JP2000513947A

JP2000513947A - インターフェロン関連蛋白ｈｋａｆｅ４２

Info

Publication number: JP2000513947A
Application number: JP10545249A
Authority: JP
Inventors: ビーリー，リー・ジェイムズ; マティアス，スティーブン・リー
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1997-03-25
Filing date: 1998-03-25
Publication date: 2000-10-24
Also published as: WO1998042841A1; CA2247075A1; EP0934414A1

Abstract

(57)【要約】ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドおよびポリヌクレオチド、ならびに組み換え法によりかかるポリペプチドを製造する方法、ならびに、とりわけ、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌の治療プロトコールの設計ならびにかかる症状の診断におけるＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】インターフェロン関連蛋白ＨＫＡＦＥ４２発明の分野本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、それによりコードされるポリペプチド、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、ならびにそれらの製造に関する。より詳細には、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチド（以下、ＨＫＡＦＥ４２という）はインターフェロン関連蛋白ファミリーに関連している。また本発明は、かかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの阻害または活性化にも関する。発明の背景細胞および組織の増殖、調節および機能活性は増殖因子またはサイトカインとそれらび同族受容体との相互作用により調節されている。サイトカインは一般名であり、種々のレギュレーターのファミリーを含み、成長因子（ＧＦ）、コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、インターフェロン（ＩＦＮ）、インターロイキン（ＩＬ）、リンホカインおよびモノカイン等がある（概説としてはCallard and Gearin g，The Cytokines Facts Book，Academic Press，London，1994およびNicola，e d.，Guidebook to Cytokines and Their Receptors，Sambrook and Tooze，Oxfo rd，1994参照）。一般的には、サイトカインは分子量２００００〜４０００ｋＤの糖蛋白であり、非常に低濃度（ｐＭオーダー）で作用する。２種のサイトカインが特に興味深い。まず、インターフェロン−ガンマはＴ細胞および天然キラー細胞から分泌され、炎症プロセスにおいて重要な役割を果たす。臨床的には、インターフェロン−ガンマは慢性の肉芽腫性疾患の徴候を改善することが示されており、さらに感染性疾患および新生物の治療にも有望であることも示されている。次に、神経成長因子（ＮＧＦ）は胚のニューロンの生存を支持し、成熟神経系におけるニューロンの表現型の維持に関与し続けている。老いた学習欠乏マウスの脳室への注入は、学習欠乏を修正することが示されている（Fischer，et al.，Nature 329:65-8，1987)。臨床的には、アルツハイマー病の患者の海馬において、サイトカインＢＤＮＦに密接に関連したｍＲＮＡの低下したレベルが観察されている。マウスＰＣ４遺伝子（Varnum et al.，Oncogene 4(10):1263-65，1989）はＩＮＦ−γに関連した即時初期遺伝子である。新生胎児の分化過程において、そして細胞系ＰＣ１２においても、ＮＧＦによりＰＣ４が誘導される。ＰＣ４とインターフェロンおよびリンホカインとの関連性は、ＮＧＦにより誘導される遺伝子経路の調節においてＰＣ４が役割を果たしている可能性があることを示唆する（ Tirone and Shooter，PNA S86(6):2088-92，1989）。筋肉分化におけるＰＣ４の役割も考えられている（Guardavaccaro et al.，Cell Growth Differ．6(2):159 -69，1995）。中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌を包含する（これらに限らない）機能不全または疾病を予防、改善または修正することにおいて役割を果たしうるインターフェロン関連蛋白ファミリーのさらなるメンバーの同定および特徴づけに対する必要性が存在し続けている。発明の概要１の態様において、本発明は、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドならびにその製造のための組み換え物質および方法に関する。本発明のもう１つの態様は、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関する。かかる方法は、とりわけ、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌の治療を包含する。さらにもう１つの態様において、本発明は、本発明により提供される材料を用いるアンタゴニストおよびアゴニストの同定方法、ならびに同定された化合物を用いるＨＫＡＦＥ４２のバランス不良関連症状の治療方法に関する。さらにもう１つの態様は、不適当なＨＫＡＦＥ４２活性またはレベルに関連した疾病の検出のための診断アッセイに関する。発明の説明定義下記定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするためのものである。「ＨＫＡＦＥ４２」は、とりわけ、配列番号：２に示すアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはその対立遺伝子変種をいう。「ＨＫＡＦＥ４２活性」または「ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド活性」または「ＨＫＡＦＥ４２の生物学的活性」は、該ＨＫＡＦＥ４２の代謝的または生理学的機能をいい、類似の活性または改善された活性または望ましくない副作用を減じられたこれらの活性を包含する。該ＨＫＡＦＥ４２の抗原性活性および免疫原性活性も含まれる。「ＨＫＡＦＥ４２遺伝子」は、配列番号：１に示すヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドまたはその対立遺伝子変種および／またはその相補物をいう。本明細書の用語「抗体」は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、ならびにヒト化抗体、さらにはＦａｂフラグメントを包含し、Ｆａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリーの生成物も包含する。「単離」とは、「人間の手により」天然の状態から変化させられた、すなわち、それが天然に存在する場合、元来の環境から変化させるもしくは取り除く、またはその両方を行ったことを意味する。例えばポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で生存動物に存在する場合は、「単離」されていないが、同一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に共存する物質から分離されている場合は、本明細書に用いる用語である、「単離」がなされている。「ポリヌクレオチド」とは、一般的には、修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを意味する。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物または一本鎖、二本鎖および三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより典型的には二本鎖もしくは三本鎖、または一本鎖および二本鎖領域の混合物でよいＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子を意味するが、これに限定するものではない。さらに、本明細書で用いるポリヌクレオチドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡおよびＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を意味する。用語「ポリヌクレオチド」は、安定性またはその他の理由により、修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡ、ならびに修飾された骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。「修飾された」塩基は、例えば、トリチル化塩基およびイノシンのごとき通常的でない塩基を包含する。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡについて行われており、よって、「ポリヌクレオチド」は、典型的に天然において見いだされるポリヌクレオチドの化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、ならびにウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称する短いポリヌクレオチドを包含する。「ポリペプチド」は、ペプチド結合または修飾されたペプチド結合により互いに結合している２個またはそれ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたは蛋白を意味する。「ポリペプチド」は、通常、例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称する短鎖、および一般的に蛋白と称する長鎖の両方を意味する。