JP2003116584A - 癌の予防・治療剤および診断剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 癌細胞に特異的に発現している分子をターゲ
ットとした抗癌剤および抗転移剤の開発。 【解決手段】 乳癌組織など、いくつかの癌組織で、特
異的に発現しているＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１をターゲ
ットとした医薬が、抗癌剤、抗転移剤、診断剤および検
査薬として好適である。 【効果】 本発明により、癌の予防治療剤、転移抑制剤
または転移予防剤として有用な化合物を得ることができ
る。また、本発明で用いるＤＮＡを用いることにより、
癌およびその転移を診断または検査することが可能であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、癌の予防・治療
剤、転移抑制剤、転移予防剤、診断剤などに関する。

【０００２】

【従来の技術】ＣＢＦＡ１（Ｃｏｒｅ−Ｂｉｎｄｉｎｇ
Ｆａｃｔｏｒ Ａｌｐｈａ ｓｕｂｕｎｉｔ １）は、Ｒ
ｕｎｔドメインを持つ転写因子であり、ＰＥＢＰ２α
１、ＡＭＬ３、ＯＳＦ２、Ｔｉｌ−１およびＲｕｎｘ２
とも呼ばれている。マウスＰＥＢＰ２α１のｃＤＮＡの
塩基配列（Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90巻, 6859-6
863頁，1993年)、ヒトＡＭＬ３のｃＤＮＡの塩基配列
（Genomics, 23巻，425-432頁，1994年）、マウスＯＳ
Ｆ２のｃＤＮＡの塩基配列（Cell，89巻，747-754頁，1
997年)、およびマウスＴｉｌ−１のｃＤＮＡの塩基配列
（Proc. Natl. Acad.Sci. USA，94巻，8464-8651頁，19
97年）は既に報告されている。ＣＢＦＡ１のノックアウ
トマウスの研究およびヒトの研究より、ＣＢＦＡ１は骨
形成に必須の転写因子であることが明らかにされてい
る。ＣＢＦＡ１はＤＮＡ結合能を持つ転写因子であり、
ＣＢＦＢ（Ｃｏｒｅ−Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ Ｂ
ｅｔａ ｓｕｂｕｎｉｔ）などと結合し、転写を促進す
ることが知られている。また、ＣＢＦＡ１には、多くの
スプライシングバリアント（アイソフォームと記載する
こともある）が存在する。Enomotoら（J. Biol. Chem.,
275巻，8695-8702頁，2000年）は、エクソン２から始
まるマウスｃＤＮＡのスプライシングバリアント（ＰＥ
ＢＰ２α１／ＡＭＬ３）を、ＴｙｐｅＩ ＣＢＦＡ、エ
クソン１から始まるスプライシングバリアント（ＯＳＦ
２／Ｔｉｌ１）を、ＴｙｐｅＩＩＣＢＦＡ１とそれぞれ
呼んでいる。Mundlosら（Cell，89巻，773-779頁，1997
年等）は、同様のスプライシングバリアントがヒトでも
存在することを報告し、マウスのエクソン１および２に
相当するものを、それぞれエクソン０および１と呼称し
ている。これらはいずれも翻訳開始エクソンの違いに着
目した呼び名であり、以下の翻訳終止コドンを含むエク
ソンまでは共通の構造を保有している。本明細書におい
ては、Mundlosらの呼称に従い、ヒト、マウスなどの種
にかかわらず、エクソン１から始まるＣＢＦＡ１をＴｙ
ｐｅＩ ＣＢＦＡ１と、エクソン０（配列番号：１）か
ら始まるＣＢＦＡ１をＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１と統一
して呼ぶ。一方、ＣＢＦＡ１は、２種の癌細胞株で発現
していることが報告されている（Mol. Cell Biol. Res.
Com., 3巻，218-223頁，2000年）が、この論文中で使
用されているＣＢＦＡ１発現確認用のＰＣＲプライマー
では、ＴｙｐｅＩ ＣＢＦＡ１とＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦ
Ａ１を識別できず、どのアイソフォームの発現かが区別
できない。また、系統化された細胞株での発現が、実際
の癌組織に反映されるかといった疑問も残されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従来の抗癌剤（例、フ
ルオロウラシルなど）は、癌細胞以外の細胞にも作用
し、毒性を示すものが数多いことより、癌細胞に特異的
に発現している分子をターゲットとした抗癌剤および抗
転移剤の開発が、毒性および副作用の回避の面から切望
されている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するために鋭意検討を重ねた結果、乳癌組織など、
いくつかの癌組織で、特異的にＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ
１の発現亢進が起こっていることを見出し、ＴｙｐｅＩ
Ｉ ＣＢＦＡ１をターゲットとした医薬が、抗癌剤、抗
転移剤、診断剤および検査薬として好適であると考え、
さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。

【０００５】すなわち、本発明は、（１） 配列番号：
１で表される塩基配列と同一もしくは実質的に同一の塩
基配列を含有するＤＮＡを用いることを特徴とする前記
ＤＮＡを含有する遺伝子の発現を抑制する化合物または
その塩のスクリーニング方法、（２） 配列番号：２で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩を産生す
る能力を有する細胞を、試験化合物存在下および非存在
下に培養し、試験化合物存在下および非存在下のそれぞ
れの場合の前記タンパク質量または前記タンパク質をコ
ードするｍＲＮＡ量を測定することを特徴とする上記
（１）記載のスクリーニング方法、（３） 配列番号：
２で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩を産
生する能力を有する細胞が、配列番号：１で表される塩
基配列と同一もしくは実質的に同一の塩基配列を含有す
るＤＮＡを含有する組換えベクターで形質転換された形
質転換体である上記（２）記載のスクリーニング方法、
（４） ＤＮＡが染色体ＤＮＡである上記（１）〜
（３）記載のスクリーニング方法、（５） 配列番号：
２で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質を用いることを特
徴とする前記タンパク質の活性を抑制する化合物または
その塩のスクリーニング方法、（６） 活性が転写活性
である上記（５）記載のスクリーニング方法、（７）
上記（１）〜（６）のいずれかに記載のスクリーニング
方法で得られる化合物またはその塩を含有する癌の予防
・治療剤、癌転移抑制剤または癌転移予防剤、（８）
配列番号：１で表される塩基配列と同一もしくは実質的
に同一の塩基配列を含有するＤＮＡを含有する癌または
その転移の診断薬、（９） 配列番号：１で表される塩
基配列と同一もしくは実質的に同一の塩基配列を含有す
るＤＮＡを用いる癌またはその転移の診断方法、（１
０） 配列番号：１で表される塩基配列と同一もしくは
実質的に同一の塩基配列に相補的な塩基配列またはその
一部分を含有するアンチセンスポリヌクレオチドを含有
する医薬、（１１） 癌の予防・治療剤、癌転移抑制剤
または癌転移予防剤である上記（１０）記載の医薬、
（１２） 配列番号：３、配列番号：４または配列番
号：５で表される塩基配列と同一または実質的に同一の
塩基配列を含有するＤＮＡ、（１３） 配列番号：３、
配列番号：４または配列番号：５で表される塩基配列か
らなる上記（１２）記載のＤＮＡ、（１４） 上記（１
２）記載のＤＮＡを含有する組換えベクター、（１５）
上記（１４）記載の組換えベクターで形質転換された
形質転換体、（１６） 上記（１５）記載の形質転換体
を培養し、配列番号：２で表されるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質を生成せしめることを特徴とする前記タンパク質ま
たはその塩の製造法、（１７） 配列番号：１で表され
る塩基配列と同一もしくは実質的に同一の塩基配列を含
有するＤＮＡが、上記（１２）記載のＤＮＡである上記
（１）記載のスクリーニング方法、（１８） 哺乳動物
に対し、上記（１）〜（６）のいずれかに記載のスクリ
ーニング方法で得られる化合物またはその塩の有効量を
投与することを特徴とする癌の予防・治療方法、癌転移
抑制方法または癌転移予防方法、（１９） 癌の予防・
治療剤、癌転移抑制剤または癌転移予防剤を製造するた
めの上記（１）〜（６）のいずれかに記載のスクリーニ
ング方法で得られる化合物またはその塩の使用などを提
供する。

【０００６】

【発明の実施の形態】配列番号：２で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質（以下、本発明で用いられるタンパク質
と称することもある。）は、配列番号：１で表される塩
基配列と同一もしくは実質的に同一の塩基配列を含有す
るＤＮＡでコードされるアミノ酸配列を含有するもので
ある。本発明で用いられるタンパク質は、ヒトまたはそ
の他の温血動物（例えば、モルモット、ラット、マウ
ス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルな
ど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリ
ア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ラ
ンゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、杯細胞、内皮
細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂
肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細
胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基
球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨
細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは
間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしく
は癌細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあらゆ
る組織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃核、
大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、
小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖
腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消
化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、顎
下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、
関節、骨格筋などに由来するタンパク質であってもよ
く、合成タンパク質であってもよい。

【０００７】配列番号：２で表されるアミノ酸配列と実
質的に同一のアミノ酸配列としては、配列番号：２で表
されるアミノ酸配列と約８５％以上、好ましくは約９０
％以上、さらに好ましくは約９５％以上、さらに好まし
くは約９８％以上の相同性を有するアミノ酸配列などが
挙げられる。配列番号：２で表されるアミノ酸配列と実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質として
は、例えば、配列番号：２で表されるアミノ酸配列と実
質的に同一のアミノ酸配列を含有し、配列番号：２で表
されるアミノ酸配列を含有するタンパク質と実質的に同
質の活性を有するタンパク質などが好ましい。「実質的
に同質の活性」としては、例えば、転写促進活性などが
挙げられる。実質的に同質とは、その活性が性質的に
（例、生理学的に、または薬理学的に）同質であること
を示す。したがって、例えば、転写促進活性が同等
（例、約０．０１〜１００倍、好ましくは約０．１〜１
０倍、より好ましくは０．５〜２倍）であることが好ま
しいが、この活性の程度、タンパク質の分子量などの量
的要素は異なっていてもよい。

【０００８】また、（１）配列番号：２で表されるアミ
ノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０
個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは
１〜５個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、（２）
配列番号：２で表されるアミノ酸配列に１または２個以
上（好ましくは、１〜３０個程度、好ましくは１〜１０
個程度、さらに好ましくは１〜５個）のアミノ酸が付加
したアミノ酸配列、（３）配列番号：２で表されるアミ
ノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜５個）
のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、（４）配列番
号：２で表されるアミノ酸配列中の１または２個以上
（好ましくは、１〜５個）のアミノ酸が他のアミノ酸で
置換されたアミノ酸配列、または（５）これらを組み合
わせたアミノ酸配列を含有するタンパク質などのいわゆ
るムテインも本発明で用いられるタンパク質に含まれ
る。

【０００９】本明細書におけるタンパク質は、ペプチド
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。本発明で用いら
れるタンパク質は、Ｃ末端が、カルボキシル基（−ＣＯ
ＯＨ）、カルボキシレート(−ＣＯＯ^-）、アミド（−Ｃ
ＯＮＨ₂）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の何れであっ
てもよい。ここでエステルにおけるＲとしては、例え
ば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ
−ブチルなどのＣ_1-6アルキル基、例えば、シクロペン
チル、シクロヘキシルなどのＣ_3-8シクロアルキル基、
例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ_6-12アリール
基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ
_1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルなどのα−
ナフチル−Ｃ_1-2アルキル基などのＣ_7-14アラルキル
基、ピバロイルオキシメチル基などが用いられる。本発
明で用いられるタンパク質がＣ末端以外にカルボキシル
基（またはカルボキシレート）を有している場合、カル
ボキシル基がアミド化またはエステル化されているもの
も本発明で用いられるタンパク質に含まれる。この場合
のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステル
などが用いられる。さらに、本発明で用いられるタンパ
ク質には、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残
基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチ
ル基などのＣ _1-6アルカノイルなどのＣ_1-6アシル基な
ど）で保護されているもの、生体内で切断されて生成す
るＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン酸化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−Ｏ
Ｈ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インドール
基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、ホル
ミル基、アセチル基などのＣ_1-6アルカノイル基などの
Ｃ_1-6アシル基など）で保護されているもの、あるいは
糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タンパ
ク質なども含まれる。本発明で用いられるタンパク質の
具体例としては、例えば、配列番号：２で表されるアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質などがあげられる。

