JP2003286168A

JP2003286168A - α−リポイルアミノ酸を含有する皮膚外用剤

Info

Publication number: JP2003286168A
Application number: JP2002090780A
Authority: JP
Inventors: Kazumi Ogata; 一美緒方; Kazuhiko Ito; 和彦伊藤; Yukihiro Sakagami; 享宏阪上
Original assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Senju Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2002-03-28
Filing date: 2002-03-28
Publication date: 2003-10-07

Abstract

(57)【要約】【課題】美肌剤、抗シワ剤、美白剤、皮膚のしみ、そば
かす、日焼けの予防・治療薬として有用なエラスターゼ
阻害作用およびメラニン産生抑制作用を有する皮膚外用
剤を提供する。【解決手段】次の式（I）【化１】（式中、ＡはＮ結合したアミノ酸残基を示す。）で表さ
れるＮ−α−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許
容できる塩を含有する皮膚外用剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、Ｎ−α−リポイル
アミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含有する
皮膚外用剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】α−リポ酸（別名：チオクト酸または
６,８−ジチオオクタン酸）はミトコンドリアに存在す
る補酵素で、抗酸化能を有し、酸化ストレスによる種々
の病態の治療、たとえば動脈硬化症および白内障の治療
薬として注目されている。また、その還元型のジメルカ
プトオクタン酸は酸化型のグルタチオンやビタミンCな
どを還元再生させる作用がある。

【０００３】α−リポ酸誘導体として、α−リポ酸にグ
リシン、メチオニン、グルタミン酸、バリンなどがそれ
ぞれ結合したα−リポイルアミノ酸が知られている（特
公昭42-1286号, 対応米国特許No. 3,238,224）。また、
特開2000-169371号公報にはα−リポイルアミノエチル
スルホン酸のイミダゾール塩が記載され、グルタチオン
還元酵素活性増強剤としての用途が記載されている。

【０００４】上記のような状況下、本発明者らは種々検
討を重ねた結果、Ｎ−α−リポイルアミノ酸がエラスタ
ーゼ阻害作用を有すること、さらにメラニン産生抑制作
用を有することを見出し、この新知見に基づき、さらに
研究を進めて本発明を完成させた。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、Ｎ−α−リ
ポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩を含
有するエラスターゼ阻害作用およびメラニン産生抑制作
用を有する皮膚外用剤を提供する。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、(1)次の式
（I）

【０００７】

【化２】

【０００８】（式中、AはN結合したアミノ酸残基）で表
されるＮ−α−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に
許容できる塩（以下本化合物という。）を含有する皮膚
外用剤、(2)Ｎ−α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポ
イル−α−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−β−アミノ
酸、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ酸、Ｎ−α−リポイ
ル−δ−アミノ酸およびＮ−α−リポイル−ε−アミノ
酸からなる群から選ばれるものである、上記(1)記載の
皮膚外用剤、(3)Ｎ−α−リポイルアミノ酸がＮ−α−
リポイルアミノエタンスルホン酸、Ｎ−α−リポイルア
スパラギン酸、Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン
酸、Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン、Ｎ−α−リポ
イルアントラニル酸、Ｎ−α−リポイルメチオニンおよ
びＮ−α−リポイルシステインからなる群から選ばれる
ものである、上記(1)記載の皮膚外用剤、(4)エラスター
ゼ阻害効果を有する上記(1)〜(3)のいずれかに記載の皮
膚外用剤、(5)さらにメラニン産生抑制効果を有する上
記(4)記載の皮膚外用剤、(6)美肌用である上記(1)〜(5)
のいずれかに記載の皮膚外用剤、(7)抗シワ用である上
記(1)〜(5)のいずれかに記載の皮膚外用剤、(8)美白用
でもある上記(7)に記載の皮膚外用剤、(9)皮膚のしみ、
そばかすまたは日焼けの予防・治療用である上記(8)記
載の皮膚外用剤、および(10)皮膚外用剤が化粧料である
上記(1)〜(9)のいずれかに記載の皮膚外用剤に関する。

