JP2003506566A

JP2003506566A - ラジカルをウロカニン酸、誘導体、及びアナログで除去する方法

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Publication number: JP2003506566A
Application number: JP2001515896A
Authority: JP
Inventors: カンメイェルアーサー
Original assignee: アカデミスジーケンホイスベイデユニフェルジテイトファンアムステルダム
Priority date: 1999-06-25
Filing date: 2000-06-23
Publication date: 2003-02-18
Also published as: EP1196129B1; ATE311845T1; WO2001000145A1; CA2376870A1; DK1196129T3; CA2376870C; SI1196129T1; DE60024628D1; US7056938B1; EP1196129A1; US8026268B2; AU5716300A; DE60024628T2; ES2253235T3; CY1104980T1; US20060106108A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、酸化防止剤、ラジカル除去剤、及びそれらの反応産物に関する。本発明は、ウロカニン酸又は塩、誘導体、その機能ある同等物及びアナログからなる、ラジカルを除去又は免疫反応を調節するための方法において使用する化合物及び組成物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

本発明は、酸化防止剤又はラジカル除去剤、及びそれらの反応産物に関する。

【０００２】

【従来の技術】

トランス−ウロカニン酸(トランス−UCA)は、ヒト表皮の主要な紫外線（UV）
吸収成分である。ＵＶ照射のＵＶ−Ｃ領域(200〜290nm)からＵＶ−Ａ−Ｉ領域(3
40〜400nｍ)への吸収は、生体内及び試験官内においてトランス−UCAをシス−UC
Aへの光異性化を引き起こす(1−3)。この特性のために、トランス−UCAは、天然
の日焼け止め剤として使われている［4］。この使用は後に少なくなっていった
。なぜなら、この化合物がUV-誘発免疫抑制の重要な仲介者であることを示唆し
［5］、光産物シス−UCAは、免疫においてUVの影響のいくつかを真似る可能性が
あることが明らかとなったからであるが、現在のところ、どのようなUCAの主要
な役割、又はその作用の様式が、免疫調節の内容なのか明らかではない。生体内
での試験は、シス−UCAの免疫抑制能の証拠を提供したが（8〜12）、多くの細胞
培養（試験官内の）において、抑制が見出せなかったのは注目に値する（13〜17
）。シス−UCAの同様のレベルは、UV−A及びUV-Bによって誘導することができる
が、それでもやはり、接触過敏性を抑制する際にUV-BがUV-Aより最も有効である
（18）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】

本発明は、ラジカルを除去又は免疫反応を調節するための方法において使用す
るための、ウロカニン酸又は塩、誘導体、その機能ある同等物及びアナログを含
有する化合物及び組成物を提供する。本発明によって提供された前記化合物、組
成物及び方法は、ウロカニン酸異性体が、ラジカル除去剤であり、身体、特に皮
膚において天然の酸化防止剤として役立つという新たな知見に基づく。皮膚のUV
照射は、反応性（ヒドロキシ）ラジカルの本来的に形成して、酸化ストレスのレ
ベルを増加させる。ここで、ウロカニン酸異性体、又はイミダゾール同等物及び
そのイミダゾール誘導体などの機能ある同等物、特に、生理学的に(身体におい
て)生じるイミダゾール化合物が、ヒドロキシ、単一酸素又は他の反応性のある
余分な電子種等のラジカルの作用に対して、水溶性環境において生物学的な膜及
びタンパク質ベース物質の液相を有効に除去する能力を有する生理学的な酸化防
止剤として、例えば作用することを示す。これらの種は、UV照射により過酸化水素から発生させることができ、フェントン
反応で金属イオン（例えば、Fe^2＋）の存在下、過酸化水素から発生させること
ができる。両方のタイプの反応は、表皮で生じることができる［6］。UVへ露光
することによって向上させた酸化ストレスの状況下[7]、UCA異性体が、その場で
ランダムに生成したヒドロキシラジカルに遭遇するであろうことは明白である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】

したがって、1つの実施態様において、本発明は、物質におけるラジカルを除
去するための方法であって、物質をウロカニン酸、又は、その機能ある同等物、
例えば、塩又は機能的に関連するイミダゾール化合物等を供給することからなる
方法を提供する。最も活性であるか、又は最小の免疫抑制を有するトランス−ウ
ロカニン酸又はその機能ある同等物を使用することが好ましい。酸化防止剤又は
ラジカル除去剤としてウロカニン酸又はその同等物を使用することは、水に一般
に可溶でないか、一部だけ可溶な他の酸化防止剤、例えばビタミンEなどを使用
するよりも有利である一方、ウロカニン酸又はそのアナログは、水溶液に容易に
溶解する。とりわけ、一般に、水ベースの前記物質が食品又は化粧品からなる場
合に、本発明により提供されたウロカニン酸又はその機能ある同等物は、水不溶
性酸化防止剤より有利である。両方の異性体は、水可溶なヒドロキシラジカル除
去剤であり、多くのエマルジョンの水相において使用することができる。さらに
、身体の天然成分であるウロカニン酸異性体は、本質的に無毒であり、加えて食
品又は化粧品を調製するときに有利である。それゆえ、別の、すなわち次の実施
態様において、本発明は、例えば、酸化ストレスさらされるなど、ラジカルを組
織において除去する方法であって、前記組織にウロカニン酸を供給することから
なる方法を提供し、たとえば、特に皮膚において、しわの認められた例老化組織
の他の合図など酸化ストレスの処理のために、本発明は、ウロカニン酸又はその
同等物を薬剤組成物又は化粧品組成物を調製するための使用方法を提供する。生
きている器官及び組織における酸化ストレス、特にタンパク質の酸化は、老化、
しわ、タンパク質の深刻な損傷、虚血、アテローム性動脈硬化、及び、例えば、
乾癬（かんせん）、強皮症、紅斑性狼瘡、アレルギー性接触皮膚炎、白斑、苔癬
（たいせん）、移植片対宿主疾患などの多くの慢性的な疾患の現象に関係させて
おり、その治療において、本発明は、ウロカニン酸又はその機能ある同等物から
なる薬剤組成物又は化粧品組成物を提供する。当該組成物は、免疫調節目的のた
めにも有利に使用される。

【０００５】なお別の実施態様において、本発明は、薬剤組成物の調製用のウロカニン酸又
はその同等物(例えば、同様の効果を有する塩、又は関連するイミダゾール化合
物)の酸化産物の使用方法であって、とくに前記産物が光酸化産物であることを
特徴とする。ラジカル除去の結果として、表皮UCA異性体は、反応性酸素種（ROS
）によって、生物学的製剤を有する酸化産物、すなわち、免疫調節する効能に変
えられるという新規な知見をここで使用する。UCAの光異性化と対照的に、UCAの
酸化に対してまだ十分な注意が支払われていなかった。UCA異性体の非常に反応
性あるヒドロキシラジカルとの反応については、とりわけなかった。ヒドロキシ
ラジカルは、UV照射した過酸化水素から、及び還元した金属イオン、例えば、鉄
イオン(Fe^2＋)から発生させることができる。両方のタイプの反応は、表皮で生
じることができる［6］。

