JP2001309794A - Ａｄａｍｔポリペプチド、それをコードする核酸、及びその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＡＤＡＭＴＳタンパク質として知られるタン
パク質ファミリーのメンバーである、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１と名付けられた新規メンバーの提供。 【解決手段】 本発明は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１をコード
するポリヌクレオチド、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１に対する抗
体、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の機能の研究のためのアッセ
イ、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１のアゴニスト又はアンタゴニス
トの決定のためのアッセイ、及び診断、バイオ療法、又
は遺伝子治療方法におけるＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプ
チド又はポリヌクレオチドの使用にも関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野 本発明は、ＡＤＡＭＴＳとして知られるタンパク質のフ
ァミリーのメンバーに関する。

【０００２】本発明の背景 ＡＤＡＭＴＳタンパク質は、メタロプロテアーゼのＡＤ
ＡＭ（A DisintegrinAnd Metalloprotease ）の特徴を
示し、そしてさらにスロンボスポンジン（thrombospond
in）ドメイン（ＴＳ）を含む。プロトタイプのＡＤＡＭ
ＴＳは、マウスにおいて同定され、心臓及び腎臓内で発
現され、そして炎症誘発性の刺激によりアップレギュレ
ートされることが判明している（K.Kuno et al., Molec
ular cloning of a gene encoding a new type of meta
lloproteinase-disintegrin family protein with thro
mbospondin motifs as a inflammation associated gen
e,272 Journal of Biological Chemistry 556 (January
1997))。これまで、９つのメンバーがＨＵＧＯデータ
ベース（http://www.gene.ucl.ac.uk/vsers/hester/ada
mts.）により認められ、これらの中の２つを除きすべて
について配列情報が入手できる。このファミリーのメン
バーは、軟骨に重要な機械特性を提供し、そして関節炎
の進行の間に失われる高分子量のプロテオグリカンであ
るアグレカン（ａｇｇｒｅｃａｎ）を分解する能力をも
つ。

【０００３】アグレカナーゼ（Ａｇｇｒｅｃａｎａｓ
ｅ）活性は、いくつかのＡＤＡＭＴＳタンパク質につい
て証明されている（例えば、M.D.Tortorella, Purifica
tion and cloning of aggrecanase-1; a member of the
ADAMTS family of proteins,284 Science 1664 (June
1999); I.Abbaszade, Cloning and characterizationof
ADAMTS 11 an aggrecanase from the ADAMTS family,
274 Journal of Biological Chemistry 23443 (August
1999) を参照のこと）。アグレカナーゼ活性に加えて、
ＡＤＡＭＴＳ−４は、中枢神経系内で主に発現されるこ
とが分かっている他のプロテログリカンであるブレビカ
ン（ｂｒｅｖｉｃａｎ）を開裂することが示された（Ma
tthews et al., Brain-enriched hyaluronan binding
(BEHAB)/Brevican cleavage in a gliome cell line is
mediated by a disintegrin andmetalloproteinase wi
th thrombospondin motifs (ADAMTS) family member, 2
75Journal of Biological Chemistry 22695 (July 200
0)）。この活性は、神経膠腫の浸潤性において役割を演
じていると推定された。ＡＤＡＭＴＳ−４の他の活性
は、ベータ−アミロイドにより処理されたラットの星状
細胞においてその発現が誘導されるものとして提案され
ており、これは、アルツハイマー病における役割を示唆
する（Satoh et al., ADAMTS-4 is transcriptionally
induced in beta-amyloid treated rat astrocytes, 28
9 Neuroscience Letters 177 (2000))。他のＡＤＡＭＴ
Ｓタンパク質は抗血管形成（例えば、Vazquez et al.,
METH-1,A human ortholog of ADAMTS-1, and METH-2 ar
e members of a new family ofproteins with Angio-in
hibitory activity, 274 Journal of Biological Chemi
stry 23349 (August 1999)を参照のこと）及び／又はプ
ロコラーゲン・プロセッシング活性（A.Colige et al.,
cDNA cloning and expression of bovine procollagen
I N-proteinase: a new member of the superfamily o
f zinc-metalloproteinase with binding sites for ce
lls and other matriy components, 94 Proceedings of
the National Academy of Science of the United Sta
tes of America (March 1997))を示すと報告されてい
る。特に泌尿生殖系に関する、受精能及び臓器発達にお
けるＡＤＡＭＴＳ−１の他の役割は、マウスにおける遺
伝子欠損と関係付けられた（Shindo et al., ADAMTS-1:
a metalloprotease-disintegrin essential for norma
l growth, fertility, and organ morphology and func
tion, 105 Journal of Clinical Investigation 1345
(May 2000)）。

【０００４】ＡＤＡＭＴＳタンパク質及びＡＤＡＭＴＳ
タンパク質のアゴニスト及びアンタゴニストは重要な治
療用途をもち、これらは、関節炎（変形性関節炎及びリ
ウマチ様関節炎）、炎症性腸疾患、クローン病、気腫、
急性呼吸困難症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アルツ
ハイマー病、臓器移植毒性及び拒絶、悪液質、アレルギ
ー、癌（例えば、固形腫瘍癌であって、結腸、乳房、
肺、前立腺、脳を含むもの、並びに白血病及びリンパ腫
を含む造血性悪性腫瘍）、組織潰瘍形成、再狭窄、歯周
病、表皮水疱性、骨粗しょう症、人工関節インプラント
のゆるみ、アテローム性動脈硬化症（アテローム性動脈
硬化斑裂開を含む）、大動脈瘤（腹部大動脈及び脳大動
脈瘤を含む）、うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、脳虚
血、心臓外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢
性）、自己免疫疾患、ハンチントン舞踏病、パーキンソ
ン病、片頭痛、うつ病、末梢ニューロパシー、痛み、脳
アミロイド血管障害、向知性又は認識性亢進、筋萎縮性
側索硬化症、多発性硬化症、眼血管形成、角膜損傷、黄
斑変性症、異常外傷治癒、熱傷、糖尿病ショック、不妊
症、並びにメタロプロテイナーゼ活性を特徴とし及び／
又は哺乳動物のアダマリシン（ａｄａｍａｌｙｓｉｎ）
活性を特徴とする他の疾患の治療を含む。

【０００５】本発明の要約 本発明は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１と名付けた新規ＡＤＡＭ
ＴＳタンパク質に、そして関連ポリヌクレオチド及びポ
リペプチドに関する。本発明は、上記タンパク質及びポ
リペプチドの製造に、及び関連アッセイにも関する。本
発明は、さらに、上記タンパク質の基質の同定方法に、
上記タンパク質の阻害剤又は活性化剤の同定方法に、そ
して診断、バイオ療法、及び遺伝子治療方法における本
発明のポリペプチド又はポリヌクレオチドの使用に関す
る。

【０００６】特に、本発明は、以下の： （ａ）配列番号５，６，７、又は８のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１ポリペプチド、あるいはそのメタロプロテイナーゼ、
ジスインテグリン・ドメイン、プロドメイン、又はスロ
ンボスポンジン（ＴＳＰ）ドメインをコードするヌクレ
オチド配列に対し少なくとも８０％の同一性を有するヌ
クレオチド配列； （ｂ）配列番号１，２，３、又は４のポリヌクレオチド
分子にストリンジェント条件下でハイブリダイズする少
なくとも１５の連続ヌクレオチドを有するヌクレオチド
配列；及び（ｃ）（ａ）又は（ｂ）のヌクレオチド配列
の相補物；から成る群から選ばれるヌクレオチド配列を
含む単離ポリヌクレオチド分子に関する。このような単
離ヌクレオチド分子は、例えば、ＤＮＡ又はＲＮＡを含
むことができる。

【０００７】１の態様においては、単離されたポリヌク
レオチドは、配列番号１，２，３、又は４、あるいはそ
のメタロプロテイナーゼ、ジスインテグリン・ドメイ
ン、プロドメイン、又はスロンボスポンジン（ＴＳＰ）
ドメインと少なくとも８０％同一である。他の態様にお
いては、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号１，
２，３、又は４の配列によりコードされるＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１ポリペプチド、あるいはそのメタロプロテイナー
ゼ、ジスインテグリン・ドメイン、プロドメイン、又は
スロンボスポンジン（ＴＳＰ）ドメインをコードする。
最も好ましい態様においては、上記の単離されたポリヌ
クレオチドは、配列番号１，２，３、又は４のＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１ポリペプチド・コーディング配列、あるいは
そのメタロプロテイナーゼ、ジスインテグリン・ドメイ
ン、プロドメイン、又はスロンボスポンジン（ＴＳＰ）
ドメイン・コーディング配列を含む。

【０００８】さらなる態様においては、本発明は、本発
明の単離されたポリヌクレオチド分子によりコードされ
るポリペプチドに関する。例えば、本発明のＡＤＡＭＴ
Ｓ−１ポリペプチドは、配列番号５，６，７、又は８に
少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列又はＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１の少なくとも約１０の連続アミノ酸をもつア
ミノ酸配列を含むことができる。好ましい態様において
は、上記ポリペプチドは、配列番号５，６，７、又は
８、あるいはそのメタロプロテイナーゼ、ジスインテグ
リン・ドメイン、プロドメイン、又はスロンボスポンジ
ン（ＴＳＰ）ドメインを含む。

【０００９】他の局面においては、本発明は、ＤＮＡ又
はＲＮＡ分子を含む発現系であって、その発現系がコン
パチブルな宿主細胞内に存在するとき、配列番号５，
６，７、又は８のポリペプチドと、あるいはそのメタロ
プロテイナーゼ、ジスインテグリン・ドメイン、プロド
メイン、又はスロンボスポンジン（ＴＳＰ）ドメイン少
なくとも８０％の同一性を有するアミノ配列を含むＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドを産生することができる、
前記発現系に関する。本発明の上記局面の１の態様にお
いては、その発現系は、本発明のポリヌクレオチドによ
りコードされるＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドを産生
することができる。

【００１０】他の局面においては、本発明は、本発明の
発現系を含む宿主細胞に関する。他の局面においては、
本発明は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドの製法であ
って、上記ポリペプチドの製造のために十分な条件下、
本発明の宿主細胞を培養し、そして細胞培養物から上記
ポリペプチドを回収する、ことを含む前記製法に関す
る。

【００１１】他の局面においては、本発明は、ＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１ポリペプチドを産生する細胞の作成方法であ
って、適当な培養条件下、上記宿主細胞が、上記ＡＤＡ
ＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドを産生するように、本発明の
発現系で宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトする
ことを含む、前記方法に関する。他の局面においては、
本発明は、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドに
免疫特異的な抗体に関する。本発明は、本発明のポリペ
プチドのアンタゴニスト、アゴニスト、及び基質にも関
する。

【００１２】さらなる局面においては、本発明は、ＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１のアゴニスト又はアンタゴニストの治療
的有効量を患者に投与することを含む、ＡＤＡＭＴＳ−
Ｊ１の活性又は発現を変更する必要のある患者を治療す
る方法に関する。他の局面においては、本発明は、ＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１の活性又は発現を変更させるために、本
発明のポリヌクレオチドを患者に投与することを含む、
ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の活性又は発現を変更する必要のあ
る患者を治療する方法に関する。本発明は、そのリガン
ド、基質、又はレセプターについてＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１
と競合するポリペプチドの治療的有効量を患者に投与す
ることを含む、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の活性又は発現を変
換する必要のある患者を治療する方法にも関する。

【００１３】本発明は、患者におけるＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１の発現又は活性に関して患者における疾患を診断し又
は疾患に対する感受性を診断するための方法であって、
上記患者のゲノム内の、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１をコードす
るヌクレオチド配列内での突然変異の存在又は不存在を
決定することを含む前記方法にも関する。あるいは、本
発明は、患者におけるＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の発現又は活
性に関して患者における疾患を診断し又は疾患に対する
感受性を診断するための方法であって、その患者から得
られたサンプル中のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の存在又は量を
分析することを含む前記方法に関する。

【００１４】他の局面においては、本発明は、ＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１にアンタゴナイズする化合物を同定するため
の方法であって： （ａ）候補化合物を、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリ
ペプチドを発現する細胞と、あるいは上記ＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１ポリペプチドを発現する細胞からの細胞膜、又は
上記ポリペプチドを発現する細胞により馴された培地、
又は上記ポリペプチドの精製された組成物と、接触さ
せ；そして（ｂ）ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１活性を測定する、
を含む前記方法に関する。

【００１５】他の態様においては、本発明は、ＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１にアゴナイズ結合する化合物を同定するため
の方法であって： （ａ）候補化合物を、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリ
ペプチドを発現する細胞と、あるいは上記ＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１ポリペプチドを発現する細胞からの細胞膜、又は
上記ポリペプチドを発現する細胞により馴された培地、
又は上記ポリペプチドの精製された組成物と、接触さ
せ；そして（ｂ）ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１活性の刺激を測定
する、を含む前記方法に関する。

【００１６】さらなる態様においては、本発明は、ＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１に結合する化合物を同定するための方法
であって： （ａ）候補化合物を、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリ
ペプチドを発現する細胞と、あるいは上記ＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１ポリペプチドを発現する細胞からの細胞膜、又は
上記ポリペプチドを発現する細胞により馴された培地、
又は上記ポリペプチドの精製された組成物と、接触さ
せ；そして（ｂ）上記ポリペプチドへの上記候補化合物
の結合を測定する、を含む前記方法に関する。

【００１７】本発明は、核酸材料を含有する生物学的サ
ンプル中のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１をコードするポリヌクレ
オチドを検出する方法であって： （ａ）ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１に特異的な本発明の単離ポリ
ヌクレオチドを、上記生物学的サンプルの上記核酸材料
にハイブリダイズさせ、それによりハイブリダイゼーシ
ョン複合体を形成し；そして（ｂ）上記ハイブリダイゼ
ーション複合体を検出する、ここで上記ハイブリダイゼ
ーション複合体の存在は上記生物学的サンプル中のＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１をコードするポリヌクレオチドの存在に
相関する、を含む前記方法にも関する。

【００１８】さらなる態様においては、本発明は、ＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１のための基質を同定する方法であって、
酵素的に活性な本発明のポリペプチドを含むポリペプチ
ドを、候補基質に接触させ、そして生成物への基質の変
換又は上記基質への上記ポリペプチドの結合のいずれか
を測定することを含む前記方法に関する。本発明は、医
薬として許容される担体とともに、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１
のアゴニスト又はアンタゴニストの治療的有効量を投与
することを含む、関節炎（変形性関節炎及びリウマチ様
関節炎）、炎症性腸疾患、クローン病、気腫、急性呼吸
困難症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー
病、臓器移植毒性及び拒絶、悪液質、アレルギー、癌
（例えば、固形腫瘍癌であって、結腸、乳房、肺、前立
腺、脳を含むもの、並びに白血病及びリンパ腫を含む造
血性悪性腫瘍）、組織潰瘍形成、再狭窄、歯周病、表皮
水疱性、骨粗しょう症、人工関節インプラントのゆる
み、アテローム性動脈硬化症（アテローム性動脈硬化斑
裂開を含む）、大動脈瘤（腹部大動脈及び脳大動脈瘤を
含む）、うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、脳虚血、心
臓外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自
己免疫疾患、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、片
頭痛、うつ病、末梢ニューロパシー、痛み、脳アミロイ
ド血管障害、向知性又は認識性亢進、筋萎縮性側索硬化
症、多発性硬化症、眼血管形成、角膜損傷、黄斑変性
症、異常外傷治癒、熱傷、不妊症又は糖尿病ショックの
治療のための方法にも関する。

【００１９】本発明は、医薬として許容される担体とと
もに、本発明のポリペプチドを投与することを含む、関
節炎（変形性関節炎及びリウマチ様関節炎）、炎症性腸
疾患、クローン病、気腫、急性呼吸困難症候群、喘息、
慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病、臓器移植毒性及
び拒絶、悪液質、アレルギー、癌（例えば、固形腫瘍癌
であって、結腸、乳房、肺、前立腺、脳を含むもの、並
びに白血病及びリンパ腫を含む造血性悪性腫瘍）、組織
潰瘍形成、再狭窄、歯周病、表皮水疱性、骨粗しょう
症、人工関節インプラントのゆるみ、アテローム性動脈
硬化症（アテローム性動脈硬化斑裂開を含む）、大動脈
瘤（腹部大動脈及び脳大動脈瘤を含む）、うっ血性心不
全、心筋梗塞、発作、脳虚血、心臓外傷、脊髄損傷、神
経変性疾患（急性及び慢性）、自己免疫疾患、ハンチン
トン舞踏病、パーキンソン病、片頭痛、うつ病、末梢ニ
ューロパシー、痛み、脳アミロイド血管障害、向知性又
は認識性亢進、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、眼
血管形成、角膜損傷、黄斑変性症、異常外傷治癒、熱
傷、不妊症又は糖尿病ショックの治療のための方法にも
関する。

