JP2000060532A - アスタキサンチン含有ヘマトコッカスの製造方法 - Google Patents
アスタキサンチン含有ヘマトコッカスの製造方法Info
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- JP2000060532A JP2000060532A JP10241639A JP24163998A JP2000060532A JP 2000060532 A JP2000060532 A JP 2000060532A JP 10241639 A JP10241639 A JP 10241639A JP 24163998 A JP24163998 A JP 24163998A JP 2000060532 A JP2000060532 A JP 2000060532A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明が解決しようとする課題は、屋外培養
池で捕食あるいは寄生生物の影響を軽減せしめた、高い
アスタキサンチン含有ヘマトコッカスの工業的な製造方
法を提供することにある。 【解決手段】 藻類ヘマトコッカスを閉鎖型培養装置で
増殖させ、次いで屋外培養池において、ヘマトコッカス
中にアスタキサンチンを生成蓄積させ、ヘマトコッカス
を補食あるいは寄生する生物が培養池中に夾雑、増殖す
る前に培養を完了することを特徴とする、２段階培養法
によるアスタキサンチン含有ヘマトコッカスの製造方
法。
池で捕食あるいは寄生生物の影響を軽減せしめた、高い
アスタキサンチン含有ヘマトコッカスの工業的な製造方
法を提供することにある。 【解決手段】 藻類ヘマトコッカスを閉鎖型培養装置で
増殖させ、次いで屋外培養池において、ヘマトコッカス
中にアスタキサンチンを生成蓄積させ、ヘマトコッカス
を補食あるいは寄生する生物が培養池中に夾雑、増殖す
る前に培養を完了することを特徴とする、２段階培養法
によるアスタキサンチン含有ヘマトコッカスの製造方
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、食材用色素とし
て、また化粧品、医薬品、健康食品として、更には魚介
類や卵黄等の食材の色揚げ等に有用なアスタキサンチン
を３％以上含有するヘマトコッカスの工業的な製造方法
に関する。
て、また化粧品、医薬品、健康食品として、更には魚介
類や卵黄等の食材の色揚げ等に有用なアスタキサンチン
を３％以上含有するヘマトコッカスの工業的な製造方法
に関する。
【０００２】
【従来の技術】アスタキサンチンは赤色を呈するカロテ
ノイド色素の一種で、自然界に広く分布している。例え
ば、マダイやサケ・マス等の魚類、あるいは甲殻類等
は、その表皮、筋肉又は外殻等にアスタキサンチンを蓄
積し、その為に表皮あるいは肉が美しい赤色もしくは桃
色を呈するが、これらの生物は自らアスタキサンチンを
生合成することはできない。
ノイド色素の一種で、自然界に広く分布している。例え
ば、マダイやサケ・マス等の魚類、あるいは甲殻類等
は、その表皮、筋肉又は外殻等にアスタキサンチンを蓄
積し、その為に表皮あるいは肉が美しい赤色もしくは桃
色を呈するが、これらの生物は自らアスタキサンチンを
生合成することはできない。
【０００３】この為、アスタキサンチンは天然物由来
で、食材用色素として有用であると共に、これら魚介類
を養殖する場合には、通常飼料にアスタキサンチンを添
加し、着色、いわゆる色揚げが行われている（特開昭54
-70995号公報、特開平7-67546号公報）。また鶏卵の色
調改善等を目的とした家禽用飼料等にも利用されており
（特許2561198号号公報）、更に最近はアスタキサンチ
ンの持つ強力な抗酸化作用が注目され、化粧品や医薬
品、健康食品としての用途も検討されている（特開昭63
-83017号公報、特開平2-49091号公報）。
で、食材用色素として有用であると共に、これら魚介類
を養殖する場合には、通常飼料にアスタキサンチンを添
加し、着色、いわゆる色揚げが行われている（特開昭54
-70995号公報、特開平7-67546号公報）。また鶏卵の色
調改善等を目的とした家禽用飼料等にも利用されており
（特許2561198号号公報）、更に最近はアスタキサンチ
ンの持つ強力な抗酸化作用が注目され、化粧品や医薬
品、健康食品としての用途も検討されている（特開昭63
-83017号公報、特開平2-49091号公報）。
【０００４】これらに用いられるアスタキサンチン源と
しては、化学合成品の他、アスタキサンチンを含有す
る、オキアミ・アミエビ類やファフィア酵母類等があ
る。市場では安全性の面から天然品の方がより好まれて
おり、オキアミから色素を抽出精製する方法や、ファフ
ィア酵母の培養法等が盛んに研究されている（特開平6-
200179号公報、特開平8-508885号公報）。
しては、化学合成品の他、アスタキサンチンを含有す
る、オキアミ・アミエビ類やファフィア酵母類等があ
る。市場では安全性の面から天然品の方がより好まれて
おり、オキアミから色素を抽出精製する方法や、ファフ
ィア酵母の培養法等が盛んに研究されている（特開平6-
200179号公報、特開平8-508885号公報）。
【０００５】しかしながら、これら生物はアスタキサン
チン含有量が低く、抽出や精製等にも問題があり、現在
のところ化学合成品が最も多く使用されているが、安全
性の観点から、天然物由来のアスタキサンチンを安価に
使用したいとの要請は強い。
チン含有量が低く、抽出や精製等にも問題があり、現在
のところ化学合成品が最も多く使用されているが、安全
性の観点から、天然物由来のアスタキサンチンを安価に
使用したいとの要請は強い。
【０００６】藻類のヘマトコッカスは、上述の生物に比
べてアスタキサンチン含有量が顕著に高い為、天然物由
来のアスタキサンチン源として近年特に注目されてい
る。しかしながら、ヘマトコッカスがアスタキサンチン
を生成蓄積することは古くから知られ（T. W. Goodwin,
et. al., Biochem. J., 57, p376 (1954)）、以来様々
な研究が為されて来たにもかかわらず、大量培養技術は
未だに確立されていない。その理由は、ヘマトコッカス
が比較的弱い藻類であり、培養しにくいことである。
