JP2003504070A - ケトカルボン酸及びそのエステルの還元のための方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ラクトバシラスの存在下に少なくとも１つのケト基を変換してヒドロキシ基にするジケトカルボン酸又はヒドロキシケトカルボン酸又はそのエステルの還元のための方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明はジケトカルボン酸又はヒドロキシケトカルボン酸又はそのエステルを
ヒドロキシ化合物に還元するための方法に関する。

【０００２】 光学活性ヒドロキシ化合物は有用なキラル構成単位である。このようにキラル
のジオールは医薬品及び植物保護の多数の作用物質並びに触媒のための有用な原
料である。キラル化合物を製造するために、バイオテクノロジー的な方法を使用
でき、これらは微生物の全細胞又は単離された酵素の使用下にも作業できる。ア
ルコールの合成のために適当な酵素は、とりわけオキシドレダクターゼであり、
これらはＥＰ９１１０７０６７．０号（ラクトバシラス ケフィア（Lactobacill
us kefir）から）、ＥＰ０７９１４Ａ２及びＰＣＴ／ＤＥ９９／００８４８号（
ラクトバシラス ブレビス（Lactobasillus brevis）から）に記載されている。
但し、これらの合成は適当な酵素を使用できるが可溶性補酵素（ＮＡＤＨ、ＮＡ
ＤＰＨ）の添加及び補酵素−再生系を必要とする。同様にＷＯ９７／００９６８
号においてケト基の還元のためにレダクターゼの使用が記載されている。

【０００３】 更にＵＳ−ＰＳ５３４２７６７号においては、ラクトバシラス ケフィアから
のアルコール−デヒドロゲナーゼを使用して還元を実施する方法を記載している
。

【０００４】 ＤＥ１９６１０９８４．１号においてはアルコール−デヒドロゲナーゼを使用
する方法を記載している。精製された酵素の他に全細胞を使用してもよい。しか
しながらこの発明の対象は２個以上のケト基を有する化合物の反応ではない。同
様に、該方法はケトカルボン酸及びそのエステルの反応に関するものではない。

【０００５】 微生物は酵素に対する廉価な代替物である。但し、該方法はしばしば低い収率
をもたらす（F. Aragazzini et al., Appl. Mikrobiol. Biotechnol. (1986) 24
, 175-177）。更にしばしば収率低下を促す二次反応を引き起こし、生成物は常
に充分なエナンチオマー純度を有さない。生成物収率及び生成物品質は使用され
る菌株及び培養条件に強く依存する。

【０００６】 欧州特許出願０５６９９９８Ａ２号から、最終的に種々の細菌をエーテル基を
有するジケトエステルの還元のために使用する方法が公知である。この発明の明
細書により使用可能な微生物には多くの酵母及び微生物が挙げられるが、ラクト
バシラス種は挙げられていない。

【０００７】 本発明の対象はそれに応じてジケトカルボン酸又はヒドロキシケトカルボン酸
又はそのエステルの還元のための方法であり、該方法は前記のような欠点をもは
や有さない。ヒドロキシ基とは本願においては保護基で保護されたヒドロキシ基
をも意味する。

【０００８】 本発明はジケトカルボン酸又はヒドロキシケトカルボン酸又はそのエステルを
、ラクトバシラス種の存在下に少なくとも１つのケト基をヒドロキシ基に変換す
ることによって還元するための方法を特徴としている。特に有利な実施態様にお
いてはジオールへの還元を実施する。

