JP2000316575A - アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法 - Google Patents
アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法Info
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- JP2000316575A JP2000316575A JP11124788A JP12478899A JP2000316575A JP 2000316575 A JP2000316575 A JP 2000316575A JP 11124788 A JP11124788 A JP 11124788A JP 12478899 A JP12478899 A JP 12478899A JP 2000316575 A JP2000316575 A JP 2000316575A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 能動感作結膜アナフィラキシーモデルである
Ｆｃγレセプターノックアウトマウスとその野生型マウ
スを用いて、アナフィラキシー抑制物質をスクリーニン
グする方法を提供すること。 【解決手段】 免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子
機能が染色体上で欠損したＦｃγレセプターノックアウ
トマウスとその野生型マウスとを能動感作し、所定の期
間後に、該能動感作に用いた抗原を前記ノックアウトマ
ウスと野生型マウスの結膜や皮膚等の局所にそれぞれ投
与して、該局所に能動アナフィラキシーを惹起し、能動
アナフィラキシーの惹起の前後に、被検物質をノックア
ウトマウスと野生型マウスの少なくとも一方に投与し、
前記ノックアウトマウスと野生型マウスとの局所に生じ
たアナフィラキシーの強さの程度を比較する。
Ｆｃγレセプターノックアウトマウスとその野生型マウ
スを用いて、アナフィラキシー抑制物質をスクリーニン
グする方法を提供すること。 【解決手段】 免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子
機能が染色体上で欠損したＦｃγレセプターノックアウ
トマウスとその野生型マウスとを能動感作し、所定の期
間後に、該能動感作に用いた抗原を前記ノックアウトマ
ウスと野生型マウスの結膜や皮膚等の局所にそれぞれ投
与して、該局所に能動アナフィラキシーを惹起し、能動
アナフィラキシーの惹起の前後に、被検物質をノックア
ウトマウスと野生型マウスの少なくとも一方に投与し、
前記ノックアウトマウスと野生型マウスとの局所に生じ
たアナフィラキシーの強さの程度を比較する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、アナフィラキシー
抑制物質のスクリーニング方法、より詳しくは、能動感
作したＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウス等のＦ
ｃγレセプター遺伝子機能が染色体上で欠損した非ヒト
動物と野生型マウス等の野生型の非ヒト動物に能動アナ
フィラキシーを引き起こし、その強さの比較によりにア
ナフィラキシー抑制物質をスクリーニングする方法に関
する。
抑制物質のスクリーニング方法、より詳しくは、能動感
作したＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウス等のＦ
ｃγレセプター遺伝子機能が染色体上で欠損した非ヒト
動物と野生型マウス等の野生型の非ヒト動物に能動アナ
フィラキシーを引き起こし、その強さの比較によりにア
ナフィラキシー抑制物質をスクリーニングする方法に関
する。
【０００２】
【従来の技術】免疫グロブリン（Ｉｇ）は、魚類から哺
乳類に至る全ての脊椎動物の体液中に存在し、リンパ系
細胞によって産生され、物理化学的性質や免疫学的性質
によって５つのクラス、すなわちＩｇＧ，ＩｇＭ，Ｉｇ
Ａ，ＩｇＤ及びＩｇＥに分類され、分子の基本構造は各
クラス共通で、分子量５〜７万のＨ鎖と分子量２．３万
のＬ鎖とから構成され、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，Ｉｇ
Ｄ，ＩｇＥに対応してγ，μ，α，δ，ε鎖と呼ばれる
構造のＨ鎖を有することが知られている。このＩｇ分子
をパパインで分解して得られるヒンジ部からＣ末端まで
のＨ鎖２本がＳ−Ｓ結合で結ばれているものはＦｃフラ
グメントと呼ばれ、このＦｃフラグメントが結合する細
胞表面上の受容体はＦｃレセプターと呼ばれている。ま
た、Ｉｇと同様の構造を持つ分子（Ｉｇスーパーファミ
リー）には、Ｆｃレセプター、Ｔリンパ球上の抗原に対
する受容体分子、主要組織適合性抗原、β2ミクログロ
ブリン、癌胎児性抗原及びリンパ球の細胞膜蛋白質等が
知られている。
乳類に至る全ての脊椎動物の体液中に存在し、リンパ系
細胞によって産生され、物理化学的性質や免疫学的性質
によって５つのクラス、すなわちＩｇＧ，ＩｇＭ，Ｉｇ
Ａ，ＩｇＤ及びＩｇＥに分類され、分子の基本構造は各
クラス共通で、分子量５〜７万のＨ鎖と分子量２．３万
のＬ鎖とから構成され、ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，Ｉｇ
Ｄ，ＩｇＥに対応してγ，μ，α，δ，ε鎖と呼ばれる
構造のＨ鎖を有することが知られている。このＩｇ分子
をパパインで分解して得られるヒンジ部からＣ末端まで
のＨ鎖２本がＳ−Ｓ結合で結ばれているものはＦｃフラ
グメントと呼ばれ、このＦｃフラグメントが結合する細
胞表面上の受容体はＦｃレセプターと呼ばれている。ま
た、Ｉｇと同様の構造を持つ分子（Ｉｇスーパーファミ
リー）には、Ｆｃレセプター、Ｔリンパ球上の抗原に対
する受容体分子、主要組織適合性抗原、β2ミクログロ
ブリン、癌胎児性抗原及びリンパ球の細胞膜蛋白質等が
知られている。
【０００３】ＩｇＧの生理活性は、補体結合能、皮膚感
作能、リンパ球、単球及び血小板等のＦｃレセプターに
対する結合能の他、胎盤透過性乳汁中のＩｇＡと共に母
児免疫と重要な関係を持つことが知られており、ＩｇＡ
は補体系の第２経路を活性化し、粘膜感染における局所
免疫反応に重要な役割を持つことが知られている。ま
た、ＩｇＥは、消化管の粘膜、気道の粘膜及びリンパ管
等で産生され、肥満細胞や好塩基性細胞のＦｃレセプタ
ーを介して結合し、自己組織親和性抗体としてアナフィ
ラキシー反応に関与することが知られている。
作能、リンパ球、単球及び血小板等のＦｃレセプターに
対する結合能の他、胎盤透過性乳汁中のＩｇＡと共に母
児免疫と重要な関係を持つことが知られており、ＩｇＡ
は補体系の第２経路を活性化し、粘膜感染における局所
免疫反応に重要な役割を持つことが知られている。ま
た、ＩｇＥは、消化管の粘膜、気道の粘膜及びリンパ管
等で産生され、肥満細胞や好塩基性細胞のＦｃレセプタ
ーを介して結合し、自己組織親和性抗体としてアナフィ
ラキシー反応に関与することが知られている。
【０００４】上記Ｆｃレセプターは、細胞内のシグナル
伝達を導出して、リガンドである抗原−抗体複合体によ
って、クロスリンクすることで数多くのエフェクターの
応答を誘発する造血幹細胞表面分子のファミリーを構成
