JP2000312544A - ヒトｔ細胞が生着したマウス、その作出方法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 免疫細胞を欠損する近交系マウスにヒト
由来骨組織を移植することによるヒトＴ細胞生着マウス
の作出方法、該方法により得られうるヒトＴ細胞生着マ
ウス。該マウスにＨＩＶを感染させることによる該ＨＩ
Ｖ感染症マウスモデルの作出方法および該方法により得
られうる該ＨＩＶ感染症マウスモデル。 【効果】 本発明の方法により得られるヒトＴ細胞生着
マウスは、長期間にわたり末梢血中に高頻度にヒトＴ細
胞が出現し、且つそのＣＤ４陽性細胞／ＣＤ８陽性細胞
比が従来の血液キメラマウスに比べて高いので、優れた
ＨＩＶ感染症モデルとなり得る。また、Ｔ細胞の増殖分
化を解析するためのモデル、腫瘍細胞移植による腫瘍免
疫の効果を調べるためのレシピエントとしても極めて有
用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトＴ細胞の分化
増殖またはその機能等のインビボ（in vivo）での解析
のための動物モデルとして有用な、ヒトＴ細胞が生着し
た新規マウスおよびその作出方法に関する。より詳細に
は、本発明は、Ｂ細胞およびＴ細胞をはじめとする免疫
細胞を欠損する近交系マウスにヒト由来骨組織を移植す
ることを特徴とする該新規マウスの作出方法、および該
方法により得られうる、長期にわたり血中にヒトＴ細胞
が高比率で存在する新規マウスに関する。さらに、本発
明は、該新規マウスのヒト免疫不全ウイルス（以下、Ｈ
ＩＶと略称する）感染モデルとしての応用に関する。

【０００２】

【従来の技術】ＡＩＤＳ克服への多くの努力がこれまで
になされてきているが、いまだ高い罹患率、死亡率を誇
るこの感染症の決定的な治療法は確立されていない。Ａ
ＩＤＳ治療の動物レベルでの研究における大きな障壁の
１つは、マウスのような汎用の小動物にはＨＩＶが感染
しないということである。最近ではrhesus monkey のよ
うな霊長類を用いた実験も行われてはいるが、それらは
非常に高価であり、研究室レベルでの実験に頻用するこ
とは困難である。したがって、ＨＩＶに感染し得るよう
に人為的に処理されたマウスモデルの開発が大いに望ま
れている。

【０００３】上記の課題を解決するための主要なアプロ
ーチは、ＨＩＶが感染し得るヒト由来免疫細胞をマウス
体内に存在させることである。そのため、ヒト血液細
胞、特にＴ細胞を含むかそれらを産生し得る組織をマウ
スに移植して、当該細胞を有するマウスモデルを作出し
ようとする試みが数多くなされてきた。例えば、J.M. M
cCune らは、遺伝子再構成能に異常があるために成熟し
たＢおよびＴ細胞が先天的に欠損したＣ．Ｂ．−１７
ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス（以下、ＳＣＩＤマウスと称
する）にヒト胎児組織（胸腺と肝臓、骨）を腎皮膜下に
移植することにより、肝臓や骨髄由来の造血幹細胞が移
植ヒト胸腺を経由して末梢に出現し、末梢血中にヒトＴ
細胞が同定されるＳＣＩＤ−ｈｕマウスを作製した（Sc
ience, 241(4873): 1632-1639 (1988)）。しかし、この
マウスは、たいていの場合ヒト細胞の出現頻度は非常に
低く、また、ヒト胎児組織の入手も容易ではないため、
広く普及するには至っていない。一方、ヒト末梢血の有
核細胞もしくはＩＬ−２で刺激した末梢血をＳＣＩＤマ
ウスの腹腔内に投与することにより作成され、同様にヒ
トＴ細胞が末梢血中に出現するｈｕ−ＰＢＬ−ＳＣＩＤ
マウスは（D.E. Mosierら, Nature, 335(6187): 256-25
9 (1988)）、ＳＣＩＤ−ｈｕマウスに比べてその作出が
圧倒的に容易であることから、現在ＨＩＶ感染の実験的
モデルとして数多く用いられている。しかしながら、こ
のマウスでもやはりヒトＴ細胞の出現頻度は低く、ま
た、ＣＤ４⁺細胞／ＣＤ８⁺細胞比（以下、単にＣＤ４／
ＣＤ８比と略称する）が通常とは異なり一般にＣＤ８陽
性細胞が優性になる、といった欠点があった。いずれの
マウスモデルもヒトＴ細胞の末梢血に占める頻度が少な
いことから、放射線照射や抗ＮＫ抗体の投与により血中
のＴ細胞キメリズムを改善する試みがなされてきた（D.
K. Kimら, Eur. J. Haematol., 61(2): 93-99 (199
8)）。