【０００９】 本発明による方法は、特に式１：

【００１０】

【化５】

【００１１】 ［式中、 Ａ，ＢはＣ＝Ｏ、ＣＨＯΣであり、その際、ΣはＨ又はヒドロキシ官能基のため
の保護基であり、Ａ及びＢは同一又は異なっていてよく、 Ｒ^１、Ｒ^２はＨ又はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シク
ロアルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキルアルキルの群からなる成
分であり、その際、これらの成分はヘテロ原子、例えばＳｉ、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、
Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩによって一置換又は多置換されているか、又は完全にヘテ
ロ原子によって置換されていてよく、 Ｒ^３はＨ、金属カチオン又はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキ
ル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキルアルキルの群か
らなる成分であり、その際、これらの成分もヘテロ原子、例えばＳｉ、Ｎ、Ｐ、
Ｏ、Ｓ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩによって一置換又は多置換されていてよく、 Ｙはアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、
アリール、アラルキル、シクロアルキルアルキルの群からなる成分であり、その
際、これらの成分もヘテロ原子、例えばＳｉ、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ
又はＩによって一置換又は多置換されていてよく、その際、Ｘがアルキル、アリ
ール、シクロアルキル、アラルキル又はシクロアルキルアルキルであってよいＸ
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−は省き、 ハロゲンとはフッ素及び塩素が特に有利であり、 ｎは０〜１０である］のプロキラルな３，５−ジオキソカルボン酸誘導体の触媒
的還元を含む。

【００１２】 アルキルとは直鎖状、また分枝鎖状の飽和炭素鎖をも意味する。例えばメチル
、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｔ−ブチル、ペンチル、ｉ−ペンチル
、ｎ−ヘキシル、ｉ−ヘキシルを挙げることができる。

【００１３】 アルケニルによって、直鎖状及び分枝鎖状の不飽和炭化水素が示され、これに
関しては、例えばビニル、１−プロペニル、アリル、ブテニル、ｉ−ブテニルを
挙げることができる。

【００１４】 アルキニルによって、直鎖状及び分枝鎖状の不飽和炭化水素を示し、これは少
なくとも−Ｃ≡Ｃ−結合を有し、例えばエチニル又はプロピニルである。

【００１５】 シクロアルキルという概念には、飽和の環式の炭化水素鎖が含まれ、これは３
、４、５、６又は７個の炭素原子からなる。

【００１６】 シクロアルケニルは不飽和の環式の５、６、７又は８個の炭素原子を有する炭
化水素を示す。アリールとは芳香族系、閉じた複素芳香族化合物及び置換された
芳香族系、例えばフェニル、ｐ−メチルフェニル又はフラニルを意味する。

【００１７】 アラルキルとは、アルキル基を介して結合しているアリール基、例えばベンジ
ル基を意味している。

【００１８】 シクロアルキルアルキルという概念はアルキル基を介して結合しているシクロ
アルキル基を含む。

【００１９】 同様に式２，３及び４による化合物の反応は可能である。

【００２０】

【化６】

【００２１】 本願ではＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＹは式１と同じ意味を有する。

【００２２】 ΣはＨ又はヒドロキシ官能のための保護基である。

【００２３】 本発明による方法によって、それに応じて特に以下に示す式５：

【００２４】

【化７】

【００２５】 の３，５−ジヒドロキシカルボン酸誘導体を製造できる。

【００２６】 ここではＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＹは式１と同じ意味を有する。

【００２７】 ΣはＨ又はヒドロキシ官能のための保護基である。

【００２８】 特に本発明による方法を使用して従来の技術に反して基質としての式３及び４
による化合物を反応させることができる。

【００２９】 立体中心Ｃ−３及びＣ−５の配置に応じて、本発明により製造される式５の３
，５−ジヒドロキシカルボン酸誘導体はキラル天然物質、医薬品物質及び農業型
作用物質、触媒及び阻害剤の合成での目的に使用できる。このための例はメバロ
ン酸型のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害剤及びリプスタチン（Lipstatin）型
のリパーゼ阻害剤である。

【００３０】 別の天然物質又は作用物質はＣ−３及びＣ−５の位置での立体中心の別の配置
を必要とする。またこれは本発明によって可能である。

【００３１】 本発明による方法は３，５−ジオキソカルボン酸誘導体の還元において、ヒド
ロキシ基をＣ−３又はＣ−５又はＣ−３及びＣ−５の位置に部位選択的導入を可
能にし、その際、ｒ−配置を有する生成物が得られる。ｒ−配置という概念に関
しては、以下の式３を例に説明する： 式３においては５位のＯΣ−基は紙面から突出しており、一方でＹ及び炭素基
本骨格の炭素原子は紙面に横たわっている：

