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JP2002528133A - ルチノシドの酵素的分解方法 - Google Patents

ルチノシドの酵素的分解方法

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Publication number
JP2002528133A
JP2002528133A JP2000579772A JP2000579772A JP2002528133A JP 2002528133 A JP2002528133 A JP 2002528133A JP 2000579772 A JP2000579772 A JP 2000579772A JP 2000579772 A JP2000579772 A JP 2000579772A JP 2002528133 A JP2002528133 A JP 2002528133A
Authority
JP
Japan
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reaction
rhamnose
carried out
rutin
rutinoside
Prior art date
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Pending
Application number
JP2000579772A
Other languages
English (en)
Inventor
ハーヴィク ブッフホルツ、
トーマス コッペ、
ミヒャエル シュリーアーン、
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Merck Patent GmbH
Original Assignee
Merck Patent GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Patent GmbH filed Critical Merck Patent GmbH
Publication of JP2002528133A publication Critical patent/JP2002528133A/ja
Pending legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)

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Abstract

(57)【要約】 ルチノシドを酵素的に分解し、ラムノースおよび／または対応するグルコピラノシドを得る方法が開示される。本発明の方法は、水および一種または複数の有機溶媒からなる溶媒混合物の存在下に行われる。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （技術分野） 本発明は、ルチノシドを酵素的に分解してラムノースおよび／または対応する
グルコピラノシドを得る方法であって、水と一種または二種以上の有機溶媒の溶
媒混合物の存在下に反応を行う方法に関する。
【０００２】 本発明において、ルチノシドは、糖を含まない構造部分に対して、式（Ｉ）
【０００３】
【化１】 で示される基が、グリコシド結合を介して結合している化合物を呼ぶ。例えば、
ルチノシドは、式Ｉで示されるビスグリコシド単位を有するフラボノイドである
。ラムノースおよび／または対応するグルコピラノシドが、本発明の方法により
ルチノシドから製造される。グルコピラノシドは、ルチノシドから誘導され、式
（Ｉ）で示される基の代わりに、糖を含まない構造部分に結合している式（Ｉ*
）で示される基
【０００４】
【化２】 を含む。例えば、本発明の方法により、ルチンからラムノースおよびイソケルセ
チンの両方が得られる。
【０００５】 ラムノースは、天然に広く生じるが、通常僅かにしか存在しない単糖類である
。ラムノースの重要な供給源は、例えば、ルチンのような天然フラボノイドのグ
リコシド基であり、そこから、グリコシドの分解によりラムノースを得ることが
できる。ラムノースは、例えば、フラネオールのような合成芳香族物質の調製の
ための出発物質として重要な役割を果たす。
【０００６】 イソケルセチンは、以下の構造式（ＩＩ）で示されるモノグリコシド化フラボ
ノイドである。
【０００７】
【化３】 フラボノイド（ｌａｔ．ｆｌａｖｕｓ＝黄色）は、植物において広く存在する
着色剤であり、例えば、フラボン（２−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４
