JP2001139498A - 膵外分泌機能診断剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む
アミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許容できる
その塩を含有する（但し、Bz-Tyr-¹³C-PABAを除く。）
膵外分泌機能診断剤を提供する。また、下記の式(II)で
表される¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩
を提供する。 Ｘ₂−Ｒ₂−Ｙ₂−Ｚ₁ (II) （式中、Ｘ₂は、水素原子または保護基であり、Ｒ₂は、
アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単結合で
あり、Ｙ₂はアミノ酸であり、Ｚ₁は、保護基を有しても
よいアミノ酸であり、Ｒ₂、Ｙ₂およびZ₁中のアミノ酸な
らびにＸ₂およびＺ₁が炭素を含有する保護基である場合
の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識さ
れている。） 【効果】 本発明により、被験者への負担が小さく、か
つ結果が即時に精度よく得られる感度の高い膵外分泌機
能検査が可能となった。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、膵外分泌機能診断
剤および新規化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術】膵外分泌機能検査は慢性膵炎、急性膵
炎、膵臓癌等の膵臓疾患の診断に有用な検査法である。
また、病態の把握や治療・投薬管理、疾患の予後の評価
にも有用な検査法である（総説 Arvanitakis and Cook
e. Gastroenterology 74:932 (1978)、Niederau and G
rendell. Gastroenterology 88:1973 (1985)、Goldber
g.Bull. Mol. Biol. Med. 15:1 (1990)、Lankisch. In
t. J. Pancreatology 14:9 (1993)、Bank and Chow Ga
stroenterologist 2:224 (1994)、Steer et al.New En
g. J. Med. 332:1482 (1995)）。

【０００３】膵外分泌機能検査は大きく有管法と無管法
の二つに分けられる。有管法はゾンデを口から十二指腸
まで挿入し十二指腸液を採取する検査法で、セクレチン
を静脈内投与することにより膵液の分泌を誘起してから
採取するセクレチン試験が一般的である。この方法は直
接膵液の量や成分を分析することから正確度が高く、膵
外分泌機能検査のゴールデンスタンダードに位置付けら
れている。しかしながら、被験者の負担が非常に大きい
ため、繰返し試験やスクリーニング試験として用いるこ
とのできる検査法ではない。また、験者にも技術的熟練
が要求されるため、一部の医療機関でしか実施できない
検査法である。さらに、X線透視下でゾンデの位置を確
認しながら十二指腸液を採取するため、X線被曝の問題
もある。

【０００４】一方、無管法はゾンデの挿入を必要としな
い膵外分泌機能検査の簡便法で、膵外分泌酵素の作用に
よる分解産物や膵外分泌酵素自体の排泄量を測定する検
査法である。現在実施されている方法は主に以下に述べ
る４検査法である。 １ 膵臓から分泌されるキモトリプシンの合成基質 BT-
PABA（N-benzoyl L-tyrosyl P-aminobenzoic acid）を
経口投与し、キモトリプシンによる分解産物である PAB
A(P-aminobenzoic acid）の尿中排泄率を測定するPFD試
験。 ２ 膵臓から分泌されるコレステロールエステルハイド
ロラーゼ、エステラーゼの合成基質 FDL (Fluorescein
dilaurate）を経口投与し、分解産物であるFluorescein
の尿中排泄率あるいは血中濃度を測定するPLT試験。 ３ 糞便中のキモトリプシンの定量を行う糞便中キモト
リプシン試験。 ４ 糞便中のエラスターゼの定量を行う糞便中エラスタ
ーゼ試験。

【０００５】しかしながら、いずれの検査法も感度が低
く、軽度の膵外分泌機能低下を検出することができな
い。この問題を解決するために、これまでに多くの簡易
膵外分泌機能検査法が検討されて来ており、¹³C-標識化
合物を投与して呼気中の¹³CO₂濃度の増加を測定する¹³C
-呼気テストの適用も試みられてきた。

【０００６】１ リパーゼの基質となる¹³C-標識Lipid
や¹³C-標識Mixed Triglycerideを投与する¹³C-呼気テス
ト（Chen et al. J. Nuclear Med. 15:1125 (1974)、Wa
tkinset al. J. Lab. Clin. Med. 90:422 (1977) 、Gho
os et al. Digestion 22:239(1981) 、John, SG. Gas
troenterology 83:44 (1982)、Watkins et al. Gastroe
nterology 82:911 (1982) 、Benini et al. Digestion
29:91 (1984)、Joneset al. J. Lab. Clin. Med. 105:6
47 (1985)、Knoblach et al. Monatsschr Kinderheilkd
136:26 (1988)、Vantrappen et al. Gastroenterology
96:1126 (1989)、Murphy et al. Arch. Disease in Ch
ildhood 65:574 (1990)、Kato et al.Am. J. Gastroent
erol. 88:64 (1993)、McClean et al. Arch. Disease i
n Childhood 69:366 (1993)、Jakobs et al. Eur. J. P
ediatr. 156:S78 (1997)、Kalivianakis et al. Eur.
J. Clin. Invest. 27:434 (1997)）。

【０００７】２ コレステロールエステラーゼ、リパー
ゼの基質となる¹³C-標識Cholesterolesterを投与する¹³
C-呼気テスト（Mundlos et al. Pediatric Res. 22:257
(1987)、Cole et al. Gastroenterology 93:1372 (198
7)、Mundlos et al. Gut 31:1324 (1990)）。 ３ アミラーゼの基質となる¹³C-標識Starchを投与する
¹³C-呼気テスト（Hieleet al. Gastroenterology 96:50
3 (1989)、Dewit et al. Pediatric Res. 32:45(199
2)、Z. Gastroenterol. 35:187 (1997)）。

【０００８】４ プロテアーゼの基質となる¹³C-Enrich
ed Egg Protein（鶏に¹³C-Leucine を食べさせることで
¹³C-濃度を、天然存在比 1.1 atom %から 1.4 atom %ま
で濃縮したタンパク質）を投与する¹³C-呼気テスト（Y.
Ghoos. ¹³CO₂-Breath Testsat the laboratory "Dig
estion-Absorption". University Hospital Gasthuisb
erg, Leuven, Belgium. (1996)）。

【０００９】しかしながら、これらも感度が低く、検査
に長時間を要することなどの理由から臨床応用されるに
至ってはいない。かかる状況下、被験者への負担が小さ
く、かつ結果が即時に精度よく得られる感度の高い膵外
分泌機能検査法の開発が望まれるところである。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明は、被
験者への負担が小さく、かつ結果が即時に精度よく得ら
れる感度の高い膵外分泌機能検査を可能にする膵外分泌
機能診断剤を提供することを目的とする。また、本発明
は、膵外分泌機能検査に利用できる新規な化合物を提供
することも目的とする。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、¹³Cで標
識したペプチド化合物を健常ラットと慢性膵炎ラットに
経口投与し、投与後の呼気CO₂中の¹³C濃度を測定するこ
とにより、高い感度で膵外分泌機能検査を行うことがで
きることを見出し、本発明を完成するに到った。

【００１２】本発明の要旨は以下の通りである。 〔１〕 少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含むアミノ
酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許容できるその塩
を含有する（但し、Bz-L‐Tyr-¹³C-PABAを除く。）膵外
分泌機能診断剤。 〔２〕 アミノ酸分子が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む〔１〕記
載の膵外分泌機能診断剤。 〔３〕 アミノ酸またはペプチドが修飾または保護され
ており、修飾基または保護基が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む
〔１〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔４〕 アミノ酸またはペプチドが下記の式(I)で表さ
れる〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の膵外分泌機能診
断剤。 Ｘ₁−Ｒ₁−Ｙ₁ (I) （式中、Ｘ₁は、水素原子または保護基であり、Ｒ₁は、
アミノ酸数２〜５０のペプチド、アミノ酸または単結合
であり、Ｙ₁は、保護基を有してもよいアミノ酸であ
る。）

【００１３】〔５〕 Ｒ₁およびＹ₁中のアミノ酸、なら
びにＹ₁がエステルで保護された場合の保護基の少なく
とも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識されている〔４〕記
載の膵外分泌機能診断剤。 〔６〕 アミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許
容できるその塩が、プロテアーゼの作用を受けた後に、
脱炭酸され、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じるものである
〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の膵外分泌機能診断
剤。 〔７〕 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアーゼである
〔６〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔８〕 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリプシン、
トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペプチダー
ゼからなる群より選択される〔７〕記載の膵外分泌機能
診断剤。

〔９〕 呼気テストに用いられる〔１〕〜〔８〕のいず
れかに記載の膵外分泌機能診断剤。

【００１４】〔１０〕 下記の式(II)で表される¹³Ｃ−
若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 Ｘ₂−Ｒ₂−Ｙ₂−Ｚ₁ (II) （式中、Ｘ₂は、水素原子または保護基であり、Ｒ₂は、
アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単結合で
あり、Ｙ₂はアミノ酸であり、Ｚ₁は、保護基を有しても
よいアミノ酸であり、Ｒ₂、Ｙ₂およびＺ₁中のアミノ
酸、ならびにＸ₂およびＺ₁が炭素を含有する保護基であ
る場合の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−
標識されており、ただし、式(II)で表される化合物から
下記の化合物は除かれる。 L-Ala-L-Pro、L-Gly-L-Leu、L-Gly-L-Phe、L-Val-L-Le
u、L-Leu-L-Leu、L-Tyr-L-Leu、Ac-D-Ala-D-Ala、L-Gly
-L-Gly-OEt、L-Leu-L-Ala-OMe、Ac-L-Gly-L-Pro-OMe、B
oc-L-Leu-L-Ala-OMe、L-Gly-L-Pro-L-Leu、L-Gly-L-Pro
-L-Phe、L-Ala-L-Gly-L-Gly、L-Gly-L-Leu-L-Pro、L-Ph
e-L-Asp-L-Met、L-Gly-L-Leu-L-Pro、Dansyl-L-Tyr-L-V
al-D-Ala、Cbz-L-Gly-L-Leu-L-Ala、L-Thr-L-Leu-L-Asn
-Bzl、Z-L-Pro-L-Pro-L-Gly-OEt、L-Leu-L-Leu-L-Leu-L
-Leu、L-Lys-L-Arg-L-Asp-L-Ser、Ac-L-Leu-L-Ala-L-Al
a-L-Gln(NMe₂)、Ac-L-Leu-L-Ala-L-Ala-L-Gln(NMe₂)-SE
t、L-Tyr-L-Gly-L-Gly-L-Phe-L-LeuおよびL-Tyr-L-Gly-
L-Gly-L-Phe-L-Met（式中、Acはアセチル基、Eｔはエチ
ル基、Meはメチル基、Bocはt-ブチルオキシカルボニル
基、Dansylはダンシル基、Cbzはカルボベンジルオキシ
基、Bzlはベンゾイル基、Zはベンジルオキシカルボニル
基、SEtはエタンチオール基であり、NMe₂はジメチルア
ミノ基である。））

【００１５】〔１１〕 １）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂が
単結合である場合、 1-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はD-Ala以外のアミノ酸
であり、 1-ii)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 1-iii)Ｚ₁がL-Pro-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 ２）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸である場合、 ２-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Val以外のアミノ
酸であり、 ２-ii)Ｚ₁がL-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 ２-iii)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外の
アミノ酸であり、 ３）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸数２のペプチド
である場合、Ｚ₁がSEｔ基を有してもよいL-Glnであると
き、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸であり、 ４）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂が単結合である場合、 ４-i)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ
酸であり、 ４-ii)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Gly、L-Val、L-L
euおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 ４-iii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミ
ノ酸であり、 ４-iv)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 ４-v)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 ５）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸である場合、 ５-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
酸であり、 ５-ii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
酸であり、 ５-iii)Ｚ₁がL-Glyであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミ
ノ酸であり、 ５-iv)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 ５-v)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
酸であり、 ５-vi)Ｚ₁がL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 ６）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸数２のペプチ
ドである場合、 ６-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 ６-ii)Ｚ₁がL-Serであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
酸であり、 ７）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸数３のペプチ
ドである場合、 ７-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Phe以外のアミノ
酸であり、 ７-ii)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-Phe以外のアミノ
酸である 〔１０〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物または
その塩。

【００１６】〔１２〕 １）Ｘ₂がDansyl、Cbz、Acおよ
びZからなる群より選択される保護基であり、Ｒ₂がアミ
ノ酸数２のペプチドまたはアミノ酸である場合、 1-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Val以外のアミノ酸
であり、 1-ii)Ｚ₁がL-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 1-iii)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のア
ミノ酸であり、 1-iv)Ｚ₁がL-Gln(NMe₂)またはL-Gln(NMe₂)-SEtであると
き、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸であり、 ２）Ｘ₂がAcまたはBocであり、Ｒ₂が単結合である場
合、 2-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はD-Ala以外のアミノ酸
であり、 2-ii)Ｚ₁がL-Pro-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 2-iii)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 ３）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸数２若しくは
３のペプチドまたはアミノ酸である場合、 3-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Pro、L-LeuおよびL
-Phe以外のアミノ酸であり、 3-ii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
酸であり、 3-iii)Ｚ₁がL-Glyであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミノ
酸であり、 3-iv)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 3-v)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-AspおよびL-Phe以
外のアミノ酸であり、 3-vi)Ｚ₁がL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 3-vii)Ｚ₁がL-Serであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
酸であり、 ４）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂が単結合である場合、 4-i)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸
であり、 4-ii)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Gly、L-Val、L-Le
uおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 4-iii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミノ
酸であり、 4-iv)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 4-v)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミ
ノ酸である 〔１０〕または〔１１〕に記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−
標識化合物またはその塩。

【００１７】〔１３〕 Ｘ₂が、Ac、Bz（ベンゾイル
基）、Boc、Zおよび水素原子からなる群より選択される
〔１０〕〜〔１２〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは
¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔１４〕 プロテアーゼの作用を受けた後に、脱炭酸さ
れ、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じる〔１０〕〜〔１３〕
のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物ま
たはその塩。 〔１５〕 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアーゼであ
る〔１４〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物また
はその塩。 〔１６〕 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリプシ
ン、トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペプチ
ダーゼからなる群より選択される〔１５〕記載の¹³Ｃ−
若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔１７〕 Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂が単結合である〔１
０〕〜〔１６〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ
−標識化合物またはその塩。

【００１８】〔１８〕 (１)Ｙ₂およびＺ₁のアミノ酸の
少なくとも一つが、ArgまたはLysであるか、(２)Ｙ₂お
よびＺ₁のアミノ酸の少なくとも一つが、芳香族アミノ
酸、Leu、HisまたはMetであるか、(３)Ｙ₂およびＺ₁の
アミノ酸の少なくとも一つが、中性かつ非芳香族アミノ
酸であるか、(４)Ｚ₁のアミノ酸が、Arg、LysおよびPro
以外のアミノ酸であるか、または(５)Ｚ₁のアミノ酸
が、ArgまたはLysである〔１０〕〜〔１７〕のいずれか
に記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその
塩。

【００１９】〔１９〕 Ｘ₂が、水素原子、Bz、Acおよ
びBocからなる群より選択され、Ｙ₂が、Phe、Ala、Gl
y、TyrおよびArgからなる群より選択され、Ｚ₁が、保護
基を有してもよいLeu、保護基を有してもよいAlaおよび
保護基を有してもよいGlyからなる群より選択される
〔１０〕〜〔１８〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは
¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔２０〕 Ｚ₁が、Leu、Ala、Gly、Leu-OMe、Leu-OEt、
Ala-OMe、Ala-OEt、Gly-OMeおよびGly-OEtからなる群よ
り選択される〔１９〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識
化合物またはその塩。 〔２１〕 Ｚ₁が、保護基を有してもよい¹³Ｃ−または
¹⁴Ｃ−標識アミノ酸である〔１０〕〜〔２０〕のいずれ
かに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその
塩。

【００２０】〔２２〕 下記の化合物からなる群より選
択される〔１０〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合
物またはその塩。 (a)Phe-¹³C-Leu、(b)Arg-¹³C-Leu、(c)Bz-Ala-¹³C-Al
a、(d)Bz-Gly-¹³C-Leu、(e)Bz-Phe-¹³C-Gly、(f)Bz-Tyr
-¹³C-Leu、(g)Bz-Phe-¹³C-Leu、(h)Bz-(DL)Phe-¹³C-Le
u、(j)Bz-Arg-¹³C-Leu、(k)Ac-Phe-¹³C-Leu、(l)Ac-Tyr
-¹³C-Leu、(m)Bz-Ala-¹³C-Ala-OMe、(n)Bz-Gly-¹³C-Leu
-OMe、(o)Bz-Phe-¹³C-Gly-OMe、(p)Bz-Phe-¹³C-Leu-OM
e、(q)Bz-(DL)Phe-¹³C-Leu-OMe、(r)Ac-Phe-¹³C-Leu-OM
e、(s)Ac-Tyr-¹³C-Leu-OMe、(t)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gl
y-Phe-¹³C-Leu、(u)Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-¹³C-
Leuおよび(v)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-¹³C-Gly-Phe-Leu

【００２１】〔２３〕 少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴
Ｃを含むアミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許
容できるその塩を含有する（但し、Bz-L‐Tyr-¹³C-PABA
を除く。）膵外分泌機能診断剤であって、該アミノ酸ま
たは該ペプチドの構成アミノ酸のすべてがL体である膵
外分泌機能診断剤。 〔２４〕 アミノ酸分子が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む〔２
３〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔２５〕 アミノ酸またはペプチドが修飾または保護さ
れており、修飾基または保護基が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む
〔２３〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔２６〕 アミノ酸またはペプチドが下記の式(I)で表
される〔２３〕〜〔２５〕のいずれかに記載の膵外分泌
機能診断剤。 Ｘ₁−Ｒ₁−Ｙ₁ (I) （式中、Ｘ₁は、水素原子または保護基であり、Ｒ₁は、
アミノ酸数２〜５０のペプチド、アミノ酸または単結合
であり、Ｙ₁は、保護基を有してもよいアミノ酸であ
る。）

【００２２】〔２７〕 Ｒ₁およびＹ₁中のアミノ酸、な
らびにＹ₁がエステルで保護された場合の保護基の少な
くとも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識されている〔２
６〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔２８〕 アミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に
許容できるその塩が、プロテアーゼの作用を受けた後
に、脱炭酸され、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じるもので
ある〔２３〕〜〔２７〕のいずれかに記載の膵外分泌機
能診断剤。 〔２９〕 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアーゼであ
る〔２８〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔３０〕 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリプシ
ン、トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペプチ
ダーゼからなる群より選択される〔２９〕記載の膵外分
泌機能診断剤。 〔３１〕 呼気テストに用いられる〔２３〕〜〔３０〕
のいずれかに記載の膵外分泌機能診断剤。

【００２３】〔３２〕 下記の式(IIa)で表される¹³Ｃ
−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩であって、標
識化合物の構成アミノ酸のすべてがL体である標識化合
物またはその塩。 Ｘ_2a−Ｒ_2a−Ｙ_2a−Ｚ_1a (IIa) （式中、Ｘ_2aは、水素原子または保護基であり、Ｒ
_2aは、アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単
結合であり、Ｙ_2aはアミノ酸であり、Ｚ_1aは、保護基を
有してもよいアミノ酸であり、Ｒ_2a、Ｙ_2aおよびＺ_1a中
のアミノ酸、ならびにＸ_2aおよびＺ_1aが炭素を含有する
保護基である場合の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−ま
たは¹⁴Ｃ−標識されており、ただし、式(IIa)で表され
る化合物から下記の化合物は除かれる。 L-Ala-L-Pro、L-Gly-L-Leu、L-Gly-L-Phe、L-Val-L-Le
u、L-Leu-L-Leu、L-Tyr-L-Leu、L-Gly-L-Gly-OEt、L-Le
u-L-Ala-OMe、Ac-L-Gly-L-Pro-OMe、Boc-L-Leu-L-Ala-O
Me、L-Gly-L-Pro-L-Leu、L-Gly-L-Pro-L-Phe、L-Ala-L-
Gly-L-Gly、L-Gly-L-Leu-L-Pro、L-Phe-L-Asp-L-Met、L
-Gly-L-Leu-L-Pro、Cbz-L-Gly-L-Leu-L-Ala、L-Thr-L-L
eu-L-Asn-Bzl、Z-L-Pro-L-Pro-L-Gly-OEt、L-Leu-L-Leu
-L-Leu-L-Leu、L-Lys-L-Arg-L-Asp-L-Ser、Ac-L-Leu-L-
Ala-L-Ala-L-Gln(NMe₂)、Ac-L-Leu-L-Ala-L-Ala-L-Gln
(NMe₂)-SEt、L-Tyr-L-Gly-L-Gly-L-Phe-L-LeuおよびL-T
yr-L-Gly-L-Gly-L-Phe-L-Met（式中、Acはアセチル基、
Eｔはエチル基、Meはメチル基、Bocはt-ブチルオキシカ
ルボニル基、Cbzはカルボベンジルオキシ基、Bzlはベン
ゾイル基、Zはベンジルオキシカルボニル基、SEtはエタ
ンチオール基であり、NMe₂はジメチルアミノ基であ
る。））