することが知られている。また、Ｆｃレセプターは、抗
体依存性細胞傷害反応、過敏性反応及びアナフィラキシ
ー反応に関与することが知られており、ＩｇのＦｃ領域
に対して親和性を持ち細胞表面上に存在していることが
知られている。Ｆｃレセプターには、体液中のＩｇＧの
γ鎖に特異的に結合するＦｃγレセプター、ＩｇＥのε
鎖に特異的に結合するＦｃεレセプター及びＩｇＡのα
鎖に特異的に結合するＦｃαレセプター等の種類が知ら
れている。これらのレセプターは抗体産生の調節因子の
一つとして知られているが、その機能は不明な点が多
く、また、これら免疫担当細胞のＦｃレセプターは細胞
機能と重要な関係があり、大部分のリンパ球、Ｔ細胞リ
ンパ球の一部、単核球、好中球、好塩基球、マクロファ
ージ、マスト細胞及び血小板等に多く存在していること
が知られている。
伝達を導出して、リガンドである抗原−抗体複合体によ
って、クロスリンクすることで数多くのエフェクターの
応答を誘発する造血幹細胞表面分子のファミリーを構成
することが知られている。また、Ｆｃレセプターは、抗
体依存性細胞傷害反応、過敏性反応及びアナフィラキシ
ー反応に関与することが知られており、ＩｇのＦｃ領域
に対して親和性を持ち細胞表面上に存在していることが
知られている。Ｆｃレセプターには、体液中のＩｇＧの
γ鎖に特異的に結合するＦｃγレセプター、ＩｇＥのε
鎖に特異的に結合するＦｃεレセプター及びＩｇＡのα
鎖に特異的に結合するＦｃαレセプター等の種類が知ら
れている。これらのレセプターは抗体産生の調節因子の
一つとして知られているが、その機能は不明な点が多
く、また、これら免疫担当細胞のＦｃレセプターは細胞
機能と重要な関係があり、大部分のリンパ球、Ｔ細胞リ
ンパ球の一部、単核球、好中球、好塩基球、マクロファ
ージ、マスト細胞及び血小板等に多く存在していること
が知られている。
【０００５】また、Ｆｃγレセプターには、Ｆｃγレセ
プターＩ（ＣＤ６４抗原）、ＦｃγレセプターII（ＣＤ
３２抗原）及びＦｃγレセプターIII（ＣＤ１６抗原）
の３種類が存在し、ＦｃγレセプターＩは、分子量７２
ｋＤａの糖タンパク質であり、免疫グロブリンＧ単量体
と高い親和性で結合し、単球とマクロファージに発現
し、ＦｃγレセプターIIは、免疫グロブリンＧ単量体に
対して低い親和性を有する受容体であり、単球、マクロ
ファージ、多形核白血球（ＰＭＮ）、マスト細胞、血小
板、いくつかのＴ細胞リンパ球及びいくつかのＢ細胞リ
ンパ球を含む造血幹細胞に広く発現し、また、Ｆｃγレ
セプターIIには遺伝子配列が異なるＦｃγレセプターII
Ａ、ＦｃγレセプターIIＢ及びＦｃγレセプターIIＣの
３種類の受容体が存在し、またＦｃγレセプターIII
は、低親和性のＦｃγレセプターで、ナチュラルキラー
細胞、マクロファージ、ＰＭＮ及びマスト細胞に発現さ
れることが、それぞれ知られている。
プターＩ（ＣＤ６４抗原）、ＦｃγレセプターII（ＣＤ
３２抗原）及びＦｃγレセプターIII（ＣＤ１６抗原）
の３種類が存在し、ＦｃγレセプターＩは、分子量７２
ｋＤａの糖タンパク質であり、免疫グロブリンＧ単量体
と高い親和性で結合し、単球とマクロファージに発現
し、ＦｃγレセプターIIは、免疫グロブリンＧ単量体に
対して低い親和性を有する受容体であり、単球、マクロ
ファージ、多形核白血球（ＰＭＮ）、マスト細胞、血小
板、いくつかのＴ細胞リンパ球及びいくつかのＢ細胞リ
ンパ球を含む造血幹細胞に広く発現し、また、Ｆｃγレ
セプターIIには遺伝子配列が異なるＦｃγレセプターII
Ａ、ＦｃγレセプターIIＢ及びＦｃγレセプターIIＣの
３種類の受容体が存在し、またＦｃγレセプターIII
は、低親和性のＦｃγレセプターで、ナチュラルキラー
細胞、マクロファージ、ＰＭＮ及びマスト細胞に発現さ
れることが、それぞれ知られている。
【０００６】従来より、上記Ｆｃレセプターの詳細な機
能やかかるレセプターの機能と密接に関係するアナフィ
ラキシー反応機構を解明するために多くの研究が行われ
ており、例えば、ＦｃεレセプターＩのノックアウトマ
ウスを用いた抗体による全身及び皮膚局所の受動感作ア
ナフィラキシー反応についての報告（Nature 370, 367-
370, 1994）、ＩｇＥノックアウトマウスを用いた受動
感作アナフィラキシー反応についての報告（Cell 76, 5
19-529, 1994）及び本発明者らによるＦｃγレセプター
IIノックアウトマウスを用いた受動感作アナフィラキシ
ー反応についての報告（Nature 379, 346-349, 1996）
等、受動感作アナフィラキシー反応によるＦｃレセプタ
ーの機能解明に関する研究は行われていたが、能動感作
アナフィラキシー反応によるＦｃγレセプターの機能解
明に関する研究は行われていなかった。
能やかかるレセプターの機能と密接に関係するアナフィ
ラキシー反応機構を解明するために多くの研究が行われ
ており、例えば、ＦｃεレセプターＩのノックアウトマ
ウスを用いた抗体による全身及び皮膚局所の受動感作ア
ナフィラキシー反応についての報告（Nature 370, 367-
370, 1994）、ＩｇＥノックアウトマウスを用いた受動
感作アナフィラキシー反応についての報告（Cell 76, 5
19-529, 1994）及び本発明者らによるＦｃγレセプター
IIノックアウトマウスを用いた受動感作アナフィラキシ
ー反応についての報告（Nature 379, 346-349, 1996）
等、受動感作アナフィラキシー反応によるＦｃレセプタ
ーの機能解明に関する研究は行われていたが、能動感作
アナフィラキシー反応によるＦｃγレセプターの機能解
明に関する研究は行われていなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、能動
感作結膜アナフィラキシーモデルであるＦｃγレセプタ
ーIIＢノックアウトマウス等のＦｃγレセプター遺伝子
機能が染色体上で欠損した非ヒト動物、すなわちＦｃγ
レセプターをコードする非ヒト動物の内在性遺伝子が不
活性化された非ヒト動物とその野生型非ヒト動物を用い
て、アナフィラキシー抑制物質をスクリーニングする方
法を提供することにある。
感作結膜アナフィラキシーモデルであるＦｃγレセプタ
ーIIＢノックアウトマウス等のＦｃγレセプター遺伝子
機能が染色体上で欠損した非ヒト動物、すなわちＦｃγ
レセプターをコードする非ヒト動物の内在性遺伝子が不
活性化された非ヒト動物とその野生型非ヒト動物を用い
て、アナフィラキシー抑制物質をスクリーニングする方
法を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究した結果、Ｆｃγレセプター
IIＢノックアウトマウスとその野生型マウスを能動感作
し、結膜と皮膚に能動感作アナフィラキシーを惹起した
ところ、ノックアウトマウスと野生型マウス間における
血管透過性亢進の程度が、結膜では差が認められず、皮
膚では差が認められることを見い出し、本発明を完成す
るに至った。
を解決するために鋭意研究した結果、Ｆｃγレセプター
IIＢノックアウトマウスとその野生型マウスを能動感作
し、結膜と皮膚に能動感作アナフィラキシーを惹起した
ところ、ノックアウトマウスと野生型マウス間における
血管透過性亢進の程度が、結膜では差が認められず、皮
膚では差が認められることを見い出し、本発明を完成す