【０００９】弾性線維は結合組織線維の一種で、ゴムの
ような弾力性を持ち張力により容易に伸展し、張力が去
るともとの長さにもどる性質を有する。この弾性線維
は、常態において張力が働いている例えば皮膚等の組織
に多く存在する。弾性線維の主成分であるエラスチンは
正常の長さの２倍程度まで可逆的に伸展できる弾力性に
富むタンパクである。エラスチンは安定な物質である
が、持続的に溶解と合成が行われ、老化により弾性線維
の減少や断裂がおこり、弾力性が低下する。これはエラ
スチンの溶解が合成を上回るためと考えられている。エ
ラスチンの溶解はエラスターゼの作用によるので、皮膚
のエラスターゼを阻害することにより、皮膚の伸展性、
弾力を維持できる。従って、エラスターゼを阻害する化
合物は美肌の維持や老化などによるシワの予防・改善に
有用である。後記の試験例から明らかなように、本化合
物はエラスターゼ阻害活性を有する。

【００１０】さらに、メラニンはチロシンから合成され
るフェノール類の酵素的ならびに非酵素的酸化、脱炭
酸、カップリング反応によって生合成される褐色ないし
黒色の色素である。皮膚や髪などに広く分布し、過剰の
光を吸収する役割を果たしていると考えられている。皮
膚におけるメラニンの産生はメラノサイトで行われ、メ
ラニン産生量が多いと皮膚の褐色の程度が進む。従っ
て、皮膚のメラニン産生を抑制する化合物は、美白の維
持や皮膚のしみ、そばかす、日焼けの予防・治療に有用
である。後記の試験例から明らかなように、本化合物は
メラニン産生抑制作用をも有している。

【００１１】このように、本化合物はエラスターゼ阻害
作用に加えてメラニン産生抑制作用を有するという特長
がある。

【００１２】従って、本化合物はエラスターゼ阻害活性
に基づく美肌の維持、シワの予防・改善に有用であり、
さらに、メラニン産生も抑制することから美白の効果が
期待できるとともに、皮膚のしみ、そばかす、日焼けの
予防・治療にも有用である。

【００１３】本化合物はα−リポ酸とアミノ酸がアミド
結合した構造を有している。本発明において、アミノ酸
とは同一分子内にカルボキシル基とアミノ基を有する、
いわゆるα−アミノ酸、β−アミノ酸、γ−アミノ酸、
δ−アミノ酸、ε−アミノ酸、並びにアミノメチルシク
ロヘキサンカルボン酸およびアントラニル酸、並びに同
一分子内にスルホン酸基とアミノ基を有するアミノエタ
ンスルホン酸（タウリン）をいう。α−アミノ酸として
は、たとえばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、
イソロイシン、セリン、トレオニン、チロシン、システ
イン、メチオニン、アスパラギン酸、アスパラギン、グ
ルタミン酸、グルタミン、アルギニン、リジン、ヒスチ
ジン、フェニルアラニン、トリプトファンなどが挙げら
れ、β−アミノ酸としてはβ−アラニンが挙げられ、γ
−アミノ酸としてはγ−アミノ−ｎ−酪酸（GABA）やカ
ルニチンが挙げられ、δ−アミノ酸としては５−アミノ
レブリン酸や５−アミノ吉草酸、ε−アミノ酸としては
６−アミノヘキサン酸が挙げられる。これらアミノ酸の
うち、６−アミノヘキサン酸、フェニルアラニン、アン
トラニル酸、アスパラギン酸、システインが好ましい
が、特に６−アミノヘキサン酸、フェニルアラニンが好
ましい。

【００１４】本化合物の薬理学的に許容できる塩として
は、ナトリウム塩やカリウム塩などのアルカリ金属塩お
よびカルシウム塩やマグネシウム塩などのアルカリ土類
金属塩が挙げられるが、これら以外の塩であっても薬理
学的に許容できる塩であればいずれのものであっても本
発明の目的のため適宜に用いることができる。

