ITUB20152637A1

ITUB20152637A1 - Composition and method to promote the growth of herbaceous plants and promote an accumulation of organic matter in the soil

Info

Publication number: ITUB20152637A1
Application number: ITUB2015A002637A
Authority: IT
Inventors: Giovanni Dinelli; Ilaria Marotti; Gioia Diana Di; Bruno Biavati; Francesca Gaggia; Loredana Baffoni; Sara Bosi; Mattia Accorsi
Original assignee: Univ Bologna Alma Mater Studiorum
Priority date: 2015-07-30
Filing date: 2015-07-30
Publication date: 2017-01-30
Also published as: WO2017017633A1; EP3328203A1

Description

Composizione e metodo per promuovere la crescita di piante erbacee e favorire un accumulo di sostanza organica nel terreno Composition and method for promoting the growth of herbaceous plants and promoting an accumulation of organic matter in the soil

L’invenzione concerne una composizione e un metodo per promuovere la crescita di piante erbacee, in particolare piante erbacee comprese in tappeti erbosi per uso sportivo o ornamentale e in terreni agricoli, e favorire un accumulo di sostanza organica nel terreno in cui vivono e crescono le suddette piante erbacee. The invention relates to a composition and a method for promoting the growth of herbaceous plants, in particular herbaceous plants included in turf for sports or ornamental use and in agricultural land, and to favor an accumulation of organic substance in the soil in which the plants live and grow. aforementioned herbaceous plants.

E’ noto che, per soddisfare le esigenze estetiche e funzionali dei tappeti erbosi destinati a uso sportivo o ornamentale, le specie vegetali formanti i suddetti tappeti erbosi vengono fatte crescere in condizioni che non sono ottimali per lo sviluppo dei rispettivi apparati radicali, ossia in substrati inerti e microbiologicamente poveri. Una mancata interazione tra i microrganismi endogeni del terreno e gli apparati radicali delle specie vegetali erbacee rende queste ultime meno resistenti agli insulti meccanici e più facilmente esposte a infezioni virali, batteriche e fungine. It is known that, in order to meet the aesthetic and functional needs of lawns intended for sports or ornamental use, the plant species forming the aforementioned lawns are grown in conditions that are not optimal for the development of the respective root systems, i.e. in substrates inert and microbiologically poor. A lack of interaction between endogenous soil microorganisms and the root systems of herbaceous plant species makes the latter less resistant to mechanical insults and more easily exposed to viral, bacterial and fungal infections.

In particolare, nel settore dei tappeti erbosi destinati all’uso sportivo e/o ricreativo, è noto un problema che affligge i prati degli impianti golfistici ed è rappresentato da un indesiderato ispessimento del c.d. feltro. Per “feltro” s’intende uno strato costituito da radici, foglie e materiale vegetale indecomposto, strato che viene naturalmente prodotto in un prato in buone condizioni. Il feltro svolge un ruolo chiave nella struttura di un prato d’impianto golfistico, specialmente all’ interno del puttìng green (l’area erbosa circondante le buche), poiché una certa quantità di feltro è necessaria per ridurre lo stress da calpestio e per la dinamica d’impatto della pallina da golf. In particular, in the field of turf for sports and / or recreational use, a problem is known that afflicts the lawns of golf facilities and is represented by an unwanted thickening of the so-called felt. By "felt" we mean a layer consisting of roots, leaves and undecomposed plant material, a layer that is naturally produced in a lawn in good condition. Felt plays a key role in the structure of a golf course lawn, especially inside the putting green (the grassy area surrounding the holes), as a certain amount of felt is needed to reduce footfall stress and for impact dynamics of the golf ball.

