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JP2003501345A - 勃起不全の治療における血管内皮成長因子の使用 - Google Patents

勃起不全の治療における血管内皮成長因子の使用

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JP2003501345A
JP2003501345A JP2000594482A JP2000594482A JP2003501345A JP 2003501345 A JP2003501345 A JP 2003501345A JP 2000594482 A JP2000594482 A JP 2000594482A JP 2000594482 A JP2000594482 A JP 2000594482A JP 2003501345 A JP2003501345 A JP 2003501345A
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JP
Japan
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vegf
patient
penis
growth factor
vascular endothelial
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JP2000594482A
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シャブサイ、リドワン
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Columbia University in the City of New York
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Columbia University in the City of New York
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Publication date
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Publication of JP2003501345A publication Critical patent/JP2003501345A/ja
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、男性患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であって、患者の陰茎に血液供給を増加または維持するために有効な血管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含む方法を提供する。本発明は、患者の勃起不全を治療する方法であって、患者の陰茎への血液供給を増加するために有効な血管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含み、それにより患者の勃起不全を治療する方法を提供する。本発明は、患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であって、血管内皮成長因子をコードする遺伝子を含む核酸を、該核酸が血管内皮成長因子を発現して、それにより患者の陰茎への血液供給を増加または維持するような条件下で、適切な細胞に導入することを含む方法を提供する。本発明は、女性患者の性器部位への血液供給を増加または維持する方法であって、患者の性器部位への血液供給を増加または維持するために有効な血管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含む方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本出願は、1999年2月21日に提出された、米国連続番号09/234,591、の優先権
を主張し、その内容は本明細書によって援用される。
【０００２】 本出願を通して、ざまざまな文献が括弧内のアラビア数字によって参照される
。これら文献の完全な書誌的引用は、発明の詳細な説明の項の末尾で見られるで
あろう。これら文献の開示は、本発明の属する技術をより完全に記載するために
、本明細書の一部をなすものとして本願に援用される。
【０００３】
【発明の属する技術分野】
ほ乳類の生殖では、男性から女性へ機能的に精子が移動することを補助するた
めに、陰茎の勃起組織を生理的に刺激することが必要である。そして明らかなこ
とに、適切な勃起組織の応答を妨げる欠陥が、生殖能力を劇的に妨害するはずで
ある。ヒトにおいて、勃起不全は病気の状態であると考えられており、「インポ
テンス」症状といわれている。この症状は、男性患者並びにその妻／配偶者の両
者の生活の質に影響を与える（1）。
【０００４】 勃起は、陰茎の海綿体（corpora cavernosa）並びにスポンジ体（corpus spon
giosum）組織に関する血流力学的現象である。この組織は、平滑筋、内皮細胞、
繊維芽細胞、および神経の複雑な混合体であり、刺激的条件下で相互作用して劇
的に副血液供給を増大し、かつ維持して陰茎を硬直させる。この応答の際に、血
液の流れは厳密に制御される必要があり、血管不全が勃起能力を強力に抑制する
能力を持つことは驚くべきことではない。実際に、陰茎血管不全は、非常にあり
ふれた勃起不全の病理機構であると信じられている（2）。これは、勃起組織の
実質的な病理学的変化と関連があり、血管平滑筋細胞の減少、およびコラーゲン
の増加、および繊維症を導く（3−6）。
【０００５】 現在利用可能な勃起不全の治療は、このような治療剤の投与と同時に、一時的
に勃起を誘導する。しかし、これらの治療は、勃起不全を引き起こす基本的な血
管／海綿の病理学について対処しまたはこれを治癒するものではない。勃起組織
の血管構造および機能の改善または修復に有効な治療法の原理は、勃起生理学お
よび、血管の勃起不全の病態生理学に基づいている。従って、新規血管構造形成
または脈管形成を誘導する因子の調査を遂行することが賢明である。天然に存在
するいくつかの成長因子が、脈管形成を誘導することが見出されている。このよ
うな成長因子は血管内皮成長因子（VEGF）ファミリー（11）、繊維芽細胞成長因
子（FGF）ファミリー（12、13）、トランスフォーミング成長因子（TGF）―アル
ファ、およびベータ（14）、並びに血小板由来成長因子（PDGF）（15-17）を含
む。血管内皮成長因子（VEGF）は、これらの血管成長因子のうちで最も効果があ
り、かつ興味がもたれるものの一つであろう。それは、胚の脈管形成（18）、成
体の血管構造の維持、並びに虚血および他の病的症状に応答した成体の新規血管
形成において役割を担っていると考えられている。実験動物または末梢血管病の
