JP2001525367A - 膜関連ウイルス複製の阻害 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 宿主細胞のグルコシダーゼまたはグルコシルトランスフェラーゼ酵素を阻害する化合物を使用する、宿主細胞膜出芽ウイルスの形態形成およびそれにより引き起こされる感染を阻止する方法。グルコシルトランスフェラーゼ酵素を阻害する化合物を使用する脂質蓄積症を処置する方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、１９９７年１２月１１日出願の米国予備出願第６０／０６９,２４ ５号の優先権の利益を主張するものである。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、宿主細胞におけるグルコシダーゼ活性を阻害する化合物による、ウ
イルス感染の処置に関する。さらに、本発明は、罹患した細胞におけるグルコシ
ルトランスフェラーゼ活性を阻害する化合物による、脂質蓄積症の処置に関する
。本発明は、特に、１,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトールおよ
びその誘導体の使用に関する。

【０００３】 （発明の背景） 全世界で４００万人以上の人々が、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に慢性的に感
染しており、これは、先進諸国の国民の健康に対する最も深刻な脅威の１つであ
る（Hoofnagle et. al.,(1997)New Engl J Med 336: 347-356）。Ｃ型肝炎の感 染は、米国においては、年間１００００万人の死亡原因になっており（Hepatiti
s C Treatment, Washington Post, November 11, 1997, at A2）、有効な対策を
講じなければ、今後２０年間にその数は３倍になると予想されている。慢性的Ｈ
ＣＶにより、肝臓癌の危険性が増加する。ＨＣＶに慢性的に感染している人は全
世界で４００万人以上おり、先進諸国の国民の健康に対する最も深刻な脅威の１
つとなっている（Hoofnagle et. al.,(1997)New Engl J Med 336: 347-356）。 持続的感染がＨＣＶ患者の８５％で進行し、これら患者の少なくとも２０％は感
染から２０年以内に肝硬変になる。３９万人が北米において慢性的に感染してい
ると考えられるが、Ｃ型肝炎による合併症は、現在、米国における肝臓移植の最
も多い理由である。

【０００４】 ＨＣＶは、Flaviviridaeに属するＲＮＡウイルスである。個々の単離物は、密
接に関連しているがヘテロローガスなウイルスゲノムの集団からなる。この遺伝
的多様性によって、そのウイルスは宿主免疫系を逃れることができ、高い慢性感
染率につながる。

【０００５】 ＨＣＶ感染の処置に効果的な治療的介入（intervention）は、数と有効性にお
いて制限を受ける。ＨＣＶ感染の標準的な処置には、インターフェロンαの投与
がある。しかしながら，インターフェロンαの使用はＨＣＶに感染した人口の約
２０％に限られ（Hoofnagle et al. (1997) New Engl J Med 336: ）、この化合
物による処置は患者の５％にしか長期間の改善をもたらさない。さらに、インタ
ーフェロンαの合併症および制限によって、処置の適応性が著しく制限される。
経験的処置は、インターフェロンαの投与とリバビリン（１−α−Ｄ−リボフラ
ノシル−１ Ｈ−１,２,４−トリアゾール−３−カルボキシアミド）は、ＨＣＶ 感染が再発した患者の半分にしか長期間の改善をもたらさなかった（Hepatitis
C Treatment Washington Post, November 11, 1997, at A2）。はっきり言えば 、インターフェロンの結果は期待はずれだったので、より有効で毒性の低い治療
の探索を急がねばならない。このように、ＨＣＶ感染を有効に処置する治療的介
入に対する臨床上の必要性が存在している。

【０００６】 ＨＣＶに慢性的に感染している人々に加え、ＨＢＶに感染している人々が３５
００万人以上いる。これらのうち１５００万人以上が介入を受けることなく肝臓
疾患により亡くなっているようである。２００万人ものＨＢＶキャリアが先進諸
国に在住しており、ＨＣＶキャリアの大部分も在住している。

【０００７】 ＨＣＶに感染している人の大多数がＨＢＶにも感染している。ＨＢＶとＨＣＶ
ウイルスは、治療上有意な方法がお互い異なるので、ＨＢＶ／ＨＣＶ複合感染に
対する治療は特に難しい。ＨＢＶはヘパドナウイルスであり、他方ＨＣＶはペス
チウイルスである。ＨＢＶはＤＮＡを含むウイルスであり、そのゲノムは、ＤＮ
Ａ依存性ＲＮＡポリメラーゼとＲＮＡ依存性ＤＮＡポリメラーゼ（即ち逆転写酵
素）の組合せを用いて感染細胞の核内で複製される。ＨＣＶはＲＮＡを含むウイ
ルスであり、そのゲノムは、１またはそれ以上の種類のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリ
メラーゼを用いて感染細胞の細胞質内で複製される。ＨＢＶ感染およびＨＣＶ感
染が頻繁に併発するにも関わらず、ＨＢＶの処置に有効であると知られている多
くの化合物は、ＨＣＶに対しては有効ではない。例えば、ラミブジン（ヌクレオ
チドアナログ３ＴＣ）は、ＨＢＶ感染の処置に有用ではあるが、ＨＣＶ感染の処
置には有用ではない。抗ウイルス剤に対するＨＢＶおよびＨＣＶの感受性の違い
は、疑いなく、遺伝的に基づいたそれらの複製の違いに関連している。ＨＢＶと
ＨＣＶ感染の両方を有効に処置する治療的介入の、特に重要な必要性が存在して
いる。

【０００８】 感染した動物細胞の細胞内膜に関連する膜からエンベロープを得る動物ウイル
スは、家畜産業に相当な損失をもたらす（Sullivan et al. (1995) Virus Res 3
8: 231-239）。そのような動物ウイルスには、ペスチウイルスやフラビウイルス
、例えばウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）、古典的なブタ熱病ウイルス
、国境病ウイルスや豚コレラウイルスなどが含まれる。

【０００９】 ＨＣＶが属するフラビウイルスグループは、節足動物の媒介によって伝染する
数多くのヒトの疾患の病原物質に含まれることが分かっている。フラビウイルス
によって引き起こされるヒトの疾患には、種々の出血熱、肝炎、および脳炎が含
まれる。ヒトにおいてこれらの疾患を引き起こすことが分かっているウイルスが
同定されており、例えば、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス１−４、日本脳炎ウ
イルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ロチオウイルス、ウェストナイル熱ウイルス
、セント・ルイス脳炎ウイルス、だに媒介脳炎ウイルス、跳躍病ウイルス、ポウ
サン・ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、およびキャサヌル森林熱ウイルスが
含まれる。したがって、フラビウイルスまたはペスチウイルスに感染した動物並
びにヒトの処置に対する非常に重要な必要性が存在している。

【００１０】 （発明の要約） 本発明は、感染細胞の細胞内膜に関連する膜からエンベロープを獲得するよう
なウイルスの形態形成を阻害する方法であって、細胞の小胞体内腔に関連するグ
ルコシダーゼ酵素の活性を阻害するのに有効な量でグルコシダーゼ阻害剤をその
細胞に投与することを含んでなる方法を提供する。ある態様では、ウイルスはフ
ラビウイルスおよびペスチウイルス、例えばＣ型肝炎ウイルス、ウシウイルス性
下痢ウイルス、古典的ブタ熱病ウイルス、国境病ウイルス、豚コレラウイルスな
ど、からなる群から選択される。また別の態様では、膜は、小胞体の内腔を取り
囲んでいる膜およびゴルジ装置の内腔を取り囲んでいる膜からなる群から選択さ
れる。

【００１１】 本発明の好ましい態様では、グルコシダーゼ阻害剤は、１,５−ジデオキシ− １,５−イミノ−Ｄ−グルシトールまたはＮ−アルキル、Ｎ−アシル、Ｎ−アロ イル、Ｎ−アルアルキルおよびＯ−アシル誘導体からなる群から選択されるその
誘導体である。

【００１２】 本発明は、小胞体（ＥＲ）に関連する内側の細胞膜からエンベロープを獲得し
ているようなウイルスの形態形成を阻害する方法を含む。この方法は、細胞にグ
ルコシダーゼ阻害剤を、細胞の小胞体に関連するグルコシダーゼ酵素の活性を阻
害しそれによりそのウイルスの形態形成が阻害されるのに有用な量で投与するこ
とを含む。ヒト肝細胞やウシ単核球が含まれるがこれに限られない、このウイル
スに感染した哺乳類細胞は、治療標的として特に企図される。

【００１３】 本発明はさらに、ウイルス感染細胞の小胞体に関連する膜からエンベロープを
獲得することによって特徴づけられるウイルスに感染した動物を処置するための
方法を含む。この方法は、その動物にグルコシダーゼ阻害剤を、その動物のウイ
ルス感染細胞の小胞体のグルコシダーゼ酵素の活性を阻害してそれによりその動
物におけるウイルス感染の減少（reducing）、除去(ablating)または縮小(dimin
ishing)に有効な量で投与することを含む。動物は、好ましくは、ブタまたはウ シ、特にヒトなどの哺乳類である。

【００１４】 本発明の方法は、ウイルスの形態形成の阻害またはＥＲに関連する膜からエン
ベロープを獲得するようなウイルスに感染した動物を処置するのに有用である。
フラビウイルスおよびポスチウイルスはいずれも、それらウイルスのエンベロー
プをＥＲに関連する膜から獲得するので、本発明の方法は、ウイルスの形態形成
の阻害、またはフラビウイルスおよびポスチウイルスによる感染の処置に特に有
用であると考えられる。フラビウイルスによる感染には、黄熱ウイルス、デング
熱ウイルス１−４、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ロチオウイル
ス、ウェストナイル熱ウイルス、セント・ルイス脳炎ウイルス、だに媒介脳炎ウ
イルス、跳躍病ウイルス、ポウサン・ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、およ
びキャサヌル森林熱ウイルスによって引き起こされる感染が含まれるがこれに限
られない。ペスチウイルスによる感染には、ＨＣＶ、風疹ウイルス、古典的ブタ
熱病ウイルス、国境病ウイルスおよび豚コレラウイルスによる感染が含まれるが
これに限られない。

【００１５】 本発明のさらなる態様によれば、グルコシダーゼ阻害剤またはグルコシルトラ
ンスフェラーゼを動物肝細胞に標的化するための方法であって、１,５−ジデオ キシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトールのＮ−アルキル誘導体で該肝細胞を標 的化することによる方法を提供する。