【００１０】本発明で用いられるタンパク質の部分ペプ
チド（以下、本発明で用いられる部分ペプチドと称する
場合がある。）としては、前記した本発明で用いられる
タンパク質の部分ペプチドであって、好ましくは、前記
した本発明で用いられるタンパク質と同様の活性を有す
るものであればいずれのものでもよい。また、本発明で
用いられる部分ペプチドは、そのアミド体およびエステ
ル体も包含する意味で用いられる場合がある。例えば、
本発明で用いられるタンパク質の構成アミノ酸配列のう
ち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個以上、さら
に好ましくは７０個以上、より好ましくは１００個以
上、最も好ましくは１５０個以上のアミノ酸配列を含有
するペプチドなどが用いられる。また、本発明で用いら
れる部分ペプチドは、そのアミノ酸配列中の１または２
個以上（好ましくは１〜２０個程度、さらに好ましくは
１〜１０個程度、より好ましくは１〜５個）のアミノ酸
が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以
上（好ましくは１〜２０個程度、さらに好ましくは１〜
１０個程度、より好ましくは１〜５個）のアミノ酸が付
加し、または、そのアミノ酸配列に１または２個以上
（好ましくは１〜２０個程度、さらに好ましくは１〜１
０個程度、より好ましくは１〜５個）のアミノ酸が挿入
され、または、そのアミノ酸配列中の１または２個以上
（好ましくは１〜２０個程度、さらに好ましくは１〜１
０個程度、より好ましくは１〜５個）のアミノ酸が他の
アミノ酸で置換されていてもよい。

【００１１】また、本発明で用いられる部分ペプチドは
Ｃ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレ
ート（−ＣＯＯ^-）、アミド（−ＣＯＮＨ₂）またはエス
テル（−ＣＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）のいず
れであってもよい。また、本発明で用いられる部分ペプ
チドがＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシ
レート）を有している場合、カルボキシル基がアミド化
またはエステル化されているものも本発明で用いられる
部分ペプチドに含まれる。この場合のエステルとして
は、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用いられ
る。さらに、本発明で用いられる部分ペプチドには、前
記した本発明で用いられるタンパク質と同様に、Ｎ末端
のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保
護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され
生成したグルタミン残基がピログルタミン酸化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。本発
明で用いられる部分ペプチドは抗体作成のための抗原と
しても用いることができる。

【００１２】本発明で用いられるタンパク質または部分
ペプチドの塩としては、生理学的に許容される酸（例、
無機酸、有機酸など）、塩基（例、アルカリ金属など）
などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される
酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無
機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との
塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン
酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン
酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベ
ンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。本発明で
用いられるタンパク質もしくはその部分ペプチドまたは
その塩は、前述したヒトまたはその他の温血動物の細胞
または組織より公知のタンパク質の精製方法により製
造、またはタンパク質をコードするＤＮＡを含有する形
質転換体を培養することにより製造することができる。
また、後述のペプチド合成法に準じて製造することもで
きる。ヒトまたはその他の温血動物の組織または細胞か
ら製造する場合、ヒトまたはその他の温血動物の組織ま
たは細胞をホモジナイズした後、酸などで抽出を行な
い、得られた抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオン
交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを組
み合わせることにより精製単離することができる。

【００１３】本発明で用いられるタンパク質もしくは部
分ペプチドまたはその塩、またはそのアミド体の合成に
は、通常市販のタンパク質合成用樹脂を用いることがで
きる。そのような樹脂としては、例えば、クロロメチル
樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹
脂、アミノメチル樹脂、４−ベンジルオキシベンジルア
ルコール樹脂、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、
ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキシメチルメチルフェニルアセ
トアミドメチル樹脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−
（２’，４’−ジメトキシフェニル−ヒドロキシメチ
ル）フェノキシ樹脂、４−（２’，４’−ジメトキシフ
ェニル−Ｆｍｏｃアミノエチル）フェノキシ樹脂などを
挙げることができる。このような樹脂を用い、α−アミ
ノ基と側鎖官能基を適当に保護したアミノ酸を、目的と
するタンパク質の配列通りに、公知の各種縮合方法に従
い、樹脂上で縮合させる。反応の最後に樹脂からタンパ
ク質を切り出すと同時に各種保護基を除去し、さらに高
希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実施
し、目的のタンパク質もしくは部分ペプチドまたはそれ
らのアミド体を取得する。上記した保護アミノ酸の縮合
に関しては、タンパク質合成に使用できる各種活性化試
薬を用いることができるが、特に、カルボジイミド類が
よい。カルボジイミド類としては、ＤＣＣ、Ｎ，Ｎ’−
ジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−
（３−ジメチルアミノプロリル）カルボジイミドなどが
用いられる。これらによる活性化にはラセミ化抑制添加
剤（例えば、ＨＯＢｔ，ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミ
ノ酸を直接樹脂に添加するかまたは、対称酸無水物また
はＨＯＢｔエステルあるいはＨＯＯＢｔエステルとして
あらかじめ保護アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に
添加することができる。

【００１４】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジ
ン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル
類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル
類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいは
これらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はタ
ンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られてい
る範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範
囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は
通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応
を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基
の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すことにより十
分な縮合を行うことができる。反応を繰り返しても十分
な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセチル
イミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化する
ことによって、後の反応に影響を与えないようにするこ
とができる。

【００１５】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソ
ボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキ
シカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキ
シカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホ
ルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニル
ホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。カル
ボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、
メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロ
オクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状また
は環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化
（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエス
テル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベン
ジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシ
ルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド
化、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒ
ドラジド化などによって保護することができる。セリン
の水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によ
って保護することができる。このエステル化に適する基
としては、例えば、アセチル基などの低級（Ｃ_1-6）ア
ルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジ
ルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭
酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル
化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒ
ドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。チロシンの
フェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Ｂｚ
ｌ、Ｃｌ₂−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、
ｔ−ブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾー
ルの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−
２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、
ベンジルオキシメチル、Ｂｕｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍ
ｏｃなどが用いられる。

【００１６】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニ
トロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロ
フェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ
−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕
などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたもの
としては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられ
る。保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ
−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気
流中での接触還元、無水フッ化水素、メタンスルホン
酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオロ酢酸
あるいはこれらの混合液などによる酸処理、ジイソプロ
ピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリジン、ピ
ペラジンなどによる塩基処理、液体アンモニア中ナトリ
ウムによる還元などが用いられる。上記酸処理による脱
離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温度で行なわれ
るが、酸処理においては、例えば、アニソール、フェノ
ール、チオアニソール、メタクレゾール、パラクレゾー
ル、ジメチルスルフィド、１，４−ブタンジチオール、
１，２−エタンジチオールなどのようなカチオン捕捉剤
の添加が有効である。また、ヒスチジンのイミダゾール
保護基として用いられる２，４−ジニトロフェニル基は
チオフェノール処理により除去され、トリプトファンの
インドール保護基として用いられるホルミル基は上記の
１，２−エタンジチオール、１，４−ブタンジチオール
などの存在下の酸処理による脱保護以外に、希水酸化ナ
トリウム溶液、希アンモニアなどによるアルカリ処理に
よっても除去される。

【００１７】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護、保護基の脱離、反応に関与する官能基の活性化など
は公知の手段から、また原料の反応に関与すべきでない
官能基の保護に用いうる保護基は公知の基から適宜選択
し、適用できる。タンパク質または部分ペプチドのアミ
ド体を得る別の方法としては、例えば、まず、カルボキ
シ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をアミド化して保
護した後、アミノ基側にペプチド（タンパク質）鎖を所
望の鎖長まで延ばした後、前記ペプチド鎖のＮ末端のα
−アミノ基の保護基のみを除いたタンパク質または部分
ペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基のみを除去
したタンパク質または部分ペプチドとを製造し、これら
のタンパク質または部分ペプチドを上記したような混合
溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と
同様である。縮合により得られた保護タンパク質または
ペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護基
を除去し、所望の粗タンパク質または部分ペプチドを得
ることができる。この粗タンパク質または部分ペプチド
は既知の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍
結乾燥することで所望のタンパク質または部分ペプチド
のアミド体を得ることができる。タンパク質または部分
ペプチドのエステル体を得るには、例えば、カルボキシ
末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール
類と縮合しアミノ酸エステルとした後、タンパク質また
は部分ペプチドのアミド体と同様にして、所望のタンパ
ク質または部分ペプチドのエステル体を得ることができ
る。

【００１８】本発明で用いられるタンパク質およびその
部分ペプチドまたはその塩は、公知のペプチドの合成法
に従って、あるいは本発明で用いられるタンパク質を適
当なペプチダーゼで切断することによって製造すること
ができる。ペプチドの合成法としては、例えば、固相合
成法、液相合成法のいずれによっても良い。すなわち、
本発明で用いられる部分ペプチドを構成し得る部分ペプ
チドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生成物
が保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目
的のペプチドを製造することができる。公知の縮合方法
や保護基の脱離としては、例えば、以下の〜に記載
された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) Schroeder および Luebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, New York (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合
成、広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明で用いられる部分ペ
プチドを精製単離することができる。上記方法で得られ
るタンパク質または部分ペプチドが遊離体である場合
は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって適当
な塩に変換することができるし、逆に塩で得られた場合
は、公知の方法あるいはそれに準じる方法によって遊離
体または他の塩に変換することができる。

【００１９】配列番号：１で表される塩基配列と同一も
しくは実質的に同一の塩基配列を含有するＤＮＡ（以
下、本発明で用いられるＤＮＡと称することもある。）
は、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記し
た細胞または組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞または
組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれ
でもよい。ライブラリーに使用するベクターは、バクテ
リオファージ、プラスミド、コスミド、ファージミドな
どいずれであってもよい。また、前記した細胞または組
織よりtotalＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したもの
を用いて直接Reverse Transcriptase Polymerase Chain
Reaction（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法と略称する）によっ
て増幅することもできる。配列番号：１で表される塩基
配列と実質的に同一の塩基配列を含有するＤＮＡとして
は、配列番号：１で表される塩基配列を含有するＤＮＡ
とハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
ＤＮＡを有し、本発明で用いられるタンパク質と実質的
に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮＡで
あれば何れのものでもよい。

【００２０】配列番号：１で表される塩基配列を含有す
るＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１で表
される塩基配列と約８５％以上、好ましくは約９０％以
上、さらに好ましくは約９５％、さらに好ましくは約９
８％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤＮＡな
どが用いられる。ハイブリダイゼーションは、公知の方
法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュラー・
クローニング（Molecular Cloning）２ｎｄ（J. Sambro
ok et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に
記載の方法などに従って行うことができる。また、市販
のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記
載の方法に従って行うことができる。より好ましくは、
ハイストリンジェントな条件に従って行うことができ
る。ハイストリンジェントな条件とは、例えば、ナトリ
ウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９〜２０
ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６０〜６
５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１９ｍＭ
で温度が約６５℃の場合が最も好ましい。

【００２１】本発明で用いられる部分ペプチドをコード
するＤＮＡとしては、前記した本発明で用いられる部分
ペプチドをコードする塩基配列を含有するＤＮＡであれ
ばいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、
ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞または組織由
来のｃＤＮＡ、前記した細胞または組織由来のｃＤＮＡ
ライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。本発明で
用いられる部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、
例えば、配列番号：１で表される塩基配列を含有するＤ
ＮＡの部分塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番
号：１で表される塩基配列を含有するＤＮＡとハイスト
リンジェントな条件下でハイブリダイズするＤＮＡを有
し、本発明で用いられるタンパク質と実質的に同質の活
性を有するタンパク質をコードするＤＮＡの部分塩基配
列を含有するＤＮＡなどが用いられる。ハイブリダイゼ
ーションの方法およびハイストリンジェントな条件は前
記と同様のものが用いられる。