【０００４】最近開発されたＮＯＤ／Ｓｈｉ−ｓｃｉｄ
Ｊｉｃ（ＮＯＤ／ＳＣＩＤ）マウスは、従来のＳＣＩ
Ｄマウスに比べて、ＮＫ細胞やマクロファージのような
Ｔ細胞およびＢ細胞以外の免疫細胞の活性も低く、５〜
１０倍もヒト細胞が生着しやすいマウスである（R.M. H
esseltonら, J. Infect. Dis., 172(4): 974-982 (199
5)）。しかし、このマウスをｈｕ−ＰＢＬ−ＳＣＩＤの
レシピエントとして使用してもやはりＣＤ８陽性細胞優
性であり、ＨＩＶ感染のモデルとしてはいまだ不十分で
あると考えられた。

【０００５】一方、成人由来の骨組織をＳＣＩＤマウス
に移植したとする報告はこれまでにいくつか見られるも
のの（Y. Heikeら, Blood, 86(2): 524-530 (1995)）、
ヒトＴ細胞が生着したとするものはない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】このように、従来のヒ
トＴ細胞生着マウスはいずれも、血中へのヒトＴ細胞の
出現頻度が低い、その効果が長期にわたって持続しな
い、および／またはＣＤ４／ＣＤ８比がヒトにおけるそ
れと異なりＣＤ８陽性細胞優性である、等の欠点を有し
ており、未だＨＩＶ感染症モデルとして満足のいく実験
的マウスモデルは得られていないのが現状である。した
がって、本発明の目的は、長期間にわたって血中に高頻
度にヒトＴ細胞が出現し、且つＣＤ４／ＣＤ８比がヒト
におけるそれに近似するようなヒトＴ細胞生着マウスお
よびその作出方法を提供することであり、該マウスモデ
ルをＨＩＶに感染させることによって、従来よりも優れ
たＨＩＶ感染マウスモデルを提供することである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、Ｂ細胞お
よびＴ細胞をはじめとする免疫細胞が欠損した近交系マ
ウス、特にＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスをレシピエントとし
て、成人由来の骨組織を移植した結果、Ｔ細胞が増殖す
るのみならず、長期にわたりその高い血中キメリズムを
示すマウスを作出することに成功した。また、これらの
マウスでは血中および各臓器におけるＣＤ４／ＣＤ８比
が、従来公知のマウスモデルよりも有意に高く、ＨＩＶ
感染モデルとしてより好適であることを確認した。さら
に、このマウスにＨＩＶを実際に感染させて、感染後の
ＣＤ４陽性Ｔ細胞の減少を確認して該マウスモデルが優
れたＨＩＶ感染モデルとなることを実証して本発明を完
成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明は以下の通りである。 （１）少なくとも２ヶ月間ヒト骨組織由来のＴ細胞が末
梢血中に存在し、且つその間のある時期において血中の
ヒト細胞の割合が少なくとも１０％、好ましくは３０％
を超えることを特徴とするヒトＴ細胞が生着したマウ
ス。 （２）ヒト由来骨組織を、少なくともＢ細胞およびＴ細
胞を含む免疫細胞を欠損する近交系マウス、好ましくは
さらにＮＫ細胞および／またはマクロファージ活性に欠
損のある近交系マウス、就中ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスに
移植する、好ましくは該レシピエントの腹膜外腔に移植
することを特徴とする、ヒトＴ細胞が生着したマウスの
作出方法。 （３）上記（２）の方法により得られうるヒトＴ細胞が
生着したマウスであって、少なくとも移植後約１ヶ月か
ら約３ヶ月までの２ヶ月間ヒト骨組織由来のＴ細胞が末
梢血中に存在し、且つその間のある時期において血中の
ヒト細胞の割合が少なくとも１０％、好ましくは３０％
を超えることを特徴とするマウス。 （４）該ヒトＴ細胞の一部がＨＩＶに感染し得るもので
ある上記（１）または（３）のマウス。 （５）上記（４）のマウスをＨＩＶに感染させることを
特徴とする実験的ＨＩＶ感染マウスモデルの作出方法。 （６）上記（５）の方法により得られうる実験的ＨＩＶ
感染マウスモデル。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明のマウスは、少なくとも２
ヶ月間ヒト骨組織由来のＴ細胞が末梢血中に存在し、且
つその間のある時期において血中のヒト細胞の割合が少
なくとも１０％を超えるものであれば、いかなる方法に
より作出されるものであってもよく、その起源も特に制
限されない。しかしながら、好ましくは、本発明のマウ
スは、ヒト由来骨組織を、少なくともＢ細胞およびＴ細
胞を含む免疫細胞を欠損する近交系マウス、好ましくは
さらにＮＫ細胞および／またはマクロファージ活性に欠
損のある近交系マウスに移植することにより作出される
ものである。Ｂ細胞およびＴ細胞を欠損する近交系マウ
スとしては、例えばＳＣＩＤマウス等が挙げられる。ま
た、さらにＮＫ細胞および／またはマクロファージ等の
他の免疫細胞の活性に欠損のある近交系マウスとして
は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスが例示される。このよう
に、先天性免疫細胞欠損マウスにヒト由来骨組織を移植
することにより作出されたヒトＴ細胞生着マウスでは、
移植後約４週間目から末梢血中にヒトＴ細胞が出現し、
ある時期において血液細胞に占めるヒト細胞の割合が少
なくとも１０％を超える。好ましくはこのようなマウス
では、血液細胞に占めるヒト細胞の割合が少なくとも３
０％を超え、最高では５０％を超える場合もある。この
ような高頻度の出現は、少なくとも移植後約３ヶ月目ま
で持続する。