【００１６】 本発明の別の態様によれば、罹患した人の細胞においてグルコシルまたはガラ
クトシルが結合した脂質が蓄積する、脂質蓄積症を処置するための方法を提供す
る。本発明のこの１つの態様では、この方法は、動物の罹患した細胞にＮ−ノニ
ル−１,５−ジデオキシ−１，５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導体の有効なグ ルコシルトランスフェラーゼ阻害量を投与することによる、動物におけるリソソ
ーム蓄積症の処置を含む。本発明の好ましい態様では、動物はテイ-サックス病 、ゴーシェ病、クラッベ病、またはファブリ病を患っている、

【００１７】 本発明のさらなる態様によれば、該ウイルスによる感染の続発症である癌の進
行から、ウイルス成分を動物細胞の内膜から獲得するようなウイルスによる感染
から、哺乳類を保護するための予防的方法であって、有効な抗ウイルス量の動物
細胞グルコシダーゼ阻害剤をウイルスに感染した動物細胞に投与することを含む
方法を提供する。本発明の好ましい態様では、ウイルスグルコシダーゼ阻害剤は
、１,５−ジデオキシ−１,５−Ｄ−グルシトールおよびその誘導体からなる群か
ら選択される。

【００１８】 （好ましい態様の詳細な記載） ウイルスエンベロープ糖タンパク質を合成し、適切に折りたたむために宿主細
胞のグリコシダーゼ酵素を必要とするウイルスによる感染は、宿主細胞にそのよ
うな酵素の阻害剤を投与することにより処置することができる。標的となるウイ
ルスは、小胞体（ＥＲ）に関連する内側の細胞膜と共同してエンベロープの成分
を獲得するいずれかのウイルスである。好ましいウイルスは、フラビウイルスま
たはペスチウイルスにグループするウイルスである。

【００１９】 細胞の「ＥＲに関連する膜」とは、細胞のＥＲの内腔を取り囲んでいる膜を意
味する。ゴルジ装置（ＧＡ）の内腔を取り囲んでいる膜、ＥＲからＧＡへの通過
する小胞を取り囲んでいる膜、ＧＡからＥＲへ通過する小胞を取り囲んでいる膜
、ＧＡまたはＥＲから細胞の原形質膜へ通過する小胞の内腔を取り囲んでいる膜
、ＧＡまたはＥＲから細胞の核膜へ通過する小胞を取り囲んでいる膜、またはＧ
ＡまたはＥＲからミトコンドリア膜へ通過する小胞の内腔を取り囲んでいる膜を
意味する。

【００２０】 細胞の「ＥＲに関連するグルコシダーゼ酵素」とは、細胞のＥＲの内腔側に埋
め込まれた、結合した、またはそこに融合した膜内に含まれるグルコシダーゼ酵
素を意味する。例えば、哺乳類α−グルコシダーゼＩおよび哺乳類α−グルコシ
ダーゼＩＩは哺乳類細胞のＥＲに関連するグルコシダーゼ酵素である。

【００２１】 本発明の方法にしたがって処置されるウイルスに感染した動物細胞は、細胞内
の膜に関連するグルコシダーゼ酵素、好ましくは小胞体（ＥＲ）に関連する酵素
を含む細胞である。

【００２２】 グルコシダーゼに対し阻害効果を示す薬剤は、グルコースの構造的アナログで
あるためにそのような効果を示すと考えられている。これら薬剤の１つは、１, ５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール（あるいはデオキシノジリ マイシン）というイミノ糖であり、以下「ＤＮＪ」とする。数多くのＤＮＪ誘導
体が記載されている。ＤＮＪおよびそのアルキル誘導体は、Ｎ−結合したオリゴ
糖プロセシング酵素、αグルコシダーゼＩおよびαグルコシダーゼＩＩの強力な
阻害剤である（Saunier et al. (1982)J Biol Chem 257: 14155-14161;Elbein (
1987)ann Rev Biochem 56: 497-534）。これらのグルコシダーゼは、哺乳類細胞
の小胞体に関連する。ＤＮＪのＮ−ブチルおよびＮ−ノニル誘導体もゴルジに関
連するグルコシルトランスフェラーゼを阻害する。

【００２３】 ＤＮＪを用いる、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）に感染した哺乳類の処置の
方法が記載されている（Bryantらに発行された米国特許第５,６２２,９７２号）
。ＤＮＪはグルコースアナログであるため、グルコシダーゼに対する阻害効果を
示すと考えられている。しかし、Bryantは、ＤＮＪが観察された抗ＲＳＶ活性を
示すそのメカニズムについてはなんら開示していない。パラミクソウイルスであ
るＲＳＶは、そのエンベロープをＲＳＶ感染細胞の原形質膜から獲得する。

【００２４】 ＤＮＪおよびＮ−メチル−ＤＮＪの使用もまた、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩ
Ｖ）、ネコ白血病ウイルス、ウマ感染性貧血ウイルス、およびヒツジおよびヤギ
のレンチウイルスなどの非欠損レトロウイルスの複製を破壊することが開示され
ている（米国特許第５,６４３,８８８号および同第５,２６４,３５６号；Acosta
et al. (1994)Am J Hosp Pharm 51: 2251-2267）。

【００２５】 我々は以前、組織培養細胞のヒト肝芽細胞腫からのヒトＢ型肝炎ウイルス（Ｈ
ＢＶ）の分泌が、宿主の生存力を脅かさない条件下で、小胞体（ＥＲ）において
αグルコシダーゼ活性の阻害剤に対して感受性であることを示した（Block et a
l. 1994）。Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染した肝臓細胞は、感染性の、ヌ クレオカプシドを含むビリオンを、過剰の非感染性ＤＮＡを含まない「サブウイ
ルス（subviral）」粒子とともに分泌する。これら粒子はすべてＥＲ成分または
ポストＥＲ成分例えば中間体成分などから発芽すると考えられている（Huovila
et al. (1992) J Cell Biol 118: 1305-1320; Patzer et al. (1986) J Virol 5
8: 884-892）。成熟ＨＢＶ出現の阻害は、ＨｅｐＧ２細胞に由来する２.１５細 胞（Lu et al. (1995) Virology 213: 660-665; Lu et al. (1997) Proc. Natl
Acad Sci USA 94: 2380-2385）の小胞体（ＥＲ）に通常関連する１またはそれ以
上のグルコシダーゼ酵素またはグルコシルトランスフェラーゼ酵素の活性の阻害
によって引き起こされる。

【００２６】 研究により、ＤＮＪ誘導体の抗ＨＩＶ特性は、ＨＩＶの細胞からの発芽を直接
的に阻害するというよりはむしろ、ＨＩＶエンベロープタンパク質の不適切な糖
鎖付与であると示唆されている（Dedera et al. (1990)AIDS Res Hum Retrovir
6: 785-794; Fischer et al. (1995) J Virol 69: 5791-5797; Taylor et al. (
1994) Antimicrob Agents Chemother 38: 1780-1787)。

【００２７】 ＤＮＪの１つの誘導体Ｎ−ブチル−１,５−ジデオキシ−１,５−Ｄ−グルシト
ール（ＮＢＤＮＪ）は、安定なトランスフェクトされたＨｅｐＧ２細胞からの成
熟ＨＢＶビリオンの出現を阻止するが、サブウイルス粒子の出現は阻止しない（
Block et al. (1994) Proc Natl Acad Sci USA 91: 2235-2239）。このように、
原形質膜を通じて発芽すると考えられているＨＩＶビリオンの形態形成は、ＮＢ
ＤＮＪの存在によっては影響されないようである。しかしながら、ＮＢＤＮＪに
暴露されたＨＩＶ感染細胞から放出されるウイルス粒子の感染性は、ＮＢＤＮＪ
に暴露されなかった細胞から放出されるＨＩＶ粒子と比較して大きく減少する（
Dedera et al. 前掲; Fisher et al. 前掲；Taylor et al., 前掲）。これらの 研究結果は、ＮＢＤＮＪの抗ＨＩＶ特性は、細胞からのＨＩＶ発芽の直接的な阻
害よりはむしろ、標的細胞の不適切なウイルス融合の結果であるということを示
唆している。

【００２８】 さらに最近になって、我々は、ＨＢＶ感染のウッドチャック動物モデルにおい
てグルコシダーゼ阻害剤の抗ウイルス効果を実証した。ウッドチャック肝炎ウイ
ルス（ＷＨＶ）に慢性的に感染したウッドチャックでは、ＥＲαグルコシダーゼ
阻害剤による処置は、ウイルスエンベロープ糖タンパク質の適切な折り畳みと輸
送を破壊し、感染性のエンベロープに包まれたウイルスの分泌を阻止する（Bloc
k et al. 1998）。

【００２９】 ＨＩＶおよびＲＳＶの状況との最も有意で明らかな違いは、適度な量のグルコ
シダーゼだけでＨＢＶおよびＢＶＤＶ分泌の強力な阻害がもたらされるというこ
とである。このことは、ＨＩＶとＲＳＶなどとは異なり、内膜から出芽するウイ
ルスについては、エンベロープウイルスタンパク質のほんの一部分の破壊でウイ
ルスの分泌を阻害するに十分であるということを示唆している。これは、破壊さ
れたＨＢＶおよびＢＶＤＶウイルスタンパク質がウイルス分泌の「ドミナント・
ネガティブ」な毒物としてはたらき、それ自身が抗ウイルス薬と同様、抗ウイル
ス剤として考えることができるということを、我々の証拠が示唆しているという
事実によるのであろう。

