JP2002325570A - 樹枝状細胞と疾病組織細胞、特に腫瘍細胞とを融合する方法及びこの種の方法のための媒体 - Google Patents
樹枝状細胞と疾病組織細胞、特に腫瘍細胞とを融合する方法及びこの種の方法のための媒体Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 融合生成物のより高い収率を実現できる、樹
枝状細胞と疾病細胞（特に腫瘍細胞）とを電気融合する
方法、並びにその方法において使用できる媒体を提供す
る。 【解決手段】 樹枝状細胞と腫瘍細胞とを混合し、場合
によっては、洗浄媒体で洗浄し、次いで遠心分離機にか
け、ペレットを電気融合媒体に受容し、次いで電気融合
処理する方法において、前記電気融合媒体として、 砂糖 ２０ｍＭ／ｌ〜１５０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を、発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液を使
用する。
枝状細胞と疾病細胞（特に腫瘍細胞）とを電気融合する
方法、並びにその方法において使用できる媒体を提供す
る。 【解決手段】 樹枝状細胞と腫瘍細胞とを混合し、場合
によっては、洗浄媒体で洗浄し、次いで遠心分離機にか
け、ペレットを電気融合媒体に受容し、次いで電気融合
処理する方法において、前記電気融合媒体として、 砂糖 ２０ｍＭ／ｌ〜１５０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を、発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液を使
用する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、請求項１記載の
上位概念の方法に関する。
上位概念の方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】この種の方法は、樹枝状細胞及び特に腫
瘍細胞から融合された細胞（融合生成物）を生成するの
に役立つ。樹枝状細胞は、表面に抗原を生成でき、生成
された抗原に依存して対応する免疫刺激性質を有する免
疫活性細胞である。
瘍細胞から融合された細胞（融合生成物）を生成するの
に役立つ。樹枝状細胞は、表面に抗原を生成でき、生成
された抗原に依存して対応する免疫刺激性質を有する免
疫活性細胞である。
【０００３】樹枝状細胞及び腫瘍細胞からなる融合生成
物は、腫瘍の治療に使用できる。これに関しては、ヒト
の転移性腎臓癌の処置における腫瘍細胞と融合された樹
枝状細胞の使用について記載したＫｕｇｌｅｒらの報告
（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖol．６，Ｎo.
３，３３２〜３３６（２０００））を参照されたい。
物は、腫瘍の治療に使用できる。これに関しては、ヒト
の転移性腎臓癌の処置における腫瘍細胞と融合された樹
枝状細胞の使用について記載したＫｕｇｌｅｒらの報告
（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖol．６，Ｎo.
３，３３２〜３３６（２０００））を参照されたい。
【０００４】公知の方法の場合、患者から腫瘍細胞を採
取し、電気融合によって樹枝状細胞と相互に融合する。
取し、電気融合によって樹枝状細胞と相互に融合する。
【０００５】樹枝状細胞は、患者自体から採取できる
が、他のヒト又は動物から採取することもできる。
が、他のヒト又は動物から採取することもできる。
【０００６】樹枝状細胞に対して、しかしながら、腫瘍
細胞に対しても、例えば、ウイルスを死滅させるため、
あらかじめ照射を行わなければならない。
細胞に対しても、例えば、ウイルスを死滅させるため、
あらかじめ照射を行わなければならない。
【０００７】電気融合は、一般に公知の多段の方法であ
る。包括的な説明は、例えば、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ及
