JP2003164290A

JP2003164290A - βアミロイド誘導Ｌｉｂ遺伝子

Info

Publication number: JP2003164290A
Application number: JP2001367093A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Yokota; 博横田; Kazunori Sato; 一紀佐藤
Original assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Daiichi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2001-11-30
Filing date: 2001-11-30
Publication date: 2003-06-10

Abstract

(57)【要約】【課題】βアミロイド刺激により発現が誘導される新規
遺伝子を見出し、アルツハイマー病などの神経疾患を制
御すること。【解決手段】βアミロイド刺激により発現が誘導される
新規遺伝子をｃＤＮＡサブトラクション法により取得
し、新規ＤＮＡ、該ＤＮＡがコードするポリペプチド、
該ＤＮＡを含有する組換えベクター、該組換えベクター
を有する形質転換体、当該ポリペプチドに対する抗体、
当該ポリペプチドの製造法、上記のものを利用した該遺
伝子の発現および活性を調節する化合物の同定法、該方
法で得られる化合物を提供し、さらに、これらを利用し
てβアミロイドに関連した神経疾患に用いる医薬組成物
・診断手段および診断用キットなどを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、アルツハイマー病に関
与する蛋白質βアミロイドにより、発現が誘導される新
規遺伝子に関する。さらに詳しくは、新規遺伝子のＤＮ
Ａ配列を有するＤＮＡ、該ＤＮＡがコードするポリペプ
チド、該ＤＮＡを含有する組換えベクター、該組換えベ
クターで形質転換された形質転換体、該形質転換体を用
いたポリペプチドの製造方法、該ポリペプチドに対する
抗体、これらを利用した化合物の同定方法、該同定方法
により得られる化合物、該ポリペプチドもしくは該ＤＮ
Ａに作用する該ポリペプチドの活性および／または発現
の阻害剤、これらに関係する医薬組成物、およびこれら
に関係する疾病の診断手段に関する。

【０００２】

【従来の技術】βアミロイドは、アルツハイマー病患者
の脳で観察される老人斑の構成因子であり、アルツハイ
マー病の初期発症段階において最も重要な意味を持つ因
子と考えられている。βアミロイドは、βアミロイド前
駆体が、ある種のプロテアーゼによりプロセシングを受
けることにより生成し、不溶性のβシート構造の凝集体
を形成する。βアミロイドは神経細胞に対し、直接的、
間接的に作用することにより、アルツハイマー病の進行
を促すと考えられている。βアミロイドの間接的作用と
して、アストログリア細胞の活性化が知られている。ア
ストログリア細胞は、βアミロイドにより活性化される
と、いくつかの機能因子を生産することが知られている
（Ｍａｒｋ，Ｒ．Ｅ．ｅｔａｌ．，ＨｕｍａｎＰａ
ｔｈｏｌ．２６，ｐｐ８１６−８２３（１９９５），Ｍ
ｃＧｅｅｒ，Ｐ．Ｌ．ｅｔａｌ．，ＢｒａｉｎＲ
ｅｓ．Ｒｅｖ．２１，ｐｐ１９５−２１８（１９９
５），Ｅｄｄｌｅｓｔｏｎ，Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｎｅｕ
ｒｏｓｃｉｅｎｃｅ５４，ｐｐ１５−３６（１９９
３））。本発明者らはβアミロイドにより発現が誘導さ
れる遺伝子としてプロスタグランジンＥ２合成酵素（特
開２００１−２５８５７５号公報）、ＡＤＡＭＴＳ−４
（ＡＤｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎａｎｄＭｅｔａｌｌｏ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｗｉｔｈＴｈｒｏｍｂｏｓｐ
ｏｎｄｉｎＭｏｔｉｆｓ−４）をすでに見出している
（特願２０００−１８１５９９号明細書）。アストログ
リア細胞とβアミロイドの協調作用により、アルツハイ
マー病が増悪すると考えられており、アルツハイマー病
患者脳の病変部において、活性化アストログリア細胞が
老人斑周辺に局在しその突起を老人斑に伸長させている
ことも知られている。

【０００３】しかしながら、βアミロイドがアストグリ
ア細胞の活性化を介してアルツハイマー病を増悪化する
機構およびβアミロイドによりアストログリア細胞にお
いて発現が誘導あるいは抑制される因子についての解析
は未だ十分でない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、アストログリア細胞においてβアミロイド
により発現が誘導される新規遺伝子を見出すことであ
り、見出された遺伝子をアルツハイマー病変等の神経疾
患の診断・制御を目的とする手段として使用することで
ある。さらには、該新規遺伝子がコードするポリペプチ
ドを提供し、該新規ポリペプチドに対する抗体を提供す
ることである。また、他の本発明の課題は、上記のもの
を利用する、該新規ポリペプチドの作用および／または
発現を調節する化合物の同定方法を提供し、さらには、
該同定方法で同定される化合物を提供することであり、
また、これらを利用した疾病の診断手段、疾病診断用キ
ット、疾病治療薬を提供するものである。

【解決するための手段】課題解決のため、本発明者は、
βアミロイド処理および未処理のラット胎児脳由来アス
トログリア細胞の発現遺伝子を用いたｃＤＮＡサブトラ
クション処理を実施し、βアミロイド処理により発現が
誘導される新規遺伝子を同定し、その塩基配列および該
新規遺伝子がコードするアミノ酸配列を決定することに
より、本発明を完成した。さらに、ヒトにおける該新規
遺伝子のオーソログを見出し、配列を決定した。

【０００５】すなわち、本発明は、（１）下記の群より選ばれるＤＮＡまたはその相補鎖；配列表の配列番号１に記載のＤＮＡ配列で示されるＤ
ＮＡ、配列表の配列番号２に記載のＤＮＡ配列で示されるＤ
ＮＡ、配列表の配列番号１または２に記載のＤＮＡ配列を含
有するＤＮＡ、前記またはのＤＮＡと少なくとも約７０％のＤＮ
Ａ配列上の相同性を有し、かつ細胞・細胞間の接着調節
機能および／または細胞・細胞外マトリックス間の接着
調節機能を有するペプチドをコードするＤＮＡ、および前記からのＤＮＡのＤＮＡ配列において、１ない
し数個のＤＮＡの欠失、置換、付加などの変異を有し、
かつ細胞・細胞間の接着調節機能および／または細胞・
細胞外マトリックス間の接着調節機能を有するペプチド
をコードするＤＮＡ。

【０００６】（２）（１）に記載のＤＮＡまたはその相
補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーシ
ョンし、かつ細胞・細胞間の接着調節機能および／また
は細胞・細胞外マトリックス間の接着調節機能を有する
ペプチドをコードするＤＮＡ。

【０００７】（３）（１）または（２）に記載のＤＮＡ
がコードするポリペプチド。

【０００８】（４）（１）または（２）に記載のＤＮＡ
またはその相補鎖を含有する組換えベクター。

【０００９】（５）ｐＣＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂ（Ｆ
ＥＲＭＢＰ−７８１１号）。

【００１０】（６）（４）に記載の組換えベクターまた
は（５）に記載のプラスミドを用いて形質転換させた形
質転換体。（７）（６）に記載の形質転換体を培養する工程を含
む、請求項３に記載のポリペプチドの製造方法。

【００１１】（８）（３）に記載のポリペプチドを免疫
学的に認識する抗体。

【００１２】（９）細胞・細胞間の接着調節機能および
／または細胞・細胞外マトリックス間の接着調節機能を
有する化合物の同定方法であって、（１）または（２）
に記載のＤＮＡまたはその相補鎖、（３）に記載のポリ
ペプチド、（４）に記載の組換えベクターまたは（５）
に記載プラスミド、（６）に記載の形質転換体および
（８）に記載の抗体のうち、少なくともいずれか１つを
用いることを特徴とする方法。

【００１３】（１０）（９）に記載の同定方法により同
定される化合物。

【００１４】（１１）（９）に記載の同定方法により同
定される細胞・細胞間および／または細胞・細胞外マト
リックス間の接着調節剤。

【００１５】（１２）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つからなる医薬。

【００１６】（１３）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有する医薬組成物。

【００１７】（１４）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有する細胞・細胞間および／または細
胞・細胞外マトリックス間の接着が関与する疾病の防止
／治療に用いる医薬組成物。

【００１８】（１５）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有する神経細胞死の防止／治療剤。

【００１９】（１６）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有するアルツハイマー病の防止／治療
剤。

【００２０】（１７）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有する疾病の診断手段。

【００２１】（１８）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有する神経細胞死の診断手段。

【００２２】（１９）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有するアルツハイマー病の診断手段。

【００２３】（２０）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有する疾病の診断用キット。

【００２４】（２１）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有する神経細胞死の診断用キット。

【００２５】（２２）（１）または（２）に記載のＤＮ
Ａまたはその相補鎖、（３）に記載のポリペプチド、
（４）に記載の組換えベクターまたは（５）に記載のプ
ラスミド、（６）に記載の形質転換体、（８）に記載の
抗体および（１０）に記載の化合物のうち、少なくとも
いずれか１つを含有するアルツハイマー病の診断用キッ
ト。を提供することである。

【００２６】

【発明の実施の形態】（アストログリア細胞のβアミロ
イド処理）アストログリア細胞は各種動物の脳から調製
できる。胎児脳が好適に用いられ、用いる動物として
は、比較的胎児脳を採取し易いラット、マウス、モルモ
ット、ウサギ等のげっ歯類が好ましく、特にラットは好
適に用いられる。胎児脳からのアストログリア細胞の調
製は自体公知の方法が用いられるが、その方法は実験医
学別冊神経生化学マニュアル（伊藤仁一ら羊土社（１
９８９））などに開示されている。