【００３０】 ＥＲαグルコシダーゼは、形成途中の糖タンパク質に結合したＮ−グルカン鎖
からの末端グルコース残基の段階的な脱離を担っている。これにより、その糖タ
ンパク質と、モノグリコシル化された糖タンパク質に選択的に結合するＥＲシャ
ペロンであるカルネキシンおよびカルレティキュリンとの相互作用が可能になる
。カルネキシンとの相互作用は、全部ではないが一部の糖タンパク質の正確な折
り畳みにとって非常に重要であり、グリコシダーゼの阻害剤は、カルネキシンに
依存しているタンパク質を特異的に標的化するのに使用することができる。Ｎ−
結合したグリカンは、糖タンパク質の運命と機能において多くの役割を担ってい
る。１つの機能は、レクチン様シャペロンタンパク質であるカルネキシンおよび
カルレティキュリンと、形成途中の糖タンパク質との相互作用を媒介することに
より、タンパク質の折り畳みを補助するというものである。それは、Ｎ−ブチル
−ＤＮＪおよびＮ−ノニル−ＤＮＪなどのαグルコセシダーゼの活性を阻害し、
タンパク質のミスフォールディングと小胞体内部での残存をもたらすことによっ
て阻止することが可能な、これらの相互作用である。我々は、Ｂ型肝炎ウイルス
（ＨＢＶ）エンベロープ糖タンパク質のうちの１つの、Ｎ−ノニル−ＤＮＪによ
って誘発されるミスフォールディングが、生体内でのウイルスの形成と分泌を阻
止し、この阻害剤がグリコシレーションを変化させ、綿製ＨＢＶ感染の動物モデ
ルにおいてウイルスのレベルを減少させることを証明した。

【００３１】 αグルコシダーゼ阻害によって起こるエンベロープタンパク質の変化に対する
ＨＢＶの強い感受性、および観察される抗ウイルス効果を達成のに酵素を高度に
阻害する必要はないという事実から、我々は、そのウイルスの感受性は、フォー
ルディングが起こるＥＲにおいてオリゴマー化とエンベロープの構築とをそのウ
イルスが行なわなければならないという事実に起因しているであろうと推測した
。ＨＩＶやＲＳＶによる刺激とは異なり、いくつかのミスフォールディングの起
きたエンベロープタンパク質は、宿主タンパク質における適切な包膜化を破壊し
、ウイルス構築に対して有するその阻害剤の阻害作用を、抗ウイルス阻害剤の濃
度では害は及ばないとみられる宿主細胞タンパク質に対して有する有害な影響と
の比較において増幅するに十分なものであろう。機構に関する研究によって、我
々は、ＥＲなどの細胞内膜からエンベロープを獲得する他のウイルスが、ＥＲα
グルコシダーゼ阻害（但し、それら糖タンパク質の１またはそれ以上がカルネキ
シン介在のフォールディングに依存するものである）に対して同等に感受性であ
ろうと提唱するに至った。

【００３２】 ＨＢＶとＨＣＶは生活環が完全に異なっているが、共通点が３つある。即ち、
これらは、肝臓を標的とし、ＥＲおよび他の内膜から出芽し、およびそれらのエ
ンベロープ糖タンパク質がカルネキシン依存性の経路によって折りたたまれる。
このことは、ＨＢＶに対して抗ウイルス効果を有すると示された同じ阻害剤が、
同じ提唱された機構によってＨＣＶを阻害し得るかどうかを調べるきっかけとな
った。

【００３３】 ２つのＨＣＶエンベロープ糖タンパク質Ｅ１およびＥ２（それぞれ５または６
個および７個のＮ−連結した糖タンパク質部位を含む）はいずれも、産生の際の
フォールディングの間にカルネキシンと相互作用する（Choukki et al., 1998）
。有効な培養細胞の複製システムがないため、ＨＣＶ粒子構築の理解は非常に限
られたものである。しかしながら、複合グリカンの不在、ＥＲにおける発現した
ＨＣＶ糖タンパク質の局在化と細胞表面におけるこれらタンパク質の不在は、内
部のビリオン形態形成がＥＲから細胞内の小胞への出芽によって起こっているこ
とを示唆している。さらに、成熟Ｅ１−Ｅ２ヘテロダイマーは、ＥＲから放出さ
れず、ＥＲ保持シグナルがＥ１とＥ２両方のＣ末端で同定された。

【００３４】 このことから、別のＥＲ結合性ウイルスウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤ
Ｖ）、ヒトＣ型肝炎（ＨＣＶ）の代理組織培養（tissue culture surrogate）に
対するグルコシダーゼ阻害剤の効果が予想された。ヒトＨＣＶの複製を支援する
ことが可能な適当な培養細胞系が存在しない状況では、両者とも有意な程度の局
所的なタンパク質領域の相同性（Miller et al. 1990）を有し、共通の複製戦略
を有し、そしておそらくウイルスの包膜化のための細胞下の局在が同じであるた
め、ウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）が、ＦＤＡ公認の、ＨＣＶモデル
微生物として用いられる（図１）。ＢＶＤＶに対する抗ウイルス効果を有するこ
とが分かっている化合物は、ＨＣＶの処置のための可能性のある候補として望ま
しい。

【００３５】 ＨＣＶと同様、ＢＶＤＶは、小さいエンベローププラス鎖ＲＮＡウイルスであ
り、Flaviviridaeのすべてのウイルスと同様、そのタンパク質のすべてを単独の
長いオープンリーディングフレーム（ORF）でコードする。ポリタンパク質のＮ 末端の位置が構造タンパク質、Ｃ末端が非構造または複製タンパク質である。Ｂ
ＶＤＶポリタンパク質は、２つのヘテロダイマー形成エンベロープタンパク質ｇ
ｐ２５（Ｅ１）およびｇｐ５３（Ｅ２）をコードする領域に６個の可能なＮ末端
グリコシレーション部位を有し、機能が未知の親水性分泌タンパク質であるｇｐ
４８（ＥＯ）をコードする領域には８個の可能なＮ−グリコシレーション部位を
有する。これらいずれかの糖タンパク質に結合したオリゴ糖の構造は今後決定さ
れなければならない。ＢＶＤＶは、ＥＲαグルコシダーゼ阻害剤に対してさらに
感受性であることがわかった。このことと、使用した阻害剤が生体内で肝細胞タ
イプの細胞に選択的に取りこまれ、生体内で肝臓において長く持続するという事
実によって、グルコシダーゼ阻害剤が広範な基礎をなす抗ウイルス性肝炎薬とし
て使用できるという期待に満ちた可能性が生まれている。

【００３６】 本明細書において、我々は、グルコシダーゼ阻害剤に対するＢＶＤＶの感受性
を説明し、ＥＲ発芽ウイルスがグリカンのプロセシングに依存して感受性である
ことについての可能性のある理由を考察する。我々は、組織培養における哺乳類
細胞の、ウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）への暴露によって生じる細胞
毒性が、その組織培養に対するグルコース阻害剤の添加によって阻止されるとい
うことを発見した。以下の実施例において使用するグルコース阻害剤には、１, ５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール（ＤＮＪ）の誘導体、Ｎ− ブチル−ＤＮＪ（ＮＢＤＮＪ）が含まれる。さらに、ＢＶＤＶ誘発性の細胞毒性
は、存在したとしてもＮＢＤＮＪによって媒介される毒性が宿主に対してほとん
どないことが観察される条件下で達成された。ＢＶＤＶは、Ｃ型肝炎ウイルス（
ＨＣＶ）の許容されている組織培養モデルであるので（Henzler, H.-J. and K.
Kaizer (1998) Nature Biotech 16: 1077-1078）、ＢＶＤＶの形態形成を阻害す
るための、本明細書に記載した組成物および方法もまた、ＨＣＶの形態形成の阻
害に有用である。

【００３７】 本発明の方法の実施に有効な化合物は、グルコース阻害剤、好ましくは哺乳類
のグルコース阻害剤を含む。本発明の方法に特に企図されるグルコシダーゼ阻害
剤は、ＤＮＪ、即ち１,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール、お
よびその誘導体であり、式

【化４】 ［式中、Ｒ¹は、 （ａ）Ｈ； （ｂ）アルキル； （ｃ）アルケニル； （ｄ）アルコキシ； （ｅ）アシル； （ｆ）アリール； （ｇ）アルアルキル； （ｈ）アロイル；および （ｉ）アルアルコキシ；および （ｊ）ヘテロ環基 からなる群から選択され、 Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は、同じかまたは異なり、 （ｗ）アシル；および （ｘ）アロイル からなる群から選択され、 前記アルキルおよびアルケニル基は、炭素原子１〜１４を有する、直鎖または
分岐鎖の、置換されているまたは置換されていない基であり、前記アルケニル基
は１〜６の二重結合を有し、前記アリール、アルアルキル、およびアロイル基は
炭素原子７〜１４を有し、ヘテロ環基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_{1- 10} アルキル、Ｃ_1-10アルキレン、Ｃ_1-10アシルまたはＣ_1-10アルコキシで置換さ
れている］ を有する化合物、または該化合物のエナンチオマー若しくは立体異性体、または
該化合物、エナンチオマーもしくは立体異性体の生理学的に許容し得る塩もしく
は溶媒和物。

【００３８】 好ましいのは、ＤＮＪのＮ−アルキル、Ｎ−アシル、Ｎ−アロイル、Ｎ−アル
アルキル、およびＯ−アシル誘導体である。特に好ましいＤＮＪの誘導体は、Ｎ
−ブチル−ＤＮＪである。更なる好ましいＤＮＪ誘導体は、１,５−ジデオキシ −１,５−ノニルイルイミノ−Ｄ−グルシトールでり、本明細書では、Ｎ−ノニ ル−ＤＮＪまたはＮＮ−ＤＮＪと略す。

【００３９】 記載されているＤＮＪ誘導体、例えば米国特許第５,６２２,９７２号に記載さ
れているものには、以下のものが含まれる： １,５−ジデオキシ−１,５−ブチルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ブチルイミノ−４Ｒ,６−Ｏ−フェニルメチレン− Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−メチルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ヘキシルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ノニルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−（２−エチルブチルイミノ）−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ベンジルオキシカルボニルイミノ−Ｄ−グルシトー
ル； １,５−ジデオキシ−１,５−フェニルアセチルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ベンゾイルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−エチルマロニルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ヒドロシンナモイルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−メチルマロニルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ブチルイミノ−４Ｒ,６−Ｏ−フェニルメチレン− Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−（フェノキシメチル）カルボニルイミノ−Ｄ−グル
シトール； １,５−ジデオキシ−１,５−エチルブチルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−ヘキシルイミノ−４Ｒ,６−Ｏ−フェニルメチレン −Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−（２−メチルペンチル）イミノ−Ｄ−グルシトール
； １,５−ジデオキシ−１,５−（３−ニコチノイル）イミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−シンナモイルイミノ−Ｄ−グルシトール； １,５−ジデオキシ−１,５−（４−クロロフェニル）アセチルイミノ−Ｄ−グル
シトール； １,５−ジデオキシ−１,５−（４−ビフェニル）アセチルイミノ−Ｄ−グルシト
ール。 化合物は、イミノ保護した化学種またはそのイミノ保護化学種のジ−もしくはテ
トラ−アセテート、プロピオネート、ブチレート、イソブチレートとして使用す
る。