べてアスタキサンチン含有量が顕著に高い為、天然物由
来のアスタキサンチン源として近年特に注目されてい
る。しかしながら、ヘマトコッカスがアスタキサンチン
を生成蓄積することは古くから知られ（T. W. Goodwin,
et. al., Biochem. J., 57, p376 (1954)）、以来様々
な研究が為されて来たにもかかわらず、大量培養技術は
未だに確立されていない。その理由は、ヘマトコッカス
が比較的弱い藻類であり、培養しにくいことである。
【０００７】ヘマトコッカス中に多量にアスタキサンチ
ンを生成蓄積させる為には、多量の強い光を照射するこ
とが重要であり、藻類を光合成培養する為には、光源と
して太陽光が最も安価かつ強力で、従って、通常は屋外
の太陽光下の池型の培養装置（以下、屋外培養池とい
う）が用いられる。
ンを生成蓄積させる為には、多量の強い光を照射するこ
とが重要であり、藻類を光合成培養する為には、光源と
して太陽光が最も安価かつ強力で、従って、通常は屋外
の太陽光下の池型の培養装置（以下、屋外培養池とい
う）が用いられる。
【０００８】しかし、屋外培養池でヘマトコッカスを培
養する場合は、ヘマトコッカスを補食する動物や寄生す
る微生物が外部から培養池に混入すること（以下夾雑と
いう）を防ぐことは非常に困難で、従来、屋外培養池で
の商業生産に成功した藻類は、増殖の速いクロレラ、あ
るいはアルカリ又は高塩濃度条件下で培養することによ
り、夾雑を防止できるスピルリナやドナリエラに限られ
ていた。
養する場合は、ヘマトコッカスを補食する動物や寄生す
る微生物が外部から培養池に混入すること（以下夾雑と
いう）を防ぐことは非常に困難で、従来、屋外培養池で
の商業生産に成功した藻類は、増殖の速いクロレラ、あ
るいはアルカリ又は高塩濃度条件下で培養することによ
り、夾雑を防止できるスピルリナやドナリエラに限られ
ていた。
【０００９】ヘマトコッカスをコストの安い屋外培養池
で培養すると、数日後に繊毛虫、ワムシ等の動物プラン
クトンや、真菌類が夾雑してヘマトコッカスを補食ある
いは寄生する為、ヘマトコッカスの培養は不可能であっ
た。
で培養すると、数日後に繊毛虫、ワムシ等の動物プラン
クトンや、真菌類が夾雑してヘマトコッカスを補食ある
いは寄生する為、ヘマトコッカスの培養は不可能であっ
た。
【００１０】捕食あるいは寄生生物の夾雑を防止する為
に、チューブラー等の様々な閉鎖型培養装置や培養方法
が考案されてきた（特公平2-501189号公報、特開平5-68
585号公報）。しかしいずれも、装置が複雑で製造コス
トが高くなること、夾雑を十分に防止できないこと等の
問題点があり、研究段階にとどまっている。
に、チューブラー等の様々な閉鎖型培養装置や培養方法
が考案されてきた（特公平2-501189号公報、特開平5-68
585号公報）。しかしいずれも、装置が複雑で製造コス
トが高くなること、夾雑を十分に防止できないこと等の
問題点があり、研究段階にとどまっている。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】本発明が解決しようと
する課題は、屋外培養池で捕食あるいは寄生生物の影響
を軽減せしめた、高いアスタキサンチン含有ヘマトコッ
カスの工業的な製造方法を提供することにある。
する課題は、屋外培養池で捕食あるいは寄生生物の影響
を軽減せしめた、高いアスタキサンチン含有ヘマトコッ
カスの工業的な製造方法を提供することにある。
【００１２】
【課題を解決する為の手段】本発明者らは、鋭意研究の
結果、屋外培養池でヘマトコッカスを培養する場合、ヘ
マトコッカスを補食する動物（以下補食動物という）や
寄生する微生物（以下寄生微生物という）の夾雑によ
り、培養開始から４〜８日間以降に藻体量が減少し始め
ること、更に屋外培養池の培養開始時のヘマトコッカス
藻体濃度（以下、初発藻濃度という）とアスタキサンチ
ン生成速度の関係を調べ、効率良くアスタキサンチンを
生成蓄積させるのに適した初発藻濃度があること、
結果、屋外培養池でヘマトコッカスを培養する場合、ヘ
マトコッカスを補食する動物（以下補食動物という）や
寄生する微生物（以下寄生微生物という）の夾雑によ
り、培養開始から４〜８日間以降に藻体量が減少し始め
ること、更に屋外培養池の培養開始時のヘマトコッカス
藻体濃度（以下、初発藻濃度という）とアスタキサンチ
ン生成速度の関係を調べ、効率良くアスタキサンチンを
生成蓄積させるのに適した初発藻濃度があること、
【００１３】ヘマトコッカスを閉鎖型培養装置で増殖さ
せ、殺菌後の屋外培養池に接種しヘマトコッカス中にア
スタキサンチンを生成、蓄積させることにより、補食動
物や寄生微生物の夾雑により藻体が減少する前に、アス
タキサンチン含有量の高いヘマトコッカス藻体を製造で
きることを見いだして、本発明を完成するに至った。
せ、殺菌後の屋外培養池に接種しヘマトコッカス中にア
スタキサンチンを生成、蓄積させることにより、補食動
物や寄生微生物の夾雑により藻体が減少する前に、アス
タキサンチン含有量の高いヘマトコッカス藻体を製造で
きることを見いだして、本発明を完成するに至った。
【００１４】即ち、本発明は（イ）藻類ヘマトコッカス
を閉鎖型培養装置で増殖させ、次いで屋外培養池におい
て、ヘマトコッカス中にアスタキサンチンを生成蓄積さ
せ、ヘマトコッカスを補食あるいは寄生する生物が培養
池中に夾雑、増殖する前に培養を完了することを特徴と
する、２段階培養法によるアスタキサンチン含有ヘマト
コッカスの製造方法と、
を閉鎖型培養装置で増殖させ、次いで屋外培養池におい
て、ヘマトコッカス中にアスタキサンチンを生成蓄積さ
せ、ヘマトコッカスを補食あるいは寄生する生物が培養
池中に夾雑、増殖する前に培養を完了することを特徴と
する、２段階培養法によるアスタキサンチン含有ヘマト
コッカスの製造方法と、
【００１５】（ロ）アスタキサンチンを生成蓄積させる
屋外培養池の初発ヘマトコッカス濃度を５〜２０ｇＤＣ
Ｗ／ｍ2とすることを特徴とする、（イ）に記載のアス
タキサンチン含有ヘマトコッカスの製造方法と、
屋外培養池の初発ヘマトコッカス濃度を５〜２０ｇＤＣ
Ｗ／ｍ2とすることを特徴とする、（イ）に記載のアス
タキサンチン含有ヘマトコッカスの製造方法と、