ポリペプチドは２０種の遺伝子によりコードされたアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有できる。「ポリペプチド」には、プロセッシングおよびその他の翻訳後修飾のような天然のプロセッシングにより修飾されたものが含まれるが、当業者に周知の化学修飾技術によっても修飾される。このような修飾は基礎的な参考書およびさらに詳細な論文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載されており、これらは当業者に周知である。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端等のポリペプチドの任意の部位で行われうる。同一の型の修飾は該ポリペプチドの幾つかの部位で、同一または異なる程度で存在し得ることは理解されよう。また、ポリペプチドは多くの型の修飾をも含み得る。ポリペプチドは、ユビキチネーションの結果として分枝状であってもよく、分枝を伴うまたは伴わない環状のものであってもよい。環状、分枝状および分枝状かつ環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセッシングにより生じるものであってもよく、あるいは合成法により製造されるものであってもよい。修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログルタメート形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白加水分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマーカルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなトランスファーＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ酸の添加、ならびにユビキチネーションなどがある。例えばroteins-Structure and Molecular Properties、第２版、T.E.Creigh ton、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク（1993）およびPosttranslationa l Covalent Modification of Proteins、B.C.Johnson編、アカデミックブレス、ニューヨーク（1983）のWold,F.,Posttranslational Protein Modifications:Pe rspective and Prospects、1〜12頁；Seifterら、Meth.Enzymol.182:626-646（1 990）およびRattanら、Protein Synthesis:Posttranslational Modifications a nd Aging，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62（1992）参照。本明細書で用いる「変種」なる用語は、対照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なるポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が異なる。変種のヌクレオチド配列の差異は、対照ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させるものであってもよく、変化させないものであってもよい。ヌクレオチドの変化は結果的に、以下に論じるように、対照配列によりコードされるポリペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合および末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的には、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が全体的に非常に類似しており、多くの領域で同一であるように限定される。変種および対照ポリペプチドは、１またはそれ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起こることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝学的コードによりコードされたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変種は、例えば対立遺伝子変種のような天然発生のものでよいか、または天然に発生することが知られていない変種でよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの非天然発生変種は、突然変異技術、直接的合成、および当業者に既知のその他の組換え技術により製造できる。「同一性」は、当該分野で公知であり、配列の比較で決定されるような、２またはそれ以上のポリペプチド配列あるいは２またはそれ以上のポリヌクレオチド配列間の関係である。また、当該分野では、「同一性」は、場合によっては、配列の鎖間の対合によって決定できるような、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列間の配列の関連性の度合を意味する。「同一性」および「類似性」は、Co mputational Molecular Biology，Lesk，A.M.編，Oxford University Press，Ne w York，1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects，Smith，D.W. 編，A：cademic Press，New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data ，Part I，Griffin，A.M.およびGriffin，H.G.編，Humana Press，New Jersey ，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，Von Heinje,G．Academic P ress，1987；およびSequence Analysis Primer，Gribskov,M.およびDevereux，J .編，M Stockton Press，New York，1991；およびCarllio,HおよびLipman,D.，S IAM J Applied Math.，48:1073(1988)に記載されている方法（これらに限らない）を含め、公知方法により容易に決定することができる。同一性を決定する好ましい方法は、テストする配列間に最大の対合を与えるように設計されている。そのうえ、同一性を測定する方法は公に入手できるコンピュータ・プログラムに集成されている。２つの配列の間の同一性を測定する好ましいコンピュータ・プログラム方法は、例えば、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J .ら，Nucleic Acids Research（1984）12(1):387)、BLASTP、BLASTNおよびFASTA （Atschul,S.F.ら，J.Molec.Biol．（1990）215:403-410）を包含するが、これに限らない。BLAST XプログラムはNCBIおよび他のソース（BLAST Manual，Altsh ul，S．ら，NCBI NLM NIH Bethesda，MD20894；Altschul,S．ら，J Mol．Biol. ，215:403-410(1990)）から公に入手できる。また、周知のスミス・ウォーターマン(Smith Waterman)アルゴリズムを用いて同一性を決定することもできる。ポリペプチド配列の比較のためのパラメーターは以下のものを包含する： 1）アルゴリズム:Needleman and Wunsch，J.Mol.Biol．48:443-453（1970）比較マトリックス:Hentikoff and Hentikoff，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89：10915-1 0919(1992)からのBLOSSUM62 ギャップペナルティー：１２ギャップ長ペナルティー：４これらのパラメーターに関して有用なプログラムは、Genetics Computer Grou p，Madison WI.から「ギャップ」プログラムとして公に利用できる。上記パラメーターはポリペプチド比較のための省略時パラメーターである（エンドギャップについてペナルティーを伴わない）。ポリヌクレオチド比較のための好ましいパラメーターは下記のものを包含する： 1）アルゴリズム：Needleman and Wunsch，J.Mol.Bilo．48:443-453（1970）比較マトリックス：マッチ＝＋１０、ミスマッチ＝０ギャップペナルティー：５０ギャップ長ペナルティー：３これらのパラメーターに関して有用なプログラムは、Genetics Computer Group，Madison WI.から「ギャップ」プログラムとして公に利用できる。上記パラメーターはポリヌクレオチド比較のための省略時パラメーターである。例えば、本発明ポリヌクレオチド配列は配列番号：１の対照配列と同一、すなわち同一性１００％であってもよく、あるいは対照配列と比較してある程度の数までのヌクレオチドの変化を有していてもよい。かかる変化は、少なくとも１個のヌクレオチドの欠失、置換（トランジションおよびトランスバージョンを包含）または挿入からなる群より選択され、該変化は対照ヌクレオチド配列の５’または３’末端の位置あるいはそれらの末端位置の間の位置において、対照配列中のヌクレオチドにおいて個々にまたは散在して、あるいは対照配列中の１またはそれ以上の連続した群として生じてもよい。配列番号：１中の全ヌクレオチド数と個々の同一性パーセント値（１００で割ったもの）とをかけて、その積を配列番号：１中の全ヌクレオチド数から差し引くことによりヌクレオチド変化の数を決定する。これを下式により説明する：ｎ_n≦ｘ_n−（ｘ_n・ｙ）式中、ｎ_nはヌクレオチド変化の数であり、ｘ_nは配列番号：１中の全ヌクレオチド数であり、ｙは、例えば７０％なら０．７０、８０％なら０．