【００２２】本発明で用いられるタンパク質または本発
明で用いられる部分ペプチド（以下、これらをコードす
るＤＮＡのクローニングおよび発現の説明においては、
これらを単に本発明で用いられるタンパク質と略記する
場合がある）を完全にコードするＤＮＡのクローニング
の手段としては、本発明で用いられるタンパク質をコー
ドする塩基配列の一部分を含有する合成ＤＮＡプライマ
ーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、または適当な
ベクターに組み込んだＤＮＡを本発明で用いられるタン
パク質の一部または全領域をコードするＤＮＡ断片もし
くは合成ＤＮＡを用いて標識したものとのハイブリダイ
ゼーションによって選別することができる。ハイブリダ
イゼーションの方法は、例えば、モレキュラー・クロー
ニング（Molecular Cloning）２ｎｄ（J. Sambrook et
al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989）に記載の
方法などに従って行うことができる。また、市販のライ
ブラリーを使用する場合、添付の使用説明書に記載の方
法に従って行うことができる。ＤＮＡの塩基配列の置換
は、ＰＣＲや公知のキット、例えば、Mutan^TM-superExp
ress Km（宝酒造（株））、Mutan^TM-K（宝酒造（株））
などを用いて、ODA-LA PCR法、Gapped duplex法、Kunke
l法などの公知の方法あるいはそれらに準じる方法に従
って行うことができる。タンパク質をコードするクロー
ン化ＤＮＡは、目的によりそのまま、または所望により
制限酵素で消化されたり、リンカーを付加されたりして
使用することができる。前記ＤＮＡはその５’末端側に
翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また３’末端側
には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡ
Ｇを有していてもよい。これらの翻訳開始コドンや翻訳
終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプターを用いて付
加することもできる。本発明で用いられるタンパク質の
発現ベクターは、例えば、（イ）本発明で用いられるタ
ンパク質をコードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片
を切り出し、（ロ）前記ＤＮＡ断片を適当な発現ベクタ
ー中のプロモーターの下流に連結することにより製造す
ることができる。

【００２３】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫ
プロモーターなどが挙げられる。これらのうち、ＣＭＶ
（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰ_Lプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主が
バチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、Ｓ
ＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主
が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプ
ロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター
などが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘ
ドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好まし
い。

【００２４】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
^rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏ^rと略称する場合がある、Ｇ４１８耐
性）等が挙げられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイ
ニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含
まない培地によっても選択できる。また、必要に応じ
て、宿主に合ったシグナル配列を、本発明で用いられる
タンパク質のＮ端末側に付加する。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ＰｈｏＡ・シグナル配列、ＯｍｐＡ
・シグナル配列などが、宿主がバチルス属菌である場合
は、α−アミラーゼ・シグナル配列、サブチリシン・シ
グナル配列などが、宿主が酵母である場合は、ＭＦα・
シグナル配列、ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿主が動
物細胞である場合には、インシュリン・シグナル配列、
α−インターフェロン・シグナル配列、抗体分子・シグ
ナル配列などがそれぞれ利用できる。このようにして構
築された本発明で用いられるタンパク質をコードするＤ
ＮＡを含有するベクターを用いて、形質転換体を製造す
ることができる。

【００２５】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１
２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユー
エスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），６０巻，１
６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・アシッ
ズ・リサーチ，（Nucleic Acids Research），９巻，３
０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モ
レキュラー・バイオロジー（Journal of MolecularBiol
ogy），１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４
１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティック
ス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕などが用
いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチルス・
サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジー
ン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１〔ジャ
ーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Bioch
emistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用いられ
る。酵母としては、例えば、サッカロマイセス・セレビ
シエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２
Ｒ^-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１
２、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Schizosaccharomy
ces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピ
キア・パストリス（Pichia pastoris）ＫＭ７１などが
用いられる。

【００２６】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、ヨトウガの幼虫由来株化細胞（Spod
optera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia n
iの中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来の
High Five^TM細胞、Mamestrabrassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、カイコ由来株化細胞（Bombyx
mori N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。前記Ｓ
ｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCCCRL171
1）、Ｓｆ２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴ
ィボ（In Vivo）,13, 213-217,(1977)）などが用いられ
る。昆虫としては、例えば、カイコの幼虫などが用いら
れる〔前田ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９
２(１９８５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞
ＣＯＳ−７，Ｖｅｒｏ，チャイニーズハムスター細胞Ｃ
ＨＯ（以下、ＣＨＯ細胞と略記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損
チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄ
ｈｆｒ^-）細胞と略記），マウスＬ細胞，マウスＡｔＴ
−２０，マウスミエローマ細胞，ラットＧＨ３，ヒトＦ
Ｌ細胞、Ｈ９ｃ２細胞などが用いられる。エシェリヒア
属菌を形質転換するには、例えば、プロシージングズ・
オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンジ
イズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA），６９巻，２１１０（１９７２）、ジーン（Ge
ne），１７巻，１０７(１９８２)などに記載の方法に従
って行うことができる。

【００２７】バチルス属菌を形質転換するには、例え
ば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティッ
クス（Molecular ＆ General Genetics），１６８巻，
１１１(１９７９)などに記載の方法に従って行うことが
できる。酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・
イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymology），
１９４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA），７５巻，１９２９(１９７８）などに
記載の方法に従って行うことができる。昆虫細胞または
昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロジ
ー（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）などに記載の
方法に従って行うことができる。動物細胞を形質転換す
るには、例えば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験プロ
トコール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発
行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１
９７３)に記載の方法に従って行うことができる。この
ようにして、タンパク質をコードするＤＮＡを含有する
発現ベクターで形質転換された形質転換体を得ることが
できる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌である
形質転換体を培養する際、培養に使用される培地として
は液体培地が適当であり、その中には前記形質転換体の
生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せし
められる。炭素源としては、例えば、グルコース、デキ
ストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、
例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ
・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バ
レイショ抽出液などの無機または有機物質、無機物とし
ては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。また、酵母エ
キス、ビタミン類、生長促進因子などを添加してもよ
い。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。

【００２８】エシェリヒア属菌を培養する際の培地とし
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質
転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホ
ールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），７７巻，４５０５
(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地
〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナ
ショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・
ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），８
１巻，５３３０（１９８４）〕が挙げられる。培地のｐ
Ｈは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は通常約２
０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて
通気や撹拌を加える。宿主が昆虫細胞または昆虫である
形質転換体を培養する際、培地としては、Grace’s Ins
ect Medium（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Nature）, 19
5, 788 (1962)）に非動化した１０％ウシ血清等の添加
物を適宜加えたものなどが用いられる。培地のｐＨは約
６．２〜６．４に調整するのが好ましい。培養は通常約
２７℃で約３〜５日間行ない、必要に応じて通気や撹拌
を加える。宿主が動物細胞である形質転換体を培養する
際、培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清
を含むＭＥＭ培地〔サイエンス（Science），１２２
巻，５０１(１９５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー
（Virology），８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ
１６４０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・メ
ディカル・アソシエーション（The Journal of the Ame
rican Medical Association）１９９巻，５１９(１９６
７)〕，１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサ
イエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン
（Proceeding ofthe Society for the Biological Medi
cine），７３巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐ
Ｈは約６〜８であるのが好ましい。培養は通常約３０℃
〜４０℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気
や撹拌を加える。以上のようにして、形質転換体の細胞
質内または細胞外に本発明で用いられるタンパク質を生
成せしめることができる。

【００２９】上記培養物から本発明で用いられるタンパ
ク質を分離精製するには、例えば、下記の方法により行
うことができる。本発明で用いられるタンパク質を培養
菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、公
知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩衝
液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結融
解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠心
分離やろ過によりタンパク質の粗抽出液を得る方法など
が適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジン
などのタンパク質変性剤や、トリトンＸ−１００^TMなど
の界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中にタンパ
ク質が分泌される場合には、培養終了後、公知の方法で
菌体あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。こ
のようにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含
まれるタンパク質の精製は、公知の分離・精製法を適切
に組み合わせて行うことができる。これらの公知の分
離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を
利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およ
びＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主
として分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマト
グラフィーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニテ
ィークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する
方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の
差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差
を利用する方法などが用いられる。

【００３０】このようにして得られるタンパク質が遊離
体で得られた場合には、公知の方法あるいはそれに準じ
る方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得ら
れた場合には公知の方法あるいはそれに準じる方法によ
り、遊離体または他の塩に変換することができる。な
お、組換え体が産生するタンパク質を、精製前または精
製後に適当なタンパク質修飾酵素を作用させることによ
り、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除
去することもできる。タンパク質修飾酵素としては、例
えば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニルエンド
ペプチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼな
どが用いられる。このようにして生成する本発明で用い
られるタンパク質の存在は、特異抗体を用いたエンザイ
ムイムノアッセイやウエスタンブロッティングなどによ
り測定することができる。

【００３１】本発明で用いられるＤＮＡは、配列番号：
１で表される塩基配列と同一もしくは実質的に同一の塩
基配列を含有するＤＮＡを含有するＤＮＡであればよ
く、好ましくは、配列番号：１で表される塩基配列を含
有するＤＮＡを含有するＤＮＡがあげられる。本発明で
用いられるＤＮＡは、ｃＤＮＡ、染色体ＤＮＡ、合成Ｄ
ＮＡの何れであってもよく、またプロモーター領域、エ
ンハンサー領域を含んでいてもよい。前記ＤＮＡの具体
例としては、ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１の（1）エクソ
ン０〜７を含有するＤＮＡ（配列番号：３；全長Ｔｙｐ
ｅＩＩ ＣＢＦＡ１のＤＮＡと称することもある）、
（2）エクソン０〜５および７を含有するＤＮＡ（配列
番号：４；エクソン６欠失型ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１
のＤＮＡと称することもある）、（3）エクソン０〜
３、５および７を含有するＤＮＡ（配列番号：５；エク
ソン４および６欠損型ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１のＤＮ
Ａと称することもある）などが挙げられる。

【００３２】本発明で用いられるタンパク質もしくは部
分ペプチドまたはその塩に対する抗体は、本発明で用い
られるタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩を
認識し得る抗体であれば、ポリクローナル抗体、モノク
ローナル抗体の何れであってもよい。本発明で用いられ
るタンパク質もしくは部分ペプチドまたはその塩（以
下、抗体の説明においては、これらを単に本発明で用い
られるタンパク質と略記する場合がある）に対する抗体
は、本発明で用いられるタンパク質を抗原として用い、
公知の抗体または抗血清の製造法に従って製造すること
ができる。 〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクローナル抗体産生細胞の作製 本発明で用いられるタンパク質は、温血動物に対して投
与により抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担
体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産生
能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完全
フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は通常
２〜６週毎に１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用
いられる温血動物としては、例えば、サル、ウサギ、イ
ヌ、モルモット、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワ
トリが挙げられるが、マウスおよびラットが好ましく用
いられる。モノクローナル抗体産生細胞の作製に際して
は、抗原で免疫された温血動物、例えばマウスから抗体
価の認められた個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾
臓またはリンパ節を採取し、それらに含まれる抗体産生
細胞を同種または異種動物の骨髄腫細胞と融合させるこ
とにより、モノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調
製することができる。抗血清中の抗体価の測定は、例え
ば、後記の標識化タンパク質と抗血清とを反応させたの
ち、抗体に結合した標識剤の活性を測定することにより
行うことができる。融合操作は既知の方法、例えば、ケ
ーラーとミルスタインの方法〔ネイチャー（Nature)、2
56、495 (1975)〕に従い実施することができる。融合促
進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ）やセンダイウィルスなどが挙げられるが、好ましく
はＰＥＧが用いられる。