ヒトにおけるVEGFの組織レベルを増加する治療は、組織の血管分布を測定可能な
程度に増加させる結果となった（19-24） 勃起不全に対するVEGF治療の能力を考察するために、ほ乳類の陰茎および勃起
組織においてVEGFが発現する範囲を特徴付けすること、並びに他のほ乳類の組織
と比較して、この組織で最も豊富に存在している既知のVEGFアイソフォーム（mR
NAのスプライス部位の差異に由来する）を決定することが望まれていた。ここで
は、成熟ラットの陰茎およびヒト勃起組織における、VEGFアイソフォームの発現
（mRNA）調査が提供される。
【０００６】 VEGFは、内皮細胞に選択的に作用する成長因子である（18）。血管新生の生物
医学的研究における現在の焦点として、VEGFの生物学が非常に綿密に調査されて
いる。ヒトでは、VEGF様タンパク質をコードする異なった遺伝子がいくつか存在
する（49、50）。これら遺伝子の研究のほとんどはVEGF-Aについてのものである
（51、52、53）。いくつかの異なった研究室によって報告されているように、VE
GF-A遺伝子はいくつかの異なった成熟mRNA転写物を生じさせる。この違いにより
それらがコードするタンパク質産物は異なる（33、34）。これらの転写物バリア
ントは、オルタナティブスプライシング機構を介して生じ（30、31、54）、特定
のVEGF-A転写物の転写量はいずれも異なっており、調査した組織に依存している
（28）。成熟組織において見出される最も主要なVEGF-A転写物は、188/189、164
/165、120/121（ラット/ヒト）アミノ酸のタンパク質をコードする（28、35）。
その他に、VEGF-Aから生じる転写産物では、よりまれなバリアント（205/206、
および144/145アミノ酸のタンパク質をコードする）も報告されているが、これ
らの型は、主に胎児を起源とする小数の組織において見出されただけである（そ
れぞれ、VEGF 205/206：ヒト胎児肝臓（32）、ヒツジ（41）、およびヒト胎盤（
42）/VEGF 144/1145：ヒト子宮（39）、子宮内膜癌腫細胞（39）、ヒツジ（41）
、およびヒト胎盤（42））。成体の陰茎組織におけるVEGF-Aアイソフォームの発
現を予備調査した際に、205/206および144/145型のVEGFをコードするVEGF-Aのス
プライスバリアントの発現は、標準的なRT−PCR技術によって同定でき、かつ他
の成体ラットおよびヒト組織および培養細胞からクローニングおよびシーケンシ
ングすることによって確認できることが分かった。これらのよりまれなVEGF-Aの
スプライスバリアントは、本来予想されていたよりも広い組織分布をしているか
もしれないことが、これらの結果から示唆される。
【０００７】
【発明の概要】
本発明は、男性患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であって、
患者の陰茎への血液供給を増加または維持するために有効な血管内皮成長因子の
ある量を患者に投与することを含む方法を提供する。
【０００８】 本発明は、患者の勃起不全を治療する方法であって、患者の陰茎への血液供給
を増加するために有効な血管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含む
方法を提供する。
【０００９】 本発明は、男性患者の陰茎において、血管組織の密度を増加または維持する方
法であって、患者の陰茎への血液供給を増加または維持するために有効な血管内
皮成長因子のある量を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００１０】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が、VEGF-A 205/206、VEGF
-A 188/189、VEGF-A 164/165、VEGF-A 144/145、VEGF-A 120/121、またはVEGF-A 110である方法を提供する。
【００１１】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が、静脈内に、局所的に、
経皮的に、経口的に、または注射によって投与される方法を提供する。
【００１２】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が陰茎に注射される方法。
【００１３】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が海綿体（corpora cavern
osa）組織、またはスポンジ体（corpus spongiosum）組織に注射される方法を提
供する。
【００１４】 本発明は、患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であって、血管
内皮成長因子をコードする遺伝子を含む核酸を、該核酸が血管内皮成長因子を発
現して、それにより患者の陰茎への血液供給を増加または維持するような条件下
で、適切な細胞に導入することを含む方法を提供する。
【００１５】 本発明は、女性患者の性器部位への血液供給を増加または維持する方法であっ
て、患者の性器部位への血液供給を増加または維持するために有効な血管内皮成
長因子のある量を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００１６】
【発明の詳細な記載】
本発明は、男性患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であって、
患者の陰茎に血液供給を増加または維持するために有効な血管内皮成長因子のあ
る量を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００１７】 ここで使用される「増加する」の用語は、前記血液供給が、前記方法を使用し
ていないコントロール実験で存在するであろうよりも高いレベルであることを意
味する。
【００１８】 ここで使用される「維持する」の用語は、前記血液供給が、前記方法を使用し
ていないコントロールの状況で存在するであろう血液供給以上のレベルを保つこ
とを意味する。
【００１９】 ここで使用される「患者」の用語は、あらゆる動物または人工的に改変された
動物を含むものである。これは、マウス、ラット、イヌ、モルモット、クロアシ
イタチ、ウサギ、霊長類、ウマ、ウシ、鳥類、ヤギ、イヌ、ネコなどの動物を含
むが、これらに限定されない。好ましい態様において、前記患者はヒトである。
【００２０】 本発明は、患者の勃起不全を治療する方法であって、患者の陰茎への血液供給
を増加するために有効な血管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含み
、それにより患者の勃起不全を治療する方法を提供する。
【００２１】 ここで使用される「治療」は、勃起不全を遅くすること、止めること、または
逆転することのいずれかを意味する。好ましい態様において、治療は、勃起不全
が排除される点まで逆転させることを意味する。
