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JP2003210166A - 変温動物由来細胞の細胞接着基材 - Google Patents

変温動物由来細胞の細胞接着基材

Info

Publication number
JP2003210166A
JP2003210166A JP2002328721A JP2002328721A JP2003210166A JP 2003210166 A JP2003210166 A JP 2003210166A JP 2002328721 A JP2002328721 A JP 2002328721A JP 2002328721 A JP2002328721 A JP 2002328721A JP 2003210166 A JP2003210166 A JP 2003210166A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
gly
sequence
cell
cells
pro
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2002328721A
Other languages
English (en)
Inventor
Sukehito Kurokawa
祐人 黒川
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sanyo Chemical Industries Ltd
Original Assignee
Sanyo Chemical Industries Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanyo Chemical Industries Ltd filed Critical Sanyo Chemical Industries Ltd
Priority to JP2002328721A priority Critical patent/JP2003210166A/ja
Publication of JP2003210166A publication Critical patent/JP2003210166A/ja
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  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

(57)【要約】 【課題】 プリオンやヒト感染性のウイルス等の感染物
質が含有される危険性がなく、変温動物由来細胞を効率
よく増殖させることができる細胞接着基材を提供するこ
とである。 【解決手段】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）及び／又は
細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）を用いて、変温動物由
来細胞（Ａ）及び基材（Ｂ）を接着させてなることを特
徴とする細胞接着基材を用いる。（Ｘ）は、細胞接着シ
グナルを現わす最小アミノ酸配列（ｓｈ）を含み、
（Ｙ）は、（ｓｈ）を含まないペプチドであって、少な
くとも３個のアミノ酸からなる反復単位が、少なくとも
重合度３で重合したアミノ酸配列（ｊｈ）を有するペプ
チドである。（Ａ）としては昆虫細胞が好ましい。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、細胞接着基材に関
する。さらに詳しくは、変温動物由来細胞と基材とを接
着させてなる細胞接着基材に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、変温動物由来細胞と基材とを接着
させてなる細胞接着基材として、天然由来のコラーゲン
や絹蛋白質を基材にコーティングしたものに変温動物由
来細胞を接着させてなる細胞接着基材が知られている
（特許文献１）。
【０００３】
【特許文献１】特開平１１−２４３９４８号公報。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】天然由来のコラーゲン
や絹蛋白質を基材にコーティングしたものに変温動物由
来細胞を接着させてなる細胞接着基材は、天然由来の蛋
白質を用いるため蛋白質中にプリオンやヒト感染性のウ
イルス等の感染物質が含有される危険性があるという問
題点及び細胞接着性が低いという問題点があった。すな
わち、本発明の目的は、天然由来の蛋白質を使用せず、
細胞接着性の高い細胞接着基材を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、鋭意研究を
重ねてきた結果、特定のペプチドを使用することにより
上記目的を達成することを見いだし本発明に到達した。
すなわち、本発明の細胞接着基材の特徴は、変温動物由
来細胞（Ａ）及び基材（Ｂ）と、細胞接着性人工ペプチ
ド（Ｘ）及び／又は細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）を
用いて、変温動物由来細胞（Ａ）及び基材（Ｂ）を接着
させてなる点にある。
【０００６】
【発明の実施の形態】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）
は、細胞接着シグナルを現わす最小アミノ酸配列（ｓ
ｈ）を有している。なお、「細胞接着シグナルを現わ
す」とは、特定の最小アミノ酸配列（ｓｈ）が細胞のイ
ンテグリンレセプターに認識されることを意味する（大
阪府立母子医療センター雑誌、第８巻 第１号、５８〜
６６頁、１９９２年）。
【０００７】細胞接着シグナルを現わす最小アミノ酸配
列（ｓｈ）としては、例えば、「病態生理、第９巻 第
７号、５２７〜５３５頁、１９９０年」や「大阪府立母
子医療センター雑誌、第８巻 第１号、５８〜６６頁、
１９９２年」に記載されているもの等が用いられる。こ
れらの最小アミノ酸配列（ｓｈ）の中で好ましいもの
は、Arg Gly Asp配列、Leu Asp Val配列、Arg Glu Asp
Val配列（１）、Tyr IleGly Ser Arg配列（２）、Pro A
sp Ser Gly Arg配列（３）、Arg Tyr Val Val Leu Pro
Arg配列（４）、Leu Gly Thr Ile Pro Gly配列（５）、
Arg Asn Ile AlaGlu Ile Ile Lys Asp Ile配列（６）、
Ile Lys Val Ala Val配列（７）、Leu Arg Glu配列、As
p Gly Glu Ala 配列（８）、Gly Val Lys Gly Asp Lys
Gly AsnPro Gly Trp Pro Gly Ala Pro配列（９）、Gly
Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Lys Gly Asp Lys
（１０）、His Ala Val配列及びTyr Lys Leu Asn Val A
sn Asp Ser配列（１１）である。さらに好ましいもの
は、変温動物由来細胞（Ａ）への接着性が高い点で、Ar
g Gly Asp配列、Tyr Ile Gly Ser Arg配列（２）、及び
Ile Lys Val Ala Val配列（７）である。なお、アミノ
酸配列は３文字表記で表し、（ ）内にアミノ酸配列表
中の対応する配列番号を記載する（以下、同じであ
る。）。
【０００８】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）は、前記最
小アミノ酸配列（ｓｈ）を１分子中に少なくとも１個有
すればよいが、変温動物由来細胞（Ａ）への接着性が高
い点で、１分子中に２〜５０個有するものが好ましく、
さらに好ましくは１分子中に３〜３０個、特に好ましく
は１分子中に５〜２０個有するものである。細胞接着性
人工ペプチド（Ｘ）の数平均分子量は、３００〜３，０
００，０００が好ましく、さらに好ましくは１，０００
〜１，０００，０００、特に好ましくは３，０００〜３
００，０００である。すなわち、（Ｘ）の数平均分子量
の上限は３，０００，０００が好ましく、さらに好まし
くは１，０００，０００、特に好ましくは３００，００
０であり、同様に下限は３００が好ましく、さらに好ま
しくは１，０００、特に好ましくは３，０００である。
なお、数平均分子量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリ
アクリルアミドゲル電気泳動）法で、測定サンプルを水
中で分離し、泳動距離を標準物質と比較することによっ
て求めるものである（以下、同じである。）。
【０００９】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）としては、
例えば、Arg Gly Asp Ser配列（１４）からなるペプチ
ド、Gly Arg Gly Asp Ser配列（１５）からなるペプチ
ド、Gly Arg Gly Asp Ser Pro配列（１６）からなるペ
プチド、Arg Gly Asp Ser ProAla Ser Ser Lys Pro配列
（１７）からなるペプチド、Ala Val Thr Gly Arg GlyA
sp Ser Pro Ala Ser Ala配列（１８）からなるペプチ
ド、Pro Gly Ala Ser Ile Lys Val Ala Val Ser Ala Gl
y Pro Ser配列（１９）からなるペプチド、Cys Ser Arg
Ala Arg Lys Gln Ala Ala Ser Ile Lys Val Ala Val S
er Ala Asp Arg配列（２０）からなるペプチド、Val Cy
s Glu Pro Gly Tyr Ile Gly Ser Arg CysAsp配列（２
１）からなるペプチド及びこれらの少なくとも一種のペ
プチドからなる重合体等が例示できる。重合体として
は、例えば、（Arg Gly Asp Ser）4配列（２２）、（Ar
g Gly Asp Ser）8配列（２３）、（Arg Gly Asp Ser）
16配列（２４）、（Gly Arg Gly Asp Ser）8配列（２
５）、（Gly Arg Gly Asp Ser Pro）8配列（２６）、
（Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro）4配列
（２７）、（Ala Val Thr Gly ArgGly Asp Ser Pro Ala
Ser Ala）4配列（２８）、（Pro Gly Ala Ser Ile Lys
Val Ala Val Ser Ala Gly Pro Ser）4配列（２９）、
（Cys Ser Arg Ala Arg LysGln Ala Ala Ser Ile Lys V
al Ala Val Ser Ala Asp Arg）4配列（３０）、又は（V
al Cys Glu Pro Gly Tyr Ile Gly Ser Arg Cys Asp）4
