3. 【請求項３】 哺乳動物においてアネルギー応答を誘導するために、ＤＣな
   どのＡＰＣの機能の細胞内阻害剤を薬学上有効量投与する工程を含む、アレルギ
   ーまたは自己免疫疾患の治療方法。
4. 【請求項４】 哺乳動物においてアネルギー応答を誘導するために、ＮＦ−
   κＢ阻害剤を薬学上有効量投与する工程を含む、自己免疫疾患の治療方法。
5. 【請求項５】 哺乳動物においてアネルギー応答を誘導するために、ＤＣな
   どのＡＰＣの機能の細胞内阻害剤を薬学上有効量投与する工程を含む、ヒトなど
   の哺乳動物における移植拒絶の防止方法。
6. 【請求項６】 哺乳動物においてアネルギー応答を誘導するために、ＮＦ−
   κＢ阻害剤を薬学上有効量投与する工程を含む、ヒトなどの哺乳動物における移
   植拒絶の防止方法。
7. 【請求項７】 ＮＦ−κＢ阻害剤をコードする核酸を含むベクターであって
   、該核酸が該核酸の発現に必要な調節配列に作動的に連結されてなるベクターを
   投与する工程を含む、請求項２、４または６いずれか記載の方法。
8. 【請求項８】 ベクターがアデノウイルスまたはレンチウイルスである、請
   求項７記載の方法。
9. 【請求項９】 薬剤として使用するためのＮＦ−κＢ阻害剤。
10. 【請求項１０】 哺乳動物においてアネルギー応答を誘導するまたは抗原提
    示を阻害するのに使用するためのＮＦ−κＢ阻害剤。
11. 【請求項１１】 アネルギー応答を誘導することにより自己免疫疾患または
    アレルギーを治療するのに使用するためのＮＦ−κＢ阻害剤。
12. 【請求項１２】 アネルギー応答を誘導することにより移植組織の拒絶を阻
    害するのに使用するためのＮＦ−κＢ阻害剤。
13. 【請求項１３】 アネルギー応答を誘導するための薬剤の製造におけるＮＦ
    −κＢ阻害剤の使用。
14. 【請求項１４】 阻害剤がＩκＢαまたはＰＳＩまたはＩＫＫ２ドミナント
    ネガティブ突然変異体である、前記請求項いずれか記載の方法または阻害剤。
15. 【請求項１５】 阻害剤がＮＦ−κＢの少なくとも一部に対して有効なアン
    チセンス核酸である、請求項１〜１０いずれか記載の方法または阻害剤。
16. 【請求項１６】 アンチセンス核酸がＲｅｌ Ｂに対して有効である、請求
    項１５記載の方法または阻害剤。
17. 【請求項１７】 阻害剤がベクター中の核酸によりコードされ、該ベクター
    が該核酸に作動的に連結された調節配列をさらに含む、前記請求項いずれか記載
    の方法または阻害剤。
18. 【請求項１８】 阻害剤が抗体のＦｖ断片である、請求項１７記載の方法ま
    たは阻害剤。
19. 【請求項１９】 阻害剤が、ＮＦ−κＢもしくはその断片に結合しうる、抗
    体もしくはその有効な断片、または抗体もしくはその有効な断片をコードするｃ
    ＤＮＡである、請求項１〜１１、１４または１５いずれか記載の方法または阻害
    剤。
20. 【請求項２０】 抗体が抗Ｒｅｌ Ｂ抗体もしくはその有効な断片またはＲ
    ｅｌ Ｂもしくはその有効な断片をコードするｃＤＮＡである、請求項１９記載
    の方法または阻害剤。
21. 【請求項２１】 ＤＣなどのＡＰＣの機能の細胞内誘導剤を薬学上有効量投
    与する工程を含む、ヒトなどの哺乳動物において抗原提示を刺激するまたは免疫
    応答を刺激する方法。
22. 【請求項２２】 ＮＦ−κＢ誘導剤を薬学上有効量投与する工程を含む、ヒ
    トなどの哺乳動物において抗原提示を刺激するまたは免疫応答を刺激する方法。
23. 【請求項２３】 感染症または癌を治療するための請求項１８記載の方法。
24. 【請求項２４】 薬剤として使用するためのＮＦ−κＢ誘導剤。
25. 【請求項２５】 免疫応答を刺激するのに使用するためのＮＦ−κＢ誘導剤
    。
26. 【請求項２６】 抗感染症剤または抗癌剤として使用するための、請求項２
    ５記載のＮＦ−κＢ誘導剤。