【００２７】アストログリア細胞に作用させるβアミロ
イドは市販されており、Ａｎａｓｐｅｃ社などから入手
できるが、遺伝子工学的手法により作成することもでき
る。βアミロイドは処理させる前に遠心処理等により凝
集させてもよい。βアミロイドの添加濃度および処理時
間は生理活性を示す範囲で適宜選択されるが、濃度とし
ては２５〜５０μＭ、処理時間としては１０〜２０時間
が好ましい。βアミロイド処理と並行して、同一条件下
で他の培養容器にアストログリア細胞を播種し、βアミ
ロイドの希釈に用いた緩衝液を等量添加することにより
βアミロイド未処理アストログリア細胞を調製できる。

【００２８】（発現遺伝子の調製）βアミロイド処理お
よび未処理のアストログリア細胞の発現遺伝子は通常用
いられるＲＮＡの採取法により採取できる。発現遺伝子
は、ｍＲＮＡのままで用いてもｃＤＮＡ化して用いても
よい。ｍＲＮＡからｃＤＮＡへの変換は逆転写酵素等を
用いた方法が適用できる。全ＲＮＡの採取には例えば、
酸性グアニジニウム−フェノール−クロロホルム法（Ａ
ＧＰＣ法；Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉｅｔａｌ．，Ａｎ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２，ｐｐ１５６−１５９
（１９８６））が適用でき、全ＲＮＡからのｍＲＮＡの
採取にはオリゴｄＴカラム等を用いたｐｏｌｙＡ（＋）
ＲＮＡの精製等が挙げられる。ＲＮＡサンプルは複数回
採取したものを混合して用いることもできる。採取ロッ
トの品質を解析する目的では、アストログリアでの発現
が知られているいくつかの遺伝子の発現をモニターする
とよい。例えば、神経成長因子（ＮＧＦ）、腫瘍壊死因
子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−６（ＩＬ−
６）、ｐ７５などをモニター遺伝子として用い、これら
の発現が同等であるサンプルを使用するとよい。

【００２９】（サブトラクション処理）βアミロイド処
理により発現が誘導される遺伝子を獲得するためには、
サブトラクション処理が適用できる。サブトラクション
処理では差し引かれる側の遺伝子群（テスター）と差し
引く側の遺伝子群（ドライバー）の二組の遺伝子群を用
いる。例えば、βアミロイドにより発現が誘導される遺
伝子を獲得するためには、テスターとしてβアミロイド
処理細胞から得られた遺伝子（βアミロイド処理遺伝
子）、ドライバーとして未処理細胞から得られた遺伝子
（未処理遺伝子）を用いたサブトラクションを行うとよ
い。サブトラクション処理の方法としては、既知の各種
手段を利用可能であり（特開平３−１１７４８８号）、
好ましくはｃＤＮＡサブトラクション法が挙げられる。
ｃＤＮＡサブトラクション法としては、ＲＤＡ法、ＰＣ
Ｒ−選択（ｓｅｌｅｃｔ）ｃＤＮＡ法などが特に好まし
い。

【００３０】サブトラクション処理では、サブトラクシ
ョンの陽性対照として、テスター側に適当なＤＮＡフラ
グメントを加え、その濃縮を確認することにより、サブ
トラクション処理の効率を確認できる。また、βアミロ
イド処理により発現が誘導されることが知られている遺
伝子をプローブとして、サブトラクション前およびサブ
トラクション後のＰＣＲ産物についてサザンブロット・
ハイブリダイゼーションを行うと、同様にサブトラクシ
ョン処理の成否を確認できる。現在、βアミロイド処理
により、発現が誘導されることが知られている遺伝子と
しては、ＮＧＦ、ｉｎｄｕｃｉｂｌｅＮｉｔｒｉｃ
ＯｘｉｄｅＳｙｎｔｈａｓｅ（ｉＮＯＳ）、Ｒｅｇｕ
ｌａｔｅｄｏｎＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＮｏｒｍａ
ｌＴ−ｃｅｌｌＥｘｐｒｅｓｓｅｄａｎｄＳｅ
ｃｒｅｔｅｄ（ＲＡＮＴＥＳ）等が挙げられる。

【００３１】サブトラクション処理後のＰＣＲ産物を適
当なベクターへ挿入し、プラスミドライブラリーなどを
作成する。ベクター挿入部分をＰＣＲにより増幅し、そ
れらの遺伝子をメンブレンにドットブロットしたものを
２セット作製する。このドットメンブレンに対して、テ
スターとしてβアミロイド処理遺伝子、ドライバーとし
て未処理遺伝子を用いたサブトラクション処理後のＰＣ
Ｒ産物〔以下、サブトラクション処理を（テスター）−
（ドライバー）の式で表す。〕と（未処理遺伝子）−
（βアミロイド処理遺伝子）のサブトラクション後のＰ
ＣＲ産物プローブでそれぞれハイブリダイゼーションを
実施する。（未処理遺伝子）−（βアミロイド処理遺伝
子）のサブトラクション後のＰＣＲ産物と比較して、
（βアミロイド処理遺伝子）−（未処理遺伝子）のサブ
トラクション後のＰＣＲ産物において特異的に濃縮が認
められるクローンを、βアミロイド処理によって発現が
誘導される遺伝子として判断すればよい。ベクター挿入
部分は自体公知のＤＮＡシークエンス法によりその配列
を決定することができる。

【００３２】（ラット遺伝子の取得）本発明において提
供される遺伝子は、ラット胎児脳由来アストログリアを
用いたｃＤＮＡサブトラクション処理により、新規な蛋
白質をコードする遺伝子としてそのｃＤＮＡが取得され
たものである。ヌクレオチドデータベース（ＤＤＢＪ／
ＥＭＢＬ／ＧｅｎＢａｎｋ）を検索した結果、新規であ
ることが確認されたため、作製したβアミロイド処理ラ
ットアストログリア細胞由来ｃＤＮＡライブラリーを用
いて、該ｃＤＮＡフラグメントをプローブとしてスクリ
ーニングしたところ５．６ＫｂのｃＤＮＡを得た。この
ｃＤＮＡはノーザンブロットで認められるバンドとほぼ
同ヌクレオチド数となることと、５’−ｒａｐｉｄａ
ｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃＤＮＡｅｎｄｓ
(５’−ｒａｃｅ)法で５’側の配列が得られなかったこ
とからｍＲＮＡ全長を含んだものであると考えられた。
蛍光色素（Ｃｙ５；ファルマシア）標識Ｍ１３ユニバー
サルおよびリバースプライマーを用いてシークエンス反
応を行い、ＡＬＦＥｘｐｒｅｓｓ蛍光シークエンサー
（ファルマシア社製）などでＯＲＦ領域の配列を決定し
たところ、本遺伝子はＯＲＦ１７３４ｂｐ、５７８アミ
ノ酸をコードする、新規ＬＲＲスーパーファミリー（Ｂ
ｕｃｈａｎａｎ，Ｓ．Ｇ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｇ
ＢｉｏｐｈｙｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．６５，ｐｐ１−４４
（１９９６）Ｓｈｉｓｈｉｄｏ，Ｅ．ｅｔａｌ．，Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ２８０，ｐｐ２１１８−２１２１（１９
９８））に属する蛋白であることが明らかになった（図
１）。

【００３３】本遺伝子がコードする蛋白質はシグナル配
列（１−１９アミノ酸）、ＬｅｕｃｉｎｅＲｉｃｈ
Ｒｅｐｅａｔ（ＬＲＲ）Ｎ−フランキング領域（２５
−５３アミノ酸）、１５回ＬＲＲ領域（５４−４１３ア
ミノ酸）、ＬＲＲＣ−フランキング領域（４２３−４
７５アミノ酸）、膜貫通領域（５３５−５５７アミノ
酸）、細胞内領域（５５８−５７８アミノ酸）から成
る。それぞれのＬＲＲは２４アミノ酸のコンセンサス残
基を持つ（図２）。本蛋白質をＬｉｂと名づけた。Ｆｌ
ａｇタグを付加したＬｉｂをＣｏｓ７細胞に発現させた
ところ計算上の６２ｋＤａより大きく、これは糖鎖付加
の影響と考えられた。βアミロイド処理によりＬｉｂは
ラットアストログリア細胞で１３倍の発現上昇を示した
（図３）。

【００３４】（ヒトオーソログの取得）Ｌｉｂのヒトの
オーソログを見出すために、ヒトゲノムデータベースの
検索を行ったところ、ヒトの対応遺伝子はＮＣＢＩゲノ
ムデータベース上に見出された。ＲＴ−ＰＣＲ法により
ヒト脳由来ポリＡ（＋）ＲＮＡ（ＣＬＯＮＴＥＣＨ）か
らクローニングし、配列を決定し、ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ
／ＧｅｎＢａｎｋにアクセションナンバーＡＢ０７１０
３７で登録（未公開）した。ヒトＬｉｂはラットとアミ
ノ酸レベルで８４％、ヌクレオチドレベルで８１％のホ
モロジーを示した（図２）。ヒトＬｉｂはクロモソーム
３ｑ２９領域に存在し、この遺伝子がｍＲＮＡとして転
写されていることは本発明者らがはじめて示した。ヒト
Ｌｉｂの組織分布を調べたところ胎盤で強い発現が認め
られ、脳では検出レベルを下回った（図４）。