（３１）配列からなるペプチド等が挙げられる。該重合
体の重合度は、２〜５０が好ましく、さらに好ましくは
３〜３０、特に好ましくは４〜２０、最も好ましくは４
〜１６である。
【０００１０】細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）は、細
胞接着シグナルを現わす最小アミノ酸配列（ｓｈ）を含
まないペプチドであって、少なくとも３個のアミノ酸か
らなる反復単位が、少なくとも重合度３で重合した構造
（アミノ酸配列）（ｊｈ）を有するペプチドである。少
なくとも３個のアミノ酸からなる反復単位としては、例
えば、「特表平３−５０２９３５号公報、反復単位」や
「Abraham J. Dombら著、Handbook of Biodegradable P
olymers, Harwood Academic Publishers発行, Amsterda
m、1997年、ブロック配列」に記載されているもの等が
用いられる。これらの反復単位のうち、Gly Ala Gly Al
a Gly Ser配列（１２）、Gly Val Gly Val Pro配列（１
３）、Gly Pro Pro配列、Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly
ProGly 配列（３２）、Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly
Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln配列（３３）及びGly
Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly S
er Pro配列（３４）が好ましく、変温動物由来細胞
（Ａ）への接着性が高いという観点から、さらに好まし
くはGly Ala Gly Ala Gly Ser配列（１２）、GlyVal Gl
y Val Pro配列（１３）及びGly Pro Pro配列、特に好ま
しくはGly Ala Gly Ala Gly Ser配列（１２）である。
【０００１１】細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）は、反
復単位を少なくとも重合度３で重合した構造（ｊｈ）を
有するペプチドであればよいが、変温動物由来細胞
（Ａ）への接着性が高い点で、反復単位を、１分子中に
３〜１０，０００個有するものが好ましく、さらに好ま
しくは１分子中に１０〜３，０００個、特に好ましくは
１分子中に３０〜１，０００個有するものである。細胞
接着補助人工ペプチド（Ｙ）の数平均分子量は、５００
〜５，０００，０００が好ましく、さらに好ましくは
１，５００〜１，５００，０００、特に好ましくは５，
０００〜５００，０００である。すなわち、（Ｙ）の数
平均分子量の上限は５，０００，０００が好ましく、さ
らに好ましくは１，５００，０００、特に好ましくは５
００，０００であり、同様に下限は５００が好ましく、
さらに好ましくは１，５００、特に好ましくは５，００
０である。
【００１２】細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）として
は、例えば、「特表平３−５０２９３５号公報」や「Ab
raham J. Dombら著、Handbook of Biodegradable Polym
ers, Harwood Academic Publishers発行, Amsterdam、1
997年」に記載されているもの等が用いられる。これら
の細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）のうち、１分子中に
Gly Ala Gly Ala Gly Ser配列（１２）を約１７０個有
する数平均分子量約１０万のペプチド（ａ）、１分子中
に（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）9配列（３５）とGly Al
a Ala Gly Tyr配列（３６）とをそれぞれ約１８個づつ
有する数平均分子量約１０万のペプチド（ｂ）、（Gly
Val Gly Val Pro）8配列（３７）と（GlyAla Gly Ala G
ly Ser）8配列（３８）とをそれぞれ約１１個づつ有す
る数平均分子量約１０万のペプチド（ｃ）、（Gly Val
Gly Val Pro）12配列（３９）と（Gly Ala Gly Ala Gly
Ser）8配列（３８）とをそれぞれ約８個づつ有する数
平均分子量約１０万のペプチド（ｄ）、（Gly Val Gly
Val Pro）16配列（４０）と（Gly Ala Gly Ala Gly Se
r）8配列（３８）とをそれぞれ約７個づつ有する数平均
分子量約１０万のペプチド（ｅ）、（Gly Val Gly Val
Pro）8配列（３７）と（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）6配
列（４１）とをそれぞれ約１２個づつ有する数平均分子
量約１０万のペプチド（ｆ）、及び（Gly Val Gly Val
Pro）8配列（３７）と（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）4配
列（４２）とをそれぞれ約１２個づつ有する数平均分子
量約１０万のペプチド（ｇ）が好ましく、さらに好まし
くはペプチド（ａ）及びペプチド（ｂ）である。
【００１３】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）及び細胞接
着補助人工ペプチド（Ｙ）は、人工的に製造されるもの
であり、例えば、有機合成法（酵素法、固相合成法及び
液相合成法等）、及び遺伝子組み換え法によって容易に
製造できる。有機合成法に関しては、例えば、「生化学
実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１
日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」や
「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和
６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学
同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。
【００１４】遺伝子組み換え法に関しては、例えば、
「特表平３−５０２９３５号公報」に記載されている方
法等が適用できる。なお、遺伝子組み換え法による場
合、組み換え微生物由来の不純物を含むことがあるた
め、抗ペプチド抗体等を用いたアフィニティ精製等によ
って精製し、ペプチドの純度を８０重量％以上にするこ
とが好ましく、さらに好ましくは９０重量％以上、特に
好ましくは９５重量％以上である。これらのうち、細胞
接着性人工ペプチド（Ｘ）及び細胞接着補助人工ペプチ
ド（Ｙ）のアミノ酸配列を容易に設計・製造できるとい
う観点から、遺伝子組み換え法が好ましい。
【００１５】有機合成法による細胞接着性人工ペプチド
（Ｘ１）としては、例えば、Arg Gly Asp Ser配列（１
４）、Gly Arg Gly Asp Ser配列（１５）、Gly Arg Gly
AspSer Pro配列（１６）及びArg Gly Asp Ser Pro Ala
Ser Ser Lys Pro配列（１７）からなる群より選ばれる
少なくとも１種のアミノ酸配列を有するペプチド等が挙
げられる。有機合成法による細胞接着補助人工ペプチド
（Ｙ１）としては、例えば、GlyAla Gly Ala Gly Ser配
列（１２）及び／又はGly Val Gly Val Pro配列（１
３）を有するペプチド等が挙げられる。
【００１６】遺伝子組み換え法による細胞接着性人工ペ
プチド（Ｘ２）としては、例えば、Arg Gly Asp配列、T
yr Ile Gly Ser Arg配列（２）及びIle Lys Val Ala Va
l配列（７）からなる群より選ばれる少なくとも１種の
アミノ酸配列を有するペプチド等が挙げられる。遺伝子
組み換え法による細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ２）と
しては、例えば、Gly Ala Gly Ala Gly Ser配列（１
２）、Gly Val Gly Val Pro配列（１３）及びGly Ala P
ro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro
配列（４３）からなる群より選ばれる少なくとも１種の
アミノ酸配列を有するペプチド等が挙げられる。
【００１７】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）及び細胞接
着補助人工ペプチド（Ｙ）は、同一分子内にあってもよ
く、すなわち、（Ｘ）及び（Ｙ）に換えて、細胞接着シ
グナルを現わす最小アミノ酸配列（ｓｈ）と、少なくと
も３個のアミノ酸からなる反復単位を少なくとも重合度
３で重合してなるアミノ酸配列（ｊｈ）（細胞接着シグ
ナルを現わす最小アミノ酸配列（ｓｈ）を含まない）と
を有するペプチド（Ｚ）を用いることができる。このよ
うな細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）と細胞接着補助人工
ペプチド（Ｙ）とが同一分子内にあるペプチド（Ｚ）
は、変温動物由来細胞（Ａ）へのペプチドの接着性が高
いという観点から好ましい。
【００１８】ペプチド（Ｚ）は、最小アミノ酸配列（ｓ
ｈ）を１分子中に少なくとも１個有すればよいが、変温
動物由来細胞（Ａ）への接着性が高い点で、１分子中に
２個以上有するものが好ましく、さらに好ましくは３個
以上、特に好ましくは５個以上有するものであり、ま
た、５０個以下有するものが好ましく、さらに好ましく
は１分子中に３０個以下、特に好ましくは１分子中に２
０個以下有するものである。また、ペプチド（Ｚ）は、
アミノ酸配列（ｊｈ）を１分子中に少なくとも１個有す
ればよいが、熱に対する安定性の観点から、１分子中に
２個以上有するものが好ましく、さらに好ましくは３個
以上、特に好ましくは５個以上有するものであり、ま
た、５０個以下有するものが好ましく、さらに好ましく
は１分子中に３０個以下、特に好ましくは１分子中に２
０個以下有するものである。
【００１９】ペプチド（Ｚ）において、最小アミノ酸配
列（ｓｈ）とアミノ酸配列（ｊｈ）との個数の比率
｛（ｊｈ）／（ｓｈ）は、０．２以上が好ましく、さら
に好ましくは０．５以上、特に好ましくは０．８以上で
あり、また、５以下が好ましく、さらに好ましくは２以
下、特に好ましくは１．３以下である。最小アミノ酸配
列（ｓｈ）とアミノ酸配列（ｊｈ）とは、ペプチド
（Ｚ）のβターン構造の取りやすさ等の観点から、最小
アミノ酸配列（ｓｈ）とアミノ酸配列（ｊｈ）とが交互