びＧ．Ｎｅｉｌの書籍“Ｅｌｅｃｔｒｏｍａｎｉｐｕｌ
ａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌｓ”、ＣＲＣ出版（在フロ
リダ）、１９９６から得られる。
る。包括的な説明は、例えば、Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ及
びＧ．Ｎｅｉｌの書籍“Ｅｌｅｃｔｒｏｍａｎｉｐｕｌ
ａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｅｌｌｓ”、ＣＲＣ出版（在フロ
リダ）、１９９６から得られる。
【０００８】第１工程（前処理）において、誘電泳動
（Ｄielektrophorese ）によって細胞を相互に接触させ
る。次いで、第２工程（パルス）において、細胞膜の破
壊をもたらすパルスを発生し、かくして、細胞膜を融合
でき、したがって、細胞を融合できる。融合パートナー
を安定化するため、第３工程（後処理）において、融合
終了まで、破壊された細胞を誘電泳動によって相互に接
触状態に保持する。
（Ｄielektrophorese ）によって細胞を相互に接触させ
る。次いで、第２工程（パルス）において、細胞膜の破
壊をもたらすパルスを発生し、かくして、細胞膜を融合
でき、したがって、細胞を融合できる。融合パートナー
を安定化するため、第３工程（後処理）において、融合
終了まで、破壊された細胞を誘電泳動によって相互に接
触状態に保持する。
【０００９】（腫瘍細胞及び樹枝状細胞からなる）生成
された融合生成物は、照射後、患者に注射され、身体内
に免疫刺激作用を展開する。
された融合生成物は、照射後、患者に注射され、身体内
に免疫刺激作用を展開する。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】上述の方法には、融合
生成物の生成のために選択した条件が最適な結果を与え
ないという欠点がある。
生成物の生成のために選択した条件が最適な結果を与え
ないという欠点がある。
【００１１】したがって、本発明の課題は、融合生成物
のより高い収率を実現できる、樹枝状細胞と疾病細胞、
特に腫瘍細胞とを電気融合する方法を提供することにあ
る。本発明の更なる課題は、上記方法において使用でき
る媒体を提供することにある。
のより高い収率を実現できる、樹枝状細胞と疾病細胞、
特に腫瘍細胞とを電気融合する方法を提供することにあ
る。本発明の更なる課題は、上記方法において使用でき
る媒体を提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】上記課題は、請求項１の
特徴記載部分に開示の特徴を有する方法及び請求項17〜
18に記載の媒体によって解決される。
特徴記載部分に開示の特徴を有する方法及び請求項17〜
18に記載の媒体によって解決される。
【００１３】本発明に係る方法の場合、先行技術の場合
と同様、樹枝状細胞を疾病組織、特に、腫瘍組織からな
る細胞と混合する。
と同様、樹枝状細胞を疾病組織、特に、腫瘍組織からな
る細胞と混合する。
【００１４】細胞数に関する混合比が１：１であれば好
ましい。ライン毎に２×１０6 の細胞数（即ち、細胞混
合物中の合計細胞数：４×１０6 ）を使用するのが好ま
しい。
ましい。ライン毎に２×１０6 の細胞数（即ち、細胞混
合物中の合計細胞数：４×１０6 ）を使用するのが好ま
しい。
【００１５】次いで、細胞混合物を、場合によっては、
特に等浸透圧の洗浄媒体で洗浄し、遠心分離機にかけ、
次いで、電気融合媒体中に再懸濁させる。次いで、再懸
濁させた細胞混合物を、例えば、電極チャンバ内に装入
し、細胞相互の融合を誘起する電気的条件で処理する。
特に等浸透圧の洗浄媒体で洗浄し、遠心分離機にかけ、
次いで、電気融合媒体中に再懸濁させる。次いで、再懸
濁させた細胞混合物を、例えば、電極チャンバ内に装入
し、細胞相互の融合を誘起する電気的条件で処理する。