【００１６】（ハ）閉鎖型培養装置が、培養液に人為的
に光を照射しない装置であることを特徴とする、（イ）
又は（ロ）に記載のアスタキサンチン含有ヘマトコッカ
スの製造方法と、
に光を照射しない装置であることを特徴とする、（イ）
又は（ロ）に記載のアスタキサンチン含有ヘマトコッカ
スの製造方法と、
【００１７】（ニ）屋外培養池の培養液中に、ヘマトコ
ッカスの増殖栄養源としての窒素源を実質的に含まない
ことを特徴とする、（イ）又は（ロ）に記載のアスタキ
サンチン含有ヘマトコッカスの製造方法とを含むもので
ある。
ッカスの増殖栄養源としての窒素源を実質的に含まない
ことを特徴とする、（イ）又は（ロ）に記載のアスタキ
サンチン含有ヘマトコッカスの製造方法とを含むもので
ある。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明で用いられるヘマトコッカ
スとは、緑藻綱ボルボックス目クラミドモナス科ヘマト
コッカス属に属する単細胞藻類であり、特定の藻株に限
る必要はなく、大学や研究機関に保存されている藻株、
あるいは世界各地の湖沼、河川、水たまり、海辺等で採
取し純粋分離した藻株を用いることができる。
スとは、緑藻綱ボルボックス目クラミドモナス科ヘマト
コッカス属に属する単細胞藻類であり、特定の藻株に限
る必要はなく、大学や研究機関に保存されている藻株、
あるいは世界各地の湖沼、河川、水たまり、海辺等で採
取し純粋分離した藻株を用いることができる。
【００１９】前者の例としては、ヘマトコッカス プル
ビアリス（Haematococcus pluvialis）は、国立環境研
究所のNIES144、米国テキサス大学藻類保存施設のUTEX2
505、ヘマトコッカス ラキュストリス（H. lacustri
s）は、American Type CultureCollectionのATCC3040
2、同30453、東京大学応用微生物研究所のIAM C-392、
同C-393、同C-394、同C-339、UTEX 16、同294、ヘマト
コッカス カペンシス（H. capensis）は、UTEX LB102
3、ヘマトコッカス ドロエバケンシス（H. droebakens
is）は、UTEX 55、ヘマトコッカス ジンバブエンシス
（H. zimbabwiensis）は、UTEX LB1758、等が挙げられ
る。
ビアリス（Haematococcus pluvialis）は、国立環境研
究所のNIES144、米国テキサス大学藻類保存施設のUTEX2
505、ヘマトコッカス ラキュストリス（H. lacustri
s）は、American Type CultureCollectionのATCC3040
2、同30453、東京大学応用微生物研究所のIAM C-392、
同C-393、同C-394、同C-339、UTEX 16、同294、ヘマト
コッカス カペンシス（H. capensis）は、UTEX LB102
3、ヘマトコッカス ドロエバケンシス（H. droebakens
is）は、UTEX 55、ヘマトコッカス ジンバブエンシス
（H. zimbabwiensis）は、UTEX LB1758、等が挙げられ
る。
【００２０】後者としては、例えば、墓石や岩石の窪み
に溜まった雨水が赤色を呈している場合、それを採取し
て、淡水産藻類用培地の平板寒天培地に塗抹することに
より、ヘマトコッカスを分離することができる。
に溜まった雨水が赤色を呈している場合、それを採取し
て、淡水産藻類用培地の平板寒天培地に塗抹することに
より、ヘマトコッカスを分離することができる。
【００２１】ヘマトコッカスは、好適な条件下では２本
の等長鞭毛を有する涙滴型の遊走子細胞となり、細胞分
裂により増殖する。この遊走子に、例えば窒素欠乏や強
い光の照射、高塩濃度等の様々なストレスを与えると、
増殖を停止して形態が変化し、鞭毛が無い球形のシスト
細胞になることが知られている（M. R. Droop, Arch.Mi
krobiol., 21, p267 (1955)）。シスト化にともなっ
て、多くの場合、原形質にアスタキサンチンを生成蓄積
する。尚、この細胞内構造をヘマトクロームと呼ぶこと
もある。
の等長鞭毛を有する涙滴型の遊走子細胞となり、細胞分
裂により増殖する。この遊走子に、例えば窒素欠乏や強
い光の照射、高塩濃度等の様々なストレスを与えると、
増殖を停止して形態が変化し、鞭毛が無い球形のシスト
細胞になることが知られている（M. R. Droop, Arch.Mi
krobiol., 21, p267 (1955)）。シスト化にともなっ
て、多くの場合、原形質にアスタキサンチンを生成蓄積
する。尚、この細胞内構造をヘマトクロームと呼ぶこと
もある。
【００２２】ヘマトコッカスを屋外培養池で培養した場
合には、参考例に示すように、必ず補食動物や寄生微生
物の夾雑が発生する。培養池を次亜塩素酸塩等で殺菌し
た後培養を開始した場合には８日目以降に、あるいは培
養後に池を殺菌しなかった場合は４日目以降に、顕微鏡
下で補食動物あるいは寄生微生物が認められ、藻濃度は
減少する。
合には、参考例に示すように、必ず補食動物や寄生微生
物の夾雑が発生する。培養池を次亜塩素酸塩等で殺菌し
た後培養を開始した場合には８日目以降に、あるいは培
養後に池を殺菌しなかった場合は４日目以降に、顕微鏡
下で補食動物あるいは寄生微生物が認められ、藻濃度は
減少する。
【００２３】補食動物としては繊毛虫、ワムシの他、ア
メーバ、ユスリカの幼虫（アカムシ）等が挙げられ、ヘ
マトコッカスの遊走子及びシスト細胞の両方を補食す
る。一方、寄生微生物としては真菌のツボカビ類に属す
るキトリッド等が挙げられ、ヘマトコッカスのシスト細
胞に特異的に寄生し死滅させる。
メーバ、ユスリカの幼虫（アカムシ）等が挙げられ、ヘ
マトコッカスの遊走子及びシスト細胞の両方を補食す
る。一方、寄生微生物としては真菌のツボカビ類に属す
るキトリッド等が挙げられ、ヘマトコッカスのシスト細
胞に特異的に寄生し死滅させる。
【００２４】このような捕食又は寄生生物の夾雑を防止
する目的で、本発明における２段階培養では、ヘマトコ
ッカスをまず捕食又は寄生生物の夾雑のない閉鎖型（密
閉型）培養装置で増殖させる。ここで用いる装置は、補
食動物あるいは寄生微生物の夾雑を防止できるものであ