【００１０】本発明の特に好ましい実施態様において
は、レシピエントとしてＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスが使用
される。マウスの性別・齢等は特に制限はないが、例え
ば、８〜１２週齢のものを用いることができる。マウス
の飼育管理はコンベンショナルなものであってよいが、
好ましくはＳＰＦグレードのものが使用される。

【００１１】本発明のマウスにおいて、移植されるヒト
骨組織は、骨髄細胞を含むヒト由来の骨組織であれば、
その部位やドナーの状態等は特に制限されないが、好ま
しくは胎児以外のヒト骨組織、より好ましくは成人由来
の骨組織である。例えば、成人の肋骨由来の骨組織など
が挙げられる。しかしながら、遊離の骨髄細胞を使用す
ると、Ｔ細胞の生着は認められるが、その血中への出現
頻度は低くその効果も長期に及ばないことから、移植さ
れる骨組織は、骨髄の立体構造が維持され、また、マウ
ス体内でヒト体内の微小環境を再現できるように間質
（stroma）細胞を含むものであることが好ましい。

【００１２】移植される骨組織は、例えば、手術時に摘
出された骨を直後に、あるいは使用時まで０〜４℃程度
の低温で保存した後、骨髄組織が露出するように６〜８
ｍｍ程度の大きさに無菌的に細切する。移植骨組織片中
に含まれる骨髄細胞は１０⁶〜１０⁹ 個程度、好ましく
は１０⁷ 〜１０⁸個程度、最も好ましくは２〜５×１０
⁷ 程度である。