るに至った。
【０００９】すなわち本発明は、免疫グロブリンＦｃγ
レセプター遺伝子機能が染色体上で欠損した非ヒト動物
と野生型の非ヒト動物とを能動感作し、所定の期間後
に、該能動感作に用いた抗原を前記非ヒト動物の局所に
それぞれ投与して、該局所に能動アナフィラキシーをひ
き起こし、該能動アナフィラキシーをひき起こす前後
に、被検物質を少なくとも非ヒト動物の一方に投与し、
前記免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子機能が染色
体上で欠損した非ヒト動物と野生型の非ヒト動物との局
所に生じたアナフィラキシーの強さの程度を比較するこ
とを特徴とするアナフィラキシー抑制物質のスクリーニ
ング方法（請求項１）や、免疫グロブリンＦｃγレセプ
ター遺伝子が、ＦｃγレセプターIIＢ遺伝子であること
を特徴とする請求項１記載のアナフィラキシー抑制物質
のスクリーニング方法（請求項２）や、野生型の非ヒト
動物が、免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子機能が
染色体上で欠損した非ヒト動物の野生型非ヒト動物であ
ることを特徴とする請求項１又は２記載のアナフィラキ
シー抑制物質のスクリーニング方法（請求項３）や、能
動感作が、全身又は眼局所感作であることを特徴とする
請求項１〜３のいずれか記載のアナフィラキシー抑制物
質のスクリーニング方法（請求項４）や、能動アナフィ
ラキシーをひき起こす局所が、結膜であることを特徴と
する請求項１〜４のいずれか記載のアナフィラキシー抑
制物質のスクリーニング方法（請求項５）や、能動アナ
フィラキシーをひき起こす局所が、皮膚であることを特
徴とする請求項１〜４のいずれか記載のアナフィラキシ
ー抑制物質のスクリーニング方法（請求項６）や、アナ
フィラキシーの強さの程度が、血管透過性亢進の程度で
あることを特徴とする請求項１〜６のいずれか記載のア
ナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法（請求項
７）や、血管透過性亢進が、能動アナフィラキシーをひ
き起こすとほぼ同時に色素を静脈内投与し、所定時間後
の局所に漏出した色素を測定することにより求められる
ことを特徴とする請求項７記載のアナフィラキシー抑制
物質のスクリーニング方法（請求項８）や、非ヒト動物
が、齧歯目動物であることを特徴とする請求項１〜８の
いずれか記載のアナフィラキシー抑制物質のスクリーニ
ング方法（請求項９）や、齧歯目動物が、マウスである
ことを特徴とする請求項９記載のアナフィラキシー抑制
物質のスクリーニング方法（請求項１０）や、抗原が、
水酸化アルミニウムに混合されたオボアルブミンである
ことを特徴とする請求項１〜１０のいずれか記載のアナ
フィラキシー抑制物質のスクリーニング方法（請求項１
１）に関する。
レセプター遺伝子機能が染色体上で欠損した非ヒト動物
と野生型の非ヒト動物とを能動感作し、所定の期間後
に、該能動感作に用いた抗原を前記非ヒト動物の局所に
それぞれ投与して、該局所に能動アナフィラキシーをひ
き起こし、該能動アナフィラキシーをひき起こす前後
に、被検物質を少なくとも非ヒト動物の一方に投与し、
前記免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子機能が染色
体上で欠損した非ヒト動物と野生型の非ヒト動物との局
所に生じたアナフィラキシーの強さの程度を比較するこ
とを特徴とするアナフィラキシー抑制物質のスクリーニ
ング方法（請求項１）や、免疫グロブリンＦｃγレセプ
ター遺伝子が、ＦｃγレセプターIIＢ遺伝子であること
を特徴とする請求項１記載のアナフィラキシー抑制物質
のスクリーニング方法（請求項２）や、野生型の非ヒト
動物が、免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子機能が
染色体上で欠損した非ヒト動物の野生型非ヒト動物であ
ることを特徴とする請求項１又は２記載のアナフィラキ
シー抑制物質のスクリーニング方法（請求項３）や、能
動感作が、全身又は眼局所感作であることを特徴とする
請求項１〜３のいずれか記載のアナフィラキシー抑制物
質のスクリーニング方法（請求項４）や、能動アナフィ
ラキシーをひき起こす局所が、結膜であることを特徴と
する請求項１〜４のいずれか記載のアナフィラキシー抑
制物質のスクリーニング方法（請求項５）や、能動アナ
フィラキシーをひき起こす局所が、皮膚であることを特
徴とする請求項１〜４のいずれか記載のアナフィラキシ
ー抑制物質のスクリーニング方法（請求項６）や、アナ
フィラキシーの強さの程度が、血管透過性亢進の程度で
あることを特徴とする請求項１〜６のいずれか記載のア
ナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法（請求項
７）や、血管透過性亢進が、能動アナフィラキシーをひ
き起こすとほぼ同時に色素を静脈内投与し、所定時間後
の局所に漏出した色素を測定することにより求められる
ことを特徴とする請求項７記載のアナフィラキシー抑制
物質のスクリーニング方法（請求項８）や、非ヒト動物
が、齧歯目動物であることを特徴とする請求項１〜８の
いずれか記載のアナフィラキシー抑制物質のスクリーニ
ング方法（請求項９）や、齧歯目動物が、マウスである
ことを特徴とする請求項９記載のアナフィラキシー抑制
物質のスクリーニング方法（請求項１０）や、抗原が、
水酸化アルミニウムに混合されたオボアルブミンである
ことを特徴とする請求項１〜１０のいずれか記載のアナ
フィラキシー抑制物質のスクリーニング方法（請求項１
１）に関する。
【００１０】また本発明は、ＦｃγレセプターIIＢノッ
クアウトマウスとその野生型マウスとを能動感作し、所
定の期間後に、該能動感作に用いた抗原を前記マウスに
それぞれ点眼して、結膜にアレルギー性結膜炎を惹起
し、アレルギー性結膜炎の惹起とほぼ同時に被検物質を
野生型マウスに投与し、野生型マウスの結膜における血
管透過性亢進の程度が前記ノックアウトマウスのそれと
比較して弱い場合の被検物質を選択することを特徴とす
るアレルギー性結膜炎抑制物質のスクリーニング方法
（請求項１２）や、ＦｃγレセプターIIＢノックアウト
マウスと該ノックアウトマウスとその野生型マウスとを
能動感作し、所定の期間後に、該能動感作に用いた抗原
を前記マウスにそれぞれ皮内注射して、皮膚にアナフィ
ラキシーを惹起し、皮膚アナフィラキシーの惹起とほぼ
同時に被検物質を前記ノックアウトマウスに投与し、該
ノックアウトマウスの皮膚における血管透過性亢進の程
度が野生型マウスのそれと比較してほぼ同じ場合の被検
物質を選択することを特徴とする皮膚アナフィラキシー
抑制物質のスクリーニング方法（請求項１３）や、能動
感作したＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウス（請
求項１４）に関する。
クアウトマウスとその野生型マウスとを能動感作し、所
定の期間後に、該能動感作に用いた抗原を前記マウスに
それぞれ点眼して、結膜にアレルギー性結膜炎を惹起
し、アレルギー性結膜炎の惹起とほぼ同時に被検物質を
野生型マウスに投与し、野生型マウスの結膜における血
管透過性亢進の程度が前記ノックアウトマウスのそれと
比較して弱い場合の被検物質を選択することを特徴とす