８０、８５％なら０．８５、９０％なら０．９０、９５％なら０．９５、９７％なら０．９７、１００％なら１．００であり、・は積の演算子であり、ｘ_nとｙとの整数でない積は切り捨てにより最も近い整数とした後、ｘ_nから差し引く。配列番号：２のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド配列の変化は、好ましくはコーディング配列中のナンセンス、ミスセンスまたはフレームシフト変異を引き起こす可能性があり、それゆえ、かかる変化に随伴してポリヌクレオチドによりコードされているポリペプチドが変化する。同様に、本発明ポリペプチド配列は配列番号：２の対照配列と同一、すなわち同一性１００％であってもよく、あるいは対照配列と比較してある程度の数までのアミノ酸の変化を有していてもよい。かかる変化は、少なくとも１個のアミノ酸の欠失、置換（保存的および非保存的置換を包含）または挿入からなる群より選択され、該変化は対照ポリペプチド配列のアミノまたはカルボキシ末端の位置あるいはそれらの末端位置の間の位置において、対照配列中のアミノ酸において個々にまたは散在して、あるいは対照配列中の１またはそれ以上の連続した群として生じてもよい。配列番号：２中の全アミノ酸数と同一性を示す整数を１００で割った値とをかけて、その積を配列番号：２中の全アミノ酸数から差し引くことによりアミノ酸変化の数を決定する。これを下式により説明する：ｎ_a≦Ｘ_a−（ｘ_a・ｙ）式中、ｎ_aはアミノ酸変化数であり、ｘ_aは配列番号：２中の全アミノ酸数であり、ｙは、例えば７０％なら０．７０、８０％なら０．８０、８５％なら０．８５、９０％なら０．９０、９５％なら０．９５、９７％なら０．９７、１００％なら１．００であり、・は積の演算子であり、ｘ_aとｙとの整数でない積は切り捨てにより最も近い整数とした後、ｘ_aから差し引く。本発明のポリペプチド１の態様において、本発明はＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド（ＨＫＡＦＥ４２蛋白）に関する。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドは、配列番号：２のポリペプチド；ならびに配列番号：２のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに前著うにわたって配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、なおさら好ましくは少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを包含する。さらにそのうえ、少なくとも９８〜９９％同一のものが非常に好ましい。また、全長にわたって配列番号：２のアミノ酸配列を有するポリペプチドに対して少なくとも９５％、さらにより好ましくは少なくとも９６％、なおさら好ましくは少なくとも９７％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドもＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに包含される。さらにそのうえ、少なくとも９８〜９９％同一のものが非常に好ましい。好ましくは、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドはＨＫＡＦＥ４２の生物学的活性のうちの少なくとも１つを示す。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドは「成熟」蛋白の形態であってもよく、あるいは融合蛋白のごとき大型の蛋白の一部であってもよい。分泌またはリーダー配列、プロ配列、複数のヒスチジン残基のごとき精製を促進する配列、または組み換え生産を行っている間の安定性のためのさらなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含んでいることがしばしば有利である。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの生物学的に活性のあるフラグメントも本発明に包含される。フラグメントは、前述のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのアミノ酸配列のすべてではなく一部に対して全く同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドについては、フラグメントは「独立して存在するもの（free standing）」であるか、あるいはより大きなポリペプチド内に含まれていてもよく、その中でフラグメントは一部分もしくは領域を形成している。最も好ましくは、単一の連続した領域として、より大きなポリペプチドに含まれる。本発明ポリペプチドフラグメントの典型例は、例えば、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのアミノ酸番号約１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００および１０１から末端までからなるフラグメントを包含する。この意味において、「約」とは、片方の端または両端において、示された数よりも数個、５個、４個、３個、２個または１個多いかまたは少ない範囲を含む。好ましいフラグメントは、例えば、アミノ末端を含む一連の残基が欠失、またはカルボキシ末端を含む一連の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端でもう一方がカルボキシ末端を含む２種の一連の残基が欠失していること以外はＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのアミノ酸配列を有する末端切断ポリペプチドを包含する。また、構造的または機能的属性により特徴づけられるフラグメント、例えばアルファーヘリックスおよびアルファーヘリックス形成領域、ベータシートおよびベータシート形成領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファー両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面形成領域、基質結合領域、および高抗原性指標領域を含むフラグメントなども好ましい。受容体活性を媒介する、生物学的に活性な領域も好ましく、類似の活性もしくは改善された活性のある、または望ましくない活性を減じたフラグメント等がある。動物、とりわけヒトにおいて抗原的または免疫原的なフラグメントもまた含まれる。好ましくは、これらのポリペプチドのすべては、抗原的活性を包含する受容体の生物学的活性を保持している。上記配列およびフラグメントの変種もこのグループに含まれる。好ましい変種は、保存的アミノ酸置換により変化したものであり、すなわち、同様の特徴を有するアミノ酸により置換されているものである。典型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ間：ＳｅｒおよびＴｈｒ間；ＡｓｐおよびＧｌｕ間;ＡｓｎおよびＧｌｎ間；ならびに塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇ間；あるいは芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒ間におけるものである。数個、５ないし１０個、１ないし５個、または１ないし２個のアミノ酸がいずれかの組み合わせで置換、欠失または付加されている変種が特に好ましい。いずれの適当な方法でも本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを製造することができる。かかるポリペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組み換え法によるポリペプチド、合成法によるポリペプチド、またはこれらの方法の組み合わせによるポリペプチドを包含する。かかるポリペプチドの製造手段は当該分野においてよく理解されている。本発明のポリヌクレオチド本発明のもう１つの態様は、ＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドに関する。ＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドは、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドおよびフラグメントをコードしている単離ポリヌクレオチド、ならびにそれらに密接に関連しているポリヌクレオチドを包含する。より詳細には、本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドは、配列番号：２のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしている配列番号：１に示すヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびに配列番号：１の特定の配列を有するポリヌクレオチドを包含する。さらにＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドは、配列番号：２のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して全長にわたり少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、ならびに配列番号：１のヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを包含する。配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列に対して十分な同一性を有し、増幅に使用可能であるかまたはプローブもしくはマーカーとして使用される条件下でハイブリダイゼーションするヌクレオチド配列もＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドに包含される。また本発明は、かかるＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドに対して相補的なポリヌクレオチドも提供する。