【００２４】〔３３〕 １）Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2a
が単結合である場合、 1-i)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 1-ii)Ｚ_1aがL-Pro-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外の
アミノ酸であり、 ２）Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2aがアミノ酸である場合、 ２-i)Ｚ_1aがL-Alaであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
ノ酸であり、 ２-ii)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外の
アミノ酸であり、 ３）Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2aがアミノ酸数２のペプチ
ドである場合、Ｚ_1aがSEｔ基を有してもよいL-Glnであ
るとき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミノ酸であり、 ４）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aが単結合である場合、 ４-i)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミ
ノ酸であり、 ４-ii)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Gly、L-Val、L
-LeuおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 ４-iii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 ４-iv)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外の
アミノ酸であり、 ４-v)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
アミノ酸であり、 ５）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸である場
合、 ５-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外のアミ
ノ酸であり、 ５-ii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外のアミ
ノ酸であり、 ５-iii)Ｚ_1aがL-Glyであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 ５-iv)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
ノ酸であり、 ５-v)Ｚ_1aがL-Metであるとき、Ｙ_2aはL-Asp以外のアミ
ノ酸であり、 ５-vi)Ｚ_1aがL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
アミノ酸であり、 ６）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸数２のペプ
チドである場合、 ６-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
ノ酸であり、 ６-ii)Ｚ_1aがL-Serであるとき、Ｙ_2aはL-Asp以外のアミ
ノ酸であり、 ７）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸数３のペプ
チドである場合、 ７-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Phe以外のアミ
ノ酸であり、 ７-ii)Ｚ_1aがL-Metであるとき、Ｙ_2aはL-Phe以外のアミ
ノ酸である〔３２〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化
合物またはその塩。

【００２５】〔３４〕 １）Ｘ_2aが、Cbz、AcおよびZか
らなる群より選択される保護基であり、Ｒ_2aがアミノ酸
数２のペプチドまたはアミノ酸である場合、 1-i)Ｚ_1aがL-Alaであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミノ
酸であり、 1-ii)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外の
アミノ酸であり、 1-iii)Ｚ_1aがL-Gln(NMe₂)またはL-Gln(NMe₂)-SEtである
とき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミノ酸であり、 ２）Ｘ_2aがAcまたはBocであり、Ｒ_2aが単結合である場
合、 2-i)Ｚ_1aがL-Pro-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 2-ii)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
アミノ酸であり、 ３）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸数２若しく
は３のペプチドまたはアミノ酸である場合、 3-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Pro、L-Leuおよ
びL-Phe以外のアミノ酸であり、 3-ii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外のアミ
ノ酸であり、 3-iii)Ｚ_1aがL-Glyであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のアミ
ノ酸であり、 3-iv)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
ノ酸であり、 3-v)Ｚ_1aがL-Metであるとき、Ｙ_2aはL-AspおよびL-Phe
以外のアミノ酸であり、 3-vi)Ｚ_1aがL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
アミノ酸であり、 3-vii)Ｚ_1aがL-Serであるとき、Ｙ_2aはL-Asp以外のアミ
ノ酸であり、 ４）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aが単結合である場合、 4-i)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミノ
酸であり、 4-ii)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Gly、L-Val、L-
LeuおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 4-iii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のアミ
ノ酸であり、 4-iv)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外の
アミノ酸であり、 4-v)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のア
ミノ酸である〔３２〕または〔３３〕に記載の¹³Ｃ−若
しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。

【００２６】〔３５〕 Ｘ_2aが、Ac、Bz（ベンゾイル
基）、Boc、Zおよび水素原子からなる群より選択される
〔３２〕〜〔３４〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは
¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔３６〕 プロテアーゼの作用を受けた後に、脱炭酸さ
れ、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じる〔３２〕〜〔３５〕
のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物ま
たはその塩。 〔３７〕 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアーゼであ
る〔３６〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物また
はその塩。 〔３８〕 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリプシ
ン、トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペプチ
ダーゼからなる群より選択される〔３７〕記載の¹³Ｃ−
若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔３９〕 Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2aが単結合である
〔３２〕〜〔３８〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは
¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。

【００２７】〔４０〕 (１)Ｙ_2aおよびＺ_1aのアミノ酸
の少なくとも一つが、L-ArgまたはL-Lysであるか、(２)
Ｙ_2aおよびＺ_1aのアミノ酸の少なくとも一つが、芳香族
L-アミノ酸、L-Leu、L-HisまたはL-Metであるか、(３)
Ｙ_2aおよびＺ_1aのアミノ酸の少なくとも一つが、中性か
つ非芳香族L-アミノ酸であるか、(４)Ｚ_1aのアミノ酸
が、L-Arg、L-LysおよびL-Pro以外のL-アミノ酸である
か、または(５)Ｚ_1aのアミノ酸が、L-ArgまたはL-Lysで
ある〔３２〕〜〔３９〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若し
くは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。

【００２８】〔４１〕 Ｘ_2aが、水素原子、Bz、Acおよ
びBocからなる群より選択され、Ｙ_2aが、L-Phe、L-Al
a、L-Gly、L-TyrおよびL-Argからなる群より選択され、
Ｚ_1aが、保護基を有してもよいL-Leu、保護基を有して
もよいL-Alaおよび保護基を有してもよいL-Glyからなる
群より選択される〔３２〕〜〔４０〕のいずれかに記載
の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔４２〕 Ｚ_1aが、L-Leu、L-Ala、L-Gly、L-Leu-OMe、
L-Leu-OEt、L-Ala-OMe、L-Ala-OEt、L-Gly-OMeおよびL-
Gly-OEtからなる群より選択される〔４１〕記載の¹³Ｃ
−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔４３〕 Ｚ_1aが、保護基を有してもよい¹³Ｃ−または
¹⁴Ｃ−標識アミノ酸である〔３２〕〜〔４２〕のいずれ
かに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその
塩。

【００２９】〔４４〕 下記の化合物からなる群より選
択される〔３２〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合
物またはその塩。 (a)L-Phe-¹³C-L-Leu、(b)L-Arg-¹³C-L-Leu、(c)Bz-L-Al
a-¹³C-L-Ala、(d)Bz-L-Gly-¹³C-L-Leu、(e)Bz-L-Phe-¹³
C-L-Gly、(f)Bz-L-Tyr-¹³C-L-Leu、(g)Bz-L-Phe-¹³C-L-
Leu、(h)Bz-L-Arg-¹³C-L-Leu、(i)Ac-L-Phe-¹³C-L-Le
u、(j)Ac-L-Tyr-¹³C-L-Leu、(k)Bz-L-Ala-¹³C-L-Ala-OM
e、(l)Bz-L-Gly-¹³C-L-Leu-OMe、(m)Bz-L-Phe-¹³C-L-Gl
y-OMe、(n)Bz-L-Phe-¹³C-L-Leu-OMe、(o)Ac-L-Phe-¹³C-
L-Leu-OMe、(p)Ac-L-Tyr-¹³C-L-Leu-OMe、(q)Bz-L-Ala-
L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Gly-L-Phe-¹³C-L-Leu、(r)Boc-L-
Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Gly-L-Phe-¹³C-L-Leuおよび
(s)Bz-L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-¹³C-L-Gly-L-Phe-L-Le
u

【００３０】〔４５〕 少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴
Ｃを含むアミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許
容できるその塩を含有する膵外分泌機能診断剤であっ
て、該アミノ酸または該ペプチドの構成アミノ酸の少な
くとも１個がD体またはDL体である膵外分泌機能診断
剤。 〔４６〕 アミノ酸分子が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む〔４
５〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔４７〕 アミノ酸またはペプチドが修飾または保護さ
れており、修飾基または保護基が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む
〔４５〕記載の膵外分泌機能診断剤。〔４８〕 アミノ
酸またはペプチドが下記の式(I)で表される〔４５〕〜
〔４７〕のいずれかに記載の膵外分泌機能診断剤。 Ｘ₁−Ｒ₁−Ｙ₁ (I) （式中、Ｘ₁は、水素原子または保護基であり、Ｒ₁は、
アミノ酸数２〜５０のペプチド、アミノ酸または単結合
であり、Ｙ₁は、保護基を有してもよいアミノ酸であ
る。）

【００３１】〔４９〕 Ｒ₁およびＹ₁中のアミノ酸、な
らびにＹ₁がエステルで保護された場合の保護基の少な
くとも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識されている〔４
８〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔５０〕 アミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に
許容できるその塩が、プロテアーゼの作用を受けた後
に、脱炭酸され、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じるもので
ある〔４５〕〜〔４９〕のいずれかに記載の膵外分泌機
能診断剤。 〔５１〕 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアーゼであ
る〔５０〕記載の膵外分泌機能診断剤。 〔５２〕 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリプシ
ン、トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペプチ
ダーゼからなる群より選択される〔５１〕記載の膵外分
泌機能診断剤。 〔５３〕 呼気テストに用いられる〔４５〕〜〔５２〕
のいずれかに記載の膵外分泌機能診断剤。

【００３２】〔５４〕 下記の式(IIb)で表される¹³Ｃ
−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩であって、標
識化合物の構成アミノ酸の少なくとも１個がD体またはD
L体である標識化合物またはその塩。 Ｘ_2b−Ｒ_2b−Ｙ_2b−Ｚ_1b (IIb) （式中、Ｘ_2bは、水素原子または保護基であり、Ｒ
_2bは、アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単
結合であり、Ｙ_2bはアミノ酸であり、Ｚ_1bは、保護基を
有してもよいアミノ酸であり、Ｒ_2b、Ｙ_2bおよびＺ_1b中
のアミノ酸、ならびにＸ_2bおよびＺ_1bが炭素を含有する
保護基である場合の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−ま
たは¹⁴Ｃ−標識されており、ただし、式(IIb)で表され
る化合物から下記の化合物は除かれる。Ac-D-Ala-D-Ala
およびDansyl-L-Tyr-L-Val-D-Ala（式中、Acはアセチル
基、Dansylはダンシル基である。））

【００３３】〔５５〕 １）Ｘ_2bが保護基であり、Ｒ_2b
が単結合である場合、Ｚ_1bがD-Alaであるとき、Ｙ_2bはD
-Ala以外のアミノ酸であり、 ２）Ｘ_2bが保護基であり、Ｒ_2bがアミノ酸である場合、
Ｚ_1bがD-Alaであるとき、Ｙ_2bはVal以外のアミノ酸であ
る〔５４〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物また
はその塩。 〔５６〕 Ｘ_2bが、Ac、Bz（ベンゾイル基）、Boc、Zお
よび水素原子からなる群より選択される〔５４〕〜〔５
５〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合
物またはその塩。

【００３４】〔５７〕 プロテアーゼの作用を受けた後
に、脱炭酸され、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じる〔５
４〕〜〔５６〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ
−標識化合物またはその塩。 〔５８〕 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアーゼであ
る〔５７〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物また
はその塩。 〔５９〕 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリプシ
ン、トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペプチ
ダーゼからなる群より選択される〔５８〕記載の¹³Ｃ−
若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔６０〕 Ｘ_2bが保護基であり、Ｒ_2bが単結合である
〔５４〕〜〔５９〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは
¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。

【００３５】〔６１〕 (１)Ｙ_2bおよびＺ_1bのアミノ酸
の少なくとも一つが、ArgまたはLysであるか、(２)Ｙ_2b
およびＺ_1bのアミノ酸の少なくとも一つが、芳香族アミ
ノ酸、Leu、HisまたはMetであるか、(３)Ｙ_2bおよびＺ
_1bのアミノ酸の少なくとも一つが、中性かつ非芳香族ア
ミノ酸であるか、(４)Ｚ_1bのアミノ酸が、Arg、Lysおよ
びPro以外のアミノ酸であるか、または(５)Ｚ_1bのアミ
ノ酸が、ArgまたはLysである〔５４〕〜〔６０〕のいず
れかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはそ
の塩。

【００３６】〔６２〕 Ｘ_2bが、水素原子、Bz、Acおよ
びBocからなる群より選択され、Ｙ_2bが、Phe、Ala、Gl
y、TyrおよびArgからなる群より選択され、Ｚ_1bが、保
護基を有してもよいLeu、保護基を有してもよいAlaおよ
び保護基を有してもよいGlyからなる群より選択される
〔５４〕〜〔６１〕のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは
¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 〔６３〕 Ｚ_1bが、Leu、Ala、Gly、Leu-OMe、Leu-OE
t、Ala-OMe、Ala-OEt、Gly-OMeおよびGly-OEtからなる
群より選択される〔６２〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−
標識化合物またはその塩。 〔６４〕 Ｚ_1bが、保護基を有してもよい¹³Ｃ−または
¹⁴Ｃ−標識アミノ酸である〔５４〕〜〔６３〕のいずれ
かに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその
塩。

【００３７】〔６５〕 下記の化合物からなる群より選
択される〔５４〕記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合
物またはその塩。 (a)Phe-¹³C-Leu、(b)Arg-¹³C-Leu、(c)Bz-Ala-¹³C-Al
a、(d)Bz-Gly-¹³C-Leu、(e)Bz-Phe-¹³C-Gly、(f)Bz-Tyr
-¹³C-Leu、(g)Bz-Phe-¹³C-Leu、(h)Bz-(DL)Phe-¹³C-Le
u、(j)Bz-Arg-¹³C-Leu、(k)Ac-Phe-¹³C-Leu、(l)Ac-Tyr
-¹³C-Leu、(m)Bz-Ala-¹³C-Ala-OMe、(n)Bz-Gly-¹³C-Leu
-OMe、(o)Bz-Phe-¹³C-Gly-OMe、(p)Bz-Phe-¹³C-Leu-OM
e、(q)Bz-(DL)Phe-¹³C-Leu-OMe、(r)Ac-Phe-¹³C-Leu-OM
e、(s)Ac-Tyr-¹³C-Leu-OMe、(t)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gl
y-Phe-¹³C-Leu、(u)Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-¹³C-
Leuおよび(v)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-¹³C-Gly-Phe-Leu 以下、本発明を詳細に説明する。

【００３８】

【発明の実施の形態】本明細書において、ペプチドは、
N末端を左に、C末端を右に表記することとする。また、
アミノ酸残基は、三文字法に従って表記することとし、
特にことわらない限り、L体、D体およびDL体のいずれで
あってもよい。

【００３９】本明細書において、「アミノ酸」とは、分
子内にカルボキシル基とアミノ基を有する化合物をい
い、プロリン、ヒドロキシプロリンのようなイミノ酸、
分子内にラクタム構造を有する化合物も含むものとす
る。アミノ酸は、L-アミノ酸、D-アミノ酸またはDL‐ア
ミノ酸のいずれであってもよい。また、本明細書におい
て、「ペプチド」とは、２個以上のアミノ酸がペプチド
結合により結合して生じる化合物をいい、アミノ酸のみ
からなるホモメリックペプチドの他、非アミノ酸成分を
含むヘテロメリックペプチドも含み、さらに、それらの
誘導体も含むものとし、構成アミノ酸残基数（ｎ）が１
００以下のものをいう。

【００４０】本明細書において、「少なくとも1個の¹³
Ｃまたは¹⁴Ｃを含むアミノ酸若しくはペプチド」とは、
アミノ酸、ペプチドを構成するアミノ酸残基、それらの
修飾基および保護基中の少なくとも１個の炭素原子が¹³
Ｃまたは¹⁴Ｃ原子に置換されていることにより、アミノ
酸若しくはペプチド分子中の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃ原子の存在
比が天然存在比より高くなっているものをいう。

【００４１】本発明の膵外分泌機能診断剤は、少なくと
も1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含むアミノ酸若しくはペプチ
ドまたは薬剤学的に許容できるその塩を含有する（但
し、Bz-Tyr-¹³C-PABAを除く。）。本発明の膵外分泌機
能診断剤において、アミノ酸分子が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含
んでもよいし、アミノ酸またはペプチドが修飾または保
護されている場合には、修飾基または保護基が¹³Ｃまた
は¹⁴Ｃを含んでもよい。

【００４２】上記のアミノ酸またはペプチドは、例え
ば、下記の式(I)で表される。 Ｘ₁−Ｒ₁−Ｙ₁ (I) （式中、Ｘ₁は、水素原子または保護基であり、Ｒ₁は、
アミノ酸数２〜５０のペプチド、アミノ酸または単結合
であり、Ｙ₁は、保護基を有してもよいアミノ酸であ
る。）

【００４３】式(I) において、Ｘ₁は、水素原子または
保護基であるが、保護基としては、有機化学の分野にお
いて通常用いられている保護基、例えば、生化学実験講
座１タンパク質の化学ＩＶ、日本生化学会編、東京化学
同人刊（１９７７）、実験化学講座２２ 有機合成Ｉ
Ｖ、日本化学会編、丸善刊（１９９２）、ペプチド合成
の基礎と実験、泉屋信夫 加藤哲夫 青柳東彦 脇道典
著、丸善刊（１９８５）、“Modification of Protein
s" (ed by Robert E. Feeney, John R. Whitaker), the
American Chemical Society (1982) 、M. Bodanszky,
“Principles ofPeptides Synthesis", Springer-Verla
g, Berlin (1984)、E. Schroder, K. Lubke, “The Pep
tides", Academic Press, N.Y. Vol. 1 (1965), Vol. 2
(1966)に記載されている保護基を挙げることができ、
具体例としては、ベンゾイル基、アセチル基、ベンジル
オキシカルボニル基、置換ベンジルオキシカルボニル基
（p-ニトロベンジルオキシカルボニル基、p-メトキシベ
ンジルオキシカルボニル基、etc）、t-ブチルオキシカ
ルボニル基、9-フルオレニルメトキシカルボニル基、p-
トルエンスルホニル基、フタリル基、ホルミル基、トリ
フルオロアセチル基、トリフェニルメチル基、シクロヘ
キシルオキシカルボニル基、o-ニトロフェニルスルフェ
ニル基、t-アシルオキシカルボニル基、イソボルニルオ
キシカルボニル基、ジフェニルホスフィニル基、ジフェ
ニルホスフィノチオイル基、ベンジル基、アルキル基及
びアリルチオカルボニル基、o-ニトロフェノキシアセチ
ル基及びクロルアセチル基、ベンゼンスルホニル基、ジ
ベンジルホスホリル基、トリアルキルシリル基、アリリ
デン基、アセトアセチル基を挙げることができる。

【００４４】Ｒ₁は、アミノ酸数２〜５０のペプチド、
アミノ酸または単結合であるが、アミノ酸としては、グ
リシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、
セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、フェニ
ルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン
酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギ
ニン、リジン、ヒスチジン、プロリン、オルニチンを挙
げることができる。

