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JP2003102467A - 炭化水素資化微細藻類およびそれを用いたバイオレメディエーション方法 - Google Patents

炭化水素資化微細藻類およびそれを用いたバイオレメディエーション方法

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JP2003102467A
JP2003102467A JP2001305283A JP2001305283A JP2003102467A JP 2003102467 A JP2003102467 A JP 2003102467A JP 2001305283 A JP2001305283 A JP 2001305283A JP 2001305283 A JP2001305283 A JP 2001305283A JP 2003102467 A JP2003102467 A JP 2003102467A
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Japan
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microalgae
hydrocarbons
hydrocarbon
oil
salt concentration
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Naoto Urano
直人 浦野
Ryohei Ueno
良平 上野
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Japan Science and Technology Corp
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  • Processing Of Solid Wastes (AREA)
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 広範囲なpH、温度および塩濃度の土壌
や河川、湖沼、海洋等において実施できるバイオレメデ
ィエーションの方法と、それに適用するための微生物と
して、高温度、高塩濃度を含む広い塩濃度範囲、あるい
は広いpH範囲内においても炭化水素を資化できる微生
物を提供する。 【解決手段】 炭化水素を資化する微細藻類であって、
30〜40℃の温度範囲において炭化水素を資化できる
微細藻類を用いる。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】この出願の発明は、炭化水素
を資化できる微細藻類とそれを用いた排水の浄化方法に
関するものである。さらに詳しくは、この出願の発明は
高温度、高塩濃度を含む広い塩濃度範囲、さらには広い
pH範囲において、炭化水素を資化できる微細藻類と、
それを用いたバイオレメディエーション方法に関するも
のである。
【0002】
【従来技術とその課題】近年大きな社会問題となってい
る海洋汚染では、その発生源として、有害化学物質、油
類、放射性物質、廃棄物の投棄、富栄養価物などが知ら
れている。
【0003】中でも、油類による汚染は、原油生産地域
のみならず、油脂を使用あるいは生産する工場、たとえ
ば食品加工場等の周辺においても問題となっている。ま
た、油田から原油を搬送する際にタンカーの事故が起こ
れば、広い海域に渡り水質汚染が起こり、海鳥、哺乳動
物、魚介類等の周辺環境に甚大な被害をもたらす。例え
ば、海鳥や海洋性の哺乳動物は、羽毛や皮膚表面に疎水
性物質を有し、海水との直接接触を防止して体温を維持
しているが、油が付着すると、この疎水性物質が失われ
るため体温が低下し、生存できなくなる。また、これら
の動物は海水から余分な塩分を排出しながら水分を補給
するが、油の付着によりこの機能も失われるため、脱水
症状を起こす。さらに、海草や魚介類は、表面に油が付
着することにより光合成や呼吸ができなくなり、死滅す
る。
【0004】従来、タンカーや油田の事故により一過的
に水域に流出した原油や石油は、オイルフェンスにより
その広がりを防止し、界面活性剤や有機溶剤からなる油
処理剤を散布することにより、油が水と混合するように
して処理していた。しかし、油処理剤を使用する方法で
は、流出した油類は、小さな油滴となり、水と混合さ
れ、やがて海洋中に希釈されてその被害の規模を縮小で
きるものの、根本的な解決にはならない。また、工業排