【００２０】本発明は、医薬として許容される担体とと
もに、本発明のポリヌクレオチドを投与することを含
む、関節炎（変形性関節炎及びリウマチ様関節炎）、炎
症性腸疾患、クローン病、気腫、急性呼吸困難症候群、
喘息、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病、臓器移植
毒性及び拒絶、悪液質、アレルギー、癌（例えば、固形
腫瘍癌であって、結腸、乳房、肺、前立腺、脳を含むも
の、並びに白血病及びリンパ腫を含む造血性悪性腫
瘍）、組織潰瘍形成、再狭窄、歯周病、表皮水疱性、骨
粗しょう症、人工関節インプラントのゆるみ、アテロー
ム性動脈硬化症（アテローム性動脈硬化斑裂開を含
む）、大動脈瘤（腹部大動脈及び脳大動脈瘤を含む）、
うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、脳虚血、心臓外傷、
脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自己免疫疾
患、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、片頭痛、う
つ病、末梢ニューロパシー、痛み、脳アミロイド血管障
害、向知性又は認識性亢進、筋萎縮性側索硬化症、多発
性硬化症、眼血管形成、角膜損傷、黄斑変性症、異常外
傷治癒、熱傷、不妊症又は糖尿病ショックの治療のため
の方法にも関する。

【００２１】本発明はさらに、医薬として許容される担
体とともに、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１のアゴニスト又はアン
タゴニストの治療的有効量を含む、関節炎（変形性関節
炎及びリウマチ様関節炎）、炎症性腸疾患、クローン
病、気腫、急性呼吸困難症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾
患、アルツハイマー病、臓器移植毒性及び拒絶、悪液
質、アレルギー、癌（例えば、固形腫瘍癌であって、結
腸、乳房、肺、前立腺、脳を含むもの、並びに白血病及
びリンパ腫を含む造血性悪性腫瘍）、組織潰瘍形成、再
狭窄、歯周病、表皮水疱性、骨粗しょう症、人工関節イ
ンプラントのゆるみ、アテローム性動脈硬化症（アテロ
ーム性動脈硬化斑裂開を含む）、大動脈瘤（腹部大動脈
及び脳大動脈瘤を含む）、うっ血性心不全、心筋梗塞、
発作、脳虚血、心臓外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急
性及び慢性）、自己免疫疾患、ハンチントン舞踏病、パ
ーキンソン病、片頭痛、うつ病、末梢ニューロパシー、
痛み、脳アミロイド血管障害、向知性又は認識性亢進、
筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、眼血管形成、角膜
損傷、黄斑変性症、異常外傷治癒、熱傷、不妊症又は糖
尿病ショックの治療のための医薬組成物に関する。

【００２２】本発明は、医薬として許容される担体とと
もに、本発明のポリペプチドを含む、関節炎（変形性関
節炎及びリウマチ様関節炎）、炎症性腸疾患、クローン
病、気腫、急性呼吸困難症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾
患、アルツハイマー病、臓器移植毒性及び拒絶、悪液
質、アレルギー、癌（例えば、固形腫瘍癌であって、結
腸、乳房、肺、前立腺、脳を含むもの、並びに白血病及
びリンパ腫を含む造血性悪性腫瘍）、組織潰瘍形成、再
狭窄、歯周病、表皮水疱性、骨粗しょう症、人工関節イ
ンプラントのゆるみ、アテローム性動脈硬化症（アテロ
ーム性動脈硬化斑裂開を含む）、大動脈瘤（腹部大動脈
及び脳大動脈瘤を含む）、うっ血性心不全、心筋梗塞、
発作、脳虚血、心臓外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急
性及び慢性）、自己免疫疾患、ハンチントン舞踏病、パ
ーキンソン病、片頭痛、うつ病、末梢ニューロパシー、
痛み、脳アミロイド血管障害、向知性又は認識性亢進、
筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、眼血管形成、角膜
損傷、黄斑変性症、異常外傷治癒、熱傷、不妊症又は糖
尿病ショックの治療のための医薬組成物にも関する。

【００２３】本発明は、医薬として許容される担体とと
もに、本発明のポリヌクレオチドを含む、関節炎（変形
性関節炎及びリウマチ様関節炎）、炎症性腸疾患、クロ
ーン病、気腫、急性呼吸困難症候群、喘息、慢性閉塞性
肺疾患、アルツハイマー病、臓器移植毒性及び拒絶、悪
液質、アレルギー、癌（例えば、固形腫瘍癌であって、
結腸、乳房、肺、前立腺、脳を含むもの、並びに白血病
及びリンパ腫を含む造血性悪性腫瘍）、組織潰瘍形成、
再狭窄、歯周病、表皮水疱性、骨粗しょう症、人工関節
インプラントのゆるみ、アテローム性動脈硬化症（アテ
ローム性動脈硬化斑裂開を含む）、大動脈瘤（腹部大動
脈及び脳大動脈瘤を含む）、うっ血性心不全、心筋梗
塞、発作、脳虚血、心臓外傷、脊髄損傷、神経変性疾患
（急性及び慢性）、自己免疫疾患、ハンチントン舞踏
病、パーキンソン病、片頭痛、うつ病、末梢ニューロパ
シー、痛み、脳アミロイド血管障害、向知性又は認識性
亢進、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、眼血管形
成、角膜損傷、黄斑変性症、異常外傷治癒、熱傷、不妊
症又は糖尿病ショックの治療のための医薬組成物にも関
する。

【００２４】本発明の詳細な説明 本明細書中に使用する用語の理解を容易にするために、
以下の定義を提供する。本明細書中に使用するとき“抗
体”とは、ポリクローナル及びモノクローナル抗体、キ
メラ、単鎖、及びヒト化抗体、並びにＦａｂ断片であっ
て、Ｆａｂ又は他の免疫グロブリン発現ライブラリーの
産物を含むものを含む。

【００２５】“ポリヌクレオチド”は、一般に、非修飾
ＲＮＡ又はＤＮＡあるいは修飾ＲＮＡ又はＤＮＡである
ことができる、ポリリボヌクレオチド又はポリデオキシ
リボヌクレオチドのいずれかをいう。“ポリヌクレオチ
ド”は、非限定的に、１本鎖及び２本鎖ＤＮＡ、１本鎖
及び２本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、１本鎖及び２本
鎖ＲＮＡ、及び１本鎖及び２本鎖領域の混合物であるＲ
ＮＡ、１本鎖又は、より典型的には、２本鎖又は１本鎖
及び２本鎖領域の混合物であることができるＤＮＡ及び
ＲＮＡを含むハイブリッド分子を含む。さらに、“ポリ
ヌクレオチド”とは、ＲＮＡ又はＤＮＡ又はＲＮＡとＤ
ＮＡの両者を含む３本鎖領域をいう。用語“ポリヌクレ
オチド”は、１以上の修飾塩基を含むＤＮＡとＲＮＡ、
及び安定性又は他の理由のために修飾された骨格をもつ
ＤＮＡ又はＲＮＡをも含む。“修飾された”塩基は、例
えば、トリチル化塩基及び普通でない塩基、例えばイノ
シンを含む。さまざまな修飾がＤＮＡとＲＮＡに行われ
ている；従って、“ポリヌクレオチド”は、典型的には
天然に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的又は
代謝的に修飾された形態、並びにウイルス及び細胞に特
徴的なＤＮＡとＲＮＡの化学的形態を包含する。“ポリ
ヌクレオチド”は、しばしばオリゴヌクレオチドといわ
れる、比較的短いポリヌクレオチドをも包含する。

【００２６】“ポリペプチド”とは、ペプチド結合又は
修飾ペプチド結合、すなわち、ペプチド・アイソスター
により互いに連結される２以上のアミノ酸を含むペプチ
ド又はタンパク質のいずれかをいう。“ポリペプチド”
とは、一般にペプチド、オリゴペプチド又はオリゴマー
といわれる短鎖と、一般にタンパク質といわれる長鎖の
両者をいう。“ポリペプチド”は、天然プロセス、例え
ば翻訳後プロセッシング、又は本分野において周知の化
学的技術のいずれかにより、修飾されたアミノ酸配列を
含む。このような修飾は、基礎的なテキスト、及びより
詳細なモノグラフ、並びに学術論文中によく記載されて
いる。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、及びアミ
ノ又はカルボキシル末端を含む、ポリペプチドのどこで
も生じうる。同じタイプの修飾は、与えられたポリペプ
チド内のいくつかの部位において同程度又は変更された
程度において存在することができるということが理解さ
れるであろう。また、与えられたポリペプチドは、多く
のタイプの修飾を含むことができる。ポリペプチドは、
ユビキネーション（ｕｂｉｑｕｉｎａｔｉｏｎ）の結果
として分枝することができ、そして分枝の有無に拘ら
ず、環状であることができる。環状、分枝及び分枝環状
ポリペプチドは、翻訳後天然プロセスから生じることが
でき、又は合成方法によりなされることができる。修飾
は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミ
ド化、フラビンの共有結合、ヘム成分の共有結合、ホス
ファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環化、ジス
ルフィド結合形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シス
テインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル化、
ガンマ−カルボキシレーション、グリコシレーション、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシレーション、ヨウ素
化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解
プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セ
レノイル化、硫酸化、タンパク質へのアミノ酸の転移−
ＲＮＡ仲介付加、例えば、アルギニレーション、及びユ
ビキチネーションを含む。例えば、Proteins-structure
and molecular properties, 2nd Ed., T.E.Creightom,
W.H.Freeman and Company, New York, 1993; F.Wood,
Posttranslational protein modifications: perspecti
ves and prospects, pgs.1-12 in Posttranslational c
ovalentmodification of proteins, B.C.Johnson, Ed.,
Academic Press, New York, 1983; S.Seifter and S.E
nglard, Analysis for protein modifications and non
protein cofactors, 182 Methods of Enzymology 626
(1990); S.I.Rattan et al., Protein Systhesis, post
transtational modifications, and aging, 663 Ann NY
Acad Sci 48 (1992) 。

【００２７】本明細書中に使用するとき、“変異体”
は、参照ポリヌクレオチド又はポリペプチドとはそれぞ
れ相違するが、本質的特性を保持する、ポリヌクレオチ
ド又はポリペプチドである。ポリヌクレオチドの典型的
な変異体は、他の参照ポリヌクレオチドとはヌクレオチ
ド配列が相違する。上記変異体のヌクレオチド配列にお
ける変化は、上記参照ポリヌクレオチドによりコードさ
れるポリペプチドのアミノ酸配列を変更してもしなくて
もよい。ヌクレオチドの変化は、以下に討議するよう
に、上記参照配列によりコードされるポリペプチドにお
ける、アミノ酸置換、付加、欠失、融合、及び切断をも
たらすことができる。ポリペプチドの典型的な変異体
は、他の参照ポリペプチドとはアミノ酸配列が相違す
る。一般に、上記参照ポリペプチドの配列と上記変異体
の配列が全体として酷似し、そして多くの領域におい
て、同一であるように、相違は制限される。変異体と参
照ポリペプチドは、いずれかの組合せにおける、１以上
の置換、付加、及び／又は欠失によりアミノ酸配列が相
違しうる。置換され又は挿入されたアミノ酸配列の残基
は、その遺伝子コードによりコードされるものであって
もなくてもよい。ポリヌクレオチド又はポリペプチドの
変異体は、天然のもの、例えば、対立遺伝子変異体であ
ることができ、又はそれは、天然に生じることが知られ
ていない変異体であることができる。ポリヌクレオチド
及びポリペプチドの非天然変異体は、突然変異誘発技術
又は直接合成により作られることができる。

【００２８】“同一性”は、ヌクレオチド配列又はアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最高のオーダ
ーのマッチが得られるように、上記配列が整列される。
“同一性”自体は、本分野に認知された意味をもち、そ
して公表された技術を用いて計算されることができる。
例えば、Computational molecular biology, A.M.Lesk,
ed., Oxford University Press, New York, 1988; Bio
computing: informatics and genome projects, D.W.Sm
ith, ed., Academic Press, New York, 1993;Computer
analysis of sequence data, part 1, A.M.Griffin, an
d H.G.Griffin, eds., Humana Press, New Jersey, 199
4; Sequence analysis in molecular biology, G.von H
einje, ed., Academic Press, 1987; 及びSequence ana
lysis primer, M.Gribskov and J.Devereux, eds., M S
tocktoa Press, New York, 1991を参照のこと。２つの
ポリヌクレオチド配列又はポリペプチド配列の間の同一
性を計測するための多数の方法が存在するけれども、用
語“同一性”は当業者に周知である。同一性及び類似性
を決定する方法は、コンピュータ・プログラムにおいて
コードされる。２つの配列の間の同一性及び類似性を決
定するための好ましいコンピュータ・プログラム方法
は、非限定的に、ＧＣＳプログラム・パッケージ；J.De
vereux, et al., A comprehensive set of sequence an
alysis programs for the VAX, 12 (1) Nucleic Acids
Research 387 (January 1984); BLASTP;BLASTN; FASTA;
S.F.Altschul et al., Basic local alignment search
tool,215 (3) Journal of Molecular Biology 403 (Oc
tober 1990）を含む。同一性を決定する上記方法の中
で、好ましい方法はＢＬＡＳＴＰである。

【００２９】説明として、図１の参照ヌクレオチド配列
に少なくとも、例えば、９５％の“同一性”を有するヌ
クレオチド配列をもつポリヌクレオチドにより、そのポ
リヌクレオチドのヌクレオチド配列は、そのポリヌクレ
オチド配列が図１の参照ヌクレオチド配列の各１００ヌ
クレオチド当り５までの点変異を含んでもよいというこ
とを除き、同一であるということが意図される。換言す
れば、参照ヌクレオチド配列に少なくとも９５％同一で
あるヌクレオチド配列をもつポリヌクレオチドを得るた
めに、参照配列内のヌクレオチドの５％までが、欠失さ
れ又は他のヌクレオチドで置換されることができ、又は
参照配列内の全ヌクレオチドの５％までの多数のヌクレ
オチドがその参照配列内に挿入されることができる。上
記参照配列の上記突然変異は、上記参照ヌクレオチド配
列の５′又は３′末端位で、又は上記末端位の間のどこ
かで生じ、上記参照配列内のヌクレオチド間に個々にか
又は上記参照配列内の１以上の連続群内に散在されるこ
とができる。

【００３０】同様に、図２の参照アミノ酸配列に、少な
くとも、例えば、９５％の“同一性”を有するアミノ酸
配列をもつポリペプチドにより、上記ポリペプチドのア
ミノ酸配列は、そのポリペプチド配列が図２の参照アミ
ノ酸の各１００アミノ酸当り５までのアミノ酸変更を含
んでもよいということを除き、同一であるということが
意図される。換言すれば、参照アミノ酸配列に少なくと
も９５％同一であるアミノ酸配列をもつポリペプチドを
得るために、参照配列内のアミノ酸残基の５％までが、
欠失され又は他のアミノ酸で置換されることができ、又
は参照配列内の全アミノ酸残基の５％までの多数のアミ
ノ酸がその参照配列内に挿入されることができる。上記
参照配列の上記変更は、上記参照アミノ酸配列のアミノ
又はカルボキシル末端部分で、又は上記末端部分の間の
どこかで生じ、上記参照配列内の残基間に個々にか又は
上記参照配列内の１以上の連続群内に散在されることが
できる。

【００３１】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド １の局面においては、本発明は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポ
リペプチドに関する。ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド
は、図５〜８のポリペプチド、並びに図５〜８のアミノ
酸配列を含むポリペプチド、及び図５〜８の配列に少な
くとも８０％の同一性、好ましくは少なくとも９０％の
同一性、より好ましくは少なくとも９５％の同一性、そ
して最も好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を
有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。

【００３２】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドは、プロ
セスされていない又は部分的にプロセスされた前駆体、
あるいは“成熟”タンパク質の形態であることができ、
これは、次に融合タンパク質の如き大きなタンパク質の
一部であることができる。その成熟形は通常アミノ酸２
２４から又はその付近から始まり（ＮＡＩＲ…から始ま
り）そしてそのカルボキシル末端に続く。分泌又はリー
ダー配列、プロ配列、精製又は同定を助ける配列、例え
ば、多数のヒスチジン残基、ＦＬＡＧ Ｔａｇ、又は組
換え製造の間の安定性のための追加の配列を含む、追加
のアミノ酸配列を含むことが、しばしば有利である。

【００３３】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドの断片も
本発明に包含される。断片は、上述のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１ポリペプチドのアミノ酸配列の部分とその全体が同一
であるが全体とは同一でないところのアミノ酸配列を有
するポリペプチドである。ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプ
チドと同様に、断片は“独立”したものであり、又はそ
れらが一部又は領域を、最も好ましくは単一の連続領域
として、形成するところのより大きなポリペプチド内に
含まれることができる。