【００３５】（Ｌｉｂの機能）ＬＲＲは２０〜２９アミ
ノ酸からなる短い配列の繰り返しであり、その最も典型
的な長さは２４アミノ酸である。ＬＲＲドメインは、接
着、ターゲット認識、レセプター・リガンド結合を含む
蛋白質・蛋白質間の特異的相互作用に機能する。Ｌｉｂ
はＬＲＲスーパーファミリーに属する新規の分子であ
る。さらに、ある種の接着因子とレセプターの細胞外ド
メインに特徴的であり、システインに富むＮ端・Ｃ端の
両ＬＲＲフランキング領域（結合モチーフとしてジスル
フィド結合を形成していると考えられている）を有して
いる。これらのＬＲＲの特性および、βアミロイド処理
によるＬｉｂの発現が顕著に誘導されることから判断す
ると、βアミロイドによりアストログリア細胞で発現誘
導されたＬｉｂはニューロン−アストログリア細胞間、
もしくはグリア細胞間の相互作用を強めることが推測さ
れ、結果としてこれがアルツハイマー病の進行に関わる
と本発明者らは考えている。

【００３６】ＬＲＲファミリーのメンバーの中には、シ
ョウジョウバエ発生段階の特定の筋肉への神経軸索の伸
長時にターゲット認識分子として働く蛋白質（Ｃａｒｐ
ｒｉｃｉｏｕｓ）（Ｓｈｉｓｈｉｄｏ，Ｅ．ｅｔａ
ｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２８０，ｐｐ２１１８−２１
（１９９８），Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｈ．ｅｔａ
ｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．４２，ｐｐ１０４−１
６（２０００））、また、血小板接着、活性化に関与す
るＧＰＩｂ−Ｖ−ＩＸ複合体の構成分子である蛋白質
（ＧｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＶ）（Ｈｉｃｋｅｙ，
Ｍ．Ｊ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０，ｐｐ８３２７−８３３１
（１９９３），Ｌａｎｚａ，Ｆ．ｅｔａｌ．，Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，ｐｐ２０８０１−２０８
０７（１９９３），Ｍｏｄｄｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｗ．
ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，ｐｐ
３６４−３６９（１９９２），Ｌｏｐｅｚ，Ｊ．Ａ．
ｅｔａｌ．，ＢｌｏｏｄＣｏａｇｕｌ．Ｆｉｂｒｉ
ｎｏｌｙｓｉｓ５，ｐｐ９７−１１９（１９９４））
が存在する。Ｌｉｂは上記蛋白質と同様なドメイン構成
を示すとともにほぼ同数のリピート数を持つ。上記蛋白
質の機能もすべてが明らかになってはいないが、Ｌｉｂ
も同様に発生段階もしくは神経傷害時に、細胞・細胞
間、細胞・細胞外マトリックス間の相互作用に関与する
分子であると発明者は考えている。

【００３７】Ｌｉｂは常発現性遺伝子ではなく誘導遺伝
子であり、サイトカイン類でも発現上昇を示したことか
ら、新規炎症関連因子である。ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β
はアルツハイマー病脳に検出されており（ＭｃＧｅｅ
ｒ，Ｐ．Ｌ．，ｅｔａｌ．，ＢｒａｉｎＲｅ
ｓ．Ｒｅｖ．２１，ｐｐ１９５−２１８（１９９
５））、またＩＦＮ−γもアルツハイマー病悪化への関
与が指摘されている（Ｂｌａｓｋｏ，Ｉ．ｅｔａ
ｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１１６，ｐｐ
１−４（２００１），Ｉｉ，Ｍ．ｅｔａｌ．，Ｂｒ
ａｉｎＲｅｓ．７２０，ｐｐ９３−１００（１９９
６））。アルツハイマー病その他の神経疾患で認められ
るように、グリア細胞は炎症時に患部へ移動し、それを
取り囲み突起を内部に伸長している。Ｌｉｂは、定常時
には低い発現に押さえられているが、炎症性刺激に対応
して発現が誘導され（図６）、グリアに見られる細胞・
細胞間、もしくは細胞・細胞外マトリックス間の動的変
化に関わる分子であると考えられる。

【００３８】（ＤＮＡおよびその相補鎖）本発明のＤＮ
Ａおよびその相補鎖は、配列表の配列番号１または２に
示すＤＮＡ配列からなるＤＮＡおよびその相補鎖、配列
表の配列番号１または２に示す部分配列を有するＤＮＡ
およびその相補鎖およびこれらのＤＮＡとストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイゼーションするＤＮＡを意
味する。「ＤＮＡにストリンジェントな条件下でハイブ
リダイゼーションするＤＮＡ」は、例えば、Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ第２版（Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏ
ｋｅｔａｌ．（１９８９））に記載の方法によって
得ることができる。ここで、「ストリンジェントな条件
下でハイブリダイゼーションする」とは、例えば、６×
ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳおよび５０％ホルムアミドの溶
液中で４２℃にて加温した後、０．１×ＳＳＣ、０．５
％ＳＤＳの溶液中で６８℃にて洗浄する条件でも判別可
能な陽性のハイブリダイゼーションのシグナルが観察さ
れることを表す。

【００３９】また、本発明のＤＮＡは配列表の配列番号
１または２のＤＮＡ配列で示されるＤＮＡと少なくとも
約７０％のＤＮＡ配列上の相同性を有し、かつ細胞・細
胞間の接着調節機能および／または細胞・細胞外マトリ
ックス間の接着調節機能を有するポリペプチドをコード
するＤＮＡから選択される。

【００４０】その選択されるＤＮＡは、好ましくは約７
０％以上、より好ましくは約８０％以上、さらに好まし
くは約９０％をこえる相同性を有する。ＤＮＡ配列の相
同性を決定する技術は、自体公知であり、例えばＤＮＡ
配列を直接決定する方法を使用することができる。コー
ドするポリペプチドの細胞・細胞間の接着調節機能およ
び／または細胞・細胞外マトリックス間の接着調節機能
の確認は本発明のＤＮＡを用いてポリペプチドを適当な
細胞に発現させることにより行うことができる。ポリペ
プチドの発現には公知の蛋白質発現系、例えば、無細胞
蛋白質発現系を利用できる。無細胞蛋白質発現系として
は、例えば、胚芽、家兎網状赤血球等由来のリボソーム
系の技術を利用できる（Ｎａｔｕｒｅ，１７９，ｐｐ１
６０−１６１（１９５７））。該ポリペプチドを発現さ
せた細胞同士あるいは、該ポリペプチドを発現させた細
胞の細胞外マトリックスへの接着能を視覚的あるいは物
理的的な手段により測定すればよい。

【００４１】さらに本発明のＤＮＡは上記ＤＮＡのＤＮ
Ａ配列において１ないし数個のＤＮＡの欠失、置換、付
加などの変異を有し、かつ細胞・細胞間の接着調節機能
および／または細胞・細胞外マトリックス間の接着調節
機能有するポリペプチドをコードするＤＮＡを意味す
る。ＤＮＡの欠失、置換、付加あるいは挿入の手段は自
体公知であり、エキソヌクレアーゼを用いた欠失変異体
の作製法、部位特異的突然変異誘発法などが挙げられ
る。

【００４２】これらのＤＮＡは、いずれも本発明の新規
ポリペプチドの製造に有用な遺伝子を提供するものであ
り、これをコードする遺伝子等の核酸、またはｍＲＮＡ
検出のためのプローブもしくはプライマーとして、ある
いは遺伝子発現を調節するアンチセンスオリゴマーとし
て使用することができる。例えば、本発明のＤＮＡをア
ンチセンスとして使用する場合、本発明の新規ポリペプ
チドの発現が特異的に阻害される。さらに、本発明のＤ
ＮＡは、核酸に関する試薬としても利用できる。

【００４３】（ポリペプチド）本発明のポリペプチドは
配列表の配列番号１または２のＤＮＡ配列で示されるＤ
ＮＡおよび配列表の配列番号１または２に記載のＤＮＡ
配列で示されるＤＮＡを含有するＤＮＡによりコードさ
れるポリペプチドである。さらに配列表の配列番号１ま
たは２に記載のＤＮＡ配列で示されるＤＮＡと少なくと
も約７０％のＤＮＡ配列上の相同性を有するＤＮＡによ
りコードされ、かつ細胞・細胞間の接着調節機能および
／または細胞・細胞外マトリックス間の接着調節機能を
有するポリペプチドである。また、上記ＤＮＡまたはそ
の相補鎖とストリンジェントな条件下でハイブリダイゼ
ーションするＤＮＡによりコードされ、かつ細胞・細胞
間および／または細胞・細胞外マトリックス間の接着を
調節する機能を有するポリペプチドである。さらに上記
ＤＮＡのＤＮＡ配列において１ないし数個のＤＮＡの欠
失、置換、付加などの変異を有しするＤＮＡによりコー
ドされ、かつ細胞・細胞間の接着調節機能および／また
は細胞・細胞外マトリックス間の接着調節機能を有する
ポリペプチドである。また、これらのポリペプチドは、
その構成アミノ基もしくはカルボキシル基などを修飾す
るなど、機能の著しい変更を伴わない程度に改変が可能
である。

【００４４】本発明のポリペプチドは、それら自体で、
それら自体の生体内での機能を調節するための医薬組成
物に使用できる。また、本発明のポリペプチドは、それ
らの機能を調節し得る化合物、例えば、阻害剤、拮抗
剤、賦活剤等を得るためのスクリーニングや、それらに
対する抗体の取得に用いることができる。さらに、本発
明のポリペプチドは、試薬としても使用可能である。

【００４５】（組換えベクター）本発明のＤＮＡを適当
なベクターＤＮＡへ組み込むことにより、組換えベクタ
ーを得ることができる。ベクターＤＮＡとしては、天然
に存在するものを抽出したもののほか、増殖に必要な部
分以外のＤＮＡの部分が一部欠落しているものでもよ
い。例えば、ＣｏｌＥ１から派生するベクター、ラム
ダファージから派生するベクターがある。前記ベクター
ＤＮＡに本発明のＤＮＡを組み込む方法は、自体公知の
方法を適用し得る。例えば、適当な制限酵素を選択、処
理してＤＮＡを特定部位で切断し、次いで同様に処理し
たベクターとして用いるＤＮＡと混合し、リガーゼによ
って再結合する方法が用いられる。後述の実施例中に示
すｐＣＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂ（図５）では、ベクタ
ーＤＮＡとしてｐＣＭＶ−Ｔａｇ４（ＳＴＲＡＴＡＧＥ
ＮＥ社製）を用いたが、むろんこれに限定されない。ま
た、ｐＣＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂは特許生物寄託セン
ターにＦＥＲＭＢＰ−７８１１号として寄託されてい
る。