【００４０】 ＤＮＪ誘導体を合成する方法は知られており記載されており、例えば、米国特
許第５,６２２,９７２号、同第４,２４６,３４５号、同第４,２６６,０２５号、
同第４,４０５,７１４号、および同第４,８０６,６５０号および１９９２年３月
１６日出願の米国特許出願第０７／８５１,８１８号に記載されている。

【００４１】 基本骨格である１,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトールの置換
基は、その化合物の抗ウイルス剤としての効力に影響し得、さらに、分子を別の
器官よりもある器官に対して選択的に標的化することができる。例えば、Ｎ−ブ
チル置換されたＤＮＪは、Ｎ−ノニル置換されたＤＮＪよりも、ＢＶＤＶウイル
スの細胞内産生の阻害において効力が低い（図１および実施例２）。様々な置換
された化合物の効力の比較を実施例１に記載する。Ｎ−ノニル−置換されたＤＮ
Ｊは選択的に肝細胞に取りこまれる（図７および実施例７）。様々な置換された
ＤＮＪの選択的な標的化特性を測定するための方法を、実施例８と図８に記載す
る。

【００４２】 本明細書に記載したＤＮＪ誘導体は、遊離アミンの形態で、または薬学的に許
容し得る塩の形態で使用するができる。薬学的な塩および塩の形態を製造するた
めの方法はBerge, S. et al. (1977)J Pharm Sci 66 (1): 1-18に記載されてい る。塩の形態は、例えば、ＤＮＪ誘導体のＨＣｌ塩が示される。ＤＮＪ誘導体は
また、米国特許第５,０４３,２７３号および同第５,１０３,００８号に記載の６
−リン酸化誘導体などのプロドラッグの形態で使用することもできる。薬学的に
許容し得る担体をさらに含む組成物および組成物の動物への送達に勇往な成分を
さらに含む組成物の使用は明らかに企図される。組成物をヒトに送達するのに有
用な数多くの薬学的に許容し得る担体および組成物をウシなどの他の動物に送達
するのに有用な成分は、当分野において知られている。そのような担体および成
分の本発明の組成物への添加は、当業者の水準の範囲内に十分入る。

【００４３】 本発明の方法は、ＤＮＪ誘導体と補助的な抗ウイルス化合物の使用をさらに含
むことができる。補助的な抗ウイルス化合物は、現在認識されているいずれの抗
ウイルス化合物、またはこれから認識されるいずれの抗ウイルス化合物でもよい
。例示としては、補助的な抗ウイルス化合物は、インターフェロンα、リバビリ
ン、ラミブジン、ブレフェルジンＡ、モネンシン、Tuvirumab(Protein Design L
abs)Penciclovir(SmithKline Beecham, Philadelphia, PA)Famciclovir(SmithKl
ine Beecham, Philadelphia, PA),Betaseron(Chiron Corp),Theradigm-HBV(Cyte
l, La Jolla, CA),Adefovir Dipivoxil (GS 840, Gilead Sciences, Foster Cit
y, CA), Intron A (Schering Plough), Roferon (Roche labs),ベータインター フェロン、ＢＭＳ２００，４７５(Bristol Myers Squibb),Lobucavir(Bristol M
yers Squibb),FTC(Triangle, Inc.),DAPD(Triangle, Inc.),チモシンアルファペ
プチド、Glycovir(Block et al. (1994) Proc Natl Acad Sci 91: 2235-2240),
顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（Martin et al.(1993) Hepatology 18:
775-780）、“イムノ−サイトカイン”（Guidotti et al. (1994) J Virol 68:
1265-1270）, CDG(Fourel et al. (1994) J Virol 68: 1059-1065)などがある 。

【００４４】脂質蓄積症の処置 複合脂質に取りこまれているグルコシルまたはガラクトシル残基が組織に蓄積
する脂質蓄積症のリピドーシスのグループに属する疾患は、本発明の化合物を阻
害するグルコシルトランスフェラーゼ、特にＮ−ノニル−１,５−ジデオキシ− １,５−イミノ−Ｄ−グルシトールを本発明の方法にしたがい使用して処置する ことができる。

【００４５】ゴーシェ病 網内細胞における異常なグルコセレブロシドの蓄積、および肝脾腫大、皮膚の
色素沈着、骨格の病変および瞼裂斑により臨床的顕在化を生じる脂質代謝の家族
性常染色体劣性の疾患。

【００４６】 この疾患の根底にある欠陥は、グルコセレブロシドをグルコースとセラミドに
正常に加水分解するグルコセレブロシダーゼ活性の欠損にある。典型的な病理学
的所見は、広範な細網細胞の過形成である。細胞は、グルコセレブロシドおよび
線維性細胞質で満たされており、形状は様々で、１またはいくつかの中心から離
れた位置にある小さな核を有する。これらの細網細胞は、肝臓、脾臓、リンパ節
および骨髄にみられる。

【００４７】クラッベ病（ガラクトシルセラミドリピドーシス） ガラクトセレブロシドβ−ガラクトシダーゼの欠損が間接的原因である家族性
の脂質蓄積症。発育の遅滞、麻痺、視覚消失、視覚消失、および偽球麻痺を特徴
とする致命的な乳児疾患。

【００４８】ファブリ病（ガラクトシルガラクトシルグルコシルセラミドリピドーシス） 糖脂質が多くの組織に蓄積する脂質代謝の家族性疾患。代謝障害は、トリヘキ
ソシルセラミドの代謝に必要なリソソーム酵素αガラクトシダーゼの欠損によっ
て引き起こされる。罹患した人は、色素沈着や角膜混濁を生じる。

【００４９】テイ-サックス病（ＧＭ２ガングリオシド蓄積症） ヘキソサミニダーゼＡの欠損により引き起こされる家族性の劣性疾患であり、
ガングリオシド（グルコースとガラクトースからなるオリゴ糖を含んでなる複合
スフィンゴ脂質）の脳における蓄積を生じる。

【００５０】 本発明にしたがって動物または動物細胞へ投与する抗ウイルス剤の量は、細胞
内でＥＲまたは他の内膜に関連するグルコシダーゼの活性を有効に阻害する量で
ある。本発明の方法にしたがって動物または動物細胞へ投与するグルコシルトラ
ンスフェラーゼの量は、細胞内でＥＲまたは他の内膜に関連するグルコシルトラ
ンスフェラーゼの活性を十分に阻害する量である。本明細書において使用する「
阻害」なる語は、本発明のＤＮＪ誘導体化合物の非存在下で示される生物学的活
性の検出可能な減少および／または除去を意味する。「有効量」なる語は、望ま
しい効果を達成するに必要な組成物の量を意味する。本明細書において使用する
「処置」なる語は、患者の症状を減少または緩和し、症状の悪化、進行を阻止す
ること、原因となる因子の阻害もしくは除去、またはそこから開放された患者に
おける感染もしくは疾患を予防することを意味する。

【００５１】 即ち、例えば、リピドーシスに罹患している患者の処置により、影響を受けて
いる細胞における脂質蓄積の減少であり、処置される人において疾患の進行を阻
止であり得る。ウイルス感染の処置には、感染因子の破壊、その増殖または成熟
化の阻害もしくはそれらに対する妨害、その病理学的影響の中和などが含まれる
。細胞または動物二糖よされる組成物の量は、恐らく、その投与に伴う有用性に
勝るような有毒な作用を誘発しないような量であろう。

【００５２】 本発明の医薬組成物における活性成分の実際の投与レベルは、特定の患者に対
し所望の治療応答を達成するのに有効な活性化合物の量を投与するように変更す
ることができる。

【００５３】 選択する投与量レベルは、選択した化合物の活性、投与経路、処置する状態の
重篤度、および処置する患者の状態と以前の病歴に依存する。しかしながら、所
望の治療効果を達成するに必要な量よりも低い投与量レベルでの化合物の投与で
開始し、所望の効果を達成するまで徐々に投与量を増加させることは、当業者の
範囲内である。所望であれば、有効日用量を、例えば１日２〜４回の、複数の用
量に分割してもよい。但し、特定の患者に対する具体的な投与量レベルが、体重
、全般的な健康状態、食事、投与の時間と経路およびその他の薬剤との組合せ並
びに処置する疾患の重篤度を含む、様々な因子に依存するということは理解され
よう。成人のヒトの日用量は、体重１ｋｇあたり、通常、グルコシダーゼ阻害剤
が約１ｍｇ〜１ｇの間、好ましくは約１０ｍｇ〜１００ｍｇの間であると考えら
れる。勿論、細胞または動物に投与うする組成物の量は、グルコシダーゼ阻害剤
の分子量、投与経路など、当業者が理解している数多くの因子に依存する。

【００５４】 本発明の方法において有用な医薬組成物は、経口用固形製剤、眼薬、坐剤、エ
アゾル剤、局所用剤または他の同様な製剤として、全身的に投与することができ
る。グルコシダーゼ阻害剤またはグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤に加え、
そのような医薬組成物に、薬物の投与を増強したり促進することが分かっている
薬学的に許容し得る担体やその他の成分を含有させることができる。ナノ粒子、
リポソーム、再封入赤血球（resealed erythrocytes）、および免疫学的ベース のシステムなど、その他考えられる製剤もまた、本発明の方法に従うグルコシダ
ーゼ阻害剤またはグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤の投与に使用することが
できる。そのような、医薬組成物は、知られている経路により投与することがで
きる。本明細書において使用する「非経口的」なる語には、皮下、静脈内、動脈
内、およびくも膜下、および注射および注入法が含まれるこれに限られない。例
えば、医薬組成物は、経口的に、局所的に、非経口的に、全身的にまたは肺を経
由して投与することができる。