【００１６】さて、本発明に基づき、電気融合媒体は、
下記内容物質、すなわち、 砂糖 ２０ｍＭ／ｌ〜１５０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液であ
る。
下記内容物質、すなわち、 砂糖 ２０ｍＭ／ｌ〜１５０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液であ
る。
【００１７】医療への応用を考慮して、対応する内容物
の融合溶液の混合によって電気融合媒体を調製するのが
好ましい。
の融合溶液の混合によって電気融合媒体を調製するのが
好ましい。
【００１８】砂糖として、Ｓｅｒｕｍ−Ｗｅｒｋ社（在
ベルンブルグ）から“ソルビトール融合溶液４０”なる
名称で市販されている融合溶液に、ソルビットを７５ｍ
Ｍ／ｌの濃度で装入するのが好ましい。しかしながら、
この代わりに、他の砂糖、例えば、グリコースを含むこ
とができる他の溶液を使用することもできる。
ベルンブルグ）から“ソルビトール融合溶液４０”なる
名称で市販されている融合溶液に、ソルビットを７５ｍ
Ｍ／ｌの濃度で装入するのが好ましい。しかしながら、
この代わりに、他の砂糖、例えば、グリコースを含むこ
とができる他の溶液を使用することもできる。
【００１９】マグネシウム塩は、Ｌ−グルコン酸水素マ
グネシウム溶液として使用するのが好ましい。この溶液
は、例えば、Ｖｅｒｌａ−Ｐｈａｒｍ社から“マグネシ
ウムＶｅｒｌａ”なる名称で市販されている。 0.5ｍＭ
／ｌの濃度のマグネシウム塩を使用するのが好ましい。
もちろん、他のマグネシウム塩、例えば、塩化マグネシ
ウムを含む他のマグネシウム塩を使用することもでき
る。
グネシウム溶液として使用するのが好ましい。この溶液
は、例えば、Ｖｅｒｌａ−Ｐｈａｒｍ社から“マグネシ
ウムＶｅｒｌａ”なる名称で市販されている。 0.5ｍＭ
／ｌの濃度のマグネシウム塩を使用するのが好ましい。
もちろん、他のマグネシウム塩、例えば、塩化マグネシ
ウムを含む他のマグネシウム塩を使用することもでき
る。
【００２０】カルシウム塩は、グルコン酸カルシウム・
二糖酸カルシウム・溶液として好ましくは 0.1ｍＭ／ｌ
の濃度で装入するのが好ましい。適切な融合溶液は、Ｂ
ｒａｕｎ社（在メルスンゲン）から“カルシウムＢｒａ
ｕｎ１０％”なる名称で市販されている。この場合も、
異なる濃度の他のカルシウム塩を含む他の溶液を使用す
ることもできる。
二糖酸カルシウム・溶液として好ましくは 0.1ｍＭ／ｌ
の濃度で装入するのが好ましい。適切な融合溶液は、Ｂ
ｒａｕｎ社（在メルスンゲン）から“カルシウムＢｒａ
ｕｎ１０％”なる名称で市販されている。この場合も、
異なる濃度の他のカルシウム塩を含む他の溶液を使用す
ることもできる。
【００２１】以上に最適として示した条件を選択すれ
ば、約８５μＳ（ジーメンス）の導電率と、約 6.6のｐ
Ｈ値と、約７０ｍＯｓｍの浸透圧とを有する電気融合媒
体が得られる。
ば、約８５μＳ（ジーメンス）の導電率と、約 6.6のｐ
Ｈ値と、約７０ｍＯｓｍの浸透圧とを有する電気融合媒
体が得られる。
【００２２】電気融合媒体の浸透圧は、被融合細胞に依
存して、砂糖含有量によって約２０ｍＯｓｍ〜１５０ｍ
Ｏｓｍの範囲に変更できる。
存して、砂糖含有量によって約２０ｍＯｓｍ〜１５０ｍ
Ｏｓｍの範囲に変更できる。
【００２３】本発明の更なる形態は、方法の操作中に使
用する洗浄媒体に関する。この洗浄媒体は、等浸透圧性
質を有し、下記内容物質、すなわち、 砂糖 ２７０ｍＭ／ｌ〜３１０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液であれ
ば好ましい。
用する洗浄媒体に関する。この洗浄媒体は、等浸透圧性
質を有し、下記内容物質、すなわち、 砂糖 ２７０ｍＭ／ｌ〜３１０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液であれ
ば好ましい。
【００２４】医療への応用を考慮して、例えば、上述の
融合溶液の混合によって、洗浄媒体も調製するのが好ま