【００４６】（形質転換体）上記のような無細胞蛋白質
発現系以外にも、大腸菌、酵母、枯草菌、昆虫細胞、動
物細胞等の自体公知の宿主を利用した遺伝子組換え技術
によって、本発明からなる新規ポリペプチドおよびその
由来物を提供可能である。

【００４７】形質転換は、自体公知の手段を応用するこ
とができ、例えば、レプリコンとして、プラスミド、染
色体、ウイルス等を利用して宿主の形質転換を行う。よ
り好ましい系としては、遺伝子の安定性を考慮するなら
ば、染色体内へのインテグレート法が挙げられるが、簡
便には核外遺伝子を用いた自律複製系を利用する。ベク
ターは、宿主の種類により選択され、発現目的遺伝子配
列とその複製そして制御に関する情報を担持した遺伝子
配列とを構成要素とする。構成要素は宿主が原核細胞か
真核細胞かによって選択し、プロモーター、リボソーム
結合部位、ターミネーター、シグナル配列、エンハンサ
ー等を自体公知の方法によって組み合わせて使用する。

【００４８】形質転換体は、自体公知の各々の宿主の培
養条件に最適な条件を選択して培養することにより、本
発明のポリペプチドの製造に用いることができる。培養
は、発現産生される新規ポリペプチドの生理活性を指標
に行ってもよいが、培地中の形質転換体量を指標にして
継代培養またはバッチによって行う。

【００４９】なお、上記ｐＣＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂ
を用いてコンピテントセルＥ．ｃｏｌｉＤＨ５αの形
質転換を行うことにより得た形質転換体を用いて、ｐＣ
ＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂの増幅を行った。

【００５０】（新規ポリペプチドおよびその由来物の回
収）培地からの新規ポリペプチドおよびその由来物から
なるポリペプチドの回収は、分子篩、イオンカラムクロ
マトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー等を
組み合わせるか、溶解度差に基づく硫安、アルコール等
の分画手段によっても精製回収できる。より好ましく
は、アミノ酸配列の情報に基づき、該アミノ酸配列に対
する抗体を作製し、ポリクローナル抗体またはモノクロ
ーナル抗体によって、特異的に吸着回収する方法を用い
る。

【００５１】（抗体）抗体は、本発明の新規ポリペプチ
ドおよびその由来物からなるポリペプチドの抗原決定基
を選別し、作製する。抗原決定基は、少なくとも、５
個、より好ましくは少なくとも８〜１０個のアミノ酸で
構成される。このアミノ酸配列は、必ずしも配列表の配
列番号１のＤＮＡがコードするポリペプチド配列と相同
である必要はなく、蛋白質の立体構造上の外部への露出
部位であればよく、露出部位が不連続部位であれば、該
露出部位について連続的なアミノ酸配列であることも有
効である。抗体は、免疫学的に新規ポリペプチドおよび
その由来物からなるポリペプチドを認識する限り特に限
定されない。この認識の有無は、公知の抗原抗体結合反
応によって決定する。

【００５２】抗体を産生するためには、本発明の新規ポ
リペプチドおよびその由来物からなるポリペプチドを、
アジュバントの存在または非存在下で、単独または担体
に結合して、動物に対して体液性応答および／または細
胞性応答等の免疫誘導を行う。担体は、自身が宿主に対
して有害作用を起こさなければ特に限定されず、例え
ば、セルロース、重合アミノ酸、アルブミン等が例示さ
れる。免疫する動物としては、マウス、ラット、ウサ
ギ、ヤギ、馬等が好適に用いられる。ポリクローナル抗
体は、自体公知の血清からの抗体回収法によって取得す
る。好ましい手段としては、免疫アフィニティクロマト
グラフィー法である。

【００５３】モノクローナル抗体を生産するためには、
上記の免疫手段が施された動物から抗体産生細胞を回収
し、自体公知の永久増殖性細胞への形質転換手段を導入
することによって行われる。

【００５４】ポリクローナル抗体またはモノクローナル
抗体は、直接本発明のポリペプチドと結合し、その活性
を制御可能であり、本発明のポリペプチドの活性が関与
する疾病の治療・防止のために有用である。

【００５５】（化合物の同定）かくして調製されたＤＮ
Ａおよびその相補鎖、ポリペプチド、組換えベクター、
形質転換体および抗体は、単独または複数手段を組み合
わせることによって、本発明のポリペプチドの発現また
は活性を調節する化合物の同定に有効な手段を提供す
る。すなわち、本発明のＤＮＡまたはその相補鎖、組換
えベクター、形質転換体、または抗体のうちの少なくと
も１つを用いることにより、本発明のポリペプチドの発
現を阻害もしくは増強する化合物の同定が、また、本発
明のポリペプチド、または抗体のうちの少なくとも１つ
を用いることにより、本発明のポリペプチドの活性を阻
害もしくは増強する化合物の同定が可能である。例え
ば、ポリペプチドの立体構造に基づくドラッグデザイン
による拮抗剤の選別、蛋白質発現系を利用した遺伝子レ
ベルでの発現調節剤の選別、抗体を利用した抗体認識物
質の選別等が、自体公知の医薬品スクリーニングシステ
ムにおいて利用可能である。また、本同定方法により得
られた化合物は後述する医薬組成物、疾病の治療剤とし
て有用である。

【００５６】（化合物、医薬組成物、診断手段）上記の
同定方法で得られた化合物は、細胞・細胞間および／ま
たは細胞・細胞外マトリックス間の接着を調節する阻害
剤、拮抗剤、賦活剤等の候補化合物として利用可能であ
る。上記の阻害剤、拮抗剤、賦活剤等の候補化合物とし
ては、蛋白質、ポリペプチド、抗原性を有さないポリペ
プチド、低分子化合物が挙げられ、好ましくは低分子化
合物である。

【００５７】かくして選別された候補化合物は、生物学
的有用性を毒性等を考慮して選別することによって、細
胞・細胞間および／または細胞・細胞外マトリックス間
の接着が関与する疾病の治療に用いる医薬組成物として
調製可能である。また、本発明からなる新規ＤＮＡまた
はその相補鎖、これらがコードするポリペプチド、上記
ＤＮＡまたはその相補鎖を含む組換えベクター、これら
組換えベクターを用いて形質転換した形質転換体、およ
び上記ポリペプチドを免疫学的に認識する抗体は、それ
ら自体が、本発明のポリペプチドの活性、発現に対する
阻害、拮抗、賦活等の機能を有し、細胞・細胞間および
／または細胞・細胞外マトリックス間の接着が関与する
疾病の治療・防止に用いる医薬手段として使用できる。

【００５８】細胞・細胞間および／または細胞・細胞外
マトリックス間の接着が関与する疾病としては、神経細
胞死が関与する疾病、例えばアルツハイマー病等の神経
疾患が挙げられる。Ｌｉｂの特徴的構造であるＬＲＲの
特性および、βアミロイド処理によるＬｉｂの発現が顕
著に誘導されることから判断すると、βアミロイドによ
りアストログリア細胞で発現誘導されたＬｉｂはニュー
ロン・アストログリア細胞間、もしくはグリア細胞間の
相互作用を強めることが推測され、結果としてこれがア
ルツハイマー病の進行に関わると本発明者らは考えてい
る。したがって、Ｌｉｂの発現阻害または機能阻害は、
アルツハイマー病の治療応用にできると発明者は考えて
いる。

【００５９】製剤化にあたっては、化合物、ポリペプチ
ド、蛋白質、ポリヌクレオチド、抗体等、各対照に応じ
た自体公知の製剤化手段を導入すればよい。

【００６０】本発明の新規ＤＮＡまたはその相補鎖、こ
れらがコードするポリペプチド、上記ＤＮＡまたはその
相補鎖を含む組換えベクター、これら組換えベクターを
用いて形質転換した形質転換体、および上記ポリペプチ
ドを免疫学的に認識する抗体は、細胞・細胞間および／
または細胞・細胞外マトリックス間の接着が関与する神
経細胞死、疾患等の診断手段として有用である。特に、
アルツハイマー病の診断マーカーおよび／または試薬等
の診断手段として有用である。診断は本発明のＤＮＡと
の相互作用・反応性を利用して、本発明のポリペプチド
の存在量を決定すること、および／または本発明のポリ
ペプチドの試料中での存在量を決定することによって行
う。試料としては血液、ずい液、脳生検サンプル等が好
適であり、特に脳脊ずい液が好ましい。診断に用いる測
定法は、自体公知の抗原抗体反応、酵素反応系、ＰＣＲ
反応系等を利用すればよい。なお、ここで言う手段と
は、目的達成のために使用する方法および／または媒体
を意味する。すなわち、例えば、診断手段には、診断す
るための方法、診断に用いる試薬、キットなどが含まれ
る。

【００６１】

【実施例】（グリア細胞の培養）アストログリア細胞は
ラット大脳皮質から得た。Ｗｉｓｔｅｒ系ラット胎児
（チャールスリバー、１７Ｄａｙｓ）の大脳を採取し、
トリプシン処理により細胞を分散させた。得られた細胞
を２０％の牛胎児血清（ＦＣＳ）、抗生物質液を含むダ
ルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で１週間培養
後、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ中でさらに二次培養し
た。９０％以上の細胞がグリア線維酸性蛋白陽性である
ことが、蛍光抗体法により確認された。Ｃ６ラットアス
トログリオーマ細胞はＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣ
ｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から
入手し、１０％ＦＣＳを含むＤＭＥＭ中で維持した。