【００２２】 本発明は、男性患者の陰茎において、血管組織の密度を増加または維持する方
法であって、患者の陰茎への血液供給を増加または維持するために有効な血管内
皮成長因子のある量を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００２３】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が、VEGF-A 205/206、VEGF
-A 188/189、VEGF-A 164/165、VEGF-A 144/145、VEGF-A 120/121、またはVEGF-A 110である方法を提供する。
【００２４】 ここで使用される「VEGF-A 205/206」の用語は、VEGF-A ラット205アミノ酸ス
プライスバリアント、またはVEGF-A ヒト206アミノ酸スプライスバリアントをい
う。
【００２５】 ここで使用される「VEGF-A 188/189」の用語は、VEGF-A ラット188アミノ酸ス
プライスバリアント、またはVEGF-A ヒト189アミノ酸スプライスバリアントをい
う。
【００２６】 ここで使用される「VEGF-A 164/165」の用語は、VEGF-A ラット164アミノ酸ス
プライスバリアント、またはVEGF-A ヒト165アミノ酸スプライスバリアントをい
う。
【００２７】 ここで使用される「VEGF-A 144/145」の用語は、VEGF-A ラット144アミノ酸ス
プライスバリアント、またはVEGF-A ヒト145アミノ酸スプライスバリアントをい
う。
【００２８】 ここで使用される「VEGF-A 120/121」の用語は、VEGF-A ラット120アミノ酸ス
プライスバリアント、またはVEGF-A ヒト121アミノ酸スプライスバリアントをい
う。
【００２９】 ここで使用される「VEGF-A 110」の用語は、VEGF-A ヒト110アミノ酸スプライ
スバリアントをいう。
【００３０】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が、静脈内に、局所的に、
経皮的に、経口的に、または注射によって投与される方法を提供する。
【００３１】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が陰茎に注射される方法を
提供する。
【００３２】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子が海綿体（corpora cavern
osa）組織に注射される方法を提供する。
【００３３】 本発明は、上記の方法であって、血管内皮成長因子がスポンジ体（corpus spo
ngiosum）組織に注射される方法を提供する。
【００３４】 本発明は、患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であって、血管
内皮成長因子をコードする遺伝子を含む核酸を、該核酸が血管内皮成長因子を発
現して、それにより患者の陰茎への血液供給を増加または維持するような条件下
で、適切な細胞に導入することを含む方法を提供する。
【００３５】 ここで使用される「核酸」の用語は、DNAまたはRNAのいずれかをいう。「核酸
配列」または「ポリヌクレオチド配列」は、一本鎖または二本鎖のデオキシリボ
ヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド塩基をいう。該塩基は5'から3'末端に読
まれる。これは、自己複製可能なプラスミド、感染性のDNAまたはRNAポリマー、
および非機能的DNAまたはRNAのいずれも含む。
【００３６】 ここで使用される「適切な」の用語は、血管内皮成長因子を産生して、患者の
陰茎の血液供給を増加または維持するような血管内皮成長因子遺伝子を発現する
ことができる細胞を意味する。
【００３７】 「ベクター」の用語は、ウイルス発現系、自律的に自己複製可能な環状DNA（
プラスミド）を意味し、発現および非発現プラスミドの両者を含む。組換えの微
生物または培養細胞は「発現ベクター」の宿主として記載される場合、これには
染色体外の環状DNA、およびDNA宿主染色体に組み込まれたもの両方を含む。ベク
ターが宿主細胞によって維持される場合、前記ベクターは有糸分裂の際に、自律
性構造として細胞で安定的に複製されるか、または宿主ゲノムに組み込まれるで
あろう。
【００３８】 本発明は上記方法であって、前記核酸がベクターを含む方法を提供する。
【００３９】 ここで使用される「ベクター」の用語は、ウイルス発現系、自律性自己複製可
能な環状DNAプラスミドを意味し、かつ発現および非発現プラスミドの両者を含
む。
【００４０】 本発明は、患者の陰茎において、血管構造の密度を増加または維持する方法で
あって、血管内皮成長因子をコードする遺伝子を含む核酸を、該核酸が血管内皮
成長因子を発現して、それにより患者の陰茎への血液供給を増加または維持する
ような条件下で、適切な細胞に導入することを含む方法を提供する。
【００４１】 本発明は、女性患者の性器部位への血液供給を増加または維持する方法であっ
て、患者の性器部位への血液供給を増加または維持するために有効な血管内皮成
長因子のある量を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００４２】 本発明は、女性患者の性器部位において、血管構造の密度を増加または維持す
る方法であって、女性患者の性器部位への血液供給を増加または維持するために
有効な血管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含む方法を提供する。
【００４３】 本発明は、以下の実験の詳細によって更によく理解されるであろう。しかし、
ここで述べる特定の方法および結果は、特許請求の範囲により完全に記載された
本発明を単に例示するためのものであることを、当業者は容易に理解するであろ
う。
【００４４】
【実験の詳細】
＜Ａ＞.材料と方法 1、ヒト組織 ヒト海綿体組織の標本（12）は、改良IRBプロトコールによって、陰茎に補装
具を移植する際に陰茎陰嚢の接合部から外科的に除去した。これらの生検材料は
、ほぼ5×5×10mmに測定した。前記標本は直ちに液体窒素で凍結して、処理時ま
では-70℃で保存した。
【００４５】 ２、実験動物および組織 年齢を合わせた雄スプレーグドーリラットは、改良IACUCプロトコールによっ
て入手し、12時間周期の昼光で、餌および水を任意に利用可能にして維持した。
致死的過剰量のペントバルビタールナトリウムでラットを殺した。肺および陰茎
は直ちに回収した。陰茎組織は、包皮および陰茎幹を除去して陰茎を切断した後
の頂部を、環状に切開することにより得た。有意な量の皮膚を含む亀頭も除去し
た。過剰の血液は、陰茎を滅菌綿ガーゼで徐々に吸い取らせることによって除去
し、試料は、液体窒素で瞬間凍結させて、使用するまで-70℃で保存した。この
手順によって、低温保存された陰茎幹を提供される。この陰茎幹には、勃起組織
の大部分が含まれている。