【０００６】 UVに露光することによって増加させた酸化ストレスの状況下において、UCA異
性体は、ランダムに生産されたヒドロキシラジカルと遭遇するであろうことは明
白である。我々は、シス−ウロカニン酸それ自身は、免疫応答の調節又は抑制を
概して与えないが、ウロカニン酸の酸化産物、たとえば、皮膚の紫外線(UV)露光
後は上昇するという洞察を提供する。ここで、UV露光によって作られたラジカル
を除去するウロカニン酸は、それによって、身体の増加する免疫反応をUV誘発し
た組織の損傷に対して次に調節し、抑制するか、和らげるイミダゾール−4−カ
ルボキシルアルデヒド、イミダゾール−4−酢酸、又はイミダゾール−4−カルボ
ン酸などのウロカニン酸誘導体を含むイミダゾールに酸化される。

【０００７】この天然のメカニズムに洞察を与えることによって、我々は、例えば、追いつ
められてUV露光に直面する（非常に強く）免疫反応を保持するために作用する免
疫調節機構における見識を与える。したがって、本発明は、種々の刺激に対する
免疫反応を調節するためのウロカニン酸の酸化産物を含有する薬剤組成物の使用
方法を与え、それによって、以前に知られていない、前記産物の天然の作用を模
倣する。ここで、本発明は、例えば、ヒトなどの動物の免疫反応を調節するため
の方法であって、前記動物に、たとえば、酸化産物が、イミダゾール−4−カル
ボキシルアルデヒド、イミダゾール−4−酢酸、若しくはイミダゾール−4−カル
ボン酸などのイミダゾール、又は3−（4−イミダゾロン−２イル）アクリル酸、
及び３−（4−イミダゾロン−5−イル）アクリル酸などのウロカニン酸のイミダ
ゾール誘導体などであり、ウロカニン酸の前記産物からなる薬剤組成物を処理す
ることからなる方法を提供する。特に、本発明は、たとえば、乾癬（かんせん）
又は皮膚炎等の種々の皮膚障害において、免疫調節剤としての1又はそれ以上のU
CA光酸化産物の使用方法を提供する。さらに、本発明は、そのラジカル除去特性
のために、ウロカニン酸又はその機能ある同等物からなる薬剤組成物を提供し、
それによって、前記組成物は、選択的に既に免疫調節機能を有する酸化産物から
なる免疫調節剤として付加的に使用される。

【０００８】本発明をそれに限定することなしに詳細な説明において、さらに説明する。

【０００９】

【発明の実施の形態】

トランス−UCA、シス−UCA、関連するイミダゾール及び非イミダゾール化合物
をそれらの能力に関して試験して、ヒドロキシラジカルを除去するためにデオキ
シリボースと競争させた。ヒドロキシラジカルへの露光の際、デオキシリボース
は、チオバルビツール酸と反応してピンク色のクロモーゲンを形成するマロンジ
アルデヒドへ分解した。強いヒドロキシラジカル除去剤が、デオキシリボースと
競争して、マロンジアルデヒドの量を低くするであろう［22］。10つの化合物、
UCA、UCAアナログ、アラニン、尿酸（図1）をそれらの能力に関して試験して、
ヒドロキシラジカルを除去した。

【００１０】方法：デオキシリボース（dR）分解試験。この試験は、最初に述べた方法と類似した［22］。簡単に、5mLねじキャップガ
ラス管において、3.0mM２デオキシ−D−リボース、0.5mM過酸化水素、及び段階
的な濃度でのテスト化合物の1つを含む、最終容積1.0mLリン酸ナトリウム緩衝液
（50mM、pH7.2）において反応を行なった。反応を前もって混合したジソジウムE
DTA及び第一鉄溶液（それぞれ、最終濃度0.5mM及び0.2mM）を加えてはじめた。
混合物を15分間室温で放置した。50mMのNaOH中の1.0mLのチオバルビツール酸、0
.75mLの2.8％トリクロロ酢酸を加えた後、管を20分間沸騰水浴中で加熱した。ピ
ンク色を532nmにおいて読み取り、適当なブランクを除去した後、相互作用を示
す吸収値を試験化合物の濃度に対してプロットした。試験化合物の希釈から6つ
の複写決定系を使用して、割合定数値の計算用にグラフスロープを構築した。各
試験化合物に対して計算された割合定数の意味、SD、数、及びデオキシリボース
分解の阻害率をリストした。その結果、ヒドロキシラジカルとの反応に対する第
二オーダー割合定数、及び、加えて、等モル濃度(3mM)の除去剤とのデオキシリ
ボース分解阻害率を表１に要約した。両方のUCAに対して、割合定数から導いた
典型的なスロープを有するグラフを図2に示す。L-ヒスチジン（2.6×10⁹M⁻¹.s
⁻¹）を含め、他の4−（5−）−置換イミダゾルよりも、ヒドロキシラジカルを
除去する際に、トランス−UCA及びシス−UCAが実質的により強力であった（それ
ぞれ、8.0及び7.1×109M⁻¹.S⁻¹。）。UCAの前駆物質であるL−ヒスチジンは、
UCAと類似の構造を有する既知の適度な除去剤として含まれた［22〜24］。L-ア
ラニンを既知の弱い除去剤として使用した［22］。代わりにフラン環を有するト
ランス−FAAを非イミダゾールアクリル酸誘導体として試験した。この置換物は
、非常に弱い除去能力を示した。

【００１１】他の４−（5−）置換イミダゾールアナログ、ジヒドロウロカニン酸又は３−
（イミダゾール−4−イル）−プロピオン酸及びイミダゾール−4−酢酸は、ヒス
チジンと比較して適度な除去能を示した。置換していないイミダゾール及びその
２−メチル誘導体は、UCA異性体より強い除去剤と見られた。周知のヒドロキシ
ラジカル除去剤の尿酸は、優れた能力を示した（27.8×１０^９M^-1．ｓ^−１）。

【００１２】 2つの表皮性化合物であるトランス−UCA及びシス−UCAは、良好なヒドロキシ
ラジカル除去剤であり、それらの能力は、尿酸のものより低いが、他の４−（5
−）置換したイミダゾール、たとえば、ヒスチジンのものより高い。

【００１３】トランス−UCA及びシス−UCAは、ここで良好なヒドロキシラジカル除去剤と認
められた。両方の異性体は、表皮、後者はUV−露光された皮膚において実質的な
濃度で生じる。とりわけUV照射上で表皮におけるヒドロキシラジカルの出現の強
い証拠がある［7］。通常のヒトの皮膚は、約200μMの鉄を含み［26、27］、大
部分は、フェリチンに合成される。UV照射による遊離第一鉄の放出［28］及び過
酸化水素の存在［29,30］は、ヒドロキシラジカルの発生に必要である。他の報
告は、UV-誘発されたヒドロキシラジカルの存在を間接的に支持する。なぜなら
、表皮成分上のそれらの影響が、酸化防止剤を中和することができるからである
［31,32］。