れば良く、例えばタンク型、チューブラー型、又はエア
ドーム型の培養装置が挙げられるが、これらに限定され
るものではない。
する目的で、本発明における２段階培養では、ヘマトコ
ッカスをまず捕食又は寄生生物の夾雑のない閉鎖型（密
閉型）培養装置で増殖させる。ここで用いる装置は、補
食動物あるいは寄生微生物の夾雑を防止できるものであ
れば良く、例えばタンク型、チューブラー型、又はエア
ドーム型の培養装置が挙げられるが、これらに限定され
るものではない。
【００２５】高圧蒸気滅菌できるタンク型培養装置は、
ヘマトコッカスを純粋培養することができるので、この
目的に好適である。淡水産藻類用の培地に酢酸又は酢酸
塩を１〜１００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは５〜３０ｍｍ
ｏｌ／ｌ加え、ｐＨを６〜９、好ましくは７〜８に調整
し、高圧蒸気滅菌する。淡水産藻類用の培地には藻類の
増殖に必要な窒素、リン、カリウム、マグネシウム、
鉄、その他微量金属の無機塩とチアミン等のビタミンが
含まれ、例えばＶＴ培地、Ｃ培地、ＭＢＭ培地、ＭＤＭ
培地等が挙げられる（藻類研究法、千原光雄・西澤一俊
編、共立出版、1979）。
ヘマトコッカスを純粋培養することができるので、この
目的に好適である。淡水産藻類用の培地に酢酸又は酢酸
塩を１〜１００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは５〜３０ｍｍ
ｏｌ／ｌ加え、ｐＨを６〜９、好ましくは７〜８に調整
し、高圧蒸気滅菌する。淡水産藻類用の培地には藻類の
増殖に必要な窒素、リン、カリウム、マグネシウム、
鉄、その他微量金属の無機塩とチアミン等のビタミンが
含まれ、例えばＶＴ培地、Ｃ培地、ＭＢＭ培地、ＭＤＭ
培地等が挙げられる（藻類研究法、千原光雄・西澤一俊
編、共立出版、1979）。
【００２６】なかでもＣ培地はトリス塩酸塩が含まれ、
ｐＨ調整が容易なので好ましい。これにヘマトコッカス
を接種して、２０〜３２℃、好ましくは２５〜２８℃で
通気、及び攪拌しながら培養する。増殖が始まると酢酸
が消費されてｐＨが上昇し、そのままでは増殖が阻害さ
れるので、酢酸や塩酸等を添加してｐＨを６〜９、好ま
しくはｐＨ７〜８に保つことが好ましい。
ｐＨ調整が容易なので好ましい。これにヘマトコッカス
を接種して、２０〜３２℃、好ましくは２５〜２８℃で
通気、及び攪拌しながら培養する。増殖が始まると酢酸
が消費されてｐＨが上昇し、そのままでは増殖が阻害さ
れるので、酢酸や塩酸等を添加してｐＨを６〜９、好ま
しくはｐＨ７〜８に保つことが好ましい。
【００２７】この培養は光を照射しながら行うこともで
き、その場合には炭素源として酢酸の代わりに二酸化炭
素を用いることもできる。但し、酢酸を用いた方が増殖
は速い。本発明では、次の屋外培養池での培養で、安価
な太陽光を利用してアスタキサンチンをヘマトコッカス
中に蓄積させる為、高価な装置と運転コストがかかる閉
鎖型培養装置での光照射は必ずしも必要としない。
き、その場合には炭素源として酢酸の代わりに二酸化炭
素を用いることもできる。但し、酢酸を用いた方が増殖
は速い。本発明では、次の屋外培養池での培養で、安価
な太陽光を利用してアスタキサンチンをヘマトコッカス
中に蓄積させる為、高価な装置と運転コストがかかる閉
鎖型培養装置での光照射は必ずしも必要としない。
【００２８】閉鎖型培養装置での培養により、緑色、茶
色ないし赤色の遊走子又はシストからなる、補食動物や
寄生微生物の夾雑がない清浄なヘマトコッカス藻体が得
られる。これを次に屋外培養池に移し、アスタキサンチ
ンを迅速に生成蓄積させる。
色ないし赤色の遊走子又はシストからなる、補食動物や
寄生微生物の夾雑がない清浄なヘマトコッカス藻体が得
られる。これを次に屋外培養池に移し、アスタキサンチ
ンを迅速に生成蓄積させる。
【００２９】屋外培養池は、コンクリート製、又はプラ
スチック製の円型あるいはレースウエイ型等の池と、培
養液を攪拌する装置、及び二酸化炭素を培養液に供給す
る装置からなり、クロレラやスピルリナ、ドナリエラ等
の培養に一般に使われているものを用いることもでき、
その表面は大気、太陽光下に開放されているものであ
り、補食動物や寄生微生物の屋外培養池への浸入を防止
する為に、屋外培養池が特にガラス等で密閉されている
必要はない。
スチック製の円型あるいはレースウエイ型等の池と、培
養液を攪拌する装置、及び二酸化炭素を培養液に供給す
る装置からなり、クロレラやスピルリナ、ドナリエラ等
の培養に一般に使われているものを用いることもでき、
その表面は大気、太陽光下に開放されているものであ
り、補食動物や寄生微生物の屋外培養池への浸入を防止
する為に、屋外培養池が特にガラス等で密閉されている
必要はない。
【００３０】閉鎖型培養装置で培養したヘマトコッカス
を屋外培養池に移す前に、屋外培養池が殺菌されている
ことが好ましい。屋外培養池の殺菌は、補食動物や寄生
微生物を死滅させる方法であれば何でも良いが、次亜塩
素酸塩やオゾンによる薬液殺菌は方法が簡便で本発明に
適している。
を屋外培養池に移す前に、屋外培養池が殺菌されている
ことが好ましい。屋外培養池の殺菌は、補食動物や寄生
微生物を死滅させる方法であれば何でも良いが、次亜塩
素酸塩やオゾンによる薬液殺菌は方法が簡便で本発明に
適している。
【００３１】具体的には、屋外培養池を洗浄した後、次
亜塩素酸塩やオゾンを培地に溶解して屋外培養池に満た
すだけでよく、同時に培地の殺菌も行われる。殺菌後は
太陽光の照射と攪拌により残留塩素やオゾンは培地中か
ら消失するので、そのまま培養を開始することができ
る。
亜塩素酸塩やオゾンを培地に溶解して屋外培養池に満た
すだけでよく、同時に培地の殺菌も行われる。殺菌後は
太陽光の照射と攪拌により残留塩素やオゾンは培地中か
ら消失するので、そのまま培養を開始することができ
る。
【００３２】殺菌条件は添加濃度（ｐｐｍ）と時間
（分）の積であるＣＴ値で表され、本発明においては、
次亜塩素酸ナトリウムや次亜塩素酸カルシウムの場合Ｃ
Ｔ値が５〜５００、オゾンの場合ではＣＴ値が０．５〜
１０となるよう殺菌する。これらの殺菌操作を行うと、
ヘマトコッカスを屋外培養池で最大７日間培養すること