【００４６】 ３、RNAの抽出 組織（20匹のラットから供給された、または12人のヒト検体から供給された陰
茎）は、まず液体窒素中で微粉砕して微粉末にした。製造者のプロトコールに従
ってRNAzol（Tel-Test Inc., Friendswoods Tx）抽出法を使用して（25、26）、
全RNAを組織粉末から単離した。RNA濃度を260nm分光高度計で測定して、RNAが分
解されていないことを確認し、それぞれの試料は、1％の変性ホルムアルデヒド
ゲルの電気泳動によって解析した。本方法の改良法を使用して、前立腺癌細胞株
LNCaPから抽出した（27）。
【００４７】 ４、RT−PCRによるVEGF cDNAの増幅 first-strand cDNA合成には、1μgの全RNAを使用した。前記RNAは、20μl量で
、0.5μgのオリゴ（dT）プライマーと70℃で10分間アニーリングさせた。次に氷
中で2分間、急速に冷却して、10mMdNTPs、5×1st strandバッファー、0.1Mジチ
オスレイトール（DTT）、10U RNaseインヒビター（Gibco BRL）、および200U Su
per script II逆転写酵素（Gibco BRL）を添加して最終量50μlにした。反応混
合液を37℃で90分間インキュベートし、使用するまではcDNAを-20℃で保存した
。
【００４８】 前記RNA試料中のVEGFアイソフォームの存在を同定するために、ポリメラーゼ
連鎖反応（PCR）技術を使用した。増幅アッセイに使用したプライマーは、以前
に発表したものを少し改良したものである（28）。これらのプライマーは、VEGF
-Aの第一エキソン内から始まって第8エキソン内で終結するので、既知のVEGFス
プライスバリアントの全てを増幅することが可能である。
【００４９】 使用したプライマーのオリゴヌクレオチド配列は以下の通りである： プライマー 5' 種 ヒト 位置 エキソン1の初め 核酸配列 5' TGC ACC CAT GGC AGA AGG AGG 3' プライマー 3' 種 ヒト 位置 エキソン8の終わり 核酸配列 5' TCA CCG CCT CGG CTT GTC ACA 3' プライマー 5' 種 ラット 位置 エキソン1の初め 核酸配列 5' TGC ACC CAC GAC AGA AGG GGA 3' プライマー 3' 種 ラット 位置 エキソン8の終わり 核酸配列 5' TCA CCG CCT TGG CTT GTC ACA T 3' 前記PCR反応混合液は、10×反応バッファー（100mM Tris、500mM KCl、1.5mM Mg
Cl2、pH8.3）、100pmol 上流プライマー（5'-ヒト/5'-ラット）、100pmol下流プ
ライマー（3'-ヒト/3'-ラット）、2.5U Taq DNAポリメラーゼ（Boehringer Mann
heim Biochemicals, Indianapolis, IN）10μl cDNAを含み、および滅菌水で50
μlとする。PCRは、DNA Thermal Cycler (Perkin Elmer Cetus, Norwalk CT)を
使用して以下のように行った：94℃で7分間；次に、94℃で1分間の変性、72℃で
1分間のアニーリングおよび伸長をそれぞれ35サイクル。PCR産物（20μlのラッ
ト肺/LNCaP-、および35μlのラット陰茎/ヒト陰茎反応混合物）を2％アガロース
ゲルの電気泳動によって解析し、次に臭化エチジウムで染色してDNAバンドを可
視化した。テスト反応物のサイズを照合するために、100塩基対ラダーのDNA分子
量マーカー（Boehringer Mannheim Biochemicals）を使用した。
【００５０】 ５、RT−PCR産物のクローニングおよびシーケンシング 1μlのラットペニスのPCR産物をpGEM−T easy Vector DNAにライゲーションして
、dh5コンピテント細胞に形質転換するために使用した。cDNAインサートを含む
形質転換体は、EcoRIで消化したミニプレップを解析することによってインサー
トサイズを特徴づけた。標準的なジデオキシヌクレオチドシーケンス技術を使用
して、異なったサイズのcDNAインサートを含む多様なプラスミドベクターを、二
本鎖テンプレートからシーケンスした。これらの配列を、genbankに存在するヒ
トおよびラットVEGF cDNA配列と比較して、エキソン構造を同定した。
【００５１】 ６、VEGF mRNAアイソフォームのRNase 保護アッセイ VEGF cDNAのための、二種のアンチセンスRNAプローブを使用した。一つは、ラ
ットVEGF 164スプライスアイソフォームcDNAを含むベクターをApaIで消化してか
らインビトロで転写したが、もう一方は、ラットVEGF 188スプライスアイソフォ
ームcDNAを含むベクターをApaIで消化してから、SP6−ポリメラーゼを使用して
インビトロで転写した。インビトロ転写反応は、250μCi[32P]-UTP（NEN LIfe S
cience Products, Boston, MA）の存在下において、インビトロ転写キット（MAX
Iscript, Ambion, Inc., Austin, TX）によって提供された試薬を使用して、製
造者の説明に従って行った。個々のラベルされたアンチセンスプローブ（VEGF 1
64には619塩基プローブ、およびVEGF 188には691塩基プローブ）は、変性5％ア
クリルアミドゲルの電気泳動によって精製して、次に溶出バッファー（RPA II k
it, Ambion, Inc.から）でゲルから溶出した。これらのプローブは、20μgのラ
ット肺RNAまたは30μgの陰茎RNAとの溶液ハイブリダイゼーション処理に使用し
た。ハイブリダイゼーションは、製造者の推奨するRNaseアッセイキット（RPA I
I kit, Ambion, Inc）によって提供されたもの使用して、一晩行った。ハイブリ
ダイゼーションの試料は、RPA II kitで提供されたヌクレアーゼカクテルで消化
して、次に、消化物を5％アクリルアミドのシーケンスゲルで、分子量マーカー
のレーンと隣接して電気泳動することによって解析した。
【００５２】 いくつかのコントロール反応では、酵母RNA（20μg）にハイブリダイゼーショ
ンしたラベルプローブを含んでいた（RNase消化あり／なし）。ゲルをKodak XAR
-5フィルムに暴露してオートラジオグラフを作製し、RNase保護されたバンドを
示した。
【００５３】 ＜Ｂ＞. 結果と考察 勃起不全は、陰茎の勃起成分の血管潅流における問題と関連している。血管形
成および陰茎の勃起組織の潅流を制御する因子をもっと理解するために、我々は
、陰茎組織における血管内皮成長因子（VEGF）の発現の特徴付けを始めた。VEGF
は、インビトロおよびインビボにおいて有意な血管新生活性を有するいくつかの
ポリペプチドのうちの一つである。VEGF遺伝子およびその産物の多くの特徴付け
により、いくつかの異なった成熟mRNA転写物が存在することが示された。この転
写物は、元のBEGF転写物のオルタナティブスプライシングに由来する。これらの
バリアント転写物は、異なった生物学的活性を持つペプチドをコードするであろ