【００１５】さらに、これらの1水和物、2水和物、1/2
水和物、1/3水和物、1/4水和物、2/3水和物、3/2水和
物、6/5水和物も本化合物に含まれる。

【００１６】α−リポイルアミノ酸の合成法としては、
アミノ酸の酸性基のカルボン酸を保護基としてエステル
化し、α−リポ酸と脱水縮合剤で酸アミドとし、最後に
ケン化するのが一般的である。

【００１７】本発明の皮膚外用剤に含有されるα−リポ
イルアミノ酸は自体公知の方法により製造することがで
きるが、混合酸無水物法（MA法）により合成すると目的
化合物のα−リポイルアミノ酸を効率的かつ高収率で得
ることができる。すなわち、本化合物は、次の合成法に
より、またはこれに準じて適宜合成することができる。

【００１８】

【化３】

【００１９】（式中のAは前記と同義である。）

【００２０】α−リポ酸を有機溶媒（たとえばクロロホ
ルム、テトラヒドロフラン、アセトニトリルなど）に溶
かし、これに３級アミン（トリエチルアミン、トリブチ
ルアミンやＮ−メチルモルホリン（NMM）など）の存在
下−15℃〜−5℃でハロゲン化炭酸エステル（クロル炭
酸エチル、クロル炭酸ブチルなど）、イソブチルオキシ
カルボニルクロリド、塩化ジエチルアセチルまたは塩化
トリメチルアセチルなどの混合酸無水物化試薬を反応さ
せてα−リポ酸の混合酸無水物とする。反応時間は1〜2
分から数10分程度である。さらにアミノ酸を塩基（水酸
化ナトリウム、水酸化カリウムやトリエチルアミン、ト
リブチルアミンなどの３級アミン）存在下でアルコー
ル、水またはそれらの混液などの溶媒に溶かしたものを
加えて反応させた後、適当な溶媒、たとえば水またはア
ルコールから再結晶させると、高収率で本化合物のα−
リポイルアミノ酸を得る。

【００２１】本発明の皮膚外用剤は美肌、抗シワ、美白
並びに皮膚のしみ、そばかす、日焼けの予防・治療を目
的として、クリーム剤、軟膏剤、パウダー、ローション
剤などとして適宜用いることができ、また美肌、抗シ
ワ、美白などの化粧料として、化粧水、化粧用クリー
ム、化粧用ローション、パック剤などとしても用いるこ
とができる。また、本化合物を本発明の皮膚外用剤に配
合させるときは、通常皮膚外用剤に用いられる成分、た
とえば賦形剤、安定化剤、顔料、香料、紫外線吸収剤、
酸化防止剤、防腐剤、金属封鎖剤、有機酸などを適宜配
合してもよい。

【００２２】本発明の皮膚外用剤に含有される本化合物
は、その化合物の種類、配合しようとする皮膚外用剤の
種類や配合目的などによっても異なるが、通常約0.001
〜5(w/w)%、好ましくは約0.005〜2(w/w)%程度配合する
のがよい。

【００２３】本発明の皮膚外用剤には、目的と必要に応
じて、本化合物のうち１種または２種以上を適宜組み合
わせて含有させることもできる。

【００２４】

【実施例】次に、参考例、試験例および製剤実施例を挙
げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲は
これらに限定されない。

【００２５】参考例１Ｎ−α−リポイルアミノエタン
スルホン酸ナトリウム DL−α−リポ酸6.2gをクロロホルム60mlに溶かし、トリ
エチルアミン3.2gを加えて−5℃に冷却して置き、これ
にクロル炭酸エチル3.3gを徐々に滴下し、滴下終了15分
後にこれにアミノエタンスルホン酸4.5gおよび水酸化ナ
トリウム1.5gをメタノール60mlに溶かしたものを一挙に
加えて、その温度で15分間、さらに室温に戻して1時間
攪拌した。次に、これに水酸化ナトリウム1.5gをメタノ
ール50mlに溶かした溶液を加えて、減圧下で溶媒を1/3
になるまで濃縮させ、これにエタノール60mlを加えて析
出した結晶を濾取した。これを水−メタノールから再結
晶させて、目的化合物のナトリウム塩の白色結晶5.8gを
得た。融点235〜237℃。TLC、Rf＝0.53（ｎ−ブタノー
ル：酢酸：水＝4:1:2）元素分析： C₁₀H₁₇NO₄S₃Na・H₂Oとして理論値： C，34.08 H，5.43 N，3.97 実測値： C，34.23 H，5.54 N，3.80