【００３２】

【化８】

【００３３】 この配置は以下にＹとは無関係にｒ−配置と呼称する。

【００３４】 更に本発明による方法は式２の３，５−ジオキソカルボン酸誘導体の還元にお
いてＣ−２及びＣ−４の位置での立体中心の意図的な固定を可能にする。特にＲ ^１ 及びＲ^２がＨとは異なり、Ｒ^１が例えばメチル基を表す場合に当てはまる。エ
ナンチオマー純度もジアステレオマー純度もここでは非常に高い（＞９５％）。

【００３５】 本発明によれば、還元法によって種々のヒドロキシ基含有率を有する化合物を
含有する混合物を製造することができる。このための例は、式３、４及び５の化
合物からなる混合物である（Ｒ^１、Ｒ^２＝Ｈ；Ｙ＝−ＣＨ_３又は−ＣＨ_２Ｃｌ及
びＲ^３＝Ｃ（ＣＨ_３）_３）。

【００３６】 本発明による方法はラクトバシラス種を使用して実施する。基本的に全てのラ
クトバシラス種が該当する。しかしながら、ラクトバシラス ケフィア及びラク
トバシラス ブレビスの使用が特に有利である。

【００３７】 本発明による方法は慣用の発酵条件下に、かつ慣用のリアクター中で実施でき
る。

【００３８】 補助基質としては、容易に代謝可能な炭素含有基質、例えばグルコースを使用
できる。これによって反応時に消費される還元当量が追加される。

【００３９】 これらの反応は本発明によれば１０〜５０℃、有利には１５〜４０℃の温度で
実施する。

【００４０】 ｐＨ値は２〜１０、有利には４〜８である。しかしながら適当なｐＨ値を保証
するためにその都度発酵技術において慣用の緩衝物質を使用できる。これらは、
例えばトリエタノールアミン、リン酸バッファー、リン酸−クエン酸バッファー
、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール−バッフ
ァー、２−［Ｎ−モルホリノ］エタンスルホン酸−バッファー（ＭＥＳ）又はＴ
ｒｉｓバッファーである。これらのバッファーのための濃度範囲は、有利には５
０〜５００ミリモル／ｌの範囲である。

【００４１】 リアクターとしては同様に全ての公知のリアクター型を使用できる。このよう
に従来慣用の撹拌リアクターも固相リアクターも使用できる。

【００４２】 本発明による方法の使用において、とりわけ高価であり、環境に不利なラセミ
体又はジアステレオマーの分離を省くことができる。ジアステレオ選択的な合成
において必要なホモキラルな補助基の化学量論的量の結合及び分離が回避される
。更に出発化合物中のジヒドロキシカルボン酸エステルの炭素骨格は既に完全で
ある、すなわち立体中心は全合成順序における後半の時点に導入される。これに
よってホモキラル材料の損失は低く保持される。同時に、本発明による方法によ
って非常に高い立体選択性が達成される。全細胞の使用によって更に、反応にお
いて更に高価な補酵素及び補酵素−再生系を使用する必要性が排除される。本発
明により製造される式１〜５による化合物は、特にキラルな天然物質、医薬物質
、農業物質、触媒及び阻害剤の製造のために使用できる。このための例はメビン
サン型のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ及びリプスタチン型のリパーゼ阻害剤であ
る。

【００４３】 以下に本発明を実施例をもとに詳細に記載する： 例１：ラクトバシラス細胞（ラクトバシラス ケフィア）の製造 還元のための細胞は、ラクトバシラス ケフィア（例えばＤＳＭ２０５８７）
の菌株培養を以下の培地で増殖させることによって得られる： １Ｌあたり：１０ｇの典型的に消化されたカゼインペプトン；１０ｇの肉エキ
ス；５ｇの酵母抽出物、２０ｇのグルコース；１ｇのTween ８０；２ｇのＫ_２Ｈ
ＰＯ_４；５ｇの酢酸Ｎａ；２ｇのクエン酸二アンモニウム；０．２ｇのＭｇＳＯ _４ ×７Ｈ_２Ｏ；０．０５ｇのＭｎＳＯ_４×Ｈ_２Ｏ；ｐＨ＝６．２〜６．５。