【００１３】所望により、骨組織の移植に先だって、レ
シピエントマウスの自己免疫系の機能を低下させる目的
で、マウスに放射線を照射したりあるいは抗ＮＫ抗体を
投与することができるが、前処理をせずに移植を行う態
様も同様に好ましい。放射線を照射する場合、例えば、
３．０〜３．２Ｇｙ程度の亜致死線量を照射する。

【００１４】ヒト骨組織は、それを移植されたマウスに
結果としてヒトＴ細胞が生着し得る限りいずれの部位に
移植されてもよいが、好ましくは皮下、腹膜外腔に移植
される。この際、骨組織は露出した骨髄面が腹膜に密着
するように移植することが好ましい。

【００１５】移植後のマウスは、移植前と同様の条件下
で飼育管理すればよい。移植後、末梢血中へのヒトＴ細
胞の出現は、２〜４週間毎に採血して、これを例えばフ
ローサイトメトリー法で分析することによりモニタリン
グすることができる。例えば、眼底静脈叢や尾静脈等よ
り採取した末梢血から赤血球を溶血して白血球を濃縮
し、抗ヒトＣＤ４５抗体および種々の分化抗原（例え
ば、ＣＤ３、ＣＤ１３、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ３
４、ＣＤ５６等）に対する抗体で二重染色して、細胞自
動選別機能を有するフローサイトメーター（ＦＡＣＳ）
を用いて解析する。Ｔ細胞はＣＤ３陽性であるから、ヒ
トＴ細胞はＣＤ４５陽性／ＣＤ３陽性として検出され
る。

【００１６】本発明のマウスは、Ｔ細胞に加えてヒトＢ
細胞がさらに生着する場合がある。Ｂ細胞の生着は、移
植時に放射線を照射しないマウスでより高頻度に出現す
る。また、Ｂ細胞の生着はＴ細胞より約２週間遅れる傾
向が認められる。Ｂ細胞はＣＤ１９陽性であるから、上
述のフローサイトメトリーにおいてＣＤ４５陽性／ＣＤ
１９陽性として検出することができる。

【００１７】本発明のマウスは、末梢血中だけでなく各
種臓器内にヒトＴ細胞が出現する。ヒトＴ細胞のキメリ
ズムは臓器によって異っており、肝臓および脾臓に多く
出現するが、骨髄では少ない。末梢血や胸腺においては
その中間的分布を示す。

【００１８】本発明のマウスは、従来公知のヒトＴ細胞
生着マウスと比較してＣＤ４／ＣＤ８比が高いことを特
徴とする。この傾向は、他の臓器よりも末梢血において
特に高い。ＣＤ４陽性Ｔ細胞は、他のＴ細胞やＢ細胞の
機能を補助するヘルパー細胞（ＣＤ４５白血球共通抗原
のうちＣＤ４５ＲＯを発現する）またはキラーＴ細胞等
を誘導するヘルパー／インデューサー細胞（ＣＤ４５白
血球共通抗原のうちＣＤ４５ＲＡを発現する）である。
前者は感作された記憶細胞、後者は未熟なＴ細胞に相当
する。一方、ＣＤ８陽性Ｔ細胞は細胞傷害性のキラーＴ
細胞である。

【００１９】本発明のマウスの末梢血中に出現するヒト
Ｔ細胞はまた、ヒト末梢血Ｔ細胞の９０％以上を占め
る、αβＴ細胞レセプター（αβＴＣＲ）を発現するＴ
細胞であり、さらにＣＤ４５ＲＯ陽性の成熟記憶細胞タ
イプのＴ細胞である。また、該ヒトＴ細胞は一部しか活
性化マーカーを発現しておらず、あまり強く活性化され
てはいない。

【００２０】本発明のマウス末梢血中に出現するヒトＴ
細胞はポリクローナル性であり、種々のタイプのＶβマ
ーカー抗原を発現する細胞が混在している。

【００２１】本発明のマウスの末梢血中に出現するヒト
Ｔ細胞のさらなる特徴は、ＣＤ４陽性細胞の一部におい
てＨＩＶ感染のコレセプター（co-receptor）であるＣ
ＸＣＲ４を発現していることである。したがって、本発
明のマウスはＨＩＶ感染症モデルとして好適に使用し得
る。