【００２６】参考例２Ｎ−α−リポイルアミノエタン
スルホン酸カリウム参考例１の水酸化ナトリウムを水酸化カリウム4.0gに代
えて参考例１と同様に反応処理してこれを水/メタノー
ルから再結晶させて、目的化合物のカリウム塩の白色結
晶6.5gを得た。融点240〜242℃。

【００２７】参考例３Ｎ−α−リポイルアミノエタン
スルホン酸カルシウムおよびマグネシウム参考例１で得られたナトリウム塩を水に溶かし、スルホ
ン酸樹脂で脱塩して遊離酸として、これらに炭酸カルシ
ウムまたは塩基性炭酸マグネシウムで、それぞれ中和さ
せて、それぞれ水溶性のカルシウム塩またはマグネシウ
ム塩を得た。それぞれ融点300℃以上。

【００２８】参考例４Ｎ−α−リポイル−６−アミノ
ヘキサン酸ナトリウム DL−α−リポ酸4.2gおよび６−アミノヘキサン酸3.0gを
用いて、参考例１と同様に反応させエタノールから再結
晶させて、目的化合物の黄色がかった白色結晶3.0gを得
た。融点200〜202℃（分解）。TLC、Rf=0.84（クロロホ
ルム：メタノール：水＝5:4:1)

【００２９】参考例５Ｎ−α−リポイルアスパラギン
酸ジナトリウム DL−α−リポ酸4.2gおよびL−アスパラギン酸2.9gを用
いて、参考例１と同様に反応処理して、水/メタノール
から再結晶させて、目的化合物の白色結晶4.5gを得た。
融点300℃以上。TLC、Rf=0.47（クロロホルム：メタノ
ール：水＝4:1:2）

【００３０】参考例６Ｎ−α−リポイルフェニルアラ
ニン DL−α−リポ酸4.2gおよびL−フェニルアラニン3.5gを
用いて、参考例１と同様に反応させ、溶媒を留去した
後、塩酸酸性として酢酸エチルで抽出し、水洗後、酢酸
エチルを留去した。残渣結晶をエタノール/イソプロピ
ルエーテルから再結晶させて、淡黄色結晶5.4gを得た。
融点154℃〜156℃。TLC、Rf=0.86（ｎ−ブタノール：酢
酸：水＝4:1:2）。

【００３１】参考例７Ｎ−α−リポイルアントラニル
酸ナトリウム DL−α−リポ酸4.2gおよびアントラニル酸2.9gを用い
て、参考例１と同様にして白色結晶3.6gを得た。融点30
0℃以上。TLC、Rf=0.89（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝
4:1:2）。

【００３２】参考例８Ｎ−α−リポイルメチオニン DL−α−リポ酸4.2gおよびL−メチオニン3.5gを用い
て、参考例8と同様にして淡黄色結晶4.0gを得た。融点1
08℃〜109℃。TLC、Rf=0.81（ｎ−ブタノール：酢酸：
水＝4:1:2）。

【００３３】参考例９Ｎ−α−リポイルシステインナ
トリウム DL−α−リポ酸4.2gおよびトリエチルアミン2.2gをテト
ラハイドロフラン60mlに溶かして−5℃に冷却して置
き、攪拌下、これにクロル炭酸エチル2.3gを徐々に滴下
し、滴下終了後、さらに6分後にL−システイン2.6gおよ
びトリエチルアミン2.5gを水20mlに溶かした溶液を加え
て、参考例1と同様に反応させた後、塩酸酸性として酢
酸エチルで抽出し水洗後、酢酸エチルを留去し残渣をエ
タノールに溶かし、これに水酸化ナトリウム/メタノー
ル溶液を徐々に加えてpH7として析出する白色結晶4.3g
を得た。融点150℃付近から徐々に分解。TLC、Rf=0.72
（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝4:1:2）。また、N−エチ
ルマレイン酸イミドを添加したものはRf=0.69を示し
た。