【００６２】（βアミロイドの調製およびアストログリ
ア細胞のβアミロイド処理）βアミロイド（Ａｎａｓｐ
ｅｃ社製、βアミロイド１−４０）を滅菌水に溶解し−
７０℃で保存し用時融解して用いた。βアミロイドの凝
集は、１ｍＭのβアミロイドをＥａｒｌｅ’ｓ緩衝液に
溶解し、ＣＯ_２インキュベーターで１週間保持後、１０
０００×ｇで１０分間遠心処理することにより行った。
ペレットをＢ２７サプリメント（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）
を含むＤＭＥＭ中に再懸濁し、適宜の濃度に調製して用
いた。二次培養後のアストログリア細胞をリン酸緩衝液
（ＰＢＳ）で洗浄後、Ｂ２７サプリメントを含む無血清
培地に変換し、２日間培養後、２５μＭの凝集βアミロ
イドを添加してさらに１５時間培養した。

【００６３】（ｃＤＮＡサブトラクションおよびライブ
ラリースクリーニング）βアミロイド処理および未処理
のアストログリア細胞（６ｃｍプラスティックディッシ
ュ各２０枚）よりＡＧＰＣ法にて９回にわたり全ＲＮＡ
を抽出した。ｐｏｌｙＡ（＋）ＲＮＡはオリゴｄＴ―
ラテックス（ロシュ社製）を用いて調製した。

【００６４】βアミロイド処理および未処理のアストロ
グリア細胞由来のｐｏｌｙＡ（＋）ＲＮＡ各２μｇを
出発原料として（βアミロイド処理遺伝子）―（未処理
遺伝子）および（未処理遺伝子）―（βアミロイド処理
遺伝子）のｃＤＮＡサブトラクション処理を、Ｄｉａｔ
ｃｈｅｎｋｏらの方法（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．ＵＳＡ９３，ｐｐ６０２５−６０３０（１９９
６））に準じて、ＰＣＲ−ｓｅｌｅｃｔｃＤＮＡｓ
ｕｂｔｒａｃｔｉｏｎｋｉｔ（ＣＬＯＮＴＥＣＨ）を
用いて行った。サブトラクション処理のポジティブコン
トロールとして、ＲｓａＩ消化後のテスターにφΧ１
７４／ＨａｅＩＩＩ消化ＤＮＡフラグメントをテスタ
ー中の重量比で約２．５×１０^−５になるように加え
た。

【００６５】実施したサブトラクション処理の効率を検
証するため、陽性対照であるφΧ１７４／ＨａｅＩＩ
Ｉ消化ＤＮＡフラグメントをプローブとして、サブトラ
クション後のＰＣＲ産物およびサブトラクション前のＰ
ＣＲ産物についてサザンブロット・ハイブリダイゼーシ
ョンを実施した。

【００６６】（βアミロイド処理遺伝子）―（未処理遺
伝子）のＰＣＲ産物のベクター〔ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐ
ｔＳＫ＋（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）〕へのライゲーシ
ョンを行い、プラスミドライブラリーを作製し、ＤＨ５
αコンピテントセル（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）のトランス
フォーメーションを行った。

【００６７】プラスミドライブラリーの９６０クローン
のベクター挿入部分をＰＣＲ法により増幅し、それらの
遺伝子を６０〜１００ｎｇずつメンブレン（Ｈｙｂｏｎ
ｄ−Ｎ＋；Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）にドットブロットし
たものを２セット作製した。このドットブロットメンブ
レンに対して、（βアミロイド処理遺伝子）―（未処理
遺伝子）および（未処理遺伝子）―（βアミロイド処理
遺伝子）のサブトラクション後のＰＣＲ産物のプローブ
で、０．５ＭＮａ_２ＨＰＯ_４（ｐＨ６．８）、１０μｇ
／ｍｌサケ精子ＤＮＡを含む７％ＳＤＳ液中６８℃、１
６時間のハイブリダイゼーションをそれぞれ実施した。
メンブレンを０．１％ＳＤＳを含む０．１×ＳＳＣで６
８℃、３０分の洗浄を行った。（未処理遺伝子）―（β
アミロイド処理遺伝子）のサブトラクション後のＰＣＲ
産物と比較して（βアミロイド処理遺伝子）―（未処理
遺伝子）のサブトラクション後のＰＣＲ産物において特
異的に濃縮が認められるクローンを選択した。

【００６８】（ノーザンブロットハイブリダイゼーショ
ンによる解析）選択したクローン群のそれぞれのベクタ
ー挿入部分を^３２Ｐで標識後プローブとし、βアミロイ
ド処理および未処理アストログリア細胞由来ｐｏｌｙ
Ａ（＋）ＲＮＡを用いたノーザンブロット・ハイブリダ
イゼーションを実施した。上記方法により、βアミロイ
ド処理および未処理のアストログリアから、それぞれの
ｐｏｌｙＡ（＋）ＲＮＡサンプルを調製した。常発現
性遺伝子であるグリセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲ
ナーゼ（Ｇ３ＰＤＨ）ｃＤＮＡ、βアクチンｃＤＮＡ
（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社製）を内部標準プローブとして用
いた。検出はＢＡＳ２０００（富士フィルム社製）を用
いて行った。Ｇ３ＰＤＨ遺伝子、βアクチン遺伝子は、
βアミロイド処理時および未処理時において発現量に差
が認められないのに対し、本発明の新規遺伝子は、βア
ミロイド未処理時では低レベルで維持されていた発現量
が、βアミロイド処理により約１３倍増加した（図
３）。

【００６９】（塩基配列解析およびホモロジー検索）β
アミロイドにより発現が誘導されるクローンはＣｙ５標
識Ｍ１３ユニバーサルおよびリバースプライマーを用い
てシークエンス反応を行い、ＡＬＦＥｘｐｒｅｓｓ蛍
光シークエンサー（ファルマシア）でベクター挿入部分
の塩基配列を解析した。得られた配列について、ＮＣＢ
Ｉデータベースでホモロジー検索を実施した。得られた
全長ｃＤＮＡのうちの１クローンはホモロジーを示す遺
伝子はなく、新規と考えられた。作製したβアミロイド
処理ラットアストログリアｃＤＮＡライブラリーよりこ
のｃＤＮＡフラグメントをプローブとしてスクリーニン
グしたところ、５．６ＫｂのｃＤＮＡを得た。このｃＤ
ＮＡはノーザンブロットで認められるバンドとほぼ同ヌ
クレオチド数となることと、５’ｒａｃｅ法で５’側の
配列が得られなかったことから、新規遺伝子のｍＲＮＡ
全長を含んだものと考えられた。ＯＲＦ領域の配列を決
定したところ本遺伝子はＯＲＦ１７３４ｂｐ、５７８ア
ミノ酸をコードする、新規ＬＲＲスーパーファミリーに
属する蛋白質であることが明らかになった（図１）。本
蛋白質はシグナル配列（１−１９アミノ酸）、ＬＲＲ
Ｎ−フランキング領域（２５−５３アミノ酸）、１５回
ＬＲＲ領域（５４−４１３アミノ酸）、ＬＲＲＣ−フ
ランキング領域（４２３−４７５アミノ酸）、膜貫通領
域（５３５−５５７アミノ酸）、細胞内領域（５５８−
５７８アミノ酸）から成る。それぞれのＬＲＲは２４ア
ミノ酸のコンセンサス残基を持つ。本蛋白質をＬｉｂと
名づけた（図１）。Ｆｌａｇタグを付加したＬｉｂをＣ
ｏｓ７細胞に発現させたところ計算上の６２ｋＤａより
大きく、これは糖鎖付加の影響と考えられた。

【００７０】（新規遺伝子発現の組織分布およびヒトオ
ーソログのクローニング）ヒトのオーソログを見出すた
めに、ヒトゲノムデータベースの検索を行った。ヒトの
対応遺伝子はＮＣＢＩゲノムデータベース上に見つかっ
たため、ヒト胎児脳由来ｐｏｌｙＡ（＋）ＲＮＡ（１
μｇ、ＣＬＯＮＴＥＣＨ）からＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ
ＩＩ（ＧＩＢＣＯ）を用いて、プライマーをオリゴｄＴ
（１２−１８）とするＲＴ−ＰＣＲ法によるクローニン
グを実施した。逆転写産物は５’−ＴＧＴＧＣＴＣＴＣ
ＴＣＣＣＴＴＧＣＡＣＡＧ−３’（５’側フランキング
領域）と５’−ＡＴＣＡＣＧＧＧＡＡＡＧＣＴＣＣＡＴ
ＧＧＡＣ−３’（３’側フランキング領域）をプライマ
ーとして設定しＰＣＲによる増幅を行った。ＰＣＲ産物
はｐＣＲ２．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に組み込み、
シークエンスを行った。

【００７１】ＰＣＲエラーによる配列決定ミスを避ける
ため、独立した５つのクローンの配列を決定してそれら
を総合判断して本遺伝子の配列を決定した。ヒトＬｉｂ
はラットとアミノ酸レベルで８４％、ヌクレオチドレベ
ルで８１％のホモロジーを示した（図２）。

【００７２】ヒトＬｉｂはクロモソーム３ｑ２９領域に
存在し、この遺伝子がｍＲＮＡとして転写されているこ
とは本発明者らがはじめて示した。ヒトオーソログの組
織分布を調べるため、ヒトの各組織から抽出したｐｏｌ
ｙＡ（＋）ＲＮＡのノーザンブロット（ＣＬＯＮＴＥ
ＣＨ）に、ヒトＬｉｂのｃＤＮＡを^３２Ｐ標後識ハイブ
リダイゼーションさせた。胎盤で強い発現が認められ、
脳では検出レベルを下回った（図４）。