−オン）の親構造が共通しているフラボンのグリコシドとして示される。
【０００８】 フラボノイドの糖を含まない構造部分は、所謂アグリコンである。イソケルセ
チンは、例えば、アグリコンケルセチン（２−（３，４−ジヒドロキシフェニル
）−３，５，７−トリヒドロキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン）のグリ
コシドであり、５個のヒドロキシル基の存在においてフラボンと異なる。イソケ
ルセチンにおいて、炭水化物基のグルコースが、ケルセチンの３位のヒドロキシ
ル基に結合している。イソケルセチンは、例えば、ケルセチン３−Ｏ−β−Ｄ−
グルコピラノシドまたは２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３−（β−Ｄ
−グルコピラノシロキシ）−５，７−ジヒドロキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−
４−オンと呼ばれる。しかしながら、これは、例えば、ヒルスツリンの名でも知
られている。
【０００９】 フラボノイドおよびフラボノイド混合物は、例えば、食品および化粧産業にお
いて用いられ、そこでの重要性を次第に増している。特に、イソケルセチンのよ
うなモノグリコシド化フラボノイドは、人体における優れた吸収能において優れ
ている。
【００１０】 ビスグリコシド単位を有する天然産フラボノイドの例はルチンであり、以下の
構造式（ＩＩＩ）で示される。
【００１１】
【化４】 イソケルセチンと同様に、ルチンは、炭水化物基のルチノースがケルセチンの
３位のヒドロキシル基に結合しているアグリコンケルセチンのグリコシドである
。ルチンにおける炭水化物基は、１位および６位において結合しているグルコー
ス単位、および末端結合しているラムノースまたは６−デオキシマンノース単位
からなる。ルチンは、例えば、ケルセチン３−Ｏ−β−Ｄ−ルチノシドまたは２
−（３，４−ジヒドロキシフェニル）３−｛［６−Ｏ−（６−デオキシ−α−マ
ンノピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシル］オキシ｝−５，７−ジヒドロキ
シ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オンと呼ばれる。しかしながら、これは、例
えば、ソフォリン、ビルタン、ルタビオン、タルチン、フィトメリン、メリンま
たはルトシドの名でも知られている。
【００１２】 ルチンは、結晶水３分子と共に、淡黄色ないし緑色を帯びた針状物を形成する
。無水ルチンは弱酸性の性質を有し、１２５℃で褐色になり、２１４〜２１５℃
で分解する。ルチンは、多くの植物種において、多くの場合にビタミンＣとの結
合物として生じ、例えば、シトラス種、黄色パンジー、レンギョウおよびアカシ
ア種、種々のナス属およびタバコ種、フウチョウボク、ライム花、セント・ジョ
ーンズ麦芽、茶等に存在するが、１８４２年にランコウ（ｃｏｍｍｏｎ ｒｕｅ
：Ｒｕｔａ ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ）から単離された。ルチンは、ソバの葉およ
びルチンを１３〜２７％含む東アジアのパゴダ状木Ｗｅｉ−Ｆａ（Ｓｏｐｈｏｒ
ａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｆａｒｂａｃｅａｅ）から得ることもできる。
【００１３】 前記理由から、天然原料から、例えば、ビスグリコシド単位を有するフラボノ
イドから、ラムノースおよびモノグリコシド化フラボノイドの両方を調製するこ
とが望まれる。この点において、例えば、ルチノシドを分解してラムノースおよ
び対応するグルコピラノシドを得ることは興味深い。
【００１４】 ラムノースを酵素的に触媒して調製することが文献に記載されている。例えば
、ＥＰ０ ３１７ ０３３は、末端位に結合しているラムノースを含むグリコシ
ドのラムノシド結合が酵素的加水分解により達成される、Ｌ−ラムノースの調製
方法を記載している。しかしながら、炭水化物基のビスグリコシド構造を有する
グリコシドの水性媒体中において行われるこの種の分解は、通常、低い選択率で
進行する。例えば、ルチンにおける炭水化物基のビスグリコシド構造のために、
２つの単糖類グルコースおよびラムノースの混合物が通常得られる。さらに、ア
グリコンケルセチンおよび他の望ましくない副生物が、通常、高い割合で生じる
。
【００１５】 さらに、ルチンの酵素的触媒分解も、例えば、ＪＰ０１２１３２９３に記載さ