【００２２】本発明のマウスに、感染に十分な量のＨＩ
Ｖを投与（例えば、静脈内、動脈内、筋肉内、皮内、腹
腔内投与等）することにより、ＨＩＶ感染症マウスモデ
ルを作出することができる。ＨＩＶはヒトＴ細胞のうち
ＣＤ４陽性細胞に特異的に感染するので、ウイルス感染
はＣＤ４／ＣＤ８比の減少をモニタリングすることによ
り確認することができる。

【００２３】本発明のマウスは、ＨＩＶ感染モデルとし
て以外に、例えば、Ｔ細胞の発生と分化の解析用のモデ
ルや腫瘍細胞移植による腫瘍免疫の効果を調べるための
レシピエントとしても好適に使用することができる。

【００２４】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、これらは単なる例示であって、本発明の範
囲を何ら限定するものではない。

【００２５】実施例１ マウスへのヒト骨組織の移植 ＮＯＤ／Ｓｈｉ−ｓｃｉｄ Ｊｉｃマウス（日本クレア
より購入）を筑波大学動物実験センターで飼育し、８〜
１２週齢のものをレシピエントとして用いた。ヒト骨組
織は、筑波大学胸部外科で成人の肺癌患者から手術時に
摘出された肋骨を、インフォームドコンセントを得た後
譲り受け、移植まで数時間４℃で保存した。該肋骨を、
骨髄組織が露出するように、６〜８ｍｍの大きさ（骨髄
細胞数にして約２〜５×１０⁷個）に無菌的に細切し
た。亜致死線量（３００ｃＧｙ）の放射線を照射したＮ
ＯＤ／ＳＣＩＤマウスの皮下、腹膜外腔に、骨髄面が腹
膜に密着するように移植した。なお、移植の際は、マウ
スはネンブタール腹腔内投与により麻酔した。

【００２６】比較例１ マウスへの浮遊骨髄細胞の移植 実施例１で得られた肋骨片より骨を除いて浮遊細胞とし
た骨髄細胞（約２×１０⁷個）をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウ
スに尾静脈注射して移植した。

【００２７】試験例１ 骨組織または骨髄細胞移植マウ
スの末梢血キメリズムの推移 実施例１で得られた骨組織移植マウスの末梢血を、移植
後２週間以降に１〜４週間毎の様々な間隔で麻酔下に眼
底静脈叢より採取した。赤血球を塩化アンモニウムで溶
血し、濃縮した白血球を抗ヒトＣＤ４５抗体および種々
の分化抗原（ＣＤ３、ＣＤ１３、ＣＤ１９、ＣＤ３３、
ＣＤ３４およびＣＤ５６）に対する抗体で染色し、セル
ソーター（FACS Vantage; Becton Dickinson社製）で解
析した。白血球細胞を上記抗体と混和した後、染色用培
地で２回洗浄し、死細胞をゲートアウトするためＰＩを
さらに加えた。ＦＡＣＳの解析は３または４色にて行
い、少なくとも白血球３０，０００個以上のデータを解
析した。その結果、ヒト細胞（ＣＤ４５陽性細胞）は移
植後２週間ではマウス末梢血中に検出されず、４週より
出現した。さらに移植後８週にはその頻度は増加し、あ
るマウスでは移植後１０週の時点で５０％を超える細胞
がヒト由来となった。末梢血中へのヒト細胞の出現はそ
の後も持続し、少なくとも移植後１２週までは検出され
た（図１Ａ）。生着した細胞の大多数はＴ細胞であり、
移植後８週におけるＣＤ４５陽性細胞に占めるＣＤ３陽
性細胞（すなわち、Ｔ細胞）の割合は６９．５±１７．
５％（ｎ＝９）であった（図２ｂ）。一方、比較例１で
得られた浮遊骨髄細胞移植マウスの末梢血は、ヒト細胞
キメラになるもののキメリズムは低く（図１Ｂ）、また
Ｔ細胞はほとんど認められなかった（図２ｃ）。