【００５５】 これらの組成物を本発明の方法に従って、１回投与量または異なる時間に投与
する複数の用量で投与することができる。ウイルスに対する組成物の阻害効果は
、通常の宿主細胞タンパク質のグリコシレーションに対する組成物の阻害効果よ
りも長く持続するので、ウイルス増殖を遅延し、宿主細胞タンパク質グリコシレ
ーションに対する影響が最小限になるよう投与レジメを調整することができる。
例えば、本発明の組成物の用量を１週間に１回、動物に投与することができ、そ
れによってウイルス増殖がその週全体にわたって持続するが、宿主細胞のタンパ
ク質グリコシレーションがその週につきほんの短い期間しか阻害されない。

【００５６】 これら化合物を投与する１つの利点は、これら化合物が、ウイルスの機能では
なく宿主細胞の酵素を阻害するということである。ウイルスが突然変異が可能で
あり、それによって、抗ウイルス剤による阻害に感受性であるウイルスの機能が
、その子孫ウイルスにおいては、その阻害剤による阻害に対して耐性になるとい
うことがよく知られている。例えば、ＡＺＴなど特定の抗ウイルス剤に対して影
響されないように変異するＨＩＶウイルスの能力についてはよく議論されている
。本発明の方法は、その方法において使用する組成物は、その生活環の一部とし
てウイルスが用いる宿主細胞の機能を標的としているという利点を有する。この
宿主の機能、即ち宿主細胞のＥＲに関連する宿主のグルコシダーゼにより触媒さ
れるグリコシレーションまたは宿主細胞のＥＲに関連する宿主のグルコシルトラ
ンスフェラーゼによって触媒されるグルコシル転移、はウイルスのゲノムにおけ
る変異によって引き起こされる変化の対象とはならない。したがって、本発明の
組成物による阻害に耐性であるウイルスの株が発生する見込みはない。

【００５７】実験手順 本発明において、ＮＢＤＮＪによって、組織培養にてＭＤＢＫ細胞単層にプラ
-クを形成するＢＶＤＶの能力を阻害することが観察された。例えば、ＢＶＤＶ に暴露し、ＮＢＤＮＪには暴露していない２つの培養細胞では、感染細胞を含む
ウェルに１６および２５のウイルスプラークが存在した。ＢＶＤＶに暴露し、感
染後すぐにＮＢＤＮＪに暴露した培養細胞では、プラ-クはみられなかった。細 胞単層は、ニュートラルレッド染色で調べたところ、外見上は正常で生存能力が
あった。

【００５８】 ウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）を、ＨＣＶの代理として、これらの
実験に使用した。ＨＣＶは、組織培養でもヒトおよびチンパンジー以外の動物で
も増殖し得るという信頼性に欠けるため、組織培養におけるＨＣＶの代用物の使
用が必要である。ＨＣＶと同様、ＢＶＤＶは、ＥＲから発芽すると考えれられて
いるペスチウイルスである（Harasawa et al. (1995) Microb Immunoln 39: 979
-985）。ＢＶＤＶは、組織培養での使用では、ＨＣＶに最も近い生化学的代理物
であるとウイルス学者によって考えられており（Suzich et al. (1993) J Virol
67: 6152-6158; Donis (1995) Vet Chinics N Amer 11: 393-423）、米国食品 医薬局の専門家の内部声明（internal statement）も含め、先駆的な専門家達は
、ＨＣＶの許容し得る代理として認識している。

【００５９】 ＨＣＶの代理物として有用であることとは別に、ＢＶＤＶも重要な家畜の病原
体である（Donis (1995) Vet Chinics N Amer 11: 393-423）。ＢＶＤＶ感染は 、米国において、かなりの家畜の損失の原因である（Sullivan et al. (1995)）
。

【００６０】 イミノ糖誘導体Ｎ−ブチル−デオキシノジリマイシン（ＮＢ−ＤＮＪ）および
Ｎ−ノニルデオキシノジリマイシン（ＮＮ−ＤＮＪ）は、Madin Darby Bovine K
idney (MDBK)細胞におけるＢＶＤＶの細胞変性効果を強力に阻害する。プラ−ク
減少および収量アッセイ（実施例２）を用いて、ノニル化合物（ＩＣ＝５０＝２
.５μＭ）がブチル化合物（ＩＣ５０＝１１５μＭ）よりも４６倍強力であるこ とが示された。

【００６１】 Ｎ−ノニル−ＤＮＪは、細胞ベースでの分析においてＮ−ブチル−ＤＮＪより
もはるかに強力なグルコシルトランスフェラーゼ活性の阻害剤であり、グルコシ
ルトランスフェラーゼの阻害が、多くのリソソーム糖脂質蓄積症の処置に有用で
あろう（F.M. Platt, G.R. Neises, G.Rinkensmeier, MJ. Townsend, V.H. Perr
y, R.L.Proia. B. Winchester, R.A. Dwek, T.D. Butters (1997) Science 276:
428-431）という点で、ノニルＤＮＪおよびＤＮＪのその他のアルキル鎖誘導体
は、テイ−サックス病、ゴーシェ病、ファブリ病などのリソソーム糖脂質蓄積症
の処置に価値があり得る。ＮＢ−ＤＮＪおよびＮＮ−ＤＮＪ化合物はいずれもＥ
Ｒαグルコシダーゼを阻害するだけでなく、スフィンゴ糖脂質生合成に関与する
セラミド特異的グルコシルトランスフェラーゼも阻害するので、これら薬剤が抗
ウイルス効果を発揮する経路を確立する必要があった。グルコシルトランスフェ
ラーゼのみを標的とする阻害剤であるＮ−ブチル−デオキシガラクトノジリマイ
シン（ＮＢ−ＤＧＪ）を用いて、２つの経路が薬理学的に解明されている。プラ
−ク減少アッセイでは、ＮＢ−ＤＮＪは、ＢＶＤＶプラ−ク形成に対して効果が
なかった（図３）。¹⁴Ｃ−パルミテート標識ＮＢ−ＤＧＪ処理したＭＤＢＫ細胞
におけるＧｌｃ−セラミドおよびガングリオシドの用量依存的な減少（非表示デ
ータ）から示されるように、使用したＮＢ−ＤＧＪ濃度は、グルコシルトランス
フェラーゼを完全に阻害するのに十分であった。このことは、ＮＢ−ＤＮＪおよ
びＮＮ−ＤＮＪについて観察された抗ウイルス効果がＮ−グリカンプロセシング
に関与するＥＲαグルコシダーゼの阻害に起因していることを示している。

【００６２】 それによりグルコシダーゼ阻害されるグリカンでさえ複合型のオリゴ糖へのさ
らなるプロセシングが可能である、脱グルコシル化を達成する別の経路を提供す
ることができる酵素である、ゴルジ体のエンドα−Ｄ−マンノシダーゼがＭＤＢ
Ｋ細胞において実質的なレベルで存在することが証明された。しかしながら、す
べてのタンパク質が必然的にこの経路を経由するわけではない。例えば、ＶＳＶ
−Ｇタンパク質は、ＭＤＢＫ細胞においてカスタノスペルミンによるグルコシダ
ーゼブロックの間もエンド−Ｈ−感受性である。したがって、ＮＢ−ＤＮＪおよ
びＮＮ−ＤＮＪによるによるＭＤＢＫ細胞の処置もまた、ウイルスの分泌の重要
となり得るＢＶＤＶエンベロープ糖タンパク質の複合型のＮ−グルカンからの獲
得を阻止する。この可能性を調べるために、ゴルジ体マンノシダーゼＩ阻害剤で
あるデオキシマンノジリマイシン（ＤＭＪ）を、プラ−ク減少アッセイに使用し
た（図４）。Ｎ−グリカン生合成において前の段階と相互作用することなく複合
型のＮ−グリカンの形成を阻止するＤＭＪは、ＢＶＤＶプラ−ク形成に対して効
果がなかった。このことは、ＮＢ−ＤＮＪおよびＮＮ−ＤＮＪの抗ウイルス効果
が複合Ｎ−グリカン形成前の段階によって媒介されることを意味している。

【００６３】 ＮＢ−ＤＮＪは宿主細胞の酵素を標的とするので、ウイルスレセプターを含め
他のＮ−グリコシル化された宿主タンパク質は機能が損なわれるかもしれない。
その場合、そのウイルスの宿主細胞への侵入は阻止されるであろう。この可能性
を調べるために、ＭＤＢＫ細胞を１ｍg／ｍLのＮＢ−ＤＮＪの存在または存在下
で、ウイルスに感染させるまで６日間増殖させた。薬物による前処理は、ウイル
スの侵入を阻止せず（非表示データ）、ウイルスレセプターがグルコシダーゼが
阻害された細胞において機能していることを示した。

【００６４】 Ｂ型肝炎ウイルス（ＢＢＶ）に感染したグルコシダーゼが阻害されたＨｅｐＧ
２細胞において、エンベロープを有するウイルスの分泌は阻止され、ウイルスの
ＤＮＡは細胞内で構築された。しかしながら、組織培養ではＨＢＶの感染性を測
定することは困難であるため、蓄積したＤＮＡが感染性の粒子内に含まれている
かどうかはあきらかでない。

【００６５】 ＢＶＤＶ分泌の阻止は、細胞の内側のウイルス物質の蓄積も引き起こし、この
場合、この物質が感染性であるかどうかを試験することはより容易である。感染
した未処理のおよびＮＢ−ＤＮＪ処理した細胞を十分に洗浄し、２〜３日後に凍
結融解法により溶解させた。収量アッセイを行ない、細胞リゼートおよび上清中
のプラ−ク形成単位（ｐｆｕ）の数を測定した（図５）。未処理の細胞について
は、感染性のウイルス物質の大部分（９７％以上）は、２日後に細胞の内側から
回収され、３日後には感染性のウイルス物質の３分の１が上清から検出できた。
意味深いことに、ＮＢ−ＤＮＪ処理した細胞では、感染性の物質は２日後には検
出できず、３日後には非常に少ない感染性物質が検出された。培地中には感染性
の物質は見られなかった。これらのデータは、ＢＶＤＶは、阻害剤処理した細胞
の内部には感染状態で蓄積しないことを示している。