れている。しかしながら、水性媒体中で行われるこの種の反応は、通常、同様に
低い選択率で進行する。
【００１６】 従って、目的は、既知の方法の不利益を回避ないし少なくとも低減し、特に、
ラムノースおよびグルコピラノシド産物を高い収率で調製し得るようにラムノー
スおよびグルコピラノシドをできるだけ高い選択率で調製可能にする、ルチノシ
ドを酵素的に分解してラムノースおよび／または対応するグルコピラノシドを得
る方法を開発することにある。
【００１７】 （発明の開示） 驚くべきことに、この目的は、ルチノシドを酵素的に分解してラムノースおよ
び／または対応するグルコピラノシドを得る方法を、水と一種または二種以上の
有機溶媒の溶媒混合物の存在下に反応が起こるように行うと、達成されることが
わかった。
【００１８】 本発明の方法は、特に、ラムノースおよび対応するグルコピラノシドへのルチ
ノシドの分解が高い選択率で行われることが傑出している。ラムノースおよびグ
ルコピラノシドは、好ましくは、本発明の方法の後の適当な処理により得られる
。しかしながら、さらに、ラムノースのみまたはグルコピラノシドのみを、本発
明の方法の後の適当な処理によって得ることもできる。
【００１９】 本発明は、ルチノシドを酵素的に分解してラムノースおよび／または対応する
グルコピラノシドを得る有利な方法を利用するものである。この方法によれば、
ルチノシドが、水と一種または二種以上の有機溶媒の溶媒混合物中において触媒
量の酵素と接触する。好ましくは、反応は、例えば攪拌により充分に混合して行
われる。
【００２０】 反応は好ましくは、窒素雰囲気下に行われる。
【００２１】 本発明の方法のために適当なルチノシドは、例えば、糖を含まない構造部分ま
たはアグリコンとして、２−フェニル−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン親構
造を有し、その親構造が３位に式（Ｉ）の基を有し、その親構造のフェニル基で
、３位から離れて、−ＯＨまたは−Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｈによって一または多置換
されることもできるルチノシドである。ここで、ｎは１〜８である。
【００２２】 ｎは好ましくは１である。
【００２３】 −ＯＨおよび／または−Ｏ−（ＣＨ2）n−Ｈによる２−フェニル−４Ｈ−１−
ベンゾピラン−４−オン親構造の置換は、好ましくは、５、７、３’および／ま
たは４’において生じる。
【００２４】 特に好ましいルチノシドは、式（ＩＶ）に相等する：
【００２５】
【化５】 （式中、ＲはＨ（ケンプフェロールルチノシド）、ＯＨ（ルチン）またはＯＣＨ 3 （イソラムネチンルチノシド）である。） ラムノースおよびケンプフェロールグルコシドは、本発明の方法によりケンプフ
ェロールルチノシドから得ることができ、ラムノースおよびイソケルセチンはル
チンから得ることができ、ラムノースおよびイソラムネチングルコシドはイソラ
ムネチンルチノシドから得ることができる。ルチノシドルチンが特に好ましく用
いられる。
【００２６】 本発明は、食品および化粧産業におけるケンプフェロールグルコシド、イソケ
ルセチンおよび／またはイソラムネチングルコシドの使用にも関する。
【００２７】 本発明の方法は、いかなる高純度の出発材料も必要としない。例えば、本発明
の方法のために、ルチノシドの混合物も用いることができる。反応は、例えば、
出発材料が他のフラボノイドを含む場合も起こる。例えば、ルチン製造からの母
液残留物を用いて行うこともできる。
【００２８】 本発明の方法のための適当な酵素は加水分解酵素である。ペニシリン菌株（ｓ
ｔｒａｉｎ Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄｅｃｕｍｂｅｎｓ）から得られた加水
分解酵素が好ましく用いられ、特に、酵素ナリンギナーゼおよびヘスペリジナー
ゼが用いられる。酵素ナリンギナーゼは非常に例外的に好ましい。
【００２９】 本発明の方法のための出発材料および酵素は、市販されている、または当業者
に良く知られている方法により得られるか、または調製することができる。
【００３０】 本発明の方法のための適当な反応温度は１５〜８０℃である。本発明の方法は
、好ましくは、３０〜５０℃の反応温度、特に３５〜４５℃の反応温度で行われ
る。
【００３１】 反応温度が低過ぎる場合、反応は、不適切に遅い反応速度で進行する。これに
対して、反応温度が高すぎる場合、蛋白である酵素が変質し、失活する。
【００３２】 本発明の方法のために適したｐＨは、３〜８のｐＨである。本発明の方法は、