【００３３】骨髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ−１、
Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄
腫細胞が挙げられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられ
る。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細
胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、
ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）
が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、
好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベート
することにより効率よく細胞融合を実施できる。モノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには
種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を
直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイク
ロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に
放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体
（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス
免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡ
を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する
方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着
させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性
物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げら
れる。モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれ
に準じる方法に従って行うことができる。通常ＨＡＴ
（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加
した動物細胞用培地で行うことができる。選別および育
種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるものな
らばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２０
％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰＭ
Ｉ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧＩ
Ｔ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ
培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））
などを用いることができる。培養温度は、通常２０〜４
０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５
日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間である。培養
は、通常５％炭酸ガス下で行うことができる。ハイブリ
ドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の
測定と同様にして測定できる。

【００３４】（ｂ）モノクローナル抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、公知の方法、例え
ば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコ
ール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体
（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過
法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテ
インＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合
を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行うこ
とができる。

【００３５】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明で用
いられるポリクローナル抗体は、公知あるいはそれに準
じる方法に従って製造することができる。例えば、免疫
抗原（本発明で用いられるタンパク質等の抗原）とキャ
リアータンパク質との複合体をつくり、上記のモノクロ
ーナル抗体の製造法と同様に温血動物に免疫を行ない、
前記免疫動物から本発明で用いられるタンパク質に対す
る抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を行うことに
より製造することができる。温血動物を免疫するために
用いられる免疫抗原とキャリアータンパク質との複合体
に関し、キャリアータンパク質の種類およびキャリアー
とハプテンとの混合比は、キャリアーに架橋させて免疫
したハプテンに対して抗体が効率良くできれば、どの様
なものをどの様な比率で架橋させてもよいが、例えば、
ウシ血清アルブミンやウシサイログロブリン、ヘモシア
ニン等を重量比でハプテン１に対し、約０．１〜２０、
好ましくは約１〜５の割合でカプルさせる方法が用いら
れる。また、ハプテンとキャリアーのカプリングには、
種々の縮合剤を用いることができるが、グルタルアルデ
ヒドやカルボジイミド、マレイミド活性エステル、チオ
ール基、ジチオビリジル基を含有する活性エステル試薬
等が用いられる。縮合生成物は、温血動物に対して、抗
体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤と
ともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は、通常約２〜６週
毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行なわれる。ポリク
ローナル抗体は、上記の方法で免疫された温血動物の血
液、腹水など、好ましくは血液から採取することができ
る。抗血清中のポリクローナル抗体価の測定は、上記の
抗血清中の抗体価の測定と同様にして測定できる。ポリ
クローナル抗体の分離精製は、上記のモノクローナル抗
体の分離精製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従
って行うことができる。

【００３６】本発明で用いられるタンパク質または部分
ペプチドをコードするＤＮＡ（以下、アンチセンスポリ
ヌクレオチドの説明においては、これらのＤＮＡを本発
明で用いられるＤＮＡと略記する）に相補的な、または
実質的に相補的な塩基配列を含有するアンチセンスポリ
ヌクレオチドとしては、本発明で用いられるＤＮＡに相
補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有し、前記
ＤＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、
いずれのアンチセンスポリヌクレオチドであってもよい
が、アンチセンスＤＮＡが好ましい。本発明で用いられ
るＤＮＡに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、本
発明で用いられるＤＮＡに相補的な塩基配列（すなわ
ち、本発明で用いられるＤＮＡの相補鎖）の全塩基配列
または部分塩基配列と約９７％以上、好ましくは約９８
％以上、さらに好ましくは約９９％以上の相同性を有す
る塩基配列などが挙げられる。特に、本発明で用いられ
るＤＮＡの相補鎖の全塩基配列うち、本発明で用いられ
るタンパク質のＮ末端部位をコードする部分の塩基配列
（例えば、開始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖と
約９７％以上、好ましくは約９８％以上、さらに好まし
くは約９９％以上の相同性を有するアンチセンスポリヌ
クレオチドが好適である。アンチセンスポリヌクレオチ
ドは通常、１０〜４０個程度、好ましくは１５〜３０個
程度の塩基から構成される。ヌクレアーゼなどの加水分
解酵素による分解を防ぐために、アンチセンスポリヌク
レオチドを構成する各ヌクレオチドのリン酸残基（ホス
フェート）は、例えば、ホスホロチオエート、メチルホ
スホネート、ホスホロジチオネートなどの化学修飾リン
酸残基に置換されていてもよい。これらのアンチセンス
ポリヌクレオチドは、公知のＤＮＡ合成装置などを用い
て製造することができる。

【００３７】本発明に従えば、本発明のタンパク質遺伝
子の複製または発現を阻害することのできるアンチセン
スポリヌクレオチド（核酸）を、クローン化した、ある
いはアミノ酸配列が決定されたタンパク質をコードする
ＤＮＡの塩基配列情報に基づき設計し、合成しうる。か
かるアンチセンスポリヌクレオチド（核酸）は、本発明
のタンパク質遺伝子のＲＮＡとハイブリダイズすること
ができ、該ＲＮＡの合成または機能を阻害することがで
きるか、あるいは本発明のタンパク質関連ＲＮＡとの相
互作用を介して本発明のタンパク質遺伝子の発現を調節
・制御することができる。本発明のタンパク質関連ＲＮ
Ａの選択された配列に相補的なポリヌクレオチド、およ
び本発明のタンパク質関連ＲＮＡと特異的にハイブリダ
イズすることができるポリヌクレオチドは、生体内およ
び生体外で本発明のタンパク質遺伝子の発現を調節・制
御するのに有用であり、また病気などの治療または診断
に有用である。用語「対応する」とは、遺伝子を含めた
ヌクレオチド、塩基配列または核酸の特定の配列に相同
性を有するあるいは相補的であることを意味する。ヌク
レオチド、塩基配列または核酸とペプチド（タンパク
質）との間で「対応する」とは、ヌクレオチド（核酸）
の配列またはその相補体から翻訳されるペプチド（タン
パク質）のアミノ酸を通常指している。タンパク質遺伝
子の５’端ヘアピンループ、５’端６−ベースペア・リ
ピート、５’端非翻訳領域、ポリペプチド翻訳開始コド
ン、タンパク質コード領域、ＯＲＦ翻訳終止コドン、
３’端非翻訳領域、３’端パリンドローム領域、および
３’端ヘアピンループは好ましい対象領域として選択し
うるが、タンパク質遺伝子内の如何なる領域も対象とし
て選択しうる。目的核酸と、対象領域の少なくとも一部
に相補的なポリヌクレオチドとの関係は、対象物とハイ
ブリダイズすることができるポリヌクレオチドとの関係
は、「アンチセンス」であるということができる。アン
チセンスポリヌクレオチドは、２−デオキシ−Ｄ−リボ
ースを含有しているポリヌクレオチド、Ｄ−リボースを
含有しているポリヌクレオチド、プリンまたはピリミジ
ン塩基のＮ−グリコシドであるその他のタイプのポリヌ
クレオチド、あるいは非ヌクレオチド骨格を有するその
他のポリマー（例えば、市販のタンパク質、核酸および
合成配列特異的な核酸ポリマー）または特殊な結合を含
有するその他のポリマー（但し、該ポリマーはＤＮＡや
ＲＮＡ中に見出されるような塩基のペアリングや塩基の
付着を許容する配置をもつヌクレオチドを含有する）な
どが挙げられる。それらは、２本鎖ＤＮＡ、１本鎖ＤＮ
Ａ、２本鎖ＲＮＡ、１本鎖ＲＮＡ、さらにＤＮＡ：ＲＮ
Ａハイブリッドであることができ、さらに非修飾ポリヌ
クレオチド（または非修飾オリゴヌクレオチド）、さら
には公知の修飾の付加されたもの、例えば当該分野で知
られた標識のあるもの、キャップの付いたもの、メチル
化されたもの、１個以上の天然のヌクレオチドを類縁物
で置換したもの、分子内ヌクレオチド修飾のされたも
の、例えば非荷電結合（例えば、メチルホスホネート、
ホスホトリエステル、ホスホルアミデート、カルバメー
トなど）を持つもの、電荷を有する結合または硫黄含有
結合（例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエ
ートなど）を持つもの、例えばタンパク質（ヌクレアー
ゼ、ヌクレアーゼ・インヒビター、トキシン、抗体、シ
グナルペプチド、ポリ−Ｌ−リジンなど）や糖（例え
ば、モノサッカライドなど）などの側鎖基を有している
もの、インターカレート化合物（例えば、アクリジン、
ソラレンなど）を持つもの、キレート化合物（例えば、
金属、放射活性をもつ金属、ホウ素、酸化性の金属な
ど）を含有するもの、アルキル化剤を含有するもの、修
飾された結合を持つもの（例えば、αアノマー型の核酸
など）であってもよい。ここで「ヌクレオシド」、「ヌ
クレオチド」および「核酸」とは、プリンおよびピリミ
ジン塩基を含有するのみでなく、修飾されたその他の複
素環型塩基をもつようなものを含んでいて良い。こうし
た修飾物は、メチル化されたプリンおよびピリミジン、
アシル化されたプリンおよびピリミジン、あるいはその
他の複素環を含むものであってよい。修飾されたヌクレ
オチドおよび修飾されたヌクレオチドはまた糖部分が修
飾されていてよく、例えば、１個以上の水酸基がハロゲ
ンとか、脂肪族基などで置換されていたり、あるいはエ
ーテル、アミンなどの官能基に変換されていてよい。

【００３８】本発明のアンチセンス・ポリヌクレオチド
（核酸）は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、あるいは修飾された核酸
（ＲＮＡ、ＤＮＡ）である。修飾された核酸の具体例と
しては核酸の硫黄誘導体やチオホスフェート誘導体、そ
してポリヌクレオシドアミドやオリゴヌクレオシドアミ
ドの分解に抵抗性のものが挙げられるが、それに限定さ
れるものではない。本発明のアンチセンス核酸は次のよ
うな方針で好ましく設計されうる。すなわち、細胞内で
のアンチセンス核酸をより安定なものにする、アンチセ
ンス核酸の細胞透過性をより高める、目標とするセンス
鎖に対する親和性をより大きなものにする、そしてもし
毒性があるならアンチセンス核酸の毒性をより小さなも
のにする。こうして修飾は当該分野で数多く知られてお
り、例えば J. Kawakami et al.,Pharm Tech Japan, Vo
l. 8, pp.247, 1992; Vol. 8, pp.395, 1992; S. T. Cr
ooke et al. ed., Antisense Research and Applicatio
ns, CRC Press, 1993 などに開示がある。本発明のアン
チセンス核酸は、変化せしめられたり、修飾された糖、
塩基、結合を含有していて良く、リポゾーム、ミクロス
フェアのような特殊な形態で供与されたり、遺伝子治療
により適用されたり、付加された形態で与えられること
ができうる。こうして付加形態で用いられるものとして
は、リン酸基骨格の電荷を中和するように働くポリリジ
ンのようなポリカチオン体、細胞膜との相互作用を高め
たり、核酸の取込みを増大せしめるような脂質（例え
ば、ホスホリピド、コレステロールなど）といった疎水
性のものが挙げられる。付加するに好ましい脂質として
は、コレステロールやその誘導体（例えば、コレステリ
ルクロロホルメート、コール酸など）が挙げられる。こ
うしたものは、核酸の３’端あるいは５’端に付着させ
ることができ、塩基、糖、分子内ヌクレオシド結合を介
して付着させることができうる。その他の基としては、
核酸の３’端あるいは５’端に特異的に配置されたキャ
ップ用の基で、エキソヌクレアーゼ、ＲＮａｓｅなどの
ヌクレアーゼによる分解を阻止するためのものが挙げら
れる。こうしたキャップ用の基としては、ポリエチレン
グリコール、テトラエチレングリコールなどのグリコー
ルをはじめとした当該分野で知られた水酸基の保護基が
挙げられるが、それに限定されるものではない。アンチ
センス核酸の阻害活性は、本発明の形質転換体、本発明
の生体内や生体外の遺伝子発現系、あるいは本発明のタ
ンパク質の生体内や生体外の翻訳系を用いて調べること
ができる。該核酸は公知の各種の方法で細胞に適用でき
る。