【００１４】 UCAは、イミダゾール化合物であり、たとえば、ヒスチジン［22〜24］、ヒス
タミン［33］、ジペプチドを含有するヒスチジン［24,34］、シメチジン及び他
のヒスタミン（H2）受容体アンタゴニスト［35］などのいくつかの他のイミダゾ
ール誘導体も既に良好なヒドロキシラジカル除去剤として知られている。本研究
は、いくつかの他のイミダゾールが同様の特性を示すことを明らかにした（表1
）。ヒドロキシラジカルは、イミダゾール環と反応しイミダゾール誘導体を形成
することができる。それらの形成は、酸化ストレス用のマーカーとしてヒスチジ
ン及びヒスタミンのイミダゾールを使用するための提案を導いた［23、33］。UC
A分子中のイミダゾール環の重要性は、我々の実験においても証明された。代わ
りにフラン環を有するトランス−FAAの弱い除去能力は、顕著な対照例である。
さらに、イミダゾール環と結合したUCA分子中のアクリル酸部分の存在は、他の4
−（5−）置換したイミダゾールに比較したときヒドロキシラジカルに対する増
加した除去能力の理由かもしれない。置換していないイミダゾール及びその２−
メチル誘導体はより強力なヒドロキシラジカル除去剤であり、イミダゾール環の
存在は、十分なヒドロキシラジカル除去能力に対して必要条件であることを強調
する。しかしながら、これらの化合物は、生理学的に生ずることなく、有害であ
る（LD50口径ラットイミダゾールに対して220mg/kg及び2-メチルイミダゾール
に対して1500mg/kg）。

【００１５】トランス−UCA及びシス−UCAは、主として皮膚において、相対的に高い濃度で
生理学的に生じる。我々の発見は、天然の日焼け防止剤としてのトランス−UCA
及び免疫抑制剤としてのシス−UCAの提案した役割の他に、UCA異性体に対する新
たな生理学的役割を指摘する。トランス−UCA及びシス−UCAは、主要な表皮ヒド
ロキシラジカル除去剤であるかもしれず、皮膚の酸化防止剤の常識に新しい見解
を与える。１．UCA異性体が、尿酸より強くはないが、良好なヒドロキシラジカ
ル除去剤である、及び２．UCA異性体が皮膚において既に相対的に高い濃度を占
めているという知見は、UCA異性体を相対的に高い濃度において食品、化粧品の
無害性酸化防止剤添加物として適合する可能性を創造する。シスUCAは、免疫抑
制効果を発揮するかもしれないので、（入手可能な）トランス−UCAが好ましい
。

【００１６】 UCAの光異性化と対照的に、UCAの酸化にはまだ十分な注意が払われていない。
特に、UCA異性体の非常に反応性のあるヒドロキシラジカルとの反応を調査した
。ヒドロキシラジカルは、UV照射において過酸化水素から、及び還元した金属イ
オン、例えば第一鉄（Fe²⁺）と接触した過酸化水素から、発生させることができ
る。トランス−UCA又はシス−UCAの過酸化水素とのUV-A照射が、UCA光異性化の
みを生じ、UCA光酸化を生じない。UV-A−誘導したシス−UCA形成と免疫抑制との
間の相関関係の欠如(18)が、皮膚免疫学においてUCA酸化産物の役割に対する別
の指摘かもしれない。これらの化合物は、UV-B照射の際に、又はフェントン反応
のどちらかによって過酸化水素の存在下で形成することができ、両方の反応のタ
イプは、クロマトグラフィーのパターンによって決定されたような酸化産物の比
較できる組となる。両方の反応のタイプの共通した酸化種は、大部分ヒドロキシ
ラジカルのようである。トランス−UCA又はシス−UCAで酸化を始めると同様のク
ロマトグラフィーパターンを生じる。UCA異性体のヒドロキシラジカル除去に関
連して、UCA異性体は、その上ラジカル種の除去を通じてUV−誘発した免疫抑制
を妨害するかもしれないことは注目すべきである。イミダゾール環と結合したUC
A分子のアクリル酸部分の存在は、ヒスチジン及びヒスタミンなどの非結合イミ
ダゾールと比較したとき、ヒドロキシラジカルに対してその増加した除去能力の
理由かもしれない。それは、形成された酸化産物が異なる理由かもしれない。

【００１７】物質及び方法高速液体クロマトグラフィー(HPLC) トランス−UCA及びシス−UCAを互いに、いくつかのUCA酸化産物から、4.6×25
0mmAlltima C16 及びLunaC18 逆相カラム上(Alltech、Deerfield、Il及びPhenom
enex、Torrence、CA、resp.)、p−3500 HPLC ポンプによって移送(Pharmacia,Up
psala,Sweden)した0.8mL/minの流速で、単離した。20〜200μLのサンプルをProm
is II 自動サンプラー（Spark Holland、Emmen、The Netherlands）によって注
入して、クロマトグラフィーのデーターは、SP 4270 インテグレーター上で記録
した（Spectra Physics、San Jose、CA）。サンプルからのピーク領域のデータ
を、同一のHPLC環境の下で唯一プロセスした。UV検出器(Applied Biosyystems、
model 759A、Foster City、CA)を226nm検出用にセットした。0.2〜0.8mMのテト
ラブチルアンモニウム(TBA)ギ酸塩及び１％アセトニトリルを含む、10mMアンモ
ニウムギ酸塩緩衝液(pH7.2)で定組成溶離を行なった。収集した分画をギ酸で100
mMの最終濃度まで酸性にして、TBAを除去するためにC18固相摘出カラム(JT Bake
r、Deventer、The Netherlands)を通した。

【００１８】光酸化 1.4mLサンプルで充填した、1−cm石英キュベットを、透過した1000Wキセノン
アークランプ(Oriel,Stratford,CT)の平行ビーム上に設置した。照射中、サンプ
ルを磁気的に攪拌した。赤外線(熱)及び可視光放射を最小限にするために、ビー
ムを水フィルター(7cm)を通じて透過し、二色ミラーによって反射させ、1−mm U
G１１フィルターを通して透過した。短波長中断を、各3mmの厚さを有するWG280
、WG305、WG335フィルターを通してビームを通過することによって達成する(Sch
ott−Jena、Mainz、Germany)。キセノンランプ照射を、UV-C、UV-B、UV-Aを含む
WG280を通して、UV-B及びUV−Aを含むWG305を通して、UV-Aのみを含むWG335を通
して透過した。UV-B及びUV−Aスペクトル領域の狭いバンドを、キセノンアーク
放射をモニターするのに選択した。目盛り付きEG＆E 550ラジオメータのプロー
ブ(Salem、MA、USA)は、中間密度フィルター、UV-Bをモニターするための303nm
での21％のトランミッション極大及び11.5nmの半値幅を有する狭いバンドフィル
タータイプUV−M−IL(Schott−Jena)か、UV-Aをモニターするための363nmでの４
６％のトランスミッション極大及び7.7nmの半値幅を有するタイプUV-PIL(Schott
−Jena)とを備えていた。光学フィルターのトランスミッションスペクトルをPer
kin Elmer Lambda 40 UV/ViSスペクトルメーター(Norwalk、CT、USA)でチェック
した。