【００４４】 ２４時間の増殖後に細胞を遠心分離によって回収する。これらは凍結によって
保存できる。

【００４５】 例２：ラクトバシラス ケフィアによる６−クロロ−３，５−ジオキソヘキサ
ン酸−ｔ−ブチルエステル（Ｉ）の全細胞変換 第二級アルコール（Ｓ）−ＩＩ、（Ｒ）−ＩＩＩ及び（３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶ（
式の図Ｉ）の合成 以下に記載の全細胞変換を室温において、例１に記載のように得られるラクト
バシラス ケフィアの細胞を使用して実施する。ジケト化合物ＩをM.Wolberg,W.H
ummel,M.Mueller,Ger.Pat.Appl.19847302.2,1998に記載のように製造する。

【００４６】

【化９】

【００４７】 微生物による還元の実施 ５０ｍｌのビーカー中で０．６１ｇの湿式細胞質量を０．５ｍｌのリン酸−ク
エン酸バッファー（２５０ｍＭ、ｐＨ５．５）中に撹拌しながら懸濁させる。こ
の細胞懸濁液のうち、０．９ｍｌを１ｍｌのグルコース溶液（５Ｍ、オートクレ
ーブ済）、８ｍｌのリン酸−クエン酸バッファー（２５０ｍＭ、ｐＨ５．５）及
び５０μｌの６−クロロ−３，５−ジオキソ−ヘキサン酸−ｔ−ブチルエステル
（Ｉ）と混合する。反応混合物を磁気撹拌機で撹拌する。

【００４８】 反応制御 １時間、２時間、６．５時間及び１０．５時間後に、試料を採取する。これに
加えて４０μｌの反応溶液を２００μｌの酢酸エチルエステルに添加し、振出さ
せ、かつ有機相をガスクロマトグラフィーによって分析し、その際、検出器とし
て電子衝突イオン化（７０ｅＶ）による四極子型質量分光分析計を使用する（Ｇ
Ｃ−ＭＳ直結）。

【００４９】 ＧＣキャピラリーカラム：ＨＰ−５ＭＳ（５％のフェニルメチル−シロキサン
；３０．０ｍ×２５０μｍ×０．２５μｍ 名目上） 温度プログラム：１分間６０℃、次いで２８０℃に（１５℃／分） ガスフロー：１．０ｍｌ／分のヘリウム 注入：スプリット５０：１ 滞留時間： Ｉ： ８．２１分 （Ｓ）−ＩＩ： ８．１０及び８．８４分（以下参照） （Ｒ）−ＩＩＩ： ９．０６分 （３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶ： ９．２６分 ジケト化合物Ｉはフラノンとして検出され、同様にヒドロキシケトエステルは
（Ｒ）−ＩＩＩとしても検出される（インジェクター中でのＨＣｌ−分離、式の
図ＩＶを参照）。ヒドロキシケトエステル（Ｓ）−ＩＩはＧＣ−インジェクター
中での部分的な熱的ラクトン形成によって２つのシグナルを生じる。

【００５０】 クロマトグラムをもとに、微生物による還元の経過を追跡する：第１の両方の
試料において、ヒドロキシケトン（Ｓ）−ＩＩ及び（Ｒ）−ＩＩＩの割合の増大
が確認され、一方で後半部の時点に採取された試料中にジヒドロキシ化合物につ
いてのシグナルは強度を増す。同時にヒドロキシケトン（Ｓ）−ＩＩ及び（Ｒ）
−ＩＩＩについてのシグナルは再び失われるので、ジヒドロキシ化合物（３Ｒ，
５Ｓ）−ＩＶが中間生成するヒドロキシケトン（Ｓ）−ＩＩ及び（Ｒ）−ＩＩＩ
の微生物による還元によって形成されると仮定される。

【００５１】 後処理： １２．５時間後に、反応を細胞の遠心分離によって中断する。細胞ペレット及
び遠心分離上清を分離して、互いに酢酸エチルエステルで２回ずつ抽出する。精
製された有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、かつ回転蒸発器上で濃縮した後に
４４ｍｇの粗生成物が得られる。