に位置することが好ましい。
【００２０】ペプチド（Ｚ）としては、例えば、「特表
平３−５０２９３５号公報」や「Abraham J. Dombら
著、Handbook of Biodegradable Polymers, Harwood Ac
ademicPublishers発行, Amsterdam、1997年」等に記載
の（Gly Ala Gly Ala Gly Ser） 9配列（３５）とArg Gl
y Asp配列とをそれぞれ約１２個づつ有する数平均分子
量約１０万のペプチド（ｈ）、（Gly Ala Gly Ala Gly
Ser）9配列（３５）とTyrIle Gly Ser Arg配列（２）と
をそれぞれ約１３個づつ有する数平均分子量約１０万の
ペプチド（ｉ）、（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）9配列
（３５）とIle LysVal Ala Val配列（７）とをそれぞれ
約１２個づつ有する数平均分子量約１０万るペプチド
（ｊ）、（Gly Val Gly Val Pro）8配列（３７）と（Gl
y Ala Gly Ala Gly Ser）12配列（４４）とArg Gly Asp
配列とをそれぞれ約１２個づつ有する数平均分子量約１
０万のペプチド（ｋ）、及び（Gly Ala Pro Gly Pro Pr
o GlyPro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro）2（４５）配
列とArg Gly Asp配列とをそれぞれ約６個づつ有する数
平均分子量約５万のペプチド（ｌ）等が挙げられる。
【００２１】市場から入手できるペプチド（Ｘ）として
は、商品名を記載すると例えば、ＲＧＤＳ［Arg Gly As
p Ser配列（１４）を１個含有してなるペプチド、数平
均分子量約４００、（株）ペプチド研究所製］、ＧＲＧ
ＤＳ［Gly Arg Gly Asp Ser配列（１５）を１個含有し
てなるペプチド、数平均分子量約５００、（株）ペプチ
ド研究所製］、ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（リコンビナン
トヒトフィブロネクチンＣＨ−２９６）［ヒトフィブロ
ネクチン細胞接着シグナルであるＣＳ１シグナルと細胞
接着ドメインＴｙｐｅＩＩＩ及びヘパリン結合ドメイン
ＩＩを１つずつ有する数平均分子量約６万のペプチド、
宝酒造（株）製（Arg Gly Asp Ser配列（１４）を約１
個含有）］、及びＲＧＤＳ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ「Arg
Gly Asp配列をＰｒｏｔｅｉｎ Ａ（ＩｇＧ結合ドメイ
ン）に挿入した数平均分子量約３万のペプチド、宝酒造
（株）製（Arg Gly Asp Ser配列（１４）を約１個含
有）］等が挙げられる。
【００２２】市場から入手できるペプチド（Ｚ）として
は、商品名を記載すると例えば、プロネクチンＦ［１分
子中にArg Gly Asp配列と（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）
9配列（３５）とを各々約１２個有し、遺伝子組み換え
大腸菌により製造される数平均分子量約１０万のペプチ
ド、三洋化成工業（株）製］、プロネクチンＦプラス
［プロネクチンＦをジメチルアミノエチルクロライドと
反応させて水溶性にしたもの、三洋化成工業（株）
製］、プロネクチンＬ［１分子中にIle Lys Val AlaVal
配列（７）と（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）9配列（３
５）とを各々約１２個有し、遺伝子組み換え大腸菌によ
り製造される数平均分子量約１０万のペプチド、三洋化
成工業（株）製］等が挙げられる。なお、市場から入手
できるペプチド（Ｙ）は知られていないが、上記の製造
方法により容易に得ることができる。
【００２３】変温動物由来細胞（Ａ）としては、魚類
（例えば、コイ、ナマズ、サケ、マス、サバ及びスズキ
等）、両生類（例えば、カエル、サンショウウオ及びイ
モリ等）、は虫類（例えば、カメ、トカゲ、ヘビ及びワ
ニ等）、原索動物（例えば、ヒゲムシ、ホヤ及びタリア
等）、棘皮動物（例えば、ヒトデ、ナマコ及びウニ
等）、節足動物（例えば、昆虫、甲殻類、クモ、ヤス
デ、ムカデ及びカブトガニ等）、環形動物（例えば、ゴ
カイ、ミミズ、ヒル及びイムシ等）、軟体動物（例え
ば、カイ、イカ及びタコ等）、扁形動物（例えば、渦
虫、吸虫、二生類及び条虫等）、刺胞動物（例えば、ヒ
ドロ虫、鉢虫及び花虫等）、海綿動物（例えば、石灰海
綿類、六放海綿類、四軸海綿類及び珪角海綿類等）及び
原生動物（例えば、鞭毛虫、肉質虫及び胞子虫等）等の
岩波生物学辞典（山田常雄ら編集、株式会社岩波書店発
行）に記載の変温動物からなる群より選ばれる少なくと
も１種の動物に由来する細胞等が挙げられる。
【００２４】これらのうち、魚類の細胞、両生類の細
胞、は虫類の細胞及び節足動物の細胞が好ましく、さら
に好ましくは両生類の細胞及び節足動物の細胞、特に好
ましくは節足動物の細胞、さらに特に好ましくは昆虫の
細胞、甲殻類の細胞、クモ類の細胞及びヤスデ類の細
胞、より特に好ましくは昆虫の細胞及び甲殻類の細胞、
最も好ましくは昆虫の細胞である。
【００２５】昆虫の細胞としては、カイコ細胞、クワコ
細胞、サクサン細胞、シンジュサン細胞、ヨトウガ細
胞、クワゴマダラヒトリ細胞、ハマキムシ細胞、ショウ
ジョウバエ細胞、センチニクバエ細胞、ヒトスジシマカ
細胞、アゲハチョウ細胞、ワモンゴキブリ細胞及びイラ
クサキンウワバ細胞等が挙げられ、これらのうち、カイ
コ細胞、サクサン細胞、ヨトウガ細胞、イラクサキンウ
ワバ細胞、クワゴマダラヒトリ細胞、ショウジョウバエ
細胞、センチニクバエ細胞、アゲハチョウ細胞及びワモ
ンゴキブリ細胞が好ましく、さらに好ましくはカイコ細
胞、ヨトウガ細胞、イラクサキンウワバ細胞、センチニ
クバエ細胞及びワモンゴキブリ細胞、特に好ましくはカ
イコ細胞、ヨトウガ細胞及びイラクサキンウワバ細胞で
ある。
【００２６】カイコ細胞としてはＢｍＮ細胞及びＢｏＭ
ｏ細胞等が挙げられ、ヨトウガ細胞としてはＳｆ９細胞
及びＳｆ２１細胞等が挙げられ、イラクサキンウワバ細
胞としてはＴｎ−５細胞、ＨＩＧＨ ＦＩＶＥ細胞及び
ＭＧ１細胞等が挙げられる。変温動物由来細胞（Ａ）の
由来は、細胞が採取できる部位であれば何れでもよい
が、細胞採取し易いという観点から、胚、卵巣、脂肪体
および血球が好ましい。
【００２７】変温動物由来細胞（Ａ）は、遺伝子を導入
（組み換え）した変温動物由来細胞であってもよい。細
胞に遺伝子を導入する方法としては、例えば、マイクロ
インジェクション法、リン酸カルシウム法、エレクトロ
ポレーション法、プロトプラスト融合法、ＤＥＡＥデキ
ストラン法、リポフェクション法、カチオン性物質利用
法、ウイルス法及びパーティクルガン法等の遺伝子工学
キーワードブック（緒方宣邦ら著、株式会社羊土社発
行、２０００年）や生物化学実験法４５組換えタンパク
質生産法（塚越規弘編著、株式会社学会出版センター、
２００１年）に記載の方法等が適用できる。これらのう
ちカチオン性物質利用法及びウイルス法が好ましい。
【００２８】基材（Ｂ）としては特に制限はなく、細胞
が接着でき、細胞培養ができるものであれば何れも使用
できる。基材（Ｂ）の形状としては、細胞培養に一般に
用いられる形状［例えば、細胞培養の技術（日本組織培
養学会編集、株式会社朝倉書店発行、１９９９年）に記
載の形状］等が使用でき、例えば、板状、穴付きプレー
ト（６穴、２４穴、９６穴プレート等）、シャーレ、フ
ラスコ、ボトル、ビーズ及びファイバー等が挙げられ
る。基材（Ｂ）の材質としては、細胞培養に一般に用い
られる材質［例えば、細胞培養の技術（日本組織培養学
会編集、株式会社朝倉書店発行、１９９９年）に記載の
材質］等が使用でき、例えば、ガラス、シリコーン、ポ
リスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ナイロ
ン、アクリル樹脂及びポリウレタン等が挙げられる。
【００２９】本発明の細胞接着基材は、ペプチド（Ｘ）
及び／又はペプチド（Ｙ）を、基材（Ｂ）の表面に付着
した状態及び／又は基材（Ｂ）に練り込まれた状態とす
ることにより生産することができる。ペプチド（Ｘ）及
び／又はペプチド（Ｙ）が、基材（Ｂ）の表面に付着し
た状態及び／又は基材（Ｂ）に練り込んだ状態のうち、
ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）の使用量が少
なくて済むという観点から、基材（Ｂ）の表面に付着し
た状態が好ましい。
【００３０】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を基材（Ｂ）の表面に付着した状態にさせる方法として
は、ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）を物理的
に接触させる方法及び化学的に結合させる方法等が挙げ
られる。
【００３１】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を物理的に接触させる方法としては、例えば、ペプチド
（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）を溶媒（Ｓ１）等に溶
解又は分散させた溶液又は分散液を、基材（Ｂ）に塗
工、含浸又は混合させる方法等が適用できる。そしてそ
の後、乾燥させることによって、（Ｘ）及び／又は
（Ｙ）が付着した細胞接着基材を得ることができる（例
えば、「Ｅｓｔｙ，Ａ．Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏ
ｄｕｃｔｓ １９９１年」に記載の方法等）。
【００３２】溶媒（Ｓ１）としては特に制限はないが、
無機塩、有機酸塩、アミノ酸、ビタミン、アルコール、
脂質・糖、酸及び／又は塩基を含有する水溶液、水及び
体液等が使用できる。水溶液中の無機塩、有機酸塩、ア
ミノ酸、ビタミン、アルコール、脂質・糖、酸及び／又
は塩基の含有量は、水溶液の重量に基づいて、０．００
１〜５０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０１
〜１０重量％である。すなわち、この含有量の上限は５
０重量％が好ましく、さらに好ましくは１０重量であ
り、またこの含有量の下限は０．００１重量％が好まし
く、さらに好ましくは０．０１重量である。
【００３３】無機塩としては、ハロゲン化金属塩、硫酸
金属塩、リン酸金属塩、硝酸金属塩、炭酸金属塩及び過
ハロゲン酸金属等が使用でき、塩化ナトリウム、硫酸ナ
トリウム、リン酸ナトリウム、塩化カルシウム、硝酸
鉄、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸ナトリウ
ム、リン酸水素ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水
素カリウム、硫酸銅、硫酸鉄、塩化リチウム、臭化ナト
リウム、臭化リチウム過塩素酸ナトリウム及び過塩素酸
リチウム等が挙げられる。有機酸塩としては、蟻酸ナト
リウム、酢酸ナトリウム、酢酸リチウム及び酒石酸ナト
リウム等が挙げられる。
【００３４】アミノ酸としては、アルギニン、ヒスチジ
ン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルア
ラニン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリ
ン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタ
ミン酸、プロリン、セリン及びグリシン等が挙げられ
る。ビタミンとしては、コリン、イノシトール、ニコチ
ンアミド、グルタミン、ビタミンＡ、ビタミンＢ12及び
ビタミンＣ等が挙げられる。アルコールとしては、炭素
数１〜４のアルコール等が使用でき、メタノール、エタ
ノール、イソプロピルアルコール及びブタノール等が挙
げられる。脂質・糖としては、脂質、単糖、２糖、オリ
ゴ糖、アミノ糖及び酸性糖等が挙げられる。
【００３５】酸としては、無機酸及び炭素数１〜６の有
機酸等が使用でき、塩酸、燐酸、酢酸、蟻酸、フェノー
ル及び硫酸等が挙げられる。塩基としては、無機塩基及
び炭素数２〜６の有機塩基等が使用でき、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム、アンモニア及びトリエチルアミ
ン等が挙げられる。水としては、蒸留水、イオン交換
水、水道水及びイオン交換蒸留水等が挙げられる。体液
としては、血液、血漿、血清及び尿等が挙げられる。こ
れらの溶媒（Ｓ１）の中で、無機塩、酸及び／又は塩基
を含有する水溶液及び水が好ましく、さらに好ましくは
無機塩、酸及び／又は塩基を含有する水溶液である。
【００３６】さらに、ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチ
ド（Ｙ）を培地に溶解又は分散させることにより、その
培地溶液（分散液）を変温動物由来細胞（Ａ）の培地と
して使用し、変温動物由来細胞（Ａ）の培養するととも
に、ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）を基材
（Ｂ）の表面に付着させることもできる。この場合、通
常、変温動物由来細胞（Ａ）は基材上で培養されるが、
培地中で培養された変温動物由来細胞（Ａ）が基材に接
着される場合もありうる。
【００３７】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を化学的に結合させる方法としては、例えば、Ｎ−ヒド
ロキシコハク酸イミド又はカルボジイミド等の存在下
に、基材（Ｂ）にペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド
（Ｙ）をエステル化又はアミド化により固定させ、洗浄
乾燥させる方法等が適用できる。なお、この場合、反応
溶媒を使用してもよく、反応溶媒としては公知のものが
使用でき、例えば、溶媒（Ｓ１）及び有機溶剤等が用い
られる。有機溶媒としては、アセトン、エタノール、ジ
メチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメチル
アセトアミド及びテトラヒドロフラン等が挙げられる。
これらのうち好ましくは、水及び有機溶媒である。ペプ
チド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）を化学的に結合さ
せる場合、化学反応に関与する官能基としては、カルボ
キシル基、アミノ基及び水酸基等が挙げられる。
【００３８】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を基材（Ｂ）に練り込まれた状態にさせる方法として
は、成形前の基材（Ｂ）の溶液にペプチド（Ｘ）及び／
又はペプチド（Ｙ）を投入した混合物を、所定の形状に
成形する方法等が挙げられ、例えば、熱可塑性樹脂（ポ
リエチレン、ポリスチレン及びポリアミド等）を融点温
度以上にして流動可能状態とした後、ペプチド（Ｘ）及
び／又はペプチド（Ｙ）を投入し、その混合物を押出成
形や射出成形などで加工する方法や、熱硬化性樹脂（尿
素樹脂、メラミン樹脂、フェノール樹脂、エポキシ樹
脂、不飽和ポリエステル、アルキド樹脂、ウレタン樹
脂、エボナイト及びシリコーン樹脂等）に、ペプチド
（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）を投入し、その混合物
を硬化温度以上にして加工する方法等が適用できる。
【００３９】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を基材（Ｂ）の表面に付着させる場合、ペプチド（Ｘ）
及び／又はペプチド（Ｙ）の含有溶液（分散液）中の
（Ｘ）及び／又は（Ｙ）の濃度は、（Ｘ）及び／又は
（Ｙ）の含有溶液（分散液）の重量に基づいて、０．０
０１μｇ／ｇ〜９９９ｍｇ／ｇが好ましく、さらに好ま
しくは０．０１μｇ／ｇ〜１００ｍｇ／ｇ、特に好まし
くは０．１μｇ／ｇ〜１０ｍｇ／ｇ、最も好ましくは１
μｇ／ｇ〜１ｍｇ／ｇである。すなわち、この場合、濃
度の上限は９９９ｍｇ／ｇが好ましく、さらに好ましく
は１００ｍｇ／ｇ、特に好ましくは１０ｍｇ／ｇ、最も
好ましくは１ｍｇ／ｇであり、同様に下限は０．００１
μｇ／ｇが好ましく、さらに好ましくは０．０１μｇ／
ｇ、特に好ましくは０．１μｇ／ｇ、最も好ましくは１
μｇ／ｇである。
【００４０】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を基材（Ｂ）の表面に付着させた場合、ペプチド（Ｘ）
及び／又はペプチド（Ｙ）の含有量としては、基材
（Ｂ）の培養単位面積あたり、０．１ｎｇ／ｃｍ2〜１
００ｍｇ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは１ｎｇ
／ｃｍ2〜１０ｍｇ／ｃｍ2、特に好ましくは１０ｎｇ／
ｃｍ 2〜１ｍｇ／ｃｍ2、最も好ましくは１００ｎｇ／ｃ
ｍ2〜１００μｇ／ｃｍ2である。なお、培養単位面積
は、基材（Ｂ）の表面のうち、培養される細胞が接着し
得る表面の表面積を意味する。ここで、細胞が入り込ま
ないような微小な凹凸（例えば、１μｍ以下）は平坦な
表面として取扱うが、培養単位面積を高める目的でリブ
（畝）等が設けてあるものについてはそのリブの表面積
を培養単位面積に含まれる。また、基材（Ｂ）の培養単
位面積は、基材メーカーがカタログに記載している基材
の培養単位面積をそのまま適用できる。培養単位面積あ
たりのペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）の含有
量の測定方法は特に限定されないが、例えば、免疫学的
測定法等が利用できる。免疫学的測定法としては、例え
ば、ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）と結合す
る抗体に酵素を標識したもの（以下、酵素標識抗体）を
基材（Ｂ）の培養単位面積に反応させ、基材（Ｂ）の培
養単位面積に結合した酵素標識抗体の酵素量を測定する
方法等が挙げられる。
【００４１】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を基材（Ｂ）に練り込ませる場合、ペプチド（Ｘ）及び
／又はペプチド（Ｙ）の含有混合物中の（Ｘ）及び／又
は（Ｙ）の濃度は、含有混合物の重量に基づいて、０．
０１μｇ／ｇ〜９９９ｍｇ／ｇが好ましく、さらに好ま
しくは０．１μｇ／ｇ〜１００ｍｇ／ｇ、特に好ましく
は１μｇ／ｇ〜１０ｍｇ／ｇ、最も好ましくは１０μｇ
／ｇ〜１０ｍｇ／ｇである。すなわち、この場合、濃度
の上限は９９９ｍｇ／ｇが好ましく、さらに好ましくは
１００ｍｇ／ｇ、特に好ましくは１０ｍｇ／ｇ、最も好
ましくは１ｍｇ／ｇであり、同様に下限は０．０１μｇ
／ｇが好ましく、さらに好ましくは０．１μｇ／ｇ、特
に好ましくは１μｇ／ｇｍｇ／ｇ、最も好ましくは１０
μｇ／ｇである。
【００４２】ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
を、基材（Ｂ）の表面に付着又は基材（Ｂ）に練り込ん
だ後、必要に応じて滅菌処理を施してもよい。滅菌方法
としては特に制限はなく、例えば、放射線滅菌、エチレ
ンオキサイドガス滅菌、γ線滅菌、アルコール滅菌、オ
ートクレーブ滅菌及び乾熱滅菌等が挙げられる。
【００４３】変温動物由来細胞（Ａ）と基材（Ｂ）とを
接着させる方法としては、細胞を基材に接着させる一般
的な方法［例えば、細胞培養の技術（日本組織培養学会
編集、株式会社朝倉書店発行、１９９９年）、生物化学
実験法４５組換えタンパク質生産法（塚越規弘編著、株
式会社学会出版センター、２００１年）及び昆虫バイオ
工場（木村滋編著、株式会社工業調査会発行、２０００
年）等に記載の方法］等が使用できる。例えば、０．１
〜１０，０００万ｃｅｌｌｓの変温動物由来細胞（Ａ）
及び０．００１〜１００ｍＬの培地を、０．０１〜１，
０００平方センチメートルの培養単位面積を有する基材
（Ｂ）に投入し、０〜６０℃の空気や水等の雰囲気下、
１分〜１週間培養して細胞を接着させる方法等が挙げら
れる。なお、ペプチド（Ｘ）及び／又はペプチド（Ｙ）
はあらかじめ基材（Ｂ）の表面に付着及び／又は基材
（Ｂ）に練り込ませておくことが好ましい。
【００４４】変温動物由来細胞（Ａ）が基材（Ｂ）に接
着したことの確認方法としては、一般的な確認方法［例
えば、細胞培養の技術（日本組織培養学会編集、株式会
社朝倉書店発行、１９９９年）、生物化学実験法４５組
換えタンパク質生産法（塚越規弘編著、株式会社学会出
版センター、２００１年）及び昆虫バイオ工場（木村滋
編著、株式会社工業調査会発行、２０００年）等に記載
の方法］が使用できる。例えば、血球計数法（コールタ
ーカウンターの使用など）、顕微鏡観察法（計算盤の使
用など）及び染色法（トリパンブルー、エリスロシン−
Ｂ、ニグロシン、クリスタルバイオレット、テトラゾリ
ウム塩の使用など）等が挙げられる。本発明の細胞接着
基材において、基材（Ｂ）に接着した変温動物由来細胞
（Ａ）の数は、基材（Ｂ）の培養単位面積当り、５０〜
５，０００万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2が好ましく、さらに好
ましくは５００〜５００万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2、特に好
ましくは５，０００〜５０万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2であ
る。すなわち、変温動物由来細胞（Ａ）の数の上限は、