【００４５】Ｙ₁は、保護基を有してもよいアミノ酸で
あるが、保護基としては、有機化学の分野において通常
用いられている保護基、例えば、生化学実験講座１ タ
ンパク質の化学ＩＶ、日本生化学会編、東京化学同人刊
（１９７７）、実験化学講座２２ 有機合成ＩＶ、日本
化学会編、丸善刊（１９９２）、ペプチド合成の基礎と
実験、泉屋信夫 加藤哲夫 青柳東彦 脇道典著、丸善
刊（１９８５）、“Modification of Proteins" (ed by
Robert E. Feeney, John R. Whitaker), theAmerican
Chemical Society (1982) 、M. Bodanszky, “Principl
es of Peptides Synthesis", Springer-Verlag, Berlin
(1984)、E. Schroder, K. Lubke, “The Peptides", A
cademic Press, N.Y. Vol. 1 (1965), Vol. 2 (1966)に
記載されている保護基を挙げることができ、具体的に
は、カルボキシル基の保護基としては、メチルエステル
基、エチルエステル基、ベンジルエステル基、t-ブチル
エステル基、p-ニトロベンジルエステル基、 N'-置換ヒ
ドラジド基などを挙げることができ、リジン、オルニチ
ン残基中のω-アミノ基の保護基としては、ベンジルオ
キシカルボニル基、p-トルエンスルホニル基、2-クロロ
ベンジルオキシカルボニル基などを挙げることができ、
アルギニン残基中のグアニジノ基の保護基としては、ニ
トロ基、メトキシベンジルオキシカルボニル基、p-トル
エンスルホニル基などを挙げることができ、セリン残
基、チロシン残基等の水酸基を含むアミノ酸残基中の水
酸基の保護基としては、ベンジル基、t-ブチル基などを
挙げることができ、ヒスチジン残基中のイミダゾール基
の保護基としては、ベンジルオキシカルボニル基、ベン
ジルオキシメチル基などを挙げることができ、システイ
ン残基中のメルカプト基の保護基としては、ベンジル
基、トリチル基などを挙げることができ、メチオニン残
基中のチオエーテルの保護基としては、スルホキシドな
どを挙げることができ、トリプトファン残基中のインド
ール基の保護基としては、ホルミル基などを挙げること
ができる。アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バ
リン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、
システイン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシ
ン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、
グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、リジン、ヒス
チジン、プロリン、オルニチンを挙げることができる。

【００４６】Ｒ₁およびＹ₁で表されるアミノ酸、ならび
にＲ₁で表されるペプチドは種々の修飾がなされていて
もよく、そのような修飾の具体例としては、アミノ基の
グアニジル化、スクシニル化、アセチル化、アルギニン
のグアニジノ基のジカルボニル化合物による修飾、カル
ボキシル基のエステル化、システインのチオール基のス
ルフェニルスルホン化、アルキル化、ヒスチジンのイミ
ダゾール基のエトキシカルボニル化、メチオニンのスル
ホニウム塩の生成、セリン、スレオニンのアセチル化、
チロシンのニトロ化、ヨウ素化、トリプトファンのニト
ロフェニルスルホニル化を挙げることができる。

【００４７】Ｒ₁およびＹ₁中のアミノ酸、ならびにＹ₁
がエステルで保護された場合の保護基の少なくとも一つ
が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃで標識されるとよい。好ましくは、膵
外分泌性プロテアーゼが作用するアミノ酸残基が¹³Ｃま
たは¹⁴Ｃで標識されているとよい。本明細書において、
「¹³Ｃまたは¹⁴Ｃで標識する」とは、ある分子に¹³Ｃま
たは¹⁴Ｃを導入することによって目印をつけることをい
い、ある分子の構成炭素を¹³Ｃまたは¹⁴Ｃで置き換える
ことの他に、ある分子に¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む原子団ま
たは分子を共有結合させることも含む。

【００４８】本発明は、また、下記の式(II)で表される
¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩を包含す
る。 Ｘ₂−Ｒ₂−Ｙ₂−Ｚ₁ (II) （式中、Ｘ₂は、水素原子または保護基であり、Ｒ₂は、
アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単結合で
あり、Ｙ₂はアミノ酸であり、Ｚ₁は、保護基を有しても
よいアミノ酸であり、Ｒ₂、Ｙ₂およびＺ₁中のアミノ酸
ならびにＸ₂およびＺ₁が炭素を含有する保護基である場
合の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識
されており、ただし、式(II)で表される化合物から下記
の化合物は除かれる。 L-Ala-L-Pro、L-Gly-L-Leu、L-Gly-L-Phe、L-Val-L-Le
u、L-Leu-L-Leu、L-Tyr-L-Leu、Ac-D-Ala-D-Ala、L-Gly
-L-Gly-OEt、L-Leu-L-Ala-OMe、Ac-L-Gly-L-Pro-OMe、B
oc-L-Leu-L-Ala-OMe、L-Gly-L-Pro-L-Leu、L-Gly-L-Pro
-L-Phe、L-Ala-L-Gly-L-Gly、L-Gly-L-Leu-L-Pro、L-Ph
e-L-Asp-L-Met、L-Gly-L-Leu-L-Pro、Dansyl-L-Tyr-L-V
al-D-Ala、Cbz-L-Gly-L-Leu-L-Ala、L-Thr-L-Leu-L-Asn
-Bzl、Z-L-Pro-L-Pro-L-Gly-OEt、L-Leu-L-Leu-L-Leu-L
-Leu、L-Lys-L-Arg-L-Asp-L-Ser、Ac-L-Leu-L-Ala-L-Al
a-L-Gln(NMe₂)、Ac-L-Leu-L-Ala-L-Ala-L-Gln(NMe₂)-SE
t、L-Tyr-L-Gly-L-Gly-L-Phe-L-LeuおよびL-Tyr-L-Gly-
L-Gly-L-Phe-L-Met（式中、Acはアセチル基、Eｔはエチ
ル基、Meはメチル基、Bocはブチルオキシカルボニル
基、Dansylはダンシル基、Cbzはカルボベンジルオキシ
基、Bzlはベンゾイル基、Zはベンジルオキシカルボニル
基、SEtはエタンチオール基であり、NMe₂はジメチルア
ミノ基である。））

【００４９】式(II)において、Ｘ₂は、水素原子または
保護基であるが、保護基としては、有機化学の分野にお
いて通常用いられている保護基、例えば、生化学実験講
座１タンパク質の化学ＩＶ、日本生化学会編、東京化学
同人刊（１９７７）、実験化学講座２２ 有機合成Ｉ
Ｖ、日本化学会編、丸善刊（１９９２）、ペプチド合成
の基礎と実験、泉屋信夫 加藤哲夫 青柳東彦 脇道典
著、丸善刊（１９８５）、“Modification of Protein
s" (ed by Robert E. Feeney, John R. Whitaker), the
American Chemical Society (1982) 、M. Bodanszky,
“Principles ofPeptides Synthesis", Springer-Verla
g, Berlin (1984)、E. Schroder, K. Lubke, “The Pep
tides", Academic Press, N.Y. Vol. 1 (1965), Vol. 2
(1966)に記載されている保護基を挙げることができ、
具体例としては、ベンゾイル基、アセチル基、ベンジル
オキシカルボニル基、置換ベンジルオキシカルボニル基
（p-ニトロベンジルオキシカルボニル基、p-メトキシベ
ンジルオキシカルボニル基、etc）、t-ブチルオキシカ
ルボニル基、9-フルオレニルメトキシカルボニル基、p-
トルエンスルホニル基、フタリル基、ホルミル基、トリ
フルオロアセチル基、トリフェニルメチル基、シクロヘ
キシルオキシカルボニル基、o-ニトロフェニルスルフェ
ニル基、t-アシルオキシカルボニル基、イソボルニルオ
キシカルボニル基、ジフェニルホスフィニル基、ジフェ
ニルホスフィノチオイル基、ベンジル基、アルキル基及
びアリルチオカルボニル基、o-ニトロフェノキシアセチ
ル基及びクロルアセチル基、ベンゼンスルホニル基、ジ
ベンジルホスホリル基、トリアルキルシリル基、アリリ
デン基、アセトアセチル基を挙げることができる。

【００５０】Ｒ₂は、アミノ酸数２〜５のペプチド、ア
ミノ酸または単結合であるが、アミノ酸としては、グリ
シン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セ
リン、スレオニン、システイン、メチオニン、フェニル
アラニン、チロシン、トリプトファン、アスパラギン
酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギ
ニン、リジン、ヒスチジン、プロリン、オルニチンを挙
げることができる。

【００５１】Ｙ₂はアミノ酸であり、アミノ酸として
は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイ
シン、セリン、スレオニン、システイン、メチオニン、
フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、アスパ
ラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、
アルギニン、リジン、ヒスチジン、プロリン、オルニチ
ンを挙げることができる。

【００５２】Ｚ₁は、保護基を有してもよいアミノ酸で
あるが、保護基としては、有機化学の分野において通常
用いられている保護基、例えば、生化学実験講座１ タ
ンパク質の化学ＩＶ、日本生化学会編、東京化学同人刊
（１９７７）、実験化学講座２２ 有機合成ＩＶ、日本
化学会編、丸善刊（１９９２）、ペプチド合成の基礎と
実験、泉屋信夫 加藤哲夫 青柳東彦 脇道典著、丸善
刊（１９８５）、“Modification of Proteins" (ed by
Robert E. Feeney, John R. Whitaker), theAmerican
Chemical Society (1982) 、M. Bodanszky, “Principl
es of Peptides Synthesis", Springer-Verlag, Berlin
(1984)、E. Schroder, K. Lubke, “The Peptides", A
cademic Press, N.Y. Vol. 1 (1965), Vol. 2 (1966)に
記載されている保護基を挙げることができ、具体的に
は、カルボキシル基の保護基としては、メチルエステル
基、エチルエステル基、ベンジルエステル基、t-ブチル
エステル基、p-ニトロベンジルエステル基、 N'-置換ヒ
ドラジド基などを挙げることができ、リジン、オルニチ
ン残基中のω-アミノ基の保護基としては、ベンジルオ
キシカルボニル基、p-トルエンスルホニル基、2-クロロ
ベンジルオキシカルボニル基などを挙げることができ、
アルギニン残基中のグアニジノ基の保護基としては、ニ
トロ基、メトキシベンジルオキシカルボニル基、p-トル
エンスルホニル基などを挙げることができ、セリン残
基、チロシン残基等の水酸基を含むアミノ酸残基中の水
酸基の保護基としては、ベンジル基、t-ブチル基などを
挙げることができ、ヒスチジン残基中のイミダゾール基
の保護基としては、ベンジルオキシカルボニル基、ベン
ジルオキシメチル基などを挙げることができ、システイ
ン残基中のメルカプト基の保護基としては、ベンジル
基、トリチル基などを挙げることができ、メチオニン残
基中のチオエーテルの保護基としては、スルホキシドな
どを挙げることができ、トリプトファン残基中のインド
ール基の保護基としては、ホルミル基などを挙げること
ができる。アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バ
リン、ロイシン、イソロイシン、セリン、スレオニン、
システイン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシ
ン、トリプトファン、アスパラギン酸、アスパラギン、
グルタミン酸、グルタミン、アルギニン、リジン、ヒス
チジン、プロリン、オルニチンを挙げることができる。

【００５３】Ｒ₂、Ｙ₂およびＺ₁で表されるアミノ酸、
ならびにＲ₂で表されるペプチドは種々の修飾がなされ
ていてもよく、そのような修飾の具体例としては、アミ
ノ基のグアニジル化、スクシニル化、アセチル化、アル
ギニンのグアニジノ基のジカルボニル化合物による修
飾、カルボキシル基のエステル化、システインのチオー
ル基のスルフェニルスルホン化、アルキル化、ヒスチジ
ンのイミダゾール基のエトキシカルボニル化、メチオニ
ンのスルホニウム塩の生成、セリン、スレオニンのアセ
チル化、チロシンのニトロ化、ヨウ素化、トリプトファ
ンのニトロフェニルスルホニル化を挙げることができ
る。

【００５４】Ｒ₂、Ｙ₂およびＺ₁中のアミノ酸、ならび
にＸ₂およびＺ₁が炭素を含有する保護基である場合の保
護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識されて
いる。Ｚ₁は保護基を有してもよい¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−
標識アミノ酸であることが好ましい。

【００５５】本発明の一態様として、式(II)で表される
¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩におい
て、１）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂が単結合である場合、 1-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はD-Ala以外のアミノ酸
であり、 1-ii)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 1-iii)Ｚ₁がL-Pro-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 ２）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸である場合、 ２-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Val以外のアミノ
酸であり、 ２-ii)Ｚ₁がL-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 ２-iii)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外の
アミノ酸であり、

【００５６】３）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸数
２のペプチドである場合、Ｚ₁がSEｔ基を有してもよいL
-Glnであるとき、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸であり、 ４）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂が単結合である場合、 ４-i)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ
酸であり、 ４-ii)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Gly、L-Val、L-L
euおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 ４-iii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミ
ノ酸であり、 ４-iv)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 ４-v)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、

【００５７】５）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸
である場合、 ５-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
酸であり、 ５-ii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
酸であり、 ５-iii)Ｚ₁がL-Glyであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミ
ノ酸であり、 ５-iv)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 ５-v)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
酸であり、 ５-vi)Ｚ₁がL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、

【００５８】６）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸
数２のペプチドである場合、 ６-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 ６-ii)Ｚ₁がL-Serであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
酸であり、 ７）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸数３のペプチ
ドである場合、 ７-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Phe以外のアミノ
酸であり、 ７-ii)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-Phe以外のアミノ
酸である。

【００５９】また、本発明の別の態様として、式(II)で
表される¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩
において、１）Ｘ₂がDansyl、Cbz、AcおよびZからなる
群より選択される保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸数２の
ペプチドまたはアミノ酸である場合、 1-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Val以外のアミノ酸
であり、 1-ii)Ｚ₁がL-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 1-iii)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のア
ミノ酸であり、 1-iv)Ｚ₁がL-Gln(NMe₂)またはL-Gln(NMe₂)-SEtであると
き、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸であり、

【００６０】２）Ｘ₂がAcまたはBocであり、Ｒ₂が単結
合である場合、 2-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はD-Ala以外のアミノ酸
であり、 2-ii)Ｚ₁がL-Pro-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 2-iii)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、

【００６１】３）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸
数２若しくは３のペプチドまたはアミノ酸である場合、 3-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Pro、L-LeuおよびL
-Phe以外のアミノ酸であり、 3-ii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
酸であり、 3-iii)Ｚ₁がL-Glyであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミノ
酸であり、 3-iv)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
酸であり、 3-v)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-AspおよびL-Phe以
外のアミノ酸であり、 3-vi)Ｚ₁がL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
ミノ酸であり、 3-vii)Ｚ₁がL-Serであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
酸であり、

【００６２】４）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂が単結合で
ある場合、 4-i)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸
であり、 4-ii)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Gly、L-Val、L-Le
uおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 4-iii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミノ
酸であり、 4-iv)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
ミノ酸であり、 4-v)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミ
ノ酸である。 式(II)において、Ｘ₂は、Ac、Bz、Boc、Zおよび水素原
子からなる群より選択されることが好ましい。また、式
(II)で表される¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物または
その塩としては、Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂が単結合であ
るものが好ましい。

【００６３】本発明の好ましい一態様においては、(１)
Ｙ₂およびＺ₁のアミノ酸の少なくとも一つが、Argまた
はLysであるか（トリプシンの好適な基質）、(２)Ｙ₂お
よびＺ₁のアミノ酸の少なくとも一つが、芳香族アミノ
酸、Leu、HisまたはMetであるか（キモトリプシンの好
適な基質）、(３)Ｙ₂およびＺ₁のアミノ酸の少なくとも
一つが、中性かつ非芳香族アミノ酸であるか（エラスタ
ーゼの好適な基質）、(４)Ｚ₁のアミノ酸が、Arg、Lys
およびPro以外のアミノ酸であるか（カルボキシペプチ
ダーゼＡの好適な基質）、または(５)Ｚ₁のアミノ酸
が、ArgまたはLysである（カルボキシペプチダーゼＢの
好適な基質）。

【００６４】また、本発明のより好ましい態様において
は、Ｘ₂は、水素原子、ベンゾイル基、アセチル基およ
びt-ブチルオキシカルボニル基からなる群より選択さ
れ、Ｙ ₂は、フェニルアラニン、アラニン、グリシン、
チロシンおよびアルギニンからなる群より選択され、Ｚ
₁は、保護基を有してもよいロイシン、保護基を有して
もよいアラニンおよび保護基を有してもよいグリシンか
らなる群、例えば、ロイシン、アラニン、グリシン、ロ
イシンメチルエステル、ロイシンエチルエステル、アラ
ニンメチルエステル、アラニンエチルエステル、グリシ
ンメチルエステル、ならびにグリシンエチルエステルか
らなる群、より具体的には、¹³Ｃ−および ¹⁴Ｃ−ロイシ
ン、¹³Ｃ−および¹⁴Ｃ−アラニン、¹³Ｃ−および¹⁴Ｃ−
グリシン、 ¹³Ｃ−および¹⁴Ｃ−ロイシンメチルエステ
ル、¹³Ｃ−および¹⁴Ｃ−ロイシンエチルエステル、¹³Ｃ
−および¹⁴Ｃ−アラニンメチルエステル、¹³Ｃ−および
¹⁴Ｃ−アラニンエチルエステル、¹³Ｃ−および¹⁴Ｃ−グ
リシンメチルエステル、ならびに¹³Ｃ−および¹⁴Ｃ−グ
リシンエチルエステルからなる群より選択される。

【００６５】本発明のさらに好ましい態様では、式(II)
で表される¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその
塩は、下記の化合物からなる群より選択される。 (a)Phe-¹³C-Leu、(b)Arg-¹³C-Leu、(c)Bz-Ala-¹³C-Al
a、(d)Bz-Gly-¹³C-Leu、(e)Bz-Phe-¹³C-Gly、(f)Bz-Tyr
-¹³C-Leu、(g)Bz-Phe-¹³C-Leu、(h)Bz-(DL)Phe-¹³C-Le
u、(j)Bz-Arg-¹³C-Leu、(k)Ac-Phe-¹³C-Leu、(l)Ac-Tyr
-¹³C-Leu、(m)Bz-Ala-¹³C-Ala-OMe、(n)Bz-Gly-¹³C-Leu
-OMe、(o)Bz-Phe-¹³C-Gly-OMe、(p)Bz-Phe-¹³C-Leu-OM
e、(q)Bz-(DL)Phe-¹³C-Leu-OMe、(r)Ac-Phe-¹³C-Leu-OM
e、(s)Ac-Tyr-¹³C-Leu-OMe、(t)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gl
y-Phe-¹³C-Leu、(u)Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-¹³C-
Leuおよび(v)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-¹³C-Gly-Phe-Leu

【００６６】上記の式(I) で表される¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ
−標識化合物および薬剤学的に許容できるその塩、なら
びに上記の式(II)で表される¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識化
合物およびその塩は、プロテアーゼの作用を受けた後
に、消化管から吸収されて、代謝作用により脱炭酸さ
れ、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じるものであるとよい。
プロテアーゼは膵外分泌性プロテアーゼであるとよく、
膵外分泌性プロテアーゼとしては、キモトリプシン、ト
リプシン、エラスターゼ、カルボシキペプチダーゼＡお
よびＢに代表されるカルボシキペプチダーゼなどを挙げ
ることができる。

【００６７】キモトリプシンは、チロシン残基、トリプ
トファン残基、フェニルアラニン残基、ロイシン残基、
ヒスチジン残基またはメチオニン残基のカルボキシル末
端側のペプチド結合を特異的に切断し、また、これらの
残基を含むエステルおよびアミドにも作用する。

【００６８】トリプシンは、アルギニン残基、リジン残
基、および人為的な反応で生成したＳ−アミノエチルシ
ステイン残基のカルボキシル基側において、ペプチド結
合の加水分解を触媒する。また、これら３種のアミノ酸
の誘導体ならば、ペプチド結合の代わりに（アリル）ア
ミドやエステル結合をもつ化学合成物をも基質とする。

【００６９】エラスターゼは、電荷のない非芳香族アミ
ノ酸である、アラニン残基、グリシン残基、バリン残
基、ロイシン残基、イソロイシン残基およびメチオニン
残基などのカルボシキル基側のペプチド結合を加水分解
する。人工基質としては、スクシニル−（アラニル）3
−ｐ−ニトロアニリドなどが知られている。カルボキシ
ペプチダーゼＢは、アルギニン、リジンなどの塩基性ア
ミノ酸をカルボシキル基側から順次遊離させる作用を持
つ。

【００７０】カルボキシペプチダーゼＡは、チロシン、
フェニルアラニン、トリプトファン、ロイシン、イソロ
イシン、スレオニン、グルタミン、ヒスチジン、アラニ
ン、バリン、アスパラギン、セリン、リジン、グリシ
ン、アスパラギン酸またはグルタミン酸などの芳香族・
疎水性アミノ酸をカルボシキル基側から順次遊離させる
作用を持つ。

【００７１】上記のようなプロテアーゼの基質特異性を
考慮することによって、膵外分泌機能診断剤への使用に
適した¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩を設
計することができる。上記の¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識化
合物は、市販のアミノ酸を利用して、公知の方法で合成
することができる。例えば、実験化学講座２２ 有機合
成 IV、日本化学会編、丸善刊（１９９２）に記載の方
法により製造することができるが、その一例について、
以下に説明する。