【００５２】 生成物分析 ａ）粗生成物中の反応生成物の割合の測定 非破壊のガスクロマトグラフィー分析（ＧＣ−ＭＳ、上記参照の方法）のため
に、１．５ｍｌのＧＣ−ガラスバイアル中に１．５ｍｇの微生物的な還元の粗生
成物を０．５ｍｌのジクロロメタン中に取り、１０μｌのトリフルオロ酢酸無水
物（ＴＦＡＡ）及び１０μｌのピリジンを混合する。引き続きガラスバイアルを
隔壁で閉じ、４０℃で３０分間保持する（水浴）。

【００５３】 後続のＧＣ−ＭＳ分析によって４つのメインシグナルが得られ、これらを属す
る質量スペクトルをもとに誘導体生成物（３Ｒ，５Ｓ）−Ｖ、（Ｓ）−ＩＶ、（
Ｓ）−ＶＩＩ及びＶＩＩＩに割り当てることができる（式の図ＩＩ）。

【００５４】

【化１０】

【００５５】 誘導体（３Ｒ，５Ｓ）−Ｖは微生物の還元生成物（３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶから形
成され、一方でヒドロキシケトン（Ｓ）−ＩＩが反応して、２つの立体異性体の
ビスアシル化生成物（Ｓ）−ＶＩ及び（Ｓ）−ＶＩＩになる。環式の誘導体ＶＩ
ＩＩはフラノンＩＸから形成され、その微生物による反応の間のジケト化合物Ｉ
からの形成は公知である（分子内アルキル化による副生成物、M. Wolberg, W. H
ummel, M. Mueller, Ger. Pat. Appl. 19857302.2, 1998を参照）。ヒドロキシ
ケトエステル（Ｒ）−ＩＩＩの誘導体は粗生成物中に見いだすことができる。こ
の中間生成する化合物はここで選択される反応の操作（１２．５時間後の反応の
中断）において完全にジヒドロキシ化合物（３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶに変換される。

【００５６】 ガスクロマトグラムにおける４つのメインシグナルの積分によって以下の相対
強度（（Ｓ）−ＩＶ及び（Ｓ）−ＶＩＩをまとめる、括弧中に滞留時間）： （３Ｒ，５Ｓ）−Ｖ： ３４％（８．１４分） （Ｓ）−ＶＩ／（Ｓ）−ＶＩＩ： ６１％（８．３０／７．８４分） ＶＩＩＩ： ５％（６．８５分） ここで記載される微生物的な還元の反応の操作においては、従って主にヒドロ
キシケトン（Ｓ）−ＩＩからなる粗生成物が得られる。この結果はＮＭＲ分光分
析法で測定する（以下参照）。

【００５７】 反応の操作の変更によって粗生成物の組成に明らかに影響を及ぼすことができ
る。

【００５８】 前記の誘導体化及びＧＣ−ＭＳ分析は、無関係の合成によって得られたラセミ
体のヒドロキシケトエステルｒａｃ−ＩＩ及びジヒドロキシ化合物のジアステレ
オマー混合物ｓｙｎ−／ａｎｔｉ−ＩＶ（式の図ＩＩＩ）を使用して調査した。

【００５９】

【化１１】

【００６０】 これらのラセミ体試料の滞留時間及び質量スペクトルは微生物による還元の生
成物の滞留時間及び質量スペクトルと一致する。それぞれのＴＦＡ誘導体に関し
ても同様のことが言える（式の図ＩＩ）。

【００６１】 フラノンＩＸを同様に無関係の合成において製造した（式の図ＩＶ）。

【００６２】

【化１２】

【００６３】 またここでは滞留時間及び質量スペクトルは微生物による還元の粗生成物のス
ペクトルにおける類似のシグナルと一致する。

【００６４】 ｂ）ジアステレオマー比の測定 ジアステレオマーｓｙｎ−ＩＶ及びａｎｔｉ−ＩＶは使用されるガスクロマト
グラフィーによる方法では分離されない。ベースライン分離はＴＦＡＡ／ピリジ
ンにでの誘導体化によって達成できる（式の図Ｖ）。