27. 【請求項２７】 感染症もしくは癌または異常型のもしくは異常に高レベル
    の体中の有害分子で特徴づけられる状態を治療するための薬剤の製造に使用する
    ためのＮＦ−κＢ誘導剤。
28. 【請求項２８】 誘導剤がＭＥＫＫ１、ＮＩＫ、ＩＫＫ２、ＴＲＡＦ２、Ｔ
    ＲＡＦ５、ＴＲＡＦ６、ＴＡＫ、Ｍｙｄ８８のドミナントネガティブ突然変異体
    、ＴＰ Ｌ−２、ＩＲＡＫ、ＩＫＫ５、ＴｏｌｌレセプターおよびＲｅｌ Ｂ、
    またはＮＦ−κＢを誘導しうるそれらの断片もしくは突然変異タンパク質から選
    ばれる、請求項２２〜２７いずれか記載の方法またはＮＦ−κＢ誘導剤。
29. 【請求項２９】 ＮＦ−κＢ誘導剤がベクター内の核酸によりコードされ、
    該ベクターが該核酸に作動的に連結され、かつ該核酸の発現に必要な調節配列を
    さらに含んでなる、請求項１８〜２３いずれか記載の方法またはＮＦ−κＢ誘導
    剤。
30. 【請求項３０】 ベクターがアデノウイルスまたはレンチウイルスである、
    請求項２９記載の方法またはＮＦ−κＢ誘導剤。
31. 【請求項３１】 誘導剤がＤＮＡワクチン形態のものである、請求項１８〜
    ２４いずれか記載の方法またはＮＦ−κＢ誘導剤。
32. 【請求項３２】 有効量のＮＦ−κＢの阻害剤を投与する工程を含む、イン
    ビボまたはインビトロで樹状細胞などのＡＰＣの成熟化および活性化を阻害する
    方法。
33. 【請求項３３】 有効量のＮＦ−κＢの誘導剤を投与する工程を含む、イン
    ビボまたはインビトロで樹状細胞などのＡＰＣの成熟化および活性化を刺激する
    方法。
34. 【請求項３４】 ヒトなどの哺乳動物に抗原分子または抗原分子をコードす
    るポリヌクレオチドを投与する、上記請求項いずれか記載の方法、阻害剤、誘導
    剤または使用。
35. 【請求項３５】 阻害剤または誘導剤が樹状細胞またはその前駆細胞などの
    ＡＰＣに対して標的化される、上記請求項いずれか記載の方法、阻害剤、誘導剤
    または使用。
36. 【請求項３６】 樹状細胞またはその前駆細胞などのＡＰＣがインビトロで
    阻害剤または誘導剤に曝露され、哺乳動物に導入される、上記請求項いずれか記
    載の方法、阻害剤、誘導剤または使用。
37. 【請求項３７】 （１）細胞内調節剤、例えば、ＤＣなどのＡＰＣの機能の
    細胞内阻害剤または細胞内増進剤を含むまたはコードする部分（調節部分）およ
    び（２）抗原分子を含むまたはコードする部分（抗原部分）を含んでなる分子。
38. 【請求項３８】 抗原分子と、ＤＣなどのＡＰＣの機能の増進剤とをコード
    してなるポリヌクレオチド。
39. 【請求項３９】 ＤＣなどのＡＰＣの機能の増進剤がＮＦ−κＢ誘導剤であ
    る、請求項３３記載の分子または請求項３４記載のポリヌレオチド。
40. 【請求項４０】 （１）細胞内調節剤、例えば、ＤＣなどのＡＰＣの機能の
    細胞内阻害剤または細胞内増進剤、及び（２）抗原分子を含むまたはコードする
    抗原部分を含んでなる、パーツキットまたはキメラ分子の組成物。
41. 【請求項４１】 （１）ＮＦ−κＢ阻害剤または誘導剤を含むまたはコード
    する調節部分および（２）抗原分子を含むまたはコードする抗原部分を含んでな
    る、パーツキットまたは組成物またはキメラ分子。
42. 【請求項４２】 抗原分子が、形質転換細胞もしくは癌細胞または病原生物
    上に存在するエピトープ、または病原生物に感染した細胞上に存在するエピトー
    プ、あるいはアルツハイマー病もしくは海綿状脳症などの病状において発現され
    るポリペプチドを含む、請求項３４記載の方法、阻害剤、誘導剤もしくは使用、
    または請求項３７〜４１いずれか記載の分子、ポリヌクレオチド、パーツキット
    、組成物もしくはキメラ分子。
43. 【請求項４３】 癌、癌細胞もしくは腫瘍細胞に対して、または病原生物も
    しくは病原生物に感染した細胞、またはアルツハイマー病もしくは海綿状脳症な