しい。しかしながら、この場合も、組成の異なる他の溶
液を選択できる。
融合溶液の混合によって、洗浄媒体も調製するのが好ま
しい。しかしながら、この場合も、組成の異なる他の溶
液を選択できる。
【００２５】２９０ｍＭ／ｌの砂糖濃度を選択すれば、
約７５μＳの導電率と、約 6.3のｐＨ値と、約２８０ｍ
Ｏｓｍの浸透圧とを有する洗浄媒体が得られる。
約７５μＳの導電率と、約 6.3のｐＨ値と、約２８０ｍ
Ｏｓｍの浸透圧とを有する洗浄媒体が得られる。
【００２６】上記洗浄溶液と本発明に基づき使用する電
気融合溶液との組合せが、特に有利であることが判明し
ている。
気融合溶液との組合せが、特に有利であることが判明し
ている。
【００２７】双方の媒体中に、砂糖として、部分的に、
トレハロースを使用でき、あるいは、砂糖を部分的にポ
リエチレングリコールで置き換えることができる。
トレハロースを使用でき、あるいは、砂糖を部分的にポ
リエチレングリコールで置き換えることができる。
【００２８】電気融合において特殊な電気的条件を設定
すれば、融合結果を更に改善できる。
すれば、融合結果を更に改善できる。
【００２９】通常、上述の如く、３段の電気的処理を実
施する。第１工程において、細胞を相互に添加する（前
処理）。第２工程において、細胞膜を破壊する（パル
ス）。第３工程において、融合安定化まで、破壊された
細胞を接触状態に保持する（後処理）。この場合、通常
の電極チャンバ内で電気融合を行うことができる。本発
明の有利な実施例に基づき、半導体技術によって蒸着し
た電極からなるマイクロ電極構造又はナノ電極構造を使
用する。
施する。第１工程において、細胞を相互に添加する（前
処理）。第２工程において、細胞膜を破壊する（パル
ス）。第３工程において、融合安定化まで、破壊された
細胞を接触状態に保持する（後処理）。この場合、通常
の電極チャンバ内で電気融合を行うことができる。本発
明の有利な実施例に基づき、半導体技術によって蒸着し
た電極からなるマイクロ電極構造又はナノ電極構造を使
用する。
【００３０】マイクロ電極構造又はナノ電極構造の使用
によって、操作を自動化できる。この場合、更に、双方
のタイプの細胞を特に巧妙に適切に対をなすように融合
できる。もちろん、他の技術によって、例えば、若干の
例を挙げれば、フィルタ、機械的装置の使用によって又
は更に超音波によって、融合を行うこともできる。
によって、操作を自動化できる。この場合、更に、双方
のタイプの細胞を特に巧妙に適切に対をなすように融合
できる。もちろん、他の技術によって、例えば、若干の
例を挙げれば、フィルタ、機械的装置の使用によって又
は更に超音波によって、融合を行うこともできる。
【００３１】以下に挙げるすべての電圧データは、 0.2
ｍｍの電極間隔に対応する。この間隔は、強制されるも
のではない。異なる電極間隔を有するチャンバ又は構造
も問題なく使用できる。この場合、指示した電圧を、そ
れに対応して換算するだけでよい。
ｍｍの電極間隔に対応する。この間隔は、強制されるも
のではない。異なる電極間隔を有するチャンバ又は構造
も問題なく使用できる。この場合、指示した電圧を、そ
れに対応して換算するだけでよい。
【００３２】本発明の有利な実施例に基づき、５〜２０
Ｖの交流電圧において３０ｓｅｃ〜３ｍｉｎの時間にわ
たって前処理を実施する。電圧周波数は、１ｋＨｚ〜４
ＭＨｚの範囲に選択すればよい。１０Ｖ（２ＭＨｚ）及
び時間６０ｓｅｃの条件を選択するのが好ましい。
Ｖの交流電圧において３０ｓｅｃ〜３ｍｉｎの時間にわ
たって前処理を実施する。電圧周波数は、１ｋＨｚ〜４
ＭＨｚの範囲に選択すればよい。１０Ｖ（２ＭＨｚ）及
び時間６０ｓｅｃの条件を選択するのが好ましい。
【００３３】第２工程において、本発明に基づき、直流
電圧として１５〜５０Ｖの電圧及び１５μｓｅｃ〜１ｍ
ｓｅｃの期間の少なくも１つのパルスを印加する。２０
Ｖの電圧及び４０μｓｅｃの期間のパルスを使用するの
が好ましい。パルスが、矩形波であれば好ましい。しか
しながら、パルス中に電圧を増減することも考えられ