【００７２】¹³Ｃ標識アミノ酸を塩化水素/メタノール
に溶解後還流し、得られたメチルエステルをジクロロメ
タンに懸濁後氷冷撹拌下トリエチルアミンを滴下する。
さらに、Ｎ-ベンゾイル-アミノ酸、HOBt ( 1-Hydroxy-1
H-benzotriazole・H₂O )及びジクロロメタンを添加す
る。次に、ＷＳＣ（1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropy
l)-carbodiimide・HCl）をジクロロメタンに溶解した溶
液を加え、撹拌する。濃縮した後酢酸エチルで抽出し、
1Ｎ-塩酸、5％NaHCO₃、水で洗浄後硫酸マグネシウムで
乾燥し、濃縮乾固することで、または、さらにけん化す
ることで、式(Ｉ)で表される¹³Ｃ標識化合物が得られ
る。

【００７３】上記の¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識化合物は、
塩の形で得ることもできる。塩としては、塩酸、硫酸、
硝酸、リン酸などの無機酸との塩；蟻酸、酢酸、プロピ
オン酸、グリコール酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、
クエン酸、クリフルオロ酢酸などの有機酸との塩；ナト
リウム、カリウムなどのアルカリ金属との塩；カルシウ
ルなどのアルカリ土類金属との塩；アンモニウム、エタ
ノールアミン、トリエチルアミン、ジシクロヘキシルア
ミンなどの有機アミンとの塩などを挙げることができ
る。

【００７４】本発明の膵外分泌機能診断剤を用いる検査
は、少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含むアミノ酸若
しくはペプチドまたは薬剤学的に許容できるその塩を被
験者に投与することにより行う。投与後の血中、尿中、
便中の¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識化合物濃度を測定する検
査も可能であるが、呼気ＣＯ₂ 中の¹³Ｃ濃度あるいは ¹⁴
Ｃ濃度の増加を測定する呼気テストが望ましい。少なく
とも1個の¹³Ｃまたは^{1 4}Ｃを含むアミノ酸若しくはペプ
チドまたは薬剤学的に許容できるその塩を被験者に投与
する際に、試験食等を投与して、膵酵素の分泌を誘起し
ておいてもよい。また、少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴
Ｃを含むアミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許
容できるその塩の複数種を組み合わせて使用してもよ
い。¹³Ｃの場合は具体的には、投与後の呼気ＣＯ₂ 中の
¹³Ｃ濃度を測定し、投与後一定時間（例えば5分、10
分、15分）経過後における呼気ＣＯ₂ 中の¹³Ｃ濃度の増
加率（Δ¹³Ｃ(‰)）、あるいは投与後一定時間までの呼
気ＣＯ₂ 中の¹³Ｃ濃度の増加率（Δ¹³Ｃ(‰)）の経時変
化（立ち上がりの傾き、傾きの変化、ピークの時間等）
のデータから膵外分泌機能の診断を行う。¹⁴Ｃの場合は
具体的には、投与後の呼気ＣＯ₂ 中の¹⁴Ｃ濃度すなわち
放射能を測定し、投与後一定時間（例えば5分、10分、1
5分）経過後における呼気ＣＯ₂ 中の放射能量、あるい
は投与後一定時間までの呼気ＣＯ₂ 中の放射能量の増加
率の経時変化（立ち上がりの傾き、傾きの変化、ピーク
の時間等）のデータから膵外分泌機能の診断を行う。こ
のような検査法は、少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを
含むアミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許容で
きるその塩を被験者に投与すると、この化合物が膵外分
泌性プロテアーゼの作用を受けた後に、消化管から吸収
されて体内の代謝作用により脱炭酸され、¹³ＣＯ₂また
は¹⁴ＣＯ₂を生じるという現象を利用するものである。

【００７５】ここで、呼気ＣＯ₂ 中の¹³Ｃ濃度の測定
は、ガスクロマトグラフ−質量分析法（GC-MS）、赤外
分光法、質量分析法、光電音響分光法、ＮＭＲ（核磁気
共鳴）法等で行うことができる。また、呼気ＣＯ₂ 中の
¹⁴Ｃ濃度すなわち放射能の測定は、呼気を直接あるいは
溶媒等にＣＯ₂ をトラップした後、GM計数管、液体シン
チレーションカウンター、固体シンチレーションカウン
ター、オートラジオグラフィー、電離箱法などで行うこ
とができる。

【００７６】本発明の膵外分泌機能診断剤は、式(I)で
表される¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識化合物または薬剤学的
に許容できるその塩を単独で、あるいは賦形剤または担
体と混合し、経口剤（錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒
剤、液剤等）に製剤化されたものであるとよい。賦形剤
または担体としては、当分野で常套的に使用され、薬剤
学的に許容されるものであればよく、その種類及び組成
は適宜変更される。例えば、液状担体としては水が用い
られる。固体担体としては、ヒドロキシプロピルセルロ
ースなどのセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウ
ムなどの有機酸塩などが使用される。また、凍結乾燥製
剤として用いたりすることもできる。

【００７７】式(I)で表される¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識
化合物または薬剤学的に許容できるその塩の製剤中にお
ける含量は、製剤の種類により異なるが、通常1〜100
重量％、好ましくは50〜100 重量％である。カプセル
剤、錠剤、顆粒剤、粉剤の場合は、式(I)で表される¹³
Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識化合物または薬剤学的に許容でき
るその塩の製剤中における含量は、約10〜100 重量％、
好ましくは50〜100 重量％であり、残部は担体である。

【００７８】本発明の膵外分泌機能診断剤の投与量は、
投与による呼気中の¹³ＣＯ₂または^{1 4}ＣＯ₂の増加を確認
できる量が必要であり、患者の年齢、体重、検査目的に
より異なるが、例えば1回当たりの投与量は成人の場
合、1〜1000mg/kg 体重程度である。以下に、本発明を
実施例により具体的に説明するが、本発明の範囲はこれ
らに何ら影響されることはない。以下の実施例におい
て、三文字法に従って表記したアミノ酸残基は、特にこ
とわらない限り、L体である。

【００７９】

【実施例】〔実施例１〕Ｎ-ベンゾイル-ＤＬ-フェニル
アラニル-¹³Ｃ-Ｌ-ロイシンメチルエステル（Bz-DL-Phe
-(¹³C-Leu)-OMe）の製造 1-¹³Ｃ-Ｌ-ロイシン１ｇ（Masstrace社)を塩化水素/メ
タノールに溶解後還流し、得られた¹³Ｃ-Ｌ-ロイシンメ
チルエステルをジクロロメタン50mlに懸濁後氷冷撹拌下
トリエチルアミン1.08mlを滴下した。さらに、Ｎ-ベン
ゾイル-ＤＬ-フェニルアラニン2.0ｇ、HOBt ( 1-Hydrox
y-1H-benzotriazole・H₂O )2.34ｇ及びジクロロメタン
を50ml添加した。次に、ＷＳＣ（1-Ethyl-3-(3-dimethy
laminopropyl)-carbodiimide・HCl）1.49ｇをジクロロ
メタン100mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間撹拌
その後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶媒に
クロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後酢酸
エチルで抽出し、1Ｎ-塩酸、5％NaHCO₃、水で洗浄後硫
酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Bz-DL-Phe-(¹³C-L
eu)-OMe 2.32ｇを得た。

【００８０】〔実施例２〕Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)とその
ナトリウム塩（Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)・Na）の製造 Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)-OMe 2.32ｇをメタノール100mlに
溶解後氷冷撹拌下で1Ｎ-NaOHを6.4ml滴下し、その後70
℃で2.5時間加熱撹拌した。反応の終了は、展開溶媒に
クロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーで確認した。反応終了後1N-H
Clで中性とした後、濃縮し5％NaHCO₃ に溶解した。酢酸
エチルで洗浄後5%-NaHCO₃ を1N-HClで酸性とし酢酸エチ
ルで抽出した。水洗後硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮
乾固後Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)1.93ｇを得、酢酸エチルで
再結晶した。構造の確認と¹³Ｃの標識位置は、¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲとマススペクトルで行った。

【００８１】¹³Ｃ−ＮＭＲ（重メタノール、300Mz、）
175.8 ｐｐｍ（¹³ＣＯＯＨ） マススペクトル ｍ/ｚ383（Ｍ⁺）、365、224、131、10
5、77 ＬＣ−ＭＳ ｍ/ｚ384 (Ｍ⁺+Ｈ) 、252、224、105 Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)のナトリウム塩は、Bz-DL-Phe-(¹³
C-Leu)を当量の1Ｍ-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥
により得られた。

【００８２】〔実施例３〕Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)のキモ
トリプシンによる分解 Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)をキモトリプシンと反応させて、
キモトリプシンが作用した場合の分解生成物のロイシン
をニンヒドリン反応により定量することで測定した。反
応は、20 mM HEPPS-Na (pH 8.0), 23 mM Bz-DL-Phe-(
¹³C-Leu), 0.16mg/mlキモトリプシン（牛膵由来、Wort
hington biochemical corporation, #1432, Lot 37A90
6）中で 37℃ 15 分間行った。反応後、反応液 100μl
に 50μlのクエン酸バッファー（クエン酸-１水和
物）、 20μl のニンヒドリン溶液（50mg/mlメチルセロ
ソルブ溶液）および 100μl の KCN溶液（0.01 M KCN水
溶液をメチルセロソルブで 50 倍希釈）を加え 100℃で
15 分間加熱した。ニンヒドリン反応液を室温まで冷却
した後、ニンヒドリン反応液 100μl に 150μl の 60
％ (V/V)エタノールを加え撹拌した後波長 570 nm にお
ける吸光度を測定した。なお、Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)を
加えずに全反応を行ったものをブランクとし、スタンダ
ードにはロイシンを用いた。

【００８３】Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)はキモトリプシンと
反応させることで分解されロイシンを生成した。分解の
速度は 1.72 nmole / mg chymotrypsin / min であっ
た。この結果から、Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)がキモトリプ
シンの基質となることが確認できた。

【００８４】〔実施例４〕Ｎ-ベンゾイル-Ｌ-アラニル-
¹³Ｃ-Ｌ-アラニンメチルエステル（Bz-Ala-(¹³C-Ala)-O
Me）の製造 1-¹³Ｃ-Ｌ-アラニン２ｇ（Masstrace社)を塩化水素/メ
タノールに溶解後還流し、得られた¹³Ｃ-Ｌ-アラニンメ
チルエステルをジクロロメタン100mlに懸濁後氷冷撹拌
下トリエチルアミン4.0mlを滴下した。さらに、Ｎ-ベン
ゾイル-Ｌ-アラニン5.6ｇ、HOBt 8.9ｇ及びジクロロメ
タンを100ml添加した。次に、ＷＳＣ 5.6ｇをジクロロ
メタン200mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間撹拌
その後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶媒に
クロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後酢酸
エチルで抽出し、1Ｎ-塩酸、5％NaHCO₃、水で洗浄後硫
酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Bz-Ala-(¹³C-Ala)
-OMe 4.38ｇを得た。

【００８５】〔実施例５〕Bz-Ala-(¹³C-Ala)とそのナト
リウム塩の製造 Bz-Ala-(¹³C-Ala)-OMe 4.38ｇをメタノール100mlに溶解
後氷冷撹拌下で1Ｎ-NaOHを16ml滴下し、その後70℃で2
時間加熱撹拌した。反応の終了は、展開溶媒にクロロホ
ルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィーで確認した。反応終了後1N-HClで中性
とした後、濃縮し5％NaHCO₃ に溶解した。酢酸エチルで
洗浄後5%-NaHCO₃ を1N-HClで酸性とし酢酸エチルで抽出
した。水洗後硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Bz
-Ala-(¹³C-Ala) 2.85ｇを得、酢酸エチルで再結晶し
た。

【００８６】構造の確認と¹³Ｃの標識位置は、¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲとマススペクトルで行った。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（重メタノール、300Mz、） 175.9ｐｐｍ
（¹³ＣＯＯＨ） ＬＣ−ＭＳ ｍ/ｚ266（Ｍ⁺+Ｈ）、176、148、105 Bz-Ala-(¹³C-Ala)のナトリウム塩は、Bz-Ala-(¹³C-Ala)
を当量の1Ｍ-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により
得られた。

【００８７】〔実施例６〕Ｎ-ベンゾイルグリシル-¹³Ｃ
-Ｌ-ロイシンメチルエステル（Bz-Gly-(¹³C-Leu)-OMe）
の製造 1-¹³Ｃ-Ｌ-ロイシン２ｇ（Masstrace社)を塩化水素/メ
タノールに溶解後還流し、得られた¹³Ｃ-Ｌ-ロイシンメ
チルエステルをジクロロメタン100mlに懸濁後氷冷撹拌
下トリエチルアミン2.4mlを滴下した。さらに、Ｎ-ベン
ゾイルグリシン3.0ｇ、HOBt 5.1ｇ及びジクロロメタン
を100ml添加した。次に、ＷＳＣ 3.3ｇをジクロロメタ
ン200mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間撹拌その
後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶媒にクロ
ロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲル薄
層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後酢酸エチ
ルで抽出し、1Ｎ-塩酸、5％NaHCO₃、水で洗浄後硫酸マ
グネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Bz-Gly-(¹³C-Leu)-OMe
4.38ｇを得た。

【００８８】〔実施例７〕Bz-Gly-(¹³C-Leu)とそのナト
リウム塩の製造 Bz-Gly-(¹³C-Leu)-OMe 4.38ｇをメタノール100mlに溶解
後氷冷撹拌下で1Ｎ-NaOHを15ml滴下し、その後70℃で2.
5時間加熱撹拌した。反応の終了は、展開溶媒にクロロ
ホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲル薄層
クロマトグラフィーで確認した。反応終了後1N-HClで中
性とした後、濃縮し5％NaHCO₃ に溶解した。酢酸エチル
で洗浄後5%-NaHCO₃ を1N-HClで酸性とし酢酸エチルで抽
出した。水洗後硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後
Bz-Gly-(¹³C-Leu) 3.83ｇを得、さらに酢酸エチルで再
結晶した。

【００８９】構造の確認と¹³Ｃの標識位置は、¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲとマススペクトルで行った。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（重クロロホルム、300Mz、） 175.5ｐｐ
ｍ（¹³ＣＯＯＨ） マススペクトル ｍ/ｚ293（Ｍ⁺）、275、134、105，77 ＬＣ−ＭＳ ｍ/ｚ294（Ｍ⁺+Ｈ）、162、134、105 Bz-Gly-(¹³C-Leu)のナトリウム塩は、Bz-Gly-(¹³C-Leu)
を当量の1Ｍ-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により
得られた。

【００９０】〔実施例８〕Bz-DL-Phe-(¹³C-Gly)-OMeの
製造 1-¹³Ｃ-グリシン570ｍｇ（Masstrace社)を塩化水素/メ
タノールに溶解後還流し、得られた¹³Ｃ-グリシンメチ
ルエステルをジクロロメタン50mlに懸濁後氷冷撹拌下ト
リエチルアミン1mlを滴下した。さらに、Ｎ-ベンゾイル
-ＤＬ-フェニルアラニン2.0ｇ、HOBt 2.3ｇ及びジクロ
ロメタンを50ml添加した。次に、ＷＳＣ1.41ｇをジクロ
ロメタン100mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間撹
拌その後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶媒
にクロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後酢
酸エチルで抽出し、1Ｎ-塩酸、5％NaHCO₃、水で洗浄後
硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Bz-DL-Phe-(¹³C
-Gly)-OMe2.11ｇを得た。

【００９１】〔実施例９〕Bz-DL-Phe-(¹³C-Gly)とその
ナトリウム塩の製造 Bz-DL-Phe-(¹³C-Gly)-OMe 2.11ｇをメタノール100mlに
溶解後氷冷撹拌下で1Ｎ-NaOHを6.9ml滴下し、その後70
℃で2.5時間加熱撹拌した。反応の終了は、展開溶媒に
クロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーで確認した。反応終了後1N-H
Clで中性とした後、濃縮し5％NaHCO₃ に溶解した。酢酸
エチルで洗浄後5%-NaHCO₃ を1N-HClで酸性とし酢酸エチ
ルで抽出した。水洗後硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮
乾固後Bz-DL-Phe-(¹³C-Gly) 1.3ｇを得た。

【００９２】構造の確認と¹³Ｃの標識位置は、¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲとマススペクトルで行った。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（重メタノール、300Mz、） 179.2 ｐｐ
ｍ（¹³ＣＯＯＨ） マススペクトル ｍ/ｚ327（Ｍ⁺）、309、224、161、10
5、77 ＬＣ−ＭＳ ｍ/ｚ328（Ｍ⁺+Ｈ）、252、224、105 Bz-DL-Phe-(¹³C-Gly)のナトリウム塩は、Bz-DL-Phe-(¹³
C-Gly)を当量の1Ｍ-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥
により得られた。

【００９３】〔実施例１０〕Ｎ-アセチル-Ｌ-フェニル
アラニル-¹³Ｃ-Ｌ-ロイシンメチルエステル（Ac-Phe-(
¹³C-Leu)-OMe）の製造 1-¹³Ｃ-Ｌ-ロイシン1.16ｇ（Masstrace社)を塩化水素/
メタノールに溶解後還流し、得られた¹³Ｃ-Ｌ-ロイシン
メチルエステルをジクロロメタン50mlに懸濁後氷冷撹拌
下トリエチルアミン1.2mlを滴下した。さらに、Ｎ-アセ
チル-Ｌ-フェニルアラニン1.8ｇ、HOBt2.7ｇ及びジクロ
ロメタンを50ml添加した。次に、ＷＳＣ1.7ｇをジクロ
ロメタン100mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間撹
拌その後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶媒
にクロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカ
ゲル薄層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後酢
酸エチルで抽出し、1Ｎ-塩酸、5％NaHCO₃、水で洗浄後
硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Ac-Phe-(¹³C-Le
u)-OMe 2.62ｇを得た。

【００９４】〔実施例１１〕Ac-Phe-(¹³C-Leu)とそのナ
トリウム塩の製造 Ac-Phe-(¹³C-Leu)-OMe 2.62ｇをメタノール100mlに溶解
後氷冷撹拌下で1Ｎ-NaOHを9.3ml滴下し、その後70℃で
2.5時間加熱撹拌した。反応の終了は、展開溶媒にクロ
ロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲル薄
層クロマトグラフィーで確認した。反応終了後1N-HClで
中性とした後、濃縮し5％NaHCO₃ に溶解した。酢酸エチ
ルで洗浄後5%-NaHCO₃ を1N-HClで酸性とし酢酸エチルで
抽出した。水洗後硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固
後Ac-Phe-(¹³C-Leu) 2.44ｇを得、酢酸エチルで再結晶
した。

【００９５】構造の確認と¹³Ｃの標識位置は、¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲとマススペクトルで行った。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（重メタノール、300Mz、）175.9 ｐｐｍ
（¹³ＣＯＯＨ） ＬＣ−ＭＳ ｍ/ｚ 322(Ｍ⁺+Ｈ）、190、162、120 Ac-Phe-(¹³C-Leu)のナトリウム塩は、Ac-Phe-(¹³C-Leu)
を当量の1Ｍ-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により
得られた。

【００９６】〔実施例１２〕Ac-Tyr-(¹³C-Leu)-OMeの製
造 1-¹³Ｃ-Ｌ-ロイシン0.98ｇ（Masstrace社)を塩化水素/
メタノールに溶解後還流し、得られた¹³Ｃ-Ｌ-ロイシン
メチルエステルをジクロロメタン50mlに懸濁後氷冷撹拌
下トリエチルアミン1.0mlを滴下した。さらに、Ｎ-アセ
チル-Ｌ-チロシン1.65ｇ、HOBt 2,26ｇ及びジクロロメ
タンを50ml添加した。次に、ＷＳＣ 1.42ｇをジクロロ
メタン100mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間撹拌
その後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶媒に
クロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後酢酸
エチルで抽出し、1Ｎ-塩酸、5％NaHCO₃、水で洗浄後硫
酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Ac-Tyr-(¹³C-Leu)
-OMe 2.14ｇを得た。