【００３４】好ましい断片は、例えば、ＡＤＡＭＴＳ−
Ｊ１ポリペプチドのアミノ酸配列をもつ切断ポリペプチ
ドを含む。但し、アミノ末端を含む連続シリーズの残基
又はカルボキシル末端を含む連続シリーズの残基の欠
失、あるいは２つの連続シリーズの残基の欠失であって
その中の１がアミノ末端をそして他がカルボキシル末端
を含むものである。構造又は機能的特性を特徴とする断
片、例えば、アルファ−ヘリックス及びアルファ−ヘリ
ックス形成領域、ベータ−シート及びベータ−シート形
成領域、ターン及びターン形成領域、コイル及びコイル
形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファ両親媒性
領域、ベータ両親媒性領域、フレキシブル領域、表面形
成領域、基質結合領域、並びに高抗原性係数領域も好ま
しい。生物学的に活性な断片も好ましい。生物学的に活
性な断片は、類似の活性又は改良された活性、又は減少
された不所望の活性を有するものを含む、１以上のＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１活性を仲介するものである。最も好まし
いのは、図１０に示すドメインの１以上を含む断片であ
る。特に好ましい態様においては、上記断片は、そのメ
タロプロテイナーゼ・ドメイン、そのジスインテグリン
・ドメイン又はそのスロンボスポンジン・ドメインを含
む。他の態様においては、上記ポリペプチドは、その亜
鉛結合性モチーフの延長を包含する、配列番号５のアミ
ノ酸３９０〜４１３を含む。

【００３５】このような断片は、便利には、それ自体
で、又は融合タンパク質の一部として使用される。例え
ば、本発明のタンパク質又はポリペプチドを含む融合タ
ンパク質を発現するであろう発現ベクターが構築される
ことができる。例えば、以下の実施例中に記載するもの
として、そのＣ末端に融合されたＦＡＡＧエピトープ・
タグの付加をもって哺乳類発現構築物（ｐＣＤＮＡ３．
１の派生物、InvitrogenCorporation）内に、ＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１の３つのスプライス形態（１．１，１．２、
及び１．３）がクローン化された（図１６）。このよう
な融合タンパク質は、例えば、上記タンパク質に対する
抗血清を産生するために、上記タンパク質の生化学的特
性を研究するために、異なる免疫学的又は機能的特性を
示すタンパク質を操作するために、同定又は精製を助け
るために、組換え発現タンパク質の安定性を改良するた
めに、又は治療剤として、使用されることができる。可
能性のある融合タンパク質発現ベクターは、非限定的
に、β−ガラクトシダーゼ及びｔｒｐＥ融合物、マルト
ース結合性タンパク質融合物（ｐＭａｌシリーズ；NewE
ngland Biolabs ）、グルタチオン−Ｓ−トランスフェ
ラーゼ融合物（ｐＧＥＸシリーズ；Pharmacia ）、ポリ
ヒスチジン融合物（ｐＥＴシリーズ；Novagen Inc., Ma
dison, WI ）、及びチオレドキシン融合物（ｐＴｒｘＦ
ｕｓ；Invitrogen, Carlsbad, CA）をコードする配列を
取り込んだベクターを含む。１例としては、ジスインテ
グリン・ドメイン又はＴＳＰドメイン、あるいはその変
異体又は断片を含むポリペプチドが、天然のジスインテ
グリン・ドメイン又はＴＳＰドメインとのインビボ又は
インビトロにおける相互作用を競合阻害するために、単
独で又は融合タンパク質の部分として、投与されること
ができる。上記の及び他の融合タンパク質をコードする
発現ベクターの構築方法は本分野において周知である。

【００３６】上記の定義された配列及び断片の変異体も
本発明の部分を形成する。好ましい変異体は、保存的ア
ミノ酸置換すなわち、ある残基を同様の特徴を有する他
のものにより置換するものによる上記指示物から変化し
たものである。典型的な保存的置換は、Ａｌａ，Ｖａ
ｌ，Ｌｅｕ、及びＩｌｅ間；Ｓｅｒ及びＴｈｒ間；酸性
残基Ａｓｐ及びＧｌｕ間；Ａｓｎ及びＧｌｎ間；塩基性
残基Ｌｙｓ及びＡｒｇ間；そして芳香族残基Ｐｈｅ及び
Ｔｙｒ間にある。特に好ましいのは、数個、５〜１０、
１〜５、又は１〜２のアミノ酸が、いずれかの組合せに
おいて、置換、欠失、又は付加されているような変異体
である。

【００３７】本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド
は、いずれかの好適なやり方で調製されることができ
る。上記ポリペプチドは、単離天然ポリペプチド、組換
え製造ポリペプチド、合成製造ポリペプチド、及び上記
方法の組合せにより製造されたポリペプチドを含む。上
記方法は、本分野においてよく理解されている。本発明
の他の態様は、単離されたＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプ
チドである。単離ポリペプチドは、その天然環境から実
質的に取り出されたものである。単離されたＡＤＡＭＴ
Ｓ−Ｊ１ポリペプチドは、例えば、その天然源から得ら
れ、組換え技術を用いて製造され、又は化学的に合成さ
れることができる。単離ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチ
ドは全長ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド、そのプロド
メインのフリン解裂によりプロセスされる予想成熟形態
（ＮＡＩＲ…から始まる予想成熟形態、アミノ酸１０
４）、あるいはアミノ酸が欠失、挿入、逆位、置換及び
／又は誘導体化（例えば、グリコシル化、リン酸化、ア
セチル化、ミリストイル化、プレニル化、パルミトイル
化、アミド化、及び／又はグリコシルホスファチジル・
イノシトールの付加）されているところのＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１ポリペプチドの如き、上記ポリペプチドのいずれ
かの同族体であることができる。ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポ
リペプチドの同族体は、その同族体をコードする核酸配
列が、本明細書中に開示する天然ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポ
リペプチド・アミノ酸配列をコードする核酸配列にスト
リンジェント条件下ハイブリダイズすることができるよ
うに、天然ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド・アミノ酸
配列に十分に類似するアミノ酸配列を有するポリペプチ
ドである。本明細書中に使用するとき、“ストリンジェ
ント・ハイブリダイズ条件”とは、０．５Ｍ ＮａＨＰ
Ｏ₄ 、７％ ＳＤＳ、１mM ＥＤＴＡ中６５℃における
フィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、及
び０．１×ＳＳＣ／０．１％ ＳＤＳ中６５℃での洗浄
をいう（例えば、Ausubel et al. (eds.), 1989, Curre
nt Protocols in Molecular Biology,Vol.1, Green Pub
lishing Associates, Inc., and John Wiley & Sons, I
nc.,New York, at p.2.10.3 を参照のこと）。ＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１ポリペプチドの同族体は、その同族体が天然
ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドの少なくとも１のエピ
トープに対して免疫応答を顕出する能力を有するように
十分に、交差反応性であるアミノ酸配列を有するポリペ
プチドをも含む。好ましくは、上記同族体は、ＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１の１以上の生物学的活性を保持する。

【００３８】本発明のタンパク質同族体の最小長は、対
応の天然タンパク質をコードする核酸分子の相補的配列
と安定したハイブリッドを形成することができる核酸分
子によりコードされることができるために十分なもので
ある。それ故、上記タンパク質同族体をコードする核酸
分子のサイズは、核酸組成、上記核酸分子と相補的配列
の間のパーセント・ホモロジー、並びにハイブリダイゼ
ーション条件自体（例えば、温度、塩濃度、及びホルム
アミド濃度）に依存する。上記核酸の最小サイズは、典
型的には、その核酸分子がＧＣリッチである場合、長さ
少なくとも約１２〜約１５ヌクレオチドであり、そして
それらがＡＴリッチである場合、少なくとも約１５〜約
１７塩基である。本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク
質同族体をコードするために使用される核酸分子の最小
サイズは、長さ約２０〜約２５ヌクレオチドである。上
記核酸分子は遺伝子の一部、遺伝子の全体、又は多数の
遺伝子、又はその部分を含むことができる点で、上記核
酸分子の最大サイズには、実施上の別約以外の、制限は
ない。１の態様においては、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１タンパク質同族体の最小サイズは、長さ１０から、よ
り好ましくは１２、さらにより好ましくは２５アミノ酸
である。他の態様においては、本発明のポリペプチド
は、約１０を超える、又は２５、好ましくは７５を超え
る、より好ましくは１００を超えるアミノ酸であって、
配列番号２のアミノ酸配列に同一であるものを有するア
ミノ酸配列を含む。好ましいタンパク質又はポリペプチ
ドのサイズは、全長、多価タンパク質（すなわち、各々
がある機能を有するところの２以上のドメインを有する
融点タンパク質）、又は上記タンパク質の機能的部分が
望まれるかどうかに依存する。機能的部分は、本明細書
中に記載されるドメイン、上記ドメインに関する本分野
における知識及び上記ドメインのための知られたアッセ
イ、又はその機能活性に基づいて得られうる。有用なタ
ンパク質断片又は他のポリペプチドは、配列番号５〜８
のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質との抗原性交差反応性
に基づいてスクリーニングされることもできる。

【００３９】本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質同
族体は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質をコードする天
然遺伝子の対立遺伝子変異体を含む。“天然”遺伝子
は、自然に最もしばしば存在するものである。ＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１タンパク質同族体は、非限定的に、例えば、
ランダム又は標的化突然変異誘発を行うための古典的又
は組換えＤＮＡ技術を用いて、あるタンパク質をコード
する遺伝子を直接修飾することを含む、本分野に知られ
た技術を用いて製造されることができる。

【００４０】他の態様においては、本発明のＡＤＡＭＴ
Ｓ−Ｊ１ポリペプチドは、本明細書中に開示するＡＤＡ
ＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドの部分であって、（Ｔｒｉｓ
−グリシンＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定され、そして本
分野において標準的な方法を用いて求められた）約２５
kDの分子量をもつ部分を含む。さらに他の態様において
は、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドは、約６
８１ヌクレオチドの長さをもつ、ｍＲＮＡ（メッセンジ
ャー・リボ核酸）によりコードされたＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１ポリペプチドの少なくとも一部を含む。

【００４１】本発明は、翻訳後修飾を経験したＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１タンパク質を包含する。このような修飾は、
例えば、グリコシル化（例えば、Ｎ−結合及び／又はＯ
結合オリゴ糖の付加を含む）又は翻訳後のコンフォメー
ション変化又は翻訳後欠失を含むことができる。他のＡ
ＤＡＭＴＳファミリー・メンバーに比較してＡＤＡＭＴ
Ｓ−Ｊ１のメタロプロテアーゼ・ドメインにおける２９
〜３６％の同一性に基づき、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１は、１
以上のタンパク質分解活性（例えば、コラゲナーゼ、ア
グレカナーゼ（ａｇｇｒｅｃａｎａｓｅ）、プロコラー
ゲン・プロテアーゼ）、並びにスロンボスポンジン・ド
メインの存在を要求してもしなくてもよい抗−血管形成
活性を有することができる。図１０及び１１を参照のこ
と。ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の上記の可能性のある活性は、
当業者に知られた技術を用いてテストされることができ
る。例えば、P.D.Brown et al., Independent expressi
on and cellular processing of Mr 72,000 type IV co
llagenase and interstitial collagenase in human tu
morigenic cell lines, 50 (19) Cancer Research 6184
(October 1990); F.Vazquez et al., METH-1 a human
ortholog of ADAMTS-1, and METH-2 are members of a
new family of poteins with angio-inhibitory activi
ty, 274 The Journal of Biological Chemistry 23349
(Aug. 1999); E.C.Arner et al., Generation and char
acterization of aggrecanase, 274 The Journal of Bi
ological Chemistry 6594 (Mar. 1999); A.Collige et
al., cDNA cloning andexpression of bovine procolla
gen I N-proteinase: A new member of the superfamil
y of zinc-metalloproteinases with binding sites fo
r cell and other matrix components 94 Proceedings
of the National Academy of Sciences (USA) 2374 (Ma
rch 1997)を参照のこと。

【００４２】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリヌクレオチド 本発明の他の局面は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリヌクレオ
チドに関する。ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリヌクレオチド
は、上記ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド及び断片をコ
ードする単離されたポリヌクレオチド、並びにそれに密
に関連するポリヌクレオチドを含む。これは、クローニ
ングにより同定された天然スプライス変異体（図１〜
３）及びデータベース・サーチにより予想されるもの
（図４）を含む。より特に、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１ポリヌクレオチドは、図５〜８のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１
ポリペプチドをそれぞれ、コードする図１〜４に示すヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド、及び図１〜４
の特定の配列を有するポリヌクレオチドを含む。ＡＤＡ
ＭＴＳ−Ｊ１ポリヌクレオチドは、さらに、図５〜８の
ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列に少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオ
チド配列を含むポリヌクレオチド、及び図１〜４のポリ
ヌクレオチド配列に少なくとも８０％同一であるポリヌ
クレオチドを含む。これに関しては、少なくとも９０％
同一であるポリヌクレオチドが特に好ましく、そして少
なくとも９５％をもつものが特に好ましい。さらに、少
なくとも９７％をもつものが高く好ましく、そして少な
くとも９８〜９９％をもつものが最も高く好ましく、少
なくとも９９％をもつものが最も好ましい。

【００４３】１の態様においては、本発明の核酸分子
は、配列番号１〜４の配列に関して、１〜５０の間、よ
り好ましくは１〜２５の間、そして最も好ましくは１〜
５の間のヌクレオチドが挿入、欠失、又は置換されてい
るヌクレオチド配列をもつ。本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１ポリヌクレオチドは、増幅又はＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の
ためのプローブ又はマーカーとしての使用のために用い
うる条件下でハイブリダイズするために十分な、図１〜
４中に含まれるヌクレオチド配列に対する同一性を有す
るヌクレオチド配列をも包含する。このような配列は、
典型的には、５０％ ＧＣ含量の標的をもつ長さ１５〜
２５のヌクレオチドであり、そして当業者に周知のＰＣ
Ｒ増幅又はオリゴヌクレオチド・ハイブリダイゼーショ
ン方法において有用である（例えば、Promega Protocol
s and Applications Guide, Third Edition, (1996), I
SBN 1-8822474-57-1を参照のこと）。

【００４４】１の態様においては、単離核酸分子は、Ａ
ＤＡＭＴＳ−Ｊ１に特異的な、すなわち、配列番号１〜
４のためのプローブとして特異的に作用する、配列番号
１〜４の断片を含む。この断片は、長さ、少なくとも、
例えば１５，２５，３５，４５又は７５ヌクレオチドで
あることができる。本発明の他の態様は、ストリンジェ
ント条件下、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド
の中の１以上をコードするＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプ
チド遺伝子（図１〜４）と、ハイブリダイズすることが
できる単離核酸分子である。

【００４５】本発明の単離核酸分子は、ＤＮＡ，ＲＮ
Ａ、あるいはＤＮＡ又はＲＮＡのいずれかの誘導体を含
むことができる。本発明の単離核酸分子は、全体の（す
なわち、完全な）遺伝子としてか又は上記遺伝子との安
定したハイブリッドを形成することができるその部分と
して、その天然源から得られうる。本明細書中に使用す
るとき、句、ある存在物の“少なくとも一部”とは、そ
の存在物の機能的局面をもつために少なくとも十分な存
在物の量をいう。例えば、本明細書中に使用するとき、
核酸配列の少なくとも一部は、ストリンジェントなハイ
ブリダイゼーション条件下、特定の所望の遺伝子（例え
ば、ＡＤＡＭＴＳ遺伝子）との安定なハイブリッドを形
成することができる一定量の核酸である。本発明の単離
核酸分子は、組換え技術（例えば、ポリメラーゼ・チェ
イン・リアクション（ＰＣＲ）増幅、クローニング）又
は化学合成を用いても製造されうる。単離ＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１タンパク質核酸分子は、非限定的に天然対立遺伝
子変異体、及び本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質
をコードし又はＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質をコード
する天然核酸分子単離物とストリンジェント条件下安定
したハイブリッドを形成するその核酸分子の能力を実質
的に妨害しないようなやり方でヌクレオチドが挿入、欠
失、置換、及び／又は逆位されているところの修飾核酸
分子を含む、天然核酸分子及びその同族体を含む。

【００４６】本発明は、上記ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリヌ
クレオチドに相補的なポリヌクレオチドをも提供する。 ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の発現 １の態様においては、本発明の単離ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１
タンパク質は、上記タンパク質を製造するために有効な
条件下で上記タンパク質を発現することができる組換え
細胞を培養し、そして上記タンパク質を回収することに
より製造される。好ましい細胞は、バクテリア（例え
ば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ））、酵母（例えば、ピチア
（Ｐｉｃｈｉａ））、昆虫（例えば、ＳＦ９）又は哺乳
動物細胞（例えば、ＣＨＯ，Ｃｏｓ７、及びＨＥＫ２９
３）を含む。この組換え細胞は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タ
ンパク質を発現することができ、そして本発明の１以上
の核酸分子で宿主細胞を形質転換させることにより製造
される。このような組換え細胞は本発明の一部である。
好適な形質転換技術は、非限定的に、トランスフェクシ
ョン、エレクトロポレーション、マイクロインジェクシ
ョン、リポフェクション、吸着、及びプロトプラスト融
合を含む。本発明の組換え細胞は、単細胞のまま残存し
てもよいし又は組織臓器又は多細胞臓器に成長してもよ
い。慣用技術に従って細胞を形質転換させるために使用
される本発明の核酸分子は染色体外に残ってもよいし又
は発現されるそれらの能力が保持されるようなやり方で
形質転換された（すなわち、組換え体）細胞の染色体内
の１以上の部位に組み込まれることができる。