ヒトＨＫＡＦＥ４２をコードしているｃＤＮＡの配列決定結果により示されるように、本発明ＨＫＡＦＥ４２はインターフェロン関連蛋白ファミリーの他の蛋白に構造的に関連している。配列番号：１のｃＤＮＡ配列は、配列番号：２の４５１個のアミノ酸のポリペプチドをコードしている１つの読み枠（ヌクレオチド番号２４７から１５９９まで）を含んでいる。配列番号：２のアミノ酸配列は、マウスＰＣ４（B．C．Varnum，R．W．Lim and H．R．Herschman，Oncogene 4：1 263-1265，1989）に対して４５０個のアミノ酸残基において約９５％の同一性（ＧＣＧＢｅｓｔＦｉｔを使用）を有する。配列番号：１のヌクレオチドは、神経成長因子を誘導可能なＰＣ４ホモログのヒトｍＲＮＡ（GenBank受託番号Ｙ１０３１３）に対して１７６７個のヌクレオチド残基において約９９％（ｂｌａｓｔｎ２を使用）を有する。本発明の好ましいポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とりわけ、それらの相同ポリヌクレオチドおよびポリペプチドと類似の生物学的機能／特性を有すると考えられる。また本発明は、配列番号：１および配列番号：２の対応全長配列の決定に先だって最初に同定された部分ポリヌクレオチドおよびポリペプチドならびに他のポリペプチドおよびポリヌクレオチドにも関する。したがって、さらなる態様において、本発明は、（ａ）配列番号：３の全長にわたって配列番号：３に対して少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するヌクレオチド配列；（ｂ）配列番号：３の全長にわたって配列番号：１に対して少なくとも９０％の同一性、好ましくは少なくとも９５％の同一性、より好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するヌクレオチド配列；（ｃ）配列番号：３のポリヌクレオチド；または（ｄ）配列番号：４の全長にわたって配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の、好ましくは少なくとも９５％、より好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド、ならびに配列番号：３のポリヌクレオチドを提供する。さらに本発明は、（ａ）配列番号：４の全長にわたって配列番号：４に対して少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；（ｂ）配列番号：４の全長にわたって配列番号：４に対して少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７〜９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド；（ｃ）配列番号：４のアミノ酸を含むポリペプチド；および（ｄ）配列番号：４のポリペプチドであるポリペプチド、ならびに配列番号：３に含まれる配列を含むポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドを提供する。配列番号：３のｃＤＮＡ配列は４５２個のアミノ酸のポリペプチドをコードする１の読み枠を含む。配列番号：４のアミノ酸配列は、マウスＰＣ４（B．C．Va rnum，et al.，Oncogene 4:1263-1265，1989）に対して４５２個のアミノ酸残基において約９３％（ＧＣＧＢｅｓｔＦｉｔを使用）の同一性を有する。さらにそのうえ、配列番号：４は、ヒトインターフェロン−ガンマに対して２１２個のアミノ酸残基にわたって１９％の同一性、そして５０％の類似性がある(Gray an d Goeddel，Nature 295:503-8，1982）。配列番号：３のヌクレオチド配列は、マウスＰＣ４（B．C．Varnum，et al.，Oncogene 4:1263-65，1989）に対して１８１１個のヌクレオチド残基において約８８％の同一性（ＧＣＧＢｅｓｔＦｉｔを使用）を有する。配列番号：３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペプチド配列はＥＳＴ（発現配列タグ）配列に由来する。ＥＳＴ配列中にはいくつかの不可避なヌクレオチド配列読み取りエラーがあることは当業者に認識されている（Adam s，M．D．et al.，Nature 377（supp）3，1995）。したがって、配列番号：３のヌクレオチド配列およびそれによりコードされるペプチド配列は配列の正確さにおいて同じ固有の限界を有する。さらにそのうえ、配列番号：３によりコードされるペプチド配列は、密接に関連した相同的蛋白または構造的に類似の蛋白に対して同一性または非常に近い相同性および／または非常に近い構造類似性（例えば、保存的なアミノ酸の相違）を有する領域を含む。標準的クローニングおよびスクリーニングを用い、ヒトケラチノサイト細胞中のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡライブラリーから、発現配列タグ（ＥＳＴ）分析（Ad ams,M.D.,et al.Science(1991)252:1651-1656;Adams,M.D.et al.,Nature(1992)3 55:632-634;Adams,M.D.,et al.,Nature(1995)377 Supp:3-174）を用いて、ＨＫＡＦＥ４２をコードしている本発明の１のポリヌクレオチドを得てもよい。ゲノムＤＮＡライブラリーのごとき天然起源から本発明ポリヌクレオチドを得ることもでき、あるいはよく知られ市販されている手段方法を用いて合成することもできる。配列番号：２のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列は、配列番号：１に含まれるポリペプチドコーディング配列（配列番号：１のヌクレオチド番号２４７から１５９９まで）と同一であってもよく、遺伝学的コードの縮重の結果生じる配列であって配列番号：２のポリペプチドをコードしているものであってもよい。本発明ポリヌクレオチドをＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの組み換え生産に用いる場合、ポリヌクレオチドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグメントのコーディング配列を含むものであってもよく；あるいは他のコーディング配列を伴った読み枠中の成熟ポリペプチドまたはフラグメントのコーディング配列を含むものであってもよい。他のコーディング配列としては、例えば、リーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、プレプロ蛋白配列をコードするコーディング配列、または他の融合ペプチド部分が挙げられる。例えば、融合ポリペプチドの精製を促すマーカー配列をコードしていてもよい。本発明のこの態様の１の好ましい具体例において、マーカー配列は、ｐＱＥべクター（Qiagen,Inc.）中に提供されるようなヘギサーヒスチジンペプチド（Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,86: 821-824(1989)に記載される）またはＨＡタグ（Wilsonら、Cell，37:767（1984 ））である。また本発明のポリヌクレオチドは、転写配列、非翻訳配列、スプライシングおよびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配列のごとき非コーディング５'および３'配列を含有していてもよい。さらに好ましい具体例は、配列番号：２に示すＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのアミノ酸配列を含むＨＫＡＦＥ４２変種をコードしているポリヌクレオチドであり、数個、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし３個、１ないし２個または 1個のアミノ酸残基がいずれかの組み合わせで置換、欠失または付加されているものである。さらに本発明は、上記配列にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドにも関する。この点において、特に本発明は、厳密な条件下で上記ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関連する。本明細書の用語「厳密な条件」とは、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％の同一性、さらにより好ましくは９７〜９９％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起こることを意味する。配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列に対して同一または十分に同一である本発明ポリヌクレオチドをｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブとして用いて、全長のｃＤＮＡおよびＨＫＡＦＥ４２をコードしているゲノムクローンを単離し、またＨＫＡＦＥ４２遺伝子に対して高い類似性を有する配列を有する他の遺伝子（他の種由来のホモログおよびオーソログをコードしている遺伝子を包含）のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離してもよい。かかるハイブリダイゼーション法は当業者に知られている。典型的には、これらのヌクレオチド配列は、対照に対して８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％の同一性を有する。一般的には、プローブは少なくとも１５個のヌクレオチドを含むであろう。好ましくは、かかるプローブは少なくとも３０個のヌクレオチドを有し、少なくとも５０個のヌクレオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３０ないし５０個の範囲のヌクレオチドを含む。