【００７３】（本発明の遺伝子の炎症性サイトカインに
よる発現誘導）ラットＣ６細胞をラットＴＮＦ−α（４
００Ｕ／ｍｌ、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，ＵＫ）、ラット
ＩＬ−１β（１００Ｕ／ｍｌ、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，
ＵＫ）およびラットインターフェロン（ＩＦＮ）−γ
（２００Ｕ／ｍｌ、ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，ＵＫ）を含む
混合液で処理した。全ＲＮＡはＲＮＡｅａｓｙｍｉｎ
ｉｃｏｌｕｍｎ（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。
本発明の遺伝子の発現レベルはＴａｑＭａｎＧｏｌｄ
ＲＴ−ＰＣＲキット（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙ
ｓｔｅｍｓ）を用いてｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴ
−ＰＣＲ（ＡＢＩＰＲＩＳＭ７７００）により解析し
た。

【００７４】ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βおよびＩＦＮ−γ
の混合液を添加することで６時間をピークにして約１．
８倍（０時間に対する倍率）の遺伝子の発現上昇が認め
られた。ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βそれぞれ単独でも若干
の発現上昇を示すが、それらを同時に添加する方がより
発現を誘起し、ＩＦＮ−γを加えることでさらなる上昇
（１．８倍）が認められた（図６）。

【００７５】（本発明の遺伝子の細胞内分布解析）ラッ
トＬｉｂ遺伝子のＣ末端にＤｓ−Ｒｅｄを融合したプラ
スミドをラットアストロサイト−マＣ６に一過的に発現
させたのち、位相差顕微鏡下で、Ｌｉｂの細胞内分布を
観察したところ、融合蛋白は細胞表面に発現しているこ
とが確認できた。（プラスミドｐＣＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂ（ＦＰＲＭ
ＢＰ− 号）の作製）Ａβ処理ラットアストロサイ
ト由来ｃＤＮＡライブラリーよりスクリーニングして得
たｒａｔＬｉｂｃＤＮＡをテンプレートとし、ｒａ
ｔＬｉｂのＯＲＦ部位をＯＲＦの両端に制限酵素サイ
ト（５’側ＢｇｌＩＩ、３’側ＢａｍＨＩ）を付加した
形でＰＣＲを用いて増幅した。

【００７６】得られた増幅断片を上記２制限酵素で処理
したものをＢａｍＨＩ処理したｐＣＭＶ−Ｔａｇ４（Ｓ
ＴＲＡＴＡＧＥＮＥ）にライゲーションしｐＣＭＶ−Ｔ
ａｇ４−ｒＬｉｂを得た（ＢｇｌＩＩ、ＢａｍＨＩはコ
ンバーチブルにライゲートできる。）（図５）。

【００７７】

【発明の効果】本発明はβアミロイド処理により発現が
誘導される新規遺伝子を提供するものである。本遺伝子
は特徴的なＬＲＲ領域を有し、細胞・細胞間および／ま
たは細胞・細胞外マトリックス間の接着に関与すると考
えられる。この特性を利用した新規医薬組成物、診断手
段の提供は、アルツハイマー病等のβアミロイドに関連
した疾患の臨床・基礎の医用領域において大きな有用性
を提供する。