う。
【００５４】 陰茎組織は、成体ラット、および陰茎補装具の移植を受けるヒト患者から得た
。VEGF遺伝子の第一および第八エキソンに由来するプライマー対を用いた逆転写
ポリメラーゼ連鎖反応（RT−PCR）技術を使用して、VBEGF転写物の型の解析を行
った。つぎに、ラットの陰茎における様々なアイソフォームの発現レベルは、RN
ase防護アッセイを使用して定量した。以前に記載したVEGF mRNAのスプライスバ
リアント（VEGF 120、144、164、188）が、ラット尾およびヒトの陰茎組織で検
出された。188スプライスアイソフォームが最も豊富なVEGF mRNAの型であるラッ
ト肺とは逆に、VEGF 164は陰茎において最も豊富に検出された転写物だった。最
後に、ラット陰茎から得られたVEGF cDNAクローンの多数の配列解析により、以
前に記載されていない110アミノ酸のタンパク質を生じさせるであろうVEGFスプ
ライスバリアントの存在することを示していた（VEGF 110 GenBank登録番号AF08
0594）。要約すると、ラットおよびヒト陰茎において、164アミノ酸のタンパク
質をコードするスプライスバリアントが最も豊富に存在し、多数のVEGF mRNAア
イソフォームが発現される。本研究は、勃起不全の治療のために、陰茎において
VEGFの発現を遺伝的に操作する試みの先駈けである。
【００５５】 １．ラットおよびヒト陰茎におけるVEGF mRNAスプライスバリアントの発現のR
T−PCR解析 ほ乳類VEGF遺伝子（29）は、少なくとも八個のエキソンからなることが知られ
ている。これは、オルタナティブスプライシングを介して（30-32）、異なった
タンパク質をコードする可能性を持つバリアントmRNA分子として組み立てられ、
それぞれが、内皮細胞に対する分裂促進活性を有する（33、34）。ヒトおよび齧
歯類の細胞株、並びに組織の両者において、これらのVEGFスプライスバリアント
の発現が特徴づけられており、成人組織において見出される顕著な型には、121
、165、または189アミノ酸(AA)を含むタンパク質（ヒトにおいて）をコードする
転写物を含む（35-38）。他のVEGFスプライスバリアントは、より検出量が少な
かった。たとえば、145 AAをコードするVEGF転写物は、ヒト子宮および胎盤組織
で見出され（39-41）、並びに206AAをコードする転写物は、胎児肝臓および胎盤
で見出された（41、42）。このグループのVEGFスプライスバリアントにおいて、
全ての転写物は最初の五つのVEGFエキソン、並びに最後の（第八）エキソンを含
むが、第六および第七エキソンの含有および／または配置は異なる。齧歯類組織
において、ほとんど同一のVEGFスプライスバリアントが報告されている。しかし
、前記齧歯類VEGFバリアントの転写物は一般に、対応するヒトのものより少ない
アミノ酸を含むタンパク質産物をコードする（図1）（28、43）。RT−PCRスクリ
ーニング法を使用して、我々は、ラットおよびヒト陰茎組織において発現するVE
GF mRNAスプライスバリアントの同定を試みた。ラット肺またはラット陰茎から
抽出されたRNAから作製したcDNAのPCR増幅反応には、ラットVEGFの第一から第八
エキソンのcDNAを増幅するために設計したオリゴヌクレオチドプライマーを使用
した。アガロースゲルで電気泳動した後、臭化エチジウムで染色することによっ
て、前記RT−PCR増幅産物を調べた。予想されたように（図2）、ラット肺cDNAか
らはサイズが564、492および360bpの三種の異なったcDNA断片（188、164、およ
び120のラットVEGF AAをコードする予想アイソフォームに対応する）、並びに43
2bpの一つの異なったcDNA断片がこれらのプライマーによって増幅された。これ
ら全てのcDNA断片は、ラット陰茎 cDNAからも増幅された。RT−PCRスクリーニング法は定量するために設計された
ものではないが、ラット肺および陰茎組織間において、これらのRT−PCR産物量
が異なっていることが明らかとなった。肺RNAから増幅されたVEGF cDNAで最も顕
著なものは、188 AAアイソフォームをコードしたが、陰茎RNAから増幅された最
も顕著な転写物は、VEGFの164 AAアイソフォームをコードするものであることが
明らかとなった（図2A）。これらのcDNA断片はそれぞれ、個々にプラスミドにク
ローン化し、シーケンスしてVEGFスプライスバリアントとして確認できるように
した。このシーケンシングによって、188、164、および120 AA型の我々の同定が
確認され、並びに432bpの増幅産物は、これまでに子宮および胎盤組織において
のみ見出されていたVEGFの144 AA型をコードするVEGF転写バリアントであること
が確認された。さらに驚くべきことに、RT−PCR増幅の結果として生じるcDNAク
ローン調査において、我々は、今までに報告されたことのないVEGF Aの新規スプ
ライスバリアントを含むcDNAクローン（330bp）を見出した（図1）。このスプラ
イスバリアントは、部分的なエキソン7（今はエキソン7Bという）にスプライシ
ングされるラットVEGF-Aの最初の三つの完全なエキソンを含み、かつ完全なエキ
ソン8で終結していた。標準的スプライスドナー配列（CCGCAG/）は、この特殊な
スプライスバリアントから欠損したエキソン7A領域の末端にあったので、この新
規転写物（7B）に含まれる部分的エキソン7が、VEGF A転写物の多くのスプライ
ス候補のもう一つあったようである。このスプライスバリアントは、よく知られ
たいずれの型よりも存在量が少ないには違いないが、この新規VEGF Aスプライス
バリアントは、VEGF-Aの110アミノ酸アイソフォームをコードする可能性を有す
る。
【００５６】 ヒト陰茎RNAから、およびVEGF-Aを豊富に発現することが知られているヒト前
立腺癌細胞株LNCaより抽出したRNAから逆転写されたcDNAを増幅するために、同
様のプライマーセットを利用した。図2Bは、ヒト陰茎cDNA、LNCaP細胞のcDNAま
たはラット組織（陰茎および肺）のcDNA由来の増幅産物を電気泳動して、臭化エ
チジウムで染色したアガロースゲルを示す。ここに示した結果から見ることがで
きるように、ヒト陰茎（およびヒトLNCaP細胞）は、ラット陰茎において見出さ
れたVEGFスプライスバリアントアイソフォーム（189、165、145および121 AAを
コードするアイソフォームを含む）と同等量発現している。さらに、これらのア
イソフォームは、ラット陰茎アイソフォームと同等量存在した。
【００５７】 ２．ラット陰茎におけるVEGF-A転写物の相対量を確認するためのRNase保護ア
ッセイ ラット陰茎で発現したVEGF-A転写物のスプライスバリアントは、ラット肺で発
現される型と発現量が有意に異なることを確認するため、およびよりよく定量す
るために、我々はRNase保護アッセイを開発した。これは、RNAサンプル中のラッ
トVEGF-Aスプライスバリアントの相対量を区別することを可能にする。ラットVE