【００２８】試験例２ ヒト骨組織移植マウスにおける
Ｂ細胞の生着 実施例１で得られたマウスより試験例１と同様にして採
取し、処理した末梢血由来の濃縮白血球を、抗ＣＤ１９
抗体と抗ＣＤ３抗体とで染色して、ＦＡＣＳで分析し
た。その結果、一部のマウスでは、Ｔ細胞とともにＢ細
胞の生着も認められた。Ｂ細胞の生着は放射線照射レシ
ピエントマウスの３％に、非照射マウスの４２％に認め
られた。また、Ｂ細胞はＴ細胞の生着より２週ほど遅れ
て検出される傾向があった（図３）。一方１匹を除き、
全てのマウスにミエロイド、エリスロイドおよびＮＫ細
胞は同定されなかった。

【００２９】試験例３ ヒト骨組織移植マウスの外観お
よび病理学的検索 実施例１で得られたヒト骨組織移植マウスは成長も良
く、下痢や体重減少といった移植片対宿主病（ＧＶＨ
Ｄ）様の兆候を認めなかった。移植後８週では移植した
ヒト骨組織の骨髄部分は脂肪組織に置換されていた。胸
腺は同定できないか、存在しても非常に小さかった。脾
臓や肝臓の腫大はなく、腫脹も発赤も認めなかった。末
梢血で２０％程度のキメリズムを示したマウスを安楽死
させ、肝臓および脾臓を摘出し、ホルマリン固定した
後、肝臓をヘマトキシリン−エオシン染色し、また、肝
臓および脾臓に酵素標識した抗ＣＤ３抗体を用いて免疫
染色を行った。その結果、肝臓ではヒトリンパ球は正常
組織と比較的境界明瞭で異型リンパ球があたかもコロニ
ーを形成しているかのように存在していた（図４および
５）。脾臓では免疫組織染色の結果、ヒトリンパ球は瀰
慢性に存在しているかのように見えた（図６）。腎臓で
は急性尿細管壊死の所見はなく、ヒトリンパ球の浸潤は
認めるものの、ＧＶＨ反応とは異なる様相を呈した。

【００３０】試験例４ 各臓器でのキメリズム 実施例１で得られたマウスの一部を安楽死させ、骨髄、
脾臓、肝臓、胸腺および移植骨組織を摘出して、それぞ
れから血球細胞を分離し濃縮白血球を得た。これを抗ヒ
トＣＤ４５抗体および抗ＣＤ４抗体で染色し、ＦＡＣＳ
を用いて解析した。その結果、ヒトリンパ球は肝臓と脾
臓に多く、骨髄には少なく、末梢血ではその中間程度の
分布を示した（図７Ａ）。選別されたＣＤ４５陽性細胞
について、さらに抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体を用
いてＦＡＣＳ解析を実施した。その結果、ヒトＴ細胞の
ほとんどは、ＣＤ４陽性もしくはＣＤ８陽性のシングル
ポジティブＴ細胞であったが、一部にＣＤ４陽性／ＣＤ
８陽性のダブルポジティブＴ細胞が存在した（図７
Ｂ）。このことはヒトＴ細胞がマウス臓器内で分化して
いることを示唆している。

【００３１】試験例５ マウス末梢血中のヒトＴ細胞の
表現型 生着したヒトＴ細胞の特性をさらに明確にするため、種
々の抗体を用いてヒト細胞を染色した。試験例１と同様
にして調製した濃縮白血球を、抗ＣＤ４抗体と抗ＣＤ８
抗体、抗αβＴＣＲ抗体と抗γδＴＣＲ抗体、抗ＣＤ４
５ＲＡ抗体と抗ＣＤ４５ＲＯ抗体、並びに抗ＣＤ６９抗
体と抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体でそれぞれ染色し、ＦＡＣＳで
解析した。その結果、このＴ細胞はαβＴＣＲを持ち、
ＣＤ４５ＲＡ陰性・ＲＯ陽性であることから成熟した記
憶細胞タイプのＴ細胞と思われた。また、この細胞には
活性化マーカーであるＣＤ６９やＨＬＡ−ＤＲは一部に
しか発現していなかった（図８Ｂ）。