１の具体例において、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを得ることは、配列番号：１の配列またはそのフラグメント配列を有する標識プローブを用いて厳密なハイブリダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリーニングし、次いで、該ポリヌクレオチド配列を含有する全長のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する工程を含む。よって、もう１つの態様において、本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドは、厳密な条件下で配列番号：１を有するヌクレオチド配列またはそのフラグメントにハイブリダイゼーションするヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を包含する。上記ハイブリダイゼーション条件により得られるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドも、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに包含される。かかるハイブリダイゼーション法は当業者によく知られている。厳密なハイブリダイゼーション条件は上で定義したものであるか、または５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭＮａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７．６）、５ｘデンハーツ溶液、１０％デキストラン硫酸、および２０マイクログラム／ｍｌの変性剪断サケ・精子ＤＮＡを含む溶液中、４２ ℃で一晩、次いで、約６５℃において０．１ｘＳＳＣ中での洗浄といった条件であってもよい。本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを、動物およびヒトの疾病の治療および診断のための研究試薬および材料として用いてもよい。ベクター、宿主細胞、発現本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子操作される宿主細胞ならびに組換え法による本発明のポリペプチドの製造にも関する。本発明ＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを用いて、無細胞翻訳系を用いてかかる蛋白を製造することもできる。組換え体を製造するために、宿主細胞を遺伝子操作して、発現系もしくはそれらの一部、または本発明のポリヌクレオチドを組み込むことができる。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、Davisら、Basic Methods in Molecula r Biology（1986）；Sambrookら、Molecular Cloning；ＡLaboratory Manual、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク（1989）のごとき多くの標準的な実験マニュアルに記載される方法により行うことができ、例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランスベクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレープ負荷（scrape loading）、バリスティック導入（ballistic introduction）および感染等がある。適当な宿主の代表的なものには、細菌細胞、例えばストレプトコッカス（stre ptococci）、スタフィロコッカス（staphylococci）、イー・コリ（E.coli）、ストレプトミセス（Streptomyces）およびバチルス・ズブチリス（Bacillus sub tiis）細胞；真菌細胞、例えば酵母細胞およびアスペルギルス（Aspergillus）細胞；昆虫細胞、例えばドロソフィラＳ２（Drosophila S2）およびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf9）細胞；ＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ（Bows）メラノーマ細胞のごとき動物細胞；ならびに植物細胞等がある。本発明のポリペプチドを製造するために非常に多くの発現系を使用できる。このようなベクターには、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクター、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来のベクター、ならびにそれらを組み合わせたものに由来するベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファージの遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミドおよびファージミド等がある。発現系の構築物には発現を制御および引き起こす調節領域を含有できる。通常、宿主中にポリヌクレオチドを保持、伸長または発現するのに、および／またはポリペプチドを発現するのに適した任意の系またはベクターを、この点に関する発現に使用できる。周知のおよび通常的な種々の任意の技術により、適当なＤＮＡ配列を発現系に挿入でき、例えば Sambrookら、Molecular Cloning，A Laboratory Manual（上記）に記載されている。翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミックスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当な分泌シグナルを発現するポリペプチドに組み込むことができる。これらのシグナルはポリペプチドに本来的なものであってもく、あるいは異種性のシグナルであってもよい。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをスクリーニングアッセイのために発現させる場合、一般的には、細胞表面にポリペプチドを生産させるのが好ましい。この場合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞を集めてもよい。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドが培地中に分泌される場合、培地を回収し、ポリペプチドを回収し精製することができる。細胞内に生成される場合、まず細胞を溶解し、次いで、ポリペプチドを回収しなければならない。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドは周知の方法により、組換え細胞培養物から回収および精製でき、その方法には例えば硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体クロマトグラフィーを精製に用いるのが最も好ましい。ポリペプチドが単離および／または精製中に変性した場合、再び活性な立体配座にするために、蛋白再生のための周知の技法を用いることができる。診断アッセイ本発明は、診断試薬としての本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に関連した変異形態のＨＫＡＦＥ４２遺伝子の検出は、ＨＫＡＦＥ４２の発現不足、過剰発現または変化した発現から生じる疾病またはかかる疾病に対する感受性を決定するための診断的手段を提供するであろう。ＨＫＡＦＥ４２遺伝子における変異を有する個体を、種々の方法によりＤＮＡレベルで検出してもよい。診断用の核酸は、対象の細胞、例えば血液、尿、唾液、組織生検または剖検材料から得てもよい。ゲノムＤＮＡを検出に直接使用してもよく、あるいは分析前にＰＣＲもしくはその他の増幅法を用いることにより酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡを同様に用いてもよい。正常遺伝子型との比較において、増幅生成物のサイズ変化により欠失および挿入を検出することができる。増幅ＤＮＡを標識ＨＫＡＦＥ４２ヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションさせることにより点突然変異を同定することができる。ＲＮａｓｅ消化により、または融解温度の差により、完全に対合した配列を誤対合二重らせんから区別することができる。ＤＮＡ配列の相違はまた、変性物質含有または不含のゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の移動度の変化を検出することにより、または直接的なＤＮＡ配列決定により検出できる。例えばMeyers et.al.Science，230:1242（1985 ）参照。特異的な位置での配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセイ、例えばＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学的切断法によっても明らかにすることができる。例えばCotton et al.Proc.Natl.Acad.Sci.,USA，85:4397-4401（1985）参照。もう１つの具体例において、ＨＫＡＦＥ４２ヌクレオチドまたはそのフラグメントを含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイ（array）を構築して、例えば遺伝学的変異の効果的なスクリーニングを行うことができる。アレイ法はよく知られており、広い適用範囲を有し、遺伝子発現、遺伝学的連関、および遺伝学的変異可能性を包含する分子遺伝学における種々の問題を調べるために用いられうる（例えば、M.Chee et al.,Science.Vol 274,pp 610-613(1996)参照）。診断アッセイは、本明細書記載の方法によりＨＫＡＦＥ４２遺伝子の変異を検出することにより、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌の診断方法またはかかる疾病に対する感受性の診断方法を提供する。さらに、対象由来の試料の異常に上昇または低下したＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドまたはＨＫＡＦＥ４２ｍＲＮＡレベルを調べることを含む方法によって、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌を診断することができる。ＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチドの発現の増加または低下を、ポリヌクレオチドの定量法として当該分野で周知の方法の任意の方法、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護、ノーザンブロッティングおよびその他のハイブリダイゼーション法を用いてＲＮＡレベルで測定することができる。宿主由来の試料中のＨＫＡＦＥ４２蛋白レベルを決定するために用いることができるアッセイ法は当業者に周知である。このようなアッセイ法には、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイ等がある。よって、もう１つの態様において、本発明は、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌の診断またはかかる疾病に対する感受性の診断のためのキットに関し、該キットは、（ａ）ＨＫＡＦＥ４２ポリヌクレオチド、好ましくは配列番号：１のヌクレオチド配列、またはそのフラグメント；（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列に対して相捕的なヌクレオチド配列；（ｃ）ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド、好ましくは配列番号：２のポリペプチド、またはそのフラグメント；または（ｄ）ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに対する抗体、好ましくは配列番号：２のポリペプチドに対する抗体を含む。かかるキットにおいて、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が重要成分を含んでいてもよいことが理解されるであろう。染色体アッセイ本発明ヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値がある。該配列は、個々のヒト・染色体上の特定の位置を標的とし、これにハイブリダイゼーションしうる。本発明による重要な配列の染色体へのマッピングは、それらの配列を遺伝子関連疾病と関連づける重要な第１工程である。配列を正確な染色体位置にマッピングしたならば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的地図のデータと関連づけることができる。かかるデータは、例えば、V.McKusick,Mendelian Inheritance in Man（Johns Hopkins University Welch Medical Libraryからオンラインで利用できる）に見いだされる。次いで、リンケージ（物理的に近接した遺伝子の同時遺伝）の分析により、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関係を同定する。罹病個体と未罹病個体との間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の相違も調べることができる。罹病個体のいくつかまたは全部において変異が観察されるが正常個体においては観察されない場合、その変異は疾病の原因である可能性がある。ＨＫＡＦＥ４２遺伝子は染色体７ｑ３１．１−２にマッピングされている。抗体本発明のポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそれらを発現する細胞を免疫原として用いて、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに対して免疫特異的な抗体を製造することもできる。用語「免疫特異的」は、先行技術の他の関連ポリペプチドに対するアフィニティーよりも、本発明ポリペプチドに対するアフィニティーが実質的に大きいことを意味する。ポリペプチドまたはエピトープが付いたフラグメント、アナログまたは細胞を、好ましくはヒトはでない動物に通常の実験法を用いて投与することにより、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに対して生じる抗体を得ることができる。連続的細胞系培養により産生される抗体を提供する、当業者周知の技術を用いて、モノクローナル抗体を調製することができる。実例としては、ハイブリドーマ法（Kohl er,G．and Milstein,C.，Nature，256:495-497（1975））；トリオーマ法（Kozb or et al.Immunology Today，4:72(1983)）；およびＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Cole et al.Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan RLiss,Inc.,77 -96頁（1985））に記載されるような種々の技法がある。一本鎖抗体の産生のために記載された技術（米国特許第４９４６７７８号）は、本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体を産生するのに適用できる。また、トランスジェニックマウス、または他の哺乳動物を包含する他の生物を用いてヒト化抗体を発現させてもよい。上記抗体を用いて、ポリペプチドを発現するクローンを単離または同定してもよく、あるいはアフィニティークロマトグラフィーによりポリペプチドを精製してもよい。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに対する抗体を用いて、とりわけ、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌を治療してもよい。ワクチン本発明のもう１つの態様は、哺乳動物における免疫学的反応を誘起する方法に関し、該方法は、抗体および／またはＴ細胞を産生させるに十分なＨＫＡＦＥ４２またはそのフラグメントを哺乳動物に接種して、とりわけ、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌から該動物を防御することを含む。本発明のさらにもう１つの態様は、哺乳動物における免疫学的応答を誘導する方法に関し、該方法は、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをインビボで発現させるための核酸ベクターを送達して、かかる免疫学的応答を誘導し、該動物を疾患から保護する抗体を生じさせることを含む。本発明のさらなる態様は免疫学的ワクチン処方（組成物）に関し、それは、哺乳動物宿主中に導入された場合、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに対する哺乳動物の免疫学的応答を誘導する。該組成物はＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドまたはＨＫＡＦＥ４２遺伝子を含んでなる。ワクチン処方は、さらに適当な担体を含んでいてもよい。ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドは胃で分解される可能性があるので、好ましくは非経口投与する（皮下、筋肉内、静脈、皮内等への注射を包含）。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッファー、静細菌剤および処方をレシピエントの血液と等張にする溶質を含んでいてもよい水性または非水性滅菌注射用溶液；ならびに懸濁剤または増粘剤を含んでいてもよい水性または非水性滅菌懸濁液を包含する。処方を１回量または複数回量として容器に入れて提供してもよく、例えば、密封アンプルおよびバイアルに入れて提供してもよく、また使用直前に滅菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態として保存してもよい。またワクチン処方は、水中油系および当該分野で知られた他の系のごとき処方の免疫原性を高めるためのアジュバント系を含んでいてもよい。用量は、個々のワクチンの活性に左右され、通常の実験により容易に決定することができる。スクリーニングアッセイ本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを活性化（アゴニスト）または阻害（アンタゴニスト、あるいは阻害剤ともいう）する化合物についてのスクリーニングプロセスにおいて本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを用いてもよい。よって、本発明ポリペプチドを用いて、例えば細胞、無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物混合物からアゴニストまたはアンタゴニストを評価、同定してもよい。これらのアゴニストまたはアンタゴニストは場合によっては天然または修飾された基質、リガンド、酵素、受容体等であってもよく、あるいは本発明ポリペプチドの構造または機能を模倣したものであってもよい。Coligan et al.,Current Protocols in Immunology 1(2):Chapter ５(1991)参照。ＨＫＡＦＥ４２蛋白は、１またはそれ以上の病理を包含する１またはそれ以上の生物学的機能に関与している。したがって、ＨＫＡＦＥ４２を刺激する化合物および薬剤、あるいはまたＨＫＡＦＥ４２を阻害しうる化合物または薬剤を見いだすことが望まれる。一般的には、中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌のごとき症状を治療または予防するためにアゴニストが用いられる。中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌のごとき症状の種々の治療または予防のためにアンタゴニストを用いてもよい。一般的には、かかるスクリーニング手順は、細胞表面に本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを発現あるいは本発明ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに応答する適当な細胞を製造することを含む。