５，０００万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2が好ましく、さらに好
ましくは５００万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2、特に好ましくは
５０万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2、また、この下限は５０ｃｅ
ｌｌｓ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは５００ｃ
ｅｌｌｓ／ｃｍ2、特に好ましくは５，０００ｃｅｌｌ
ｓ／ｃｍ2である。
【００４５】本発明の細胞接着基材を用いて細胞培養し
細胞を生産する方法としては、例えば、本発明の細胞接
着基材及び培地等を用いて、培地を適時交換しながら細
胞を培養する方法等が挙げられる。なお、基材（Ｂ）に
培地と変温動物由来細胞（Ａ）とを接触させて、基材
（Ｂ）の表面に変温動物由来細胞（Ａ）を接着させた
後、培地を適時交換して細胞を培養する方法等でもよ
い。本発明の細胞接着基材を用いて細胞培養し細胞を生
産する方法において、細胞培養の条件としては特に制限
はないが例えば、０〜６０℃の空気や水等の雰囲気下、
１時間〜１カ月培養する方法などが挙げられる。なお、
培地交換しながら細胞培養することが好ましく、その交
換頻度としては、１〜７日毎が好ましく、さらに好まし
くは１〜３日毎である。本発明の細胞接着基材を用いて
細胞培養し細胞を生産する方法によって得られる変温動
物由来細胞（Ａ）の数は、基材（Ｂ）の培養単位面積当
り、１００〜１億ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2が好ましく、さら
に好ましくは１，０００〜１，０００万ｃｅｌｌｓ／ｃ
ｍ2、特に好ましくは１万〜１００万ｃｅｌｌｓであ
る。すなわち、変温動物由来細胞（Ａ）の数の上限は、
１億ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは
１，０００万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2、特に好ましくは１０
０万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2、また、この下限は１００ｃｅ
ｌｌｓ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは１，００
０ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2、特に好ましくは１万ｃｅｌｌｓ
／ｃｍ2である。
【００４６】変温動物由来細胞（Ａ）と基材（Ｂ）とを
接着させる方法および本発明の細胞接着基材を用いて細
胞培養し細胞を生産する方法において、培地の使用量と
しては、使用する基材（Ｂ）の種類などによって異なる
が、基材（Ｂ）の培養単位面積当り、０．０００３〜３
００ｍＬ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは０．０
０３〜３０ｍＬ／ｃｍ2、特に好ましくは０．０３〜３
ｍＬ／ｃｍ2である。すなわち、培地の使用量の上限
は、３００ｍＬ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは
３０ｍＬ／ｃｍ2、特に好ましくは３ｍＬ／ｃｍ2、ま
た、この下限は０．０００３ｍＬ／ｃｍ2が好ましく、
さらに好ましくは０．００３ｍＬ／ｃｍ2、特に好まし
くは０．０３ｍＬ／ｃｍ2である。変温動物由来細胞
（Ａ）と基材（Ｂ）とを接着させる方法および本発明の
細胞接着基材を用いて細胞培養し細胞を生産する方法に
おいて、培養に用いられる培地としては、細胞培養に使
用される公知のものが使用でき、例えば、Ｇｒａｃｅ培
地、ＩＰＬ−４１培地、Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ培地、ＴＣ
−１００培地、Ｓｆ−９００ＩＩ培地、Ｅｘ−ｃｅｌｌ
４０５培地、Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地、Ｄｒｏｓ
ｏｐｈｉｌａ培地、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地、ハムＦ
−１２培地、ＲＰＭＩ培地、及びこれらの培地の混合物
等が挙げられる。
【００４７】これらの培地には、抗菌剤（アンホテリシ
ンＢ、ゲンタマイシン、ペニシリン及びストレプトマイ
シン等）、血清（ヒト血清、ウシ血清、ウマ血清及びヒ
ツジ血清等）等公知の添加剤を含有させることができ
る。抗菌剤を含有する場合、培地中の抗菌剤の濃度は、
培地の容量に基づいて、１ｎｇ／Ｌ〜１００ｇ／Ｌが好
ましく、さらに好ましくは１０ｎｇ／Ｌ〜１０ｇ／Ｌで
ある。すなわち、この場合、抗菌剤濃度の上限は１００
ｇ／Ｌが好ましく、さらに好ましくは１０ｇ／Ｌであ
り、同様に下限は１ｎｇ／Ｌが好ましく、さらに好まし
くは１０ｎｇ／Ｌである。
【００４８】血清は含有しない方が好ましいが、血清を
含有する場合、培地中の血清の濃度は、血清由来のウイ
ルス等による感染の危険性を下げるために、培地の全容
量に対して、１×１０-6〜５０％（ｖ／ｖ）が好まし
く、さらに好ましくは１×１０ -6〜１０％（ｖ／ｖ）で
あり、特に好ましくは１×１０-6〜２％（ｖ／ｖ）であ
る。すなわち、この場合、血清濃度の上限は５０％（ｖ
／ｖ）が好ましく、さらに好ましくは１０％（ｖ／ｖ）
であり、特に好ましくは２％（ｖ／ｖ）であり、同様に
下限は１×１０-6％（ｖ／ｖ）が好ましく、さらに好ま
しくは１×１０-6％（ｖ／ｖ）であり、特に好ましくは
１×１０-6％（ｖ／ｖ）である。
【００４９】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）及び／又は
細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）を用いることにより、
変温動物由来細胞（Ａ）、特に昆虫細胞を効率良く基材
（Ｂ）に接着させることができるため、有用蛋白質を生
産できるウイルス感染の昆虫細胞を効率良く作製するこ
とができる。このウイルスとしては、昆虫細胞に感染で
きるウイルスで有れば制限なく、バキュロウイルス等が
挙げられる｛「生物化学実験法４５組換えタンパク質生
産法、塚越規弘編著、株式会社学会出版センター発行、
２００１年」や「昆虫バイオ工場、木村滋編著、株式会
社工業調査会発行、２０００年」｝。ウイルス感染の昆
虫細胞の作製方法としては、例えば、トランスファーベ
クターに発現させたい遺伝子を組込み、昆虫感染性のウ
イルスＤＮＡとともに昆虫細胞にトランスフェクトした
後、プラークアッセイによってウイルス感染昆虫細胞を
選別する方法などが挙げられる｛「生物化学実験法４５
組換えタンパク質生産法、塚越規弘編著、株式会社学会
出版センター発行、２００１年」や「昆虫バイオ工場、
木村滋編著、株式会社工業調査会発行、２０００
年」｝。
【００５０】ウイルス感染の昆虫細胞等の変温動物由来
細胞（Ａ）が生産する有用蛋白質としては、例えば、ワ
クチン、検査・診断薬用の原料、獣医薬、畜産薬、医薬
及び殺虫剤等が挙げられる｛「生物化学実験法４５組換
えタンパク質生産法、塚越規弘編著、株式会社学会出版
センター発行、２００１年」や「昆虫バイオ工場、木村
滋編著、株式会社工業調査会発行、２０００年」｝。
【００５１】
【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるもの
ではない。
【００５２】＜実施例１＞（Ｓｆ９細胞と基材との接着
１） （１）ペプチド（Ｚ）の準備 特表平３−５０２９３５号公報中の実施例記載の方法に
準じて、Arg Gly Asp配列と（Gly Ala Gly Ala Gly Se
r）9配列（３５）とを各々約１２個有し、数平均分子量
約１０万のペプチド"ＳＬＰＦ"を遺伝子組み換え大腸菌
により製造した。
【００５３】（２）ＳＬＰＦの基材への付着 ＳＬＰＦの１ｍｇを４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液の
１ｍＬに溶解し、さらに、９９．５％の塩化ナトリウム
を０．８５重量％で含有する０．０２Ｍ，ｐＨ７．２の
リン酸緩衝液（以下、ＰＢＳ）で１００倍希釈して、Ｓ
ＬＰＦ水溶液（１０μｇ／ｍＬ）を作製した。このＳＬ
ＰＦ水溶液を２４穴のポリスチレンプレート（日本ベク
トン・ディッキンソン株式会社製）に１ｍＬ／穴で投入
し２５℃で２時間静置させた。その後残存するＳＬＰＦ
水溶液をアスピレーターで吸引除去し、さらに３ｍＬの
蒸留水で穴を３回洗浄して、ＳＬＰＦ付着量が約１μｇ
／ｃｍ2のＳＬＰＦ付着基材を作製した。
【００５４】（３）Ｓｆ９細胞（ウイルス未感染細胞）
の接着 このＳＬＰＦ付着基材の１穴当たりに１ｍＬのＳｆ−９
００ＩＩ培地（インビトロジェン株式会社製）及び２０
万ｃｅｌｌｓ分のＳｆ９細胞（インビトロジェン株式会
社製）液とを投入し２８℃で１時間静置させて、Ｓｆ９
を基材に接着させて、本発明の細胞接着基材１を得た
（Ｓｆ９の接着量：約５万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2）。
【００５５】＜実施例２＞ （Ｓｆ９細胞と基材との接着２） （１）ペプチド（Ｘ）の準備 Arg Gly Asp Ser配列（１４）を有するＦｉｂｒｏｎｅ
ｃｔｉｎ Ａｃｔｉｖｅ Ｆｒａｇｍｅｎｔ（以下、Ｆ
ＡＦ、株式会社ペプチド研究所製）をそのまま使用し
た。
【００５６】（２）ＦＡＦの基材への付着 ＦＡＦの１ｍｇをＰＢＳの１００ｍＬに溶解し、ＦＡＦ
水溶液（１０μｇ／ｍＬ）を作製した。そのＦＡＦ水溶
液を２４穴のポリスチレンプレート（日本ベクトン・デ
ィッキンソン株式会社製）に１ｍＬ／穴で投入し２５℃
で２時間静置させた。その後、残存するＦＡＦ水溶液を
アスピレーターで吸引除去し、さらに３ｍＬの蒸留水で
穴を３回洗浄して、ＦＡＦ付着量が約１μｇ／ｃｍ2の
ＦＡＦ付着基材を作製した。
【００５７】（３）Ｓｆ９細胞の接着 このＦＡＦ付着基材の１穴当たりに１ｍＬのＳｆ−９０
０ＩＩ培地（インビトロジェン株式会社製）及び２０万
ｃｅｌｌｓ分のＳｆ９細胞（インビトロジェン株式会社
製）液とを投入し２８℃で１時間静置させて、Ｓｆ９を
基材に接着させて、本発明の細胞接着基材２を得た（Ｓ
ｆ９の接着量：約４万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ 2）。
【００５８】＜実施例３＞ （Ｓｆ９細胞と基材との接着３） （１）ペプチド（Ｙ）の準備 特表平３−５０２９３５号公報中の実施例記載の方法に
準じて、（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）9配列（３５）を
約１７０個有し、数平均分子量約１０万のペプチド"Ｓ