【００６５】

【化１３】

【００６６】 極性の異性体ａｎｔｉ−Ｖはｓｙｎ−異性体に対してより長い滞留時間を有す
る。両方のシグナルは同一の質量スペクトルを有する。

【００６７】 微生物的な還元の粗生成物に使用して該方法によりジアステレオマーｓｙｎ−
Ｖ及びａｎｔｉ−Ｖに関して１３５：１の比がもたらされる。従って微生物的な
還元によって非常に高い過剰においてｓｙｎ異性体がもたらされる。この結果は
ＮＭＲ分光分析によって示される（以下参照）。ほぼ比選択的なＮａＢＨ_４還元
の生成物のＴＦＡ誘導体に関してＧＣシグナルの積分によって１．４：１．０ｎ
比が得られる。

【００６８】 ｃ）ＮＭＲ−分光分析法 微生物による還元の粗生成物のＮＭＲスペクトルはＧＣ−ＭＳ分析の結果を確
認する。^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは化合物（Ｓ）−ＩＩ、（３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶ
及びＩＸの個々のスペクトルの重なりを示し、その際、ヒドロキシケトン（Ｓ）
−ＩＩのシグナルが明らかに優勢であり、一方でフラノンＩＸのシグナルは弱く
見られるにすぎない。

【００６９】 ヒドロキシケトエステル（Ｓ）−ＩＩ：^１ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，２２℃、ケト形のシグナルのみが示
される）δ：４．３１（ｍ，１Ｈ，ＣＨＯＨ），３．６（ｍ，化合物（３Ｒ，５
Ｓ）−ＩＶの多重線との重なりによって認識不可能な微細構造；２×Ｈ６），３
．４１（ｓ，２Ｈ，Ｈ２），２．９０（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，５．０Ｈｚ，１Ｈ
，Ｈ４），２．８３（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，７．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ４），１．４
６（ｓ，３×ＣＨ _３，化合物（３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶ及びＩＸの類似のシグナルと
の重なり）。ケト：エノール＝約９５：５．^１３Ｃ−ＮＭＲ（７５．５ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ_３，ケト形のシグナルのみが示される）δ：２８．１３（ＯＣ（ＣＨ_３ ）_３），４６．５７，４８．４３，（Ｃ４，Ｃ６），５１．３１（Ｃ２），６７
．５８（Ｃ５），８２．７３（ＯＣ（ＣＨ_３）_３），１６６．２２（ＣＯＯｔＢ
ｕ），２０２．９３（Ｃ３）。

【００７０】 ジヒドロキシ化合物（３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶ：^１ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，２２℃）δ：４．２２（ｍ，１Ｈ，
Ｈ５），４．０５（ｍ，１Ｈ，Ｈ３），３．６（ｍ，化合物（Ｓ）−ＩＩの多重
線との重なりによって認識不可能な微細構造；２×Ｈ６），２．４３（ｄ，Ｊ＝
６．３Ｈｚ，２Ｈ，Ｈ２），１．７０（ｍ，２Ｈ，Ｈ４），１．４６（ｓ，３×
ＣＨ _３，化合物（Ｓ）−ＩＩ及びＩＸの類似のシグナルとの重なり）．^１３Ｃ−
ＮＭＲ（７５．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：２８．２７（ＯＣ（ＣＨ_３）_３），
３９．４５，４２．４７（Ｃ２，Ｃ４），４９．１７（Ｃ６），６８．３５（Ｃ
３），７１．５７（Ｃ５），８１．９０（ＯＣ（ＣＨ_３）_３），１７２．２１（ Ｃ ＯＯｔＢｕ）。

【００７１】 フラノンＩＸ：^１ Ｈ−ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３，２２℃）δ５．６９（ｓ，１Ｈ，Ｈ
３），４．５４（ｓ，２Ｈ，Ｈ５），３．４８（ｓ．２Ｈ，Ｈ６），１．４７（
ｓ，３×ＣＨ _３，化合物（Ｓ）−ＩＩ及び（３Ｒ，５Ｓ）−ＩＶの類似のシグナ
ルとの重なり）。