【００１９】追加の照射を、UV-B源として使用する蛍光管TL12、UV−A源として使用するTL1
0R(Philips、Eindhoven、The Netherlands)で、スモールペトリ皿で磁気的に攪
拌したサンプル上で行なった。UV−B出力を、SEE1240シリコン検出プローブを備
えたIL443フォトセラピーラジオメーターで、UV−A出力を、SEE115検出プロー
ブを備えたIL442Aフォトセラピーラジオメーターで測定した(International Li
ght、Newburyport、MA、USA)。

【００２０】フェントン酸化ｐＨ７．２のリン酸ナトリウム（１０または２０ｍＭ）媒質または超純水のい
ずれかに、種々の濃度の第１鉄イオン（１０〜５００μＭ）と固定濃度５００μ
Ｍの過酸化水素（フェントン試薬）とを入れた、ヒドロキシルラジカル発生系で
ＵＣＡ異性体（１０または４０μＭ）を酸化した。また、銅イオン（Ｃｕ^２＋）
を有し、５００μＭ過酸化水素または５ｍＭアスコルビン酸のいずれかと５０μ
ＭのＣｕ^２＋とからなる２つのヒドロキシルラジカル発生系を用いた。

【００２１】対照化合物イミダゾール−４−カルボキサルデヒド（４−ホルミルイミダゾール
）の合成４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール−ＨＣｌ（４ミリモル）を重炭酸ナト
リウム（６ミリモル）と共に４ｍｌのメタノールに入れ、室温で１時間攪拌した
。メタノールを蒸発させ、残留物をクロロホルム／メタノール１：１で抽出し
た。３５００回転で５分間遠心分離した後、上澄を蒸発させ、残留物を２０ｍｌ
の加熱したジオキサンに溶解した。４．４ｇの二酸化マンガン（活性化したもの
；合成用）を加え、次いで２時間還流反応させた。二酸化マンガンをフィルター
で取り除き、濾液を蒸発させた。メタノール中で結晶化を行った。９５ｍｇの微
細なオフホワイトの結晶が得られた。最大収率は２５％であった。融解範囲は１
６８〜１６９℃：１７３〜１７５℃であった。出発物質の溶解範囲は１０８〜１
１１℃であり、酸化産物イミダゾール−４−カルボン酸の溶解範囲は２９４〜２
９５℃であった。ＵＶ（水）λ_ｍａｘ（ｌｏｇ_ε）は２５７ｎｍ（３．８５）で
あった。

【００２２】結果ＵＣＡ異性体および光酸化過酸化水素のＯ−Ｏ結合をＵＶ照射により切断し、ヒドロキシルラジカルを得
た。ＵＣＡ異性体はいずれもヒドロキシルラジカルを効率的に除去するので、Ｕ
ＣＡが分解し、および／または酸化産物に転換することが期待される。擬似太陽
光ＵＶ照射が過酸化水素中に存在するトランス−ＵＣＡを光酸化産物に転換する
能力をインビトロで試験し、逆相ＨＰＬＣ分析により分析した。過酸化水素をボ
イドボリューム付近まで溶出したところ、トランス−ＵＣＡおよびシス−ＵＣＡ
が顕著に異なる溶出時間２０分および６４分で溶出した（図３ａ〜ｄ）。非照射
コントロールサンプルでは、トランス−ＵＣＡと過酸化水素との間での相互作用
は全く見られなかった（図３ａ）。過酸化水素の不在下でｐＨ７．２の８０μＭ
のトランス−ＵＣＡにＷＧ２８０フィルターを通したキセノンアーク光（ＵＶ−
ＣおよびＵＶ−Ｂを含む）を露光したところ、光異性化プロセスによりシス−Ｕ
ＣＡのみが形成された（図３ｂ）。しかし、同一条件下で、トランス−ＵＣＡを
５００μＭの過酸化水素の存在下で照射した場合、その他のピークがクロマトグ
ラムに多く出現し、トランス−ＵＣＡおよびシス−ＵＣＡのピークはいずれも大
幅に減少した（図３ｃ）。これはある種の光化学転換または分解が起きているこ
とを示している。８つの主たる光酸化産物が滞留時間に基づいた新しいピークと
して認識され、クロマトグラムに割り当てられた（図３ｃ）。

【００２３】対照的に、ＷＧ３３５フィルターでＵＶ−ＣおよびＵＶ−Ｂの両者を遮断した
擬似太陽光照射を用いて露光を行った場合、実質的に光酸化産物は検出されなか
った（図３ｄ）。先の報告（２、３）の通り、ＵＣＡ光異性化のみが見られた。
シス−ＵＣＡ光異性化に対するトランス−ＵＣＡ光異性化の比は光酸化的分解の
程度には影響されなかった。ＷＧ３０５フィルターを用いてＵＶ−Ｃを遮断する
と、中間の結果が得られた（表２）。この照射条件は、晴の日の太陽が頭上にあ
るときにできる地上の太陽光のＵＶスペクトル分布をもっとも良く再現している
。蛍光ランプＴＬ１２（ＵＶ−ＢおよびＵＶ−Ａ、若干のＵＶ−Ｃ）およびＴＬ
１０Ｒ（ＵＶ−Ａ）を用いた試験から、ＵＶ−ＢおよびＵＶ−Ｃは光酸化能力を
有するという前記の結果が裏付けられた。蛍光ランプのＵＶ−Ａ線量はＵＶ−Ｂ
線量よりも顕著に高いが、ＵＶ−ＡによるＵＣＡ光酸化産物の収量は顕著に低い
（表２）。光酸化産物の形成を８つの主要ピークの面積を合計することにより（
任意単位；ピークＡ〜Ｈ）定量する。異なる照射条件下における光酸化分解の程
度、光酸化産物の収率およびＵＣＡ光異性化の程度を表２にまとめた。これらの
ＵＶ源の照射の変動を考慮すると、約３２０ｎｍより短い波長ではＵＶ照射の光
酸化能はかなり大きくなった。シス−ＵＣＡを用いた実験でも同様の結果が得ら
れたが、この場合、シス−ＵＣＡ／トランス−ＵＣＡの比が増大した（データは
示さず）。

【００２４】ＵＣＡ異性体およびフェントン酸化次の一連の実験において、その他の自然酸化プロセスを代表する、ＵＣＡのフ
ェントン酸化を調べた。トランス−ＵＣＡ異性体およびシス−ＵＣＡ異性体を生
理的濃度の第１鉄イオン（Ｆｅ^２＋）および過酸化水素によりフェントン酸化し
た。過酸化水素の初期濃度を５００μＭとし、第１鉄イオン濃度を０〜５００μ
Ｍの間で変えた。全てのフェントン酸化反応において、ＵＣＡ異性体分解の程度
をピーク面積の減少から算出した。全ての反応条件に対し、酸化反応は２分以内
に完了しているに違いない。なぜなら、インキュベーションを延ばしても更なる
分解は観察されなかったからである。Ｆｅ^２＋を有しない過酸化水素は、ＵＣＡ
異性体に対して何らの影響も及ぼさなかった。しかし、過酸化水素を有しないＦ
ｅ^２＋は、インキュベーションを延ばすと、ＵＣＡ異性体をゆっくりと分解した
（データは示さず）。