ＬＰ４"を遺伝子組み換え大腸菌により製造した。
【００５９】（２）ＳＬＰ４の基材への付着 ＳＬＰ４の１ｍｇを４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液の
１ｍＬに溶解し、さらに、ＰＢＳで１００倍希釈し、Ｓ
ＬＰ４水溶液（１０μｇ／ｍＬ）を作製した。そのＳＬ
Ｐ４水溶液を２４穴のポリスチレンプレート（日本ベク
トン・ディッキンソン株式会社製）に１ｍＬ／穴で投入
し２５℃で２時間静置させた。 その後残存するＳＬＰ
４水溶液をアスピレーターで吸引除去し、さらに３ｍＬ
の蒸留水で穴を３回洗浄して、ＳＬＰ４付着量が約１μ
ｇ／ｃｍ2のＳＬＰ４付着基材を作製した。
【００６０】（３）Ｓｆ９細胞の接着 このＳＬＰ４付着基材の１穴当たりに１ｍＬのＳｆ−９
００ＩＩ培地（インビトロジェン株式会社製）及び２０
万ｃｅｌｌｓ分のＳｆ９細胞（インビトロジェン株式会
社製）液とを投入し２８℃で１時間静置させて、Ｓｆ９
を基材に接着させて、本発明の細胞接着基材３を得た
（Ｓｆ９の接着量：約４万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2）。
【００６１】＜実施例４＞ （ＨＩＧＨ ＦＩＶＥと基材との接着１Ｂ）実施例１の
Ｓｆ９細胞の代わりにＨＩＧＨ ＦＩＶＥ（ウイルス未
感染細胞）を使用し、Ｓｆ−９００ＩＩ培地の代わりに
Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地（インビトロジェン株式
会社製）を使用した以外は、実施例１と同様にして、本
発明の細胞接着基材１Ｂを得た（ＨＩＧＨ ＦＩＶＥの
接着量：約７万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2）。
【００６２】＜実施例５＞ （ＨＩＧＨ ＦＩＶＥと基材との接着２Ｂ）実施例２の
Ｓｆ９細胞の代わりにＨＩＧＨ ＦＩＶＥ（ウイルス未
感染細胞）を使用し、Ｓｆ−９００ＩＩ培地の代わりに
Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地（インビトロジェン株式
会社製）を使用した以外は、実施例２と同様にして、本
発明の細胞接着基材２Ｂを得た（ＨＩＧＨ ＦＩＶＥの
接着量：約５万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2）。
【００６３】＜実施例６＞ （ＨＩＧＨ ＦＩＶＥと基材との接着３Ｂ）実施例３の
Ｓｆ９細胞の代わりにＨＩＧＨ ＦＩＶＥ（ウイルス未
感染細胞）を使用し、Ｓｆ−９００ＩＩ培地の代わりに
Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地（インビトロジェン株式
会社製）を使用した以外は、実施例３と同様にして、本
発明の細胞接着基材３Ｂを得た（ＨＩＧＨ ＦＩＶＥの
接着量：約５万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2）。
【００６４】＜比較例１＞ （Ｓｆ９細胞と基材との接着４） （１）コラーゲンの準備 ウシ由来のコラーゲンタイプ１（以下、ＣＯＬ、日本ベ
クトン・ディッキンソン株式会社製、Arg Gly Asp Ser
配列（１４）を含む天然蛋白質）をそのまま使用した。
【００６５】（２）ＣＯＬの基材への付着 ＣＯＬの１ｍｇを０．０５Ｎ塩酸水溶液の１００ｍＬに
溶解し、ＣＯＬ水溶液（１０μｇ／ｍＬ）を作製した。
そのＣＯＬ水溶液を２４穴のポリスチレンプレート（日
本ベクトン・ディッキンソン株式会社製）に１ｍＬ／穴
で投入し２５℃で２時間静置させた。その後、残存する
ＣＯＬ水溶液をアスピレーターで吸引除去し、さらに３
ｍＬの蒸留水で穴を３回洗浄して、ＣＯＬ付着量が約１
μｇ／ｃｍ2のＣＯＬ付着基材を作製した。
【００６６】（３）Ｓｆ９細胞の接着 このＣＯＬ付着基材の１穴当たりに１ｍＬのＳｆ−９０
０ＩＩ培地（インビトロジェン株式会社製）及び２０万
ｃｅｌｌｓ分のＳｆ９細胞（インビトロジェン株式会社
製）液とを投入し２８℃で１時間静置させて、Ｓｆ９を
基材に接着させて、比較用の細胞接着基材４を得た（Ｓ
ｆ９の接着量：約３万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ 2）。
【００６７】＜比較例２＞ （Ｓｆ９細胞と基材との接着５） （１）フィブロインの準備 フィブロイン（以下、ＦＩＢ、和光純薬工業株式会社
製、Gly Ala Gly Ala Gly Ser配列（１２）を含む天然
蛋白質）をそのまま使用した。
【００６８】（２）ＦＩＢの基材への付着 ＦＩＢの１ｍｇを４．５Ｍ過塩素酸リチウム水溶液の１
ｍＬに溶解し、さらに、ＰＢＳで１００倍希釈し、ＦＩ
Ｂ水溶液（１０μｇ／ｍＬ）を作製した。 そのＦＩＢ
水溶液を２４穴のポリスチレンプレート（日本ベクトン
・ディッキンソン株式会社製）に１ｍＬ／穴で投入し２
５℃で２時間静置させた。その後、残存するＦＩＢ水溶
液をアスピレーターで吸引除去し、さらに３ｍＬの蒸留
水で穴を３回洗浄して、ＦＩＢ付着量が約１μｇ／ｃｍ
2のＦＩＢ付着基材を作製した。
【００６９】（３）Ｓｆ９細胞の接着 このＦＩＢ付着基材の１穴当たりに１ｍＬのＳｆ−９０
０ＩＩ培地（インビトロジェン株式会社製）及び２０万
ｃｅｌｌｓ分のＳｆ９細胞（インビトロジェン株式会社
製）液とを投入し２８℃で１時間静置させて、Ｓｆ９を
基材に接着させて、比較用の細胞接着基材５を得た（Ｓ
ｆ９の接着量：約３万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ 2）。
【００７０】＜比較例３＞ （ＨＩＧＨ ＦＩＶＥと基材との接着４Ｂ）比較例１の
Ｓｆ９細胞の代わりにＨＩＧＨ ＦＩＶＥ（ウイルス未
感染細胞）を使用し、Ｓｆ−９００ＩＩ培地の代わりに
Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地（インビトロジェン株式
会社製）を使用した以外は、比較例１と同様にして、本
発明の細胞接着基材４Ｂを得た（ＨＩＧＨ ＦＩＶＥの
接着量：約５万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2）。
【００７１】＜比較例４＞ （ＨＩＧＨ ＦＩＶＥと基材との接着５Ｂ）比較例２の
Ｓｆ９細胞の代わりにＨＩＧＨ ＦＩＶＥ（ウイルス未
感染細胞）を使用し、Ｓｆ−９００ＩＩ培地の代わりに
Ｅｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地（インビトロジェン株式
会社製）を使用した以外は、比較例２と同様にして、本
発明の細胞接着基材５Ｂを得た（ＨＩＧＨ ＦＩＶＥの
接着量：約４万ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2）。
【００７２】＜評価１Ａ＞実施例１〜３及び比較例１〜
２のＳｆ９接着基材について、Ｓｆ９の接着性を評価す
るために、これらの基材中の培地をアスピレーターで吸
引除去し、基材の１穴当たりに０．５ｍＬのＰＢＳ及び
０．１ｍＬのテトラカラーワン（商品名：生化学工業株
式会社製テトラゾリウム塩）を投入し２５℃で４時間静
置させた。なお、テトラカラーワンのテトラゾリウム塩
が細胞内ミトコンドリアのデヒドロゲナーゼにより還元
されて、ホルマザンを生成することにより発色する。そ
の後、分光光度計を用いて４５０ｎｍ（対照波長６３０
ｎｍ）の吸光度を測定し、この値を接着活性とした。こ
れらの結果を表１に示す。
【００７３】
【表１】
【００７４】＜評価１Ｂ＞実施例４〜６及び比較例３〜
４のＨＩＧＨ ＦＩＶＥ接着基材について、ＨＩＧＨ
ＦＩＶＥの接着性を評価するために、これらの基材中の
培地をアスピレーターで吸引除去し、基材の１穴当たり
に０．５ｍＬのＰＢＳ及び０．１ｍＬのテトラカラーワ
ンを投入し２５℃で４時間静置させた。その後、分光光
度計を用いて４５０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光
度を測定し、この値を接着活性とした。これらの結果を
表２に示す。
【００７５】
【表２】 表１及び２の結果から、本発明の細胞接着基材は、比較
例に比べて接着活性が極めて高いことが判る。
【００７６】＜評価２Ａ＞実施例１〜３及び比較例１〜
２のＳｆ９接着基材の細胞増殖活性を評価するために、
Ｓｆ９接着基材の１穴当たりに１ｍＬのＳｆ−９００Ｉ
Ｉ培地（インビトロジェン株式会社製）を投入し２８℃
で３日間静置させてＳｆ９を増殖させた後、培地をアス
ピレーターで吸引除去し、基材の１穴当たりに０．５ｍ
ＬのＰＢＳ及び０．１ｍＬのテトラカラーワン（生化学
工業株式会社製）を投入し２５℃で４時間静置させた。
その後、分光光度計を用いて４５０ｎｍ（対照波長６３
０ｎｍ）の吸光度を測定し、この値を増殖活性とした。
これらの結果を表３に示す。
【００７７】
【表３】
【００７８】＜評価２Ｂ＞実施例４〜６及び比較例３〜
４のＨＩＧＨ ＦＩＶＥ接着基材の細胞増殖活性を評価
するために、ＨＩＧＨ ＦＩＶＥ接着基材の１穴当たり
に１ｍＬのＥｘｐｒｅｓｓ−Ｆｉｖｅ培地（インビトロ
ジェン株式会社製）を投入し２８℃で３日間静置させて
ＨＩＧＨ ＦＩＶＥを増殖させた後、培地をアスピレー
ターで吸引除去し、基材の１穴当たりに０．５ｍＬのＰ
ＢＳ及び０．１ｍＬのテトラカラーワンを投入し２５℃
で４時間静置させた。その後、分光光度計を用いて４５
０ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度を測定し、この
値を増殖活性とした。これらの結果を表４に示す。
【００７９】
【表４】 表３及び４の結果から、本発明の細胞接着基材は、比較
例に比べて細胞増殖性が極めて高いことが判る。
【００８０】
【発明の効果】本発明の細胞接着基材は、変温動物由来
細胞（Ａ）を極めて効率良く基材に接着でき、さらに変
温動物由来細胞（Ａ）を効率良く増殖できる。すなわ
ち、本発明の細胞接着基材は、天然由来のコラーゲンや
絹蛋白質等を使用しなくても、細胞接着性が極めて高
い。従って、本発明の細胞接着基材は、プリオンやヒト
感染性のウイルス等の感染物質が含有される危険性があ
る天然由来の蛋白質等を含まないため、極めて安全性が
高い。また、極めて効率よく変温動物由来細胞を増殖さ
せることができる。
【００８１】