４．５〜７のｐＨで、特に、４．８〜６．８のｐＨで好ましく行われる。しかし
ながら、さらに、好ましいｐＨは、用いる酵素に依存して所定の限界内で変化し
得る。例えば、酵素ナリンギナーゼを用いる場合、６．４〜６．８のｐＨが非常
に例外的に好ましい。
【００３３】 この方法は、緩衝系を利用してｐＨが調整されるような方法で好ましく行われ
る。原則として、前記ｐＨの調整に適している全ての一般的緩衝系を用いること
ができる。しかしながら、好ましくは、水性クエン酸塩緩衝液が用いられる。
【００３４】 好ましくは、好ましい温度およびｐＨ領域が組み合わされる、すなわち、反応
は、好ましくは、１５〜８０℃の温度および３〜８のｐＨで行われ、特に好まし
くは、３０〜５０℃の温度および４．５〜７のｐＨで行われ、特に好ましくは３
５〜４５℃の温度および４．８〜６．８のｐＨで行われる。
【００３５】 水に加えて存在させる有機溶媒は、水に混和性の有機溶媒と、水に非混和性の
有機溶媒との両方を含む。
【００３６】 本発明の方法に適当な有機溶媒は、アセトニトリルのようなニトリル、ジメチ
ルホルムアミドのようなアミド、酢酸エステルのようなエステル、特に酢酸メチ
ルまたは酢酸エチル、メタノールまたはエタノールのようなアルコール、テトラ
ヒドロフランまたはメチルｔ−ブチルエーテルのようなエーテル、およびトルエ
ンのような炭化水素である。好ましくは、本発明の方法は、有機溶媒である酢酸
エステル、メタノール、エタノール、メチルｔ−ブチルエーテル、トルエンの一
種または二種以上の存在下に行われる。特に好ましくは、本発明の方法は、一種
または二種以上の酢酸エステル、特に、酢酸メチルの存在下に行われる。
【００３７】 本発明の方法のために適当な水：有機溶媒体積比は、１：９９〜９９：１であ
る。好ましくは、本発明の方法は、水：有機溶媒体積比を２０：８０〜８０：２
０、特に、体積比を５０：５０〜７０：３０として行われる。
【００３８】 本発明の方法のために適当なルチノシド：（水＋有機溶媒）重量比は、０．０
０１：９９．９９９〜４０：６０である。好ましくは、本発明の方法は、ルチノ
シド：（水＋有機溶媒）重量比を０．００５：９９．９９５〜２０：８０、特に
、重量比０．５：９９．５〜１０：９０として行われる。
【００３９】 本発明の方法のために適当な酵素：ルチノシド重量比は、０．００５：９９．
９９５〜５０：５０である。好ましくは、本発明の方法は、酵素：ルチノシドの
重量比を０．５：９９．５〜３０：７０、特に重量比を２：９８〜２０：８０と
して行われる。
【００４０】 反応の進行と終了は、例えば、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によりチェ
ックすることができる。
【００４１】 反応完了後、反応混合物は主に水、有機溶媒、緩衝液（例えば、クエン酸ナト
リウム）、酵素、少量の未反応ルチノシド、ラムノース、グルコピラノシド、少
量のルチノシドのアグリコン、および、適切な場合には、少量のグルコースから
なる。所望の反応生成物であるラムノースおよびグルコピラノシドは、一般的方
法により単離される。本発明の要旨において「一般的処理」は、以下のものを意
味すると解される。
【００４２】 好ましくは、有機溶媒は減圧下に留去される。例えば少量のルチノシドおよび
そのアグリコンを含み得る、ここで晶出するグルコピラノシドは、残留反応混合
物から、例えば吸引濾過または減圧濾過により、あるいは沈殿した結晶の延伸分
離により分離される。次に、固体が、好ましくは水で洗われ、次に乾燥される。
純粋なルチノシドを用いるときに得られるグルコピラノシドの純度は、一般的に
９４％を超える。さらなる精製のために、これを、例えば適当な溶媒から、例え
ば、水または、トルエンとメタノールからなる、もしくは水と酢酸メチルからな
る溶媒混合物から再結晶することができる。
【００４３】 水、緩衝液、酵素、少量のルチノシド、少量のそのアグリコン、および適切な
場合には、グルコースならびに所望の反応生成物であるラムノースが、濾液中に
残る。
【００４４】 濾液中に残るラムノースの単離は、既知の方法により、例えば、限外濾過によ
り、濾液をカチオンおよび／またはアニオン交換器を通すことにより、晶出によ
り、および濾過のような機械的分離により達成することができる。濾液中に存在
し得るグルコースも、例えば、酵母発酵により除去することができる。
【００４５】 有機溶媒、酵素または緩衝液のような処理工程において得られる物質、例えば
、クエン酸ナトリウムは再循環させてさらなる反応に用いることができる。
【００４６】 反応生成物の分析は、ＨＰＬＣにより、例えば、標準的ＨＰＬＣ装置およびＣ 18 −アルキル被覆された逆相材料を含むカラムを用いて行うことができる。