ができる。また殺菌操作を行わない場合は、最大３日間
培養することができる。
（分）の積であるＣＴ値で表され、本発明においては、
次亜塩素酸ナトリウムや次亜塩素酸カルシウムの場合Ｃ
Ｔ値が５〜５００、オゾンの場合ではＣＴ値が０．５〜
１０となるよう殺菌する。これらの殺菌操作を行うと、
ヘマトコッカスを屋外培養池で最大７日間培養すること
ができる。また殺菌操作を行わない場合は、最大３日間
培養することができる。
【００３３】本来、屋外培養池での培養中に夾雑生物が
存在しないことを確認しながら行うことが好ましいが、
本発明で言う、ヘマトコッカスを補食あるいは寄生する
生物が培養池中に夾雑、増殖する前に培養を完了すると
は、閉鎖型培養装置で培養したヘマトコッカスを屋外培
養池に移す前に、屋外培養池を殺菌した場合は、最大７
日間、屋外培養池を殺菌していない場合は、最大３日間
培養することを意味する。
存在しないことを確認しながら行うことが好ましいが、
本発明で言う、ヘマトコッカスを補食あるいは寄生する
生物が培養池中に夾雑、増殖する前に培養を完了すると
は、閉鎖型培養装置で培養したヘマトコッカスを屋外培
養池に移す前に、屋外培養池を殺菌した場合は、最大７
日間、屋外培養池を殺菌していない場合は、最大３日間
培養することを意味する。
【００３４】夾雑の有無は検鏡して確認するが、培養液
１滴中に補食動物や寄生微生物が認められた場合は、既
に藻濃度が減少し始めていることも多く、そうなると培
養後の培養池の洗浄や滅菌もまた難しくなる為、これら
の日数は重要な意味を持つ。
１滴中に補食動物や寄生微生物が認められた場合は、既
に藻濃度が減少し始めていることも多く、そうなると培
養後の培養池の洗浄や滅菌もまた難しくなる為、これら
の日数は重要な意味を持つ。
【００３５】屋外培養池での培地は、淡水産藻類用培地
に含まれる無機塩類の一部、又は全てを除いたもの、少
なくとも、ヘマトコッカスの増殖栄養源としての窒素源
を実質的に含まないものを用いる。地下水、河川水、農
業用水あるいは飲料水そのものでもよい。このような栄
養分が欠乏した培地を用いることにより、ヘマトコッカ
スの遊走子は増殖を停止してシスト化しアスタキサンチ
ンがヘマトコッカス中に生成蓄積される。
に含まれる無機塩類の一部、又は全てを除いたもの、少
なくとも、ヘマトコッカスの増殖栄養源としての窒素源
を実質的に含まないものを用いる。地下水、河川水、農
業用水あるいは飲料水そのものでもよい。このような栄
養分が欠乏した培地を用いることにより、ヘマトコッカ
スの遊走子は増殖を停止してシスト化しアスタキサンチ
ンがヘマトコッカス中に生成蓄積される。
【００３６】また０．３〜０．４％の塩化ナトリウム等
の添加による塩分濃度の増加によっても、この現象を促
進させることが出来る（M. R. Droop, Arch. Mikrobio
l., 20, 391頁 (1954)）。これらの培地を上記の薬液殺
菌又は紫外線殺菌、熱殺菌等の方法で殺菌した後、屋外
培養池に投入する。
の添加による塩分濃度の増加によっても、この現象を促
進させることが出来る（M. R. Droop, Arch. Mikrobio
l., 20, 391頁 (1954)）。これらの培地を上記の薬液殺
菌又は紫外線殺菌、熱殺菌等の方法で殺菌した後、屋外
培養池に投入する。
【００３７】次に、閉鎖型培養装置で培養した夾雑のな
いヘマトコッカス藻体を屋外培養池に接種するが、この
時の初発藻濃度はアスタキサンチンの生産性及びヘマト
コッカスのアスタキサンチン含有量に大きく影響する。
この時、アスタキサンチン生成速度及びアスタキサンチ
ン含有量は光量とも深い関係がある。
いヘマトコッカス藻体を屋外培養池に接種するが、この
時の初発藻濃度はアスタキサンチンの生産性及びヘマト
コッカスのアスタキサンチン含有量に大きく影響する。
この時、アスタキサンチン生成速度及びアスタキサンチ
ン含有量は光量とも深い関係がある。
【００３８】光量は光量子束密度（Ｅ）で表され、屋外
での光量はもちろん場所や天候等により異なるが、ヘマ
トコッカスの培養に好適な場所の光量は２５〜１００Ｅ
／ｍ 2・日、年平均で５０Ｅ／ｍ2・日程度である。初発
藻濃度及び光量と、アスタキサンチンの培養面積当たり
生成速度及びヘマトコッカスのアスタキサンチン含有量
との関係は、実施例に具体的に示した。初発藻濃度が５
ｇＤＣＷ／ｍ2以下では、どの光量においても面積当た
りのアスタキサンチン生産性が低いことが分かった。
での光量はもちろん場所や天候等により異なるが、ヘマ
トコッカスの培養に好適な場所の光量は２５〜１００Ｅ
／ｍ 2・日、年平均で５０Ｅ／ｍ2・日程度である。初発
藻濃度及び光量と、アスタキサンチンの培養面積当たり
生成速度及びヘマトコッカスのアスタキサンチン含有量
との関係は、実施例に具体的に示した。初発藻濃度が５
ｇＤＣＷ／ｍ2以下では、どの光量においても面積当た
りのアスタキサンチン生産性が低いことが分かった。
【００３９】本発明で言う、ｇＤＣＷとは、乾燥細胞重
量の略であり、JIS K 0101(工業用水試験方法）、JIS K
0102(工場排水試験方法）記載の水中の懸濁物質（Ｓ
Ｓ）の測定用として一般に広く用いられていアドバンテ
ック東洋株式会社製のＧＳ−２５（孔径約１μｍ、極微
細な硼珪酸塩ガラス繊維を有機バインダー（アクリル樹
脂）処理した濾紙）で培養液を濾過した後、該濾紙を１
０５℃で６時間乾燥し、恒量とした後、重量を測定する
ことにより得られる乾燥細胞重量をｇで表したものを言
う。
量の略であり、JIS K 0101(工業用水試験方法）、JIS K
0102(工場排水試験方法）記載の水中の懸濁物質（Ｓ
Ｓ）の測定用として一般に広く用いられていアドバンテ
ック東洋株式会社製のＧＳ−２５（孔径約１μｍ、極微
細な硼珪酸塩ガラス繊維を有機バインダー（アクリル樹
脂）処理した濾紙）で培養液を濾過した後、該濾紙を１
０５℃で６時間乾燥し、恒量とした後、重量を測定する
ことにより得られる乾燥細胞重量をｇで表したものを言
う。
【００４０】ヘマトコッカスはアスタキサンチン含有量
が最大５％にも達することが特長であるが、光量が２５
Ｅ／ｍ2・日と弱い場合には、初発藻濃度が２０ｇＤＣ
Ｗ／ｍ2を超えると、ヘマトコッカス中のアスタキサン