【００３２】試験例６ ヒトＴ細胞のクローナリティー
の確認 生着したヒトＴ細胞のクローナリティーを確認するた
め、ＦＡＣＳとＲＴ−ＰＣＲを行った。ＦＡＣＳでは抗
Ｖβ３ＴＣＲ抗体、抗Ｖβ５．２ＴＣＲ抗体、抗Ｖβ
８．１および８．２抗体を用い、ＣＤ４５、ＣＤ３とと
もに染色した（表１）。またキメラマウスの末梢血ＲＮ
ＡからｃＤＮＡに逆転写し、２３種類のＶβ特異的プラ
イマーでＲＴ−ＰＣＲを行った（表２）。表より明らか
なように、ヒトＴ細胞のポリクローナリティーが確認で
きた。

【００３３】

【表１】

【００３４】

【表２】

【００３５】試験例７ マウス末梢血中のヒトＴ細胞に
おけるＨＩＶレセプターの発現 ＨＩＶ感染モデルとして用いることができるかを検討す
るために、ＣＤ４陽性細胞にＨＩＶのコレセプターであ
るＣＸＣＲ４が発現しているかをＦＡＣＳにより確認し
た（図９）。その結果、ヒト末梢血に比して頻度は低い
ものの、ＣＤ４陽性／ＣＸＣＲ４陽性のダブルポジティ
ブＴ細胞が存在することが確認された。

【００３６】実施例２ ＨＩＶ感染モデルの作製 そこで、骨組織移植後７週で、末梢血中のヒトＴ細胞キ
メリズムが８．３％のマウスにＨＩＶを静注により感染
させ、その２週後に採血してＣＤ４／ＣＤ８比の変化を
ＦＡＣＳにて解析した（図１０）。その結果、キメリズ
ムは５．５％に減少し、ＣＤ４／ＣＤ８比は２０．１％
から４．０％となり、ＣＤ４陽性細胞が有意に減少し
た。血清中のウイルス抗原ｐ２４もＥＬＩＳＡ法により
検出可能で、この感染マウスはウイルス血症となってい
ることが判明した。

【００３７】

【発明の効果】本発明の方法によれば、長期間にわたっ
て末梢血中に高頻度にヒトＴ細胞が出現する血液キメラ
マウスを作製することが可能であり、ヒトＴ細胞の分化
増殖およびその機能のインビボでの解析の有用な手段と
なる。また、腫瘍細胞を移植してその免疫応答を調べる
ためのレシピエントとしても有用である。さらに、本発
明の方法により作出される血液キメラマウスは、従来の
マウスよりもＣＤ４／ＣＤ８比が高く、また、ＨＩＶレ
セプターであるＣＤ４およびＣＸＣＲ４マーカーの両者
を発現するＴ細胞を含むので、ＨＩＶ感染症のモデルと
して極めて有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒト骨組織（Ａ）およびヒト骨髄細胞（Ｂ）を
移植されたマウスの末梢血細胞に占めるヒト細胞の割合
の変化を示す図である（図中、＊は途中で死亡したこと
を、＊＊は他の分析のために処分したことを示してい
る）。

【図２】ヒト骨組織（ｂ）およびヒト骨髄細胞（ｃ）を
移植されたマウスの末梢血細胞に占めるヒトＴ細胞およ
びヒト非Ｔ細胞の割合を示す図である。（ａ）はコント
ロール（ヒト末梢血）である（各象限の肩の数値は全体
に占める割合（％）を示している）。

【図３】ヒト骨組織を移植されたマウスの末梢血におけ
るヒトＴ細胞およびヒトＢ細胞の出現の変化を示す図で
ある（ＣＤ４５陽性細胞のみをゲーティングした）。

【図４】ヒト骨組織を移植されたマウス（上）および未
処理のレシピエントマウス（下）の肝臓のヘマトキシリ
ン−エオシン染色像を示す図である。

【図５】ヒト骨組織を移植されたマウス（上）および未
処理のレシピエントマウス（下）の肝臓の免疫染色像を
示す図である。

【図６】ヒト骨組織を移植されたマウスの脾臓の免疫染
色像を示す図である。

【図７】ヒト骨組織を移植されたマウスの骨髄、脾臓、
肝臓、末梢血、胸腺および移植骨組織におけるヒト細胞
の出現頻度（Ａ）、並びに該ヒト細胞のＣＤ４陽性およ
びＣＤ８陽性の割合（Ｂ）を示す図である（各象限の肩
の数値は全体に占める割合（％）を示している）。