【００４７】細胞を形質転換させるために好適な宿主細
胞は、少なくとも１の本発明の核酸分子で形質転換され
た後に、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質を製造
することができるいずれかの細胞を含む。宿主細胞は、
形質転換された細胞であるか又は少なくとも１の本発明
の核酸分子で既に形質転換されている細胞のいずれかで
あることができる。好適な宿主細胞は、バクテリア、真
菌（酵母を含む）、昆虫、動物、及び植物の細胞を含
む。

【００４８】本発明は、本発明のポリヌクレオチドを宿
主細胞内に届けることができるベクター内に挿入された
上記ポリヌクレオチドを含む組換えベクターをも包含す
る。このようなベクターは、通常、異種核酸配列、例え
ば、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質の核酸分子
に隣接して天然には存在しない核酸配列を含む。上記ベ
クターは、ＤＮＡ又はＲＮＡのいずれか、そして原核又
は真核のいずれかであることができ、そして典型的に
は、ウイルス又はプラスミドである。組換えベクター
は、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリヌクレオチドのク
ローニング、配列決定、及び／又は他の操作又は発現に
おいて使用されることができる。

【００４９】本発明の１の態様においては、組換え細胞
は、１以上の転写制御配列を含有する発現ベクターに作
用可能な状態で連結された１以上の本発明のポリヌクレ
オチド分子を各々含む、１以上の組換え分子で宿主細胞
を形質転換させることにより製造される。句“作用可能
な状態で連結された”とは、宿主細胞内に形質転換され
るときにその分子が発現されることができるようなやり
方で発現ベクター内に挿入された核酸分子をいう。本明
細書中に使用するとき、句“発現ベクター”とは、宿主
細胞を形質転換させ、そして特定の核酸分子の発現をも
たらすことができるＤＮＡ又はＲＮＡベクターをいう。

【００５０】好ましくは、上記発現ベクターは、上記宿
主細胞内で複製することもできる。発現ベクターは、原
核又は真核のいずれかであることができ、そして典型的
にはウイルス又はプラスミドである。本発明の発現ベク
ターは、バクテリア、真菌（ｆｕｎｇａｌ）、昆虫、動
物、及び／又は植物細胞内で直接的遺伝子発現をもたら
すベクターを含む。本発明の核酸分子は、調節配列、例
えば、プロモーター、オペレーター、レプレッサー、エ
ンハンサー、終止配列、複製起点、及び他の調節配列で
あってその組換え細胞と適合性であり、かつ、核酸分子
の発現を制御するものを含む発現ベクターに作用可能な
状態で連結されることができる。本発明において使用さ
れることができる転写制御配列は、転写の開始、伸長、
及び終結を制御することができるものを含む。特に重要
な転写制御配列は、転写開始を制御するもの、例えば、
プロモーター、エンハンサー、オペレーター、及びレプ
レッサー配列である。好適な転写制御配列は、本発明の
組換え細胞の中の１内で機能するものを含む。さまざま
なこのような転写制御配列が当業者に知られている。好
ましい転写制御配列は、バクテリア、酵母、及び哺乳動
物細胞内で機能するものを、例えば、非限定的に、ｔａ
ｃ，ｌａｃ，ｔｒｐ，ｔｒｃ，ｏｘｙ−ｐｒｏ，ｏｍｐ
／ｌｐｐ，ｒｍＢ、バクテリオファージ・ラムダ（λ）
（例えば、λ _P とλＰ_R 及びこれらプロモーターを含む
融合物）、バクテリオファージＴ７、Ｔ７ｌａｃ、バク
テリオファージＴ３、バクテリオファージＳＰ６、バク
テリオファージＳＰＯ１、メタロチオネイン、アルファ
接合因子、バキュロウイルス、ワクシニア・ウイルス、
ヘルペス・ウイルス、ポックスウイルス、アデノウイル
ス、シミアン・ウイルス４０、レトロウイルス作用、レ
トロウイルス・ロング・ターミナル・リピート、ラウス
（Ｒｏｕｓ）サルコーマ・ウイルス、熱ショック、リン
酸及び硝酸転写制御配列、並びに原核又は真核細胞内で
の遺伝子発現を制御することができる他の配列を、含
む。追加の好適な転写制御配列は、組織特異的プロモー
ター及びエンハンサー並びにリンフォカイン誘導性プロ
モーター（例えば、インターフェロン又はインターロイ
キンにより誘導されうるプロモーター）を含む。本発明
の実施において有用な転写制御は配列は、ＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１タンパク質をコードするＤＮＡに会合する天然配
列を含む。

【００５１】発現ベクター内への挿入のために好ましい
核酸分子は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質の少なくと
も１部をコードする核酸分子、又はその同族体を含む。
本発明の発現ベクターは、例えば、先に討議したよう
な、融合タンパク質としての本発明の核酸分子の発現を
許容する融合配列を含むこともできる。本発明のＡＤＡ
ＭＴＳ−Ｊ１核酸分子内に融合配列を含ませることは、
上記核酸分子によりコードされるタンパク質の製造、保
存、又は使用の間の安定性を高めることができる。さら
に、融合セグメントは、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質
の検出及び精製を単純化して、アフィニティー・クロマ
トグラフィーによる精製を可能にする。融合セグメント
は、望ましい機能（例えば、高められた安定性及び／又
は容易な精製）を与えるいずれかのサイズを有すること
ができる。１以上の融合セグメントを使用することは本
発明の範囲内にある。融合セグメントは、本発明のＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質又はポリペプチドのアミノ及
び／又はカルボキシ末端に連結されることができる。融
合セグメントとＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質の間の結
合は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質の簡単な回収を可
能にするように、開裂を受け易いように構築されること
ができる。融合タンパク質は、好ましくは、本発明のＡ
ＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドのカルボキシル及び／又
はアミノ末端に付着された融合セグメントをコードする
アミノ酸配列で形質転換された組換え細胞を培養するこ
とにより製造される。

【００５２】本発明は、本発明の核酸分子による形質転
換から生じた組換え細胞を含む。好ましい組換え細胞
は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質の少なくとも一部を
コードする核酸分子、又はその同族体により形質転換さ
れる。本発明の核酸配列のコピー数の増幅は、その細胞
のゲノム内の上記核酸配列のコピー数を増加させること
により又は形質転換により上記核酸配列の追加のコピー
を導入することにより達成されることができる。コピー
数の増加は、より多量の酵素が作られ、基質から生成物
への高められた変換を導くようなやり方で行われる。形
質転換は、酵素合成を高めるために細胞内に核酸が形質
転換されるようないずれかの方法を用いて達成されるこ
とができる。形質転換前に、所望により、上記核酸配列
は、より高い比活性をもつ酵素をコードするように操作
されることができる。

【００５３】本発明に従って、本発明のＡＤＡＭＴＳ−
Ｊ１タンパク質を製造するために有効な条件下で組換え
細胞を培養することにより上記タンパク質を製造し、そ
して上記タンパク質を回収するために、組換えタンパク
質が使用される。有効な条件は、非限定的に、タンパク
質製造を許容する適当な培地、バイオリアクター、温
度、pH、及び酸素条件を含む。好適な培地は、典型的に
は水性であり、そして同化性炭水化物、窒素及びリン酸
源、並びに適当な塩、ミネラル、金属その他の栄養素、
例えばビタミン類を含む。上記培地は複合栄養素を含
み、又は最小であることができる。

【００５４】本発明の細胞は、非限定的に、バッチ、フ
ェッド−バッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）、細胞リサイク
ル、及び連続発酵槽を含む、慣用の発酵バイオリアクタ
ー内で培養されることができる。培養は、振とうフラス
コ、試験管、マイクロタイター・ディッシュ、及びペト
リ・プレート内で行われることもできる。培養は、組換
え細胞のために適当な温度、pH、及び酸素含量において
行われる。このような培養は当業者の専門的技術内にあ
る。

【００５５】製造のために使用されるベクター及び宿主
系に依存して、得られたＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質
は、組換え細胞内に残ることも又はその発酵培地中に分
泌されることもできる。本発明に従って“タンパク質を
回収する”ことは、上記タンパク質を含有する発酵培地
又は細胞を単に集めることを含むことができ、そして分
離又は精製の追加のステップを含む必要はない。本発明
のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質は、例えば、非限定的
に、アフィニティー・クロマトグラフィー、イオン交換
クロマトグラフィー、濾過、電気泳動、疎水相互作用ク
ロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィー、逆相
クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング及び示差
的可溶化を含む、さまざまな標準的タンパク質精製技術
を用いて精製されることができる。

【００５６】さらに、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タン
パク質は、トランスジェニック動物、又は上記動物から
回収された液体、例えば乳から回収されたＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１タンパク質を発現する細胞からＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１タンパク質を単離することにより製造されることがで
きる。本発明の単離タンパク質又はポリペプチドは、以
下さらに討議するように、治療用組成物を配合するため
に使用されることができる。

【００５７】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１に対する抗体 本発明は、本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質又は
ポリペプチドに選択的に結合することができる抗体をも
含む。抗−ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１抗体のポリクローナル集
団は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１抗血清中に含まれることがで
きる。免疫ブロット・アッセイ、免疫沈降アッセイ、酵
素イムノアッセイ（例えば、ＥＬＩＳＡ）、ラジオイム
ノアッセイ、免疫蛍光抗体アッセイ、及び免疫電子顕微
鏡を含む当業者に知られたさまざまな方法を用いて、結
合は計測されることができる；例えば、Sambrook et a
l., Molecular cloning: a laboratory manual, Cold S
pring Harbor Lab Press, 1989 を参照のこと。

【００５８】本発明の抗体は、モノクローナル又はポリ
クローナル抗体のいずれかであることができ、そして本
分野において標準的な技術を用いて調製されることがで
きる。本発明の抗体は、抗体を得るために使用される上
記タンパク質のエピトープの中の少なくとも１に選択的
に結合することができる１本鎖抗体を含む、機能的等価
物、例えば、抗体断片及び遺伝子操作された抗体を含
む。好ましくは、抗体は、少なくとも一部、ＡＤＡＭＴ
Ｓ−Ｊ１核酸分子によりコードされるタンパク質に応答
して、産生される。

【００５９】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１基質の同定 本発明は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１基質を同定するための方
法をも包含する。上記方法は、候補基質を酵素的に活性
な本発明のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドを含むポリ
ペプチドと接触させ、そして基質から生成物への変換
が、又は上記候補基質へのポリペプチドの結合が測定さ
れるようなものを含む。本発明は、候補化合物と本発明
のポリペプチド又はポリヌクレオチドの間の相互作用を
計算するコンピュータ・ソフトウェアを用いて行われる
論理的（ｒａｔｉｏｎａｌ）ドラッグ・デザインをも包
含する。

【００６０】基質は、候補タンパク質又は合成基質アプ
ローチにより同定されることができる。例えば、候補タ
ンパク質は、アガロース・ゲル・マトリックス内に投げ
られ（ｃａｓｔ）ることができ、そして上記タンパク質
を消化するＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１タンパク質の能力が電気
泳動法（ｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ）を用いて決定される。
P.D.Brown et al., Independent expression and cellu
lar processing of Mr72,000 type IV collagenase and
interstitial collagenase in human tumorigenic cel
l lines, 50 (19) Cancer Research 6184 (October 199
0）を参照のこと。あるいは、ファージ・ディスプレイ
又は蛍光計測ペプチド・ライブラリーが上記タンパク質
の基質を同定するためにスクリーニングされることがで
きる。D.R. O'Boyle et al., Identification of a nov
el peptide substrate of HSV-1protease using substr
ate phage display, 236 (2) Virology 338 (September
1997) を参照のこと。

【００６１】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１のアゴニスト／アンタ
ゴニスト 本発明は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１のアゴニスト及び／又は
アンタゴニストを決定するためのアッセイも含む。アグ
レカナーゼ、コラゲナーゼ、プロコラーゲン・プロテア
ーゼ及び／又は血管形成の活性を測定するためのアッセ
イが、好ましくは７００ダルトン未満の低分子量化合物
である、アゴニスト又はアンタゴニストを同定するため
に使用されることができる。上記化合物は、ヒドロキサ
ム酸成分又は場合により置換された複素環式核、あるい
はアリール又は複素アリール・スルホンアミド成分を含
むことができ、これらの化合物は、内因性又は組換えの
ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の活性を阻害又は刺激する。E.C.Ar
ner et al., Generation and characteritation of agg
recanase. A soluble, cartilage-derived aggrecan-de
grading activity, 274 Journal of Biological Chemis
try 6594 (March 1999); M.D.Tortorella et al., 前
掲；A.Colige et al., 前掲；K.Kuno et al.,前掲。Ｅ
ＬＩＳＡ又は蛍光基質アッセイは、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１
タンパク質の、アゴニスト又はアンタゴニストを決定す
るために、又は、その比タンパク質分解活性を測定する
ために、行われることができる。

【００６２】診断的アッセイ 本発明は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の発現及び／又は活性に
関する病気を診断し又はその病気に対する感受性を診断
するための方法をも含む。このような病気は、患者のゲ
ノムにおける上記ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列における突然変異の存在又は
不存在を決定することにより同定されることができる。
あるいは、患者から得られたサンプル中のＡＤＡＭＴＳ
−Ｊ１ポリペプチドの存在又は量は、病気又は病気に対
する感受性の指標として、測定されることができる。こ
のような診断は、以下を含む病気に関して行われること
ができる：関節炎（変形性関節炎及びリウマチ様関節
炎）、炎症性腸疾患、クローン病、気腫、急性呼吸困難
症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病、
臓器移植毒性及び拒絶、悪液質、アレルギー、癌（例え
ば、固形腫瘍癌であって、結腸、乳房、肺、前立腺、脳
を含むもの、並びに白血病及びリンパ腫を含む造血性悪
性腫瘍）、組織潰瘍形成、再狭窄、歯周病、表皮水疱
性、骨粗しょう症、人工関節インプラントのゆるみ、ア
テローム性動脈硬化症（アテローム性動脈硬化斑裂開を
含む）、大動脈瘤（腹部大動脈及び脳大動脈瘤を含
む）、うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、脳虚血、心臓
外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自己
免疫疾患、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、片頭
痛、うつ病、末梢ニューロパシー、痛み、脳アミロイド
血管障害、向知性又は認識性亢進、筋萎縮性側索硬化
症、多発性硬化症、眼血管形成、角膜損傷、黄斑変性
症、異常外傷治癒、熱傷、糖尿病ショック、不妊症、並
びにメタロプロテイナーゼ活性を特徴とし及び／又は哺
乳動物のアダマリシン（ａｄａｍａｌｙｓｉｎ）活性を
特徴とする他の疾患。

【００６３】治療用組成物及びＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の使
用 本発明の１の態様においては、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１、又
は本発明のポリペプチド又はポリヌクレオチドの、抗
体、アゴニスト、アンタゴニスト、基質及び／又は変異
体は、関節炎（変形性関節炎及びリウマチ様関節炎）、
炎症性腸疾患、クローン病、気腫、急性呼吸困難症候
群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病、臓器
移植毒性及び拒絶、悪液質、アレルギー、癌（例えば、
固形腫瘍癌であって、結腸、乳房、肺、前立腺、脳を含
むもの、並びに白血病及びリンパ腫を含む造血性悪性腫
瘍）、組織潰瘍形成、再狭窄、歯周病、表皮水疱性、骨
粗しょう症、人工関節インプラントのゆるみ、アテロー
ム性動脈硬化症（アテローム性動脈硬化斑裂開を含
む）、大動脈瘤（腹部大動脈及び脳大動脈瘤を含む）、
うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、脳虚血、心臓外傷、
脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自己免疫疾
患、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、片頭痛、う
つ病、末梢ニューロパシー、痛み、脳アミロイド血管障
害、向知性又は認識性亢進、筋萎縮性側索硬化症、多発
性硬化症、眼血管形成、角膜損傷、黄斑変性症、異常外
傷治癒、熱傷、糖尿病ショック、不妊症、並びにメタロ
プロテイナーゼ活性を特徴とし及び／又は哺乳動物のア
ダマリシン（ａｄａｍａｌｙｓｉｎ）活性を特徴とする
他の疾患の治療のための治療用組成物中に使用される。

【００６４】１の態様においては、例えば、本発明のポ
リヌクレオチドは、例えば、インビボ又はエクスビボ遺
伝子治療の一部として、遺伝子治療の適用において細胞
を形質転換させるために使用されることができる。ポリ
ヌクレオチドは、アンチセンス療法において、そしてリ
ボザイムの構築において使用されることもできる。上記
方法におけるポリヌクレオチドの使用は、当業者に知ら
れている。