る。
電圧として１５〜５０Ｖの電圧及び１５μｓｅｃ〜１ｍ
ｓｅｃの期間の少なくも１つのパルスを印加する。２０
Ｖの電圧及び４０μｓｅｃの期間のパルスを使用するの
が好ましい。パルスが、矩形波であれば好ましい。しか
しながら、パルス中に電圧を増減することも考えられ
る。
【００３４】後処理は、 2.5〜１０Ｖの交流電圧におい
て５ｓｅｃ〜６０ｓｅｃの時間にわたって実施する。電
圧周波数は、１ｋＨｚ〜４ＭＨｚの範囲に選択できる。
５Ｖ（２ＭＨｚ）及び時間３０ｓｅｃの条件を選択する
のが好ましい。
て５ｓｅｃ〜６０ｓｅｃの時間にわたって実施する。電
圧周波数は、１ｋＨｚ〜４ＭＨｚの範囲に選択できる。
５Ｖ（２ＭＨｚ）及び時間３０ｓｅｃの条件を選択する
のが好ましい。
【００３５】
【発明の実施の形態】次に、実施の形態を参照して本発
明を詳細に説明する。
明を詳細に説明する。
【００３６】実施の形態は、樹枝状細胞と乳房の恒久的
腫瘍細胞ラインとの融合に関する。
腫瘍細胞ラインとの融合に関する。
【００３７】第１工程において、双方の細胞ラインを採
取して計数した。次いで、各細胞ラインからそれぞれ２
×１０6 個の細胞をピペットに移した。次いで、１２０
０ｒｐｍで１０ｍｉｎにわたって沈殿処理した。混合さ
れた細胞を洗浄媒体（下記参照）で２回洗浄し、それぞ
れ遠心分離を行った。
取して計数した。次いで、各細胞ラインからそれぞれ２
×１０6 個の細胞をピペットに移した。次いで、１２０
０ｒｐｍで１０ｍｉｎにわたって沈殿処理した。混合さ
れた細胞を洗浄媒体（下記参照）で２回洗浄し、それぞ
れ遠心分離を行った。
【００３８】次いで、ペレットを２２０μｍｌの融合媒
体（下記参照）中に受容し、電極チャンバ内に充填し
た。電気融合媒体中に移行後、以降の処理を直ちに行わ
なければならない。なぜならば、細胞が低浸透圧条件を
許容できる時間が、極めて短いからである。電極間隔は
0.2ｍｍである。融合条件を以下に示す。
体（下記参照）中に受容し、電極チャンバ内に充填し
た。電気融合媒体中に移行後、以降の処理を直ちに行わ
なければならない。なぜならば、細胞が低浸透圧条件を
許容できる時間が、極めて短いからである。電極間隔は
0.2ｍｍである。融合条件を以下に示す。
【００３９】前処理は、１０Ｖの交流電圧（２ＭＨｚ）
において６０ｓｅｃにわたって実施した。次いで、直流
電圧２０Ｖ及び期間４０μｓｅｃのパルスを印加した。
後処理は、５Ｖの交流電圧において３０ｓｅｃにわたっ
て実施した。
において６０ｓｅｃにわたって実施した。次いで、直流
電圧２０Ｖ及び期間４０μｓｅｃのパルスを印加した。
後処理は、５Ｖの交流電圧において３０ｓｅｃにわたっ
て実施した。
【００４０】次いで、チャンバを室温に１０ｍｉｎ放置
した。次いで、リン酸塩で緩衝した食塩溶液（ＰＢＳ）
１ｍｌで洗浄を行い、融合した細胞を恒温器内で３７℃
において３０ｍｉｎにわたって培養した。最長１２時間
のより長い培養時間も考えられる。
した。次いで、リン酸塩で緩衝した食塩溶液（ＰＢＳ）
１ｍｌで洗浄を行い、融合した細胞を恒温器内で３７℃
において３０ｍｉｎにわたって培養した。最長１２時間
のより長い培養時間も考えられる。
【００４１】次いで、１２００ｒｐｍにおいて１０ｍｉ
ｎにわたって細胞を遠心分離し、所望の容積（好ましく
は、５％グルコース溶液）に調整した。
ｎにわたって細胞を遠心分離し、所望の容積（好ましく
は、５％グルコース溶液）に調整した。
【００４２】洗浄媒体及び電気融合媒体は、下記溶液を
使用して調製した： 溶液１： ソルビトール融合溶液４０ ２５０ｍｌ 無菌水（Ampuwa Fresenius） ２５０ｍｌ カルシウムＢｒａｕｎ ２００μｌ マグネシウムＶｅｒｌａ ７８０μｌ 溶液２： 無菌水（Ampuwa Fresenius） ５００ｍｌ カルシウムＢｒａｕｎ ２００μｌ マグネシウムＶｅｒｌａ ７８０μｌ