【００２５】２つのフェントン試薬を加える順序は、１０μＭの低ＵＣＡ濃度の場合を除き
、ＵＣＡ分解および酸化産物の収量に顕著な影響を及ぼさなかった。Ｆｅ^２＋を
過酸化水素の後に加えた場合、分解が増え、フェントン酸化産物の収量が減るこ
とが観察されたが、順序を逆にした場合、反対の結果が得られた（データは示さ
ず）。

【００２６】リン酸緩衝液の代わりに水中でフェントン反応を行った場合、トランス−ＵＣ
Ａの酸化分解はＵＣＡ濃度とは無関係に増大した。Ｆｅ^２＋濃度の高い（＞１０
０μｍ）リン酸緩衝液（１０ｍＭ）中で行う反応中に見られる濁りは、おそらく
不溶性のリン酸鉄の形成によるものであり、したがってＦｅ^２＋の自由に利用で
きる量が減少した。表３に初期濃度４０μＭのトランス−ＵＣＡに対する水とリ
ン酸媒質との間の違いを分解およびフェントン酸化産物の形成に関してまとめた
。光酸化実験と同様に、８つの主要な酸化産物のピーク面積を合計した。シス−
ＵＣＡを用いて類似の結果を得た（データは示さず）。この結果は、デオキシリ
ボース分解実験におけるトランス−ＵＣＡおよびシス−ＵＣＡの類似の速度定数
に一致するものである（表１）。ＵＣＡフェントン酸化産物のクロマトグラフの
パターン（図示せず）とＵＣＡ光酸化産物のクロマトグラフのパターンとの間に
、密接な類似性が見られた。このうち３つは同定されている（下記を参照）。

【００２７】トランス−ＵＣＡを用いて銅イオン（Ｃｕ^２＋）に基づく他の２つのヒドロキ
シルラジカル発生系を調べた場合、過酸化水素を含有しないＣｕ^２＋（５０μＭ
）とアスコルビン酸（５ｍＭ）との組合せにより、トランス−ＵＣＡがほとんど
完全に分解（３％残留）したが、Ｃｕ^２＋（５０μＭ）と過酸化水素（５００μ
Ｍ）とを有する系ではわずかの効果（トランス−ＵＣＡの８８％が残留）しか見
られなかった。アスコルビン酸系のデータの評価は困難であった。なぜなら、ク
ロマトグラムに干渉ピークがいくつか現れたからである。これらの干渉ピークは
おそらくアスコルビン酸およびその酸化産物から誘導されたものである。いずれ
の系もインビボの状態ではあまり重要とは考えられないが、これらの結果はＵＣ
Ａ異性体の酸化性質が類似しており、ヒドロキシルラジカル発生系の性質とは無
関係であることを示している。

【００２８】ＵＣＡ異性体およびフェントン酸化別の一連の実験で、もう一つの自然酸化プロセスを代表する、ＵＣＡのフェン
トン酸化を調べた。全ての実験で過酸化水素の初期濃度を５００μＭとし、第１
鉄イオン濃度を０〜４００μＭの間で変えた。４組の条件を比較した。１．Ｆｅ^２＋をｐＨ７．２のリン酸緩衝液に入れた。２．Ｆｅ^２＋をリン酸緩衝液＋ＥＤＴＡに入れた。３．Ｆｅ^２＋を緩衝液に入れず、初期ｐＨを５．５〜５．３とした。４．Ｃｕ^２＋をリン酸緩衝液＋アスコルビン酸塩に入れた。ＵＣＡ異性体のいずれに対しても分解の程度は同様であった。表３に過酸化水素
を条件１＜２＜４＜３の順で増やした場合のトランス−ＵＣＡの酸化分解を示す
。

【００２９】リン酸緩衝液に最終濃度が１００〜４００μＭとなるようにＦｅ^２＋を加える
ことにより、不溶性リン酸鉄の混濁溶液が生じた。この条件下で分解が最小限と
なった。限られた自由Ｆｅ^２＋しか利用できないことにより、ＵＣＡの酸化分解
が減少したものと考えられる。一方、Ｆｅ^２＋のＥＤＴＡに対する錯化では混濁
反応混合物ができず、分解が大きくなった（表３）。最も分解が大きかったのは
リン酸緩衝液の無い場合であり、規定したｐＨ値は５．５〜５．３と低く、ＵＣ
Ａ濃度（４０、１００または２５０μＭ）に依存した。トランス−ＵＣＡ、過酸
化水素および第１鉄イオンの初期濃度をそれぞれ２５０、５００および４００μ
Ｍとして、緩衝していない媒質中でフェントン反応を開始する際、ｐＨ値が５．
１から３．４に急激に下がった。グリオキシル酸（ＧＬＸ）等の比較的強い酸が
緩衝されずに遊離することによりこの効果が生じると考えられる。分解に関する
同様の結果が、若干低くはなるが、シス−ＵＣＡで得られた（表４）。この結果
は、ヒドロキシルラジカル除去に対するトランス−ＵＣＡおよびシス−ＵＣＡの
類似の２次速度定数に一致する（８）。Ｆｅ^２＋を有しない過酸化水素はＵＣＡ
異性体に全く影響を及ぼさなかった。しかし、過酸化水素を有しないＦｅ^２＋は
、インキュベーションを１日に延長すると、ＵＣＡ異性体を部分的に分解した（
データは示さず）。

【００３０】形成した酸化産物は主としてＩｍＣＨＯおよびＧＬＸである。ＩｍＣＨＯを出
発物質として用いる追加実験において、フェントン酸化または光酸化後にＩｍＣ
ＯＯＨの収率はほぼ１００％となった。高度に酸化された（４％未満のＵＣＡを
含有する）ＵＣＡサンプルでは、ＩｍＣＯＯＨが２２６ｎｍを吸収する化合物の
主体であり、ＩｍＣＨＯ濃度は大幅に減少した。追加実験により、この酸化条件
下で、アルデヒド（ＩｍＣＨＯ）がカルボン酸（ＩｍＣＯＯＨ）に酸化されるこ
とが示された。４０μＭのＵＣＡのフェントン酸化（表４、第３．１項および第
３．２項）を除いて、全ての実験においてＧＬＸの量はＩｍＣＨＯよりも少ない
と分析された（表３）。２５０μＭの比較的高濃度のトランス−ＵＣＡおよびシ
ス−ＵＣＡを、緩衝していないフェントン酸化系によりそれぞれ７８％および７
５％まで分解した。また、表４の第３項は酸化産物の収率が初期ＵＣＡ濃度に比
例することを示している。明らかに、シス−ＵＣＡからのＩｍＣＨＯの収率はト
ランス−ＵＣＡからのものより実質的に大きい。リン酸緩衝フェントン系におい
て、４０〜２５０μＭの範囲の初期ＵＣＡ濃度とは無関係に、類似の分解および
酸化産物の類似の収率が得られた（表４、第１項、４０μＭの結果のみを示した
）。ＥＤＴＡが存在する場合、分解が大きくなり、また酸化産物（特にＩｍＣＨ
Ｏ）の収率が高くなった（表４、第２項）。初期ＵＣＡ濃度を高くするほど、こ
の収率も高くなった。緩衝していない系で、調べた系の全ての中で最も高い分解
が見られた。初期ＵＣＡ濃度が高い（２５０μＭ）場合、酸化産物収率が全ての
系の中で最も高くなった（表４、第３項）。