【００４７】 本発明を以下の実施例により説明する。しかしながら、それらは決して限定的
であると考えてはならない。
【００４８】 （実施例） 用いられる物質の供給源は以下の如くである。
【００４９】 ルチン： Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ製、商品番号５０００１７； ナリンギナーゼ： Ｓｉｇｍａ製、商品番号１３８５； ヘスペリジナーゼ： Ａｍａｎｏ製、商品番号ＨＰＶ１２５１９； クエン酸一水和物： Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ製、商品番号１００２４３； 水酸化ナトリウム溶液： Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ製、商品番号１０５５８７； 酢酸メチル： Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ製、商品番号８０９７１１。
【００５０】 反応は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によりチェックされ、反応生成物
はＨＰＬＣにより分析される。
【００５１】 ［ＴＬＣ条件］ 予備被覆ＴＬＣプレート： シリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ製、商品
番号１０５７１９）； 溶離液： 酢酸エチル：エチルメチルケトン：蟻酸：水：１−ブタノールの５
０：３０：１０：１０：５混合物； 噴霧試薬： ヨウ素／硫酸； 検出： 紫外線（２５４ｎｍ）； Ｒｆ値： ルチン： ０．３８ イソケルセチン： ０．６１ ケルセチン： ０．９６ 。
【００５２】 ［標準的ＨＰＬＣ装置を用いるＨＰＬＣ条件］ カートリッジ： ＬｉＣｈｒｏＣａｒｔ（登録商標）２５０４／４ カラム： ＬｉＣｈｒｏＳｏｒｂ（登録商標）ＲＰ１８（Ｃ18−アルキル被覆
された逆相材料、および粒径５μｍ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ製、商品番号１５１
３５５）） 溶離液： アセトニトリルと水との２０：８０体積比混合物（ｐＨ２；ＮａＨ2Ｐ
Ｏ4・Ｈ2Ｏ／Ｈ3ＰＯ4で緩衝） 流量： １ｍｌ／分 波長： ２６０ｎｍ 温度： ３０℃ サンプル体積： １０μｌ サンプル調製： メタノール３ｍｌにサンプル５ｍｇを溶解し、溶離液の補給により１０
ｍｌにする。
【００５３】 保持時間： ルチン： ７〜７．５分 イソケルセチン： ８．５〜９分 ケルセチン： ４０〜４３分。
【００５４】 ＜実施例１＞ クエン酸一水和物３．１５ｇを充分に脱イオンした水１５０ｍｌに溶解し、３
２％水酸化ナトリウム水溶液１０ｇを用いてｐＨを６．６に調整する。続いて酢
酸メチル１５０ｍｌを添加し、窒素雰囲気下にルチン５．０ｇおよびナリンギナ
ーゼ０．５ｇを攪拌しつつ導入する（２００回転／分）。次に、反応混合物を、
４０℃の反応温度で２４時間攪拌する。一般的処理後、ラムノースおよび黄色結
晶３．８２ｇを得る。ＨＰＬＣによる黄色結晶の分析により以下の組成物が得ら
れる。
【００５５】 ルチン： １．２面積％ イソケルセチン： ９４．４面積％ ケルセチン： ２．６面積％。
【００５６】 ＜実施例２＞ クエン酸一水和物０．３２ｇを充分に脱イオンした水１５０ｍｌに溶解し、酢
酸メチル１５０ｍｌを加える。次に、エマルジョンを、１規定水酸化ナトリウム
水溶液２．５ｇを用いてｐＨを５．０に調整し、窒素雰囲気下にルチン５．０ｇ
およびヘスペリジナーゼ０．１２５ｇを導入する。次に、反応混合物を、４０℃
の反応温度で２１時間攪拌（２５０回転／分）する。一般的処理後、ラムノース
および黄色結晶３．４１ｇを得る。ＨＰＬＣによる黄色結晶の分析により以下の
組成物が得られる。
【００５７】 ルチン： ０．１面積％ イソケルセチン： ９８．０面積％ ケルセチン： ０．２面積％。
【００５８】 ＜実施例３＞ クエン酸一水和物６．３７ｇを充分に脱イオンした水３００ｍｌに溶解し、３
２％水酸化ナトリウム水溶液１１．３３ｇを用いてｐＨを６．６に調整する。続
いて酢酸メチル３００ｍｌを添加し、窒素雰囲気下に、ルチン５３．５面積％、
イソケルセチン３９．８面積％およびケルセチン０．４面積％（ルチン製造から
の母液残留物）、およびナリンギナーゼ１．１１ｇからなる出発材料混合物２０
．１１ｇを導入する。次に、反応混合物を４０℃の反応温度で４６時間攪拌（２
００回転／分）する。一般的処理後、ラムノースおよび黄色結晶１４．１８ｇを