【００６５】ヒトを含む哺乳動物への投与のためには、
経口、非経口（例えば、静脈内、筋中又は皮下）、バッ
カル、肛門、及び局所を含むさまざまな慣用経路が使用
されうる。経口投与のためには、さまざまな賦形剤、例
えば微晶性セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カル
シウム、リン酸２カルシウム、及びグリシンを含有する
錠剤が、さまざまな崩壊剤、例えば、デンプン（及び好
ましくは、コーン、ポテト、又はタピオカ・デンプ
ン）、アルギン酸、及び特定の複雑なシリケートととも
に、そしてポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチ
ン及びアカシアの如き顆粒バインダーとともに、使用さ
れることができる。類似のタイプの固体組成物も、ゼラ
チン・カプセル内の増量剤として使用される；この点で
好ましい材料は、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポ
リエチレン・グリコールをも含む。水性懸濁液及び／又
はエリキシルが経口投与のために望ましいとき、上記活
性成分は、各種甘味料又は芳香剤、着色料又は染料、及
び所望により、乳化及び／又は懸濁剤と、水、エタノー
ル、プロピレン・グリコール、グリセリン及びその各種
組合せの如き希釈剤とともに、併合されることができ
る。動物の場合には、それらは、有利には、５〜５００
０ppm 、好ましくは、２５〜５００ppm の濃度で、動物
飼料又は飲料水中に含有される。

【００６６】非経口投与（筋中、腹膜内、皮下、及び静
脈内使用）のためには、上記活性成分の滅菌注射溶液が
通常調製される。ゴマ油又はピーナッツ油又は水性プロ
ピレン・グリコール中の上記治療用化合物の溶液が使用
される。上記水性溶液は、必要により、好ましくは８よ
り大きなpHに好適に調整され、かつ、緩衝化され、そし
て上記液体希釈剤はまず等張性にされなければならな
い。上記水性溶液は、静脈内注射目的に好適である。上
記油状溶液は、関節内、筋中、及び皮下注射目的のため
に好適である。無菌条件下での上記全溶液の調製は、当
業者に周知の標準的な医薬技術により容易に達成され
る。動物の場合、化合物は、単一投与又は３回までの分
割投与において与えられた、約０．１〜５０mg／kg／
日、有利には０．２〜１０mg／kg／日の投与レベルにお
いて筋中又は皮下投与されることができる。

【００６７】活性化合物は、直腸組成物、例えば、坐剤
又は保持浣腸中に、例えば、慣用の坐剤ベース、例え
ば、ココア・バター又は他のグリセリドを含んで、配合
されることもできる。鼻腔内投与又は吸入による投与の
ためには、活性化合物は、便利には、患者により圧迫さ
れ又はポンピングされるポンプ・スプレー容器からの溶
液又は懸濁液の形態で、又は好適な駆出剤、例えば、ジ
クロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、
ジクロロテトラフルオロエタン、２酸化炭素又は他の好
適な気体の使用により、加圧容器又は噴霧器からのエア
ロゾル・スプレーの提供として、デリバリーされる。加
圧エアロゾルの場合、投与量単位は、計量された量をデ
リバリーするためのバルブを提供することにより測定す
ることができる。加圧された容器又は噴霧器は、上記活
性化合物の溶液又は懸濁液を含有することができる。吸
入器又はガス注入器内での使用のための（例えば、ゼラ
チンから作られた）カプセル及びカートリッジは、本発
明の化合物と好適な粉末ベース、例えばラクトース又は
デンプンの粉末ミックスを含有して、配合されることが
できる。

【００６８】本発明の治療用組成物は、本明細書中に記
載するような医学的失調をもついずれかの患者（ｓｕｂ
ｊｅｃｔ）に投与されることができる。有効なやり方で
本発明の治療用化合物を投与するために用いられる許容
されるプロトコールは、個々の投与量サイズ、投与数、
投与の頻度及び投与モードに従って変化する。適当なプ
ロトコールの決定は、過度の実験を伴わずに当業者によ
り達成される。有効投与量は、本明細書中に記載する医
学的失調に関して患者を治療することができる投与量を
いう。有効投与量は、例えば、使用される治療用組成
物、治療されている医学的失調並びに受容動物のサイズ
及びタイプに依存して変化する。

【００６９】投与量及び治療期間は、治療されている病
的症状に依存する。治療期間は、１日、１週間以上であ
ることができ、そして患者の寿命にわたって続くことが
できる。 ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の同定 新規ＡＤＡＭＴＳ遺伝子ファミリー・メンバーの同定の
ために、公的に入手可能なタンパク質配列の非凡長セッ
トをアセンブルした（受託番号：Ｄ６７０７６，ＡＪ０
０３１２５，ＡＢ００２３６４，ＡＢ０１４５８８）。
低ストリンジェンシーＢＬＡＳＴサーチのシリーズを、
次に、フエリーとして上記タンパク質配列の各々を使用
してＬｉｆｅ Ｓｅｑ Ｇｏｌｄ（商標）データベース
（Ｉｎｃｙｔｅ）に対して行った。２７８bpのＥＳＴ
を、Ｚｎ結合モチーフ及び上流配列を含んで同定した。
この配列を、ＰＣＲプライマーを設計するために使用
し、そしてライブラリーのパネルを、さらなるクローニ
ングのための源を決定するためにスクリーニングした。
大量の生成物を、変形性関節炎の軟骨のｃＤＮＡライブ
ラリーから得て、これを次にＲｅｃＡ−仲介ホモロジー
捕獲によりスクリーニングした。上記捕獲配列にハイブ
リダイズするコロニーを単離し、そしてミニプレプＤＮ
Ａを、外側プライマーを用いたＰＣＲのために使用し
た。２つの陽性クローンを同定し、その中の１を、その
全体について配列決定した（図９）。ＢＬＡＳＴＰ２．
０．９分析は、図１２中のアラインメントに示すよう
に、多数のＡＤＡＭＴＳファミリー・メンバーに対して
高いホモロジーを示した。

【００７０】上記遺伝子の５′末端を同定するために、
ＧｅｎｂａｎｋのＨＴＧ（高処理量ゲノム）セクション
を、得られた配列を用いてサーチした。この配列の開始
へのアッチを、エントリーＡＣ０１５７２３中の３２kb
のコンティグ内に発現した。その５′プライム・エクソ
ンを同定するために、２つの遺伝子予想ツール（Ｇｅｎ
ｓｃａｎ及びＧｅｎｉｅ）を上記ゲノム・コンティグに
ついて使用した。知られたＡＤＡＭＴＳに対していくら
かのホモロジーを示し、そして適当なサイズ及び位置を
もっていたエクソンを、上記コンティグ領域の開始であ
ると予想した。

【００７１】この配列の３′末端は、ＨＴＧエントリー
ＡＣ０２２７１０にマッチすることが分った。上記ゲノ
ム配列を知られたＡＤＡＭＴＳと比較することにより、
ＡＤＡＭＴＳの３′末端に対するホモロジーをもつ３つ
のエクソンを、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１配列の最終エクソン
のほかに、予想した。この潜在的に伸長されたスプライ
ス変異体を、ｃＤＮＡ，Ｉｎｃｙｔｅ ＥＳＴ ４７３
９２２４ Ｆ７の同定により確認した。これは、上記最
終エクソンにおける別のスプライス部位以外のＡＤＡＭ
ＴＳ−Ｊ１配列の３′末端をカバーし、そして上記の３
つの余分の予想エクソンに続く。

【００７２】ゲノム配列の分析により予想されるが、そ
のライブラリー・クローンから失われている５′ｃＤＮ
Ａを作るために〔図９〕、ＲＴ−ＰＣＲ戦略を使用し
た。ヒトＯＡ軟骨細胞からの並びに成人及び胎児脳から
のＲＮＡ（Clonetech Inc., Palo Alto, CA ）を、鋳型
として使用した。第１鎖ｃＤＮＡを、その遺伝子の３′
末端に対するアンチ−センス・プライマー〔プライマー
Ｊ０５：tca ctt gtc atc gtc gtc ctt gta gtc ACC CA
G AAA GCT GTG GGC A ；配列番号１０）小文字ヌクレオ
チドはＦＬＡＧタブの付加に対応する〕又はその中央か
らのアンチ−センス・プライマー〔プライマーＪ１：GG
A CGT TGT CGT AGC AGG AC〕（配列番号１１）を用い
て、プライムした。５′ＰＣＲプライマー〔Ｊ０２：gg
a att CGG GTA CCA TGT GTG ACG GC（配列番号１２）；
小文字ヌクレオチドはＥｃｏＲＩ制限部位を付加す
る〕。ＲＴ−ＰＣＲ反応からの生成物をクローン化し、
そしてヌクレオチド配列を決定した。ゲノム・クローン
から失われた５′末端は、胎児脳内で発現されているこ
とが判明し〔図１、配列番号１を参照のこと。これは、
ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１．１の核酸配列を示す〕、一方、別
の５′スプライスが、ＯＡ軟骨細胞と胎児脳ＲＮＡの両
者において同定された〔図３、配列番号３を参照のこ
と。これは、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１．２の核酸配列を示
す〕。別の３′スプライスが、胎児脳内で発現されるこ
とが判明した〔図２、配列番号２を参照のこと。これ
は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１．３の核酸配列を示す〕。図
４、配列番号４は、同定された、別のスプライス変異
体、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１．４の核酸配列を示す。上記ス
プライス変異体の対応のアミノ酸配列を図５〜８に示
す。定性的ＰＣＲ分析は、ヒトＯＡ軟骨細胞、成人及び
胎児脳、心臓、肝臓及び腎臓におけるＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１形態の発現と矛盾しなかった。

【００７３】図１０Ａと１０Ｂは、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１．１のドメインの詳細な説明を示す。ＡＤＡＭＴＳ−
Ｊ１．２，１．３、及び１．４のドメインの配列は、
１．１の対応領域を同定することにより容易に見つけら
れることができる。図１４は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１のゲ
ノム構造、ＡＤＡＭＴＳファミリーのタンパク質の上記
４つの別形態及び対応ドメインを生成するスプライシン
グのパターンを示す。この図中、“ＰＲＯ”はプロドメ
インを示し、“ＴＳＰ”はスロンボスポンジン・ドメイ
ンを示し、“ＳＳ”はシグナル配列を示し、そして“ｎ
ｏｇｅｎｏｍｉｃ”は、上記領域にわたる配列について
ゲノム配列が存在しなかったことを示す。

【００７４】ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１形態の発現 ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の上記３つのスプライス形態に対応
し、そしてＦＬＡＧ−エピトープ・タグを含む哺乳動物
の発現構築物を、ｐＣＤＮＡ３．１−ベースのベクター
（Invitrogen, Carlsbad, CA）中に上記ＰＣＲ産物をク
ローニングすることにより調製した。配列が証明されて
いるプラスミドを、カチオン脂質、ＬＦ２０００（Life
Technologies Inc., Gaithersburg, MD）を用いてＨＥ
Ｋ２９３細胞（ＡＴＣＣ）内にトランスフェクトした。
トランスフェクションから４時間後、細胞をＩＳ２９３
培地（Irvine Scientific, Irvine, CA ）中に移した。
４８時間後、培地を回収し、そして細胞タンパク質を、
２×Ｔｒｉｓ−Ｇｌｙｃｉｎｅ Ｓａｍｐｌｅバッファ
ー（Ｎｏｖｅｘ）中に収穫した。培地を酸沈降により濃
縮した（１０％最終ＴＣＡ）。

【００７５】分泌されたタンパク質（１×１０⁶ 細胞当
量）及び細胞会合タンパク質（１×１０⁵ 細胞）の発現
を、ウェスタン・ブロットにより分析した。特に、サン
プル及び事前染色／ビオチニル化分子量マーカーをＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥ（４〜２０％トリス−グリシン、Ｎｏｖｅ
ｘ）により分解し、そしてニトロセルロース膜に移し
た。ＦＬＡＧ−反応タンパク質を、ＨＲＰ−結合抗−Ｆ
ＡＧ抗体（M2, Sigma Inc., St.Louis, MO）とともに上
記ウェスタン・ブロットをインキュベートすることによ
り同定し、そして化学発光（Super Signal, Piercer In
c.）及びLumi Imager (Roche Diagnostics, Indianapol
is, IN) 上でのイメージングにより可視化した。

【００７６】１．１の予想分泌形態（８０kD）とフリン
・プロセス形態（５８kD）と一致して、ＦＬＡＧ反応性
生成物は、（＜）により図１６中に示すように、トラン
スフェクトされた細胞の培地中で検出された。同様に、
１．２の予想分泌形態（６７kD）とフリン・プロセス形
態（４５kD）に一致して、ＦＬＡＧ反応性生成物は、培
地（^* ）中に検出された。ＦＬＡＧ反応性は、模擬トラ
ンスフェクトされた細胞（Ｕｎ）、１．３を発現する構
築物又は多点突然変異をもつ１．２^* の形態でトランス
フェクトされた細胞において検出されなかった。各スプ
ライス形態でトランスフェクトされた細胞に特異的なＦ
ＬＡＧ反応性生成物は、スプライス形態（黒四角）を含
む、細胞タンパク質の分析において同定された。

【００７７】上記の結果は、スプライス形態１．１と
１．２が分泌されたポリペプチドとフリン・プロセスさ
れたポリペプチドについての予想分子量をもつ分泌産物
を生成することを示している（図１６）。さらに、そし
てバキュロウイルス発現系における観察に一致して、プ
ロドメインのほとんどを欠く形態（スプライス形態１．
３、そしてデータを示さず）を発現する構築物は、分泌
産物の存在を証明することに失敗したが、ほぼ正しいサ
イズをもつ細胞会合産物の生産を示す（図１６）。これ
らの結果は、プロドメインが分泌形態の適正な発現のた
めに必要であることを示し、そして細胞会合形態、すな
わち、１．３についての機能を示唆する。

【００７８】これまでの本発明の説明を、説明及び記述
の目的のために提示してきた。さらに、上記説明は、本
発明を、本明細書中に開示する形態に限定することを意
図されない。従って、上記教示、及び関連分野における
技術又は知識に相応する変更及び修正は、本発明の範囲
内にある。添付クレームは、従来技術により許される程
度で他の態様を含むと解釈されるべきであると意図され
る。

【００７９】配列表 配列番号１〜４は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１スプライス形態
のヌクレオチド配列である。配列番号５〜８は、ＡＤＡ
ＭＴＳ−Ｊ１形態の演繹アミノ酸配列である。配列番号
９は、ライブラリー・スクリーニングにより同定される
部分的ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ ｃＤＮＡクローンのヌクレ
オチド配列である。