【００３１】銅イオン（Ｃｕ^２＋）に基づく別のヒドロキシルラジカル発生系を調べた場合
、Ｃｕ^２＋／アスコルビン酸／過酸化水素の組合せによりトランス−ＵＣＡの大
規模な分解（表３）とＩｍＣＯＯＨを優先したＵＣＡ酸化産物の中規模な収率と
が得られる。アスコルビン酸を入れない、Ｃｕ^２＋（５０μＭ）および過酸化水
素（５００μＭ）を有する系では、分解はほとんど起きなかった（トランス−Ｕ
ＣＡの８８％が残留、データは示さず）。インビボの状態では、表皮の銅含量は
鉄よりも低いということを思い出さなければならない（２９）。

【００３２】２．３．４．フェントン酸化と光酸化とにおけるＵＣＡの比較ＵＣＡフェントン酸化産物のクロマトグラフパターンとＵＣＡ光酸化産物のク
ロマトグラフパターンとは非常に類似していた（図５）。また、光酸化下では、
ｐＨ７．２のリン酸中では酸化抑止効果が見られたが、酸化産物の収率はＩｍＣ
ＨＯの方が優位であった（表４、第４項対第５項）。光酸化においては、シス−
ＵＣＡの分解はトランス異性体と比較してかなり減少した（表４、第４〜６項）
。フェントン酸化においては、この効果は少なかった。表４のデータは空気の飽
和した溶液に対するものである。フェントン酸化または光酸化の前に溶液にアル
ゴンをパージすることにより、ＵＣＡ分解および酸化産物の収率が、いずれも因
数２〜３で促進された。アルゴンをパージした溶液を加熱（３７℃まで）するこ
とによりＩｍＣＨＯの収率が若干上昇した。

【００３３】表４のデータは、分解したＵＣＡのマイクロモル数と形成した酸化産物のマイ
クロモル数との間に食い違い（ギャップ）があることを示している。最も小さな
ギャップは、それでも５２％であるが、緩衝していない系中でシス−ＵＣＡを酸
化した後に見られた（第３項）。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によりＵＶ
検出または蛍光検出を用いて、逆相クロマトグラフィーでは知ることのできなか
った、ギャップ産物の内部をより詳細に知ることができた。溶出剤としてイソプ
ロパノール／アンモニア２５％（４：１）を用いてシリカ上でＴＬＣを行ったと
ころ、溶出可能な、部分的に重なった複数の蛍光斑の列と出発点に１つの蛍光斑
が見られた（データは示さず）。しかし、大量のＵＣＡが分解した（各ＵＣＡ異
性体の４％未満が残留）光酸化実験に導入したトランス−ＵＣＡの初期重量は、
過酷な光酸化の後でもそれほど低下しなかった（約１４％）。この結果は、ＣＯ _２および水等の気体化合物の代わりに不揮発性固体物質が優位に形成されること
を示している。ＴＬＣパターンおよび定量実験は、前記のギャップを埋める物質
を形成することとなる、ヒドロキシルラジカルにより開始されたＵＣＡの連鎖反
応の可能性を示すものである。ＵＣＡ異性体、ＩｍＣＨＯおよびＩｍＣＯＯＨの
同時定量に用いるクロマトグラフ条件下では、これらの物質を完全に検出するこ
とはできない。

【００３４】２．３．５．接触過敏症の抑止ＵＣＡ酸化産物の抑止効果を図５に示す。耳介腫脹反応の最大値を１００％に
正規化した。残留シス−ＵＣＡを４％未満含有する、ＵＣＡ（ＰＯ混合III）を
過酷に光酸化した残留物で、最も減少した。耳介腫脹は１９％のみ（腫脹の８１
％は減少した）という結果となった。この混合物の１０倍希釈でさえ、顕著に耳
介腫脹が減少（耳介腫脹２９％）し、これは濃度１ｇ／ｌのシス−ＵＣＡと同等
の効果（耳介腫脹３１％）であった。同定された３つのイミダゾールを混合する
ことにより、別の顕著な効果が得られた。１種類のイミダゾールのみ（１ｇ／ｌ
）を調べた際、中程度の効果のみが見られたが、一緒に混合して（１ｇ／ｌ、各
イミダゾールを０．３３ｇ／ｌ）調べた際には、相乗効果が得られた（耳介腫脹
２６％）。グリオキシル酸およびシュウ酸のアンモニウム塩は、ＣＨＳを顕著に
は抑止しなかった。

【００３５】調製的規模のＵＣＡ光酸化さらに分析するために、トランス−ＵＣＡおよび過酸化水素の濃度をＵＶ露光
と同様に大幅に増やして、逆相カラムから回収フラクションとしてＵＣＡ光酸化
産物を多量に得た。典型的クロマトグラムを図４に示す。Ｒ_ｔ８、Ｒ_ｔ１０、Ｒ _ｔ１４、Ｒ_ｔ１７で表された４つのフラクションを同定のために最終的に選択し
た（図４のピークＡ、１〜３）。分析に先立ち、Ｃ_１８シリカ上で固相抽出を行
ってテトラブチルアンモニウムを除去した。

【００３６】同定Ｒ_ｔ８はイミダゾール−４−カルボキサルデヒド（ＩｍＣＨＯ）と同定された
。このＵＶスペクトルは、吸収極大が２５７ｎｍである合成対照化合物（下記参
照）と同一であった。Ｒ_ｔ８を合成イミダゾール−４−カルボキサルデヒドと共
に同時注入すると、滞留時間８．１３分の単一のクロマトグラフピークを生じた
。更なる証拠を集めるべきである（図４のピークＡ）。光酸化したＵＣＡサンプ
ル中のＩｍＣＨＯ量は−２０℃で貯蔵すると徐々に減少した。

【００３７】Ｒ_ｔ１０はイミダゾール−４−酢酸と同定された。このＵＶスペクトルは、２
１３ｎｍの吸収極大と同一であった。エレクトロスプレー法を用いて質量スペク
トルを得、分析の前に乾燥サンプルをメタノール／ＨＣｌおよびｎ−ブタノール
／ＨＣｌで処理した。メチル化後には質量数１４０でピークが得られ、ブチル化
後には質量数１８３でピークが得られた。したがって、当初の化合物の質量数は
１２６であった。Ｒ_ｔ１０を市販のイミダゾール−４−酢酸と共に同時注入する
と、滞留時間８．９８分の単一のクロマトグラフピークを生じた（図４のピーク
１）。