【配列表】 <110>三洋化成工業株式会社；SANYO CHEMICAL INDUSTRIES,LTD. <120>変温動物由来細胞の細胞接着基材 <130>P5796 <150>特願2001-351232 <151>2001-11-16 <160>45 <210>1 <211>4 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>1 Arg Glu Asp Val 1 <210>2 <211>5 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>2 Tyr Ile Gly Ser Arg 1 5 <210>3 <211>5 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>3 Pro Asp Ser Gly Arg 1 5 <210>4 <211>7 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>4 Arg Tyr Val Val Leu Pro Arg 1 5 <210>5 <211>6 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>5 Leu Gly Thr Ile Pro Gly 1 5 <210>6 <211>10 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>6 Arg Asn Ile Ala Glu Ile Ile Lys Asp Ile 1 5 10 <210>7 <211>5 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>7 Ile Lys Val Ala Val 1 5 <210>8 <211>4 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>8 Asp Gly Glu Ala 1 <210>9 <211>15 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>9 Gly Val Lys Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Trp Pro Gly Ala Pro 1 5 10 15 <210>10 <211>13 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>10 Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Lys Gly Asp Lys 1 5 10 <210>11 <211>8 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>11 Tyr Lys Leu Asn Val Asn Asp Ser 1 5 <210>12 <211>6 <212>PRT <213>Bombyx mori <400>12 Gly Ala Gly Ala Gly Ser 1 5 <210>13 <211>5 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>13 Gly Val Gly Val Pro 1 5 <210>14 <211>4 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>14 Arg Gly Asp Ser 1 <210>15 <211>5 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>15 Gly Arg Gly Asp Ser 1 5 <210>16 <211>6 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>16 Gly Arg Gly Asp Ser Pro 1 5 <210>17 <211>10 <212>PRT <213>Homo sapiens <400>17 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro 1 5 10 <210>18 <211>12 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>18 Ala Val Thr Gly Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ala 1 5 10 <210>19 <211>14 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>19 Pro Gly Ala Ser Ile Lys Val Ala Val Ser Ala Gly Pro Ser 1 5 10 <210>20 <211>19 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>20 Cys Ser Arg Ala Arg Lys Gln Ala Ala Ser Ile Lys Val Ala Val Ser 1 5 10 15 Ala Asp Arg <210>21 <211>12 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>21 Val Cys Glu Pro Gly Tyr Ile Gly Ser Arg Cys Asp 1 5 10 <210>22 <211>16 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>22 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser 1 5 10 15 <210>23 <211>32 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>23 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser 1 5 10 15 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser 20 25 30 <210>24 <211>64 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>24 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser 1 5 10 15 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser 20 25 30 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser 35 40 45 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser Arg Gly Asp Ser 50 55 60 <210>25 <211>40 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>25 Gly Arg Gly Asp Ser Gly Arg Gly Asp Ser Gly Arg Gly Asp Ser Gly 1 5 10 15 Arg Gly Asp Ser Gly Arg Gly Asp Ser Gly Arg Gly Asp Ser Gly Arg 20 25 30 Gly Asp Ser Gly Arg Gly Asp Ser 35 40 <210>26 <211>48 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>26 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Gly Arg Gly Asp Ser Pro Gly Arg Gly Asp 1 5 10 15 Ser Pro Gly Arg Gly Asp Ser Pro Gly Arg Gly Asp Ser Pro Gly Arg 20 25 30 Gly Asp Ser Pro Gly Arg Gly Asp Ser Pro Gly Arg Gly Asp Ser Pro 35 40 45 <210>27 <211>40 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>27 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Arg Gly Asp Ser Pro Ala 1 5 10 15 Ser Ser Lys Pro Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro Arg Gly 20 25 30 Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro 35 40 <210>28 <211>48 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>28 Ala Val Thr Gly Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ala Val Thr Gly 1 5 10 15 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ala Val Thr Gly Arg Gly Asp Ser 20 25 30 Pro Ala Ser Ala Ala Val Thr Gly Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ala 35 40 45 <210>29 <211>56 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>29 Pro Gly Ala Ser Ile Lys Val Ala Val Ser Ala Gly Pro Ser Pro Gly 1 5 10 15 Ala Ser Ile Lys Val Ala Val Ser Ala Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser 20 25 30 Ile Lys Val Ala Val Ser Ala Gly Pro Ser Pro Gly Ala Ser Ile Lys 35 40 45 Val Ala Val Ser Ala Gly Pro Ser 50 55 <210>30 <211>76 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>30 Cys Ser Arg Ala Arg Lys Gln Ala Ala Ser Ile Lys Val Ala Val Ser 1 5 10 15 Ala Asp Arg Cys Ser Arg Ala Arg Lys Gln Ala Ala Ser Ile Lys Val 20 25 30 Ala Val Ser Ala Asp Arg Cys Ser Arg Ala Arg Lys Gln Ala Ala Ser 35 40 45 Ile Lys Val Ala Val Ser Ala Asp Arg Cys Ser Arg Ala Arg Lys Gln 50 