【００９７】〔実施例１３〕Ac-Tyr-(¹³C-Leu)とそのナ
トリウム塩の製造 Ac-Tyr-(¹³C-Leu)-OMe 2.14ｇをメタノール100mlに溶解
後氷冷撹拌下で1Ｎ-NaOHを7.3ml滴下し、その後70℃で
2.5時間加熱撹拌した。反応の終了は、展開溶媒にクロ
ロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲル薄
層クロマトグラフィーで確認した。反応終了後1N-HClで
中性とした後、濃縮し5％NaHCO₃ に溶解した。酢酸エチ
ルで洗浄後5%-NaHCO₃ を1N-HClで酸性とし酢酸エチルで
抽出した。水洗後硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固
後Ac-Tyr-(¹³C-Leu) 1.36ｇを得、酢酸エチルで再結晶
した。

【００９８】構造の確認と¹³Ｃの標識位置は、¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲとマススペクトルで行った。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（重メタノール、300Mz、）175.8 ｐｐｍ
（¹³ＣＯＯＨ） ＬＣ−ＭＳ ｍ/ｚ 338 （Ｍ⁺+Ｈ）、206、178、1
36 Ac-Tyr-(¹³C-Leu)のナトリウム塩は、Ac-Tyr-(¹³C-Leu)
を当量の1Ｍ-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により
得られた。

【００９９】〔実施例１４〕慢性膵炎ラットの作成 １４-１ 作成方法 膵管へのオレイン酸注入により慢性膵炎ラットを作成し
た（Mundlos et al.Pancreas 1:29 (1986)）。一晩絶食
した、5 週齢の Wistar 系雄性ラットをネンブタール腹
腔内投与（50 mg/kg）で麻酔し、腹部を剃毛した後手術
台に仰向けに固定した。イソジン液を塗布し殺菌した
後、腹部を 3〜4 cm正中切開した。十二指腸を膵臓の背
側が表になるように引出し、十二指腸壁に 25G針で穿刺
した。この穴より十二指腸内にポリエチレンカニューレ
（PE-10）を挿入し、さらに、十二指腸乳頭より胆膵管
に 5 mm 程度挿入した。挿入したカニューレをマイクロ
クリップで固定し、さらに、肝臓へのオレイン酸の流入
を防ぐために胆管をマイクロクリップで閉じた。オレイ
ン酸はマイクロシリンジポンプで 50μl を 20μl/min
の速度で注入し、注入終了後オレイン酸が膵臓全体に行
き渡るように 2分間そのまま放置した。マイクロクリッ
プ、カニューレを外し、十二指腸を腹腔内に戻した後、
内皮を絹糸（ネスコスーチャー絹製縫合糸 3-0号、
（株）日本商事）で縫合し、外皮はスキンステープラー
（アポーズ ULC、No.8034-12, 5.7 x 3.8 mm）で縫合し
た。なお、腹部正中切開し十二指腸を引出した処置を行
ったラットを対照とした。手術後のラットは自由摂食・
摂水、23℃、湿度 55 % の条件で使用時まで飼育した。

【０１００】１４-２ 評価 膵管内にオレイン酸注入を行った後 3週間飼育したラッ
ト（オレイン酸注入ラット）の血中アミラーゼを測定
し、さらに、膵臓内のキモトリプシノーゲン含量、およ
びアミラーゼ含量を定量した（図１）。摘出した膵臓に
抽出バッファー（20 mM HEPPS+Na, pH 8.0, 100 mM KC
l, 0.5 % (w/v) Triton X-100）を加え 10mlにメスアッ
プし、超音波破砕器（Bionic 7250、Seiko, Sonics & M
aterials）で破砕後 10,000 xg 20 分間遠心し上清に膵
抽出液を得た。膵抽出液 200μl に1 mg/mlトリプシン
（豚膵由来、Biozyme, code TRY1, batch 0196）（5 mg
/mlトリプシン, 1 mM酢酸バッファ−, pH 3.2を 20 mM
Hepes-Na, pH 8.0 で 5倍に希釈） 200μl を加え 4℃
で 2時間静置し、キモトリプシノーゲンをキモトリプシ
ンに活性化した(Lampel and Kern. Virchows Archiv A
373: 97 (1977))。キモトリプシン反応は、150μl の 2
0 mM HEPPS-Na pH 8.0 に30μl の活性化膵抽出液と 2
0μl の 123.8 mM BT-PABAを加え、37℃ 15 分間行っ
た。反応後 10μl の 100％ (W/V) TCA溶液を加え、15,
000 xgで 5分間遠心した上清中のPABAをPABA測定キット
（エーザイ）を用いて定量した。膵抽出液中のアミラー
ゼ活性は富士ドライケムを用いて測定した。活性の単位
Uは共にμmole release/minを示す。

【０１０１】キモトリプシノーゲン含量は対照ラットで
62.4 U ± 26.2, n = 11 であったのに対しオレイン酸
注入ラットでは 8.1 U± 10.7, n = 17、アミラーゼ含
量は対照ラットで 8681 U ± 5622, n = 11 であったの
に対しオレイン酸注入ラットでは 789 U± 1842, n = 1
7 とどちらの酵素含量もオレイン酸注入ラットで著しく
低下していた（図１）。特にキモトリプシノーゲン含量
の低下が顕著であったことから、対照ラットのキモトリ
プシノーゲン含量の平均 - 2SDを正常下限値とすると、
オレイン酸注入ラット 17 例中 12 例の 70 ％で膵炎が
発症したと評価できる。また、膵炎の急性期に上昇する
血中アミラーゼ濃度は対照ラットで 1930 U ±823, n =
11、オレイン酸注入ラットで 2137 U ± 668, n = 17
と差が無かったことからこの膵炎は慢性膵炎であると言
える。

【０１０２】〔実施例１５〕Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu) 呼気
テスト １５-１ 方法 手術から 3〜4 週間飼育した慢性膵炎ラット、および対
照ラットを午前 9時から絶食し、午後 4時に 3 mg/mlの
BT-PABA(PFD 内服液、（株）エーザイ）を 15mg/kg 経
口投与して、翌日午前 9時まで 16 時間蓄尿した。回収
した尿量と、尿中のPABA濃度をPABA測定キットを用いて
測定し、尿中排泄率を求めた（PFD 試験）。

【０１０３】PFD 試験を終了したラット、すなわち、24
時間絶食したラットに、蒸留水に溶解したBz-DL-Phe-(
¹³C-Leu)・Na（250 mg/kg, 6 ml/kg）を経口投与し、¹³C
-呼気テストを実施した。ラット（9週齢）は無麻酔のま
まマイクロ波照射装置用ラットホルダー内に固定した。
ストロークポンプ [バリアブル・ストロークポンプ VS-
500、（株）柴田科学工業] を用いて呼気を約 100〜300
ml/minの速度で吸引し、そのまま¹³ＣＯ2アナライザー
EX-130S [（株）日本分光] のフローセルに導入した。
ラットホルダーとストロークポンプの間にはパーマピュ
アドライヤー（ MD-050-12P、Perma Pure INC. ）を設
置して呼気中の水蒸気を除去した。炭酸ガス濃度が安定
した状態でいったんラットホルダーからラットを出し、
蒸留水に溶解したBz-DL-Phe-(¹³C-Leu)・Naを、経口投与
用ゾンデを用いて胃内に所定量投与した。

【０１０４】¹³ＣＯ₂アナライザーから出力されるデー
タはＡＤ変換した後パーソナルコンピュータ（Apple Po
wer Macintosh 8500）に取込み、データ処理ソフトウェ
ア Lab VIEW (National Instruments)を用いて 5秒間隔
で 100msec毎 10 点のデータを積算平均し、¹³Ｃatom
%、Δ¹³Ｃ(‰)、炭酸ガス濃度(%)に変換することで連続
測定 ¹³Ｃ−呼気テストを行った。変換したデータはリ
アルタイムで画面表示した後、ハードディスク中に保存
した。吸引呼気中の炭酸ガス濃度は 3± 0.5 %に維持し
た尚、Δ¹³Ｃ(‰)は各時点の呼気ＣＯ₂中の¹³Ｃ濃度(¹³
Ｃ tmin)とＣＯ₂標準ガスの¹³Ｃ濃度(¹³Ｃ std)から下
式により算出した。

【０１０５】

【式１】Δ¹³Ｃ(‰)＝｛(¹³Ｃ tmin-¹³Ｃ 0min)/¹³Ｃ s
td｝×1000

【０１０６】呼気テスト終了後のラットをネンブタール
腹腔内投与（50 mg/kg）で麻酔下で開腹し、全膵臓を摘
出し秤量後、キモトリプシノーゲン含量を測定し、慢性
膵炎発症の確認を行った。

【０１０７】１５-２ 結果 慢性膵炎ラットと対照ラットに Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)・N
aを 250 mg/kg経口投与し、投与後の呼気 CO₂中の¹³CO₂
濃度の経時変化を測定するBz-DL-Phe-(¹³C-Leu)呼気テ
ストを行った（図２）。対照ラットにおいては、投与後
2〜3 分でΔ¹³C（‰）値が増加を始め、増加の度合に
個体差はあるが 15〜20分で 100〜200 ‰のピークに達
しその後漸次減少した。これに対し慢性膵炎ラットでは
1例を除いた 7例で増加の度合が小さく 30 分まで緩や
かに増加を続けた。残る 1例は対照ラットと同じ推移を
したが、ピークの時間が遅れた。投与後 10 分における
Δ¹³C（‰）値は、慢性膵炎ラットで最もΔ¹³C（‰）値
が小さい対照ラットよりも小さかった。したがって、Δ
¹³C（‰）10分値を検査値として用いて、特異度が 100
％になるようにカットオフ値を設定しても、感度は 100
％となる（図３）。一方、同一ラット群に呼気テスト直
前に実施した PFD試験における感度は50％で、Bz-DL-Ph
e-(¹³C-Leu)呼気テストがはるかに優れていた（図
３）。PFD 試験以外の簡易膵外分泌機能検査法の感度は
PFD試験と同等であることが報告されていることから、
Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)呼気テストは最も高感度な簡易膵
外分泌機能検査法と言える。さらに、PFD 試験では 6時
間の蓄尿と大量の飲水という被験者の負担に加えて、そ
の後の分析が必要なために多くの場合はその日に結果を
見ることができないという欠点がある。これに対して、
Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu) 呼気テストではたった 10 分間の
拘束時間で、さらにその場ですぐに結果を知ることがで
きる点でも優れていると言える。

【０１０８】〔実施例１６〕Bz-Ala-(¹³C-Ala) 呼気テ
スト １５-１と同様に Bz-Ala-(¹³C-Ala)・Naを 50 mg/kg 経
口投与し、投与後の呼気 CO₂中の¹³CO₂ 濃度の経時変化
を測定する Bz-Ala-(¹³C-Ala)呼気テストを行った。Δ
¹³C（‰）10分値を検査値として用いて、特異度が 100
％になるようにカットオフ値を設定すると、感度は 88
％であった（図４）。一方、同一ラット群に呼気テスト
直前に実施した PFD試験における感度は 63 ％で、Bz-A
la-(¹³C-Ala) 呼気テストの方が高感度であった（図
４）。さらに、PFD 試験では 6時間の蓄尿と大量の飲水
という被験者の負担に加えて、その後の分析が必要なた
めに多くの場合はその日に結果を見ることができないと
いう欠点がある。これに対して、Bz-Ala-(¹³C-Ala)呼気
テストではたった 10 分間の拘束時間で、さらにその場
ですぐに結果を知ることができる点でも優れていると言
える。

【０１０９】〔実施例１７〕Bz-Gly-(¹³C-Leu)呼気テス
ト １５-１と同様にBz-Gly-(¹³C-Leu)・Naを 50 mg/kg 経口
投与し、投与後の呼気CO₂中の¹³CO₂濃度の経時変化を測
定するBz-Gly-(¹³C-Leu)呼気テストを行った。Δ¹³C
（‰）18分値を検査値として用いて、特異度が 100％に
なるようにカットオフ値を設定すると、感度は 80 ％で
あった（図５）。一方、同一ラット群に呼気テスト直前
に実施した PFD試験における感度は 50 ％で、Bz-Gly-(
¹³C-Leu)呼気テストの方が高感度であった（図５）。さ
らに、PFD 試験では 6時間の蓄尿と大量の飲水という被
験者の負担に加えて、その後の分析が必要なために多く
の場合はその日に結果を見ることができないという欠点
がある。これに対して、Bz-Gly-(¹³C-Leu)呼気テストで
はたった 18 分間の拘束時間で、さらにその場ですぐに
結果を知ることができる点でも優れていると言える。

【０１１０】〔実施例１８〕Bz-L-Phe-(¹³C-Leu)-OMeの
製造 1-¹³C-L-ロイシン 3.02g（Masstrace社)を塩化水素/メ
タノールに溶解後還流し、得られた¹³C-L-ロイシンメチ
ルエステルをジクロロメタン 150mlに懸濁後氷冷撹拌下
トリエチルアミン 3.22mlを滴下した。さらに、N-ベン
ゾイル-L-フェニルアラニン 6.16g、HOBt 7.02g及びジ
クロロメタンを100ml添加した。次に、WSC 4.4gをジク
ロロメタン200mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間
撹拌その後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶
媒にクロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリ
カゲル薄層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後
酢酸エチルで抽出し、1N-塩酸、5% NaHCO₃、水で洗浄後
硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後Bz-L-Phe-(¹³C-
Leu)-OMe 8.36gを得た。

【０１１１】〔実施例１９〕Bz-L-Phe-(¹³C-Leu)とその
ナトリウム塩の製造 Bz-L-Phe-(¹³C-Leu)-OMe 8.36gをメタノール 150mlに溶
解後氷冷撹拌下で1N-NaOHを 23.2ml滴下し、その後70℃
で3.5時間加熱撹拌した。反応の終了は、展開溶媒にク
ロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲル
薄層クロマトグラフィーで確認した。反応終了後1N-HCl
で中性とした後、濃縮し5% NaHCO₃ に溶解した。酢酸エ
チルで洗浄後5%-NaHCO₃ を1N-HClで酸性とし酢酸エチル
で抽出した。水洗後硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮乾
固後Bz-L-Phe-(¹³C-Leu) 7.92gを得、酢酸エチルで再結
晶した。

【０１１２】構造の確認と¹³Cの標識位置は、¹³C-NMRと
マススペクトルで行った。¹³ C-NMR（重メタノール、300MHz、） 175.9 ppm（¹³CO
OH） マススペクトル m/z 383（M⁺）、365、224、131、10
5、77 LC-MS m/z 384 (M⁺+H) 、252、224、105 Bz-L-Phe-(¹³C-Leu)のナトリウム塩は、Bz-L-Phe-(¹³C-
Leu)を当量の1M-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥に
より得られた。

【０１１３】〔実施例２０〕Bz-Tyr-(¹³C-Leu)-OMeの製
造 1-¹³C-L-ロイシン 1.73g（Masstrace社)を塩化水素/メ
タノールに溶解後還流し、得られた¹³C-L-ロイシンメチ
ルエステルをジクロロメタン 100mlに懸濁後氷冷撹拌下
トリエチルアミン 2.00mlを滴下した。さらに、N-ベン
ゾイル-L-チロシン 4.05g、HOBt 4.35g及びジクロロメ
タンを100ml添加した。次に、WSC 2.73gをジクロロメタ
ン 150mlに溶解した溶液を加え、氷冷下で1時間半撹拌
その後室温で一晩撹拌した。反応の終了は、展開溶媒に
クロロホルム：メタノール（95：5）を用いたシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィーで確認した。濃縮した後酢酸
エチルで抽出し、1N-塩酸、5% NaHCO₃、水で洗浄後硫酸
マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後N-ベンゾイル-L-チ
ロシル-¹³C-L-ロイシンメチルエステル 5.5gを得た。

【０１１４】〔実施例２１〕Bz-Tyr-(¹³C-Leu)とそのナ
トリウム塩の製造 N-ベンゾイル-L-チロシル-¹³C-L-ロイシンメチルエステ
ル 5.5gをメタノール150mlに溶解後氷冷撹拌下で1N-NaO
Hを14.6ml滴下し、その後70℃で3.5時間加熱撹拌した。
反応の終了は、展開溶媒にクロロホルム：メタノール
（95：5）を用いたシリカゲル薄層クロマトグラフィー
で確認した。反応終了後1N-HClで中性とした後、濃縮し
5% NaHCO₃ に溶解した。酢酸エチルで洗浄後5%-NaHCO₃
を1N-HClで酸性とし酢酸エチルで抽出した。水洗後硫酸
マグネシウムで乾燥し、濃縮乾固後N-ベンゾイル-L-チ
ロシル-¹³C-L-ロイシン 4.39gを得、酢酸エチルで再結
晶した。

【０１１５】構造の確認と¹³Cの標識位置は、¹³C-NMRと
マススペクトルで行った。¹³ C-NMR（重メタノール、300MHz） 175.9 ppm（¹³COO
H） マススペクトル m/z 399（M⁺）、381、240、147、10
7、105、77 LC-MS m/z 400（M⁺+H）、268、240 N-ベンゾイル-L-チロシル-¹³C-L-ロイシンのナトリウム
塩は、N-ベンゾイル-L-チロシル-¹³C-L-ロイシンを当量
の1M-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により得られ
た。

【０１１６】〔実施例２２〕Arg-(¹³C-Leu)の製造 1-¹³C-L-Leucine 1g（Masstrace社）、p-Toluensulfoni
c acid monohydrate（TosOH・H2O）1.7g、Benzyl alcoho
l（BzlOH）3.7mlをドライベンゼン 10mlに溶解し、ナス
型フラスコ中で還流冷却器をつけたDean-Stark装置を用
いて油浴（110度）で加熱還流させた。反応の進行と共
に発生する水分を分離し、5時間反応させた。反応終了
後、エーテル 15mlと石油エーテル 15mlを加えて結晶化
させ、エタノール-エーテルより再結晶して¹³C-Leu-OBz
lを得た。

【０１１７】Nα-Carbobenzoxy Ng-tosyl arginine（Z-
Arg(Tos)）と等モルの¹³C-Leu-OBzlを乾燥Tetrahydrofu
ran（THF）に溶解し、等モルのHOBt、2倍モルのジメチ
ルアミノピリジン、および1.5倍モルのWSCを加えて、3
時間反応させた。反応終了後、溶媒を減圧留去したの
ち、クロロホルムに溶解しクロロホルム層を10%クエン
酸、水、4%NaHCO₃、水の順に洗浄した。クロロホルム層
をNa₂SO₄上で乾燥させたのち溶媒を留去した。残渣をエ
タノール-エーテルから再結晶し、Z-Arg(Tos)-¹³C-Leu-
OBzlを得た。Z-Arg(Tos)-¹³C-Leu-OBzl 1gをチオアニソ
ール 3.6ml、Trifluoracetic acid（TFA ）1.5ml、Tri
fluoro methyl sulfonic acid（TFMSA）0.6mlに溶解
し、2時間室温で反応させた。溶媒を留去した後、水に
溶解し、アニオン交換樹脂（AG-X8、酢酸型）で処理し
た。得られた溶液を濃縮し、メタノール：水（1：1）で
平衡化させたLH20カラム（2.5cm×60cm）で精製し、Arg
-(¹³C-Leu) 200mgを得た。構造の確認と¹³Ｃの標識位置
は、¹H-NMRと¹³C-NMRで行った。

【０１１８】¹H-NMR（Dimethyl Sulfoxide-D6、400MH
z） 1.073-1.015ppm 6H ： CH-(CH ₃)₂ Leu 1.868-1.690ppm 7H ： CH-(CH₃)₂ Leu、CH-CH ₂-CH
Leu、CH-CH ₂-CH ₂-CH₂ Arg 3.26ppm 2H ： CH ₂-NH-C=NH₂ Arg 3.477ppm ： H₂O 3.649ppm 1H ： NH-CH-COOH Leu 4.2ppm 1H ： NH₂-CH-CONH Arg 7.3-6.8ppm ： グアニジン基 Arg¹³ C-NMR（Dimethyl Sulfoxide-D6、400MHz） 173.3ppm ： NH-CH-(¹³C-COOH) Leu