GF A cDNAの188 AAまたは164 AAスプライスバリアントのために、これらのそれ
ぞれのcDNAインサートを含む発現プラスミドをインビトロで転写することによっ
て、32Pで放射ラベルされたプローブを調製した。前記プローブをラット肺また
はラット陰茎から抽出されたRNAと個々にハイブリダイズして、次にヌクレアー
ゼカクテルで消化して、ポリアクリルアミドゲルで電気泳動した。前記ゲルをオ
ートラジオグラフィー用のフィルムに暴露した。本アッセイで保護された断片の
シグナル強度は、対応する転写物の相対量を示す。
【００５８】 この二種プローブによるアッセイは、いくつかの「診断用」断片を検出するこ
とによってVEGFアイソフォームの存在を明らかにするために設計された。たとえ
ば、より大きな転写物をプローブとして使用する場合（188スプライスアイソフ
ォーム）、564bpの保護された断片の存在を見分けられ、かつテストRNA試料に18
8スプライスバリアントが存在することが確認できるが、ところが消化物中に、1
50bp断片が存在すると、164スプライスバリアントが存在することを見分けられ
るであろう（図3A下部の図表を参照）。同様に、小さな転写物をプローブ（164
スプライスアイソフォーム）として使用した場合、462bpの保護された断片の存
在すれば、テスト試料中の164スプライスバリアントの存在を確認できるであろ
う（図3B下部の図表を参照）。
【００５９】 このRNase保護アッセイの結果（図3Aおよび3B）は、ラット肺において、VEGF-
A mRNAのスプライスバリアントは188および164アイソフォームであることが示さ
れた。これにより、VEGF AアイソフォームのRT−PCR増幅に関する初期の実験（
図2Aおよび2B）、並びに他の報告（39）が確認された。ラット陰茎mRNAにおいて
、我々は、ラージスプライスアイソフォームプローブを使用して、564bpまたは4
14bp断片が有意に保護されることを観測できなかったことから、ラット陰茎mRNA
では、肺、並びに陰茎mRNAにおける144スプライスバリアントの量の低さと比較
して、188スプライスバリアントmRNAの量はより低いことを示している。より小
さい転写物をプローブとして、我々は、492bぽよび342bpの保護断片の存在を同
定することができ、陰茎mRNA中に164および120アイソフォームのスプライスバリ
アントが豊富に存在することが確認できる。また、この観測により、ラット陰茎
のRT−PCR実験において、我々は164および120スプライスアイソフォームがラッ
ト陰茎mRNA中に最も豊富に存在するVEGFスプライスバリアントであることを見出
したことが支持される（図2Aおよび2B）。
【００６０】 ３. 成体男性組織におけるBEGFスプライスバリアント144/145および205/206
の発現 標準的なRT−PCR技術をVEGFスプライスアイソフォームの検出に使用した。VEG
Fのエキソン1から始まる上流プライマー、およびVEGFエキソン8由来の下流プラ
イマーを使用して、成体ラット肺および陰茎から、並びにヒト前立腺癌細胞株LN
CaPから抽出したRNAで、RT−PCRを行った。RT−PCR反応産物をアガロースゲル電
気泳動で解析し、4つの主要なバンドが各反応物から検出された（図4）。これら
のバンドのうち3つのサイズは、360/363、492/495、および564/567塩基対（ラッ
ト/ヒト））は、120/121、164/165、および188/189 AAアイソフォームコードす
る予想転写物のサイズと一致するであろう。しかし、ラット肺/陰茎およびヒト
陰茎/LNCaP細胞由来の反応産物中にはっきりと見える、さらなる432/435bpは、V
EGF-Aの144/145スプライス型の予想サイズとさらに一致しているであろう（図4
）。これは、これまでに胎盤および子宮組織（ヒツジおよびヒト）、およびヒト
内皮癌培養細胞（39）において検出されたのみである。これら反応物の増幅産物
は、プラスミドシーケンシングベクター中に個々にクローン化して、シーケンス
した。得られたシーケンスにより、我々が同定した120/121、164/165、および18
8/189 AAスプライスアイソフォーム、並びにおそらく、これらの細胞/組織由来R
NA中において、さらにまれである144/145スプライスバリアントが存在すること
を確認した。
【００６１】 これまでのRT−PCR反応の結果において、我々は、205/206AAペプチドをコード
するVEGF-Aスプライスアイソフォームを増幅した結果物であろう、より大きな61
5bpの産物が存在することをはっきりと見いだせなかった。しかし、その後、下
流プライマーを変更して（エキソン6あの最後の5塩基と相補的、およびエキソン
6Bの最初の19塩基に延長される）、上流プライマーは同じものを使用し（エキソ
ン1から始まる）、RT−PCR反応を繰り返した。VEGF-Aのエキソン6BはVEGF 05/20
6スプライスアイソフォームにのみ見出され、従って、この第二のプライマー対
は、おそらくまれなアイソフォームであるVEGF 205を増幅するために設計した。
この第二のプライマー対による増幅により、ラット肺および陰茎から抽出したRN
Aに由来する増幅産物中に433塩基対のバンドが示された（図5）。このバンドは
、VEGF 205/206スプライスアイソフォームがRNA中に存在するならば、予想され
るであろうサイズである。また、433bp増幅産物をクローニングして、かつシー
ケンシングすることによって、この断片の強度を少なくともラット肺において確
認した。この配列は、ラットVEGF-205 mRNAスプライスバリアントと完全な相同
性を示した。
【００６２】 結論として、これらの結果は、成体ラットおよびヒト組織において、VEGF-Aの
まれなスプライスバリアント（144/145および205/206 AA型）が、これまでに疑
われていたよりもおそらくもっと広範囲に発現していることを示している。VEGF
のこれらのまれなスプライスバリアントが検出されるPCR反応の条件は、天然で
「基底」といわれるこのようなまれな転写物を増幅することほど激しくはない。
144/145スプライスバリアントをコードする転写物は、120/121、164/165、およ
び188/189バリアントよりも増幅されないように見えるが、十分に簡単なDNA染色
技術の検出限界内であった。しかし、これらの組織中でVEGFの144/145および205
/206の発現量が明らかに少ないのは、おそらく他の実験者がそれらの存在を同定
することに失敗したためであると説明できる（特に、肺などのVEGF mRNAの特徴
付けが繰り返しなされた組織において）。
【００６３】 ＜実験の考察＞ 勃起不全は適切な陰茎の脈管構造の発達、および陰茎の勃起組織に効果的な血
液供給を維持することに依存している。血管系の発達および成長は、血管新生お
よび脈管形成といわれる。これらの過程は、塩基性FGF（bFGF）およびVEGFを含
む成長因子のいくつかのタイプによって支配されている。これまでに、我々はラ
ット陰茎中にヘパリン結合性成長因子が豊富に存在することを報告した。これは