水等に少量含まれる油類の処理には適用できるものでは
なかった。
【0005】そこで、光や熱により油を分解する方法
や、活性炭や薬剤を用いた物理化学的吸着等の方法も提
案され、一部で使用されている。しかし、これらの方法
は、光や熱、あるいは大量の試薬を用いる上、浄化のた
めの機械設備等を必要とするため、コストが高い、タン
カー事故等の遠洋における油の処理には適用しにくい、
広範に渡る汚染には対応できないなどの問題があった。
【0006】そこで、近年、環境適応性の高い方法とし
て、バイオレメディエーションが注目されている。バイ
オレメディエーションは、浄化機能を有する各種の微生
物を用いて、環境汚染の著しい水域や土壌における油等
の炭化水素や富栄養価物等を乳化、分解、資化する方法
であり、常温・常圧で行うためにエネルギーをほとんど
必要としない。したがって、コストが低い、汚染の現場
で直接的に処理を行うことができる、油田や工場の操業
中であっても浄化処理を行うことができる、広範囲に渡
る汚染を浄化することができる、などの利点を有する。
【0007】このようなバイオレメディエーションで用
いられる微生物としては、各種のものが知られている。
たとえば、Agrobacterium属やRodococcas属の油分解性
バクテリアが、高い炭化水素分解性を示すものとして報
告されている(Biosci.Biotechnol.Biochem., 59, 11,
2159-2161 (1995))。また、石油分解酵母(Candidamal
tosa)は、低いpH領域においても高い活性を示すもの
として報告されている(Wolf, K., ed, Non-convention
al Yeast in Biotechnology, pp.426-430 (1996))。し
かし、これらのバクテリアは、低いpHにおける分解能
が低く、酵母は、30℃以上の高温およびpH6.5以
上では活性が著しく低下するため、高温地域では使用で
きないという問題があった。
【0008】さらに、酵母様の形態を示す真核微生物で
あるPrototheca属、中でもPrototheca hydrocarboneaや
Prototheca zopfii等の緑藻が石油分解性を有すること
が報告されているが、これらの育成及び分解の条件は、
pH3〜9、塩化ナトリウム濃度0.8〜2.4重量
%、25℃以下であり、限られた環境下においてのみ、
活性を示す。とくに30℃以上を超える温度では、生育
及び油成分の分解は不可能とされていた(Appl.Enviro
n.Microb., p.333-336 (1983); System.Appl.Microbio
l.5, 119-123 (1984))。一般的に海水の塩濃度は約
3.5重量%であるため、従来報告されているProtothe
ca属の藻類は、海水からの油成分の分解・浄化には使用
できない。また土壌汚染に対しては、使用できる温度と
塩濃度の範囲が限定されているため、沿岸地域や気温の
高い地域では使用できなかったのが実情である。
【0009】したがって、この出願の発明は、以上のと
おりの問題点を解決し、広範囲なpH、温度および塩濃
度の土壌や河川、湖沼、海洋等において実施できるバイ
オレメディエーションの方法と、それに適用するための
微生物として、高温度、高塩濃度を含む広い塩濃度範
囲、あるいは広いpH範囲においても炭化水素を資化で
きる微生物を提供することを課題としている。
【0010】
【課題を解決するための手段】この出願の発明は、以上
のとおりの課題を解決するものとして、まず、第1に
は、炭化水素を資化する微細藻類であって、30〜40
℃の温度領域において炭化水素を資化できることを特徴
とする微細藻類を提供する。
【0011】この出願の発明は、第2には、0〜2Mの
塩濃度範囲で炭化水素を資化できる前記の微細藻類を、
第3には、pH3〜9の範囲で炭化水素を資化できる前
記いずれかの微細藻類を、第4には、バイオサーファク
タント能を有する前記いずれかの微細藻類を提供する。
【0012】この出願の発明は、また、第5には、前記
の微細藻類がPrototheca属の微細藻類であること、およ
び、第6には、前記のPrototheca属に属する微細藻類が
Prototheca zopfii RND-16(Ferm P-18543)であること
をその態様として提供する。
【0013】さらに、第7には、この出願の発明は、少
なくとも前記いずれかの微細藻類を用いることを特徴と
するバイオレメディエーション方法を提供する。
【0014】そして、この出願の発明は、第8には、炭