【００３４】試験例１本化合物のエラスターゼ阻害作
用本化合物のエラスターゼ阻害作用について試験した。

【００３５】試験方法 96穴のプレートを用いて行った。N-Methoxysuccinyl-L-
Alanyl-L-Alanyl-L-Prolyl-L-Valine-4-Methyl-Coumary
l-7-Amide 1mM 、検体30μl、 Tris-NaCl Buffer(25℃,
pH7.5) 210μlおよびヒト白血球由来Elastase（Elastin
Products Co.,Inc.製） 1 unit/ml 30μlを加えて１
分ごとに蛍光(Ex.360/40nm Em.460/40nm)を測定し、エ
ラスターゼ阻害率を7-Amino-4-Methyl-Coumarin標準品
による検量線より求めた。陽性対照としてElastinal
（（株）ペプチド研究所）を用いた。その結果を表１に
示す。

【００３６】

【表１】

【００３７】表１より明らかなように、Ｎ−α−リポイ
ル−６−アミノヘキサン酸Na、Ｎ−α−リポイルフェニ
ルアラニン、Ｎ−α−リポイルアントラニル酸Na、Ｎ−
α−リポイルアスパラギン酸NaおよびＮ−α−リポイル
システインNaに強いエラスターゼ阻害活性が認められ
た。Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸Naおよび
Ｎ−α−リポイルアントラニル酸Naは陽性対照であるEl
astinalよりも強いエラスターゼ阻害作用が認められ
た。一方、α−リポ酸にはほとんどエラスターゼ阻害作
用は認められなかった。本結果から本化合物は美肌およ
びシワの予防・改善に有用であることがわかった。

【００３８】試験例２本化合物のメラニン産生抑制作
用本化合物のメラニン産生抑制作用を試験した。

【００３９】試験方法大日本製薬より購入のマウス由来B16-F0メラノーマ細胞
株を実験に用いた。60mmのシャーレに20万個の細胞を藩
種し、糖合成阻害剤であるD-Glucosamine Hydrochlorid
e を0.1%加えた培地(D-MEM^＊+10%FBS^＊)で５日間培養
し、メラニン合成を停止させ白色化した。５日間培養後
に細胞をPBS(-)^＊で洗浄してD-Glucosamine Hydrochlor
ideを除去した後、phosphodiesterase阻害剤であるTheo
phylline 2mM(250倍濃縮液/蒸留水)を加えて細胞内cAMP
を増加させることによりチロシナーゼの生合成の回復を
促進した。これと同時に試験物質(250倍濃縮液/PBS(-))
を添加した。Theophyllineおよび試験物質添加３日後に
細胞をトリプシンにより回収した。細胞ペレットを1ml
のPBS(-)に懸濁させ、このうち0.1mlを細胞数計測に、
残りの0.9mlをメラニン量測定に用いた。メラニン量の
測定は細胞ペレットを5%トリクロロ酢酸、エタノール/
ジエチルエーテル(3:1)、ジエチルエーテルで一回ずつ
洗浄し風乾した後、2N NaOH 1mlを加えて溶解させ、420
nmにおける吸光度を測定してメラニン量を標準品による
検量線より求めた。

【００４０】*（注） D-MEW: Dulbecco's Modified EAGLE MEDIUM "Nissui"
(ダルベッコ変法イーグル培地“ニッスイ”) FBS: Fetal Bovine Serum Certified, Origin: United
States（非働化ウシ胎児血清） PBS(-)：Dulbecco's PBS(-)"Nissui"(ダルベッコPBS(-)
“ニッスイ”)