    どの病状におけるポリペプチドの発現により特徴づけられる疾患に対して有効な
    、ＮＦ−κＢ誘導剤もしくはＮＦ−κＢ誘導剤をコードするポリヌクレオチドを
    有効量含んでなる、ワクチン。
44. 【請求項４４】 癌細胞もしくは腫瘍細胞、または病原生物もしくは病原生
    物に感染した細胞上に存在するエピトープ、または病状に関連するポリペプチド
    に存在するエピトープを有する、抗原または抗原をコードするポリヌクレオチド
    をさらに含んでなる請求項４３記載のワクチン。
45. 【請求項４５】 ワクチンが核酸ワクチンである、請求項４３または４４記
    載のワクチン。
46. 【請求項４６】 前記請求項いずれか記載のＮＦ−κＢ誘導剤、ＮＦ−κＢ
    阻害剤、ワクチン、分子、ポリヌクレオチド、パーツキット、組成物またはキメ
    ラ分子と、薬学的に許容されうる担体とを含有してなる医薬組成物。
47. 【請求項４７】 医薬として使用するための、請求項３７〜４６いずれか記
    載のワクチン、分子、ポリヌクレオチド、パーツキット、組成物またはキメラ分
    子。
48. 【請求項４８】 抗原提示の調節を必要とする患者の治療のための薬剤の製
    造における請求項３７〜４６いずれか記載のワクチン、分子、ポリヌクレオチド
    、パーツキット、組成物またはキメラ分子の使用。
49. 【請求項４９】 患者において第１エピトープを異常に発現する標的細胞を
    死滅させる方法であって、（１）患者から樹状細胞などのＡＰＣを得る工程、（
    ２）樹状細胞などの該ＡＰＣをエクスビボでＤＣなどのＡＰＣの機能の増進剤と
    接触させる工程、（３）任意に該細胞に前記エピトープまたは該エピトープをコ
    ードするポリヌクレオチドもしくは発現ベクターを接触させる工程および（４）
    このように処置した樹状細胞などのＡＰＣを患者に再び導入する工程を含む方法
    。
50. 【請求項５０】 患者において第１エピトープを異常に発現する標的細胞を
    死滅させる方法であって、（１）患者から樹状細胞などのＡＰＣを得る工程、（
    ２）樹状細胞などの該ＡＰＣをエクスビボでＮＦ−κＢ誘導剤と接触させる工程
    、（３）任意に該細胞に前記エピトープまたは該エピトープをコードするポリヌ
    クレオチドもしくは発現ベクターを接触させる工程および（４）このように処置
    した樹状細胞などのＡＰＣを患者に再び導入する工程を含む方法。
51. 【請求項５１】 標的細胞が癌細胞である、請求項４９および５０記載の患
    者において標的細胞を死滅させる方法。
52. 【請求項５２】 アネルギー応答を必要とするまたはアネルギー応答が誘導
    された哺乳動物の治療剤の製造におけるＮＦ−κＢ阻害剤またはＮＦ−κＢ阻害
    剤をコードする核酸の使用。
53. 【請求項５３】 哺乳動物が自己免疫疾患もしくはアレルギーを有する、ま
    たは移植拒絶の防止の必要がある、請求項５２記載の使用。
54. 【請求項５４】 免疫応答の刺激を必要とするおよび／または感染症の治療
    、癌の治療、アルツハイマー病もしくは海綿状脳症などの病原性ポリペプチドの
    産生に関連する疾患の治療を必要とする哺乳動物の治療剤の製造におけるＮＦ−
    κＢ誘導剤またはＮＦ−κＢ誘導剤をコードする核酸の使用。
55. 【請求項５５】 樹状細胞などのＡＰＣの成熟化および活性化の阻害を必要
    とする患者の治療剤の製造におけるＮＦ−κＢの阻害剤またはＮＦ−κＢの阻害
    剤をコードする核酸の使用。
56. 【請求項５６】 樹状細胞などのＡＰＣの成熟化および活性化の刺激を必要
    とする患者の治療剤の製造におけるＮＦ−κＢの誘導剤の使用。
57. 【請求項５７】 調節剤、例えば、ＤＣなどのＡＰＣの機能の増進剤が細胞
    内シグナル伝達分子である、請求項３７記載の分子または請求項３８記載のポリ
    ヌクレオチド。