【００３９】以下に、本発明で用いられるタンパク質も
しくは部分ペプチドまたはその塩（以下、本発明で用い
られるタンパク質と略記する場合がある）、本発明で用
いられるタンパク質または部分ペプチドをコードするＤ
ＮＡ（以下、本発明で用いられるＤＮＡと略記する場合
がある）、本発明で用いられるタンパク質もしくは部分
ペプチドまたはその塩に対する抗体（以下、本発明で用
いられる抗体と略記する場合がある）、および本発明で
用いられるＤＮＡのアンチセンスポリヌクレオチド（以
下、本発明で用いられるアンチセンスポリヌクレオチド
と略記する場合がある）の用途を説明する。

【００４０】〔１〕疾病に対する医薬候補化合物のスク
リーニング 本発明で用いられるＤＮＡは、乳癌組織など、いくつか
の癌組織で、そのＤＮＡを含有する遺伝子がコードする
タンパク質の特異的な発現亢進が起こっているため、そ
の発現を抑制する化合物またはその塩、および、本発明
で用いられるタンパク質の活性を抑制する化合物または
その塩は、癌（例、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、食
道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、
子宮癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、血液腫瘍
など）の予防・治療剤、転移抑制剤、転移予防剤として
有用である。したがって、本発明で用いられるＤＮＡお
よびタンパク質は、前記化合物またはその塩のスクリー
ニングのために有用である。すなわち、本発明は、本発
明で用いられるＤＮＡを用いる前記遺伝子の発現を抑制
する化合物またはその塩、および本発明で用いられるタ
ンパク質を用いる前記タンパク質の活性を抑制する化合
物またはその塩のスクリーニング方法（以下、本発明の
スクリーニング方法と略記することもある）を提供す
る。本発明のスクリーニング方法の具体例としては、
（i）本発明で用いられるタンパク質を産生する能力を
有する細胞を培養した場合と、（ii）試験化合物の存在
下、本発明で用いられるタンパク質を産生する能力を有
する細胞を培養した場合との比較を行う。上記方法にお
いて、（i）と（ii）の場合（試験化合物の有無）にお
ける、本発明で用いられるＤＮＡの発現量（具体的に
は、本発明で用いられるタンパク質量または前記タンパ
ク質をコードするｍＲＮＡ量）、または本発明で用いら
れるタンパク質の活性（例、転写活性）を測定して、比
較する。前記タンパク質量の測定は、公知の方法、例え
ば、配列番号：２を認識する抗体を用いて、細胞抽出液
中などに存在する前記タンパク質を、ウェスタン解析や
ＥＬＩＳＡ法などの方法またはそれに準じる方法に従い
測定することができる。前記ｍＲＮＡ量の測定は、公知
の方法、例えば、プローブとして配列番号：１またはそ
の一部を含有する核酸を用いるノーザンハイブリダイゼ
ーション、あるいはプライマーとして配列番号：１また
はその一部を含有する核酸を用いるＰＣＲ法またはそれ
に準じる方法に従い測定することができる。ここで、配
列番号：１の一部を含有する拡散としては、配列番号：
１２で表される塩基配列を含有する核酸が挙げられる。
配列番号：１２で表される塩基配列は、配列番号：１で
表される塩基配列の第６８番目〜第１２４番目の塩基配
列である。

【００４１】例えば、上記（ii）の場合（試験化合物添
加）における前記遺伝子の発現を、上記（i）の場合
（試験化合物無添加）に比べて、約２０％以上、好まし
くは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害する
試験化合物を、本発明で用いられる遺伝子の発現を抑制
する化合物として選択することができる。前記転写活性
の測定は、公知の方法、例えば、本発明で用いられるタ
ンパク質が認識するＤＮＡの塩基配列を含有するＤＮＡ
を、レポーター遺伝子（例、ｌａｃＺ、アルカリフォス
ファターゼ、ルシフェラーゼなど）の上流に連結し、そ
のレポーター活性を指標に行うこともできるし、前記タ
ンパク質が細胞内で発現誘導する遺伝子またはその産物
の量を測定するなどの方法またはそれに準じる方法に従
い測定することができる。例えば、上記（ii）の場合
（試験化合物添加）における転写活性を、上記（i）の
場合（試験化合物無添加）に比べて、約２０％以上、好
ましくは３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害
する試験化合物を、本発明で用いられるタンパク質の活
性を阻害する化合物として選択することができる。ま
た、本発明のスクリーニング方法としては、本発明で用
いられるタンパク質と結合して協調的に転写活性を促進
するタンパク質の結合を阻害する化合物を得る方法が挙
げられる。具体的には、（i）a）本発明で用いられるタ
ンパク質およびb）本発明で用いられるタンパク質と結
合して協調的に転写活性を促進するタンパク質を接触さ
せた場合と（ii）a）試験化合物、b）本発明で用いられ
るタンパク質およびc）本発明で用いられるタンパク質
と結合して協調的に転写活性を促進するタンパク質を接
触させた場合との、「本発明で用いられるタンパク質」
と「本発明で用いられるタンパク質と結合して協調的に
転写活性を促進するタンパク質」との結合活性の比較を
行う。さらに、本発明のスクリーニング方法としては、
本発明で用いられるタンパク質と結合してその転写活性
を抑制する化合物を得る方法も挙げられる。前記結合活
性は、公知の方法、例えば、酵母または哺乳動物ツーハ
イブリッド法、免疫沈降法、ビアコア法、サンドイッチ
ＥＬＩＳＡ法などに従い測定する。例えば、上記スクリ
ーニング法において、試験化合物非存在下における結合
活性を、試験化合物存在下で約２０％以上、好ましくは
約３０％以上、より好ましくは約５０％以上阻害する試
験化合物を、本発明で用いられるタンパク質と結合して
協調的に転写活性を促進するタンパク質の結合を阻害す
る化合物として選択することができる。

【００４２】本発明のスクリーニング方法で用いる試験
化合物としては、例えば、ペプチド、タンパク質、生体
由来非ペプチド性化合物（糖質、脂質など）、合成化合
物、微生物培養物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織
抽出液などが挙げられ、これら化合物は新規化合物であ
ってもよく、公知化合物であってもよい。本発明のスク
リーニング方法において、本発明で用いられるタンパク
質を産生する能力を有する細胞は、スクリーニングに適
した培地で培養する。培地は、本発明で用いられるタン
パク質の遺伝子発現に影響を与えないものであればいず
れでもよい。本発明で用いられるタンパク質を産生する
能力を有する細胞としては、例えば、がん細胞（例、乳
癌細胞など）や、胎児由来の細胞などが用いられる。ま
た、本発明で用いられるタンパク質の大量発現などを目
的とした場合、前記した本発明のＤＮＡを含有する組換
えベクターを宿主（例えば、ＣＨＯ細胞などの動物細
胞）に形質転換した細胞などが好ましく用いられる。

【００４３】本発明のスクリーニング用キットは、本発
明で用いられるタンパク質、遺伝子または本発明で用い
られるタンパク質を産生する能力を有する細胞を含有す
る。本発明のスクリーニング方法またはスクリーニング
用キットを用いて得られる化合物またはその塩の「塩」
としては、前記した本発明で用いられるタンパク質の塩
と同様のものが用いられる。

【００４４】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、例えば、癌（例、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、
食道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱
癌、子宮癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、血液
腫瘍など）の予防・治療剤、転移抑制剤、転移予防剤と
して有用である。上述の予防・治療剤、転移抑制剤、転
移予防剤として使用する場合、常套手段に従って製剤化
することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、エリキ
シル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁液剤な
どとすることができる。上記化合物またはその塩を上述
の予防・治療剤として使用する場合、常套手段に従って
製剤化することができる。例えば、錠剤、カプセル剤、
エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性溶液、懸濁
液剤などとすることができる。例えば、必要に応じて糖
衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロ
カプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそ
れ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または
懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例
えば、上記化合物またはその塩を生理学的に認められる
担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結
合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求され
る単位用量形態で混和することによって製造することが
できる。これら製剤における有効成分量は指示された範
囲の適当な用量が得られるようにするものである。錠
剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤とし
ては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガン
ト、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースの
ような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸
などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのよう
な潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味
剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような
香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルであ
る場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液
状担体を含有することができる。注射のための無菌組成
物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、
椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸
濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することが
できる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩
水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、
Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム
など）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、ア
ルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール
（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ
ールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソル
ベート８０^TM、ＨＣＯ−５０など）などと併用してもよ
い。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが挙
げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジル
アルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例え
ば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無
痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイ
ンなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリ
エチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジル
アルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合
してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプ
ルに充填される。このようにして得られる製剤は安全で
低毒性であるので、例えば、ヒトまたはその他の温血動
物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、
ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーな
ど）に対して経口的にまたは非経口的に投与することが
できる。前記化合物またはその塩の投与量は、その作
用、対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異は
あるが、例えば、乳癌治療の目的で前記化合物またはそ
の塩を経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇ
として）においては、一日につき前記化合物またはその
塩を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０
ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非
経口的に投与する場合、前記化合物またはその塩の１回
投与量は投与対象、対象疾患などによっても異なる。例
えば、乳癌治療の目的で前記化合物またはその塩を、注
射剤の形で成人（６０ｋｇとして）に投与する場合、一
日につき前記化合物またはその塩を約０．０１〜３０ｍ
ｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ま
しくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与す
るのが好ましい。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに
換算した量を投与することができる。

【００４５】〔２〕本発明で用いられるタンパク質、そ
の部分ペプチドまたはその塩の定量 本発明で用いられる抗体は、本発明で用いられるタンパ
ク質を特異的に認識することができるので、被検液中の
本発明で用いられるタンパク質の定量、特にサンドイッ
チ免疫測定法による定量などに使用することができる。
すなわち、本発明は、（i）本発明で用いられる抗体
と、被検液および標識化された本発明で用いられるタン
パク質とを競合的に反応させ、前記抗体に結合した標識
化された本発明で用いられるタンパク質の割合を測定す
ることを特徴とする被検液中の本発明で用いられるタン
パク質の定量法、および（ii）被検液と担体上に不溶化
した本発明で用いられる抗体および標識化された本発明
で用いられる別の抗体とを同時あるいは連続的に反応さ
せたのち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定すること
を特徴とする被検液中の本発明で用いられるタンパク質
の定量法を提供する。上記（ii）の定量法においては、
一方の抗体が本発明で用いられるタンパク質のＮ端部を
認識する抗体で、他方の抗体が本発明で用いられるタン
パク質のＣ端部に反応する抗体であることが望ましい。

【００４６】また、本発明で用いられるタンパク質に対
するモノクローナル抗体（以下、本発明で用いられるモ
ノクローナル抗体と称する場合がある）を用いて、本発
明で用いられるタンパク質の定量および組織染色等によ
る検出を行うこともできる。これらの目的には、抗体分
子そのものを用いてもよく、また、抗体分子のＦ(ａ
ｂ’)₂ 、Ｆａｂ’、あるいはＦａｂ画分を用いてもよ
い。本発明で用いられる抗体を用いる本発明で用いられ
るタンパク質の定量法は、特に制限されるべきものでは
なく、被検液中の抗原量（例えば、タンパク質量）に対
応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を化学
的または物理的手段により検出し、これを既知量の抗原
を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出する測
定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例え
ば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法およ
びサンドイッチ法が好適に用いられる。感度、特異性の
点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好まし
い。標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤として
は、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発光物
質などが用いられる。放射性同位元素としては、例え
ば、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹³¹Ｉ〕、〔³Ｈ〕、〔¹⁴Ｃ〕などが
用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大きな
ものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β−
グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオキ
シダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍光
物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレッ
センイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質と
しては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ルシ
フェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗体
あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン系
を用いることもできる。