得る。ＨＰＬＣによる黄色結晶の分析により以下の組成物が得られる。
【００５９】 ルチン： ０．５面積％ イソケルセチン： ９２．０面積％ ケルセチン： ４．７面積％。
【００６０】 ＜比較例＞ クエン酸一水和物１２．６ｇを充分に脱イオンした水６００ｍｌに溶解し、３
２％水酸化ナトリウム水溶液４０ｇを用いてｐＨを６．６に調整する。続いて、
窒素雰囲気下にルチン１０．０ｇおよびナリンギナーゼ１．０ｇを攪拌しつつ導
入する（２００回転／分）。３６℃で約２４時間攪拌後、反応混合物中にイソケ
ルセチンとルチンが約２：１の比で存在する。反応混合物を、３６℃でさらに７
時間、および４０℃で２２時間攪拌し、次に１５℃に冷却する。一般的処理後、
ラムノースおよび黄色結晶７．２５ｇを得る。ＨＰＬＣによる黄色結晶の分析に
より以下の組成物が得られる。
【００６１】 ルチン： １２．１面積％ イソケルセチン： ７６．６面積％ ケルセチン： １０．５面積％ 比較例は、溶媒として水のみを用いると、固体（黄色結晶）があまり得られず
、水と有機溶媒とからなる溶媒混合物を用いる場合よりも、より多くの出発材料
およびより多くの副生物が含まれることを示している。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１２年７月１１日（２０００．７．１１）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｕ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ， ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，Ｌ Ｋ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ， ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，Ｔ Ｍ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人 Ｆｒａｎｋｆｕｒｔｅｒ Ｓｔｒ． 250， Ｄ−64293 Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｆｅｄ ｅｒａｌ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｇｅ ｒｍａｎｙ (72)発明者 コッペ、 トーマス ドイツ連邦共和国 デー−64291 ダルム シュタット イェーゲルトーシュトラーセ 14 (72)発明者 シュリーアーン、 ミヒャエル ドイツ連邦共和国 デー−64686 ライヒ エンバッハ バルクホウザー シュトラー セ ８ Ｆターム(参考） 4B018 MD42 ME04 ME14 MF01 MF12 4B064 AF02 AF52 CA21 CB07 CD04 CD05 CD06 CE10 DA10 DA20

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ルチノシドを酵素的に分解してラムノースおよび／または対
    応するグルコピラノシドを得る方法において、水と一種または二種以上の有機溶
    媒の溶媒混合物の存在下に反応を行うことを特徴とする方法。
  2. 【請求項２】 １５〜８０℃の反応温度で反応を行う請求項１に記載の方法
    。
  3. 【請求項３】 ３〜８のｐHで反応を行う請求項１または２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 緩衝系を利用してｐHを調整する請求項１〜３のいずれかに
    記載の方法。
  5. 【請求項５】 水性クエン酸塩緩衝液を利用してｐHを調整する請求項４に
    記載の方法。
  6. 【請求項６】 有機溶媒である酢酸エステル、メタノール、エタノール、メ
    チルｔ−ブチルエーテル、トルエンの一種または二種以上の存在下に反応を行う
    請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
  7. 【請求項７】 一種または二種以上の酢酸エステルの存在下に反応を行う請
    求項６に記載の方法。
  8. 【請求項８】 酢酸メチルの存在下に反応を行う請求項７に記載の方法。
  9. 【請求項９】 食品および化粧産業におけるケンプフェロールグルコシド、
    イソケルセチンおよび／またはイソラムネチングルコシドの使用。
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