チン含有量が３日間以内には３％まで到達せず、また初
発藻濃度が３０ｇＤＣＷ／ｍ2を超えると、アスタキサ
ンチン含有量が７日間以内には３％に到達せず、十分に
アスタキサンチンを生成蓄積することができない。
が最大５％にも達することが特長であるが、光量が２５
Ｅ／ｍ2・日と弱い場合には、初発藻濃度が２０ｇＤＣ
Ｗ／ｍ2を超えると、ヘマトコッカス中のアスタキサン
チン含有量が３日間以内には３％まで到達せず、また初
発藻濃度が３０ｇＤＣＷ／ｍ2を超えると、アスタキサ
ンチン含有量が７日間以内には３％に到達せず、十分に
アスタキサンチンを生成蓄積することができない。
【００４１】従って、３％以上のアスタキサンチンを含
有するヘマトコッカスを製造する為には、屋外培養池で
の初発藻濃度は、屋外培養池を殺菌し、培養期間が７日
間以内の場合には５〜３０ｇＤＣＷ／ｍ2、屋外培養池
を殺菌せず、３日間以内の場合には５〜２０ｇＤＣＷ／
ｍ2にしなければならない。
有するヘマトコッカスを製造する為には、屋外培養池で
の初発藻濃度は、屋外培養池を殺菌し、培養期間が７日
間以内の場合には５〜３０ｇＤＣＷ／ｍ2、屋外培養池
を殺菌せず、３日間以内の場合には５〜２０ｇＤＣＷ／
ｍ2にしなければならない。
【００４２】本発明においては、屋外培養池の初発ヘマ
トコッカス濃度を５〜２０ｇＤＣＷ／ｍ2とすることが
好ましい。屋外培養池の液深は、任意に変えられるが、
太陽光を有効に利用することから、好ましくは５ｃｍ〜
４０ｃｍ、更に好ましくは１０ｃｍ〜３０ｃｍである。
トコッカス濃度を５〜２０ｇＤＣＷ／ｍ2とすることが
好ましい。屋外培養池の液深は、任意に変えられるが、
太陽光を有効に利用することから、好ましくは５ｃｍ〜
４０ｃｍ、更に好ましくは１０ｃｍ〜３０ｃｍである。
【００４３】例えば、屋外培養池の液深が１０ｃｍであ
る場合には、屋外培養池の初発ヘマトコッカス濃度５〜
２０ｇＤＣＷ／ｍ2は、培養液のヘマトコッカス濃度が
５０ｍｇ／ｌ〜２００ｍｇ／ｌであることを意味し、液
深が２０ｃｍの場合には、２５ｍｇ／ｌ〜１００ｍｇ／
ｌであることを意味する。
る場合には、屋外培養池の初発ヘマトコッカス濃度５〜
２０ｇＤＣＷ／ｍ2は、培養液のヘマトコッカス濃度が
５０ｍｇ／ｌ〜２００ｍｇ／ｌであることを意味し、液
深が２０ｃｍの場合には、２５ｍｇ／ｌ〜１００ｍｇ／
ｌであることを意味する。
【００４４】屋外培養池での培養は、適当に攪拌しなが
ら３〜７日間行う。培地のｐＨは、昼間は光合成による
二酸化炭素の消費により上昇し、夜間は呼吸による二酸
化炭素の排出で低下する。昼間は二酸化炭素濃度が低下
し光合成の律速段階となるので、外部から二酸化炭素を
添加してｐＨを６〜９、好ましくは７〜８に保つように
する。
ら３〜７日間行う。培地のｐＨは、昼間は光合成による
二酸化炭素の消費により上昇し、夜間は呼吸による二酸
化炭素の排出で低下する。昼間は二酸化炭素濃度が低下
し光合成の律速段階となるので、外部から二酸化炭素を
添加してｐＨを６〜９、好ましくは７〜８に保つように
する。
【００４５】この間、ヘマトコッカスの遊走子は増殖が
停止してシスト化が進み、細胞数は増加しないが、光合
成によりアスタキサンチンを生成蓄積するので、細胞は
大型化し、見かけの藻濃度も増大する。本発明の２段階
培養法によって、３％以上の高濃度のアスタキサンチン
を含有したヘマトコッカス藻体を効率よく製造すること
ができる。
停止してシスト化が進み、細胞数は増加しないが、光合
成によりアスタキサンチンを生成蓄積するので、細胞は
大型化し、見かけの藻濃度も増大する。本発明の２段階
培養法によって、３％以上の高濃度のアスタキサンチン
を含有したヘマトコッカス藻体を効率よく製造すること
ができる。
【００４６】
【実施例】以下に本発明を実施例及び比較例により説明
するが、元より本発明はこれらに限定されるものではな
い。
するが、元より本発明はこれらに限定されるものではな
い。
【００４７】（参考例１〜５）夾雑による藻濃度の減少
（殺菌した培養池）Haematococcus pluvialis NIES144
及び本発明者が純粋分離したHaematococcussp. DY-1を
タンク型培養装置で培養し、緑色遊走子の藻体を得た。
液深が１０ｃｍになるよう飲料水を満たした屋外の円型
培養池（１．２ｍ2）を表中の条件で薬液殺菌し、ここ
に藻体を２０ｇ ＤＣＷ／ｍ2（２００ｍｇ／ｌ）となる
よう接種し、ｐＨを二酸化炭素で７．５に制御しながら
１２ｒｐｍで攪拌培養した。毎日培養液１滴をスライド
グラスに滴下して検鏡し、また藻濃度を測定した。結果
を表１に示す。いずれの培養例でも夾雑は８日目以降に
観察され、ヘマトコッカス濃度も８日目以降に減少し始
めた。
（殺菌した培養池）Haematococcus pluvialis NIES144
及び本発明者が純粋分離したHaematococcussp. DY-1を
タンク型培養装置で培養し、緑色遊走子の藻体を得た。
液深が１０ｃｍになるよう飲料水を満たした屋外の円型
培養池（１．２ｍ2）を表中の条件で薬液殺菌し、ここ
に藻体を２０ｇ ＤＣＷ／ｍ2（２００ｍｇ／ｌ）となる
よう接種し、ｐＨを二酸化炭素で７．５に制御しながら
１２ｒｐｍで攪拌培養した。毎日培養液１滴をスライド
グラスに滴下して検鏡し、また藻濃度を測定した。結果
を表１に示す。いずれの培養例でも夾雑は８日目以降に
観察され、ヘマトコッカス濃度も８日目以降に減少し始
めた。
【００４８】
【表１】
【００４９】（参考例６〜１２）夾雑による藻濃度の減
少（殺菌しない培養池） 屋外の円型培養池（１．２ｍ2）又はレースウエイ型培
養池（５ｍ2）を、洗浄しただけで薬液殺菌せずに飲料
水を液深１０ｃｍになるよう満たし、ここに参考例１〜
５と同様の藻体を２０ｇＤＣＷ／ｍ2（２００ｍｇ／
ｌ）となるよう接種して、ｐＨを二酸化炭素で７．５に
制御しながら攪拌培養した。毎日検鏡と藻濃度の測定を
行った。結果を表２に示す。いずれの培養例でも、夾雑
は４日目以降に観察され、ヘマトコッカス濃度も５日目
以降に減少し始めた。
少（殺菌しない培養池） 屋外の円型培養池（１．２ｍ2）又はレースウエイ型培
養池（５ｍ2）を、洗浄しただけで薬液殺菌せずに飲料
水を液深１０ｃｍになるよう満たし、ここに参考例１〜
５と同様の藻体を２０ｇＤＣＷ／ｍ2（２００ｍｇ／