【００６６】 ＢＶＤＶで処理した細胞は、ＮＢ−ＤＮＪが培地に残存し、グルコシダーゼが
阻害される限り、感染性のウイルスを分泌または蓄積しない。我々は、グルコシ
ダーゼブロックの効果から回復し、阻害剤の除去後分泌を再開するのにどのくら
いかかるかを調べたかった。感染した細胞を１ｍg／ｍLのＮＢ−ＤＮＪまたは３
０μg／ｍLのＮＮ−ＤＮＪのいずれかで２日間処理した後（即ち、未処理の対照
におけるプラ−クが完全に発達するまで）、薬物を含む培地を除き、薬物を含ま
ない（薬物マイナス）または薬物を含む（薬物プラス）培地に置き換えた。次い
で、特定の時点で培地を除き、プラ−ク減少および収量アッセイを用いて感染性
物質を分析した。薬物の除去後２４時間までは感染性物質は検出されず、ウイル
スは２４時間と４８時間の間で回復を開始しただけであった（図６）。

【００６７】 イミノ糖は、グルコシダーゼの可逆的な阻害剤であり、グルコシルトランスフ
ェラーゼ活性は、薬物の除去から２時間以内に正常値近くに回復する。だが、Ｎ
−ノニル−ＤＮＪおよびＮ−ブチルＤＮＪの抗ウイルス効果は、除去の２時間後
も持続し（図６）、ＨＢＶについて示された（Lu et al. (1997)）。したがって
、イミノ糖阻害剤の抗ウイルス効果は、薬物の除去後も長く細胞内に持続する寿
命の長い欠陥ウイルス糖タンパク質によって実際には媒介されていると提唱され
る。これら寿命の長い欠陥糖タンパク質はドミナントネガティブ的様式で作用す
るので、真の抗ウイルス剤と考えることができる。欠陥糖タンパク質が抗ウイル
ス剤として作用するという知見には発明性があり、これらウイルスによる感染の
処置と新たな処置の開発に有用であろう。

【００６８】 以下の実施例を引用して本発明をここに記載する。実施例は単に説明を目的と
して記載するものであり、本発明はそれにより限定されると認識すべきではなく
、むしろ本明細書に記載された教示の結果として明らかとなるいずれかのそして
すべての変更を含むものと考えるべきである。

【００６９】実験 材料および方法 細胞、ウイルスおよび阻害剤 非細胞変性（ncp）ＢＶＤＶ不含ＭＤＢＫ細胞および細胞変性（cp）ＢＶＤＶ ウイルス（ＮＡＤＬ株）は、Jhon McCauley博士（Institute of Animal Health,
Compton, UK）より寄贈頂いた。MDBKおよびHepG2細胞を、スクリーニングによ りBVDVおよびBVDV特異的抗体の存在下で陰性であることが分かっている１０％ウ
シ胎児血清（PAA Laboratories, Austria）を含むRPMI１６４０培地（GEBCO/BRL
）に維持した。N-ブチル−デオキシノジリマイシン（NBDNJ）およびＮ−ノニル −デオキシノジリマイシン（ＮＮ−ＤＮＪ）は、Monsanto Searleより得た。Ｎ Ｂ−ＤＮＪを培地に溶解し、使用する直前に濾過した。ＮＮ−ＤＮＪをエタノー
ル中で１３ｍｇ／ｍＬのストック溶液とし、使用する前に培地で希釈した。Ｎ−
ブチル−デオキシガラくトジフィマイシン（ＮＢ−ＤＧＪ）およびデオキシマン
ノジリマイシン（ＤＭＪ）をBoehringer Mannheim（ドイツ）より購入し、それ ぞれ２００ｍＭおよび１００ｍＭのストック水溶液とした。これら溶液を培地で
希釈し、使用する直前に濾過した。ＮＢ−［Ｕ−¹⁴Ｃ］デオキシノジリマイシン
（特異的抗体４.４ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）およびデオキシノジリマイシン（ＤＮＪ ）は、Ｇ．Ｄ．Ｓｅａｒｌｅより寄贈されたものである。

【００７０】 有意の程度の局所的なタンパク質領域相補性（Miller et al., 1990）、共通 の複製戦略、および恐らくウイルスのエンベロープ包囲のための細胞下での局在
について、ヒトＨＣＶとウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）はともに共通
しているので、ヒトＨＣＶの複製が支援可能な適当な細胞培地の存在下では、ウ
シウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）はＦＤＡ承認モデル微生物として働く（
図１）。ＢＶＤＶに対する抗ウイルス効果を有することが分かった化合物は、Ｇ
ＣＶの処置のための潜在性を秘めた候補として非常に有望である。

【００７１】 プラ−ク減少および収量アッセイ ＭＤＢＫ細胞を、阻害剤の存在下または非存在下で６ウェルプレートにて培養
し（図の凡例を参照）、３７℃にて１時間、ｃｐＢＶＤＶ（moi=０.００５；５ ００ｐｆｕ／ウェル）により感染させた。次いで、増殖培地単独または増殖培地
と抗ウイルス剤で接種を繰り返し、阻害剤の存在下または非存在下に２日または
３日インキュベーションした（プラ−ク減少アッセイ）。プラ−クの数を顕微鏡
かで目視により計数し、分泌した感染性ウイルスを含む上清をウェルから取り、
これを用いて６ウェルプレートでＭＤＢＫ細胞の新鮮な単層に感染させた。３日
後、得られたプラ−クを顕微鏡下で計数した（収量アッセイ）。

【００７２】実施例１ ＢＶＤＶに暴露したＭＤＢＫ細胞単層におけるプラ−ク形成に対する抗ウイルス
抗グリコシダーゼの存在の効果 ＭＤＢＫ細胞（ＡＴＣＣ番号２２ＣＣＬ Ｆ１１８５９、ＢＶＤＶ不含）を、 ２４ウェルのトレーの各ウェルにおいて半コンフルエントになるまで培養し、細
胞単層を形成した。使用した培地は、１０％（ｖ／ｖ）ウマ血清を含むダルベッ
コの改良Ｅａｇｌｅ培地であった。約１０⁵個の細胞を、１ｍLあたり約５００〜
約１０００プラ−ク形成単位（ＰＦＵ）の、培地に懸濁したＢＶＤＶのＮＡＤＬ
株（ＡＴＣＣ番号ＮＡＤＬ５３４ＶＲ）を含むウイルスストック溶液を希釈した
接種物の存在下で１時間インキュベーションすることにより、ＢＶＤＶ、ＮＡＤ
Ｌ株により感染多重度（moi）１未満で感染させた。次いで、接種物を培地のみ とまたはさらに図５に示された薬物の量（〜１０００ｍg／ｍLのＮＢＤＭＪ）を
含む培地と交換した。感染３日後、エタノール中０.２％（ｗ／ｖ）のクリスタ ルバイオレットによる染色の前と後で、細胞単層を顕微鏡で観察し、ウイルス感
染したプラ−クの存在と数を測定した（図５）。トリパン色素排除とＭＴＴアッ
セイにより測定すると、ＮＢＤＭＪに暴露した細胞は生存していた（結果をＣＣ
５０、即ちＭＴＴ活性について生存の５０％低下を生じるのに必要な薬物の量と
して表す）。これら実験の結果を以下の表および図１に示す。

【００７３】表１ Ｎ−ブチル−ＤＮＪによる処置。ＮＢＤＮＪに暴露した細胞は、１０００ｍg／ ｍLのＮＢＤＮＪに暴露した。

【表１】 注：“Ｃ”は、全面の細胞溶解が観察されたことを示す。 “１？”は、単一のＰＦＵであろう小さな領域の細胞溶解の存在を示す。 “ｓ”は、ＭＤＢＫ細胞単層をＢＶＤＶ ＰＦＵで感染させたときに通常観 察されるものよりも小さなプラ−クの存在を示す。

【００７４】実施例２ Ｎ−ブチル−ＤＮＪおよびＮ−ノニル−ＤＮＪ存在下での感染性ＢＶＤＶの分泌 ２４ウェルトレーの個々のウェルでＭＤＢＫ細胞を半コンフルエントまで培養
した。次いで、培地中に懸濁した約５００ＰＦＵのＢＶＤＶのＮＡＤＬ株の存在
下、３７℃にて１時間インキュベーションすることにより、細胞をＢＶＤＶに感
染させた。次いで、接種物を培地単独とまたはそれぞれ表２および表３に示され
たＮＢＤＮＪ又はＮＮＤＮＪの濃度を含有する培地と交換した。３日後、上清を
取り、６ウェルプレートにて新鮮なＭＤＢＫ単層を感染させるために使用した。
３日後、プラ−ク計数のための、エタノール中０.２％（ｗ／ｖ）のクリスタル バイオレットによる染色および生存能力のための０．２％ニュートラルレッドに
よる染色の前と後で、細胞単層を顕微鏡で観察し、ウイルス感染したプラ−クの
存在と数を測定した。結果は、阻害剤不含のプラ−クアッセイ上清（＝１００％
）による感染で生じたプラ−ク数の百分率として示した。これらの実験結果を表
２および表３および図１Ａおよび図１Ｂに示す。

【００７５】表２ ２組の観察結果をコンマで区切っている。

【表２】 注：“Ｃ”は、全面の細胞溶解が観察されたことを示す。

【００７６】表３ ＢＶＤＶによるプラ−ク形成に対するＮ−ノニル−ＤＮＪの存在の影響

【表３】 注：“Ｃ”は、全面の細胞溶解が観察されたことを示す。Ｎ−ノニル−ＤＮＪグ
ルコシダーゼ阻害剤（Glycobiology Institute, Oxford University "Compound
578"）。２組の観察結果をコンマで区切っている。

【００７７】 プラ−ク形成を５０％阻害するＮＢ−ＤＮＪの濃度（ＩＣ₅₀）は、約２０ｍg ／ｍLと測定された。ＭＤＢＫ細胞の５０％の死をもたらすＮＢ−ＤＮＪの濃度 （ＣＣ₅₀）は、計算により１０００ｍg／ｍL以上であった。Ｎ−ノニル−ＤＮＪ
についてのＩＣ₅₀の値は、約０.７５ｍg／ｍLであり、Ｎ−ノニルＤＮＪについ てのＣＣ₅₀の値は、約１００ｍg／ｍLであった。