【０１１９】〔実施例２３〕Phe-(¹³C-Leu)の製造 1-¹³C-L-Leucine 9.96g（Masstrace社）を1N NaOH 75ml
に溶解し、Di-t-butyldicarbonate（Boc₂O）（18.0g）
のアセトン（50ml）溶液を加えた。これにトリエチルア
ミン 5.21mlを滴下し、室温で撹拌した。1時間後、Boc₂
O（9.8g）のアセトン（40ml）溶液を加え、室温で終夜
撹拌した。アセトンを減圧下に留去後、酢酸エチル 500
mlを加えて、6N HClで酸析し、水で洗浄後、無水硫酸ナ
トリウムで乾燥した。乾燥剤を濾去後、これにシクロヘ
キシルアミン（CHA）10mlを加えた。1N HClで洗浄後、
飽和重曹水でBoc-(¹³C-Leu)を抽出し、この水層を6N HC
lで酸性にした後、酢酸エチルで抽出し、水で洗浄後、
無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧濃縮後、残った油
状物をヘキサンに溶かし、これに水 1.2mlを加えて結晶
化し、Boc-(¹³C-Leu)-OH・H₂Oを得た。Boc-(¹³C-Leu)-OH
・H₂O 10gをエタノール(50ml)-水(20ml)に溶かし、蒸留
水 20mlに溶解した炭酸セシウム 6.52gを加えた。減圧
濃縮後、エタノール、トルエンを加えて残存する水を共
沸で除き、ゲル状物を得た。これをDimethylformaide
（DMF）300mlに懸濁させ、室温撹拌下臭化ベンジル 5.2
mlを滴下した。室温で45分間撹拌した後、溶媒を減圧下
に留去した。酢酸エチルを加えて、水で洗浄した。無水
硫酸ナトリウムで乾燥した後、酢酸エチルを減圧下に留
去し、油状物を得た。これにTFA 59mlを加えて、室温で
40分撹拌した。p-トルエンスルホン酸一水和物 8.37gを
加えてから、TFAを減圧下に留去した。残渣にジイソプ
ロピルエーテルを加えて結晶化し、TosOH・H-(¹³C-Leu)-
OBzlを得た。TosOH・H-(¹³C-Leu)-OBzl 7.89g、N-t-Boc-
L-phenylalanine（Boc-Phe）5.57gおよびHOBt 2.97gをD
MF 80mlに溶かし、氷冷下水溶性カルボジイミド（WSCD:
1-Ethyl-3-(3-Dimethylaminopropyl)-Carbodiimide）4.
03mlを滴下後、室温で3時間撹拌した。酢酸エチルと氷
水を加えて分液後、有機層を飽和重曹水、水、0.1N HC
l、水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。酢酸
エチルを減圧留去後、ヘキサンを加えて結晶化し、Boc-
Phe-(¹³C-Leu)-OBzlを得た。Boc-Phe-(¹³C-Leu)-OBzl
5.2gを酢酸 10mlに溶かし、5% Palladium carbon（Pd-
C）500mgを加えて、室温で撹拌しながら、水素ガスを1
時間吹き込んだ。触媒を濾去した後、母液を約10mlまで
減圧濃縮した。氷冷下、これに4.6N 塩酸/ジオキサン7.
23mlを加えて10分間撹拌後、室温でさらに1時間撹拌し
た。減圧濃縮後、エーテルを加えて固化し、濾取した
後、エーテルで洗浄した。これを蒸留水 100mlに溶か
し、メンブランフィルターで不溶物を濾去した後、凍結
乾燥した。これをRP-HPLC（YMC-ODS(10μm)、30mm×250
mm、20ml/min、aq. CH₃CN(0.05% 塩酸)）（5%-5%-20
%、0-15-75分）で精製し、主分画を凍結乾燥し、Phe-(
¹³C-Leu) 2.84gを得た。

【０１２０】構造の確認と¹³Cの標識位置は、¹³C-NMRと
質量分析、アミノ酸分析で行った。¹³ C-NMR（DMSO-d6、270MHz） 174.3 ppm（¹³COOH） MALD-MS m/z 280.20（M⁺+H） アミノ酸分析 Phenylalanine:1.00、Leucine:1.01
（水解条件 6N HCl、110℃、22hrs）

【０１２１】〔実施例２４〕Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-P
he-(¹³C-Leu)とそのナトリウム塩の製造 N-t-Boc-phenacyl-L-alanine（Boc-Ala-OPac）33.8gに
4.6N HCl/Dioxane溶液9.6mlを加えて室温で40分間撹拌
した。ジエチルエーテルを加えて固化後、固体を濾取
し、減圧下で乾燥した。これをジクロロメタン 100mlに
懸濁し、N-t-Boc-L-alanine（Boc-Ala）18.9gを加えた
後、0℃に冷却した。WSCD 19.2mlを加えた後、室温で1.
5時間撹拌した。減圧濃縮後、残渣を酢酸エチル/水に溶
解し、有機層を水、1N HCl、水で洗浄後、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。酢酸エチルを減圧下に留去後、ジイ
ソプロピルエーテルを加えて結晶化し、これを濾取し
た。アセトン-エーテル-ジイソプロピルエーテルで再結
晶し、Boc-Ala-Ala-OPacを得た。

【０１２２】Boc-Ala-Ala-OPac 15.1gにTFA 88.8mlを加
えて室温で50分間撹拌した。減圧濃縮後、4.6N HCl/Dio
xane溶液 11.3mlを加えた。ジエチルエーテル-ジイソプ
ロピルエーテルを加えて固化し、濾取した後、減圧下で
乾燥した。これをDMF 100mlに溶かし、Boc-Ala 7.95g、
HOBt 5.95gを加えた。0℃に冷却して、WSCD 8.1mlを加
えた後、室温で4時間撹拌した。反応溶液を冷却後、水
を加えて析出した固体を濾取した。クロロホルム/メタ
ノール（3：1）に溶かし、有機層を水洗した後、そのま
ま減圧濃縮し、エーテルを加えて結晶化し、Boc-Ala-Al
a-Ala-OPacを得た。

【０１２３】Boc-Ala-Ala-Ala-OPac 8.99gをジクロロメ
タン/トリフルオロエタノール（TFE）（3：1）50mlに溶
解し、これに酢酸 100mlを加えた後、亜鉛粉末 26.2gを
加えて、35℃で1時間激しく撹拌した。不溶物を濾去し
た後、減圧濃縮した。酢酸エチルを加えて、水で洗浄
後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。酢酸エチルを減圧
下に留去し、残渣にエーテルを加えて結晶化し、Boc-Al
a-Ala-Ala-OHを得た。

【０１２４】1-¹³C-L-Leucine 9.96g（Masstrace社）を
1N NaOH 75mlに溶かし、Boc₂O（18g）のアセトン（50m
l）溶液を加えた。これにトリエチルアミン 5.21mlを滴
下し、室温で撹拌した。1時間後、Boc₂O（9.8g）のアセ
トン（40ml）溶液を加え、室温で終夜撹拌した。アセト
ンを減圧下に留去後、酢酸エチル 500mlを加えて、6NHC
lで酸析し、水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。乾燥剤を濾去後、これにCHA 10mlを加えた。1N HCl
で洗浄後、飽和重曹水でBoc-(¹³C-Leu)を抽出し、この
水層を6N HClで酸性にした後、酢酸エチルで抽出し、水
で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧濃縮
後、残った油状物をヘキサンに溶かし、これに水 1.2ml
を加えて結晶化し、Boc-(¹³C-Leu)-OH・H₂Oを得た。

【０１２５】Boc-(¹³C-Leu)-OH・H₂O 10gをエタノール(5
0ml)-水(20ml)に溶かし、蒸留水 20mlに溶解した炭酸セ
シウム 6.52gを加えた。減圧濃縮後、エタノール、トル
エンを加えて残存する水を共沸で除き、ゲル状物を得
た。これをDMF 300mlに懸濁させ、室温撹拌下臭化ベン
ジル 5.2mlを滴下した。室温で45分間撹拌した後、溶媒
を減圧下に留去した。酢酸エチルを加えて、水で洗浄し
た。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、酢酸エチルを減
圧下に留去し、油状物を得た。これにTFA 59mlを加え
て、室温で40分撹拌した。p-トルエンスルホン酸一水和
物 8.37gを加えてから、TFAを減圧下に留去した。残渣
にジイソプロピルエーテルを加えて結晶化し、TosOH・H-
(¹³C-Leu)-OBzlを得た。

【０１２６】TosOH・H-(¹³C-Leu)-OBzl 7.89g、Boc-Phe
5.57gおよびHOBt 2.97gをDMF 80mlに溶かし、氷冷下WSC
D 4.03mlを滴下後、室温で3時間撹拌した。酢酸エチル
と氷水を加えて分液後、有機層を飽和重曹水、水、0.1N
HCl、水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。酢
酸エチルを減圧留去後、ヘキサンを加えて結晶化し、Bo
c-Phe-(¹³C-Leu)-OBzlを得た。

【０１２７】Boc-Phe-(¹³C-Leu)-OBzl 3.71gにTFA 17.5
mlを加えて、室温で40分撹拌した後、これを減圧濃縮し
た。4.6N HCl/Dioxane 2.2mlを加えた後、ジイソプロピ
ルエーテルを加えて結晶化した。濾取し、減圧乾燥後、
DMF 50mlに溶かし、Boc-Ala-Gly-OH・H₂O 2.13g、HOBt
1.15gを加えた。氷冷下、WSCD 1.56mlを滴下後、室温で
3時間撹拌した。反応溶液を冷却後、析出した固体を濾
取し、水洗した。これを酢酸エチルに溶かし、無水硫酸
ナトリウムで乾燥した。減圧濃縮後、ジイソプロピルエ
ーテルで結晶化し、Boc-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)-OBzlを
得た。

【０１２８】Boc-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)-OBzl 3.59gに
TFA 22.2mlを加えて室温で45分間撹拌した。減圧濃縮
後、4.6N HCl/Dioxane 1.7mlを加え、ジイソプロピルエ
ーテルで固化、濾取した。これをDMF 50mlに溶解し、Bo
c-Ala-Ala-Ala-OH 2.03g、3-Hydroxy-4-oxo-3,4-dihydr
o-1,2,3-benzotriazine（HOObt）1.06gを加えた。氷冷
下WSCD 1.19mlを滴下後、室温で4時間撹拌した。反応溶
液を冷却後、水を加えて析出した固体を濾取し、水洗し
た。メタノールに懸濁させ、濾取した後、減圧下乾燥し
た。クロロホルム/トリフルオロエタノール 100mlに溶
かし、不純物を濾去した後、減圧下に溶媒を留去して、
残渣にエーテルを加えて濾取し、Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-
Gly-Phe-(¹³C-Leu)-OBzlを得た。

【０１２９】Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)-
OBzl 2.68gにTFA 19mlを加えて室温で45分間撹拌した。
減圧濃縮後、エーテルを加えて固化後、濾取した。これ
をDMF 20mlに溶かし、Benzoyl 1-hydroxysuccinimide
（Bz-ONSu）0.80gを加えた。トリエチルアミン 0.5mlを
滴下後、室温で1時間撹拌した。DMF 20mlを追加し、ト
リエチルアミンを加えてpH6に調整し、さらに3時間室温
で撹拌した。反応溶液を冷却後、水を加えて析出した固
体を濾取し、水洗した。メタノールに懸濁させ、濾取
し、Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)-OBzlを得
た。

【０１３０】Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)-O
Bzl 1.63gをジクロロメタン/ヘキサフルオロイソプロピ
ルアルコール（3：1）80mlに溶かし、水/メタノールに
懸濁した5% パラジウム炭素 0.32gを加えて、27℃で撹
拌しながら水素ガスを導入し、4時間撹拌した。粉末濾
紙を用いて触媒を濾去した後、濾液を減圧濃縮した。こ
れに水を加えて固化し、濾取後、水洗した。メタノール
に懸濁させ、濾取した後、減圧下乾燥した。これをヘキ
サフルオロイソプロピルアルコール 50mlに溶かし、減
圧濃縮して、残渣に酢酸エチルを加えて結晶化し、Bz-A
la-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)1.19gを得た。

【０１３１】構造の確認と¹³Cの標識位置は、¹³C-NMRと
質量分析、アミノ酸分析で行った。¹³ C-NMR（DMSO-d6、270MHz） 173.8 ppm（¹³COOH） PD-MS m/z 725.3（M⁺+H）、748.2（M⁺+Na）、764.4（M
⁺+K） アミノ酸分析 Phenylalanine:1.00、Glycine:1.08、Al
anine:4.09、Leucine:1.04 （水解条件 6N HCl、110
℃、22hrs） Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)のナトリウム塩
は、Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)を当量の1M
-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により得られた。

【０１３２】〔実施例２５〕Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-
Phe-(¹³C-Leu)とそのナトリウム塩の製造 実施例２４と同様にして、Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Ph
e-(¹³C-Leu)-OBzlを得た。Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Ph
e-(¹³C-Leu)-OBzl 1.62gをジクロロメタン/ヘキサフル
オロイソプロピルアルコール（3：1）40mlに溶かし、水
-メタノールに懸濁した5%パラジウム炭素 0.16gを加え
て、27℃で攪拌しながら水素ガスを1.5時間導入した。
粉末濾紙を用いて触媒を濾去した後、濾液を減圧濃縮し
た。これにアセトニトリルを加えて固化し、濾取した。
減圧下で乾燥後、ヘキサフルオロイソプロピルアルコー
ル 30mlに溶かし、不溶物を濾去した。減圧濃縮して、
残渣に酢酸エチルを加えて析出したゲル状物を濾取し、
Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu) 1.56gを得
た。

【０１３３】構造の確認と¹³Cの標識位置は、¹³C-NMRと
質量分析、アミノ酸分析で行った。¹³ C-NMR（DMSO-d6、270MHz） 173.7 ppm（¹³COOH） PD-MS m/z 721.7（M⁺+H）、743.9（M⁺+Na）、759.9（M
⁺+K） アミノ酸分析 Phenylalanine:1.00、Glycine:1.09、Al
anine:4.07、Leucine:1.04 （水解条件 6N HCl、110
℃、22hrs） Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)のナトリウム
塩は、Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-(¹³C-Leu)を当量
の1M-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により得られ
た。

【０１３４】〔実施例２６〕Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C-
Gly)-Phe-Leuとそのナトリウム塩の製造 1-¹³C-Glycine 5g（Masstrace社）を水酸化ナトリウム
（2.56g）水溶液（17.5ml）に溶かし、トリエチルアミ
ン 3.65mlを加えた後、Boc₂O（15.1ml）のアセトン（8m
l）溶液を加えて、室温で17時間撹拌した。減圧濃縮
後、水層にクエン酸を加えてpH4に調整、食塩を加えて
塩析して、酢酸エチルで抽出した。そのまま硫酸マグネ
シウムで乾燥後、乾燥剤を濾去して、濾液にCHA 6.76ml
を加えてから終夜冷蔵庫に静置した。析出した結晶を濾
取し、Boc-(¹³C-Gly)-OH・CHAを得た。

【０１３５】Boc-(¹³C-Gly)-OH・CHA 8gをTHF 50mlに懸
濁し、これに4.6N HCl/Dioxane 6.32mlを加えて、超音
波洗浄器で充分に破砕した後、エーテルを加えて析出し
た固体を濾去した。濾液を減圧濃縮後、残渣にエーテル
を加えて不溶物を濾去した後、減圧濃縮した。残渣をヘ
キサンで洗浄、濾取し、Boc-(¹³C-Gly)-OHを得た。

【０１３６】Boc-Phe 5.31g、TosOH・H-Leu-OBzl 7.87
g、HOBt 2.84gをDMF 40mlに溶解し、氷冷下WSCD 3.72ml
を加えてから、30分間撹拌後、さらに室温で2.5時間撹
拌した。減圧濃縮後、酢酸エチルを加えて、飽和重曹
水、飽和食塩水、10% クエン酸水溶液、飽和食塩水で順
次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濃縮後、
4.6N HCl/Dioxane 43mlを加えて、室温で30分間放置し
た。減圧濃縮後、エーテルを加えて析出した固体を濾取
し、HCl・H-Phe-Leu-OBzlを得た。

【０１３７】Boc-(¹³C-Gly)-OH 3.52g、HCl・H-Phe-Leu-
OBzl 8.88g、HOBt 2.70gをDMF 40mlに溶解し、氷冷下WS
CD 3.54mlを加えて30分間撹拌後、室温でさらに14時間
撹拌した。減圧濃縮後、酢酸エチルに溶かし、飽和重曹
水、飽和食塩水、10% クエン酸水溶液、飽和食塩水で順
次洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧濃縮後、
Boc-(¹³C-Gly)-Phe-Leu-OBzlを得た。

【０１３８】Boc-(¹³C-Gly)-Phe-Leu-OBzl 10.4gに4.6N
HCl/Dioxane 42.8mlを加えて室温で45分間放置した。
減圧濃縮後、油状物を得た。この油状物をDMF 40mlに溶
かし、Boc-Ala 3.74g、HOBt 2.66gを加えた後、氷冷下W
SCD 3.49mlを加えて30分間撹拌後、室温でさらに16時間
撹拌した。減圧濃縮後、酢酸エチルに溶かし、飽和重曹
水、飽和食塩水、10% クエン酸水溶液、飽和食塩水で洗
浄した。有機層を減圧濃縮し、残渣をジイソプロピルエ
ーテルで洗浄し、濾取し、Boc-Ala-(¹³C-Gly)-Phe-Leu-
OBzlを得た。

【０１３９】実施例２４と同様にして、Boc-Ala-Ala-Al
a-OHを得た。Boc-Ala-(¹³C-Gly)-Phe-Leu-OBzl 3.59gに
TFA 22.2mlを加えて室温で45分間放置した。減圧濃縮
後、4.6N HCl/Dioxane 1.7mlを加え、ジイソプロピルエ
ーテルを加えて固化し、濾取、乾燥した。これをDMF 50
mlに溶かし、Boc-Ala-Ala-Ala-OH 2.03g、HOObt 1.06g
を加えた後、氷冷下WSCD 1.19mlを加えて30分間撹拌
後、室温で14時間撹拌した。反応溶液を冷却後、水を加
えて析出したゲルを濾取し、Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C
-Gly)-Phe-Leu-OBzlを得た。

【０１４０】Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C-Gly)-Phe-Leu-
OBzl 2.00g、アニソール 1.34mlの懸濁液に、ドライア
イス-メタノール浴冷却撹拌下、無水フッ化水素 12mlを
導入した。これを-5℃に冷却しながら1時間撹拌後、こ
の温度でフッ化水素を留去し、残渣にエーテルを加えて
析出した固体を濾取した。これをDMF-水（9：1）40mlに
懸濁させ、Bz-ONSu 704mg、トリエチルアミン 1.03mlを
加えて室温で6時間撹拌した。DMF-水（9：1）40mlを追
加して、室温で終夜撹拌した。さらにBz-ONSu541mgを追
加して室温で一晩撹拌した。減圧濃縮し、残渣に酢酸エ
チルを加えて、超音波洗浄器で充分に破砕し、濾取し、
Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C-Gly)-Phe-Leu 1.53gを得た。

【０１４１】構造の確認と¹³Cの標識位置は、¹³C-NMRと
質量分析、アミノ酸分析で行った。¹³ C-NMR（DMSO-d6、270MHz） 168.2 ppm（¹³COOH） PD-MS m/z 725.5（M⁺+H）、747.8（M⁺+Na）、764.3（M
⁺+K） アミノ酸分析 Phenylalanine:1.00、Glycine:1.14、Al
anine:4.25、Leucine:1.07 （水解条件 6N HCl、110
℃、22hrs） Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C-Gly)-Phe-Leuのナトリウム塩
は、Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C-Gly)-Phe-Leuを当量の1M
-炭酸ナトリウムで中和し、凍結乾燥により得られた。