ｌ）となるよう接種して、ｐＨを二酸化炭素で７．５に
制御しながら攪拌培養した。毎日検鏡と藻濃度の測定を
行った。結果を表２に示す。いずれの培養例でも、夾雑
は４日目以降に観察され、ヘマトコッカス濃度も５日目
以降に減少し始めた。
【００５０】
【表２】
【００５１】（実施例１）パドル型インペラーを装着し
た５Ｌタンク型培養装置に、２倍に濃縮したＣ培地に酢
酸ナトリウムを１０ｍｍｏｌ／ｌとなるよう添加した培
地２．８Ｌを加え、高圧蒸気滅菌した。これにフラスコ
で培養したH. pluvialis NIES144の培養液２００ｍｌを
接種して、２５℃、攪拌速度５０ｒｐｍ、通気量３００
ｍｌ／分で培養した。培地ｐＨは１Ｍ酢酸の添加により
７．５に制御した。１０日間培養して、緑色の遊走子か
らなる藻濃度６００ｍｇ／ｌの無菌の培養液を得た。
た５Ｌタンク型培養装置に、２倍に濃縮したＣ培地に酢
酸ナトリウムを１０ｍｍｏｌ／ｌとなるよう添加した培
地２．８Ｌを加え、高圧蒸気滅菌した。これにフラスコ
で培養したH. pluvialis NIES144の培養液２００ｍｌを
接種して、２５℃、攪拌速度５０ｒｐｍ、通気量３００
ｍｌ／分で培養した。培地ｐＨは１Ｍ酢酸の添加により
７．５に制御した。１０日間培養して、緑色の遊走子か
らなる藻濃度６００ｍｇ／ｌの無菌の培養液を得た。
【００５２】次に２５Ｌアクリル製円筒型密閉培養槽
に、２倍に濃縮したC培地１７Ｌを加え、次亜塩素酸ナ
トリウムで薬液殺菌（ＣＴ値＝１２０）した。これに上
記の培養液３Ｌを接種して、２５℃、通気量２Ｌ／分
で、陽光ランプで照明しながら（光量＝４Ｅ／Ｌ／日）
培養した。培地ｐＨは、二酸化炭素の添加により７．５
に制御した。５日間培養して、緑色の遊走子からなる藻
濃度６００ｍｇ／Ｌの培養液を得た。この培養液から
は、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全く検出さ
れず、また補食動物や寄生微生物の夾雑も認められなか
った。
に、２倍に濃縮したC培地１７Ｌを加え、次亜塩素酸ナ
トリウムで薬液殺菌（ＣＴ値＝１２０）した。これに上
記の培養液３Ｌを接種して、２５℃、通気量２Ｌ／分
で、陽光ランプで照明しながら（光量＝４Ｅ／Ｌ／日）
培養した。培地ｐＨは、二酸化炭素の添加により７．５
に制御した。５日間培養して、緑色の遊走子からなる藻
濃度６００ｍｇ／Ｌの培養液を得た。この培養液から
は、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全く検出さ
れず、また補食動物や寄生微生物の夾雑も認められなか
った。
【００５３】こうして得た培養液を飲料水で１、２、
３、６、１２及び２４倍に希釈して、次亜塩素酸ナトリ
ウムで殺菌（ＣＴ値＝６０）した１．２ｍ2の屋外円型
培養池に液深が１０ｃｍになるよう接種し、ｐＨは二酸
化炭素の添加により７．５に制御しながら培養した。培
養期間中の温度は２５〜３２℃、光量は平均で２６Ｅ／
ｍ2・日、及び４８Ｅ／ｍ2・日となるように農業用遮光
シートで調節した。
３、６、１２及び２４倍に希釈して、次亜塩素酸ナトリ
ウムで殺菌（ＣＴ値＝６０）した１．２ｍ2の屋外円型
培養池に液深が１０ｃｍになるよう接種し、ｐＨは二酸
化炭素の添加により７．５に制御しながら培養した。培
養期間中の温度は２５〜３２℃、光量は平均で２６Ｅ／
ｍ2・日、及び４８Ｅ／ｍ2・日となるように農業用遮光
シートで調節した。
【００５４】緑色の遊走子は速やかにシスト化しアスタ
キサンチンを生成蓄積した。培養３日目および７日目の
アスタキサンチン生成速度、及びアスタキサンチン含有
量を表３（光量は平均２６Ｅ／ｍ2・日）と表４（光量
は平均４８Ｅ／ｍ2・日）に示す。尚、培養７日目ま
で、補食動物や寄生微生物の夾雑は認められなかった。
キサンチンを生成蓄積した。培養３日目および７日目の
アスタキサンチン生成速度、及びアスタキサンチン含有
量を表３（光量は平均２６Ｅ／ｍ2・日）と表４（光量
は平均４８Ｅ／ｍ2・日）に示す。尚、培養７日目ま
で、補食動物や寄生微生物の夾雑は認められなかった。
【００５５】
【表３】
【００５６】
【表４】
【００５７】（実施例２）パドル型インペラーを装着し
た５０Ｌタンク型培養装置に、２倍に濃縮したＣ培地に
酢酸ナトリウムを１０ｍｍｏｌ／ｌとなるよう添加した
培地２７Ｌを加え、高圧蒸気滅菌した。これに実施例１
と同様に５Ｌタンク型培養装置で培養し藻濃度が６００
ｍｇ／ｌとなったH. sp. DY-1の培養液３Ｌを接種し
て、２５℃、攪拌速度４０ｒｐｍ、通気量３Ｌ／分で培
養した。培地ｐＨは１Ｍ酢酸の添加により７．５に制御
した。８日間培養して、緑色の遊走子からなる藻濃度６
００ｍｇ／ｌの無菌の培養液を得た。この培養液から
は、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全く検出さ
れなかった。
た５０Ｌタンク型培養装置に、２倍に濃縮したＣ培地に
酢酸ナトリウムを１０ｍｍｏｌ／ｌとなるよう添加した
培地２７Ｌを加え、高圧蒸気滅菌した。これに実施例１
と同様に５Ｌタンク型培養装置で培養し藻濃度が６００
ｍｇ／ｌとなったH. sp. DY-1の培養液３Ｌを接種し
て、２５℃、攪拌速度４０ｒｐｍ、通気量３Ｌ／分で培
養した。培地ｐＨは１Ｍ酢酸の添加により７．５に制御
した。８日間培養して、緑色の遊走子からなる藻濃度６
００ｍｇ／ｌの無菌の培養液を得た。この培養液から
は、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全く検出さ
れなかった。
【００５８】洗浄した１．２ｍ2の屋外円型培養池に飲
料水１００Ｌを満たし、ここに上記の培養液２０Ｌを接
種して（液深１０ｃｍ）、ｐＨは二酸化炭素の添加によ
り７．５に制御しながら３日間培養した。培養期間中の
温度は２５〜３２℃、日平均光量は４６Ｅ／ｍ2・日で
あった。３日後に、赤色シストからなるヘマトコッカス
藻体を収穫し、遠心濃縮の後凍結乾燥して、アスタキサ
ンチン含有量３．２％の藻体を４１ｇ得た。収穫の際検
鏡したが、補食動物や寄生微生物の夾雑は認められなか
った。
料水１００Ｌを満たし、ここに上記の培養液２０Ｌを接
種して（液深１０ｃｍ）、ｐＨは二酸化炭素の添加によ