かかる細胞は、哺乳動物由来の細胞、酵母、Dros ophilaまたはE.coliを包含する。次いで、ＨＫＡＦＥ４２発現細胞（または発現されたポリペプチドを含む細胞膜）あるいはＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに応答する細胞（または発現されたポリペプチドを含む細胞膜）を試験化合物と接触させて、結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。ＨＫＡＦＥ４２活性に関して、候補化合物と接触した細胞の能力を、接触していない同じ細胞と比較する。アッセイは候補化合物の結合を試験するだけでよく、候補化合物に直接的または間接的に結合した標識を用いることにより、あるいは標識競争物質との競争を用いるアッセイにより、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを有する細胞への付着を検出する。さらに、これらのアッセイにおいて、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを有する細胞に適する検出系を用いて、受容体活性化により発生するシグナルを候補化合物が生じるかどうかを試験してもよい。一般的には、活性化に対する阻害剤を、既知アゴニスト存在下においてアッセイして、アゴニストによる活性化に対する候補化合物の存在の影響を観察する。さらに、簡単には、アッセイは、候補化合物をＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド含有溶液と混合して混合物を得て、混合物中のＨＫＡＦＥ４２活性を測定し、ＨＫＡＦＥ４２活性を標準と比較することを含むものであってもよい。ＨＫＡＦＥ４２ｃＤＮＡ、蛋白および蛋白に対する抗体を用いて、細胞におけるＨＫＡＦＥ４２ｍＲＮＡおよび蛋白の生成に対する添加化合物の影響を調べるためのアッセイを構築してもよい。例えば、当該分野で知られた標準的方法によりモノクローナルおよびポリクローナル抗体を用いてＨＫＡＦＥ４２蛋白の分泌レベルまたは細胞結合レベルを測定するためにＥＬＩＳＡを構築してもよく、これを用いでＨＫＡＦＥ４２の生成を阻害または促進しうる作用剤（それぞれ、アンタゴニストまたはアゴニストと呼ばれる）を、適当に処理された細胞または組織から見いだすことができる。当該分野で知られた標準的な受容体結合法により、ＨＫＡＦＥ４２蛋白を用いて膜結合または可溶性受容体（存在するならば）を同定してもよい。これらには、リガンド結合およびクロスリンキングアッセイを包含するが、それらに限定されない。クロスリンキングアッセイにおいて、ＨＫＡＦＥ４２は放射性標識（例えば１２５Ｉ）、化学修飾（例えば、ビオチン化）、または検出もしくは精製に適したペプチド配列に融合され、受容体と推定されるもの（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液）の源とともにインキュベーションされる。他の方法は、表面プラスモン共鳴および分光学的測定のごとき物理学的方法を包含する。受容体の精製およびクローニングに用いる以外に、これらの結合アッセイを用いて、受容体へのＨＫＡＦＥ４２の結合と競争するＨＫＡＦＥ４２のアゴニストおよびアンタゴニストを同定することができる（存在する場合には）。スクリーニングアッセイを行うための標準的方法は当該分野においてよく知られている。潜在的なＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのアンタゴニストの例は、抗体、あるいはいくつかの場合にはオリゴヌクレオチドまたはＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのリガンド、基質、酵素、受容体等に密接に関連した蛋白、例えば、リガンド、基質、酵素、受容体等のフラグメント；あるいは受容体に結合するが応答を誘発せず、その結果受容体活性を妨害する小型分子を包含する。よって、もう１つの態様において、本発明は、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドについてのアゴニスト、アンタゴニスト、リガンド、受容体、基質、酵素等；あるいはＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの生成を抑制または促進する化合物を同定するためのキットであって、（ａ）ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド、好ましくは配列番号：２のポリペプチド；（ｂ）ト]ＫＡＦＥ４２ポリペプチド、好ましくは配列番号：２のポリペプチドを発現する組み換え細胞；（ｃ）ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド、好ましくは配列番号：２のポリペプチドを発現する細胞膜；または（ｄ）ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド、好ましくは配列番号：２のポリペプチドに対する抗体を含むキットに関する。かかるキットにおいて（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が重要成分を含んでいてもよいことが理解されよう。予防および治療方法本発明は、過剰または不十分な量のＨＫＡＦＥ４２活性に関連する異常な状態、例えば中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌のごとき症状を治療または予防するためにアゴニストが用いられる。中枢神経系の疾病（不安症、鬱病、分裂病およびパーキンソン病を包含）、筋肉の疾病（筋ジストロフィーおよび多発性硬化症を包含）、アルツハイマー病、造血障害、アレルギー性の疾病、自己免疫性疾病、免疫不全および癌の治療方法を提供する。ＨＫＡＦＥ４２活性が過剰な場合、いくつかの方法を用いることができる。１の方法は、有効量の錠阻害剤化合物（アンタゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対象に投与して、ＨＫＡＦＥ４２へのリガンドの結合をブロックすることあるいは第２のシグナルを阻害することにより活性化を阻害し、そのことにより異常な症状を改善することを含む。もう１つのアプローチにおいて、内在性ＨＫＡＦＥ４２と競争してリガンドに結合する能力をやはり有している可溶性形態のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを投与してもよい。かかる競争物質の典型的な具体例はＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのフラグラメントを含む。さらにもう１つの方法において、発現ブロック法を用いて内在性ＨＫＡＦＥ４２をコードしている遺伝子の発現を阻害してもよい。細胞内で生成した、あるいは別個に投与されたアンチセンス配列を、かかる知られた方法に使用する。例えば、Oligodeoxynucleotidesas Antisense Inhibitors of Gene Expression,CRC Press,Boca Raton，FL(1988)中、0'Coccor,J.Neurochem(1991)56:560参照。別法として、遺伝子とともに三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを用いてもよい。例えば、Lee et al.,Nucleic Acids Res(1979)6:3073;Cooney et al.,Scien ce(1988)241:456;Dervan et al.,Science(1991)251:1360参照。これらのオリゴヌクレオチドはそれ自体投与することができ、あるいは関連オリゴマーをインビボで発現させることもできる。ＨＫＡＦＥ４２およびその活性の発現不足に関連する異常な症状の治療には、いくつかの方法が用いられる。１の方法は、ＨＫＡＦＥ４２を活性化する治療上有効量の化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬上許容される担体とともに投与し、そのことにより異常な症状を改善することを含む。別法として、遺伝子治療を用いて、対象中の細胞によるＨＫＡＦＥ４２の細胞内での生成を有効ならしめてもよい。例えば、上記のごとく本発明ポリヌクレオチドを処理加工して複製欠損レトロウイルスベクターに入れて発現するようにしてもよい。次いで、レトロウイルス発現構築物を単離し、本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレトロウイルスプラスミドベクターで形質導入したパッケージング細胞中に導入して、今度はパッケージング細胞が目的遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を生成するようにしてもよい。インビボでの細胞の処理加工およびインビボイでのポリペプヂドの発現のために、これらのプロデューサー細胞を対象に投与してもよい。遺伝子治療の概説としては、Human Molecular Genetics,T.Strachan and A.P.Read,BIOS Scientific Publishers Ltd(1986)中、第２０章、Gene Therapy and other Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches（およびその中の引用文献）参照。もう１つのアプローチは、適当な医薬担体と混合して治療量のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを投与することである。処方および投与可溶性形態のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドのごときペプチド、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチドまたは小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処方してもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプチドまたは化合物、および医薬上許容される担体または賦形剤を含んでなる。