化水素を含有する排水を浄化する方法であって、少なく
とも、排水に前記いずれかの微細藻類を接触させる工程
を有することを特徴とするバイオレメディエーション方
法を、第9には、炭化水素によって汚染された土壌を浄
化する方法であって、少なくとも、汚染土壌に前記いず
れかの微細藻類を接触させる工程を有することを特徴と
するバイオレメディエーション方法をも提供する。
【0015】
【発明の実施の形態】この出願の発明者らは、鋭意研究
により、静岡県伊豆蓮台寺温泉の40℃および35.5
℃の排水中から分離した酵母様微生物12株の中に、広
範囲なpH領域および塩濃度において炭素水素を資化す
る微細藻類を見出し、本願発明に至ったものである。具
体的には、本願発明の微細藻類は、30〜40℃の温度
範囲、pH3〜9の範囲、0〜2Mの塩濃度範囲で炭化
水素を資化できるものである。
【0016】また、後述の実施例からも明らかなよう
に、本願発明の微細藻類は、炭化水素を資化する際に、
界面活性剤成分を分泌し、石油等の炭化水素成分を乳化
して油滴を形成した後、その油滴に入り込み増殖する。
すなわち、この発明の微細藻類は、バイオサーファクタ
ント能を有するものでもある。
【0017】本発明者らは、この微細藻類についてさら
に研究を進め、18SrDNAの塩基配列による系統解析から
この微細藻類がPrototheca zopfii var. hydrocaronea
に属することを明らかにした。また、この微細藻類は、
Prototheca zopfiiと100%の確率で単系統を形成す
ると同時に、同じ従属栄養のPrototheca属であるProtot
heca wickerhamiiよりも独立栄養のクロレラであるAuxe
nochlorella protothecoidesに近縁であることも明らか
にされている。
【0018】さらに、この出願の発明の微細藻類は、従
来報告されているPrototheca zopfiiには見られない次
のような特徴を有するものである。
【0019】(a)炭化水素を資化してエタノールとす
る (b)一般培地で、40℃以上の高い温度範囲で増殖す
る (c)炭化水素を炭素源とする培地で、40℃までの高
い温度範囲で増殖する (d)静置培養における炭化水素の最大資化速度が従来
公知の菌株の2倍以上である そして、本願の発明者らは、以上のとおりの特性を有す
る微細藻類を特許寄託している(受託番号:FERM P-185
43)。
【0020】したがって、この出願の発明の微細藻類を
原油の流出した海洋や土壌、油等の炭化水素成分を含有
する排水や土壌と接触させれば、迅速にかつ効率よく、
炭化水素成分が分解され、浄化処理が行える。この出願
の発明の排水および汚染土壌の浄化方法では、微細藻類
と排水または土壌の接触方法はとくに限定されず、浄化
対象の地域や水域に前記微細藻類を散布する方法や、排
水や汚泥を該微細藻類を含有する浄化槽に導入する方法
等のさまざまな方法が適用できる。もちろん、これらの
浄化方法では、排水または土壌を微細藻類と接触させる
工程以外に、洗浄、沈降、ろ過、攪拌、培養等の様々な
工程を有していてもよい。
【0021】この出願の発明の微細藻類を用いるバイオ
レメディエーション方法は、従来公知の微生物を用いる
方法に比べ、温度、塩濃度、pH等の浄化条件が広いた
め、海洋や高温地域、低pH土壌、沿岸地域等のあらゆ
る環境において適用できる。
【0022】なお、この出願の発明の微細藻類は、炭化
水素を資化するだけでなく、グルコースからガスを発生
する嫌気代謝を行うことも明らかになっている。そし
て、このようなガスの発生を伴う糖の発酵(エタノール
発酵)は、従来のPrototheca属藻類においては知られて
いなかった性質である。
【0023】以下、実施例を示してこの出願の発明につ
いてさらに詳細に説明する。もちろん、この出願の発明
は、以下の実施例に限定されるものではないことはいう
までもない。
【0024】
【実施例】<実施例1>静岡県の伊豆連光寺温泉の40
℃および35.5℃の排水から分離した微細藻類Protot
heca zopfii RND-16株(FERM P-18543)を4%(v/v)
n−ヘキサデカン(C16:和光純薬製、#080-03685)を
含むYNB培地(Difco製、#291940)中に添加し、2
5、30、35℃でそれぞれ20日間培養した。
【0025】培養開始から微細藻類の数をトーマ血球計
により数えた。
【0026】図1に各温度における増殖曲線を示した。
【0027】これより、本願の微細藻類がN−ヘキサデ
カンの存在下で35℃においても良好な増殖を示し、そ