【００４１】その結果を表２に示す。

【００４２】

【表２】

【００４３】表２から明らかなように、Ｎ−α−リポイ
ルアミノエタンスルホン酸Na、Ｎ−α−リポイルアミノ
ヘキサン酸Na、Ｎ−α−リポイルフェニルアラニンに強
いメラニン産生抑制作用が認められた。一方、リポ酸に
も強いメラニン産生抑制作用が認められた。本化合物の
α−リポイルアミノ酸の方が従来から美白剤として使用
されているアルブチン、コウジ酸よりメラニン産生抑制
作用が強いことが分かった。

【００４４】製剤実施例１クリーム剤参考例4, 5, 6, 7または9の化合物 0.5g ステアリン酸 2.0g ステアリルアルコール 7.0g スクワラン 5.0g オクチルデカノール 6.0g ポリオキシエチレンセチルエーテル 3.0g グリセリンモノステアレート 2.0g プロピレングリコール 5.0g ｐ−オキシ安息香酸メチル 0.2g ｐ−オキシ安息香酸プロピル 0.1g 滅菌精製水 73.7g 以上の成分を混和してクリーム剤とする。

【００４５】製剤実施例２化粧水参考例１の化合物 0.5g リン酸二水素ナトリウム 0.2g グリセリン 3.0g 亜硫酸水素ナトリウム 0.1g ｐ−オキシ安息香酸メチル 0.05g ｐ−オキシ安息香酸プロピル 0.03g 水酸化ナトリウム適量精製水全量100ml pH5.5

【００４６】

【発明の効果】本化合物のＮ−α−リポイルアミノ酸ま
たはそれらの薬理学的に許容できる塩はエラスターゼ阻
害作用およびメラニン産生抑制作用を有しているので、
美肌剤、抗シワ剤、美白剤、皮膚のしみ、そばかす、日
焼けの予防・治療薬などとして有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 17/00 17/16 17/16 43/00 １１１ 43/00 １１１Ｃ０７Ｄ 339/04 Ｃ０７Ｄ 339/04 Ｆターム(参考） 4C023 MA03 4C083 AB032 AB352 AC022 AC072 AC122 AC182 AC242 AC392 AC482 AC861 AC862 AC892 CC04 CC05 CC19 DD23 DD27 DD33 EE12 EE16 EE17 FF05 4C086 AA01 BB04 MA01 MA04 MA63 NA14 ZA89 ZC20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の式（I）【化１】（式中、AはN結合したアミノ酸残基）で表されるＮ−α
−リポイルアミノ酸またはその薬理学的に許容できる塩
を含有する皮膚外用剤。
【請求項２】Ｎ−α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポ
イル−α−アミノ酸、Ｎ−α−リポイル−β−アミノ
酸、Ｎ−α−リポイル−γ−アミノ酸、Ｎ−α−リポイ
ル−δ−アミノ酸およびＮ−α−リポイル−ε−アミノ
酸からなる群から選ばれるものである、請求項１記載の
皮膚外用剤。
【請求項３】Ｎ−α−リポイルアミノ酸がＮ−α−リポ
イルアミノエタンスルホン酸、Ｎ−α−リポイルアスパ
ラギン酸、Ｎ−α−リポイル−６−アミノヘキサン酸、
Ｎ−α−リポイルフェニルアラニン、Ｎ−α−リポイル
アントラニル酸、Ｎ−α−リポイルメチオニンおよびＮ
−α−リポイルシステインからなる群から選ばれるもの
である、請求項１記載の皮膚外用剤。
【請求項４】エラスターゼ阻害効果を有する請求項１〜
３のいずれかに記載の皮膚外用剤。
【請求項５】さらにメラニン産生抑制効果を有する請求
項４記載の皮膚外用剤。
【請求項６】美肌用である請求項１〜５のいずれかに記
載の皮膚外用剤。
【請求項７】抗シワ用である請求項１〜５のいずれかに
記載の皮膚外用剤。
【請求項８】美白用でもある請求項７に記載の皮膚外用
剤。
【請求項９】皮膚のしみ、そばかすまたは日焼けの予防
・治療用である請求項８記載の皮膚外用剤。
【請求項１０】皮膚外用剤が化粧料である請求項１〜９
のいずれかに記載の皮膚外用剤。