【００７８】 ウイルス感染したプラ−クの数または単に大きさが、細胞をＮＢ−ＤＮＪまた
はＮＮ−ＤＮＪに暴露することにより減少したのかどうかについては明らかでな
い。ＢＶＤＶに感染したおよび２００ｍg／ｍLのＮＢ−ＤＮＪまたは１０ｍg／ ｍLのＮＮ−ＤＮＪのいずれかに暴露させた細胞において、目で観察される細胞 変性効果はなかった。細胞を１０００ｍg／ｍLのＮＢ−ＤＮＪに暴露しても測定
可能な毒性は生じなかった。細胞を５０ｍg／ｍLのＮＮ−ＤＮＪに暴露すると、
細胞は「ストレス」のかかった外観を有する単層を生じたが、生体染色により定
量し得る毒性作用はなかった。

【００７９】 実験結果は、ＮＮ−ＤＮＪおよびＮＢ−ＤＮＪが非常に有効な抗ウイルス剤で
あることを示している。ＢＶＤＶ感染は、ＨＣＶ感染に最も近い組織培養におい
て達成可能なモデルであって、ＢＶＤＶとＨＤＶは、生化学的、ウイルス学的、
そして遺伝学的にも非常に似ているので、これらのデータは明らかにＮｎ−ＤＮ
ＪおよびＮＢ−ＤＮＪも非常に有効な抗ウイルス剤であることを示している。

【００８０】実施例３ ＮＢ−ＤＮＪによるセラミド特異的グルコシルトランスフェラーゼの阻害に関す
る対照分析 ＭＤＢＫ細胞を¹⁴Ｃ−パルミテートＮ−ブチルデオキシガラクトノジリマイシ
ン（ＮＢ−ＤＮＪ）中でコンフルエントになるまで増殖させた。細胞をＰＢＳで
３回洗浄し、フラスコから剥がし、ＣＨＣl₃：ＭeＯＨ（２：１、ｖ／ｖ）を用 いて４℃にて一晩抽出した。最初の抽出分は保存し、さらにＣＨＣl₃：ＭeＯＨ （２：１、ｖ／ｖ）０.５ｍLを室温にて３時間かけて加えた。抽出分を集め、ア
リコートをシンチレーション計測した。試料を２００,０００ｃｐｍに調整し、 窒素下で乾燥し、１０μLのＣＨＣl₃：ＭeＯＨ（２：１、ｖ／ｖ）再懸濁し、Ｔ
ＬＣ（ＣＨＣl₃：ＭeＯＨ,２：１、ｖ／ｖ）により分離した。放射能標識した脂
質を蛍光間接撮影法により検出し、観察されたＧlcセラミドおよびガングリオシ
ドの用量依存的減少（データ非表示）は、セラミド特異的グルコシルトランスフ
ェラーゼが抗ウイルス作用を有しない濃度で阻害されたことを示した。

【００８１】実施例４ ＤＭＪによる複合糖質形成の阻害に関する対照分析 ３００μｇ／ｍLのＤＭＪの非存在／存在下で、ＭＤＢＫ細胞を３日間培養し た。ＧalβＧalＮＡcエピトープを認識するErythrina cristagalli（ＥＣＡ）レ
クチン（２８μg／ｍLおよび２８０μg／ｍL）で細胞を染色し、ＦＡＣＳで分析
した。低濃度のレクチンでは、染色強度のシフトは、レクチンが結合可能な結合
部位（即ち複合グルカン）の減少を示した。高濃度のレクチン濃度では、ＤＭＪ
の存在によって、細胞をレクチン結合による死から保護し得た。結果を図４のグ
ラフに示す。

【００８２】実施例５ 感染後のＮＢ−ＤＮＪ処置した細胞の内部および外部のウイルス物質の感染性 感染していない（Ａ）およびＢＶＤＶに感染した（ＢおよびＣ）ＭＤＢＫ細胞
を、１ｍg／ｍLのＮＢ−ＤＮＪの非存在下（ＡおよびＢ）または存在下（Ｃ）で
、２日間または３日間培養した。上清を保存し、細胞を洗浄し、凍結融解法によ
り溶解させた。収量分析を行ない、上清（Ｓ／Ｎ）および細胞リゼート中のプラ
−ク形成単位（ＰＦＵ）を測定した。結果を図５にプロットする。

【００８３】実施例６ ＮＢ−ＤＮＪまたはＮＮ−ＤＮＪに感染した細胞の処置後のＢＶＤＶのリバウン
ド 感染したＭＤＢＫ細胞（５００ｐｆｕ／ウェル）を（Ａ）１ｍg／ｍLのＮ−ブ
チルまたは（Ｂ）３０μｇ／ｍLのＮ−ノニル−ＤＮＪの存在下に２日間インキ ューベーションした。薬物を含有する培地を除き、薬物不含の（薬物抜き）また
は薬物含有の（薬物添加）培地と交換した。培地を、表示した時点で除き、プラ
−ク減少および収量分析において感染性物質について分析した。結果を図６に示
す。

【００８４】実施例７ 種々のタイプの細胞による放射能標識された阻害剤の取り込み ＭＤＢＫおよびＨｅｐＧ２細胞をコンフルエントになるまで１２ウェルプレー
トにて培養し、Ｃ¹⁴−ＮＢ−ＤＮＪおよびＨ³−ＮＮ−ＤＮＪ（１０００００ｃ ｐｍ／ウェル）の存在下で表示した時間インキュベーションした。上清を取り、
保存した。細胞をＰＢＳで洗浄し（２×５００μL）、５００μLの氷冷した１０
％過塩素酸、２％リンタングステン酸で固定し、５００μLの氷冷エタノールで ２回洗浄して乾燥させた。０.５ＭのＮaＯＨ５００μLを使用し、室温にて一晩 細胞を溶解させた。上清、ＰＢＳ洗液、および溶解した細胞中の放射能カウント
の百分率をリキッドシンチレーション計測により測定した。結果を図７のグラフ
に示す。

【００８５】実施例８ Ｎ−［³Ｈ］Ｎ−ＤＮＪの調製 ＤＮＪ（６１mmol）を、シアノホウ素［³Ｈ］水素化ナトリウム（Amersham, 1
0 Ci/mmol）の存在下でノニルアルデヒド（１.２mol当量）により、室温で３時 間還元的にアミノ化した。陽イオン交換および逆相高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）によりトリチウム標識したＮＮ−ＤＮＪを反応混合物から精製した
。ＨＰＬＣによれば生成物は放射能純度９５％以上であり、化合物の構造は質量
分析および¹Ｈ−ＮＭＲにより確認した。比活性は、１４５ｍＣｉ／ｍｍｏｌで あった。

【００８６】 実施例９ 放射能標識したイミノ糖の器官分布 放射能標識したＮＮ−ＤＮＪおよびＮＢ−ＤＮＪを真空乾燥し、マウス全血清
（Becton Dickenson）に再懸濁し、氷上で１分間音波処理した。懸濁液を０.２ μｍフィルターを用いて濾過し、放射能を典型的な回収率７８〜９５％で濾液中
に回収した。濾液をＢａｌｂｃマウスに胃菅栄養法により経口投与し（１〜３μ
Ｃｉ／マウス）、３０、６０および９０分後にマウスを頚椎脱臼により屠殺し、
器官を取り出した。器官重量を計り、Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘホモジナイザ−
を用いて、水中０.２〜０.４ｇ／ｍLでホモジネーションした。アリコートを取 り、放射能を測定した。結果を図８のグラフに示す。

【００８７】実施例１０ 脾臓腫大および細網内皮細胞における異常なグルコセレブロシドの蓄積を伴う
典型的な細網細胞増殖により臨床的に診断された、ゴーシュ病にかかっている人
を、Ｎ−ノニル−１，５−ジデオキシ−１，５−イミノ−Ｄ−グルシトール（Ｎ
−ノニル−ＤＮＪ）の経口又は非経口投与により処置する。用量を、臨床的症状
の改善または生検で細網内皮細胞において観察されるグルコセレブロシドの減少
により示されるような、治療的応答が観察されるまで１０ｍg／ｋｇ／日の基底 レベルから徐々に増加させる。Ｎ−ノニル−ＤＮＪによる処置は、患者の臨床的
な応答にしたがって中止または再開する。

【００８８】 個々のおよびすべての特許、特許出願およびそれらにおいて引用されている刊
行物は、参考としてその全内容が本明細書の一部を構成する。本発明を具体的な
態様を参照しながら開示したが、本発明の他の態様や変更が、他の当業者によっ
て本発明の真正なる精神と範囲から逸脱することなく導かれ得ることは明らかで
ある。添付した請求の範囲は、そのような態様および均等な変更のすべてを包含
することを企図するものではない。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、ウシウイルス性下痢ウイルス（BVDV）に感染したMadin
Darby Bovine Kidney (MDBK)細胞における、ＤＮＪ誘導体Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（
図１ａ）およびＮ−ノニル−ＤＮＪ“５７８”（図１ｂ）の抗ウイルス効果を示
す。

【図２】 図２は、ＤＮＪ誘導体により処置した感染ＭＤＢＫ細胞の培養細
胞における感染性のＢＶＤＶの分泌を示す。Ｙ軸の目盛は、処置した系において
観察されたプラ−クの数を、阻害剤を含まない上清による感染で生じたプラ−ク
に対する百分率として示す。Ｘ軸の目盛は、プラ−クアッセイに用いた阻害剤の
濃度を示す。ＩＣ５０をグラフの下に示す。図２ａ：Ｎ−ブチル−ＤＮＪによる
阻害；および図２：Ｎ−ノニル−ＤＮＪによる阻害。

【図３】 図３は、ＢＶＤＶプラ−ク形成に対する、セラミド特異的グルコ
シルトランスフェラーゼが完全に阻害される６８０μgまでの濃度の、Ｎ−ブチ ル−ＤＮＪ（Ｎ−ブチル−デオキシガラクトノジリマイシン）の効果を示す。Ｙ
軸の目盛は、処置した系において観察されたプラ−クの数を、阻害剤を含まない
上清による感染で生じたプラ−クに対する百分率として示す。Ｘ軸の目盛は、プ
ラ−クアッセイに用いた阻害剤の濃度を示す。