55 60 Ala Ala Ser Ile Lys Val Ala Val Ser Ala Asp Arg 65 70 75 <210>31 <211>48 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>31 Val Cys Glu Pro Gly Tyr Ile Gly Ser Arg Cys Asp Val Cys Glu Pro 1 5 10 15 Gly Tyr Ile Gly Ser Arg Cys Asp Val Cys Glu Pro Gly Tyr Ile Gly 20 25 30 Ser Arg Cys Asp Val Cys Glu Pro Gly Tyr Ile Gly Ser Arg Cys Asp 35 40 45 <210>32 <211>9 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>32 Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly 1 5 <210>33 <211>15 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>33 Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln 1 5 10 15 <210>34 <211>15 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>34 Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro 1 5 10 15 <210>35 <211>54 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>35 Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser 35 40 45 Gly Ala Gly Ala Gly Ser 50 <210>36 <211>5 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>36 Gly Ala Ala Gly Tyr 1 5 <210>37 <211>40 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>37 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 1 5 10 15 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 20 25 30 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 35 40 <210>38 <211>48 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>38 Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser 35 40 45 <210>39 <211>60 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>39 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 1 5 10 15 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 20 25 30 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 35 40 45 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 50 55 60 <210>40 <211>80 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>40 Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly 1 5 10 15 Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val 20 25 30 Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly 35 40 45 Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val 50 55 60 Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro 65 70 75 80 <210>41 <211>36 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>41 Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Gly Ser 35 <210>42 <211>24 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>42 Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser 20 <210>43 <211>15 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>43 Gly Ala Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro 1 5 10 15 <210>44 <211>72 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>44 Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala 1 5 10 15 Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala 20 25 30 Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser 35 40 45 Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala 50 55 60 Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser 65 70 <210>45 <211>30 <212>PRT <213>Artificial Sequence <400>45 Gly Ala Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly 1 5 10 15 Ala Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro 20 25 30
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B029 AA08 AA21 BB11 CC02 CC08 GA03 GB04 GB05 4B033 NA01 NA02 NA16 NB01 NB12 NB13 NB57 NC04 ND02 NE02 NF06 4B064 AG01 CA10 CA19 CC24 DA20 4B065 AA90X AB01 AC14 BA01 CA24

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）及び／又は
    細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）を用いて、変温動物由
    来細胞（Ａ）及び基材（Ｂ）を接着させてなることを特
    徴とする細胞接着基材。
  2. 【請求項２】 細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）を必須構
    成成分として用いてなり、（Ｘ）の細胞接着シグナルを
    現わす最小アミノ酸配列（ｓｈ）が、アミノ酸３文字表
    記で表わされる、Arg Gly Asp配列、Leu Asp Val配列、
    Arg Glu AspVal配列（１）、Tyr Ile Gly Ser Arg配列
    （２）、Pro Asp Ser Gly Arg配列（３）、Arg Tyr Val
    Val Leu Pro Arg配列（４）、Leu Gly Thr Ile Pro Gl
    y配列（５）、Arg Asn Ile Ala Glu Ile Ile Lys Asp I
    le配列（６）、Ile Lys Val Ala Val配列（７）、Leu A
    rg Glu配列、Asp Gly Glu Ala 配列（８）、Gly Val Ly
    s Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Trp Pro Gly Ala Pro
    配列（９）、Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Ly
    s Gly Asp Lys（１０）、His Ala Val配列及びTyr Lys
    Leu Asn Val Asn Asp Ser配列（１１）からなる群より
    選ばれる少なくとも１種の配列である請求項１記載の細
    胞接着基材。
  3. 【請求項３】 細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）を必須
    構成成分として用いてなり、（Ｙ）のアミノ酸配列が、
    アミノ酸３文字表記で表わされる、Gly AlaGly Ala Gly
    Ser（１２）及び／又はGly Val Gly Val Pro（１３）
    である請求項１又は２記載の細胞接着基材。
  4. 【請求項４】 変温動物由来細胞（Ａ）が昆虫細胞であ
    る請求項１〜３のいずれかに記載の細胞接着基材。
  5. 【請求項５】 細胞接着性人工ペプチド（Ｘ）及び／又
    は細胞接着補助人工ペプチド（Ｙ）を用いて、変温動物
    由来細胞（Ａ）と基材（Ｂ）とを接着させることを特徴
    とする細胞接着基材の生産方法。
  6. 【請求項６】 請求項４に記載の細胞接着基材を用いて
    細胞培養することを特徴とするウイルス感染昆虫細胞の
    生産方法。
  7. 【請求項７】 請求項６記載の生産方法で生産されるウ
    イルス感染昆虫細胞を用いることを特徴とする有用蛋白
    質の生産方法。
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