【０１４２】〔実施例２７〕Bz-Tyr-O-(¹³C-Et)の製造 N-t-Boc-O-benzyl-L-Tyrosine 5.31g、1,2-¹³C-エタノ
ール 3.5g（Masstrace社）をDMF 30mlに溶解し、HOBt
2.32gを加え、氷冷下でWSCD 3.14mlを滴下後、室温で4
時間撹拌した。これに酢酸エチルを加え、水、飽和重曹
水、飽和食塩水、1N HCl、飽和食塩水で順次洗浄後、無
水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で留去し、
-10℃冷却下、得られた無色油状物にTFA 20mlを加えて1
0分間撹拌後、室温で50分間撹拌した。減圧濃縮後、4.6
N HCl/Dioxane 3.73mlを加え、これにジイソプロピルエ
ーテルを加えて固化後、濾取し、ジイソプロピルエーテ
ルでさらに洗浄した。これをDMF 50mlに溶かし、-10℃
冷却下、塩化ベンゾイル1.99ml、トリエチルアミン 4.0
0mlを加えて30分間撹拌後、室温で3時間撹拌した。酢酸
エチルを加え、飽和食塩水、飽和重曹水、飽和食塩水、
1N HCl、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。減圧下に溶媒を留去後、残渣をエーテルで
洗浄し、減圧乾燥した。これをメタノールから再結晶
し、Bz-Tyr(Bzl)-O-(¹³C-Et)を得た。Bz-Tyr(Bzl)-O-(
¹³C-Et) 800mgを酢酸 30mlに溶解し、パラジウム-黒 16
00mgを加えて、室温で激しく撹拌しながら、水素ガスを
6時間導入した。水素ガスを止め、室温で終夜撹拌した
後、粉末濾紙を用いて、触媒を濾去後、減圧下に酢酸を
留去した。これにヘキサンを加えて、減圧濃縮し、無色
固体を得た。水を加えて、上清をデカンテーションして
除く操作を繰り返した後、20%アセトニトリル水溶液に
溶かして、凍結乾燥した。これを、RP-HPLC（YMCA-323
ODS、30×250mm、20-50% aq. CH₃CN(0.1% TFA含有)(60
分),流速20ml/min）で主画分をとり、凍結乾燥し、Bz-T
yr-O-(¹³C-Et) 350mgを得た。構造の確認と¹³Cの標識位
置は、¹³C-NMRと質量分析で行った。¹³ C-NMR（CDCl₃、270MHz） 14.2 ppm（¹³CH₃）、61.6
ppm（¹³CH₂） PD-MS m/z 316.2（M⁺+H）

【０１４３】〔実施例２８〕Bz-Arg- (¹³C-Leu)・HClの
製造 実施例２４と同様にしてTosOH・H-(¹³C-Leu)-OBzlを得
た。 TosOH・H-(¹³C-Leu)-OBzl 18.1g、N-t-Boc-argini
ne hydrochloride monohydrate（Boc-Arg・HCl・H₂O）1
4.5gおよびHOBt 5.95gをDMF 130mlに溶かし、-20℃で冷
却攪拌下WSCD 8.4mlを加えた後、室温で3.5時間攪拌し
た。DMFを留去した後、酢酸エチルを加えて、飽和重曹
水、飽和食塩水、0.1N塩酸水、飽和食塩水で順次洗浄し
た。無水硫酸ナトリウムで乾燥した後、酢酸エチルを減
圧下に留去した。ヘキサンを加えて固化後、濾取し、ヘ
キサン洗浄した後、減圧下で乾燥した。得られた粗結晶
をアセトニトリル 50mlに溶かした後、ジイソプロピル
エーテルを加えて結晶化し、Boc-Arg-(¹³C-Leu)-OBzl・
TosOHを得た。Boc-Arg-(¹³C-Leu)-OBzl・TosOH 24.8gに
TFA 50mlを加えて室温出30分間攪拌した。減圧濃縮後、
4.6N HCl/Dioxane 20mlを加え、さらにエーテルを加え
て固化後、濾取し、減圧乾燥した。得られた塩酸塩に、
安息香酸 5.12gおよびHOBt 5.67gを加えて、DMF 110ml
に溶かし、-20℃で冷却攪拌下WSCD 7.7mlを加えた後、
室温で15時間攪拌した。反応液を濃縮し、酢酸エチルを
加えて、0.1N塩酸、飽和食塩水、飽和重曹水で順次洗浄
した。結晶を濾取し、酢酸エチル、水で順次洗浄後、酢
酸に溶かし、エーテルを加え、無色油状物を得た。これ
を酢酸 250mlに溶かし、パラジウム-炭素 3gを加えて、
室温で攪拌しながら、水素ガスを2時間吹き込んだ。触
媒を濾去後、酢酸を留去し、残渣に4.6N HCl/Dioxane 9
mlを加えた。ジイソプロピルエーテルを加えて結晶化
し、Bz-Arg-(¹³C-Leu)・HCl 16.4gを得た。構造の確認
と¹³Cの標識位置は、¹³C-NMRと質量分析、アミノ酸分析
で行った。¹³ C-NMR（D₂O、270MHz） 177.5 ppm（¹³COOH） ESI-MS m/z 393.2（M⁺+H） アミノ酸分析 Arginine:1.00、 Leucine:1.02 （水解
条件 6N HCl、110℃、22hrs）

【０１４４】〔実施例２９〕 Bz-L-Phe-(¹³C-Leu) 呼気
テスト 実施例１５-１と同様にして、慢性膵炎ラット（n=4）お
よび健常ラット（n=4）にBz-L-Phe-(¹³C-Leu)・Naを250m
g/kg経口投与し、投与後の呼気 CO₂中の¹³CO₂濃度の増
加率（Δ¹³C(‰)）を測定するBz-L-Phe-(¹³C-Leu)呼気
テストを行った。投与後10分のΔ¹³C(‰)値は、慢性膵
炎ラットで6.97±6.09‰、健常ラットで115.02±71.26
‰であり、慢性膵炎ラットは健常ラットに比べ、有意
（ p ＜ 0.05(ANOVA with Fischer LSD)）に小さかった
（表１）。

【０１４５】

【表１】

【０１４６】〔実施例３０〕Bz-Tyr-(¹³C-Leu) 呼気テ
スト 実施例１５-１と同様にして、慢性膵炎ラット（n=4）お
よび健常ラット（n=4）にBz-Tyr-(¹³C-Leu)・Naを250mg/
kg経口投与し、投与後の呼気 CO₂中の¹³CO₂濃度の増加
率（Δ¹³C(‰)）を測定するBz-Tyr-(¹³C-Leu)呼気テス
トを行った。投与後20分のΔ¹³C(‰)値は、慢性膵炎ラ
ットで3.66±3.24‰、健常ラットで69.53±32.50‰であ
り、慢性膵炎ラットは健常ラットに比べ、有意（ p ＜
0.05 (ANOVA with Fischer LSD)）に小さかった（表
２）。

【０１４７】

【表２】

【０１４８】〔実施例３１〕Arg-(¹³C-Leu) 呼気テスト 実施例１５-１と同様にして、慢性膵炎ラット（n=4）お
よび健常ラット（n=4）にArg-(¹³C-Leu)を30mg/kg経口
投与し、投与後の呼気 CO₂中の¹³CO₂ 濃度の増加率（Δ
¹³C(‰)）を測定するArg-(¹³C-Leu)呼気テストを行っ
た。投与後30分のΔ¹³C(‰)値は、慢性膵炎ラットで4.3
7±1.83‰、健常ラットで12.37±2.26‰であり、慢性膵
炎ラットは健常ラットに比べ、有意（ p ＜ 0.01 (ANOV
A with Fischer LSD)）に小さかった（表３）。

【０１４９】

【表３】

【０１５０】〔実施例３２〕Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C-
Gly)-Phe-Leu 呼気テスト 実施例１５-１と同様にして、慢性膵炎ラット（n=2）お
よび健常ラット（n=2）にBz-Ala-Ala-Ala-Ala-(¹³C-Gl
y)-Phe-Leu・Naを420mg/kg経口投与し、投与後の呼気 CO
₂中の¹³CO₂ 濃度の増加率（Δ¹³C(‰)）を測定するBz-A
la-Ala-Ala-Ala-(¹³C-Gly)-Phe-Leu呼気テストを行っ
た。投与後15分のΔ¹³C(‰)値（平均値）は、慢性膵炎
ラットで0.61‰、健常ラットで33.32‰であり、慢性膵
炎ラットは健常ラットに比べ小さかった（表４）。

【０１５１】

【表４】

【０１５２】〔実施例３３〕 Bz-Arg- (¹³C-Leu) 呼気
テスト 実施例１５-１と同様にして、慢性膵炎ラット（n=3）お
よび健常ラット（n=3）にBz-Arg- (¹³C-Leu)・HClを100
mg/kg経口投与し、投与後の呼気 CO₂中の¹³CO ₂ 濃度の
増加率（Δ¹³C(‰)）を測定するBz-Arg- (¹³C-Leu)呼気
テストを行った。投与後20分のΔ¹³C(‰)値は、慢性膵
炎ラットで3.05±6.97‰、健常ラットで68.77±12.10‰
であり、慢性膵炎ラットは健常ラットに比べ、有意（ p
＜ 0.01(ANOVA with Fischer LSD)）に小さかった（表
５）。

【０１５３】

【表５】

【０１５４】〔製剤例１〕 （内服液剤） Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)・Na 5重量部に対し、精製水を加え
全量を100重量部として、これを溶解後ミリポアフィル
ターを用いて除菌濾過した。この濾液をバイアル瓶にと
り、密封して内服液剤を得た。

【０１５５】

【発明の効果】本発明により、被験者への負担が小さ
く、かつ結果が即時に精度よく得られる感度の高い膵外
分泌機能検査が可能となった。これまでの簡易膵外分泌
機能検査は感度が低いことから膵炎のスクリーニング検
査としての使用頻度は落ちてきており、繰返し検査がど
うしても必要な膵炎の予後のフォローアップの際に利用
されるのが一般的になってきている。しかし、感度の高
い簡易膵外分泌機能検査法であれば、集団検診や人間ド
ッグでの膵炎のスクリーニング検査に頻繁に利用され
る。さらに、慢性膵炎の重症度の判定、未だに死亡率の
高い（30％）劇症膵炎の重症化予知、膵炎の成因の診
断、膵臓癌の早期診断にも適用範囲が広がる。また、一
般外来患者の診察において、膵炎を否定する診断法とし
ても有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】オレイン酸注入群、および、対照群の膵臓中の
キモトリプシノーゲン含量とアミラーゼ含量。5週齢の
Wistar系雄性ラットの膵管内にオレイン酸50μlを注入
する処置を行ったオレイン酸注入群（●）（n=17）と、
開腹処置のみを施行した対照群（○）（n=11）を処置後
3週間飼育した後、膵臓を摘出しキモトリプシノーゲン
含量とアミラーゼ含量を測定した。

【図２】Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)・Na投与後の呼気 CO₂中の
¹³C濃度の増加率（Δ¹³C(‰)）の経時変化。0分で慢性
膵炎ラット（点線、n=8）、および対照ラット（実線、n
=4）に Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)・Na（250mg/kg）を経口投
与した。

【図３】PFD試験とBz-DL-Phe-(¹³C-Leu)(¹³C-BPL)呼気
テストにおける測定値の慢性膵炎ラット（● n=8）お
よび健常ラット（○ n=4）の分布。各ラットはPFD試験
実施後 Bz-DL-Phe-(¹³C-Leu)呼気テストを行った。特異
度（健常者の陰性判定率）が100％となるようにカット
オフ値を設定（灰色バー）したときの感度（罹患者の陽
性判定率）を各分布図の下に示した。

【図４】PFD試験とBz-Ala-(¹³C-Ala)(¹³C-BAA)呼気テス
トにおける測定値の慢性膵炎ラット（● n=8）および
健常ラット（○ n=7）の分布。各ラットはPFD試験実施
後 Bz-Ala-(¹³C-Ala)呼気テストを行った。特異度（健
常者の陰性判定率）が100％となるようにカットオフ値
を設定（バー）したときの感度（罹患者の陽性判定率）
を各分布図の下に示した。

【図５】PFD試験とBz-Gly-(¹³C-Leu)(¹³C-BGL)呼気テス
トにおける測定値の慢性膵炎ラット（● n=10）および
健常ラット（○ n=10）の分布。各ラットはPFD試験実
施後 Bz-Gly-(¹³C-Leu)呼気テストを行った。特異度
（健常者の陰性判定率）が100％となるようにカットオ
フ値を設定（バー）したときの感度（罹患者の陽性判定
率）を各分布図の下に示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 7/00 Ｃ０７Ｋ 14/00 14/00 Ｇ０１Ｎ 33/497 Ａ Ｇ０１Ｎ 33/497 33/50 Ｔ 33/50 Ｃ０７Ｍ 5:00 // Ｃ０７Ｍ 5:00 Ａ６１Ｋ 49/02 Ｚ (72)発明者 柴田 邦彦 千葉県船橋市滝台町104−１−405 (72)発明者 伊藤 あすか 神奈川県横浜市港北区鳥山町274−８ Ｆターム(参考） 2G045 AA25 CB22 DB01 FB01 FB08 4C085 HH17 JJ02 KA29 KB44 KB82 LL05 4H006 AA01 AA03 AB20 AB26 4H045 AA10 AA30 BA12 BA13 BA14 BA15 BA16 BA17 BA18 BA19 BA20 CA40 EA50 FA30 FA33