るアレルギー性結膜炎抑制物質のスクリーニング方法
（請求項１２）や、ＦｃγレセプターIIＢノックアウト
マウスと該ノックアウトマウスとその野生型マウスとを
能動感作し、所定の期間後に、該能動感作に用いた抗原
を前記マウスにそれぞれ皮内注射して、皮膚にアナフィ
ラキシーを惹起し、皮膚アナフィラキシーの惹起とほぼ
同時に被検物質を前記ノックアウトマウスに投与し、該
ノックアウトマウスの皮膚における血管透過性亢進の程
度が野生型マウスのそれと比較してほぼ同じ場合の被検
物質を選択することを特徴とする皮膚アナフィラキシー
抑制物質のスクリーニング方法（請求項１３）や、能動
感作したＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウス（請
求項１４）に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明のアナフィラキシー抑制物
質のスクリーニング方法において、免疫グロブリンＦｃ
γレセプター遺伝子機能が欠損した非ヒト動物とは、Ｆ
ｃγレセプターをコードする非ヒト動物の内在性遺伝子
が破壊・欠損・置換等により不活性化され、免疫グロブ
リンＦｃγレセプターを発現する機能を失なった非ヒト
動物をいい、Ｆｃγレセプターとは、ＩｇＧのＦｃフラ
グメントをリガンドとするレセプターであればどのよう
なものでもよく、上記ＦｃγレセプターＩ、Ｆｃγレセ
プターII及びＦｃγレセプターIIIを具体的に例示する
ことができ、また非ヒト動物とは、マウス、ラット等の
齧歯目動物を具体的に挙げることができるが、これに限
定されるものではない。
質のスクリーニング方法において、免疫グロブリンＦｃ
γレセプター遺伝子機能が欠損した非ヒト動物とは、Ｆ
ｃγレセプターをコードする非ヒト動物の内在性遺伝子
が破壊・欠損・置換等により不活性化され、免疫グロブ
リンＦｃγレセプターを発現する機能を失なった非ヒト
動物をいい、Ｆｃγレセプターとは、ＩｇＧのＦｃフラ
グメントをリガンドとするレセプターであればどのよう
なものでもよく、上記ＦｃγレセプターＩ、Ｆｃγレセ
プターII及びＦｃγレセプターIIIを具体的に例示する
ことができ、また非ヒト動物とは、マウス、ラット等の
齧歯目動物を具体的に挙げることができるが、これに限
定されるものではない。
【００１２】本発明における野生型の非ヒト動物とは、
上記免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子機能が欠損
した非ヒト動物と同種の動物を意味し、免疫グロブリン
Ｆｃγレセプター遺伝子機能が欠損した非ヒト動物の野
生型非ヒト動物が好ましい。そして、免疫グロブリンＦ
ｃγレセプター遺伝子機能が欠損した非ヒト動物として
はＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスを、野生型
マウスとしては該ノックアウトマウスとその野生型マウ
スを、それぞれ具体的に挙げることができる。以下、非
ヒト動物がマウスの場合を例にとって説明する。
上記免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子機能が欠損
した非ヒト動物と同種の動物を意味し、免疫グロブリン
Ｆｃγレセプター遺伝子機能が欠損した非ヒト動物の野
生型非ヒト動物が好ましい。そして、免疫グロブリンＦ
ｃγレセプター遺伝子機能が欠損した非ヒト動物として
はＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスを、野生型
マウスとしては該ノックアウトマウスとその野生型マウ
スを、それぞれ具体的に挙げることができる。以下、非
ヒト動物がマウスの場合を例にとって説明する。
【００１３】免疫グロブリンＦｃγレセプターノックア
ウトマウス及びその野生型マウスは、本発明者らの前掲
の公知文献（Nature 379, 346-349, 1996）に記載する
方法等によって作製することができる。例えば、マウス
遺伝子ライブラリーからＰＣＲ等の方法により得られた
遺伝子断片を用いて、免疫グロブリンＦｃγレセプター
遺伝子をスクリーニングし、スクリーニングされた免疫
グロブリンＦｃγレセプター遺伝子をウイルスベクター
等を用いてサブクローンし、ＤＮＡシーケンシングによ
り特定する。このクローンのＳ2エキソン及びＥＣ1エキ
ソンを含むフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット
等に置換することによって、ターゲットベクターを作製
することができる。
ウトマウス及びその野生型マウスは、本発明者らの前掲
の公知文献（Nature 379, 346-349, 1996）に記載する
方法等によって作製することができる。例えば、マウス
遺伝子ライブラリーからＰＣＲ等の方法により得られた
遺伝子断片を用いて、免疫グロブリンＦｃγレセプター
遺伝子をスクリーニングし、スクリーニングされた免疫
グロブリンＦｃγレセプター遺伝子をウイルスベクター
等を用いてサブクローンし、ＤＮＡシーケンシングによ
り特定する。このクローンのＳ2エキソン及びＥＣ1エキ
ソンを含むフラグメントをｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット
等に置換することによって、ターゲットベクターを作製
することができる。
【００１４】この線状化されたベクターをエレクトロポ
レーション（電気穿孔）法等によってＥＳ細胞に導入
し、相同的組換えを行い、その相同的組換え体の中か
ら、Ｇ４１８等に抵抗性を示すＥＳ細胞を選択し、その
細胞のクローンをマウスの胚盤胞中にマイクロインジェ
クションし、かかる胚盤胞を仮親のマウスに戻し、キメ
ラマウスを作製する。このキメラマウスを野生型のマウ
スとインタークロスさせると、ヘテロ接合体マウスを得
ることができ、また、このヘテロ接合体マウスをインタ
ークロスさせることによって、本発明のアレルギー性結
膜炎等の評価方法に用いる免疫グロブリンＦｃγレセプ
ターノックアウトマウス及び野生型マウスを得ることが
できる。
レーション（電気穿孔）法等によってＥＳ細胞に導入
し、相同的組換えを行い、その相同的組換え体の中か
ら、Ｇ４１８等に抵抗性を示すＥＳ細胞を選択し、その
細胞のクローンをマウスの胚盤胞中にマイクロインジェ
クションし、かかる胚盤胞を仮親のマウスに戻し、キメ
ラマウスを作製する。このキメラマウスを野生型のマウ
スとインタークロスさせると、ヘテロ接合体マウスを得
ることができ、また、このヘテロ接合体マウスをインタ
ークロスさせることによって、本発明のアレルギー性結
膜炎等の評価方法に用いる免疫グロブリンＦｃγレセプ
ターノックアウトマウス及び野生型マウスを得ることが
できる。
【００１５】本発明のアナフィラキシー抑制物質のスク
リーニング方法において、能動感作とは、例えば免疫グ
ロブリンＦｃγレセプターノックアウトマウス及び該ノ
ックアウトマウスとその野生型マウスの全身又は局所に
抗原を投与することによって、マウスの全身又は局所を
一次免疫化させることをいい、例えば全身を免疫化する
には抗原を腹腔内に注射すればよく、また、局所を免疫
化するには結膜、皮膚、鼻粘膜、気管、小腸等の特定の
臓器・組織で、かつ、アレルギー又は炎症を引き起こす
部分に適宜方法で抗原を投与すればよい。抗原として