【００８０】配列番号１０〜１２は、本明細書中に記載
するＰＣＲプライマーのヌクレオチド配列である。

【００８１】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Pfizer Inc. <120> ADAMTS POLYPEPTIDES, NUCLEIC ACIDS ENCODING THEM, AND USES THEREOF <130> PC10736A <140> B015241 <141> 2001-3-13 <160> 12 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 2235 <212> DNA <213> Human <400> 1 atgtgtgacg gcgccctgct gcctccgctc gtcctgcccg tgctgctgct gctggtttgg 60 ggactggacc cgggcacagc tgtcggngac gcggcggccg acgtggaggt ggtgctcccg 120 tggcgggtgc gccccgacga cgtgcacctg ccgccgctgc ccgcagcccc cgggccccga 180 cggcggcgac gcccccgcac gcccccagcc gccccgcgcg cccggcccgg agagcgcgcc 240 ctgctgctgc acctgccggc cttcgggcgc gacctgtacc ttcagctgcg ccgcgacctg 300 cgcttcctgt cccgaggctt cgaggtggag gaggcgggcg cggcccggcg ccgcggccgc 360 cccgccgagc tgtgcttcta ctcgggccgt gtgctcggcc accccggctc cctcgtctcg 420 ctcagcgcct gcggcgccgc cggcggcctg gttggcctca ttcagcttgg gcaggagcag 480 gtgctaatcc agcccctcaa caactcccag ggcccattca gtggacgaga acatctgatc 540 aggcgcaaat ggtccttgac ccccagccct tctgctgagg cccagagacc tgagcagctc 600 tgcaaggttc taacagaaaa gaagaagccg acgtggggca ggccttcgcg ggactggcgg 660 gagcggagga acgctatccg gctcaccagc gagcacacgg tggagaccct ggtggtggcc 720 gacgccgaca tggtgcagta ccacggggcc gaggccgccc agaggttcat cctgaccgtc 780 atgaacatgg tatacaatat gtttcagcac cagagcctgg ggattaaaat taacattcaa 840 gtgaccaagc ttgtcctgct acgacaacgt cccgctaagt tgtccattgg gcaccatggt 900 gagcggtccc tggagagctt ctgtcactgg cagaacgagg agtatggagg agcgcgatac 960 ctcggcaata accaggttcc cggcgggaag gacgacccgc ccctggtgga tgctgctgtg 1020 tttgtgacca ggacagattt ctgtgtacac aaagatgaac cgtgtgacac tgttggaatt 1080 gcttacttag gaggtgtgtg cagtgctaag aggaagtgtg tgcttgccga agacaatggt 1140 ctcaatttgg cctttaccat cgcccatgag ctgggccaca acttgggcat gaaccacgac 1200 gatgaccact catcttgcgc tggcaggtcc cacatcatgt caggagagtg ggtgaaaggc 1260 cggaacccaa gtgacctctc ttggtcctcc tgcagccgag atgaccttga aaacttcctc 1320 aagtcaaaag tcagcacctg cttgctagtc acggacccca gaagccagca cacagtacgc 1380 ctcccgcaca agctgccggg catgcactac agtgccaacg agcagtgcca gatcctgttt 1440 ggcatgaatg ccaccttctg cagaaacatg gagcatctaa tgtgtgctgg actgtggtgc 1500 ctggtagaag gagacacatc ctgcaagacc aagctggacc ctcccctgga tggcaccgag 1560 tgtggggcag acaagtggtg ccgcgcgggg gagtgcgtga gcaagacgcc catcccggag 1620 catgtggacg gagactggag cccgtggggc gcctggagca tgtgcagccg aacatgtggg 1680 acgggagccc gcttccggca gaggaaatgt gacaaccccc cccctgggcc tggaggcaca 1740 cactgcccgg gtgccagtgt agaacatgcg gtntgcgaga acctgccctg ccccaagggt 1800 ctgcccagct tccgggacca gcagtgccag gcacacgacc ggctgagccc caagaagaaa 1860 ggcctgctga cagccgtggt ggttgacgat aagccatgtg aactctactg ctcgcccctc 1920 gggaaggagt ccccactgct ggtggccgac agggtcctgg acggtacacc ctgcgggccc 1980 tacgagactg atctctgcgt gcacggcaag tgccagaaaa tcggctgtga cggcatcatc 2040 gggtctgcag ccaaagagga cagatgcggg gtctgcagcg gggacggcaa gacctgccac 2100 ttggtgaagg gcgacttcag ccacgcccgg gggacaggtt atatcgaagc tgccgtcatt 2160 cctgctggag ctcggaggat ccgtgtggtg gaggataaac ctgcccacag ctttctgggt 2220 aaaacacaaa tgact 2235 <210> 2 <211> 1905 <212> DNA <213> Human <400> 2 atgtgtgacg gcgccctgct gcctccgctc gtcctgcccg tgctgctgct gctggtttgg 60 ggactggacc cgggcacagc tgtcggcgac gcggcggccg acgtggaggt ggtgctcccg 120 tggcgggtgc gccccgacga cgtgcacctg ccgccgctgc ccgcagcccc cgggccccga 180 cggcggcgac gcccccgcac gcccccagcc gccccgcgcg cccggcccgg agagcgcgcc 240 ctgctgctgc acctgccggc cttcgggcgc gacctgtacc ttcagctgcg ccgcgacctg 300 cgcttcctgt cccgaggctt cgaggtggag gaggcgggcg cggcccggcg ccgcggccgc 360 cccgccgagc tgtgcttcta ctcgggccgt gtgctcggcc accccggctc cctcgtctcg 420 ctcagcgcct gcggcgccgc cggcggcctg gttggcctca ttcagcttgg gcaggagcag 480 gtgctaatcc agcccctcaa caactcccag ggcccattca gtggacgaga acatctgatc 540 aggcgcaaat ggtccttgac ccccagccct tctgctgagg cccagagacc tgagcagctc 600 tgcaaggttc taacagaaaa gaagaagccg acgtggggca ggccttcgcg ggactggcgg 660 gagcggagga acgctatccg gctcaccagc gagcacacgg tggagaccct ggtggtggcc 720 gacgccgaca tggtgcagta ccacggggcc gaggccgccc agaggttcat cctgaccgtc 780 atgaacatgg tatacaatat gtttcagcac cagagcctgg ggattaaaat taacattcaa 840 gtgaccaagc ttgtcctgct acgacaacgt cccgctaagt tgtccattgg gcaccatggt 900 gagcggtccc tggagagctt ctgtcactgg cagaacgagg agtatggagg ggcgcgatac 960 ctcggcaata accaggttcc cggcgggaag gacgacccgc ccctggtgga tgctgccgtg 1020 tttgtgacca ggacagattt ctgtgtacac aaggatgaac cgtgtgacac tgttggaatt 1080 gcttacttag gaggtgtgtg cagtgctaag aggaagtgtg tgcttgccga agacaatggt 1140 ctcaatttgg cctttaccat cgcccatgag ctgggccaca acttgggcat gaaccacgac 1200 gatgaccact catcttgcgc tggcaggtcc cacatcatgt caggagagtg ggtgaaaggc 1260 cggaacccaa gtgacctctc ttggtcctcc tgcagccgag atgaccttga aaacttcctc 1320 aaccctgggc ctggaggcac acactgcccg ggtgccagtg tagaacatgc ggtctgcgag 1380 aacctgccct gccccaaggg tctgcccagc ttccgggacc agcagtgcca ggcacacgac 1440 cggctgagcc ccaagaagaa aggcctgctg acagccgtgg tggttgacga taagccatgt 1500 gaactctact gctcgcccct cgggaaggag tccccactgc tggtggccga cagggtcctg 1560 gacggtacac cctgcgggcc ctacgagact gatctctgcg tgcacggcaa gtgccagaaa 1620 atcggctgtg acggcatcat cgggtctgca gccaaagagg acagatgcgg ggtctgcagc 1680 ggggacggca agacctgcca cttggtgaag ggcgacttca gccacgcccg ggggacagtt 1740 aagaatgatc tctgtacgaa ggtatccaca tgtgtgatgg cagaggctgt tcccaagtgt 1800 ttctcatgtt atatcgaagc tgccgtcatt cctgctggag ctcggaggat ccgtgtggtg 1860 gaggataaac ctgcccacag ctttctgggt aaaacacaaa tgact 1905 <210> 3 <211> 1698 <212> DNA <213> Human <400> 3 atgtgtgacg gcgccctgct gcctccgctc gtcctgcccg tgctgctgct gctggtttgg 60 ggactggacc cgggcacaga aaagaagaag ccgacgtggg gcaggccttc gcgggactgg 120 cgggagcgga ggaacgctat ccggctcacc agcgagcaca cggtggagac cctggtggtg 180 gccgacgccg acatggtgca gtaccacggg gccgaggccg cccagaggtt catcctgacc 240 gtcatgaaca tggtatacaa tatgtttcag caccagagcc tggggattaa aattaacatt 300 caagtgacca agcttgtcct gctacgacaa cgtcccgcta agttgtccat tgggcaccat 360 ggtgagcggt ccctggagag cttctgtcac tggcagaaca aggagtatgg aggagcgcga 420 tacctcggca ataaccaggt tcccggcggg aaggacgacc cgcccctggt ggatgctgct 480 gtgtttgtga ccaggacaga tttctgtgta cacaaagatg aaccgtgtga cactgttgga 540 attgcttact taggaggtgt gtgcagtgct aagaggaagt gtgtgcttgc cgaagacaat 600 ggtctcaatt tggcctttac catcgcccat gagctgggcc acaacttggg catgaaccac 660 gacgatgacc actcatcttg cgctggcagg tcccacatca tgtcaggaga gtgggtgaaa 720 ggccggaacc caagtgacct ctcttggtcc tcctgcagcc gagatgacct tgaaaacttc 780 ctcaagtcaa aagtcagcac ctgcttgcta gtcacggacc ccagaagcca gcacacagta 840 cgcctcccgc acaagctgcc gggcatgcac tacagtgcca acgagcagtg ccagatcctg 900 tttggcatga atgccacctt ctgcagaaac atggagcatc taatgtgtgc tggactgtgg 960 tgcctggtag aaggagacac atcctgcaag accaagctgg accctcccct ggatggcacc 1020 gagtgtgggg cagacaagtg gtgccgcgcg ggggagtgcg tgagcaagac gcccatcccg 1080 gagcatgtgg acggagactg gagcccgtgg ggcgcctgga gcatgtgcag ccgaacatgt 1140 gggacgggag cccgcttccg gcagaggaaa tgtgacaacc ccccccctgg gcctggaggc 1200 acacactgcc cgggtgccag tgtagaacat gcggtctgcg agaacctgcc ctgccccaag 1260 ggtctgccca gcttccggga ccagcagtgc caggcacacg accggctgag ccccaagaag 1320 aaaggcctgc tgacagccgt ggtggttgac gataagccat gtgaactcta ctgctcgccc 1380 ctcgggaagg agtccccact gctggtggcc gacagggtcc tggacggtac accctgcggg 1440 ccctacgaga ctgatctctg cgtgcacggc aagtgccaga aaatcggctg tgacggcatc 1500 atcgggtctg cagccaaaga ggacagatgc ggggtctgca gcggggacgg caagacctgc 1560 cacttggtga agggcgactt cagccacgcc cgggggacag gttatatcga agctgccgtc 1620 attcctgctg gagctcggag gatccgtgtg gtggaggata aacctgccca cagctttctg 1680 ggtaaaacac aaatgact 1698 <210> 4 <211> 2675 <212> DNA <213> Human <400> 4 atgtgtgacg gcgccctgct gcctccgctc gtcctgcccg tgctgctgct gctggtttgg 60 ggactggacc cgggcacagc tgtcggcgac gcggcggccg acgtggaggt ggtgctcccg 120 tggcgggtgc gccccgacga cgtgcacctg ccgccgctgc ccgcagcccc cgggccccga 180 cggcggcgac gcccccgcac gcccccagcc gccccgcgcg cccggcccgg agagcgcgcc 240 ctgctgctgc acctgccggc cttcgggcgc gacctgtacc ttcagctgcg ccgcgacctg 300 cgcttcctgt cccgaggctt cgaggtggag gaggcgggcg cggcccggcg ccgcggccgc 360 cccgccgagc tgtgcttcta ctcgggccgt gtgctcggcc accccggctc cctcgtctcg 420 ctcagcgcct gcggcgccgc cggcggcctg gttggcctca ttcagcttgg gcaggagcag 480 gtgctaatcc agcccctcaa caactcccag ggcccattca gtggacgaga acatctgatc 540 aggcgcaaat ggtccttgac ccccagccct tctgctgagg cccagagacc tgagcagctc 600 tgcaaggttc taacagaaaa gaagaagccg acgtggggca ggcctttgcg ggactggcgg 660 gagcggagga acgctatccg gctcaccagc gagcacacgg tggagaccct ggtggtggcc 720 gacgccgaca tggtgcagta ccacggggcc gaggctgccc agaggttcat cctgaccgtc 780 atgaacatgg tatacaatat gtttcagcac cagagcctgg ggattaaaat taacattcaa 840 gtgaccaagc ttgtcctgct acgacaacgt cccgctaagt tgtccattgg gcaccatggt 900 gagcggtccc tggagagctt cgtcactggc agaacgagga gtatggagga gcgcgatacc 960 tcggcaataa ccaggttccc ggcgggaagg acgacccgcc cctggtggat gctgctgtgt 1020 ttgtgaccag gacagatttc tgtgtacaca aagatgaacc gtgtgacact gttggaattg 1080 cttacttagg aggtgtgtgc agtgctaaga ggaagtgtgt gcttgccgaa gacaatggtc 1140 tcaatttggc ctttaccatc gcccatgagc tgggccacaa cttgggcatg aaccacgacg 1200 atgaccactc atcttgcgct ggcaggtccc acatcatgtc aggagagtgg gtgaaaggcc 1260 ggaacccaag tgacctctct tggtcctcct gcagccgaga tgaccttgaa aacttcctca 1320 agtcaaaagt cagcacctgc ttgctagtca cggaccccag aagccagcac acagtacgcc 1380 tcccgcacaa gctgccgggc atgcactaca gtgccaacga gcagtgccag atcctgtttg 1440 gcatgaatgc caccttctgc agaaacatgg agcatctaat gtgtgctgga ctgtggtgcc 1500 tggtagaagg agacacatcc tgcaagacca agctggaccc tcccctggat ggcaccgagt 1560 gtggggcaga caagtggtgc cgcgcggggg agtgcgtgag caagacgccc atcccggagc 1620 atgtggacgg agactggagc ccgtggggcg cctggagcat gtgcagccga acatgtggga 1680 cgggagcccg cttccggcag aggaaatgtg acaacccccc ccctgggcct ggaggcacac 1740 actgcccggg tgccagtgta gaacatgcgg tctgcgagaa cctgccctgc cccaagggtc 1800 tgcccagctt ccgggaccag cagtgccagg cacacgaccg gctgagcccc aagaagaaag 1860 gcctgctgac agccgtggtg gttgacgata agccatgtga actctactgc tcgcccctcg 1920 ggaaggagtc cccactgctg gtggccgaca gggtcctgga cggtacaccc tgcgggccct 1980 acgagactga tctctgcgtg cacggcaagt gccagaaaat cggctgtgac ggcatcatcg 2040 ggtctgcagc caaagaggac agatgcgggg tctgcagcgg ggacggcaag acctgccact 2100 tggtgaaggg cgacttcagc cacgcccggg ggacaggtta tatcgaagct gccgtcattc 2160 ctgctggagc tcggaggatc cgtgtggtgg aggataaacc tgcccacagc tttctggctc 2220 tcaaagactc gggtaagggg tccatcaaca gtgactggaa gatagagctc cccggagagt 2280 tccagattgc aggcacaact gttcgctatg tgagaagggg gctgtgggag aagatctctg 2340 ccaagggacc aaccaaacta ccgctgcact tgatggtgtt gttatttcac gaccaagatt 2400 atggaattca ttatgaatac actgttcctg taaaccgcac tgcggaaaat caaagcgaac 2460 cagaaaaacc gcaggactct ttgttcatct ggacccacag cggctgggaa gggtgcagtg 2520 tgcagtgcgg cggaggggag cgcagaacca tcgtttcgtg tacacggatt gtcaacaaga 2580 ccccaacttt ggtgaacgac agtgactgcc ctcaagcaag ccgcccagag ccccaggtcc 2640 gaaggtgcaa cttgcacccc tgccagtcac ggtaa 2675 <210> 5 <211> 745 <212> PRT <213> Human <400> 5 Met Cys Asp Gly Ala Leu Leu Pro Pro Leu Val Leu Pro Val Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Val Trp Gly Leu Asp Pro Gly Thr Ala Val Gly Asp Ala Ala 20 25 30 Ala Asp Val Glu Val Val Leu Pro Trp Arg Val Arg Pro Asp Asp Val 35 40 45 His Leu Pro Pro Leu Pro Ala Ala Pro Gly Pro Arg Arg Arg Arg Arg 50 55 60 Pro Arg Thr Pro Pro Ala Ala Pro Arg Ala Arg Pro Gly Glu Arg Ala 65 70 75 80 Leu Leu Leu His Leu Pro Ala Phe Gly Arg Asp Leu Tyr Leu Gln Leu 85 90 95 Arg Arg Asp Leu Arg Phe Leu Ser Arg Gly Phe Glu Val Glu Glu Ala 100 105 110 Gly Ala Ala Arg Arg Arg Gly Arg Pro Ala Glu Leu Cys Phe Tyr Ser 115 120 125 Gly Arg Val Leu Gly His Pro Gly Ser Leu Val Ser Leu Ser Ala Cys 130 135 140 Gly Ala Ala Gly Gly Leu Val Gly Leu Ile Gln Leu Gly Gln Glu Gln 145 150 155 160 Val Leu Ile Gln Pro Leu Asn Asn Ser Gln Gly Pro Phe Ser Gly Arg 165 170 175 Glu His Leu Ile Arg Arg Lys Trp Ser Leu Thr Pro Ser Pro Ser Ala 180 185 190 Glu Ala Gln Arg Pro Glu Gln Leu Cys Lys Val Leu Thr Glu Lys Lys 195 200 205 Lys Pro Thr Trp Gly Arg Pro Ser Arg Asp Trp Arg Glu Arg Arg Asn 210 215 220 Ala Ile Arg Leu Thr Ser Glu His Thr Val Glu Thr Leu Val Val Ala 225 230 235 240 Asp Ala Asp Met Val Gln Tyr His Gly Ala Glu Ala Ala Gln Arg Phe 245 250 255 Ile Leu Thr Val Met Asn Met Val Tyr Asn Met Phe Gln His Gln Ser 260 265 270 Leu Gly Ile Lys Ile Asn Ile Gln Val Thr Lys Leu Val Leu Leu Arg 275 280 285 Gln Arg Pro Ala Lys Leu Ser Ile Gly His His Gly Glu Arg Ser Leu 290 295 300 Glu Ser Phe Cys His Trp Gln Asn Glu Glu Tyr Gly Gly Ala Arg Tyr 305 310 315 320 Leu Gly Asn Asn Gln Val Pro Gly Gly Lys Asp Asp Pro Pro Leu Val 325 330 335 Asp Ala Ala Val Phe Val Thr Arg Thr Asp Phe Cys Val His Lys Asp 340 345 350 Glu Pro Cys Asp Thr Val Gly Ile Ala Tyr Leu Gly Gly Val Cys Ser 355 360 365 Ala Lys Arg Lys Cys Val Leu Ala Glu Asp Asn Gly Leu Asn Leu Ala 370 375 380 Phe Thr Ile Ala His Glu Leu Gly His Asn Leu Gly Met Asn His Asp 385 390 395 400 Asp Asp His Ser Ser Cys Ala Gly Arg Ser His Ile Met Ser Gly Glu 405 410 415 Trp Val Lys Gly Arg Asn Pro Ser Asp Leu Ser Trp Ser Ser Cys Ser 420 425 430 Arg Asp Asp Leu Glu Asn Phe Leu Lys Ser Lys Val Ser Thr Cys Leu 435 440 445 Leu Val Thr Asp Pro Arg Ser Gln His Thr Val Arg Leu Pro His Lys 450 455 460 Leu Pro Gly Met His Tyr Ser Ala Asn Glu Gln Cys Gln Ile Leu Phe 465 470 475 480 Gly Met Asn Ala Thr Phe Cys Arg Asn Met Glu His Leu Met Cys Ala 485 490 495 Gly Leu Trp Cys Leu Val Glu Gly Asp Thr Ser Cys Lys Thr Lys Leu 500 505 510 Asp Pro Pro Leu Asp Gly Thr Glu Cys Gly Ala Asp Lys Trp Cys Arg 515 520 525 Ala Gly Glu Cys Val Ser Lys Thr Pro Ile Pro Glu His Val Asp Gly 530 535 540 Asp Trp Ser Pro Trp Gly Ala Trp Ser Met Cys Ser Arg Thr Cys Gly 545 550 555 560 Thr Gly Ala Arg Phe Arg Gln Arg Lys Cys Asp Asn Pro Pro Pro Gly 565 570 575 Pro Gly Gly Thr His Cys Pro Gly Ala Ser Val Glu His Ala Val Cys 580 585 590 Glu Asn Leu Pro Cys Pro Lys Gly Leu Pro Ser Phe Arg Asp Gln Gln 595 600 605 Cys Gln Ala His Asp Arg Leu