【００４７】抗原または抗体の不溶化は、物理吸着を用
いてもよく、また、通常、タンパク質または酵素等を不
溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用いる方法
でもよい。担体としては、アガロース、デキストラン、
セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレン、ポリア
クリルアミド、シリコン等の合成樹脂、またはガラス等
が挙げられる。サンドイッチ法においては、不溶化した
本発明で用いられるモノクローナル抗体に被検液を反応
させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明で用い
られるモノクローナル抗体を反応させ（２次反応）たの
ち、不溶化担体上の標識剤の活性を測定することによ
り、被検液中の本発明で用いられるタンパク質量を定量
することができる。１次反応と２次反応は逆の順序に行
っても、また、同時に行なってもよく、時間をずらして
行なってもよい。標識化剤および不溶化の方法は前記の
それらに準じることができる。また、サンドイッチ法に
おいて、固相用抗体または標識用抗体に用いられる抗体
は必ずしも１種類である必要はなく、測定感度を向上さ
せる等の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよ
い。サンドイッチ法による本発明で用いられるタンパク
質の測定法においては、１次反応と２次反応に用いられ
る本発明で用いられるモノクローナル抗体は、本発明で
用いられるタンパク質の結合する部位が相異なる抗体が
好ましく用いられる。すなわち、１次反応および２次反
応に用いられる抗体としては、例えば、２次反応で用い
られる抗体が本発明で用いられるタンパク質のＣ端部を
認識する場合、１次反応で用いられる抗体は、好ましく
はＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗体が用いられ
る。

【００４８】競合法においては、被検液中の抗原と標識
抗原とを抗体に対して競合的に反応させたのち、未反応
の標識抗原(Ｆ)と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを
分離し（Ｂ／Ｆ分離）、ＢおよびＦいずれかの標識量を
測定し、被検液中の抗原量を定量する。この方法には、
抗体として可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレ
ングリコール、前記抗体に対する第２抗体などを用いる
液相法、および、第１抗体として固相化抗体を用いる
か、あるいは、第１抗体は可溶性の抗体を用い第２抗体
として固相化抗体を用いる固相法とが用いられる。イム
ノメトリック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを
一定量の標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液
相を分離するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の
標識化抗体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応
の標識化抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分
離する。次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中
の抗原量を定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル
内または溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈
降物の量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、
少量の沈降物しか得られない場合は、レーザーの散乱を
利用するレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられ
る。

【００４９】これらの免疫学的測定法を本発明の定量方
法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の設定
は必要とされない。それぞれの方法における通常の条
件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発明
で用いられるタンパク質の測定系を構築すればよい。こ
れらの一般的な技術手段の詳細については、総説、成書
などを参照することができる。例えば、入江 寛編「ラ
ジオイムノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入
江 寛編「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５
４年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書
院、昭和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定
法」（第２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄
治ら編「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和
６２年発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70（Imm
unochemical Techniques(Part A))、「Methods in ENZY
MOLOGY」 Vol. 73（Immunochemical Techniques(Part
B))、「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 74（Immunochemi
cal Techniques(Part C))、「Methods in ENZYMOLOGY」
Vol.84（Immunochemical Techniques(Part D:Selected
Immunoassays))、「Methodsin ENZYMOLOGY」 Vol. 92（I
mmunochemical Techniques (Part E: Monoclonal Antib
odies and General Immunoassay Methods))、「Methods
in ENZYMOLOGY」 Vol. 121（Immunochemical Technique
s(Part I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antib
odies))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照
することができる。以上のようにして、本発明で用いら
れる抗体を用いることによって、本発明で用いられるタ
ンパク質を感度良く定量することができる。さらには、
本発明で用いられる抗体を用いて本発明で用いられるタ
ンパク質の濃度を定量することにより、本発明で用いら
れるタンパク質が検出されたり、その濃度の増加が認め
られた場合、例えば、癌（例、大腸癌、乳癌、肺癌、前
立腺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎
癌、膀胱癌、子宮癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫
瘍、血液腫瘍など）である、または将来これらの疾患に
罹患する可能性が高いと診断することができる。また、
本発明で用いられる抗体は、体液または組織などの被検
体中に存在する本発明で用いられるタンパク質を検出す
るために使用することができる。また、本発明で用いら
れるタンパク質を精製するために使用する抗体カラムの
作製、精製時の各分画中の本発明で用いられるタンパク
質の検出、被検細胞内における本発明で用いられるタン
パク質の挙動の分析などのために使用することができ
る。

【００５０】〔３〕遺伝子診断 本発明で用いられるＤＮＡは、例えば、プローブとして
使用することにより、ヒトおよびその他の温血動物（例
えば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒ
ツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパン
ジーなど）における本発明で用いられるタンパク質また
はその部分ペプチドをコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例
えば、前記ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異ある
いは発現低下や、前記ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加ある
いは発現過多などの遺伝子診断に有用である。具体的に
は、癌（例、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、食道癌、
胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、子宮
癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、血液腫瘍な
ど）およびその転移の診断（検査）に有用である。本発
明で用いられるＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例
えば、公知のノーザンハイブリダイゼーション、ＰＣＲ
−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomics），第５巻，８
７４〜８７９頁（１９８９年）、プロシージングズ・オ
ブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイ
ズ・オブ・ユーエスエー（Proceedings of the Nationa
l Academy of Sciences of the United States of Amer
ica），第８６巻，２７６６〜２７７０頁（１９８９
年））などにより実施することができる。例えば、ノー
ザンハイブリダイゼーションにより遺伝子（例えば、少
なくともエクソン０を含有する遺伝子）の発現過多が検
出された場合、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ法によりＤＮＡの突然
変異が検出された場合は、例えば、癌（例、大腸癌、乳
癌、肺癌、前立腺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、
脾臓癌、腎癌、膀胱癌、子宮癌、精巣癌、甲状腺癌、膵
臓癌、脳腫瘍、血液腫瘍など）などの疾病である可能性
が高いと診断することができる。

【００５１】〔４〕アンチセンスポリヌクレオチドを含
有する医薬 本発明で用いられるＤＮＡに相補的に結合し、前記ＤＮ
Ａの発現を抑制することができる本発明で用いられるア
ンチセンスポリヌクレオチドは低毒性であり、生体内に
おける本発明で用いられるタンパク質または本発明で用
いられるＤＮＡの機能抑制することができるので、例え
ば、癌（例、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、食道癌、
胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、子宮
癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、血液腫瘍な
ど）の予防・治療剤、転移抑制剤、転移予防剤などとし
て使用することができる。上記アンチセンスポリヌクレ
オチドを上記の予防・治療剤、転移抑制剤、転移予防剤
として使用する場合、公知の方法に従って製剤化し、投
与することができる。例えば、前記アンチセンスポリヌ
クレオチドを用いる場合、前記アンチセンスポリヌクレ
オチドを単独あるいはレトロウイルスベクター、アデノ
ウイルスベクター、アデノウイルスアソシエーテッドウ
イルスベクターなどの適当なベクターに挿入した後、常
套手段に従って、ヒトまたはその他の温血動物（例え
ば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウ
マ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対
して経口的または非経口的に投与することができる。前
記アンチセンスポリヌクレオチドは、そのままで、ある
いは摂取促進のために補助剤などの生理学的に認められ
る担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテ
ーテルのようなカテーテルによって投与できる。前記ア
ンチセンスポリヌクレオチドの投与量は、対象疾患、投
与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、
乳がんの治療の目的で本発明で用いられるアンチセンス
ポリヌクレオチドを経口投与する場合、成人（体重６０
ｋｇ）に対し、一日につき前記アンチセンスポリヌクレ
オチドを約０．１〜１００ｍｇ投与する。さらに、前記
アンチセンスポリヌクレオチドは、組織や細胞における
本発明で用いられるＤＮＡの存在やその発現状況を調べ
るための診断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用
することもできる。上記アンチセンスポリヌクレオチド
と同様に、本発明のタンパク質をコードするＲＮＡの一
部を含有する二重鎖ＲＮＡ、本発明のタンパク質をコー
ドするＲＮＡの一部を含有するリボザイムなども、本発
明の遺伝子の発現を抑制することができ、生体内におけ
る本発明で用いられるタンパク質または本発明で用いら
れるＤＮＡの機能を抑制することができるので、例え
ば、癌（例、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、食道癌、
胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、子宮
癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、血液腫瘍な
ど）などの癌の予防・治療剤、転移抑制剤、転移予防剤
などとして使用することができる。二重鎖ＲＮＡは、公
知の方法（例、Nature, 411巻, 494頁, 2001年）に準じ
て、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計して製
造することができる。リボザイムは、公知の方法（例、
TRENDS in Molecular Medicine, 7巻, 221頁, 2001年）
に準じて、本発明のポリヌクレオチドの配列を基に設計
して製造することができる。例えば、本発明のタンパク
質をコードするＲＮＡの一部に公知のリボザイムを連結
することによって製造することができる。本発明のタン
パク質をコードするＲＮＡの一部としては、公知のリボ
ザイムによって切断され得る本発明のＲＮＡ上の切断部
位に近接した部分（ＲＮＡ断片）が挙げられる。上記の
二重鎖ＲＮＡまたはリボザイムを上記予防・治療剤とし
て使用する場合、アンチセンスポリヌクレオチドと同様
にして製剤化し、投与することができる。

【００５２】〔５〕本発明で用いられる抗体を含有する
医薬 本発明で用いられるタンパク質の活性を中和する作用を
有する本発明で用いられる抗体は、例えば、癌（例、大
腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、
胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、子宮癌、精巣癌、甲状
腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、血液腫瘍など）などの予防・治
療剤、転移抑制剤、転移予防剤などとして使用すること
ができる。本発明で用いられる抗体を含有する上記予防
・治療剤、転移抑制剤、転移予防剤などは低毒性であ
り、そのまま液剤として、または適当な剤型の医薬組成
物として、ヒトまたはその他の温血動物（例えば、マウ
ス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ト
リ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）に対して経
口的または非経口的に投与することができる。投与量
は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルートなどによっ
ても異なるが、例えば、成人の乳癌の治療・予防のため
に使用する場合には、本発明で用いられる抗体を１回量
として、通常０.０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程度、好ま
しくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度、さらに好まし
くは０.１〜５ｍｇ／ｋｇ体重程度を、１日１〜５回程
度、好ましくは１日１〜３回程度、静脈注射により投与
するのが好都合である。他の非経口投与および経口投与
の場合もこれに準ずる量を投与することができる。症状
が特に重い場合には、その症状に応じて増量してもよ
い。本発明で用いられる抗体は、それ自体または適当な
医薬組成物として投与することができる。上記投与に用
いられる医薬組成物は、上記抗体またはその塩と薬理学
的に許容され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含む
ものである。かかる組成物は、経口または非経口投与に
適する剤形として提供される。すなわち、例えば、経口
投与のための組成物としては、固体または液体の剤形、
具体的には錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含
む）、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセ
ル剤を含む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげら
れる。かかる組成物は公知の方法によって製造され、製
剤分野において通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦
形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦
形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マ
グネシウムなどが用いられる。

【００５３】非経口投与のための組成物としては、例え
ば、注射剤、坐剤などが用いられる。注射剤は静脈注射
剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤
などの剤形を包含する。前記注射剤は、公知の方法に従
って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射剤に用
いられる無菌の水性または油性液に溶解、懸濁または乳
化することによって調製する。注射用の水性液として
は、例えば、生理食塩水、ブドウ糖、その他の補助薬を
含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、例え
ば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール
（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、
ＨＣＯ−５０（polyoxyethylene（50 mol）adduct of h
ydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。油
性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いられ
る。溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通
常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられ
る坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に
混合することによって調製される。