【００３８】Ｒ_ｔ１４はイミダゾール−４−カルボン酸（ＩｍＣＯＯＨ）と同定された。こ
のＵＶスペクトルは、吸収極大が２２６ｎｍである市販の対照化合物と同一であ
った。プロトン共鳴（１Ｈ−ＮＭＲ）分析をＤ_２Ｏに行ったところ、シフトが７
．７６ｐｐｍおよび７．５３ｐｐｍのイミダゾールプロトンを１：１の比で示し
た。エレクトロスプレー法を用いて質量スペクトルを得、分析の前に乾燥サンプ
ルをメタノール／ＨＣｌおよびｎ−ブタノール／ＨＣｌで処理した。メチル化後
には質量数１２６でピークが得られ、ブチル化後には質量数１６９でピークが得
られた。したがって、当初の化合物の質量数は１１２であった。Ｒ_ｔ１４を市販
のＩｍＣＯＯＨと共に同時注入すると、滞留時間１４．７３分の単一のクロマト
グラフピークを生じた（図４のピーク２）。光酸化したＵＣＡサンプル中のＩｍ
ＣＯＯＨ量は−２０℃で貯蔵すると徐々に減少した。

【００３９】イミダゾール−４−カルボキサルデヒドの合成４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール−ＨＣｌから（４−ホルミルイミダゾー
ル；ＦＷ＝１３４．５）５３８ｇの出発物質（４ミリモル）をおよそ４ｍｌのエタノールに溶解し、５
００ｍｇのＮａＨＣＯ_３（６ミリモル）を加えた。試験管を４℃と温水温度とに
交互にし、断続的に６０分間攪拌した。試験管からＣＯ_２を逃がした。数本のエ
ッペンドルフ試験管に混合物を分け、スピードバック処理に１時間供した。残留
物は、明るい黄色のシロップ状の液体を有する白い固体であった。クロロホルム
／メタノールの１：１混合物を試験管に加え、続いてゆっくりと加熱および攪拌
をした。混合したフラクションを３５００回転で５分間遠心分離し、ＮａＨＣＯ _３を分離した。透明な上澄を−２０℃に一晩保ち、さらにＮａＨＣＯ_３を析出さ
せた。次に、溶液をフィルターで濾し、ロータベイパー装置を用いて乾燥するま
で蒸発させた。マグネチックスターラーを用いて残留物を２０ｍｌのジオキサン
に溶解し、４．４ｍｇのＭｎＯ_２（活性化したもの、合成用）を同じフラスコに
加えた。残留物は最初は完全には溶解しないかもしれない。混合物をパラフィン
オイル浴上で２時間還流した。温めた溶液を濾過し、温めたジオキサンでＭｎＯ _２を１回洗浄した。ロータベイパー（Ｒ）を用いてジオキサンを蒸発させ、白お
よび黄色の微細な結晶固体を得た。メタノール中で結晶化を繰返し行った。残留
物はメタノールによく溶解するので、少量のメタノールが必要であった。収量：微細なオフホワイトの結晶約２０ｍｇ（参考文献：約４７５ｍｇ）Ｍ．ｐ．：１６７〜１６８℃（参考文献：１７３〜１７５℃）Ｍ．ｐ．：４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール−ＨＣｌ：１０８〜１１１
℃ Ｍ．ｐ．：イミダゾール−４−カルボン酸：２９４〜２９５℃ （参考文献はＢａｔｔｅｒｓｂｙＡＲら、ＪＣｈｅｍＳｏｃ（Ｐｅｒ
ｋｉｎＩ）４３〜５１、１９８０年である）。

【００４０】この結果、いくつかのＵＣＡ酸化産物の類似の組がＵＶ照射では形成でき、フ
ェントン反応形では形成できないということが分かった。これまで、３つの産物
が同定された。発明者らはこれらの化合物も表皮の上層に発生するものと考え、
インビボでＵＣＡ酸化産物を定量する方法が開発されるであろうと考える。光酸
化後にＩｍＣＨＯの分解とＩｍＣＯＯＨの生成が同時に起きることから、貯蔵中
にＩｍＣＨＯが次第に酸化されてＩｍＣＯＯＨになるという我々の仮説が導かれ
たのである。酸素種との接触により、多くのアルデヒドが徐々に酸化され、対応
するカルボン酸になる。

【００４１】ＵＣＡ酸化産物が免疫抑制特性を有するのであれば、シス−ＵＣＡ誘導免疫抑
制の難解な機構のうち２つの現象を解明することができる。第１の現象は、接触
過敏症を測定した耳介腫脹反応のモデル中において酸化防止剤により免疫抑制が
抑止（１９〜２１）されることである。本発明によれば、酸化防止剤によりヒド
ロキシルラジカルが中和されるので、ＵＣＡ酸化産物の生成が阻止される。第２
の現象は、ＵＶ−Ｂによるシス−ＵＣＡの形成とＵＶ−Ａによるシス−ＵＣＡの
形成との間に関係が無いことである。シス−ＵＣＡが形成されるにもかかわらず
、ＵＶ−Ａ照射では免疫抑制は起きなかった。本発明によれば、ＵＶ−ＡはＵＣ
Ａを光酸化することができないということでこの結果を説明できる。したがって
、ＵＶ−ＡではＵＣＡ光酸化産物は形成されず（結果の項）、それゆえ免疫抑制
が起きないのである。本発明の結果および前記の仮説は、ＵＣＡ（光）酸化産物
が皮膚の免疫系で重要な役割を果すことを示している。

【００４２】（参考文献） 1. Morrison, H. (1985) Photochemistry and photobiology of urocanic acid.
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【００４３】

【表１】ウロカニン酸異性体および関連化合物のヒドロキシルラジカル除去能力ａ．溶解度が低いため、８ｍＭより高い濃度ではトランス−２−フリルアクリル
酸をテストしていない。ｂ．ｎは速度を計算した勾配の数を示す。ｃ．文献［２２］では２．３〜３．０×１０^９Ｍ^−１・ｓ^−１。

【００４４】

【表２】光酸化後のウロカニン酸（ＵＣＡ）異性体^（１）［１］トランス−ＵＣＡまたはシス−ＵＣＡの初期濃度は４０μＭであり、過酸
化水素の初期濃度は５００μＭである。［２］２回の測定の標準偏差（Ｓ．Ｄ．）。［３］Ａ．Ｕ．：ピーク面積の合計から誘導された任意単位。８つの主要な産物
のピークを合計した。［４］この列はトランス−ウロカニン酸を出発物質とする場合にのみ適用される
。［５］フィリップスの蛍光管。キセノンアークと比較するとスペクトル分布およ
び放射量が異なる。