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Daiichi Pharmaceutical co. ltd <120> Novel gene induced by beta-amyloid <130> N01113001A <160> 2 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 1737 <212> DNA <213> rat <220> <221> CDS <222> (1)..(1737) <400> 1 atg ccg ctg aaa cat tac ctc ctc ttg ctg gtg ggc tgc cag gcc tgg 48 Met Pro Leu Lys His Tyr Leu Leu Leu Leu Val Gly Cys Gln Ala Trp 1 5 10 15 gct cta ggt ttg gcc tac tat ggc tgc ccc agt gaa tgc acc tgt tcc 96 Ala Leu Gly Leu Ala Tyr Tyr Gly Cys Pro Ser Glu Cys Thr Cys Ser 20 25 30 cgg gcc tcc cag gtg gag tgc aca gga gcg cgg att gtg gcg atg cct 144 Arg Ala Ser Gln Val Glu Cys Thr Gly Ala Arg Ile Val Ala Met Pro 35 40 45 acc ccc ctg ccc tgg aat gct atg agc ctg cag gtc gtt aac acg cac 192 Thr Pro Leu Pro Trp Asn Ala Met Ser Leu Gln Val Val Asn Thr His 50 55 60 att act gag ctc cct gag aac ctg ttc ctc aac att tca gcg ctc att 240 Ile Thr Glu Leu Pro Glu Asn Leu Phe Leu Asn Ile Ser Ala Leu Ile 65 70 75 80 gcc cta aag atg gag aag aat gag ctg tca acc atc atg ccg ggt gcc 288 Ala Leu Lys Met Glu Lys Asn Glu Leu Ser Thr Ile Met Pro Gly Ala 85 90 95 ttc cgc aat ctg ggc tct ctg cgc tac ctc agc ctc gcc aac aac aaa 336 Phe Arg Asn Leu Gly Ser Leu Arg Tyr Leu Ser Leu Ala Asn Asn Lys 100 105 110 ctg agg atg ctg ccc atc agg gtc ttc cag gac gta aac aat ctg gag 384 Leu Arg Met Leu Pro Ile Arg Val Phe Gln Asp Val Asn Asn Leu Glu 115 120 125 tcc ctt ctg ctc tcc aat aac cag ctg gtg cag atc cag cca gcc cag 432 Ser Leu Leu Leu Ser Asn Asn Gln Leu Val Gln Ile Gln Pro Ala Gln 130 135 140 ttc tcc cag ttt agt aat ctt agg gaa ctc cag ttg cat ggc aac aat 480 Phe Ser Gln Phe Ser Asn Leu Arg Glu Leu Gln Leu His Gly Asn Asn 145 150 155 160 ctg gaa tcc att ccc gaa gaa gcc ttc gac cac cta gta gga ctc acc 528 Leu Glu Ser Ile Pro Glu Glu Ala Phe Asp His Leu Val Gly Leu Thr 165 170 175 aaa ctc aac ctg ggc agg aac agc ttc acc cac cta tcg cct agg ctc 576 Lys Leu Asn Leu Gly Arg Asn Ser Phe Thr His Leu Ser Pro Arg Leu 180 185 190 ttt cag cat ctg ggc aac ctc cag gtg ctc cgg cta cac gag aac agg 624 Phe Gln His Leu Gly Asn Leu Gln Val Leu Arg Leu His Glu Asn Arg 195 200 205 ctt tca gac atc ccc atg ggc acg ttc gat gca ctc ggc aac ctc cag 672 Leu Ser Asp Ile Pro Met Gly Thr Phe Asp Ala Leu Gly Asn Leu Gln 210 215 220 gag ctt gcc ctc caa gag aac cag att ggc acc ctc tcc cct ggc ttg 720 Glu Leu Ala Leu Gln Glu Asn Gln Ile Gly Thr Leu Ser Pro Gly Leu 225 230 235 240 ttc cac aat aac cgt aac ctc cag aga ctg tat ctg tcc aac aac cac 768 Phe His Asn Asn Arg Asn Leu Gln Arg Leu Tyr Leu Ser Asn Asn His 245 250 255 atc tcc cag ctg ccc cct ggc atc ttc atg cag ctg ccc cag ctt aac 816 Ile Ser Gln Leu Pro Pro Gly Ile Phe Met Gln Leu Pro Gln Leu Asn 260 265 270 aag ctc aca ctc ttt ggg aat tcc ctg agg gag ctt tcc ccg ggg gtc 864 Lys Leu Thr Leu Phe Gly Asn Ser Leu Arg Glu Leu Ser Pro Gly Val 275 280 285 ttc ggg ccc atg ccc aac ctg agg gag ctt tgg ctc tac aac aac cac 912 Phe Gly Pro Met Pro Asn Leu Arg Glu Leu Trp Leu Tyr Asn Asn His 290 295 300 atc acc tcc ctc gcc gac aac acc ttc agc cac ctg aac cag ctg cag 960 Ile Thr Ser Leu Ala Asp Asn Thr Phe Ser His Leu Asn Gln Leu Gln 305 310 315 320 gtc ctg att ctc agt cac aac cag ctc act tac atc tcc cca gga gcc 1008 Val Leu Ile Leu Ser His Asn Gln Leu Thr Tyr Ile Ser Pro Gly Ala 325 330 335 ttc aat ggg ctg acg aac ctc cga gaa ctg tcc ctc cac acc aac gct 1056 Phe Asn Gly Leu Thr Asn Leu Arg Glu Leu Ser Leu His Thr Asn Ala 340 345 350 cta cag gac ctg gac agc aac gtc ttc cga tcg ctg gcc aac ctg cag 1104 Leu Gln Asp Leu Asp Ser Asn Val Phe Arg Ser Leu Ala Asn Leu Gln 355 360 365 aac atc tcg ctc cag agt aac cgc ctc cga cag ctt ccg ggc agc atc 1152 Asn Ile Ser Leu Gln Ser Asn Arg Leu Arg Gln Leu Pro Gly Ser Ile 370 375 380 ttt gcc aac gtc aac ggc ctc aca acc atc caa ctg cag aac aac aat 1200 Phe Ala Asn Val Asn Gly Leu Thr Thr Ile Gln Leu Gln Asn Asn Asn 385 390 395 400 cta gaa aac ttg cct ttg ggc atc ttt gat cac ttg gtg aac ctg tgt 1248 Leu Glu Asn Leu Pro Leu Gly Ile Phe Asp His Leu Val Asn Leu Cys 405 410 415 gag ctt cgc ctc tac gac aac ccc tgg aga tgt gac tca gat atc ctc 1296 Glu Leu Arg Leu Tyr Asp Asn Pro Trp Arg Cys Asp Ser Asp Ile Leu 420 425 430 cca ctt cat aac tgg ctc ctt ctc aac aga gcc agg ctg ggg aca gac 1344 Pro Leu His Asn Trp Leu Leu Leu Asn Arg Ala Arg Leu Gly Thr Asp 435 440 445 act ctt cca gtg tgt tcc agt ccc gcc aac gtc cga ggc cag tcc ctc 1392 Thr Leu Pro Val Cys Ser Ser Pro Ala Asn Val Arg Gly Gln Ser Leu 450 455 460 gtc atc atc aat atc aat ttc cct gga ccc agt gtc cag ggc cca gag 1440 Val Ile Ile Asn Ile Asn Phe Pro Gly Pro Ser Val Gln Gly Pro Glu 465 470 475 480 acc cct gaa gta cct agt tac cca gat acg ccc agc tat ccc gac acc 1488 Thr Pro Glu Val Pro Ser Tyr Pro Asp Thr Pro Ser Tyr Pro Asp Thr 485 490 495 aca tct gtt tcc tct acc acg gag atc acc agc gcc gtc gac gac tac 1536 Thr Ser Val Ser Ser Thr Thr Glu Ile Thr Ser Ala Val Asp Asp Tyr 500 505 510 acc gat cta acc acc att gaa gcc acc gat gac cga aat acg tgg ggc 1584 Thr Asp Leu Thr Thr Ile Glu Ala Thr Asp Asp Arg Asn Thr Trp Gly 515 520 525 atg act gag gcc cag agc ggg ctg gcc att gct gcc atc gtg atc ggc 1632 Met Thr Glu Ala Gln Ser Gly Leu Ala Ile Ala Ala Ile Val Ile Gly 530 535 540 atc ata gct ttg gcc tgt tcc cta gcc gcc tgc atc tgc tgc tgc tgc 1680 Ile Ile Ala Leu Ala Cys Ser Leu Ala Ala Cys Ile Cys Cys Cys Cys 545 550 555 560 tgc aaa aag agg agc caa gca gtc ctg atg cag atg aag gct ccc aat 1728 Cys Lys Lys Arg Ser Gln Ala Val Leu Met Gln Met Lys Ala Pro Asn 565 570 575 gag tgc tag 1737 Glu Cys <210> 2 <211> 1746 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)..(1746) <400> 2 atg cca ctg aag cat tat ctc ctt ttg ctg gtg ggc tgc caa gcc tgg 48 Met Pro Leu Lys His Tyr Leu Leu Leu Leu Val Gly Cys Gln Ala Trp 1 5 10 15 ggt gca ggg ttg gcc tac cat ggc tgc cct agc gag tgt acc tgc tcc 96 Gly Ala Gly Leu Ala Tyr His Gly Cys Pro Ser Glu Cys Thr Cys Ser 20 25 30 agg gcc tcc cag gtg gag tgc acc ggg gca cgc att gtg gcg gtg ccc 144 Arg Ala Ser Gln Val Glu Cys Thr Gly Ala Arg Ile Val Ala Val Pro 35 40 45 acc cct ctg ccc tgg aac gcc atg agc ctg cag atc ctc aac acg cac 192 Thr Pro Leu Pro Trp Asn Ala Met Ser Leu Gln Ile Leu Asn Thr His 50 55 60 atc act gaa ctc aat gag tcc ccg ttc ctc aat atc tca gcc ctc atc 240 Ile Thr Glu Leu Asn Glu Ser Pro Phe Leu Asn Ile Ser Ala Leu Ile 65 70 75 80 gcc ctg agg att gag aag aat gag ctg tcg cgc atc acg cct ggg gcc 288 Ala Leu Arg Ile Glu Lys Asn Glu Leu Ser Arg Ile Thr Pro Gly Ala 85 90 95 ttc cga aac ctg ggc tcg ctg cgc tat ctc agc ctc gcc aac aac aag 336 Phe Arg Asn Leu Gly Ser Leu Arg Tyr Leu Ser Leu Ala Asn Asn Lys 100 105 110 ctg cag gtt ctg ccc atc ggc ctc ttc cag ggc ctg gac agc ctt gag 384 Leu Gln Val Leu Pro Ile Gly Leu Phe Gln Gly Leu Asp Ser Leu Glu 115 120 125 tct ctc ctt ctg tcc agt aac cag ctg ttg cag atc cag ccg gcc cac 432 Ser Leu Leu Leu Ser Ser Asn Gln Leu Leu Gln Ile Gln Pro Ala His 130 135 140 ttc tcc cag tgc agc aac ctc aag gag ctg cag ttg cac ggc aac cac 480 Phe Ser Gln Cys Ser Asn Leu Lys Glu Leu Gln Leu His Gly Asn His 145 150 155 160 ctg gaa tac atc cct gac gga gcc ttc gac cac ctg gta gga ctc acg 528 Leu Glu Tyr Ile Pro Asp Gly Ala Phe Asp His Leu Val Gly Leu Thr 165 170 175 aag ctc aat ctg ggc aag aat agc ctc acc cac atc tca ccc agg gtc 576 Lys Leu Asn Leu Gly Lys Asn Ser Leu Thr His Ile Ser Pro Arg Val 180 185 190 ttc cag cac ctg ggc aat ctc cag gtc ctc cgg ctg tat gag aac agg 624 Phe Gln His Leu Gly Asn Leu Gln Val Leu Arg Leu Tyr Glu Asn Arg 195 200 205 ctc acg gat atc ccc atg ggc act ttt gat ggg ctt gtt aac ctg cag 672 Leu Thr Asp Ile Pro Met Gly Thr Phe Asp Gly Leu Val Asn Leu Gln 210 215 220 gaa ctg gct cta cag cag aac cag att gga ctg ctc tcc cct ggt ctc 720 Glu Leu Ala Leu Gln Gln Asn Gln Ile Gly Leu Leu Ser Pro Gly Leu 225 230 235 240 ttc cac aac aac cac aac ctc cag aga ctc tac ctg tcc aac aac cac 768 Phe His Asn Asn His Asn Leu Gln Arg Leu Tyr Leu Ser Asn Asn His 245 250 255 atc tcc cag ctg cca ccc agc atc ttc atg cag ctg ccc cag ctc aac 816 Ile Ser Gln Leu Pro Pro Ser Ile Phe Met Gln Leu Pro Gln Leu Asn 260 265 270 cgt ctt act ctc ttt ggg aat tcc ctg aag gag ctc tct ctg ggg atc 864 Arg Leu Thr Leu Phe Gly Asn Ser Leu Lys Glu Leu Ser Leu Gly Ile 275 280 285 ttc ggg ccc atg ccc aac ctg cgg gag ctt tgg ctc tat gac aac cac 912 Phe Gly Pro Met Pro Asn Leu Arg Glu Leu Trp Leu Tyr Asp Asn His 290 295 300 atc tct tct cta ccc gac aat gtc ttc agc aac ctc cgc cag ttg cag 960 Ile Ser Ser Leu Pro Asp Asn Val Phe Ser Asn Leu Arg Gln Leu Gln 305 310 315 320 gtc ctg att ctt agc cgc aat cag atc agc ttc atc tcc ccg ggt gcc 1008 Val Leu Ile Leu Ser Arg Asn Gln Ile Ser Phe Ile Ser Pro Gly Ala 325 330 335 ttc aac ggg cta acg gag ctt cgg gag ctg tcc ctc cac acc aac gca 1056 Phe Asn Gly Leu Thr Glu Leu Arg Glu Leu Ser Leu His Thr Asn Ala 340 345 350 ctg cag gac ctg gac ggg aat gtc ttc cgc atg ttg gcc aac ctg cag 1104 Leu Gln Asp Leu Asp Gly Asn Val Phe Arg Met Leu Ala Asn Leu Gln 355 360 365 aac atc tcc ctg cag aac aat cgc ctc aga cag ctc cca ggg aat atc 1152 Asn Ile Ser Leu Gln Asn Asn Arg Leu Arg Gln Leu Pro Gly Asn Ile 370 375 380 ttc gcc aac gtc aat ggc ctc atg gcc atc cag ctg cag aac aac cag 1200 Phe Ala Asn Val Asn Gly Leu Met Ala Ile Gln Leu Gln Asn Asn Gln 385 390 395 400 ctg gag aac ttg ccc ctc ggc atc ttc gat cac ctg ggg aaa ctg tgt 1248 Leu Glu Asn Leu Pro Leu Gly Ile Phe Asp His Leu Gly Lys Leu Cys 405 410 415 gag ctg cgg ctg tat gac aat ccc tgg agg tgt gac tca gac atc ctt 1296 Glu Leu Arg Leu Tyr Asp Asn Pro Trp Arg Cys Asp Ser Asp Ile Leu 420 425 430 ccg ctc cgc aac tgg ctc ctg ctc aac cag cct agg tta ggg acg gac 1344 Pro Leu Arg Asn Trp Leu Leu Leu Asn Gln Pro Arg Leu Gly Thr Asp 435 440 445 act gta cct gtg tgt ttc agc cca gcc aat gtc cga ggc cag tcc ctc 1392 Thr Val Pro Val Cys Phe Ser Pro Ala Asn Val Arg Gly Gln Ser Leu 450 455 460 att atc atc aat gtc aac gtt gct gtt cca agc gtc cat gtc cct gag 1440 Ile Ile Ile Asn Val Asn Val Ala Val Pro Ser Val His Val Pro Glu 465 470 475 480 gtg cct agt tac cca gaa aca cca tgg tac cca gac aca ccc agt tac 1488 Val Pro Ser Tyr Pro Glu Thr Pro Trp Tyr Pro Asp Thr Pro Ser Tyr 485 490 495 cct gac acc aca tcc gtc tct tct acc act gag cta acc agc cct gtg 1536 Pro Asp Thr Thr Ser Val Ser Ser Thr Thr Glu Leu Thr Ser Pro Val 500 505 510 gaa gac tac act gat ctg act acc att cag gtc act gat gac cgc agc 1584 Glu Asp Tyr Thr Asp Leu Thr Thr Ile Gln Val Thr Asp Asp Arg Ser 515 520 525 gtt tgg ggc atg acc cag gcc cag agc ggg ctg gcc att gcc gcc att 1632 Val Trp Gly Met Thr Gln Ala Gln Ser Gly Leu Ala Ile Ala Ala Ile 530 535 540 gta att ggc att gtc gcc ctg gcc tgc tcc ctg gct gcc tgc gtc ggc 1680 Val Ile Gly Ile Val Ala Leu Ala Cys Ser Leu Ala Ala Cys Val Gly 545 550 555 560 tgt tgc tgc tgc aag aag agg agc caa gct gtc ctg atg cag atg aag 1728 Cys Cys Cys Cys Lys Lys Arg Ser Gln Ala Val Leu Met Gln Met Lys 565 570 575 gca ccc aat gag tgt taa 1746 Ala Pro Asn Glu Cys 580