、bFGFに対する抗体によって中和される機能的活性を有することから、この物質
は本当にbFGFであったことが示唆される。我々はラットおよびヒト陰茎のmRNAを
個々に特徴づけて、陰茎組織中に、多くのmRNAスプライスアイソフォームのいず
れが発現するかを評価して、多くのスプライスアイソフォームのうちのどれが陰
茎においてもっとも豊富に発現されているかを決定した。
【００６４】 これらの結果は、VEGF-A mRNAの異なったmRNAスプライスバリアントが、ラッ
トおよびヒト陰茎の両方において発現されていることを示し、VEGF-Aの発現が豊
富であることがわかっている他のラット組織（ラット肺）と比較した場合、VEGF
-Aスプライスアイソフォームの量の差が異なっていることが明らかとなる。ラッ
ト肺は188スプライスバリアントをコードするRNAを最も豊富に発現することが確
かめられているが、逆に、ラット陰茎ではVEGF-A mRNAの164スプライスバリアン
トが最も豊富に発現している。これまでは胎盤およびいくつかの女性生殖組織（
子宮）においてのみにおいて見出されていたVEGF-Aの144 スプライスバリアント
の存在を検出する能力は驚驚くべきものであった（39-42）。さらに、ラット陰
茎mRNAをRT−PCRで増幅して得られた多数のVEGFcDNAをシーケンシングして研究
することにより、VEGF-Aの新規スプライスバリアントの存在が明らかとなった。
これは、最初の3エキソンを（最初の5エキソンの代わりに）保持し、かつ第七エ
キソン内に外見上スプライスを有するという普通ではない特徴を有する。我々の
RT−PCR実験において330bpの増幅産物は検出されず、また我々のRNase保護実験
においても、保護されたエキソン断片に対応するものはこれまで有意に検出され
たことがないことから、このスプライスバリアントは、ごく少量しか存在しない
ようである。この異常なVEGFスプライスバリアントは、脈管形成ペプチドを生産
することができるかもしれないという可能性が考慮される一方、VEGF mRNA（マ
ウス）に他のまれなスプライスバリアント（VEGFの最初の三つのエキソンだけを
含む）がすでに報告されていることに興味が持たれる。このスプライスバリアン
ト（VEGF 115）は、VEGF受容体と結合して、内皮細胞の分裂を活性化することが
可能なペプチドをコードすることが示された。従って、これらの研究において観
測された異常なVEGFスプライスバリアント（110）は、見た目はまれで量が少な
いが、おそらく機能的なVEGFペプチドを生産する能力を有する。
【００６５】 勃起不全の最初の経口治療法として、Sildenafil citrateのFDAによる最近の
承認は、勃起不全のための薬物療法の開発における画期的事件となった。しかし
、勃起不全に対する全ての現代の薬物的治療は、一時的に勃起を生み出す「即時
応答（on-demand）」薬物からなる。この時点で、勃起不全の効果的治療方法は
全くない。本プロジェクトにおける仕事は、脈管形成による勃起不全において遭
遇する頻度が高い血管エレメントの減少に対して可能な治療として、勃起組織に
血管形成を誘導するという我々の概念に基づいている。
【００６６】 この説明的研究では、VEGF-A mRNAの発現を齧歯類およびヒト陰茎において調
査した。勃起組織における様々なVEGFアイソフォームの特徴付けは、陰茎の脈管
形成を調節する血管由来の成長因子の特性を明らかにするという我々の興味が動
機となっており、これらの発見はヒトインポテンスの治療に利用される可能性が
ある。他の血管不全症状について考慮されていたように（9、23）、VEGFペプチ
ドをさらに陰茎血管の発達を刺激するための治療に適用することが考えられるで
あろう。同様に、VEGF発現ベクターは、勃起不全の効果的治療のための、新規遺
伝子治療法を提供する。この方法は、前記応答に関与する他の遺伝子産物につい
て考慮されていた方法である（47、48）。陰茎の勃起組織において、天然に発現
している主要な血管新生ペプチドを同定することによって、ゴールが一歩近づく
ことになる。
【００６７】
【参照文献】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ラット組織においてすでに検出されており、本研究においても観測された、い
くつかの主要なVEGF-AのcDNAスプライスバリアントのアイソフォームを特徴づけ
る図。 ほ乳類VEGF遺伝子は八個のエキソンに分かれている（ボックスで示した）。こ
れらエキソンのオルタナティブスプライシングにより、ラット組織において以前
に検出された型（VEGF 205アミノ酸−120アミノ酸）、並びにラット陰茎由来のV
EGF cDNAクローンをスクリーニングすることと、シーケンスすることによって我
々が発見した型（VEGF 110アミノ酸）の六個の分子を生じさせる。エキソンボッ
クスのヌクレオチドの長さは、上がVEGF 205型であり、下がVEGF 110型である。
【図２Ａ】 ラットおよびヒト組織で発現されるVEGF-A cDNAスプライスバリアントをRT−P
CRによって特徴付けた電気泳動写真。 （A）ラット組織に存在するVEGF-A mRNAスプライスバリアントをRT−PCRで増幅
することにより生じた産物のアガロースゲルの概観図。ラットの肺および陰茎の
両者において、VEGF-Aのスプライス型188、164、144、および120の増幅に特徴的
なcDNA産物が存在することが示される。これらのcDNA増幅産物は、右のレーンに
印を付けたように、独立して存在する特定のVEGFアイソフォームマーカーと同等
に移動する。188型は肺では、よりより広く発現することが明らかであるが、164
型は陰茎で最も豊富であることが明らかである。M.W.＝分子量マーカーを含むレ
ーン。
【図２Ｂ】 ラットおよびヒト組織で発現されるVEGF-A cDNAスプライスバリアントをRT−P
CRによって特徴付けた電気泳動写真。 ヒト細胞および組織に存在するVEGF-A mRNAスプライスバリアントをRT−PCRで増
幅することにより生じた産物のアガロースゲルの概観図。LNCaP細胞株RNAおよび
ヒト海綿体RNAの両者は、四種の主要なVEGF-Aスプライスバリアント（189、165
、145、および121）の増幅を可能にする。ラット陰茎RNAの増幅結果（4番レーン
）として、ヒト陰茎では165 AAスプライスバリアントが189スプライスバリアン
トよりも豊富である。同様に増幅されたラット組織（陰茎および肺）由来の産物
を、右のレーンと比較する。M.W.＝分子量マーカーを含むレーン。増幅断片の分
子サイズを右に示す。
【図３Ａ】 VEGF-A mRNAスプライスバリアントの相対的発現量を測定するための、ラット
肺または陰茎から抽出されたRNAのRNase保護アッセイ図。 （Ａ）32Pラベルされたラージ（VEGF 188）アンチセンスプローブを使用したRNa
se保護アッセイ。RNase消化産物を含むゲルのオートラジオグラフィーをすると
、保護された564bpの断片が存在することを示され、ラット肺においてのみVEGF