【００４５】

【表３】フェントン酸化後のトランス−ウロカニン酸^（１）［１］トランス−ＵＣＡ初期濃度：４０μＭ。［２］過酸化水素より先にＦｅ^２＋を添加。［３］１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．２。［４］Ａ．Ｕ．：ピーク面積の合計から誘導された任意単位。８つの主要な産物
のピークを合計した。［５］２回の測定の標準偏差（Ｓ．Ｄ．）。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明においてヒドロキシルラジカル除去能力を調べた化合物である
。（ａ）トランス−ＵＣＡ、（ｂ）シス−ＵＣＡ、（ｃ）Ｌ−ヒスチジン、（ｄ
）ジヒドロＵＣＡまたは３−（イミダゾール−４−イル）プロピオン酸、（ｅ）
イミダゾール酢酸、（ｆ）２−メチルイミダゾール、（ｇ）イミダゾール、（ｈ
）Ｌ−アラニン、（ｉ）トランス−２−フリルアクリル酸および（ｊ）尿酸であ
る。

【図２】ヒドロキシルラジカルを用いたトランス−ＵＣＡおよびシス−ＵＣＡ
の２次速度定数の決定である。速度定数は、直線（ｋ＝傾き×Ｋ_ｄＲ×［ｄＲ］
×Ａ_０）から導いた。式中、Ａ_０はヒドロキシルラジカル除去剤の無い状態で測
定した吸光度であり、Ｋ_ｄＲはパルス放射線分解に関する研究［８］から３．１
×１０^９Ｍ^−１・ｓ^−１とし、［ｄＲ］は３ｍＭとした。この組では、速度定数
はトランス−ＵＣＡおよびシス−ＵＣＡに対してそれぞれ８．４９×１０^９Ｍ⁻ ^１・ｓ^−１および７．３３×１０^９Ｍ^−１・ｓ^−１であった。その他の除去剤に
ついても同様にして調べた。

【図３】８０μＭトランス−ウロカニン酸を２０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．２
に入れたもののクロマトグラムである。過酸化水素の初期濃度は５００μＭ、注
入量は８０μＬであった。ａ．過酸化水素を入れた。照射はせず。ｂ．過酸化水素は入れず。ＷＧ２８０フィルターを通したキセノンアークランプ
で照射を行った。ｃ．過酸化水素を入れ、ｂと同様にして照射を行った。ｄ．過酸化水素を入れ、ＷＧ３３５フィルターを通したキセノンアークランプで
照射を行った。Ａ〜Ｈで表されるピークは光酸化産物に対応する。２１０ｎｍのＵＶ検出を用い
てＡｌｌｔｉｍａＣ_１８カラム上で分離を行った。溶出剤は、１０ｍＭリン酸ナ
トリウムｐＨ７．２と１．０ｍＭ硫酸テトラブチルアンモニウムとからなる。実
験条件は詳細な説明に記載した。

【図４】８０μＭトランス−ＵＣＡおよび５００μＭ過酸化水素を水に入れた
（緩衝剤なし）ものからＵＣＡ酸化産物を形成した際の比較クロマトグラフパタ
ーンである。左は２５０μＭのＦｅ^２＋を用いてフェントン酸化をした後のもの
であり、右はＵＶ−Ｂを３２ｋＪ・ｍ^−２で含有する、全紫外線で光酸化した後
のものである。光異性化が起きないため、フェントン酸化後のものにはシス−Ｕ
ＣＡピークがない。ピークの割り当て（Ａ〜Ｇ）は図１Cと同様に行った。ピー
クＢ、ＣおよびＤは、それぞれイミダゾール−４−カルボキサルデヒド、イミダ
ゾール−４−酢酸およびイミダゾール−４−カルボン酸を表す。クロマトグラフ
の条件は図３に適用したものと同じである。

【図５】ＢＡＬＢ／ｃマウスからの耳介腫脹の減少としての接触過敏症の抑制
である。ポジティブコントロール（抑制なし）を１００％に正規化した。Ｉｍ−
ｍｉｘは、３種の同定されたイミダゾール（同定の項参照）の混合物であり、Ｐ
Ｏｍｉｘ IIIは３種の同定されたイミダゾールを、大規模な光酸化で得られた
他の何種かの同定されていないＵＣＡ酸化産物と共に混合したものである。不全
トランス−ＵＣＡおよびシス−ＵＣＡが３重量％未満の量で存在する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｐ 9/10 17/00 17/00 17/06 17/06 17/16 17/16 25/18 25/18 37/02 37/02 39/06 39/06 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4B018 MD09 ME06 ME07 4C083 AC851 AC852 BB46 BB47 CC19 EE17 4C086 AA01 AA02 BC38 MA01 MA52 NA14 ZA01 ZA36 ZA45 ZA89 ZB07 ZB13 ZC37 ZC52 4H025 AA54 AC07

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】物質におけるラジカルを除去するための方法であって、前記物質
にウロカニン酸又はその機能ある同等物を供給することからなる方法。
【請求項２】ウロカニン酸が、トランス−ウロカニン酸である請求項1記載の
方法。
【請求項３】前記物質が、水溶性である請求項1又は2項に記載の方法。
【請求項４】前記物質が、食品又は化粧品からなる請求項1〜3項のいずれか1
項に記載の方法。
【請求項５】ウロカニン酸を酸化防止剤又はラジカル除去剤として使用する方
法。
【請求項６】ウロカニン酸が、トランス−ウロカニン酸である請求項5項記載
の方法。
【請求項７】水溶液中で使用する請求項5又は6項記載の方法。
【請求項８】食品又は化粧品を調製する際に使用する請求項7記載の方法。
【請求項９】薬剤組成物の調製用にウロカニン酸を使用する方法。
【請求項１０】酸化ストレスの処理用に薬剤組成物を調製するための使用方法
。
【請求項１１】薬剤組成物の調製用にウロカニン酸の酸化産物を使用する方法
。
【請求項１２】前記生成物が光酸化産物である請求項１１記載の使用方法。
【請求項１３】動物の免疫反応の調節用に薬剤組成物を調製するための請求項
１１又は１２項に記載の使用方法。
【請求項１４】前記生成物が、イミダゾール−4−カルボキシルアルデヒド、
イミダゾール−4−酢酸、又はイミダゾール−4−カルボン酸などのイミダゾール
である請求項１１〜１３項のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１５】ウロカニン酸又はその機能ある同等物及び/又は酸化産物を含
有する薬剤組成物。
【請求項１６】動物の酸化ストレスを治療する方法であって、ウロカニン酸又
はその機能ある同等物からなる薬剤組成物で前記動物を治療することからなる方
法。
【請求項１７】動物の免疫反応を調節するための方法であって、ウロカニン酸
の酸化産物からなる薬剤組成物で前記動物を処理することからなる方法。
【請求項１８】前記産物が、イミダゾール−4−カルボキシルアルデヒド、イ
ミダゾール−4−酢酸、又はイミダゾール−4−カルボン酸などのイミダゾールで
ある請求項１７記載の方法。
【請求項１９】さらに、請求項１７又は１８に記載の動物の免疫反応を調節す
るための方法からなる請求項１６記載の方法。