は、水酸化アルミニウムに混合したオボアルブミン等の
アレルギー又は炎症を惹起させるものであればどんなも
のでもよく、特に制限されるものではない。
リーニング方法において、能動感作とは、例えば免疫グ
ロブリンＦｃγレセプターノックアウトマウス及び該ノ
ックアウトマウスとその野生型マウスの全身又は局所に
抗原を投与することによって、マウスの全身又は局所を
一次免疫化させることをいい、例えば全身を免疫化する
には抗原を腹腔内に注射すればよく、また、局所を免疫
化するには結膜、皮膚、鼻粘膜、気管、小腸等の特定の
臓器・組織で、かつ、アレルギー又は炎症を引き起こす
部分に適宜方法で抗原を投与すればよい。抗原として
は、水酸化アルミニウムに混合したオボアルブミン等の
アレルギー又は炎症を惹起させるものであればどんなも
のでもよく、特に制限されるものではない。
【００１６】マウスを能動感作した後、所定期間、例え
ば１〜３週間後、好ましくは２週間後に、能動感作に使
用した抗原を前記ノックアウトマウス及び該ノックアウ
トマウスとその野生型マウスの結膜や皮膚等の局所に投
与して、当該局所に能動アナフィラキシーを惹起させ
る。アナフィラキシー抑制物質の候補となる被検物質
は、通常、能動アナフィラキシーが惹起する前後にノッ
クアウトマウスと野生型マウスの少なくとも一方に投与
され、投与方法としては静脈注射、塗布、点滴等適宜採
用することができる。そして、ノックアウトマウスと野
生型マウスの結膜や皮膚等の局所に生じたアナフィラキ
シーの強さの程度を比較・評価することによりアナフィ
ラキシー抑制物質をスクリーニングする。
ば１〜３週間後、好ましくは２週間後に、能動感作に使
用した抗原を前記ノックアウトマウス及び該ノックアウ
トマウスとその野生型マウスの結膜や皮膚等の局所に投
与して、当該局所に能動アナフィラキシーを惹起させ
る。アナフィラキシー抑制物質の候補となる被検物質
は、通常、能動アナフィラキシーが惹起する前後にノッ
クアウトマウスと野生型マウスの少なくとも一方に投与
され、投与方法としては静脈注射、塗布、点滴等適宜採
用することができる。そして、ノックアウトマウスと野
生型マウスの結膜や皮膚等の局所に生じたアナフィラキ
シーの強さの程度を比較・評価することによりアナフィ
ラキシー抑制物質をスクリーニングする。
【００１７】そして、アナフィラキシーの強さの程度
は、どのような方法により測定してもよいが、例えば、
能動アナフィラキシーをひき起こすとほぼ同時に色素を
静脈内投与し、所定時間後の局所に漏出した色素を測る
ことにより求められる血管透過性亢進の程度として測定
することができる。この場合の色素としては、エバンス
ブルー、ニュートラルレッド、ヤヌスグリーン等の超生
体染色物質を例示することができる。
は、どのような方法により測定してもよいが、例えば、
能動アナフィラキシーをひき起こすとほぼ同時に色素を
静脈内投与し、所定時間後の局所に漏出した色素を測る
ことにより求められる血管透過性亢進の程度として測定
することができる。この場合の色素としては、エバンス
ブルー、ニュートラルレッド、ヤヌスグリーン等の超生
体染色物質を例示することができる。
【００１８】本発明のアナフィラキシー抑制物質のスク
リーニング方法として、ＦｃγレセプターIIＢノックア
ウトマウスと該ノックアウトマウスとその野生型マウス
とを能動感作し、所定の期間後に、該能動感作に用いた
抗原を前記マウスにそれぞれ点眼して、結膜にアレルギ
ー性結膜炎を惹起し、アレルギー性結膜炎の惹起とほぼ
同時に被検物質を野生型マウスに投与し、野生型マウス
の結膜における血管透過性亢進の程度が前記ノックアウ
トマウスのそれと比較して弱い場合の被検物質を選択す
るアレルギー性結膜炎抑制物質のスクリーニング方法
や、ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスと該ノッ
クアウトマウスとその野生型マウスとを能動感作し、所
定の期間後に、該能動感作に用いた抗原を前記マウスに
それぞれ皮内注射して、皮膚にアナフィラキシーを惹起
し、皮膚アナフィラキシーの惹起とほぼ同時に被検物質
を前記ノックアウトマウスに投与し、該ノックアウトマ
ウスの皮膚における血管透過性亢進の程度が野生型マウ
スのそれと比較してほぼ同じ場合の被検物質を選択する
皮膚アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法を
具体的に挙げることができる。
リーニング方法として、ＦｃγレセプターIIＢノックア
ウトマウスと該ノックアウトマウスとその野生型マウス
とを能動感作し、所定の期間後に、該能動感作に用いた
抗原を前記マウスにそれぞれ点眼して、結膜にアレルギ
ー性結膜炎を惹起し、アレルギー性結膜炎の惹起とほぼ
同時に被検物質を野生型マウスに投与し、野生型マウス
の結膜における血管透過性亢進の程度が前記ノックアウ
トマウスのそれと比較して弱い場合の被検物質を選択す
るアレルギー性結膜炎抑制物質のスクリーニング方法
や、ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスと該ノッ
クアウトマウスとその野生型マウスとを能動感作し、所
定の期間後に、該能動感作に用いた抗原を前記マウスに
それぞれ皮内注射して、皮膚にアナフィラキシーを惹起
し、皮膚アナフィラキシーの惹起とほぼ同時に被検物質
を前記ノックアウトマウスに投与し、該ノックアウトマ
ウスの皮膚における血管透過性亢進の程度が野生型マウ
スのそれと比較してほぼ同じ場合の被検物質を選択する
皮膚アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法を
具体的に挙げることができる。
【００１９】以下に、実施例を挙げてこの発明を更に具
体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの実
施例に限定されるものではない。 実施例１（ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの
作製） 本発明のアナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方
法に用いたＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウス及
び該ノックアウトマウスとその野生型マウスは、以下の
ように作製した。
体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの実
施例に限定されるものではない。 実施例１（ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの
作製） 本発明のアナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方
法に用いたＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウス及
び該ノックアウトマウスとその野生型マウスは、以下の
ように作製した。
【００２０】１２９／Ｓｖ／Ｊ系統由来のマウスのゲノ
ムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによっ
て、ＦｃγレセプターIIＢ遺伝子のゲノムＤＮＡのクロ
ーンを単離した。このクローンのＳ2及びＥＣ1の２つの
独立したエキソンを含む２．６５Ｋｂのフラグメントを
ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット（東洋紡社製）に、置換す
ることによってターゲットベクターを作製した。この線
状化したベクターをエレクトロポレーションによってＥ
Ｓ細胞（Ｊ１）に導入し、相同的組換えを行った。
ムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによっ
て、ＦｃγレセプターIIＢ遺伝子のゲノムＤＮＡのクロ
ーンを単離した。このクローンのＳ2及びＥＣ1の２つの
独立したエキソンを含む２．６５Ｋｂのフラグメントを
ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセット（東洋紡社製）に、置換す
ることによってターゲットベクターを作製した。この線
状化したベクターをエレクトロポレーションによってＥ
Ｓ細胞（Ｊ１）に導入し、相同的組換えを行った。
【００２１】上記の相同的組換えを起こしたＥＳ細胞か
らＥＳクローンを単離し、Ｇ４１８及びＧＡＮＣ(ガン
シクロビア)に対してネオマイシン耐性ＥＳクローンを
スクリーニングし、サザンブロット法によって相同的組
換え体を同定した。その同定された相同的組換え体から
ゲノムＤＮＡを単離して、ＨｉｎｄIIIでダイジェスト
し、ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセットを含むターゲティング
された対立遺伝子を含んでいることを確認した。かかる
確認されたＥＳクローンを胚盤胞中にマイクロインジェ
クションし、キメラマウスを作製し、作製されたマウス
を野生型のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスとインタークロスさ
せることによってヘテロ接合体マウスを得て、また、ホ
モ接合体マウスを得るために、このヘテロ接合体マウス
をインタークロスさせて、ＦｃγレセプターIIＢ遺伝子
が染色体上で欠損したノックアウトマウス及びその野生
型マウスを作製した。
らＥＳクローンを単離し、Ｇ４１８及びＧＡＮＣ(ガン
シクロビア)に対してネオマイシン耐性ＥＳクローンを
スクリーニングし、サザンブロット法によって相同的組
換え体を同定した。その同定された相同的組換え体から
ゲノムＤＮＡを単離して、ＨｉｎｄIIIでダイジェスト
し、ｐＭＣ１ネオ遺伝子カセットを含むターゲティング
された対立遺伝子を含んでいることを確認した。かかる
確認されたＥＳクローンを胚盤胞中にマイクロインジェ
クションし、キメラマウスを作製し、作製されたマウス
を野生型のＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスとインタークロスさ
せることによってヘテロ接合体マウスを得て、また、ホ
モ接合体マウスを得るために、このヘテロ接合体マウス
をインタークロスさせて、ＦｃγレセプターIIＢ遺伝子
が染色体上で欠損したノックアウトマウス及びその野生
型マウスを作製した。
【００２２】実施例２（全身能動感作によるマウスのア
レルギー性結膜炎） 文献（Int. Arch. Allergy 39, 156-171, 1970）記載の
方法により水酸化アルミニウムゲル（alum）を調製し、
２０ｍｇ／ｍｌの水酸化アルミニウムゲルに２００μｇ
／ｍｌのオボアルブミン（生化学工業（株）社製）を吸
着させ、抗原溶液を調製した。この抗原溶液１ｍｌを上
記実施例１により作製された野生型マウス及びＦｃγレ
セプターIIＢノックアウトマウスの腹腔内に注射するこ
とにより全身能動感作し、能動感作野生型マウス及び能
動感作ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスを作製
した。
レルギー性結膜炎） 文献（Int. Arch. Allergy 39, 156-171, 1970）記載の
方法により水酸化アルミニウムゲル（alum）を調製し、
２０ｍｇ／ｍｌの水酸化アルミニウムゲルに２００μｇ
／ｍｌのオボアルブミン（生化学工業（株）社製）を吸
着させ、抗原溶液を調製した。この抗原溶液１ｍｌを上
記実施例１により作製された野生型マウス及びＦｃγレ
セプターIIＢノックアウトマウスの腹腔内に注射するこ
とにより全身能動感作し、能動感作野生型マウス及び能
動感作ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスを作製
した。
【００２３】これら全身能動感作マウスの感作後１４日
目に、野生型マウス及びＦｃγレセプターIIＢノックア
ウトマウスの眼に、０、０．０１、０．１、１及び１０
％の前記抗原溶液を点眼することによりアレルギー性結
膜炎を惹起させた。また、惹起と同時に、マウスの体重
１ｋｇ当たり、０．１％のエバンスブルー（青色アゾ色
素）１０ｍｌを静脈内に投与した。結膜炎を惹起させて
から３０分後、それらのマウスを頸椎脱臼により安楽死
させて、結膜組織から漏出した部位を切り出し、その漏
出部位の色素を、アセトンと０．５％の硫酸ナトリウム
との混合液（７：３）に４８時間以上浸して抽出した。
それら抽出溶液の６２０ｎｍにおける吸光度を分光光度
計により、血管透過性亢進の程度を測定した。結果を図
１に示す。図１からわかるように、全身能動感作による
ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの結膜におけ
るアナフィラキシーの影響は、野生型マウスのそれと比
較して有意な差は認められなかった。
目に、野生型マウス及びＦｃγレセプターIIＢノックア
ウトマウスの眼に、０、０．０１、０．１、１及び１０
％の前記抗原溶液を点眼することによりアレルギー性結
膜炎を惹起させた。また、惹起と同時に、マウスの体重
１ｋｇ当たり、０．１％のエバンスブルー（青色アゾ色
素）１０ｍｌを静脈内に投与した。結膜炎を惹起させて
から３０分後、それらのマウスを頸椎脱臼により安楽死
させて、結膜組織から漏出した部位を切り出し、その漏
出部位の色素を、アセトンと０．５％の硫酸ナトリウム
との混合液（７：３）に４８時間以上浸して抽出した。
それら抽出溶液の６２０ｎｍにおける吸光度を分光光度
計により、血管透過性亢進の程度を測定した。結果を図
１に示す。図１からわかるように、全身能動感作による
ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの結膜におけ
るアナフィラキシーの影響は、野生型マウスのそれと比
較して有意な差は認められなかった。
【００２４】実施例３（眼局所能動感作によるマウスの
アレルギー性結膜炎） 抗原溶液を眼球結膜下に注射（２５μｌ／ｅｙｅ）し眼
局所を能動感作する以外は実施例２と同様に行った。結
果を図２に示す。図２からわかるように、眼局所能動感
作によるＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの結
膜におけるアナフィラキシーの影響は、野生型マウスの
それと比較して有意な差は認められなかった。
アレルギー性結膜炎） 抗原溶液を眼球結膜下に注射（２５μｌ／ｅｙｅ）し眼
局所を能動感作する以外は実施例２と同様に行った。結