【図４】 図４は、感染細胞の培養細胞におけるＢＶＤＶプラ−ク形成に対
する、処置細胞を、複合糖結合レクチンであるＥＣＡの致死作用から保護する濃
度まで濃度を増加させた、デオキシマンノジリマイシン（ＤＭＪ）の効果を示す
。Ｙ軸の目盛は処置した系におけるプラ−クの数を、阻害剤を含まないプラ−ク
アッセイ上清による感染により生じたプラ−ク（Ｙ＝１００％）に対する百分率
で示す。

【図５】 図５は、細胞内および（図５ａ）非感染；（図５ｂ）未処置ＢＶ
ＤＶ感染細胞；および（図５Ｃ）Ｎ−ブチル−ＤＮＪ処置ＢＶＤＶ感染細胞の培
養細胞上清におけるウイルス物質の感染性の比較を示す。

【図６】 図６は、Ｎ−ブチルＤＮＪ（図６ａ）およびＮ−ノニル−ＤＮＪ
（図６ｂ）による処置を中止したのちの、感染細胞におけるＢＶＤＶ産生のリバ
ウンドを示す。◆＝薬物あり；■＝薬物中止。

【図７】 図７は、種々の細胞のタイプによる放射能標識した阻害剤の取り
こみの比較を示す。◆ＨｅｐＧ２中のＮＮ−ＤＮＪ；■ＭＤＢＫ中のＮＮ−ＤＮ
ＪＭＤＢＫ中のＮＢ−ＤＪ；●ＨｅｐＧ２中のＮＢ−ＤＮＪ。

【図８】 図８は、放射能標識したイミノ糖Ｎ−ノニル−ＤＮＪおよびＮ−
ブチル−ＤＮＪのＢａｌｂＣマウスの器官における投与後３０、６０および９０
分間の分布を示す。Ｙ軸の数値は、Ｘ軸にそって表示した各器官に関する放射能
である。結果を、器官の重量にしたがって標準化する。

【図９】 図９は、代表的なFlaviviridaeウイルスのポリタンパク配列の構
成を示す：（ａ）ペスチウイルスＢＶＤＶに関する配列；および（ｂ）Ｃ型肝炎
ウイルスに関する配列。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ １１１ Ｃ０７Ｄ 211/46 Ｃ０７Ｄ 211/46 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，Ｌ Ｔ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ， ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，Ｕ Ａ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (71)出願人 トーマス・ジェファーソン・ユニバーシテ ィ Ｔｈｏｍａｓ Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ Ｕｎ ｉｖｅｒｓｉｔｙ アメリカ合衆国19107−5587ペンシルベニ ア州フィラデルフィア、ウォールナット・ ストリート1020番 (71)出願人 バルッチ・エス・ブラムバーグ アメリカ合衆国19106ペンシルベニア州フ ィラデルフィア、サウス・ローレンス・コ ート232番 (72)発明者 バルッチ・エス・ブラムバーグ アメリカ合衆国19106ペンシルバニア州フ ィラデルフィア、サウス・ローレンス・コ ート232番 (72)発明者 ティモシー・エム・ブロック アメリカ合衆国18901ペンシルベニア州ド イルズタウン、フォックスクロフト・ドラ イブ90番 (72)発明者 レイモンド・エイ・ドウェック イギリス、オーエックス２・８エイユー、 オックスフォードシャー、ノース・ヒンス キー、バーノン・アベニュー、アンブルサ イド (72)発明者 アナンド・メータ アメリカ合衆国19350ペンシルベニア州ラ ンドンバーグ、インディアンタウン・ロー ド335番 (72)発明者 フランシス・プラット イギリス、オーエックス８・８ビーエヌ、 オックスフォードシャー、ロング・ハンバ ラ、ミルウッド・エンド33番 (72)発明者 テリー・ディ・バターズ イギリス、オーエックス４・９ビーエス、 オックスフォードシャー、オックスフォー ド、ガーシントン、パイン・クローズ１番 (72)発明者 ニコレ・ジィッツマン ドイツ連邦共和国デー−53913オーデンド ルフ、エンゲルベルト−ツィンマーマン・ シュトラーセ11番 Ｆターム(参考） 4C054 AA02 CC02 DD04 DD12 EE24 FF24 4C084 AA16 BA44 CA01 CA20 CA25 NA14 ZB331 ZB332 ZC201 ZC202 4C086 AA01 AA02 BC21 NA14 ZB33 ZC20

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 そのウイルスに感染した宿主細胞の細胞内膜に存在する酵素
   と共同して複製をするウイルスの産生を阻害するための医薬の製造における、有
   効量のグリコシダーゼ阻害剤、グルコシルトランスフェラーゼ阻害剤、またはタ
   ンパク質折り畳みを破壊する薬剤の使用。
2. 【請求項２】 そのウイルスに感染した宿主細胞の細胞内膜に存在する酵素
   と共同して複製をするウイルスの産生を阻害するのに使用するための医薬の製造
   における、有効な抗グリコシダーゼまたは抗グリコシルトランスフェラーゼ量の
   、一般式 【化１】 ［式中、Ｒ¹は、 （ｍ）Ｈ； （ｎ）アルキル； （ｏ）アルケニル； （ｐ）アルコキシ； （ｑ）アシル； （ｒ）アリール； （ｓ）アルアルキル； （ｔ）アロイル；および （ｕ）アルアルコキシ；および （ｖ）ヘテロ環基 からなる群から選択され、 Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵は同じかまたは異なり、 （ｗ）アシル；および （ｘ）アロイル からなる群から選択され、 Ｒ⁶は水素、またはアルキル、アルケニル、アシル、アロイルもしくはアルア ルキル基であり、 前記アルキルおよびアルケニル基は、直鎖または分岐鎖の、置換されているま
   たは置換されていない基であり、 前記アルケニル基は１〜６の二重結合を有し、 前記アリール基およびヘテロ環基が、場合によりハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_{1- 10} アルキル、Ｃ_1-10アルキレン、Ｃ_1-10アシルまたはＣ_1-10アルコキシで置換さ
   れている］ を有する１,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導体、並びに
   該化合物のエナンチオマーおよび立体異性体、並びに該化合物、エナンチオマー
   または立体異性体の生理学的に許容し得る塩または溶媒和物の使用。
3. 【請求項３】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導
   体がＲ¹においてアルキル基で置換されている、請求項２に記載の使用。
4. 【請求項４】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導
   体が一般式 【化２】 を有する、請求項３に記載の使用。
5. 【請求項５】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導
   体がＲ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶において水素で置換されている、請求項４に記載の
   使用。
6. 【請求項６】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導
   体が一般式 【化３】 を有する、請求項２に記載の使用。
7. 【請求項７】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導
   体がＲ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶において水素で置換されている、請求項６に記載の
   使用。
8. 【請求項８】 Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁵の少なくとも１つがアシル基である、請 求項１〜７のいずれかに記載の使用。
9. 【請求項９】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘導
   体が哺乳類の宿主細胞に投与される、請求項２に記載の使用。
10. 【請求項１０】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘
    導体がヒトの宿主細胞に投与される、請求項９に記載の使用。
11. 【請求項１１】 １,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトール誘
    導体が生体内で前記宿主細胞に投与される、請求項２に記載の使用。
12. 【請求項１２】 宿主細胞がフラビウイルスグループのウイルスに感染して
    いる、請求項２に記載の使用。
13. 【請求項１３】 宿主細胞内のフラビウイルスが、黄熱ウイルス、デング熱
    ウイルス１−４、日本脳炎ウイルス、マレー渓谷脳炎ウイルス、ロチオウイルス
    、ウェストナイル熱ウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、だに媒介脳炎ウイル
    ス、跳躍病ウイルス、ポウサンウイルス、オムスク出血熱ウイルス、およびキャ
    サヌル森林熱ウイルスからなる群から選択される、請求項１２に記載の使用。
14. 【請求項１４】 宿主細胞がＣ型肝炎ウイルスに感染している、請求項１２
    に記載の使用。
15. 【請求項１５】 宿主細胞がペスチウイルスグループのウイルスに感染して
    いる、請求項２に記載の使用。
16. 【請求項１６】 宿主細胞が、宿主細胞において小胞体または小胞体の内腔
    を取り囲んでいる膜と共同することによりそのウイルス構造の少なくとも一部を
    複製するようなウイルスに感染している、請求項２に記載の使用。
17. 【請求項１７】 宿主細胞が、その宿主細胞においてゴルジ装置またはゴル
    ジ装置の内腔の膜と共同してそのウイルス構造の少なくとも一部を複製するよう
    なウイルスに感染している、請求項２に記載の使用。
18. 【請求項１８】 抗グルコシダーゼまたは抗グルコシルトランスフェラーゼ
    剤を、それを必要とする脊椎動物の肝細胞へ送達させるための医薬の製造におけ
    る、有効量の１,５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトールのＮ−アル
    キル誘導体の使用。
19. 【請求項１９】 ウシウイルス性下痢ウイルスに感染した細胞を処置するた
    めの医薬の製造における、有効な抗グルコシダーゼまたは抗グルコシルトランス
    フェラーゼ量の、Ｎ−アルキル、Ｎ−アシル、Ｎ−アリール、Ｎ−アルアルキル
    およびＮ−アロイル誘導体からなる群から選択される１,５−ジデオキシ−１,５
    −イミノ−Ｄ−グルシトール誘導体の使用。
20. 【請求項２０】 ウイルスに感染した細胞がウシ単核細胞である、請求項１
    ９に記載の使用。
21. 【請求項２１】 ウイルスの構成成分を動物細胞の内膜から獲得するウイル
    スに感染した動物を、該ウイルスによる感染の続発症である癌の発生から保護す
    るための医薬の製造における、有効な抗ウイルス量の動物細胞グルコシダーゼ阻
    害剤の使用。
22. 【請求項２２】 前記グルコシダーゼ阻害剤が１,５−ジデオキシ−１,５−
    イミノ−Ｄ−グルシトールおよびその誘導体からなる群から選択される、請求項
    ２１に記載の使用。
23. 【請求項２３】 動物におけるリソソーム脂質蓄積症を処置するための医薬
    の製造における、グリコシルトランスフェラーゼ有効阻害量のＮ−ノニル−１, ５−ジデオキシ−１,５−イミノ−Ｄ−グルシトールの使用。
24. 【請求項２４】 動物が、テイ-サックス病、ゴーシェ病、クラッベ病、ま たはファブリ病を患っている、請求項２３に記載の使用。