【００７２】 挙げられたシフトはＣＤＣｌ_３のＣＨＣｌ_３に関連し（^１Ｈ−ＮＭＲ：δ＝７
．２７；^１３Ｃ−ＮＭＲ：δ＝７７．２３）、無関係の経路で合成された比較化
合物ｒａｃ−ＩＩ、ｓｙｎ／ａｎｔｉ−ＩＶ及びＩＸ（式の図ＩＩＩ）のデータ
と一致する。

【００７３】 立体異性体化合物ｓｙｎ−ＩＶのそれとは異なるジヒドロキシ化合物のシグナ
ルは微生物による還元の粗生成物の^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルで観察され得ない
。これは非常に高い割合のｓｙｎ−異性体の更なる裏付けである（前記参照）。

【００７４】 ジヒドロキシ化合物ａｎｔｉ−ＩＶ（無関係の合成から、式の図ＩＩＩを参照
）：^１３ Ｃ−ＮＭＲ（７５．５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：２８．２７（ＯＣ（ＣＨ_３ ）_３），３９．３３，４２．２２（Ｃ２，Ｃ４），４９．６０（Ｃ６），６５．
４６（Ｃ３），６８．９４（Ｃ５），８１．８７（ＯＣ（ＣＨ_３）_３），１７２
．５４（ＣＯＯｔＢｕ）。

【００７５】 異性体混合物ｓｙｎ−／ａｎｔｉ−ＩＶの^１３Ｃ−ＮＭＲ−スペクトルにおけ
るシグナル組のジアステレオマーへの割り当ては、炭素原子Ｃ−３及びＣ−５（
式の図ＶＩ）の特徴的な化学シフトをもとに行う。

【００７６】

【化１４】

【００７７】 問題となる化合物クラス（１，３−ジオール）の場合は、ヒドロキシルを有す
るｓｙｎ異性体の炭素原子のシグナルはａｎｔｉ異性体の類似のシグナルと比較
して大抵、深いフィールドシフトを有する。そのための比較： ａ）F. G. Kathawala et al., Helv. Chim. Acta 1986, 69, 803-805 ｂ）K.-M. Chen et al., Tetrahedron Lett. 1987, 28, 155-158 ｃ）C. Bonini et al., Gazz. Chem. Ital. 1991, 121, 75-80 粗生成物の^１３Ｃ−ＮＭＲはここに記載の微生物による還元においてｓｙｎ異
性体が形成されることに応じて証明する。

【００７８】 ｄ）絶対配置及びエナンチオマー純度の測定 立体中心Ｃ−３の配置は立体配置Ｃ−５と比較して既に^１３Ｃ−ＮＭＲ分光分
析によって明確なので、更なる分析は立体中心Ｃ−５の配置の調査に限定する。
このために、微生物による還元の粗生成物を環式の誘導体（Ｓ）−Ｘに変える（
式の図ＶＩＩ）。

【００７９】

【化１５】

【００８０】 同じ方法でヒドロキシケトエステルｒａｃ−ＩＩから得られるラセミの誘導体
ｒａｃ−Ｘ（式の図ＶＩＩＩ）はキラルの固定相でＨＰＬＣによって分離できる
。

【００８１】 ＨＰＬＣ条件：Chiracel OB（DAISO）；２５℃；１ｍｌ／分 ｉ−ヘキサン／
ｉ−プロパノール（８０：２０）；２１０ｎｍで検出 滞留時間： （Ｓ）−Ｘ：２４．７分 （Ｒ）−Ｘ：２１．５分 分離されたエナンチオマーの絶対配置の割り当ては、ラセミの誘導体ｒａｃ−
Ｘと同様にヒドロキシケトン（Ｓ）−ＩＩ（＞９９％ｅｅ）から製造されるラク
トン（Ｓ）−Ｘの信頼できる試料の滞留時間との比較によって行う（式の図ＶＩ
ＩＩ）。エナンチオマー純粋なヒドロキシケトン（Ｓ）−ＩＩは公知の指示によ
って得られる（M. Wolberg, W. Hummel, M. Mueller, Ger. Pat. Appl. 1985730
2.2, 1998）。