果を図２に示す。図２からわかるように、眼局所能動感
作によるＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの結
膜におけるアナフィラキシーの影響は、野生型マウスの
それと比較して有意な差は認められなかった。
【００２５】比較例１（眼局所受動感作によるマウスの
アレルギー性結膜炎） 抗ジニトロフェニルＩｇＧ1を用いて眼局所受動感作を
行い、２時間後に１０％ジニトロフェニル−ウシ血清ア
ルブミンを点眼する以外は実施例２と同様に行った。結
果を図３に示す。図３からわかるように、眼局所受動感
作によるＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの結
膜におけるアナフィラキシーの影響は、野生型マウスの
それと比較して有意に増強していた。
アレルギー性結膜炎） 抗ジニトロフェニルＩｇＧ1を用いて眼局所受動感作を
行い、２時間後に１０％ジニトロフェニル−ウシ血清ア
ルブミンを点眼する以外は実施例２と同様に行った。結
果を図３に示す。図３からわかるように、眼局所受動感
作によるＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの結
膜におけるアナフィラキシーの影響は、野生型マウスの
それと比較して有意に増強していた。
【００２６】実施例２及び実施例３の能動感作によるマ
ウスのアレルギー性結膜炎に関する結果は、比較例１の
受動感作の場合の結果と異なり、野生型マウスの結膜ア
レルギー反応においてはＦｃγレセプターIIＢを介する
抑制的な制御機構が機能していないことを示している。
したがって、被検物質を野生型マウスに投与し、野生型
マウスの結膜における血管透過性亢進の程度がノックア
ウトマウスのそれと比較して有意に弱い場合の被検物質
を選択することにより、アレルギー性結膜炎抑制物質を
スクリーニングすることができる。
ウスのアレルギー性結膜炎に関する結果は、比較例１の
受動感作の場合の結果と異なり、野生型マウスの結膜ア
レルギー反応においてはＦｃγレセプターIIＢを介する
抑制的な制御機構が機能していないことを示している。
したがって、被検物質を野生型マウスに投与し、野生型
マウスの結膜における血管透過性亢進の程度がノックア
ウトマウスのそれと比較して有意に弱い場合の被検物質
を選択することにより、アレルギー性結膜炎抑制物質を
スクリーニングすることができる。
【００２７】実施例４（全身能動感作によるマウスの皮
膚アナフィラキシー反応） 全身能動感作マウスの皮内に、０、１、１０、１００、
１０００、１００００（ｎｇ／ｓｉｔｅ）の前記抗原溶
液を注射する以外は実施例２と同様に行った。結果を図
４に示す。図４からわかるように、全身能動感作による
ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの皮膚アナフ
ィラキシー反応は、野生型マウスのそれと比較して有意
に増強していた。
膚アナフィラキシー反応） 全身能動感作マウスの皮内に、０、１、１０、１００、
１０００、１００００（ｎｇ／ｓｉｔｅ）の前記抗原溶
液を注射する以外は実施例２と同様に行った。結果を図
４に示す。図４からわかるように、全身能動感作による
ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの皮膚アナフ
ィラキシー反応は、野生型マウスのそれと比較して有意
に増強していた。
【００２８】実施例５（眼局所能動感作によるマウスの
皮膚アナフィラキシー反応） 眼局所能動感作マウスの皮内に、０、１、１０、１０
０、１０００、１００００（ｎｇ／ｓｉｔｅ）の前記抗
原溶液を注射する以外は実施例３と同様に行った。結果
を図５に示す。図５からわかるように、全身能動感作に
よるＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの皮膚ア
ナフィラキシー反応は、野生型マウスのそれと比較して
有意に増強していた。
皮膚アナフィラキシー反応） 眼局所能動感作マウスの皮内に、０、１、１０、１０
０、１０００、１００００（ｎｇ／ｓｉｔｅ）の前記抗
原溶液を注射する以外は実施例３と同様に行った。結果
を図５に示す。図５からわかるように、全身能動感作に
よるＦｃγレセプターIIＢノックアウトマウスの皮膚ア
ナフィラキシー反応は、野生型マウスのそれと比較して
有意に増強していた。
【００２９】実施例４及び実施例５の能動感作によるマ
ウスの皮膚アナフィラキシー反応に関する結果は、野生
型マウスの皮膚アナフィラキシー反応においてはＦｃγ
レセプターIIＢを介する抑制的な制御機構が機能してい
ることを示している。したがって、被検物質をノックア
ウトマウスに投与し、ノックアウトマウスの皮膚におけ
る血管透過性亢進の程度が野生型マウスのそれと比較し
て同程度の被検物質を選択することにより、皮膚アナフ
ィラキシー抑制物質をスクリーニングすることができ
る。
ウスの皮膚アナフィラキシー反応に関する結果は、野生
型マウスの皮膚アナフィラキシー反応においてはＦｃγ
レセプターIIＢを介する抑制的な制御機構が機能してい
ることを示している。したがって、被検物質をノックア
ウトマウスに投与し、ノックアウトマウスの皮膚におけ
る血管透過性亢進の程度が野生型マウスのそれと比較し
て同程度の被検物質を選択することにより、皮膚アナフ
ィラキシー抑制物質をスクリーニングすることができ
る。
【００３０】
【発明の効果】本発明によると、局所に生じたアナフィ
ラキシーの強さの程度を評価することにより、アレルギ
ー性結膜炎抑制物質や皮膚アナフィラキシー抑制物質等
のアナフィラキシー抑制物質をスクリーニングすること
ができるばかりか、免疫グロブリンＦｃγレセプターの
生物学的役割に有用な情報を得ることができ、さらにア
レルギー疾患及び自己免疫疾患治療に対して有用な情報
を得ることができる。
ラキシーの強さの程度を評価することにより、アレルギ
ー性結膜炎抑制物質や皮膚アナフィラキシー抑制物質等
のアナフィラキシー抑制物質をスクリーニングすること
ができるばかりか、免疫グロブリンＦｃγレセプターの
生物学的役割に有用な情報を得ることができ、さらにア
レルギー疾患及び自己免疫疾患治療に対して有用な情報
を得ることができる。
【図１】全身能動感作によるマウスのアレルギー性結膜
炎の結果を示す図である。
炎の結果を示す図である。
【図２】眼局所能動感作によるマウスのアレルギー性結
膜炎の結果を示す図である。
膜炎の結果を示す図である。
【図３】眼局所受動感作によるマウスのアレルギー性結
膜炎の結果を示す図である。
膜炎の結果を示す図である。
【図４】全身能動感作によるマウスの皮膚アナフィラキ
シー反応の結果を示す図である。
シー反応の結果を示す図である。
【図５】眼局所能動感作によるマウスの皮膚アナフィラ
キシー反応の結果を示す図である。