188スプライスバリアントの発現が豊富であり、ラット陰茎mRNAでは豊富でない
ことを特徴づける。
【図３Ｂ】 VEGF-A mRNAスプライスバリアントの発現の相対量を測定するための、ラット
肺または陰茎から抽出されたRNAのRNaseプロテクションアッセイの図。 （B）32Pラベルされたスモール（VEGF 164）アンチセンスプローブを使用したRN
ase保護アッセイ。RNase消化産物を含むゲルのオートラジオグラフィーをすると
、肺に150bpの断片が存在するが、陰茎RNAに存在しないことが示され、この部位
では188スプライスバリアントの発現が豊富であることが確認される。同様に、
ラット肺および陰茎RNAの両者において492bpの保護された断片が存在することに
より、両組織においてVEGF 164スプライスアイソフォームの発現が特徴づけられ
る。最後に、陰茎RNA中に342bpの保護された断片が存在するのは、188または144
スプライス型とハイブリダイズすることによって生じる可能性もあるが、陰茎中
のVEG F120スプライスアイソフォームが消化されて生じるようである。これは、
（188または144スプライスバリアントと、ラージプローブ（VEGF 188）のハイブ
リダイゼーションによって生じるであろう）他の特定の断片の保護を検出する能
力が我々にないことに基づいている。図（図の下段部分）では、保護される断片
のサイズを同定する。断片は、より大きなプローブ（A）または小さなVEGFプロ
ーブ（B）を使用して生じた。分子量マーカー（M.W.）のサイズは右に示した。 特異的に消化された保護断片のサイズは、左に示した。コントロールレーンは、
プローブにハイブリダイズした酵母RNA+消化、またはプローブにハイブリダイズ
した酵母RNA-消化を含む。
【図４】 ラットおよびヒト組織および細胞において、VEGFスプライスアイソフォーム（
144/145）が発現することを示すRT−PCR増幅の電気泳動写真。 エキソン1および8内のPCRプライマーは、ラット肺および陰茎から、またはヒ
ト陰茎LNCaP細胞株からのcDNAを増幅するために使用した。反応産物のアガロー
スゲルを臭化エチジウムで染色した。矢印は、360/363bp（VEGF 120/121）、432
/435bp（VEGF 144/145）、492/495bp（VEGF 164/165）、および564/567bp（VEG
F188/189）のバンドの位置を示す。ゲルの右側には、個々のクローンのRT−PCR
増幅で生じた典型的なラダーを含む。クローンには、参照したVEGF cDNA断片ま
たは分子量マーカーを含む。
【図５】 RT−PCR増幅は、ラットおよびヒト組織および細胞において、VEGFスプライス
アイソフォーム（VEGF205）の発現することを示す図。 エキソン1および8B内のPCRプライマーは、ラット肺および陰茎から、またはヒ
ト陰茎LNCaP細胞株からのcDNAを増幅するために使用した。反応産物のアガロー
スゲルを臭化エチジウムで染色した。矢印は、433bp（VEGF 205）のバンドの位
置を示す。右のレーンには、ラット組織または定義されたVEGF-Aのスプライスバ
リアントcDNAを含むクローン化されたプラスミドのエキソン1/8プライマーを使
用したRT−PCR増幅の反応産物を含む。M.W.は分子量マーカーである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ａ６１Ｋ 37/24 // Ｃ０７Ｋ 14/485 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 シャブサイ、リドワン アメリカ合衆国、ニュージャージー州 07470 ウェイン、ラツァー・ロード 461 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA21 CA04 CA12 CA20 DA03 GA11 HA13 HA14 HA17 4C084 AA01 AA02 AA13 BA01 BA08 DB52 MA52 MA55 MA63 MA66 NA14 ZA812 4C087 AA01 AA02 BC83 MA02 MA52 MA55 MA63 MA66 NA14 ZA81 4H045 AA30 BA10 CA40 DA20 EA24

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 男性患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であ
    って、患者の陰茎への血液供給を増加または維持するために有効な血管内皮成長
    因子のある量を患者に投与することを含む方法。
  2. 【請求項２】 患者の勃起不全を治療する方法であって、患者の陰茎への血
    液供給を増加するために有効な血管内皮成長因子のある量を患者に投与すること
    を含む方法。
  3. 【請求項３】 男性患者の陰茎において、血管組織の密度を増加または維持
    する方法であって、患者の陰茎への血液供給を増加または維持するために有効な
    血管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含む方法。
  4. 【請求項４】 請求項1、2、または3に記載の方法であって、血管内皮成長
    因子が、VEGF-A 205/206、VEGF-A 188/189、VEGF-A 164/165、VEGF-A 144/145、
    VEGF-A 120/121、またはVEGF-A 110である方法。
  5. 【請求項５】 請求項1、2、または3に記載の方法であって、血管内皮成長
    因子が、静脈内に、局所的に、経皮的に、経口的に、または注射によって投与さ
    れる方法。
  6. 【請求項６】 請求項1、2、または3に記載の方法であって、血管内皮成長
    因子が陰茎に注射される方法。
  7. 【請求項７】 請求項1、2、または3に記載の方法であって、血管内皮成長
    因子が海綿体（corpora cavernosa）組織に注射される方法。
  8. 【請求項８】 請求項1、2、または3に記載の方法であって、血管内皮成長
    因子がスポンジ体（corpus spongiosum）組織に注射される方法。
  9. 【請求項９】 患者の陰茎への血液供給を増加または維持する方法であって
    、血管内皮成長因子をコードする遺伝子を含む核酸を、該核酸が血管内皮成長因
    子を発現して、それにより患者の陰茎への血液供給を増加または維持するような
    条件下で、適切な細胞に導入することを含む方法。
  10. 【請求項１０】 請求項8に記載の方法であって、前記核酸がベクターを含
    む方法。
  11. 【請求項１１】 女性患者の性器部位への血液供給を増加または維持する方
    法であって、患者の性器部位への血液供給を増加または維持するために有効な血
    管内皮成長因子のある量を患者に投与することを含む方法。
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