【図８】ヒト末梢血中のＴ細胞（Ａ）およびヒト骨組織
を移植されたマウスの末梢血に出現するヒトＴ細胞
（Ｂ）の特性を示す図である（ＣＤ３陽性細胞のみをゲ
ーティングした）。

【図９】ヒト骨組織を移植されたマウス（Ｂ）の末梢血
に出現するヒトＴ細胞の一部がＣＤ４およびＣＸＣＲ４
のダブルポジティブＴ細胞であることを示す図である
（矢印で示した領域の細胞がＨＩＶ感染性である）。
（Ａ）はコントロール（ヒト末梢血）である。いずれの
場合もＣＤ３陽性細胞のみをゲーティングした。

【図１０】ヒト骨組織を移植されたマウスの末梢血に出
現するＣＤ４陽性ヒトＴ細胞が、ＨＩＶ感染により有意
に減少することを示す図である（各象限の肩の数値は全
体に占める割合（％）を示している）。測定はＣＤ３陽
性細胞のみをゲーティングして行った。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 金 東具 アメリカ合衆国、ニュー ヨーク州 10021、ニュー ヨーク、イースト シッ クスティー サード ストリート、500、 アパートメント ８ジー Ｆターム(参考） 4B065 AA91X AA94X AC20 BD12 CA44 CA46 CA60

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも２ヶ月間ヒト骨組織由来のＴ
   細胞が末梢血中に存在し、且つその間のある時期におい
   て血中のヒト細胞の割合が少なくとも１０％を超えるこ
   とを特徴とするヒトＴ細胞が生着したマウス。
2. 【請求項２】 ある時期において血中のヒト細胞の割合
   が少なくとも３０％を超えることを特徴とする請求項１
   記載のマウス。
3. 【請求項３】 ヒト由来骨組織を、少なくともＢ細胞お
   よびＴ細胞を含む免疫細胞を欠損する近交系マウスに移
   植することを特徴とする、ヒトＴ細胞が生着したマウス
   の作出方法。
4. 【請求項４】 レシピエントが、さらにＮＫ細胞および
   ／またはマクロファージ活性に欠損のある近交系マウス
   である請求項３記載の方法。
5. 【請求項５】 レシピエントがＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス
   である請求項４記載の方法。
6. 【請求項６】 ヒト由来骨組織をレシピエントの腹膜外
   腔に移植することを特徴とする請求項３〜５のいずれか
   に記載の方法。
7. 【請求項７】 請求項３〜６のいずれかに記載の方法に
   より得られうるヒトＴ細胞が生着したマウスであって、
   少なくとも移植後約１ヶ月から約３ヶ月までの２ヶ月間
   ヒト骨組織由来のＴ細胞が末梢血中に存在し、且つその
   間のある時期において血中のヒト細胞の割合が少なくと
   も１０％を超えることを特徴とするマウス。
8. 【請求項８】 ある時期において血中のヒト細胞の割合
   が少なくとも３０％を超えることを特徴とする請求項７
   記載のマウス。
9. 【請求項９】 該ヒトＴ細胞の一部がヒト免疫不全ウイ
   ルスに感染し得るものである請求項１、２、７および８
   のいずれかに記載のマウス。
10. 【請求項１０】 請求項９記載のマウスをヒト免疫不全
    ウイルスに感染させることを特徴とする実験的ヒト免疫
    不全ウイルス感染マウスモデルの作出方法。
11. 【請求項１１】 請求項１０記載の方法により得られう
    る実験的ヒト免疫不全ウイルス感染マウスモデル。