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の遺伝子（ラットＬｉｂ）のｃＤＮＡ
および該遺伝子がコードするポリペプチドの一次構造を
示す図である。図中、Ｎｃ，Ｅｃ，Ｘｂ，Ｘｈ，Ｈｉは
それぞれ制限酵素ＮｃｏＩ，ＥｃｏＲＩ，ＸｂａＩ，Ｘ
ｈｏＩ，ＨｉｎｄＩＩＩの認識サイトを示す。下段の図
はＬｉｂ蛋白質の各々の領域を示す。図中、Ｓｉｇｎａ
ｌＰｅｐｔｉｄｅはシグナルペプチド、Ｎ−ｆｌａｎ
ｋｓはＮ−フランキング領域、ＦｉｆｔｅｅｎＬｅｕ
ｃｉｎｅ−ｒｉｃｈｒｅｐｅａｔｓは１５ロイシンリ
ッチリピート、Ｃ−ｆｌａｎｋｓはＣ−フランキング領
域、Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｒｅｇｉｏｎは膜貫
通領域をそれぞれ表す。

【図２】ラットＬｉｂ（上段）とヒトＬｉｂ（下段）
のアミノ酸配列の比較を説明する図である。図中「＊」
はアミノ酸が同一であることを示し、「．」は性質の類
似したアミノ酸であることを示す。

【図３】本発明の遺伝子の発現がβアミロイド処理に
より誘導されることを確認したノーザンブロッティング
の結果の図である。図中、レーンＮは無処理のラットア
ストログリア細胞由来ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡサンプ
ル、レーンＡは２５μＭのβアミロイド１５時間処理後
のラットアストログリア細胞由来ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮ
Ａサンプルをそれぞれ示す。ＡはＬｉｂ遺伝子、ＢはＧ
３ＰＤＨ遺伝子（ｇ）およびβアクチン遺伝子（ａ）を
プローブとして用いた結果を示す。

【図４】本発明の遺伝子の組織分布をヒト組織ブロッ
ト（ｔｉｓｓｕｅｂｌｏｔｓ）により解析した結果を
示す図である。ヒトＬｉｂｃＤＮＡをプローブとして用
いた。

【図５】ｐＣＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂの構築を示す
図である。図中、ＢｇｌＩＩ０．６およびＢａｍＨＩ
２．３は制限酵素ＢｇｌＩＩおよびＢａｍＨＩの認識部
位を示す。Ｐｃｍｖはサイトメガロウイルスプロモータ
ー領域、Ｔｓｖ４０はＳＶ４０ターミネーター領域、Ｐ
ｓｖ４０はＳＶ４０プロモーター領域、ｏｒｉは複製開
始配列、Ｎｅｏｒ／Ｋａｎｒはネオマイシンおよび
カナマイシン耐性遺伝子部位、Ｔｔｋはチミジンキナー
ゼターミネーター領域を示す。ｒＬｉｂはラットＬｉｂ
遺伝子の挿入部位を示す。

【図６】ラットＣ６細胞におけるサイトカイン処理に
よるＬｉｂｍＲＮＡの発現量変化を示す図である。Ａは
０時間時のＬｉｂｍＲＮＡ発現量を１とした場合の、Ｔ
ＮＦ−α、ＩＬ−１βおよびＩＦＮ−γの混合液処理
後、各時間におけるＬｉｂｍＲＮＡの相対発現量を示す
図である。Ｂは、ＴＮＦ−α単独（α）、ＩＬ−１β単
独（β）、ＩＦＮ−γ（γ）、ＴＮＦ−αとＩＬ−１β
の混合液（α＋β）、ＴＮＦ−αとＩＬ−１βとＩＦＮ
−γの混合液（α＋β＋γ）処理６時間後のＬｉｂｍＲ
ＮＡ発現量をＧ３ＰＤＨｍＲＮＡ発現量を基準とする相
対値として表した図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｃ０８５ 45/00 Ａ６１Ｐ 25/28 ４Ｃ０８７ 48/00 29/00 ４Ｈ０４５Ａ６１Ｐ 25/28 43/00 １０５ 29/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 43/00 １０５ 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＭＣ１２Ｐ 21/02 ＺＣ１２Ｑ 1/02 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 5/00 Ａ 33/566 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 BA80 CA04 CA11 HA11 HA17 4B063 QA18 QQ05 QQ42 QQ79 QR32 QR48 QR74 4B064 AG01 CA19 CC24 DA01 DA13 4B065 AA91X AA91Y AA93Y AB01 BA01 CA24 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17 BA01 BA08 BA22 CA18 CA23 CA53 DA01 DA45 DB01 DB70 NA14 ZA16 ZB11 ZB21 4C085 AA12 AA13 BB07 BB11 CC02 CC05 CC07 CC08 CC21 CC28 DD23 DD62 DD63 EE01 4C087 AA02 AA03 BB45 BC34 BC83 CA12 CA16 CA20 NA14 ZA16 ZB11 ZB21 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA45 DA75 EA22 EA28 EA50

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の群より選ばれるＤＮＡまたはその相
補鎖；配列表の配列番号１に記載のＤＮＡ配列で示されるＤ
ＮＡ、配列表の配列番号２に記載のＤＮＡ配列で示されるＤ
ＮＡ、配列表の配列番号１または２に記載のＤＮＡ配列を含
有するＤＮＡ、前記またはのＤＮＡと少なくとも約７０％のＤＮ
Ａ配列上の相同性を有し、かつ細胞・細胞間の接着調節
機能および／または細胞・細胞外マトリックス間の接着
調節機能を有するペプチドをコードするＤＮＡ、および前記からのＤＮＡのＤＮＡ配列において、１ない
し数個のＤＮＡの欠失、置換、付加などの変異を有し、
かつ細胞・細胞間の接着調節機能および／または細胞・
細胞外マトリックス間の接着調節機能を有するペプチド
をコードするＤＮＡ。
【請求項２】請求項１に記載のＤＮＡまたはその相補鎖
とストリンジェントな条件下でハイブリダイゼーション
し、かつ細胞・細胞間の接着調節機能および／または細
胞・細胞外マトリックス間の接着調節機能を有するペプ
チドをコードするＤＮＡ。
【請求項３】請求項１または２に記載のＤＮＡがコード
するポリペプチド。
【請求項４】請求項１または２に記載のＤＮＡまたはそ
の相補鎖を含有する組換えベクター。
【請求項５】ｐＣＭＶ−Ｔａｇ４−ｒＬｉｂ（ＦＥＲＭ
ＢＰ−７８１１号）。
【請求項６】請求項４に記載の組換えベクターまたは請
求項５に記載のプラスミドを用いて形質転換させた形質
転換体。
【請求項７】請求項６に記載の形質転換体を培養する工
程を含む、請求項３に記載のポリペプチドの製造方法。
【請求項８】請求項３に記載のポリペプチドを免疫学的
に認識する抗体。
【請求項９】細胞・細胞間の接着調節機能および／また
は細胞・細胞外マトリックス間の接着調節機能を有する
化合物の同定方法であって、請求項１または２に記載の
ＤＮＡまたはその相補鎖、請求項３に記載のポリペプチ
ド、請求項４に記載の組換えベクターまたは請求項５に
記載プラスミド、請求項６に記載の形質転換体および請
求項８に記載の抗体のうち、少なくともいずれか１つを
用いることを特徴とする方法。
【請求項１０】請求項９に記載の同定方法により同定さ
れる化合物。
【請求項１１】請求項９に記載の同定方法により同定さ
れる細胞・細胞間および／または細胞・細胞外マトリッ
クス間の接着調節剤。
【請求項１２】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つからなる医薬。
【請求項１３】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有する医薬組成物。
【請求項１４】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有する細胞・細胞間および／または
細胞・細胞外マトリックス間の接着が関与する疾病の防
止／治療に用いる医薬組成物。
【請求項１５】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有する神経細胞死の防止／治療剤。
【請求項１６】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有するアルツハイマー病の防止／治
療剤。
【請求項１７】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有する疾病の診断手段。
【請求項１８】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有する神経細胞死の診断手段。
【請求項１９】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有するアルツハイマー病の診断手
段。
【請求項２０】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有する疾病の診断用キット。
【請求項２１】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有する神経細胞死の診断用キット。
【請求項２２】請求項１または２に記載のＤＮＡまたは
その相補鎖、請求項３に記載のポリペプチド、請求項４
に記載の組換えベクターまたは請求項５に記載のプラス
ミド、請求項６に記載の形質転換体、請求項８に記載の
抗体および請求項１０に記載の化合物のうち、少なくと
もいずれか１つを含有するアルツハイマー病の診断用キ
ット。