【００５４】上記の経口用または非経口用医薬組成物
は、活性成分の投与量に適合するような投薬単位の剤形
に調製されることが好都合である。かかる投薬単位の剤
形としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプ
ル）、坐剤などが例示され、それぞれの投薬単位剤形当
たり通常５〜５００ｍｇ、とりわけ注射剤では５〜１０
０ｍｇ、その他の剤形では１０〜２５０ｍｇの上記抗体
が含有されていることが好ましい。なお前記した各組成
物は、上記抗体との配合により好ましくない相互作用を
生じない限り他の活性成分を含有してもよい。

【００５５】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commission on Biochemical Nomenclature による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
り、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体
があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すもの
とする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸

【００５６】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル Ｅｔ ：エチル Ｂｕ ：ブチル Ｐｈ ：フェニル ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｃｌ₂−Ｂｚｌ ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １，２，３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：１−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボ キシイミド ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド

【００５７】本願明細書の配列表の配列番号は、以下の
配列を示す。 〔配列番号：１〕ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１のエクソン
０の塩基配列を示す。 〔配列番号：２〕配列番号：１２で表される塩基配列が
コードするタンパク質のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：３〕実施例２で得られた全長ＴｙｐｅＩＩ
ＣＢＦＡ１のＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：４〕実施例２で得られたエクソン６欠損型
ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１のＤＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：５〕実施例２で得られたエクソン４および
６欠損型ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１のＤＮＡの塩基配列
を示す。 〔配列番号：６〕実施例１で用いられたプライマーの塩
基配列を示す。 〔配列番号：７〕実施例１で用いられたプライマーの塩
基配列を示す。 〔配列番号：８〕実施例１で用いられたプライマーの塩
基配列を示す。 〔配列番号：９〕実施例１で用いられたプライマーの塩
基配列を示す。 〔配列番号：１０〕実施例２で用いられたプライマーの
塩基配列を示す。 〔配列番号：１１〕実施例２で用いられたプライマーの
塩基配列を示す。 〔配列番号：１２〕配列番号：１で表される塩基配列の
第６８番目〜第１２４番目の塩基配列を示す。

【００５８】後述の実施例２で得られた形質転換体Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＴＯＰ１０／ｐＴＢ２２
２７は、２００１年５月１７日から茨城県つくば市東１
丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５６６）
の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託セン
ターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７５９７として、２０
０１年４月２４日から大阪府大阪市淀川区十三本町２−
１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財団法人発
酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６６２１とし
て寄託されている。後述の実施例２で得られた形質転換
体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＴＯＰ１０／ｐＴ
Ｂ２２２６は、２００１年５月１７日から茨城県つくば
市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０５−８５
６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄
託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７５９６とし
て、２００１年４月２４日から大阪府大阪市淀川区十三
本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８６）の財
団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ １６６
２０として寄託されている。後述の実施例２で得られた
形質転換体Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＴＯＰ１
０／ｐＴＢ２２２５は、２００１年５月１７日から茨城
県つくば市東１丁目１番地１ 中央第６（郵便番号３０
５−８５６６）の独立行政法人産業技術総合研究所 特
許生物寄託センターに寄託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７５９
５として、２００１年４月２４日から大阪府大阪市淀川
区十三本町２−１７−８５（郵便番号５３２−８６８
６）の財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に寄託番号ＩＦＯ
１６６１９として寄託されている。

【００５９】

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法は、モレキュ
ラー・クローニング（Molecular cloning）, ２ｎｄ
（J.Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Pres
s, 1989）に記載の方法に従った。 実施例１ １）主要癌組織におけるＣＢＦＡ１の発現 同一癌患者で病変部と正常部における遺伝子発現を比較
することができるＭａｔｃｈｅｄ ｃＤＮＡ ｐａｉｒ
（ＣＬＯＮＴＥＣＨ）をテンプレートとしてプライマー
１（配列番号：６）およびプライマー２（配列番号：
７）を用いてマニュアルに従いＰＣＲを行った。プライ
マー１およびプライマー２は、エクソン４およびエクソ
ン７に基づき、それぞれ設計した。結果を図１に示す。
これより、１４例中５例（乳癌患者の２番、３番および
４番、肺癌患者の３番、結腸癌患者の３番）で癌組織の
みに、１例（結腸癌患者の５番）で癌組織における発現
が亢進していることがわかった。 ２）乳癌組織におけるＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１の発現 上記１）において、乳癌患者４例中３例と高頻度でＣＢ
ＦＡ１が発現していることがわかったので、次にＢｒｅ
ａｓｔ Ｔｕｍｏｒ ｃＤＮＡ ｐａｎｅｌ（ＢＩＯＣＨ
ＡＩＮ）を用い、同様にＰＣＲを行い、乳癌におけるＣ
ＢＦＡ１の発現を調べた。結果を図２に示す。これよ
り、乳癌患者８例中５例（２番、３番、５番、６番およ
び８番）でＣＢＦＡ１が発現していることがわかった。
次に、ＴｙｐｅＩ ＣＢＦＡ１特異的な配列として、エ
クソン１およびエクソン７に基づき、プライマー２（配
列番号：７）およびプライマー３（配列番号：８）をそ
れぞれ設計した。ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１特異的な配
列として、エクソン０およびエクソン７に基づき、プラ
イマー２（配列番号：７）およびプライマー４（配列番
号：９）をそれぞれ設計した。上記の乳癌患者５例につ
いて、プライマー２およびプライマー３を用いて、同様
にＰＣＲを行い、ＴｙｐｅＩ ＣＢＦＡ１の発現を調べ
た。さらに、プライマー２およびプライマー４を用い
て、同様にＰＣＲを行い、ＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１の
発現を調べた。結果を図３に示す。ＴｙｐｅＩＩ ＣＢ
ＦＡ１の発現は、５例全てで認められた。これより、乳
癌患者で発現しているＣＢＦＡ１は、ＴｙｐｅＩＩ Ｃ
ＢＦＡ１が主要であることがわかった。なお、ここで使
用したｃＤＮＡはβアクチン発現量を基に補正した量を
用いた。

【００６０】実施例２ ＢＩＯ−ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＰＡＲＴＮＥＲＳ社から購
入した乳がん組織（３例）由来のｔｏｔａｌ ＲＮＡを
用いて、まずｃＤＮＡを調製した。ｃＤＮＡ調製はラン
ダム６マーを使用し、ＴｈｅｒｍｏＳｃｒｉｐｔ ＲＴ−
ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（GIBCO）添付のプロトコールに従
って行った。得られたｃＤＮＡを鋳型として、２種のプ
ライマー（配列番号：１０および配列番号：１１）、Ｐ
ｆｕＴＵＲＢＯ ＤＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（STRATA
GENE）を用いてＰＣＲを行い、ｐＣＲｂｌｕｎｔ（INVI
TROGEN）にクローニングし、大腸菌ＴＯＰ１０（INVITR
OGEN）に導入後、塩基配列を決定した。その結果、乳が
ん患者３例中２例より、エクソン４および６欠損型Ｔｙ
ｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１（配列番号：５）が、１例よりエ
クソン６欠失型ＴｙｐｅＩＩＣＢＦＡ１(配列番号：
４）が得られ、いずれもＴｙｐｅＩＩ ＣＢＦＡ１とし
ては新規なアイソフォームであることがわかった。それ
ぞれの形質転換体を、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌ
ｉ ＴＯＰ１０／ｐＴＢ２２２７、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ ＴＯＰ１０／ｐＴＢ２２２６と命名し
た。一方、ヒト正常軟骨細胞由来ＲＮＡ（BIOCHAIN社）
を用いて、同様にして全長クローニングを行い、エクソ
ン０から７を全て含むクローンを得た。前記クローンが
含有するＤＮＡの塩基配列を、配列番号：３に示す。形
質転換体を、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＴＯＰ
１０／ｐＴＢ２２２５と命名した。配列番号：３、配列
番号：４および配列番号：５のエクソン−１（エクソン
０の上流）の長さは、全て異なっていることも判明し
た。

【００６１】

【発明の効果】本発明のスクリーニング法により得られ
る化合物、本発明の抗体、本発明のアンチセンスポリヌ
クレオチドなどは、例えば癌（例、大腸癌、乳癌、肺
癌、前立腺癌、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓
癌、腎癌、膀胱癌、子宮癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓
癌、脳腫瘍、血液腫瘍など）の予防治療剤、転移抑制剤
または転移予防剤として有用な化合物を得ることができ
る。また、本発明で用いられるＤＮＡ、本発明の抗体、
本発明のアンチセンスポリヌクレオチドなどを用いるこ
とにより、癌（例、大腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、食
道癌、胃癌、肝臓癌、胆道癌、脾臓癌、腎癌、膀胱癌、
子宮癌、精巣癌、甲状腺癌、膵臓癌、脳腫瘍、血液腫瘍
など）およびその転移を診断または検査することが可能
である。