の速度が25℃よりも明らかに大きいことが確認され
た。
【0028】また、N−ヘキサデカンを活発に資化、分
解している微細藻類を顕微鏡で観察し、写真を撮影し
た。図2に、微細藻類の顕微鏡写真を示した。
【0029】図2より、本願発明の微細藻類は、界面活
性剤成分を分泌し、水中のn−ヘキサデカンを乳化して
油滴を形成した後その油滴中に入り込み、n−ヘキサデ
カンを分解、資化することが確認された。 <実施例2>実施例1と同様に、微細藻類Prototheca z
opfii RND-16株(FERM P-18543)をテトラデカン
(C14)、ペンタデカン(C15)、ヘキサデカン
(C16)、ヘプタデカン(C17)中にそれぞれ添加し
(1%(v/v))、35℃で培養した。
【0030】培養液中に残存する各n−アルカンの濃度
をガスクロマトグラフにより分析した。図3(a)に培
養前、図3(b)に10日間培養後の結果を示した。
【0031】図3より、培養10日目で4種類のn−ア
ルカンがほとんど分解されることが確認された。
【0032】以上の試験結果から、この出願の発明の微
細藻が、従来知られているPrototheca zopfiiとは全く
異なる性質を示す新規微生物であることが示された。ま
た、この微細藻類は、高温度範囲でも炭化水素である各
種n−アルカンを迅速に、効率よく分解、浄化できるこ
とが確認された。
【0033】
【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この出願の
発明により、新規な炭化水素資化微細藻類と、それを用
いた炭化水素含有排水の浄化方法が提供される。この微
細藻類は、広範囲なpH、温度及び塩濃度において炭化
水素成分を分解浄化できるものであり、油田や原油タン
カーの事故等によって油が流出した海洋や土壌や、炭化
水素成分を含有する工業排水等のバイオレメディエーシ
ョンに適用できる微生物として有用性が高い。
【図面の簡単な説明】
【図1】この出願の発明の実施例において、本願発明の
微細藻類をn−ヘキサデカン存在下、各温度で培養した
際の増殖曲線を示した図である。
【図2】この出願の発明の微細藻類がヘキサデカンを資
化、分解している様子の顕微鏡写真を示した図である。
【図3】この出願の発明の実施例において、本願発明の
微細藻類を各種n−アルカンの存在下に培養した際のガ
スクロマトグラフを示した図である。(a:培養前、
b:培養後)
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Fターム(参考) 4B065 AA83X BA22 BC02 BC50 CA54 4D004 AA41 AB05 CA17 CA35 CC20 DA03 DA06 DA10 4D040 CC03

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 炭化水素を資化する微細藻類であって、
    30〜40℃の温度範囲において炭化水素を資化できる
    ことを特徴とする微細藻類。
  2. 【請求項2】 0〜2Mの塩濃度範囲で炭化水素を資化
    できる請求項1の微細藻類。
  3. 【請求項3】 pH3〜9の範囲で炭化水素を資化でき
    る請求項1または2のいずれかの微細藻類。
  4. 【請求項4】 バイオサーファクタント能を有する請求
    項1ないし3のいずれかの微細藻類。
  5. 【請求項5】 Prototheca属の微細藻類である請求項1
    ないし4のいずれかの微細藻類。
  6. 【請求項6】 Prototheca属に属する微細藻類が、Prot
    otheca zopfii RND-16(Ferm P-18543)である請求項5
    の微細藻類。
  7. 【請求項7】 少なくとも請求項1ないし6のいずれか
    の微細藻類を用いることを特徴とするバイオレメディエ
    ーション方法。
  8. 【請求項8】 炭化水素を含有する排水を浄化する方法
    であって、少なくとも、排水に請求項1ないし6のいず
    れかの微細藻類を接触させる工程を有することを特徴と
    する請求項7のバイオレメディエーション方法。
  9. 【請求項9】 炭化水素によって汚染された土壌を浄化
    する方法であって、少なくとも、汚染土壌に請求項1な
    いし6のいずれかの微細藻類を接触させる工程を有する
    ことを特徴とする請求項7のバイオレメディエーション
    方法。
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