使用して調製した： 溶液１： ソルビトール融合溶液４０ ２５０ｍｌ 無菌水（Ampuwa Fresenius） ２５０ｍｌ カルシウムＢｒａｕｎ ２００μｌ マグネシウムＶｅｒｌａ ７８０μｌ 溶液２： 無菌水（Ampuwa Fresenius） ５００ｍｌ カルシウムＢｒａｕｎ ２００μｌ マグネシウムＶｅｒｌａ ７８０μｌ
【００４３】電気融合媒体の調製のため、２７ｍｌの溶
液１と 472.7ｍｌの溶液２とを混合し、混合物 5.5ｍｌ
を採取し、 5.5ｍｌの溶液１と混合した。
液１と 472.7ｍｌの溶液２とを混合し、混合物 5.5ｍｌ
を採取し、 5.5ｍｌの溶液１と混合した。
【００４４】洗浄媒体の調製のため、１０９ｍｌの溶液
１と３９１ｍｌの溶液２とを混合し、混合物17.5ｍｌを
採取し、17.5ｍｌの溶液１と混合した。
１と３９１ｍｌの溶液２とを混合し、混合物17.5ｍｌを
採取し、17.5ｍｌの溶液１と混合した。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B024 AA01 GA10 HA20 4B065 AA90X AB04 BA08 BB02 BB16 BD15 CA44 4C087 AA02 AA03 BB37 DA31 MA17 MA66 NA14 ZB09 ZB26
Claims (18)
- 【請求項１】 樹枝状細胞と腫瘍細胞とを融合する方法
であって、樹枝状細胞と腫瘍細胞とを混合し、場合によ
っては、洗浄媒体で洗浄し、次いで遠心分離機にかけ、
ペレットを電気融合媒体に受容し、次いで電気融合によ
って処理する形式のものにおいて、電気融合媒体が、下
記内容物質、すなわち、 砂糖 ２０ｍＭ／ｌ〜１５０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液である
ことを特徴とする方法。 - 【請求項２】 砂糖濃度が、７５ｍＭ／ｌであり、マグ
ネシウム塩濃度が、0.5ｍＭ／ｌであり、カルシウム塩
濃度が、 0.1ｍＭ／ｌであることを特徴とする請求項１
に係る方法。 - 【請求項３】 砂糖としてソルビット又はグルコースを
使用することを特徴とする請求項１又は２に係る方法。 - 【請求項４】 砂糖として部分的にトレハロースを使用
することを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に係
る方法。 - 【請求項５】 電気融合媒体が、７０〜９０μＳの導電
率と、約 6.6〜7.0のｐＨ値と、７０ｍＯｓｍの浸透圧
とを有することを特徴とする請求項１〜４のいずれか１
項に係る方法。 - 【請求項６】 洗浄媒体が、下記内容物質、すなわち、 砂糖 ２７０ｍＭ／ｌ〜３１０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液である
ことを特徴とする請求項１〜５のいずれか１項に係る方
法。 - 【請求項７】 洗浄媒体が、約７５μＳの導電率と、約
6.3〜7.0 のｐＨ値と、約２８０ｍＯｓｍの浸透圧とを
有することを特徴とする請求項６に係る方法。 - 【請求項８】 洗浄媒体及び／又は電気融合媒体におい
て、砂糖をポリエチレングリコールで部分的に置き換え
ることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に係る
方法。 - 【請求項９】 電気融合時、第１工程（前処理）におい
て、電界強度２５０〜１０００Ｖ／ｃｍの交流電圧を３
０ｓｅｃ〜３ｍｉｎの時間にわたって印加することを特
徴とする請求項１〜８のいずれか１項に係る方法。 - 【請求項10】 電気融合時、第２工程（パルス）におい
て、電界強度７５０〜２５００Ｖ／ｃｍの直流電圧及び
１５μｓｅｃ〜１ｍｓｅｃの期間の少なくとも１つのパ
ルスを印加することを特徴とする請求項１〜９のいずれ
か１項に係る方法。 - 【請求項11】 電気融合時、第３工程（後処理）におい
て、電界強度１２５〜５００Ｖ／ｃｍの交流電圧を５ｓ
ｅｃ〜６０ｓｅｃの時間にわたって印加することを特徴
とする請求項１〜10のいずれか１項に係る方法。 - 【請求項12】 電気融合の第１，第３工程における周波
数が、１ｋＨｚ〜４ＭＨｚの範囲にあることを特徴とす