【００８２】

【化１６】

【００８３】 微生物による還元の粗生成物から製造した誘導体（Ｓ）−Ｘのシグナルの積分
はエナンチオマー過剰９９．４％を算出する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 7/50 Ｃ１２Ｒ 1:225） (Ｃ１２Ｐ 7/62 Ｃ１２Ｒ 1:225） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者 ヴェルナー フンメル ドイツ連邦共和国 ティッツ クラウディ ウスシュトラーセ 11 (72)発明者 クリスティアン ヴァンドレー ドイツ連邦共和国 ユーリッヒ ヴォルフ スホーフェナー シュトラーセ 139 Ｆターム(参考） 4B064 AD30 CA02 CB18 CC07 DA01 DA11 DA16

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ジケトカルボン酸又はヒドロキシケトカルボン酸又はそのエ
   ステルを、ラクトバシラス種の存在下に少なくとも１つのケト基をヒドロキシ基
   に変換することによって還元するための方法。
2. 【請求項２】 ジオールに還元する、請求項１記載の方法。
3. 【請求項３】 ジオール及びモノアルコールからなる混合物に還元する、請
   求項１又は２記載の方法。
4. 【請求項４】 式１： 【化１】 ［式中、 Ａ，ＢはＣ＝Ｏ、ＣＨＯΣであり、その際、ΣはＨ又はヒドロキシ官能基のため
   の保護基であり、Ａ及びＢは同一又は異なっていてよく、 Ｒ^１、Ｒ^２はＨ又はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シク
   ロアルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキルアルキルの群からなる成
   分であり、その際、これらの成分はヘテロ原子、例えばＳｉ、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、
   Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩによって一置換又は多置換されているか、又は完全にヘテ
   ロ原子によって置換されていてよく、 Ｒ^３はＨ、金属カチオン又はアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキ
   ル、シクロアルケニル、アリール、アラルキル、シクロアルキルアルキルの群か
   らなる成分であり、その際、これらの成分もヘテロ原子、例えばＳｉ、Ｎ、Ｐ、
   Ｏ、Ｓ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩによって一置換又は多置換されていてよく、 Ｙはアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、
   アリール、アラルキル、シクロアルキルアルキルの群からなる成分であり、その
   際、これらの成分もヘテロ原子、例えばＳｉ、Ｎ、Ｐ、Ｏ、Ｓ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ
   又はＩによって一置換又は多置換されていてよく、その際、Ｘがアルキル、アリ
   ール、シクロアルキル、アラルキル又はシクロアルキルアルキルであってよいＸ
   −ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−は省き、 ｎは０〜１０である］の化合物を反応させる、請求項１から３までのいずれか１
   項記載の方法。
5. 【請求項５】 式２： 【化２】 ［式中、 Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＹは式１と同じ意味を有する］の化合物を使用する、請求
   項１から３までのいずれか１項記載の方法。
6. 【請求項６】 式３： 【化３】 ［式中、 Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＹは式１と同じ意味を有し、ΣはＨ又はヒドロキシ官能の
   ための保護基である］の化合物又はそのエナンチオマーを使用する、請求項１か
   ら３までのいずれか１項記載の方法。
7. 【請求項７】 式４： 【化４】 ［式中、 Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３及びＹは式１を同じ意味を有し、ΣはＨ又はヒドロキシ官能の
   ための保護基である］の化合物又はそのエナンチオマーを使用する、請求項１か
   ら３までのいずれか１項記載の方法。
8. 【請求項８】 ラクトバシラス ケフィア又はラクトバシラス ブレビス又は
   これらの微生物の混合培養を使用する、請求項１から７までのいずれか１項記載
   の方法。
9. 【請求項９】 該方法を２〜１０のｐＨ値で実施する、請求項１から８まで
   のいずれか１項記載の方法。
10. 【請求項１０】 該方法を４〜８のｐＨ値で実施する、請求項１から８まで
    のいずれか１項記載の方法。
11. 【請求項１１】 請求項１から１０までのいずれか１項記載の方法によって
    製造される少なくとも１つのヒドロキシ基を有する化合物。
12. 【請求項１２】 キラルの天然物質、医薬物質及び農業作用物質、触媒又は
    阻害物質の製造のための、請求項１１記載の化合物の使用。