かかる担体としては、セイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限らない。処方は投与経路に適したものとすべきであり、当業者によく知られている。さらに本発明は、上記本発明成分の１種またはそれ以上を充填した、１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パックおよびキットにも関する。本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含する。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さらに、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるならば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の形態であってもよい。必要な用量範囲は、ペプチド、投与経路、処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇあたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしながら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざまな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれらの用量の変更を行うことができる。しばしば「遺伝子治療」と称される上記治療方法において、治療に使用するポリペプチドを対象中において生成させることもできる。よって、例えば、ポリペプチドをコードしているＤＮＡまたはＲＮＡのごときポリヌクレオチドを用いて、例えばレトロウイルスプラスミドベクターを用いることによりエクスビボにおいて対象由来の細胞を処理加工してもよい。次いで、細胞を対象に導入する。本明細書に引用されたすべての刊行物（特許および特許出願を包含するが、これらに限らない）を、参照によりそれぞれの全体が本明細書に記載されているものとみなす。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｋ 39/395 39/395 48/00 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/52 Ｃ０７Ｋ 14/52 16/24 16/24 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＡ，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者マティアス，スティーブン・リーイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号：２のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対してその全長にわたり少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド；または該単離ポリヌクレオチドに対して相捕的なヌクレオチド配列。２．該ポリヌクレオチドが配列番号：２のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしている配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列を含むものである請求項１のポリヌクレオチド。３．配列番号：１のヌクレオチド配列に対してその全長にわたり少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。４．配列番号：１のポリヌクレオチドである請求項３のポリヌクレオチド。５．適合する宿主細胞中に存在する場合に、配列番号：２のポリペプチドに対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを生成しうる発現系を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子。６．請求項５の発現系を含む宿主細胞。７．ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの生成に十分な条件下で請求項６の宿主を培養し、次いで、培地から該ポリペプチドを回収することを含む、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプヂチドの製造方法。８．請求項５の発現系で宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションして、適当な培養条件下で宿主細胞がＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを生成するようにすることを含む、ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを生成する細胞の製造方法。９．配列番号：２のアミノ酸配列に対してその全長にわたり少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むＨＫＡＦＥ４２ポリペプチド。１０．配列番号：２のアミノ酸配列を含む請求項９のポリペプチド。１１．配列番号：２のアミノ酸配列である請求項９のポリペプチド。１２．請求項９のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに対して免疫特異的な抗体。１３．請求項９のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの活性または発現の増強を必要とする対象の治療方法であって、（ａ）該ポリペプチドに対する治療上有効量のアゴニストを対象に投与すること；および／または（ｂ）インビボにおいて該ポリペプチド活性を生じさせる形態の、配列番号：２のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも９９％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド；または該ヌクレオチド配列に対して相捕的なヌクレオチド配列を対象に与えることを含む方法。１４．請求項９のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの活性または発現の阻害を必要とする対象の治療方法であって、（ａ）該ポリペプチドに対する治療上有効量のアンタゴニストを対象に投与すること；および／または（ｂ）該ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列の発現を阻害する核酸分子を対象に投与すること；および／または（ｃ）リガンド、基質、または受容体を求めて該ポリペプチドと競争する治療上有効量のポリペプチドを対象に投与することを含む方法。１５．対象中の請求項９のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの発現または活性に関連した、対象における疾病または疾病に対する感受性の診断方法であって、（ａ）対象のゲノム中の該ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列中の変異の存在または不存在を決定すること；および／または（ｂ）該対象由来の試料中のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドの発現の存在または量を分析することを含む方法。１６．請求項９のＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを阻害する化合物（アンタゴニスト）または促進する化合物（アゴニスト）の同定方法であって、（ａ）ＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを発現あるいはＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドに応答する細胞（またはＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを発現またはＨＫＡＦＦ;４２ポリペプチドに応答する細胞膜）に候補化合物を接触させ；次いで（ｂ）結合、または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察し、あるいはＨＫＡＦＥ；４２ポリペプチド活性に関して、候補化合物と接触した細胞（または細胞膜）の能力を接触しなかった同じ細胞と比較することを含む方法。１７．請求項１６の方法により同定されるアゴニストまたはアンタゴニスト。１８．請求項８の方法により製造される組み換え宿主細胞、またはＨＫＡＦＥ４２ポリペプチドを発現するその膜。１９．（ａ）配列番号：３の全長にわたり配列番号：３に対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド；（ｂ）配列番号：３の全長にわたり配列番号：１に対して少なくとも９０％の同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド；（ｃ）配列番号：３のポリヌクレオチドを含む単離ポリヌクレオチド；（ｄ）配列番号：３のポリヌクレオチド；または（ｅ）配列番号：４の全長にわたり配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチドからなる群より選択される単離ポリヌクレオチド。２０．（ａ）配列番号：４の全長にわたり配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド；（ｂ）配列番号：４の全長にわたり配列番号：４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有するアミノ酸配列であるポリペプチド；（ｃ）配列番号：４のアミノ酸を含むポリペプチド；（ｄ）配列番号：４のポリペプチドであるポリペプチド；または（ｅ）配列番号：３に含まれる配列を含むポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドからなる群より選択されるポリペプチド。