Claims (43)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む
   アミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許容できる
   その塩を含有する（但し、Bz-L‐Tyr-¹³C-PABAを除
   く。）膵外分泌機能診断剤。
2. 【請求項２】 アミノ酸分子が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含む請
   求項１記載の膵外分泌機能診断剤。
3. 【請求項３】 アミノ酸またはペプチドが修飾または保
   護されており、修飾基または保護基が¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを
   含む請求項１記載の膵外分泌機能診断剤。
4. 【請求項４】 アミノ酸またはペプチドが下記の式(I)
   で表される請求項１〜３のいずれかに記載の膵外分泌機
   能診断剤。 Ｘ₁−Ｒ₁−Ｙ₁ (I) （式中、Ｘ₁は、水素原子または保護基であり、Ｒ₁は、
   アミノ酸数２〜５０のペプチド、アミノ酸または単結合
   であり、Ｙ₁は、保護基を有してもよいアミノ酸であ
   る。）
5. 【請求項５】 Ｒ₁およびＹ₁中のアミノ酸、ならびにＹ
   ₁がエステルで保護された場合の保護基の少なくとも一
   つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−標識されている請求項４記載の
   膵外分泌機能診断剤。
6. 【請求項６】 アミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学
   的に許容できるその塩が、プロテアーゼの作用を受けた
   後に、脱炭酸され、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じるもの
   である請求項１〜５のいずれかに記載の膵外分泌機能診
   断剤。
7. 【請求項７】 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアーゼ
   である請求項６記載の膵外分泌機能診断剤。
8. 【請求項８】 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリプ
   シン、トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペプ
   チダーゼからなる群より選択される請求項７記載の膵外
   分泌機能診断剤。
9. 【請求項９】 呼気テストに用いられる請求項１〜８の
   いずれかに記載の膵外分泌機能診断剤。
10. 【請求項１０】 下記の式(II)で表される¹³Ｃ−若しく
    は¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。 Ｘ₂−Ｒ₂−Ｙ₂−Ｚ₁ (II) （式中、Ｘ₂は、水素原子または保護基であり、Ｒ₂は、
    アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単結合で
    あり、Ｙ₂はアミノ酸であり、Ｚ₁は、保護基を有しても
    よいアミノ酸であり、Ｒ₂、Ｙ₂およびＺ₁中のアミノ
    酸、ならびにＸ₂およびＺ₁が炭素を含有する保護基であ
    る場合の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−または¹⁴Ｃ−
    標識されており、ただし、式(II)で表される化合物から
    下記の化合物は除かれる。L-Ala-L-Pro、L-Gly-L-Leu、
    L-Gly-L-Phe、L-Val-L-Leu、L-Leu-L-Leu、L-Tyr-L-Le
    u、Ac-D-Ala-D-Ala、L-Gly-L-Gly-OEt、L-Leu-L-Ala-OM
    e、Ac-L-Gly-L-Pro-OMe、Boc-L-Leu-L-Ala-OMe、L-Gly-
    L-Pro-L-Leu、L-Gly-L-Pro-L-Phe、L-Ala-L-Gly-L-Gl
    y、L-Gly-L-Leu-L-Pro、L-Phe-L-Asp-L-Met、L-Gly-L-L
    eu-L-Pro、Dansyl-L-Tyr-L-Val-D-Ala、Cbz-L-Gly-L-Le
    u-L-Ala、L-Thr-L-Leu-L-Asn-Bzl、Z-L-Pro-L-Pro-L-Gl
    y-OEt、L-Leu-L-Leu-L-Leu-L-Leu、L-Lys-L-Arg-L-Asp-
    L-Ser、Ac-L-Leu-L-Ala-L-Ala-L-Gln(NMe₂)、Ac-L-Leu-
    L-Ala-L-Ala-L-Gln(NMe₂)-SEt、L-Tyr-L-Gly-L-Gly-L-P
    he-L-LeuおよびL-Tyr-L-Gly-L-Gly-L-Phe-L-Met（式
    中、Acはアセチル基、Eｔはエチル基、Meはメチル基、B
    ocはt-ブチルオキシカルボニル基、Dansylはダンシル
    基、Cbzはカルボベンジルオキシ基、Bzlはベンゾイル
    基、Zはベンジルオキシカルボニル基、SEtはエタンチオ
    ール基であり、NMe₂はジメチルアミノ基である。））
11. 【請求項１１】 １）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂が単結合
    である場合、 1-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はD-Ala以外のアミノ酸
    であり、 1-ii)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
    ミノ酸であり、 1-iii)Ｚ₁がL-Pro-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
    ミノ酸であり、 ２）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸である場合、 ２-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Val以外のアミノ
    酸であり、 ２-ii)Ｚ₁がL-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
    酸であり、 ２-iii)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外の
    アミノ酸であり、 ３）Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸数２のペプチド
    である場合、Ｚ₁がSEｔ基を有してもよいL-Glnであると
    き、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸であり、 ４）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂が単結合である場合、 ４-i)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ
    酸であり、 ４-ii)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Gly、L-Val、L-L
    euおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 ４-iii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミ
    ノ酸であり、 ４-iv)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
    ミノ酸であり、 ４-v)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
    ミノ酸であり、 ５）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸である場合、 ５-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
    酸であり、 ５-ii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
    酸であり、 ５-iii)Ｚ₁がL-Glyであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミ
    ノ酸であり、 ５-iv)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
    酸であり、 ５-v)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
    酸であり、 ５-vi)Ｚ₁がL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
    ミノ酸であり、 ６）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸数２のペプチ
    ドである場合、 ６-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
    酸であり、 ６-ii)Ｚ₁がL-Serであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
    酸であり、 ７）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸数３のペプチ
    ドである場合、 ７-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Phe以外のアミノ
    酸であり、 ７-ii)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-Phe以外のアミノ
    酸である請求項１０記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化
    合物またはその塩。
12. 【請求項１２】 １）Ｘ₂がDansyl、Cbz、AcおよびZか
    らなる群より選択される保護基であり、Ｒ₂がアミノ酸
    数２のペプチドまたはアミノ酸である場合、 1-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Val以外のアミノ酸
    であり、 1-ii)Ｚ₁がL-Alaであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
    酸であり、 1-iii)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のア
    ミノ酸であり、 1-iv)Ｚ₁がL-Gln(NMe₂)またはL-Gln(NMe₂)-SEtであると
    き、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸であり、 ２）Ｘ₂がAcまたはBocであり、Ｒ₂が単結合である場
    合、 2-i)Ｚ₁がD-Alaであるとき、Ｙ₂はD-Ala以外のアミノ酸
    であり、 2-ii)Ｚ₁がL-Pro-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
    ミノ酸であり、 2-iii)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
    ミノ酸であり、 ３）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂がアミノ酸数２若しくは
    ３のペプチドまたはアミノ酸である場合、 3-i)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Pro、L-LeuおよびL
    -Phe以外のアミノ酸であり、 3-ii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Pro以外のアミノ
    酸であり、 3-iii)Ｚ₁がL-Glyであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミノ
    酸であり、 3-iv)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミノ
    酸であり、 3-v)Ｚ₁がL-Metであるとき、Ｙ₂はL-AspおよびL-Phe以
    外のアミノ酸であり、 3-vi)Ｚ₁がL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のア
    ミノ酸であり、 3-vii)Ｚ₁がL-Serであるとき、Ｙ₂はL-Asp以外のアミノ
    酸であり、 ４）Ｘ₂が水素原子であり、Ｒ₂が単結合である場合、 4-i)Ｚ₁がL-Proであるとき、Ｙ₂はL-Ala以外のアミノ酸
    であり、 4-ii)Ｚ₁がL-Leuであるとき、Ｙ₂はL-Gly、L-Val、L-Le
    uおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 4-iii)Ｚ₁がL-Pheであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のアミノ
    酸であり、 4-iv)Ｚ₁がL-Gly-OEtであるとき、Ｙ₂はL-Gly以外のア
    ミノ酸であり、 4-v)Ｚ₁がL-Ala-OMeであるとき、Ｙ₂はL-Leu以外のアミ
    ノ酸である請求項１０または１１に記載の¹³Ｃ−若しく
    は¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
13. 【請求項１３】 Ｘ₂が、Ac、Bz（ベンゾイル基）、Bo
    c、Zおよび水素原子からなる群より選択される請求項１
    ０〜１２のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは ¹⁴Ｃ−標識
    化合物またはその塩。
14. 【請求項１４】 プロテアーゼの作用を受けた後に、脱
    炭酸され、¹³ＣＯ₂または¹⁴ＣＯ₂を生じる請求項１０〜
    １３のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合
    物またはその塩。
15. 【請求項１５】 プロテアーゼが膵外分泌性プロテアー
    ゼである請求項１４記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化
    合物またはその塩。
16. 【請求項１６】 膵外分泌性プロテアーゼが、キモトリ
    プシン、トリプシン、エラスターゼおよびカルボシキペ
    プチダーゼからなる群より選択される請求項１５記載の
    ¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
17. 【請求項１７】 Ｘ₂が保護基であり、Ｒ₂が単結合であ
    る請求項１０〜１６のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは
    ¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
18. 【請求項１８】 (１)Ｙ₂およびＺ₁のアミノ酸の少なく
    とも一つが、ArgまたはLysであるか、(２)Ｙ₂およびＺ₁
    のアミノ酸の少なくとも一つが、芳香族アミノ酸、Le
    u、HisまたはMetであるか、(３)Ｙ₂およびＺ₁のアミノ
    酸の少なくとも一つが、中性かつ非芳香族アミノ酸であ
    るか、(４)Ｚ₁のアミノ酸が、Arg、LysおよびPro以外の
    アミノ酸であるか、または(５)Ｚ₁のアミノ酸が、Argま
    たはLysである請求項１０〜１７のいずれかに記載の¹³
    Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
19. 【請求項１９】 Ｘ₂が、水素原子、Bz、AcおよびBocか
    らなる群より選択され、Ｙ₂が、Phe、Ala、Gly、Tyrお
    よびArgからなる群より選択され、Ｚ₁が、保護基を有し
    てもよいLeu、保護基を有してもよいAlaおよび保護基を
    有してもよいGlyからなる群より選択される請求項１０
    〜１８のいずれかに記載の^{1 3}Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化
    合物またはその塩。
20. 【請求項２０】 Ｚ₁が、Leu、Ala、Gly、Leu-OMe、Leu
    -OEt、Ala-OMe、Ala-OEt、Gly-OMeおよびGly-OEtからな
    る群より選択される請求項１９記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴
    Ｃ−標識化合物またはその塩。
21. 【請求項２１】 Ｚ₁が、保護基を有してもよい¹³Ｃ−
    または¹⁴Ｃ−標識アミノ酸である請求項１０〜２０のい
    ずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物または
    その塩。
22. 【請求項２２】 下記の化合物からなる群より選択され
    る請求項１０記載の ¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物ま
    たはその塩。 (a)Phe-¹³C-Leu、(b)Arg-¹³C-Leu、(c)Bz-Ala-¹³C-Al
    a、(d)Bz-Gly-¹³C-Leu、(e)Bz-Phe-¹³C-Gly、(f)Bz-Tyr
    -¹³C-Leu、(g)Bz-Phe-¹³C-Leu、(h)Bz-(DL)Phe-¹³C-Le
    u、(j)Bz-Arg-¹³C-Leu、(k)Ac-Phe-¹³C-Leu、(l)Ac-Tyr
    -¹³C-Leu、(m)Bz-Ala-¹³C-Ala-OMe、(n)Bz-Gly-¹³C-Leu
    -OMe、(o)Bz-Phe-¹³C-Gly-OMe、(p)Bz-Phe-¹³C-Leu-OM
    e、(q)Bz-(DL)Phe-¹³C-Leu-OMe、(r)Ac-Phe-¹³C-Leu-OM
    e、(s)Ac-Tyr-¹³C-Leu-OMe、(t)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gl
    y-Phe-¹³C-Leu、(u)Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-¹³C-
    Leuおよび(v)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-¹³C-Gly-Phe-Leu
23. 【請求項２３】 少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含
    むアミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許容でき
    るその塩を含有する（但し、Bz-L‐Tyr-¹³C-PABAを除
    く。）膵外分泌機能診断剤であって、該アミノ酸または
    該ペプチドの構成アミノ酸のすべてがL体である膵外分
    泌機能診断剤。
24. 【請求項２４】 下記の式(IIa)で表される¹³Ｃ−若し
    くは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩であって、標識化合
    物の構成アミノ酸のすべてがL体である標識化合物また
    はその塩。 Ｘ_2a−Ｒ_2a−Ｙ_2a−Ｚ_1a (IIa) （式中、Ｘ_2aは、水素原子または保護基であり、Ｒ
    _2aは、アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単
    結合であり、Ｙ_2aはアミノ酸であり、Ｚ_1aは、保護基を
    有してもよいアミノ酸であり、Ｒ_2a、Ｙ_2aおよびＺ_1a中
    のアミノ酸、ならびにＸ_2aおよびＺ_1aが炭素を含有する
    保護基である場合の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−ま
    たは¹⁴Ｃ−標識されており、ただし、式(IIa)で表され
    る化合物から下記の化合物は除かれる。 L-Ala-L-Pro、L-Gly-L-Leu、L-Gly-L-Phe、L-Val-L-Le
    u、L-Leu-L-Leu、L-Tyr-L-Leu、L-Gly-L-Gly-OEt、L-Le
    u-L-Ala-OMe、Ac-L-Gly-L-Pro-OMe、Boc-L-Leu-L-Ala-O
    Me、L-Gly-L-Pro-L-Leu、L-Gly-L-Pro-L-Phe、L-Ala-L-
    Gly-L-Gly、L-Gly-L-Leu-L-Pro、L-Phe-L-Asp-L-Met、L
    -Gly-L-Leu-L-Pro、Cbz-L-Gly-L-Leu-L-Ala、L-Thr-L-L
    eu-L-Asn-Bzl、Z-L-Pro-L-Pro-L-Gly-OEt、L-Leu-L-Leu
    -L-Leu-L-Leu、L-Lys-L-Arg-L-Asp-L-Ser、Ac-L-Leu-L-
    Ala-L-Ala-L-Gln(NMe₂)、Ac-L-Leu-L-Ala-L-Ala-L-Gln
    (NMe₂)-SEt、L-Tyr-L-Gly-L-Gly-L-Phe-L-LeuおよびL-T
    yr-L-Gly-L-Gly-L-Phe-L-Met（式中、Acはアセチル基、
    Eｔはエチル基、Meはメチル基、Bocはt-ブチルオキシカ
    ルボニル基、Cbzはカルボベンジルオキシ基、Bzlはベン
    ゾイル基、Zはベンジルオキシカルボニル基、SEtはエタ
    ンチオール基であり、NMe₂はジメチルアミノ基であ
    る。））
25. 【請求項２５】 １）Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2aが単結
    合である場合、 1-i)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のア
    ミノ酸であり、 1-ii)Ｚ_1aがL-Pro-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外の
    アミノ酸であり、 ２）Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2aがアミノ酸である場合、 ２-i)Ｚ_1aがL-Alaであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
    ノ酸であり、 ２-ii)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外の
    アミノ酸であり、 ３）Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2aがアミノ酸数２のペプチ
    ドである場合、Ｚ_1aがSEｔ基を有してもよいL-Glnであ
    るとき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミノ酸であり、 ４）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aが単結合である場合、 ４-i)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミ
    ノ酸であり、 ４-ii)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Gly、L-Val、L
    -LeuおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 ４-iii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のア
    ミノ酸であり、 ４-iv)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外の
    アミノ酸であり、 ４-v)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
    アミノ酸であり、 ５）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸である場
    合、 ５-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外のアミ
    ノ酸であり、 ５-ii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外のアミ
    ノ酸であり、 ５-iii)Ｚ_1aがL-Glyであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のア
    ミノ酸であり、 ５-iv)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
    ノ酸であり、 ５-v)Ｚ_1aがL-Metであるとき、Ｙ_2aはL-Asp以外のアミ
    ノ酸であり、 ５-vi)Ｚ_1aがL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
    アミノ酸であり、 ６）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸数２のペプ
    チドである場合、 ６-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
    ノ酸であり、 ６-ii)Ｚ_1aがL-Serであるとき、Ｙ_2aはL-Asp以外のアミ
    ノ酸であり、 ７）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸数３のペプ
    チドである場合、 ７-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Phe以外のアミ
    ノ酸であり、 ７-ii)Ｚ_1aがL-Metであるとき、Ｙ_2aはL-Phe以外のアミ
    ノ酸である請求項２４記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識
    化合物またはその塩。
26. 【請求項２６】 １）Ｘ_2aが、Cbz、AcおよびZからなる
    群より選択される保護基であり、Ｒ_2aがアミノ酸数２の
    ペプチドまたはアミノ酸である場合、 1-i)Ｚ_1aがL-Alaであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミノ
    酸であり、 1-ii)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外の
    アミノ酸であり、 1-iii)Ｚ_1aがL-Gln(NMe₂)またはL-Gln(NMe₂)-SEtである
    とき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミノ酸であり、 ２）Ｘ_2aがAcまたはBocであり、Ｒ_2aが単結合である場
    合、 2-i)Ｚ_1aがL-Pro-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のア
    ミノ酸であり、 2-ii)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
    アミノ酸であり、 ３）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aがアミノ酸数２若しく
    は３のペプチドまたはアミノ酸である場合、 3-i)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Pro、L-Leuおよ
    びL-Phe以外のアミノ酸であり、 3-ii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Pro以外のアミ
    ノ酸であり、 3-iii)Ｚ_1aがL-Glyであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のアミ
    ノ酸であり、 3-iv)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のアミ
    ノ酸であり、 3-v)Ｚ_1aがL-Metであるとき、Ｙ_2aはL-AspおよびL-Phe
    以外のアミノ酸であり、 3-vi)Ｚ_1aがL-Asn-Bzlであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外の
    アミノ酸であり、 3-vii)Ｚ_1aがL-Serであるとき、Ｙ_2aはL-Asp以外のアミ
    ノ酸であり、 ４）Ｘ_2aが水素原子であり、Ｒ_2aが単結合である場合、 4-i)Ｚ_1aがL-Proであるとき、Ｙ_2aはL-Ala以外のアミノ
    酸であり、 4-ii)Ｚ_1aがL-Leuであるとき、Ｙ_2aはL-Gly、L-Val、L-
    LeuおよびL-Tyr以外のアミノ酸であり、 4-iii)Ｚ_1aがL-Pheであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外のアミ
    ノ酸であり、 4-iv)Ｚ_1aがL-Gly-OEtであるとき、Ｙ_2aはL-Gly以外の
    アミノ酸であり、 4-v)Ｚ_1aがL-Ala-OMeであるとき、Ｙ_2aはL-Leu以外のア
    ミノ酸である請求項２４または２５に記載の¹³Ｃ−若し
    くは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
27. 【請求項２７】 Ｘ_2aが、Ac、Bz（ベンゾイル基）、Bo
    c、Zおよび水素原子からなる群より選択される請求項２
    ４〜２６のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは ¹⁴Ｃ−標識
    化合物またはその塩。
28. 【請求項２８】 Ｘ_2aが保護基であり、Ｒ_2aが単結合で
    ある請求項２４〜２７のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しく
    は¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
29. 【請求項２９】 (１)Ｙ_2aおよびＺ_1aのアミノ酸の少な
    くとも一つが、L-ArgまたはL-Lysであるか、(２)Ｙ_2aお
    よびＺ_1aのアミノ酸の少なくとも一つが、芳香族L-アミ
    ノ酸、L-Leu、L-HisまたはL-Metであるか、(３)Ｙ_2aお
    よびＺ_1aのアミノ酸の少なくとも一つが、中性かつ非芳
    香族L-アミノ酸であるか、(４)Ｚ_1aのアミノ酸が、L-Ar
    g、L-LysおよびL-Pro以外のL-アミノ酸であるか、また
    は(５)Ｚ_1aのアミノ酸が、L-ArgまたはL-Lysである請求
    項２４〜２８のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−
    標識化合物またはその塩。
30. 【請求項３０】 Ｘ_2aが、水素原子、Bz、AcおよびBoc
    からなる群より選択され、Ｙ_2aが、L-Phe、L-Ala、L-Gl
    y、L-TyrおよびL-Argからなる群より選択され、Ｚ
    _1aが、保護基を有してもよいL-Leu、保護基を有しても
    よいL-Alaおよび保護基を有してもよいL-Glyからなる群
    より選択される請求項２４〜２９のいずれかに記載の¹³
    Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
31. 【請求項３１】 Ｚ_1aが、L-Leu、L-Ala、L-Gly、L-Leu
    -OMe、L-Leu-OEt、L-Ala-OMe、L-Ala-OEt、L-Gly-OMeお
    よびL-Gly-OEtからなる群より選択される請求項３０記
    載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
32. 【請求項３２】 Ｚ_1aが、保護基を有してもよい¹³Ｃ−
    または¹⁴Ｃ−標識アミノ酸である請求項２４〜３１のい
    ずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物または
    その塩。
33. 【請求項３３】 下記の化合物からなる群より選択され
    る請求項２４記載の ¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物ま
    たはその塩。 (a)L-Phe-¹³C-L-Leu、(b)L-Arg-¹³C-L-Leu、(c)Bz-L-Al
    a-¹³C-L-Ala、(d)Bz-L-Gly-¹³C-L-Leu、(e)Bz-L-Phe-¹³
    C-L-Gly、(f)Bz-L-Tyr-¹³C-L-Leu、(g)Bz-L-Phe-¹³C-L-
    Leu、(h)Bz-L-Arg-¹³C-L-Leu、(i)Ac-L-Phe-¹³C-L-Le
    u、(j)Ac-L-Tyr-¹³C-L-Leu、(k)Bz-L-Ala-¹³C-L-Ala-OM
    e、(l)Bz-L-Gly-¹³C-L-Leu-OMe、(m)Bz-L-Phe-¹³C-L-Gl
    y-OMe、(n)Bz-L-Phe-¹³C-L-Leu-OMe、(o)Ac-L-Phe-¹³C-
    L-Leu-OMe、(p)Ac-L-Tyr-¹³C-L-Leu-OMe、(q)Bz-L-Ala-
    L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Gly-L-Phe-¹³C-L-Leu、(r)Boc-L-
    Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Gly-L-Phe-¹³C-L-Leuおよび
    (s)Bz-L-Ala-L-Ala-L-Ala-L-Ala-¹³C-L-Gly-L-Phe-L-Le
    u
34. 【請求項３４】 少なくとも1個の¹³Ｃまたは¹⁴Ｃを含
    むアミノ酸若しくはペプチドまたは薬剤学的に許容でき
    るその塩を含有する膵外分泌機能診断剤であって、該ア
    ミノ酸または該ペプチドの構成アミノ酸の少なくとも１
    個がD体またはDL体である膵外分泌機能診断剤。
35. 【請求項３５】 下記の式(IIb)で表される¹³Ｃ−若し
    くは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩であって、標識化合
    物の構成アミノ酸の少なくとも１個がD体またはDL体で
    ある標識化合物またはその塩。 Ｘ_2b−Ｒ_2b−Ｙ_2b−Ｚ_1b (IIb) （式中、Ｘ_2bは、水素原子または保護基であり、Ｒ
    _2bは、アミノ酸数２〜５のペプチド、アミノ酸または単
    結合であり、Ｙ_2bはアミノ酸であり、Ｚ_1bは、保護基を
    有してもよいアミノ酸であり、Ｒ_2b、Ｙ_2bおよびＺ_1b中
    のアミノ酸、ならびにＸ_2bおよびＺ_1bが炭素を含有する
    保護基である場合の保護基の少なくとも一つが¹³Ｃ−ま
    たは¹⁴Ｃ−標識されており、ただし、式(IIb)で表され
    る化合物から下記の化合物は除かれる。Ac-D-Ala-D-Ala
    およびDansyl-L-Tyr-L-Val-D-Ala（式中、Acはアセチル
    基、Dansylはダンシル基である。））
36. 【請求項３６】 １）Ｘ_2bが保護基であり、Ｒ_2bが単結
    合である場合、Ｚ_1bがD-Alaであるとき、Ｙ_2bはD-Ala以
    外のアミノ酸であり、 ２）Ｘ_2bが保護基であり、Ｒ_2bがアミノ酸である場合、
    Ｚ_1bがD-Alaであるとき、Ｙ_2bはVal以外のアミノ酸であ
    る請求項３５記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物ま
    たはその塩。
37. 【請求項３７】 Ｘ_2bが、Ac、Bz（ベンゾイル基）、Bo
    c、Zおよび水素原子からなる群より選択される請求項３
    ５〜３６のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは ¹⁴Ｃ−標識
    化合物またはその塩。
38. 【請求項３８】 Ｘ_2bが保護基であり、Ｒ_2bが単結合で
    ある請求項３５〜３７のいずれかに記載の¹³Ｃ−若しく
    は¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
39. 【請求項３９】 (１)Ｙ_2bおよびＺ_1bのアミノ酸の少な
    くとも一つが、ArgまたはLysであるか、(２)Ｙ_2bおよび
    Ｚ_1bのアミノ酸の少なくとも一つが、芳香族アミノ酸、
    Leu、HisまたはMetであるか、(３)Ｙ_2bおよびＺ_1bのア
    ミノ酸の少なくとも一つが、中性かつ非芳香族アミノ酸
    であるか、(４)Ｚ_1bのアミノ酸が、Arg、LysおよびPro
    以外のアミノ酸であるか、または(５)Ｚ_1bのアミノ酸
    が、ArgまたはLysである請求項３５〜３８のいずれかに
    記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
40. 【請求項４０】 Ｘ_2bが、水素原子、Bz、AcおよびBoc
    からなる群より選択され、Ｙ_2bが、Phe、Ala、Gly、Tyr
    およびArgからなる群より選択され、Ｚ_1bが、保護基を
    有してもよいLeu、保護基を有してもよいAlaおよび保護
    基を有してもよいGlyからなる群より選択される請求項
    ３５〜３９のいずれかに記載の^{1 3}Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標
    識化合物またはその塩。
41. 【請求項４１】 Ｚ_1bが、Leu、Ala、Gly、Leu-OMe、Le
    u-OEt、Ala-OMe、Ala-OEt、Gly-OMeおよびGly-OEtから
    なる群より選択される請求項４０記載の¹³Ｃ−若しくは
    ¹⁴Ｃ−標識化合物またはその塩。
42. 【請求項４２】 Ｚ_1bが、保護基を有してもよい¹³Ｃ−
    または¹⁴Ｃ−標識アミノ酸である請求項３５〜４１のい
    ずれかに記載の¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物または
    その塩。
43. 【請求項４３】 下記の化合物からなる群より選択され
    る請求項３５記載の ¹³Ｃ−若しくは¹⁴Ｃ−標識化合物ま
    たはその塩。 (a)Phe-¹³C-Leu、(b)Arg-¹³C-Leu、(c)Bz-Ala-¹³C-Al
    a、(d)Bz-Gly-¹³C-Leu、(e)Bz-Phe-¹³C-Gly、(f)Bz-Tyr
    -¹³C-Leu、(g)Bz-Phe-¹³C-Leu、(h)Bz-(DL)Phe-¹³C-Le
    u、(j)Bz-Arg-¹³C-Leu、(k)Ac-Phe-¹³C-Leu、(l)Ac-Tyr
    -¹³C-Leu、(m)Bz-Ala-¹³C-Ala-OMe、(n)Bz-Gly-¹³C-Leu
    -OMe、(o)Bz-Phe-¹³C-Gly-OMe、(p)Bz-Phe-¹³C-Leu-OM
    e、(q)Bz-(DL)Phe-¹³C-Leu-OMe、(r)Ac-Phe-¹³C-Leu-OM
    e、(s)Ac-Tyr-¹³C-Leu-OMe、(t)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-Gl
    y-Phe-¹³C-Leu、(u)Boc-Ala-Ala-Ala-Ala-Gly-Phe-¹³C-
    Leuおよび(v)Bz-Ala-Ala-Ala-Ala-¹³C-Gly-Phe-Leu