Ser Pro Lys Lys Lys Gly Leu Leu Thr 610 615 620 Ala Val Val Val Asp Asp Lys Pro Cys Glu Leu Tyr Cys Ser Pro Leu 625 630 635 640 Gly Lys Glu Ser Pro Leu Leu Val Ala Asp Arg Val Leu Asp Gly Thr 645 650 655 Pro Cys Gly Pro Tyr Glu Thr Asp Leu Cys Val His Gly Lys Cys Gln 660 665 670 Lys Ile Gly Cys Asp Gly Ile Ile Gly Ser Ala Ala Lys Glu Asp Arg 675 680 685 Cys Gly Val Cys Ser Gly Asp Gly Lys Thr Cys His Leu Val Lys Gly 690 695 700 Asp Phe Ser His Ala Arg Gly Thr Gly Tyr Ile Glu Ala Ala Val Ile 705 710 715 720 Pro Ala Gly Ala Arg Arg Ile Arg Val Val Glu Asp Lys Pro Ala His 725 730 735 Ser Phe Leu Gly Lys Thr Gln Met Thr 740 745 <210> 6 <211> 635 <212> PRT <213> Human <400> 6 Met Cys Asp Gly Ala Leu Leu Pro Pro Leu Val Leu Pro Val Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Val Trp Gly Leu Asp Pro Gly Thr Ala Val Gly Asp Ala Ala 20 25 30 Ala Asp Val Glu Val Val Leu Pro Trp Arg Val Arg Pro Asp Asp Val 35 40 45 His Leu Pro Pro Leu Pro Ala Ala Pro Gly Pro Arg Arg Arg Arg Arg 50 55 60 Pro Arg Thr Pro Pro Ala Ala Pro Arg Ala Arg Pro Gly Glu Arg Ala 65 70 75 80 Leu Leu Leu His Leu Pro Ala Phe Gly Arg Asp Leu Tyr Leu Gln Leu 85 90 95 Arg Arg Asp Leu Arg Phe Leu Ser Arg Gly Phe Glu Val Glu Glu Ala 100 105 110 Gly Ala Ala Arg Arg Arg Gly Arg Pro Ala Glu Leu Cys Phe Tyr Ser 115 120 125 Gly Arg Val Leu Gly His Pro Gly Ser Leu Val Ser Leu Ser Ala Cys 130 135 140 Gly Ala Ala Gly Gly Leu Val Gly Leu Ile Gln Leu Gly Gln Glu Gln 145 150 155 160 Val Leu Ile Gln Pro Leu Asn Asn Ser Gln Gly Pro Phe Ser Gly Arg 165 170 175 Glu His Leu Ile Arg Arg Lys Trp Ser Leu Thr Pro Ser Pro Ser Ala 180 185 190 Glu Ala Gln Arg Pro Glu Gln Leu Cys Lys Val Leu Thr Glu Lys Lys 195 200 205 Lys Pro Thr Trp Gly Arg Pro Ser Arg Asp Trp Arg Glu Arg Arg Asn 210 215 220 Ala Ile Arg Leu Thr Ser Glu His Thr Val Glu Thr Leu Val Val Ala 225 230 235 240 Asp Ala Asp Met Val Gln Tyr His Gly Ala Glu Ala Ala Gln Arg Phe 245 250 255 Ile Leu Thr Val Met Asn Met Val Tyr Asn Met Phe Gln His Gln Ser 260 265 270 Leu Gly Ile Lys Ile Asn Ile Gln Val Thr Lys Leu Val Leu Leu Arg 275 280 285 Gln Arg Pro Ala Lys Leu Ser Ile Gly His His Gly Glu Arg Ser Leu 290 295 300 Glu Ser Phe Cys His Trp Gln Asn Glu Glu Tyr Gly Gly Ala Arg Tyr 305 310 315 320 Leu Gly Asn Asn Gln Val Pro Gly Gly Lys Asp Asp Pro Pro Leu Val 325 330 335 Asp Ala Ala Val Phe Val Thr Arg Thr Asp Phe Cys Val His Lys Asp 340 345 350 Glu Pro Cys Asp Thr Val Gly Ile Ala Tyr Leu Gly Gly Val Cys Ser 355 360 365 Ala Lys Arg Lys Cys Val Leu Ala Glu Asp Asn Gly Leu Asn Leu Ala 370 375 380 Phe Thr Ile Ala His Glu Leu Gly His Asn Leu Gly Met Asn His Asp 385 390 395 400 Asp Asp His Ser Ser Cys Ala Gly Arg Ser His Ile Met Ser Gly Glu 405 410 415 Trp Val Lys Gly Arg Asn Pro Ser Asp Leu Ser Trp Ser Ser Cys Ser 420 425 430 Arg Asp Asp Leu Glu Asn Phe Leu Asn Pro Gly Pro Gly Gly Thr His 435 440 445 Cys Pro Gly Ala Ser Val Glu His Ala Val Cys Glu Asn Leu Pro Cys 450 455 460 Pro Lys Gly Leu Pro Ser Phe Arg Asp Gln Gln Cys Gln Ala His Asp 465 470 475 480 Arg Leu Ser Pro Lys Lys Lys Gly Leu Leu Thr Ala Val Val Val Asp 485 490 495 Asp Lys Pro Cys Glu Leu Tyr Cys Ser Pro Leu Gly Lys Glu Ser Pro 500 505 510 Leu Leu Val Ala Asp Arg Val Leu Asp Gly Thr Pro Cys Gly Pro Tyr 515 520 525 Glu Thr Asp Leu Cys Val His Gly Lys Cys Gln Lys Ile Gly Cys Asp 530 535 540 Gly Ile Ile Gly Ser Ala Ala Lys Glu Asp Arg Cys Gly Val Cys Ser 545 550 555 560 Gly Asp Gly Lys Thr Cys His Leu Val Lys Gly Asp Phe Ser His Ala 565 570 575 Arg Gly Thr Val Lys Asn Asp Leu Cys Thr Lys Val Ser Thr Cys Val 580 585 590 Met Ala Glu Ala Val Pro Lys Cys Phe Ser Cys Tyr Ile Glu Ala Ala 595 600 605 Val Ile Pro Ala Gly Ala Arg Arg Ile Arg Val Val Glu Asp Lys Pro 610 615 620 Ala His Ser Phe Leu Gly Lys Thr Gln Met Thr 625 630 635 <210> 7 <211> 566 <212> PRT <213> Human <400> 7 Met Cys Asp Gly Ala Leu Leu Pro Pro Leu Val Leu Pro Val Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Val Trp Gly Leu Asp Pro Gly Thr Glu Lys Lys Lys Pro Thr 20 25 30 Trp Gly Arg Pro Ser Arg Asp Trp Arg Glu Arg Arg Asn Ala Ile Arg 35 40 45 Leu Thr Ser Glu His Thr Val Glu Thr Leu Val Val Ala Asp Ala Asp 50 55 60 Met Val Gln Tyr His Gly Ala Glu Ala Ala Gln Arg Phe Ile Leu Thr 65 70 75 80 Val Met Asn Met Val Tyr Asn Met Phe Gln His Gln Ser Leu Gly Ile 85 90 95 Lys Ile Asn Ile Gln Val Thr Lys Leu Val Leu Leu Arg Gln Arg Pro 100 105 110 Ala Lys Leu Ser Ile Gly His His Gly Glu Arg Ser Leu Glu Ser Phe 115 120 125 Cys His Trp Gln Asn Lys Glu Tyr Gly Gly Ala Arg Tyr Leu Gly Asn 130 135 140 Asn Gln Val Pro Gly Gly Lys Asp Asp Pro Pro Leu Val Asp Ala Ala 145 150 155 160 Val Phe Val Thr Arg Thr Asp Phe Cys Val His Lys Asp Glu Pro Cys 165 170 175 Asp Thr Val Gly Ile Ala Tyr Leu Gly Gly Val Cys Ser Ala Lys Arg 180 185 190 Lys Cys Val Leu Ala Glu Asp Asn Gly Leu Asn Leu Ala Phe Thr Ile 195 200 205 Ala His Glu Leu Gly His Asn Leu Gly Met Asn His Asp Asp Asp His 210 215 220 Ser Ser Cys Ala Gly Arg Ser His Ile Met Ser Gly Glu Trp Val Lys 225 230 235 240 Gly Arg Asn Pro Ser Asp Leu Ser Trp Ser Ser Cys Ser Arg Asp Asp 245 250 255 Leu Glu Asn Phe Leu Lys Ser Lys Val Ser Thr Cys Leu Leu Val Thr 260 265 270 Asp Pro Arg Ser Gln His Thr Val Arg Leu Pro His Lys Leu Pro Gly 275 280 285 Met His Tyr Ser Ala Asn Glu Gln Cys Gln Ile Leu Phe Gly Met Asn 290 295 300 Ala Thr Phe Cys Arg Asn Met Glu His Leu Met Cys Ala Gly Leu Trp 305 310 315 320 Cys Leu Val Glu Gly Asp Thr Ser Cys Lys Thr Lys Leu Asp Pro Pro 325 330 335 Leu Asp Gly Thr Glu Cys Gly Ala Asp Lys Trp Cys Arg Ala Gly Glu 340 345 350 Cys Val Ser Lys Thr Pro Ile Pro Glu His Val Asp Gly Asp Trp Ser 355 360 365 Pro Trp Gly Ala Trp Ser Met Cys Ser Arg Thr Cys Gly Thr Gly Ala 370 375 380 Arg Phe Arg Gln Arg Lys Cys Asp Asn Pro Pro Pro Gly Pro Gly Gly 385 390 395 400 Thr His Cys Pro Gly Ala Ser Val Glu His Ala Val Cys Glu Asn Leu 405 410 415 Pro Cys Pro Lys Gly Leu Pro Ser Phe Arg Asp Gln Gln Cys Gln Ala 420 425 430 His Asp Arg Leu Ser Pro Lys Lys Lys Gly Leu Leu Thr Ala Val Val 435 440 445 Val Asp Asp Lys Pro Cys Glu Leu Tyr Cys Ser Pro Leu Gly Lys Glu 450 455 460 Ser Pro Leu Leu Val Ala Asp Arg Val Leu Asp Gly Thr Pro Cys Gly 465 470 475 480 Pro Tyr Glu Thr Asp Leu Cys Val His Gly Lys Cys Gln Lys Ile Gly 485 490 495 Cys Asp Gly Ile Ile Gly Ser Ala Ala Lys Glu Asp Arg Cys Gly Val 500 505 510 Cys Ser Gly Asp Gly Lys Thr Cys His Leu Val Lys Gly Asp Phe Ser 515 520 525 His Ala Arg Gly Thr Gly Tyr Ile Glu Ala Ala Val Ile Pro Ala Gly 530 535 540 Ala Arg Arg Ile Arg Val Val Glu Asp Lys Pro Ala His Ser Phe Leu 545 550 555 560 Gly Lys Thr Gln Met Thr 565 <210> 8 <211> 891 <212> PRT <213> Human <400> 8 Met Cys Asp Gly Ala Leu Leu Pro Pro Leu Val Leu Pro Val Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Val Trp Gly Leu Asp Pro Gly Thr Ala Val Gly Asp Ala Ala 20 25 30 Ala Asp Val Glu Val Val Leu Pro Trp Arg Val Arg Pro Asp Asp Val 35 40 45 His Leu Pro Pro Leu Pro Ala Ala Pro Gly Pro Arg Arg Arg Arg Arg 50 55 60 Pro Arg Thr Pro Pro Ala Ala Pro Arg Ala Arg Pro Gly Glu Arg Ala 65 70 75 80 Leu Leu Leu His Leu Pro Ala Phe Gly Arg Asp Leu Tyr Leu Gln Leu 85 90 95 Arg Arg Asp Leu Arg Phe Leu Ser Arg Gly Phe Glu Val Glu Glu Ala 100 105 110 Gly Ala Ala Arg Arg Arg Gly Arg Pro Ala Glu Leu Cys Phe Tyr Ser 115 120 125 Gly Arg Val Leu Gly His Pro Gly Ser Leu Val Ser Leu Ser Ala Cys 130 135 140 Gly Ala Ala Gly Gly Leu Val Gly Leu Ile Gln Leu Gly Gln Glu Gln 145 150 155 160 Val Leu Ile Gln Pro Leu Asn Asn Ser Gln Gly Pro Phe Ser Gly Arg 165 170 175 Glu His Leu Ile Arg Arg Lys Trp Ser Leu Thr Pro Ser Pro Ser Ala 180 185 190 Glu Ala Gln Arg Pro Glu Gln Leu Cys Lys Val Leu Thr Glu Lys Lys 195 200 205 Lys Pro Thr Trp Gly Arg Pro Leu Arg Asp Trp Arg Glu Arg Arg Asn 210 215 220 Ala Ile Arg Leu Thr Ser Glu His Thr Val Glu Thr Leu Val Val Ala 225 230 235 240 Asp Ala Asp Met Val Gln Tyr His Gly Ala Glu Ala Ala Gln Arg Phe 245 250 255 Ile Leu Thr Val Met Asn Met Val Tyr Asn Met Phe Gln His Gln Ser 260 265 270 Leu Gly Ile Lys Ile Asn Ile Gln Val Thr Lys Leu Val Leu Leu Arg 275 280 285 Gln Arg Pro Ala Lys Leu Ser Ile Gly His His Gly Glu Arg Ser Leu 290 295 300 Glu Ser Phe Cys His Trp Gln Asn Glu Glu Tyr Gly Gly Ala Arg Tyr 305 310 315 320 Leu Gly Asn Asn Gln Val Pro Gly Gly Lys Asp Asp Pro Pro Leu Val 325 330 335 Asp Ala Ala Val Phe Val Thr Arg Thr Asp Phe Cys Val His Lys Asp 340 345 350 Glu Pro Cys Asp Thr Val Gly Ile Ala Tyr Leu Gly Gly Val Cys Ser 355 360 365 Ala Lys Arg Lys Cys Val Leu Ala Glu Asp Asn Gly Leu Asn Leu Ala 370 375 380 Phe Thr Ile Ala His Glu Leu Gly His Asn Leu Gly Met Asn His Asp 385 390 395 400 Asp Asp His Ser Ser Cys Ala Gly Arg Ser His Ile Met Ser Gly Glu 405 410 415 Trp Val Lys Gly Arg Asn Pro Ser Asp Leu Ser Trp Ser Ser Cys Ser 420 425 430 Arg Asp Asp Leu Glu Asn Phe Leu Lys Ser Lys Val Ser Thr Cys Leu 435 440 445 Leu Val Thr Asp Pro Arg Ser Gln His Thr Val Arg Leu Pro His Lys 450 455 460 Leu Pro Gly Met His Tyr Ser Ala Asn Glu Gln Cys Gln Ile Leu Phe 465 470 475 480 Gly Met Asn Ala Thr Phe Cys Arg Asn Met Glu His Leu Met Cys Ala 485 490 495 Gly Leu Trp Cys Leu Val Glu Gly Asp Thr Ser Cys Lys Thr Lys Leu 500 505 510 Asp Pro Pro Leu Asp Gly Thr Glu Cys Gly Ala Asp Lys Trp Cys Arg 515 520 525 Ala Gly Glu Cys Val Ser Lys Thr Pro Ile Pro Glu His Val Asp Gly 530 535 540 Asp Trp Ser Pro Trp Gly Ala Trp Ser Met Cys Ser Arg Thr Cys Gly 545 550 555 560 Thr Gly Ala Arg Phe Arg Gln Arg Lys Cys Asp Asn Pro Pro Pro Gly 565 570 575 Pro Gly Gly Thr His Cys Pro Gly Ala Ser Val Glu His Ala Val Cys 580 585 590 Glu Asn Leu Pro Cys Pro Lys Gly Leu Pro Ser Phe Arg Asp Gln Gln 595 600 605 Cys Gln Ala His Asp Arg Leu Ser Pro Lys Lys Lys Gly Leu Leu Thr 610 615 620 Ala Val Val Val Asp Asp Lys Pro Cys Glu Leu Tyr Cys Ser Pro Leu 625 630 635 640 Gly Lys Glu Ser Pro Leu Leu Val Ala Asp Arg Val Leu Asp Gly Thr 645 650 655 Pro Cys Gly Pro Tyr Glu Thr Asp Leu Cys Val His Gly Lys Cys Gln 660 665 670 Lys Ile Gly Cys Asp Gly Ile Ile Gly Ser Ala Ala Lys Glu Asp Arg 675 680 685 Cys Gly Val Cys Ser Gly Asp Gly Lys Thr Cys His Leu Val Lys Gly 690 695 700 Asp Phe Ser His Ala Arg Gly Thr Gly Tyr Ile Glu Ala Ala Val Ile 705 710 715 720 Pro Ala Gly Ala Arg Arg Ile Arg Val Val Glu Asp Lys Pro Ala His 725 730 735 Ser Phe Leu Ala Leu Lys Asp Ser Gly Lys Gly Ser Ile Asn Ser Asp 740 745 750 Trp Lys Ile Glu Leu Pro Gly Glu Phe Gln Ile Ala Gly Thr Thr Val 755 760 765 Arg Tyr Val Arg Arg Gly Leu Trp Glu Lys Ile Ser Ala Lys Gly Pro 770 775 780 Thr Lys Leu Pro Leu His Leu Met Val Leu Leu Phe His Asp Gln Asp 785 790 795 800 Tyr Gly Ile His Tyr Glu Tyr Thr Val Pro Val Asn Arg Thr Ala Glu 805 810 815 Asn Gln Ser Glu Pro Glu Lys Pro Gln Asp Ser Leu Phe Ile Trp Thr 820 825 830 His Ser Gly Trp Glu Gly Cys Ser Val Gln Cys Gly Gly Gly Glu Arg 835 840 845 Arg Thr Ile Val Ser Cys Thr Arg Ile Val Asn Lys Thr Pro Thr Leu 850 855 860 Val Asn Asp Ser Asp Cys Pro Gln Ala Ser Arg Pro Glu Pro Gln Val 865 870 875 880 Arg Arg Cys Asn Leu His Pro Cys Gln Ser Arg 885 890 <210> 9 <211> 1966 <212> DNA <213> Human <400> 9 ccccgccgag ctgtgcttct actcgggccg tgtgctcggc caccccggct ccctcgtctc 60 gctcagcgcc tgcggcgccg ccggcggcct ggttggcctc attcagcttg ggcaggagca 120 ggtgctaatc cagcccctca acaactccca gggcccattc agtggacgag aacatctgat 180 caggcgcaaa tggtccttga cccccagccc ttctgctgag gcccagagac ctgagcagct 240 ctgcaaggtt ctaacagaaa agaagaagcc gacgtggggc aggcctttgc gggactggcg 300 ggagcggagg aacgctatcc ggctcaccag cgagcacacg gtggagaccc tggtggtggc 360 cgacgccgac atggtgcagt accacggggc cgaggctgcc cagaggttca tcctgaccgt 420 catgaacatg gtatacaata tgtttcagca ccagagcctg gggattaaaa ttaacattca 480 agtgaccaag cttgtcctgc tacgacaacg tcccgctaag ttgtccattg ggcaccatgg 540 tgagcggtcc ctggagagct tctgtcactg gcagaacgag gagtatggag gagcgcgata 600 cctcggcaat aaccaggttc ccggcgggaa ggacgacccg cccctggtgg atgctgctgt 660 gtttgtgacc aggacagatt tctgtgtaca caaagatgaa ccgtgtgaca ctgttggaat 720 tgcttactta ggaggtgtgt gcagtgctaa gaggaagtgt gtgcttgccg aagacaatgg 780 tctcaatttg gcctttacca tcgcccatga gctgggccac aacttgggca tgaaccacga 840 cgatgaccac tcatcttgcg ctggcaggtc ccacatcatg tcaggagagt gggtgaaagg 900 ccggaaccca agtgacctct cttggtcctc ctgcagccga gatgaccttg aaaacttcct 960 caagtcaaaa gtcagcacct gcttgctagt cacggacccc agaagccagc acacagtacg 1020 cctcccgcac aagctgccgg gcatgcacta cagtgccaac gagcagtgcc agatcctgtt 1080 tggcatgaat gccaccttct gcagaaacat ggagcatcta atgtgtgctg gactgtggtg 1140 cctggtagaa ggagacacat cctgcaagac caagctggac cctcccctgg atggcaccga 1200 gtgtggggca gacaagtggt gccgcgcggg ggagtgcgtg agcaagacgc ccatcccgga 1260 gcatgtggac ggagactgga gcccgtgggg cgcctggagc atgtgcagcc gaacatgtgg 1320 gacgggagcc cgcttccggc agaggaaatg tgacaacccc ccccctgggc ctggaggcac 1380 acactgcccg ggtgccagtg tagaacatgc ggtctgcgag aacctgccct gccccaaggg 1440 tctgcccagc ttccgggacc agcagtgcca ggcacacgac cggctgagcc ccaagaagaa 1500 aggcctgctg acagccgtgg tggttgacga taagccatgt gaactctact gctcgcccct 1560 cgggaaggag tccccactgc tggtggccga cagggtcctg gacggtacac cctgcgggcc 1620 ctacgagact gatctctgcg tgcacggcaa gtgccagaaa atcggctgtg acggcatcat 1680 cgggtctgca gccaaagagg acagatgcgg ggtctgcagc ggggacggca agacctgcca 1740 cttggtgaag ggcgacttca gccacgcccg ggggacaggt tatatcgaag ctgccgtcat 1800 tcctgctgga gctcggagga tccgtgtggt ggaggataaa cctgcccaca gctttctggg 1860 taaaacacaa atgacttgac tcaccattta tgtgttgaga atcgattttg atgatcagtc 1920 tggtaaattg gttcagtgtc aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1966 <210> 10 <211> 46 <212> DNA <213> Human <400> 10 tcacttgtca tcgtcgtcct tgtagtcacc cagaaagctg tgggca 46 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Human <400> 11 ggacgttgtc gtagcaggac 20 <210> 12 <211> 26 <212> DNA <213> Human <400> 12 ggaattcggg taccatgtgt gacggc 26