キシー反応の結果を示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/50 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者 中田 勝彦 奈良県櫻井市箸中531−１ (72)発明者 高井 俊行 宮城県仙台市青葉区中山４−18−１−506 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA29 BA13 BB24 BB60 CB09 CB26 DA80 FA11 FA29 GC10 4B024 AA11 BA80 CA04 DA02 EA04 GA12 GA14 GA18 4B063 QA07 QA18 QQ96 QR48 QR66 QR72 QR80 QS14 QS36 QS38 QX01 4B065 AA91X AA91Y AB01 BA02 BA03 BA04 CA46
Claims (14)
- 【請求項１】 免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子
機能が染色体上で欠損した非ヒト動物と野生型の非ヒト
動物とを能動感作し、所定の期間後に、該能動感作に用
いた抗原を前記非ヒト動物の局所にそれぞれ投与して、
該局所に能動アナフィラキシーを惹起し、該能動アナフ
ィラキシーの惹起の前後に、被検物質を少なくとも非ヒ
ト動物の一方に投与し、前記免疫グロブリンＦｃγレセ
プター遺伝子機能が染色体上で欠損した非ヒト動物と野
生型の非ヒト動物との局所に生じたアナフィラキシーの
強さの程度を比較することを特徴とするアナフィラキシ
ー抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２】 免疫グロブリンＦｃγレセプター遺伝子
が、ＦｃγレセプターIIＢ遺伝子であることを特徴とす
る請求項１記載のアナフィラキシー抑制物質のスクリー
ニング方法。 - 【請求項３】 野生型の非ヒト動物が、免疫グロブリン
Ｆｃγレセプター遺伝子機能が染色体上で欠損した非ヒ
ト動物の野生型非ヒト動物であることを特徴とする請求
項１又は２記載のアナフィラキシー抑制物質のスクリー
ニング方法。 - 【請求項４】 能動感作が、全身又は眼局所感作である
ことを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のアナフ
ィラキシー抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項５】 能動アナフィラキシーをひき起こす局所
が、結膜であることを特徴とする請求項１〜４のいずれ
か記載のアナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方
法。 - 【請求項６】 能動アナフィラキシーをひき起こす局所
が、皮膚であることを特徴とする請求項１〜４のいずれ
か記載のアナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方
法。 - 【請求項７】 アナフィラキシーの強さの程度が、血管
透過性亢進の程度であることを特徴とする請求項１〜６
のいずれか記載のアナフィラキシー抑制物質のスクリー
ニング方法。 - 【請求項８】 血管透過性亢進が、能動アナフィラキシ
ーをひき起こすとほぼ同時に色素を静脈内投与し、所定
時間後の局所に漏出した色素を測定することにより求め
られることを特徴とする請求項７記載のアナフィラキシ
ー抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項９】 非ヒト動物が、齧歯目動物であることを
特徴とする請求項１〜８のいずれか記載のアナフィラキ
シー抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項１０】 齧歯目動物が、マウスであることを特
徴とする請求項９記載のアナフィラキシー抑制物質のス
クリーニング方法。 - 【請求項１１】 抗原が、水酸化アルミニウムに混合さ
れたオボアルブミンであることを特徴とする請求項１〜
１０のいずれか記載のアナフィラキシー抑制物質のスク
リーニング方法。 - 【請求項１２】 ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマ
ウスとその野生型マウスとを能動感作し、所定の期間後
に、該能動感作に用いた抗原を前記マウスにそれぞれ点
眼して、結膜にアレルギー性結膜炎を惹起し、アレルギ
ー性結膜炎の惹起とほぼ同時に被検物質を野生型マウス
に投与し、野生型マウスの結膜における血管透過性亢進
の程度が前記ノックアウトマウスのそれと比較して弱い
場合の被検物質を選択することを特徴とするアレルギー
性結膜炎抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項１３】 ＦｃγレセプターIIＢノックアウトマ
ウスとその野生型マウスとを能動感作し、所定の期間後
に、該能動感作に用いた抗原を前記マウスにそれぞれ皮
内注射して、皮膚にアナフィラキシーを惹起し、皮膚ア
ナフィラキシーの惹起とほぼ同時に被検物質を前記ノッ
クアウトマウスに投与し、該ノックアウトマウスの皮膚
における血管透過性亢進の程度が野生型マウスのそれと
比較してほぼ同じ場合の被検物質を選択することを特徴
とする皮膚アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング
方法。 - 【請求項１４】 能動感作したＦｃγレセプターIIＢノ
ックアウトマウス。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11124788A JP2000316575A (ja) | 1999-04-30 | 1999-04-30 | アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11124788A JP2000316575A (ja) | 1999-04-30 | 1999-04-30 | アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000316575A true JP2000316575A (ja) | 2000-11-21 |
Family
ID=14894146
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11124788A Pending JP2000316575A (ja) | 1999-04-30 | 1999-04-30 | アナフィラキシー抑制物質のスクリーニング方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000316575A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006227000A (ja) * | 2005-01-21 | 2006-08-31 | National Food Research Institute | アレルギー重症度のインデックス化方法 |
-
1999
- 1999-04-30 JP JP11124788A patent/JP2000316575A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006227000A (ja) * | 2005-01-21 | 2006-08-31 | National Food Research Institute | アレルギー重症度のインデックス化方法 |
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