り７．５に制御しながら３日間培養した。培養期間中の
温度は２５〜３２℃、日平均光量は４６Ｅ／ｍ2・日で
あった。３日後に、赤色シストからなるヘマトコッカス
藻体を収穫し、遠心濃縮の後凍結乾燥して、アスタキサ
ンチン含有量３．２％の藻体を４１ｇ得た。収穫の際検
鏡したが、補食動物や寄生微生物の夾雑は認められなか
った。
【００５９】（比較例１）パドル型インペラーを装着し
た５Ｌタンク型培養装置に、２倍に濃縮したＣ培地に酢
酸ナトリウムを１０ｍｍｏｌ／ｌとなるよう添加した培
地２．８Ｌを加え、高圧蒸気滅菌した。これにフラスコ
で培養したH. pluvialis NIES144の培養液２００ｍｌを
接種し、２５℃、攪拌速度５０ｒｐｍ、通気量３００ｍ
ｌ／分で培養した。培地ｐＨは、１Ｍ酢酸の添加により
７．５に制御した。１０日間培養して、緑色の遊走子か
らなる藻濃度６００ｍｇ／ｌの無菌の培養液を得た。こ
の時、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全て消費
されており、検出されなかった。
た５Ｌタンク型培養装置に、２倍に濃縮したＣ培地に酢
酸ナトリウムを１０ｍｍｏｌ／ｌとなるよう添加した培
地２．８Ｌを加え、高圧蒸気滅菌した。これにフラスコ
で培養したH. pluvialis NIES144の培養液２００ｍｌを
接種し、２５℃、攪拌速度５０ｒｐｍ、通気量３００ｍ
ｌ／分で培養した。培地ｐＨは、１Ｍ酢酸の添加により
７．５に制御した。１０日間培養して、緑色の遊走子か
らなる藻濃度６００ｍｇ／ｌの無菌の培養液を得た。こ
の時、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全て消費
されており、検出されなかった。
【００６０】屋外の０．３ｍ2アクリル製角型培養池
に、２倍に濃縮したＣ培地２７Ｌを加え、次亜塩素酸ナ
トリウムで薬液殺菌（ＣＴ値＝６０）した。これに上記
の培養液３Ｌを接種して（液深１０ｃｍ）培養した。培
地ｐＨは、二酸化炭素の添加により７．５に制御した。
１０日間培養して、茶色の遊走子からなる藻濃度８４０
ｍｇ／ｌの培養液を得た。培養期間中の温度は２５〜３
０℃、日平均光量は３６Ｅ／ｍ2・日であった。この培
養液からは、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全
く検出されず、検鏡によりヘマトコッカスを補食して緑
色を呈した繊毛虫が培養液１滴当たり１〜３個観察され
た。
に、２倍に濃縮したＣ培地２７Ｌを加え、次亜塩素酸ナ
トリウムで薬液殺菌（ＣＴ値＝６０）した。これに上記
の培養液３Ｌを接種して（液深１０ｃｍ）培養した。培
地ｐＨは、二酸化炭素の添加により７．５に制御した。
１０日間培養して、茶色の遊走子からなる藻濃度８４０
ｍｇ／ｌの培養液を得た。培養期間中の温度は２５〜３
０℃、日平均光量は３６Ｅ／ｍ2・日であった。この培
養液からは、当初の培地に含まれていた硝酸態窒素は全
く検出されず、検鏡によりヘマトコッカスを補食して緑
色を呈した繊毛虫が培養液１滴当たり１〜３個観察され
た。
【００６１】洗浄した１．２ｍ2の屋外円型培養池に飲
料水９０Ｌを満たし、ここに上記の培養液３０Ｌを接種
して（液深１０ｃｍ）、ｐＨは二酸化炭素の添加により
７．５に制御しながら培養した。培養期間中の温度は２
５〜３２℃、日平均光量は４１Ｅ／ｍ2・日であった。
２日後に培養液をサンプリングしたところ、赤褐色のシ
ストからなるヘマトコッカスの藻濃度は３１ｇＤＣＷ／
ｍ2（310ｍｇ／ｌ）、藻体のアスタキサンチン含有量は
１．９％であった。しかし、この日から繊毛虫とワムシ
が急速に増殖してヘマトコッカスを補食し、３日目に検
鏡するとヘマトコッカスは全く見られなかった。
料水９０Ｌを満たし、ここに上記の培養液３０Ｌを接種
して（液深１０ｃｍ）、ｐＨは二酸化炭素の添加により
７．５に制御しながら培養した。培養期間中の温度は２
５〜３２℃、日平均光量は４１Ｅ／ｍ2・日であった。
２日後に培養液をサンプリングしたところ、赤褐色のシ
ストからなるヘマトコッカスの藻濃度は３１ｇＤＣＷ／
ｍ2（310ｍｇ／ｌ）、藻体のアスタキサンチン含有量は
１．９％であった。しかし、この日から繊毛虫とワムシ
が急速に増殖してヘマトコッカスを補食し、３日目に検
鏡するとヘマトコッカスは全く見られなかった。
【００６２】
【発明の効果】本発明のアスタキサンチン含有ヘマトコ
ッカスの製造方法により、閉鎖型培養装置で清浄なヘマ
トコッカス藻体を得ることにより夾雑を防ぐことがで
き、それを屋外培養池に移してアスタキサンチンを生成
蓄積させることにより、３％以上の高いアスタキサンチ
ン含有ヘマトコッカスを安価かつ効率的に製造すること
ができる。
ッカスの製造方法により、閉鎖型培養装置で清浄なヘマ
トコッカス藻体を得ることにより夾雑を防ぐことがで
き、それを屋外培養池に移してアスタキサンチンを生成
蓄積させることにより、３％以上の高いアスタキサンチ
ン含有ヘマトコッカスを安価かつ効率的に製造すること
ができる。
Claims (4)
- 【請求項１】 藻類ヘマトコッカスを閉鎖型培養装置で
増殖させ、次いで屋外培養池において、ヘマトコッカス
中にアスタキサンチンを生成蓄積させ、ヘマトコッカス
を補食あるいは寄生する生物が培養池中に夾雑、増殖す
る前に培養を完了することを特徴とする、２段階培養法
によるアスタキサンチン含有ヘマトコッカスの製造方
法。 - 【請求項２】 アスタキサンチンを生成蓄積させる屋外
培養池の初発ヘマトコッカス濃度を５〜２０ｇＤＣＷ／
ｍ2とすることを特徴とする、請求項１に記載のアスタ
キサンチン含有ヘマトコッカスの製造方法。 - 【請求項３】 閉鎖型培養装置が、培養液に人為的に光
を照射しない装置であることを特徴とする、請求項１又
は２に記載のアスタキサンチン含有ヘマトコッカスの製
造方法。 - 【請求項４】 屋外培養池の培養液中に、ヘマトコッカ
スの増殖栄養源としての窒素源を実質的に含まないこと
を特徴とする、請求項１又は２に記載のアスタキサンチ
ン含有ヘマトコッカスの製造方法。
Priority Applications (1)
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