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の別のスプライス形
態のポリヌクレオチド・コーディング配列〔配列番号
１〕を示す。

【図２】図２は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の別のスプライス
形態のポリヌクレオチド・コーディング配列〔配列番号
２〕を示す。

【図３】図３は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の別のスプライス
形態のポリヌクレオチド・コーディング配列〔配列番号
３〕を示す。

【図４】図４は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の別のスプライス
形態のポリヌクレオチド・コーディング配列〔配列番号
４〕を示す。

【図５】図５は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１スプライス形態に
対応するポリペプチド配列〔配列番号５〕を示す。

【図６】図６は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１スプライス形態に
対応するポリペプチド配列〔配列番号６〕を示す。

【図７】図７は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１スプライス形態に
対応するポリペプチド配列〔配列番号７〕を示す。

【図８】図８は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１スプライス形態に
対応するポリペプチド配列〔配列番号８〕を示す。

【図９】図９は、３′非翻訳配列及びポリアデニル化配
列を含む、ライブラリー・スクリーニングにより同定さ
れたＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の部分的ｃＤＮＡ配列〔配列番
号９〕を示す。

【図１０】図１０（Ａ）と（Ｂ）は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
１．１のドメインの詳細な説明を示す。

【図１１】図１０（Ｂ）の続きを示す。

【図１２】図１０（Ｂ）の続きを示す。

【図１３】図１０（Ｂ）の続きを示す。

【図１４】図１４は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１のゲノム構
造、ＡＤＡＭＴＳファミリーのタンパク質の４つの別形
態及び対応のドメインを生成するスプライシングのパタ
ーンを示す。

【図１５】図１５は、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド
・メタロプロテアーゼドメインと他のＡＤＡＭＴＳタン
パク質のドメインのホモロジーを示す。

【図１６】図１６は、組換え発現構築物によりＨＥＫ２
９３細胞を形質転換させた後の、分泌及び細胞会合ＡＤ
ＡＭＴＳ−Ｊ１−ＦＬＡＧ融合タンパク質のウェスタン
・ブロット分析を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 19/02 11/00 35/00 19/02 Ｃ１２Ｎ 1/15 35/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 9/24 1/21 9/64 Ｚ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/37 9/24 1/68 Ａ 9/64 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/37 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/68 33/50 Ｚ 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 Ａ６１Ｋ 37/02 33/566 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (72)発明者 ピーター ジェフリー ミッチェル アメリカ合衆国，コネチカット 06340, グロトン，イースタン ポイント ロー ド，ファイザー グローバル リサーチ アンド ディベロプメント (72)発明者 ティモシー スコット ワットマン アメリカ合衆国，コネチカット 06340, グロトン，イースタン ポイント ロー ド，ファイザー グローバル リサーチ アンド ディベロプメント (72)発明者 ロデリック トーマス ウォルシュ イギリス国，シーティー13 ９エヌジェ イ，ケント，サンドウィッチ，ラムスゲー ト ロード，ファイザー グローバル リ サーチ アンド ディベロプメント

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の： （ａ）配列番号５，６，７、又は８のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ
   １ポリペプチド、あるいはそのメタロプロテイナーゼ、
   ジスインテグリン・ドメイン、プロドメイン、又はスロ
   ンボスポンジン（ＴＳＰ）ドメインをコードするヌクレ
   オチド配列に対し少なくとも８０％の同一性を有するヌ
   クレオチド配列； （ｂ）配列番号１，２，３、又は４のポリヌクレオチド
   分子にストリンジェント条件下でハイブリダイズする少
   なくとも１５の連続ヌクレオチドを有するヌクレオチド
   配列；及び （ｃ）（ａ）又は（ｂ）のヌクレオチド配列の相補物；
   から成る群から選ばれるヌクレオチド配列を含む単離ポ
   リヌクレオチド分子。
2. 【請求項２】 前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号
   １，２，３、又は４のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチド
   ・コーディング配列、あるいはそのメタロプロテイナー
   ゼ、ジスインテグリン・ドメイン、プロドメイン、又は
   スロンボスポンジン（ＴＳＰ）ドメインコーディング配
   列を含む、請求項１に記載の単離ポリヌクレオチド分
   子。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の単離ポリヌクレオチド
   分子によりコードされたポリペプチド。
4. 【請求項４】 配列番号５，６，７、又は８であるアミ
   ノ酸配列、あるいはそのメタロプロテイナーゼ、ジスイ
   ンテグリン・ドメイン、プロドメイン、又はスロンボス
   ポンジン（ＴＳＰ）ドメインを含む、請求項３に記載の
   ポリペプチド。
5. 【請求項５】 ＤＮＡ又はＲＮＡ分子を含む発現系であ
   って、その発現系がコンパチブルな宿主細胞内に存在す
   るとき、請求項３に記載のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプ
   チドを産生することができる、前記発現系。
6. 【請求項６】 請求項５に記載の発現系を含む宿主細
   胞。
7. 【請求項７】 ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドの製法
   であって、上記ポリペプチドの製造のために十分な条件
   下、請求項６に記載の宿主細胞を培養し、そして細胞培
   養物から上記ポリペプチドを回収する、ことを含む前記
   製法。
8. 【請求項８】 ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドに免疫
   特異的な抗体、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドのため
   のアゴニスト、ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドのため
   のアンタゴニスト、及びＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチ
   ドのための基質から成る群から選ばれる剤であって、こ
   こで上記ポリペプチドが請求項４に記載のポリペプチド
   である、前記剤。
9. 【請求項９】 ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の活性又は発現を変
   更する必要のある患者（被験体）を治療するための医薬
   組成物であって、治療的有効量の請求項８に記載の剤を
   含む、前記医薬組成物。
10. 【請求項１０】 患者におけるＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１の発
    現又は活性に関して患者における疾患を診断し又は疾患
    に対する感受性を診断するためのインビトロ・アッセイ
    法であって、上記患者のゲノム内の、請求項３に記載の
    ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列内での突然
    変異の存在又は不存在を決定し、又は上記患者から得ら
    れたサンプル中のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１発現の存在又は量
    を分析する、ことを含む前記インビトロ・アッセイ法。
11. 【請求項１１】 ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１にアンタゴナイズ
    し、アゴナイズし、又はそれに結合する化合物を同定す
    るための方法であって： （ａ）候補化合物を、請求項３に記載のＡＤＡＭＴＳ−
    Ｊ１ポリペプチドを発現する細胞と、あるいは上記ＡＤ
    ＡＭＴＳ−Ｊ１ポリペプチドを発現する細胞からの細胞
    膜、又は上記ポリペプチドを発現する細胞により馴され
    た培地、又は上記ポリペプチドの精製された組成物と、
    接触させ；そして（ｂ）ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１活性の阻害
    又は刺激、又は上記ポリペプチドへの上記候補化合物の
    結合を測定する、を含む前記方法。
12. 【請求項１２】 核酸材料を含有する生物学的サンプル
    中のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１をコードするポリヌクレオチド
    を検出する方法であって： （ａ）ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１に特異的な請求項１に記載の
    単離ポリヌクレオチドを、上記生物学的サンプルの上記
    核酸材料にハイブリダイズさせ、それによりハイブリダ
    イゼーション複合体を形成し；そして（ｂ）上記ハイブ
    リダイゼーション複合体を検出する、ここで上記ハイブ
    リダイゼーション複合体の存在は上記生物学的サンプル
    中のＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１をコードするポリヌクレオチド
    の存在に相関する、を含む前記方法。
13. 【請求項１３】 請求項３に記載の酵素的に活性なポリ
    ペプチドを含むポリペプチドを、候補基質と接触させ、
    そして生成物への基質の変換又は上記基質への上記ポリ
    ペプチドの結合のいずれかを測定する、ことを含む、Ａ
    ＤＡＭＴＳ−Ｊ１のための基質を同定する方法。
14. 【請求項１４】 医薬として許容される担体とともに、
    ＡＤＡＭＴＳ−Ｊ１のアゴニスト又はアンタゴニスト、
    請求項３に記載のポリペプチド、及び請求項１に記載の
    ポリヌクレオチドから成る群から選ばれる剤の治療的有
    効量を含む、関節炎（変形性関節炎及びリウマチ様関節
    炎）、炎症性腸疾患、クローン病、気腫、急性呼吸困難
    症候群、喘息、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病、
    臓器移植毒性及び拒絶、悪液質、アレルギー、癌（例え
    ば、固形腫瘍癌であって、結腸、乳房、肺、前立腺、脳
    を含むもの、並びに白血病及びリンパ腫を含む造血性悪
    性腫瘍）、組織潰瘍形成、再狭窄、歯周病、表皮水疱
    性、骨粗しょう症、人工関節インプラントのゆるみ、ア
    テローム性動脈硬化症（アテローム性動脈硬化斑裂開を
    含む）、大動脈瘤（腹部大動脈及び脳大動脈瘤を含
    む）、うっ血性心不全、心筋梗塞、発作、脳虚血、心臓
    外傷、脊髄損傷、神経変性疾患（急性及び慢性）、自己
    免疫疾患、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、片頭
    痛、うつ病、末梢ニューロパシー、痛み、脳アミロイド
    血管障害、向知性又は認識性亢進、筋萎縮性側索硬化
    症、多発性硬化症、眼血管形成、角膜損傷、黄斑変性
    症、異常外傷治癒、熱傷、不妊症又は糖尿病ショックの
    治療のための医薬組成物。