る請求項１〜11のいずれか１項に係る方法。 - 【請求項13】 半導体技術によって製造した電極からな
るマイクロ電極構造又はナノ電極構造において電気融合
を行うことを特徴とする請求項１〜12のいずれか１項に
係る方法。 - 【請求項14】 電気融合を自動化することを特徴とする
請求項13に係る方法。 - 【請求項15】 異種の細胞を所定の対をなすよう統合す
ることを特徴とする請求項１〜14のいずれか１項に係る
方法。 - 【請求項16】 第３工程後、細胞を室温に１０ｍｉｎ放
置し、次いで、生理学的緩衝条件を形成し、次いで、３
７℃において少なくとも３０ｍｉｎにわたって培養する
ことを特徴とする請求項１〜15のいずれか１項に係る方
法。 - 【請求項17】 請求項１〜16のいずれか１項に係る方法
に使用する電気融合媒体において、該電気融合媒体が、
下記内容物質、すなわち、 砂糖 ２０ｍＭ／ｌ〜１５０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液である
ことを特徴とする電気融合媒体。 - 【請求項18】 請求項１〜16のいずれか１項に係る方法
に使用する洗浄媒体において、該洗浄媒体が、下記内容
物質、すなわち、 砂糖 ２７０ｍＭ／ｌ〜３１０ｍＭ／ｌ， マグネシウム塩 0.05ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ及び カルシウム塩 0.01ｍＭ／ｌ〜１ｍＭ／ｌ を発熱物質を含まない無菌蒸留水に溶解した溶液である
ことを特徴とする洗浄媒体。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10047272.9 | 2000-09-14 | ||
| DE10047272A DE10047272B4 (de) | 2000-09-14 | 2000-09-14 | Verfahren zur Fusion von dendritischen Zellen mit erkrankten Gewebezellen, insbesondere Tumorzellen |
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|---|---|
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| EP (1) | EP1188827B1 (ja) |
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| WO2007001200A1 (en) * | 2005-06-23 | 2007-01-04 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetsvennostyu 'rusgen' | Mature dendritic cells loaded with tumor polylysates and antitumoral vaccine base thereon |
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| US20060134067A1 (en) * | 2003-02-18 | 2006-06-22 | Maxcyte, Inc. | Loading of cells with antigens by electroporation |
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|---|---|---|---|---|
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2001
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|---|---|---|---|---|
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