【００６２】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Takeda Chemical Industries, Ltd. <120> Prophylactic, remedy and diagnostic agent for cancer <130> P02-0085 <150> JP2001-217186 <151> 2001-07-17 <160> 12 <210> 1 <211> 126 <212> DNA <213> Human <400> 1 tttaaggctg caagcagtat ttacaacaga gggtacaagt tctatctgaa aaaaaaaagg 60 agggactatg gcatcaaaca gcctcttcag cacagtgaca ccatgtcagc aaaacttctt 120 ttggga 126 <210> 2 <211> 19 <212> PRT <213> Human <400> 2 Met Ala Ser Asn Ser Leu Phe Ser Thr Val Thr Pro Cys Gln Gln Asn 5 10 15 Phe Phe Trp <210> 3 <211> 1694 <212> DNA <213> Human <400> 3 actaccagcc accgagacca acagatttaa ggctgcaagc agtatttaca acagagggta 60 caagttctat ctgaaaaaaa aaaggaggga ctatggcatc aaacagcctc ttcagcacag 120 tgacaccatg tcagcaaaac ttcttttggg atccgagcac cagccggcgc ttcagccccc 180 cctccagcag cctgcagccc ggcaaaatga gcgacgtgag cccggtggtg gctgcgcaac 240 agcagcagca acagcagcag cagcaacagc agcagcagca gcagcaacag cagcagcagc 300 agcaggaggc ggcggcggcg gctgcggcgg cagcggcggc tgcggcggcg gcagctgcag 360 tgccccggtt gcggccgccc cacgacaacc gcaccatggt ggagatcatc gccgaccacc 420 cggccgaact cgtccgcacc gacagcccca acttcctgtg ctcggtgctg ccctcgcact 480 ggcgctgcaa caagaccctg cccgtggcct tcaaggtggt agccctcgga gaggtaccag 540 atgggactgt ggttactgtc atggcgggta acgatgaaaa ttattctgct gagctccgga 600 atgcctctgc tgttatgaaa aaccaagtag caaggttcaa cgatctgaga tttgtgggcc 660 ggagtggacg aggcaagagt ttcaccttga ccataaccgt cttcacaaat cctccccaag 720 tagctaccta tcacagagca attaaagtta cagtagatgg acctcgggaa cccagaaggc 780 acagacagaa gcttgatgac tctaaaccta gtttgttctc tgaccgcctc agtgatttag 840 ggcgcattcc tcatcccagt atgagagtag gtgtcccgcc tcagaaccca cggccctccc 900 tgaactctgc accaagtcct tttaatccac aaggacagag tcagattaca gaccccagac 960 aggcacagtc ttccccgccg tggtcctatg accagtctta cccctcctac ctgagccaga 1020 tgacgtcccc gtccatccac tctaccaccc cgctgtcttc cacacggggc actgggcttc 1080 ctgccatcac cgatgtgcct aggcgcattt cagatgatga cactgccacc tctgacttct 1140 gcctctggcc ttccactctc agtaagaaga gccaggcagg tgcttcagaa ctgggccctt 1200 tttcagaccc caggcagttc ccaagcattt catccctcac tgagagccgc ttctccaacc 1260 cacgaatgca ctatccagcc acctttactt acaccccgcc agtcacctca ggcatgtccc 1320 tcggtatgtc cgccaccact cactaccaca cctacctgcc accaccctac cccggctctt 1380 cccaaagcca gagtggaccc ttccagacca gcagcactcc atatctctac tatggcactt 1440 cgtcaggatc ctatcagttt cccatggtgc cggggggaga ccggtctcct tccagaatgc 1500 ttccgccatg caccaccacc tcgaatggca gcacgctatt aaatccaaat ttgcctaacc 1560 agaatgatgg tgttgacgct gatggaagcc acagcagttc cccaactgtt ttgaattcta 1620 gtggcagaat ggatgaatct gtttggcgac catattgaaa ttcctcagca gtggcccagt 1680 ggtatctggg ggcc 1694 <210> 4 <211> 1631 <212> DNA <213> Human <400> 4 actaccagcc accgagacca acagagtcat ttaaggctgc aagcagtatt tacaacagag 60 ggtacaagtt ctatctgaaa aaaaaaggag ggactatggc atcaaacagc ctcttcagca 120 cagtgacacc atgtcagcaa aacttctttt gggatccgag caccagccgg cgcttcagcc 180 ccccctccag cagcctgcag cccggcaaaa tgagcgacgt gagcccggtg gtggctgcgc 240 aacagcagca gcaacagcag cagcagcaac agcagcagca gcagcagcaa cagcagcagc 300 agcagcagga ggcggcggcg gcggctgcgg cggcggcggc ggctgcggcg gcggcagctg 360 cagtgccccg gttgcggccg ccccacgaca accgcaccat ggtggagatc atcgccgacc 420 acccggccga actcgtccgc accgacagca ccaacttcct gtgctcggtg ctgccctcgc 480 actggcgctg caacaagacc ctgcccgtgg ccttcaaggt ggtagccctc ggagaggtac 540 cagatgggac tgtggttact gtcatggcgg gtaacgatga aaattattct gctgagctcc 600 ggaatgcctc tgctgttatg aaaaaccaag tagcaaggtt caacgatctg agatttgtgg 660 gccggagtgg acgaggcaag agtttcacct tgaccataac cgtcttcaca aatcctcccc 720 aagtagctac ctatcacaga gcaattaaag ttacagtaga tggacctcgg gaacccagaa 780 ggcacagaca gaagcttgat gactctaaac ctagtttgtt ctctgaccgc ctcagtgatt 840 tagggcgcat tcctcatccc agtatgagag taggtgtccc gcctcagaac ccacggccct 900 ccctgaactc tgcaccaagt ccttttaatc cacaaggaca gagtcagatt acagacccca 960 ggcaggcaca gtcttccccg ccgtggtcct atgaccagtc ttacccctcc tacctgagcc 1020 agatgacgtc cccgtccatc cactctacca ccccgctgtc ttccacacgg ggcactgggc 1080 ttcctgccat caccgatgtg cctaggcgca tttcaggtgc ttcagaactg ggcccttttt 1140 cagaccccag gcagttccca agcatttcat ccctcactga gagccgcttc tccaacccac 1200 gaatgcacta tccagccacc tttacttaca ccccgccagt cacctcaggc atgtccctcg 1260 gtatgtccgc caccactcac taccacacct acctgccacc accctacccc ggctcttccc 1320 aaagccagag tggacccttc cagaccagca gcactccata tctctactat ggcacttcgt 1380 caggatccta tcagtttccc atggtgccgg ggggagaccg gtctccttcc agaatgcttc 1440 cgccatgcac caccacctcg aatggcagca cgctattaaa tccaaatttg cctaaccaga 1500 atgatggtgt tgacgctgat ggaagccaca gcagttcccc aactgttttg aattctagtg 1560 gcagaatgga tgaatctgtt tggcgaccat attgaaattc ctcagcagtg gcccagtggt 1620 atctgggggc c 1631 <210> 5 <211> 1492 <212> DNA <213> Human <400> 5 actaccagcc accgagacca acagagtcag tgagtgctct ctaaccacag tctatgcagt 60 aatatttaag gctgcaagca gtatttacaa cagagggtac aagttctatc tgaaaaaaaa 120 aggagggact atggcatcaa acagcctctt cagcacagtg acaccatgtc agcaaaactt 180 cttttgggat ccgagcacca gccggcgctt cagccccccc tccagcagcc tgcagcccgg 240 caaaatgagc gacgtgagcc cggtggtggc tgcgcaacag cagcagcaac agcagcagca 300 gcaacagcag cagcagcagc agcaacagca gcagcagcag caggaggcgg cggcggcggc 360 tgcggcggcg gcggcggctg cggcggcggc agctgcagtg ccccggttgc ggccgcccca 420 cgacaaccgc accatggtgg agatcatcgc cgaccacccg gccgaactcg tccgcaccga 480 cagccccaac ttcctgtgct cggtgctgcc ctcgcactgg cgctgcaaca agaccctgcc 540 cgtggccttc aaggtggtag ccctcggaga ggtaccagat gggactgtgg ttactgtcat 600 ggcgggtaac gatgaaaatt attctgctga gctccggaat gcctctgctg ttatgaaaaa 660 ccaagtagca aggttcaacg atctgagatt tgtgggccgg agtggacgag gcaagagttt 720 caccttgacc ataaccgtct tcacaaatcc tccccaagta gctacctatc acagagcaat 780 taaagttaca gtagatggac ctcgggaacc cagaaacccc aggcaggcac agtcttcccc 840 gccgtggtcc tatgaccagt cttacccctc ctacctgagc cagatgacgt ccccgtccat 900 ccactctacc accccgctgt cttccacacg gggcactggg cttcctgcca tcaccgatgt 960 gcctaggcgc atttcaggtg cttcagaact gggccctttt tcagacccca ggcagttccc 1020 aagcatttca tccctcactg agagccgctt ctccaaccca cgaatgcact atccagccac 1080 ctttacttac accccgccag tcacctcagg catgtccctc ggtatgtccg ccaccactca 1140 ctaccacacc tacctgccac caccctaccc cggctcttcc caaagccaga gtggaccctt 1200 ccagaccagc agcactccat atctctacta tggcacttcg tcaggatcct atcagtttcc 1260 catggtgccg gggggagacc ggtctccttc cagaatgctt ccgccatgca ccaccacctc 1320 gaatggcagc acgctattaa atccaaattt gcctaaccag aatgatggtg ttgacgctga 1380 tggaagccac agcagttccc caactgtttt gaattctagt ggcagaatgg atgaatctgt 1440 ttggcgacca tattgaaatt cctcagcagt ggcccagtgg tatctggggg cc 1492 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer used in Example 1 <400> 6 gaacccacgg ccctccctga ac 22 <210> 7 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer used in Example 1 <400> 7 ccgggcacca tgggaaactg atagga 26 <210> 8 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer used in Example 1 <400> 8 tcccccggcc acttcgctaa cttg 24 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer used in Example 1 <400> 9 ggagggacta tggcatcaaa cagc 24 <210> 10 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer used in Example 1 <400> 10 actaccagcc accgagacca acag 24 <210> 11 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer used in Example 1 <400> 11 ggcccccaga taccact 17 <210> 12 <211> 57 <212> DNA <213> Human <400> 12 atggcatcaa acagcctctt cagcacagtg acaccatgtc agcaaaactt cttttgg 57

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１で行われた、同一癌患者での病変部と
正常部における遺伝子発現の結果を示す。

【図２】実施例１で行われた、乳癌におけるＣＢＦＡ１
の発現の結果を示す。

【図３】実施例１で行われた、乳癌患者におけるＴｙｐ
ｅＩ ＣＢＦＡ１の発現結果を示す。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 35/04 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｃ０８４ Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 ４Ｃ０８６ 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/574 Ｚ 33/50 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/574 5/00 Ａ Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA78 4B024 AA01 AA11 CA04 DA06 EA04 HA01 4B063 QA01 QA05 QA18 QQ53 QR48 QR51 QR75 QR77 QS33 QX02 QX07 4B064 AG01 CA02 CA10 CC24 DA01 DA13 4B065 AA26X AA93Y AB01 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA13 AA17 BA35 BA44 CA11 CA53 CA56 CA59 NA14 ZB262 4C086 AA01 AA03 EA16 MA01 MA04 NA13 NA14 ZB26

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：１で表される塩基配列と同一
   もしくは実質的に同一の塩基配列を含有するＤＮＡを用
   いることを特徴とする前記ＤＮＡを含有する遺伝子の発
   現を抑制する化合物またはその塩のスクリーニング方
   法。
2. 【請求項２】 配列番号：２で表されるアミノ酸配列と
   同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
   ンパク質またはその塩を産生する能力を有する細胞を、
   試験化合物存在下および非存在下に培養し、試験化合物
   存在下および非存在下のそれぞれの場合の前記タンパク
   質量または前記タンパク質をコードするｍＲＮＡ量を測
   定することを特徴とする請求項１記載のスクリーニング
   方法。
3. 【請求項３】 配列番号：２で表されるアミノ酸配列と
   同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
   ンパク質またはその塩を産生する能力を有する細胞が、
   配列番号：１で表される塩基配列と同一もしくは実質的
   に同一の塩基配列を含有するＤＮＡを含有する組換えベ
   クターで形質転換された形質転換体である請求項２記載
   のスクリーニング方法。
4. 【請求項４】 ＤＮＡが染色体ＤＮＡである請求項１〜
   ３記載のスクリーニング方法。
5. 【請求項５】 配列番号：２で表されるアミノ酸配列と
   同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
   ンパク質を用いることを特徴とする前記タンパク質の活
   性を抑制する化合物またはその塩のスクリーニング方
   法。
6. 【請求項６】 活性が転写活性である請求項５記載のス
   クリーニング方法。
7. 【請求項７】 請求項１〜６のいずれかに記載のスクリ
   ーニング方法で得られる化合物またはその塩を含有する
   癌の予防・治療剤、癌転移抑制剤または癌転移予防剤。
8. 【請求項８】 配列番号：１で表される塩基配列と同一
   もしくは実質的に同一の塩基配列を含有するＤＮＡを含
   有する癌またはその転移の診断薬。
9. 【請求項９】 配列番号：１で表される塩基配列と同一
   もしくは実質的に同一の塩基配列を含有するＤＮＡを用
   いる癌またはその転移の診断方法。
10. 【請求項１０】 配列番号：１で表される塩基配列と同
    一もしくは実質的に同一の塩基配列に相補的な塩基配列
    またはその一部分を含有するアンチセンスポリヌクレオ
    チドを含有する医薬。
11. 【請求項１１】 癌の予防・治療剤、癌転移抑制剤また
    は癌転移予防剤である請求項１０記載の医薬。
12. 【請求項１２】 配列番号：３、配列番号：４または配
    列番号：５で表される塩基配列と同一または実質的に同
    一の塩基配列を含有するＤＮＡ。
13. 【請求項１３】 配列番号：３、配列番号：４または配
    列番号：５で表される塩基配列からなる請求項１２記載
    のＤＮＡ。
14. 【請求項１４】 請求項１２記載のＤＮＡを含有する組
    換えベクター。
15. 【請求項１５】 請求項１４記載の組換えベクターで形
    質転換された形質転換体。
16. 【請求項１６】 請求項１５記載の形質転換体を培養
    し、配列番号：２で表されるアミノ酸配列と同一もしく
    は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質を
    生成せしめることを特徴とする前記タンパク質またはそ
    の塩の製造法。
17. 【請求項１７】 配列番号：１で表される塩基配列と同
    一もしくは実質的に同一の塩基配列を含有するＤＮＡ
    が、請求項１２記載のＤＮＡである請求項１記載のスク
    リーニング方法。
18. 【請求項１８】 哺乳動物に対し、請求項１〜６のいず
    れかに記載のスクリーニング方法で得られる化合物また
    はその塩の有効量を投与することを特徴とする癌の予防
    ・治療方法、癌転移抑制方法または癌転移予防方法。
19. 【請求項１９】 癌の予防・治療剤、癌転移抑制剤また
    は癌転移予防剤を製造するための請求項１〜６のいずれ
    かに記載のスクリーニング方法で得られる化合物または
    その塩の使用。