Tuttavia, accade inevitabilmente che le procedure d’irrigazione e l’uso di fertilizzanti producano un accumulo di materiale vegetale, con un conseguente ispessimento dello strato di feltro. Ciò provoca svariati problemi, quali una ridotta permeabilità all’acqua, una ridotta capacità di scambi gassosi tra strati superficiali e strati più profondi del terreno e un accumulo di umidità nel terreno. Di conseguenza, il feltro diventa una zona di accumulo e propagazione per le principali patologie fungine che affliggono il putting green, quali quelle causate dalle specie Sclerotinia homeocarpa e Rizoctonia solani. Sono noti svariati metodi agronomici che consentono di degradare il feltro e che si eseguono in prefissati periodi dell’anno, come la foratura, la carotatura, il vertical mowing (incisione verticale del tappeto erboso) e il top-dressing (riempimento delle depressioni superficiali del tappeto erboso con terriccio e sabbia). I suddetti trattamenti mirano ad asportare materiale compattato, permettere un’ossigenazione a livello radicale e ristabilire una corretta porosità del terreno. However, it inevitably happens that the irrigation procedures and the use of fertilizers produce an accumulation of plant material, with a consequent thickening of the felt layer. This causes various problems, such as reduced water permeability, a reduced capacity for gaseous exchanges between surface layers and deeper layers of the soil and an accumulation of moisture in the soil. Consequently, the felt becomes an accumulation and propagation area for the main fungal diseases that afflict the putting green, such as those caused by the species Sclerotinia homeocarpa and Rizoctonia solani. Various agronomic methods are known which allow to degrade the felt and which are carried out at predetermined times of the year, such as drilling, coring, vertical mowing (vertical incision of the turf) and top-dressing (filling the surface depressions of the turf with soil and sand). The aforementioned treatments aim to remove compacted material, allow oxygenation at the root level and restore correct porosity of the soil.

Un inconveniente dei metodi agronomici noti consiste nel fatto che questi ultimi, sebbene efficaci, causano inevitabilmente un’interruzione estetica e funzionale del prato deH’impianto golfistico in cui sono eseguiti. A drawback of known agronomic methods consists in the fact that the latter, although effective, inevitably cause an aesthetic and functional interruption of the lawn of the golf facility in which they are performed.

Un altro inconveniente dei metodi agronomici noti consiste nel fatto che questi ultimi richiedono l’intervento di personale specializzato e l’uso di specifiche attrezzature, risultando quindi significativamente costosi. Another drawback of known agronomic methods consists in the fact that the latter require the intervention of specialized personnel and the use of specific equipment, thus being significantly expensive.

Per contenere le infezioni fungine, oltre ad agire con metodi agronomici sui fattori favorenti (ispessimento dello strato di feltro), sono noti, e ampiamente usati, metodi di trattamento chimico dei tappeti erbosi con specifici prodotti (fungicidi). To contain fungal infections, in addition to acting with agronomic methods on the favoring factors (thickening of the felt layer), methods of chemical treatment of lawns with specific products (fungicides) are known and widely used.

Tuttavia, anche i metodi di trattamento chimico noti incrementano la spesa necessaria per la manutenzione dei tappeti erbosi. Inoltre, i metodi di trattamento chimico noti richiedono l’uso di sostanze tossiche e presentano quindi un significativo impatto ambientale. However, known chemical treatment methods also increase the cost of maintaining lawns. In addition, the known chemical treatment methods require the use of toxic substances and therefore have a significant environmental impact.

Per cercare di superare gli inconvenienti connessi ai metodi agronomici e chimici noti, è stato proposto l’uso di composizioni, a base di microrganismi, che sarebbero in grado di colpire gli agenti fitopatogeni fungini e contenere quindi le infezioni vegetali causate da questi ultimi. To try to overcome the drawbacks associated with known agronomic and chemical methods, the use of compositions based on microorganisms has been proposed, which would be able to target fungal phytopathogens and therefore contain plant infections caused by the latter.

W096/29874 descrive composizioni contenenti i ceppi YCED 9 e WYE 53 di Streptomyces, utilizzabili per ridurre la suscettibilità alle infezioni fungine in piante d’interesse agronomico. I ceppi YCED 9 e WYE 53 sono in grado di produrre metaboliti antimicrobici, tra cui metaboliti antifu ngini, con i quali è possibile trattare gli apparati radicali delle piante o i semi di queste ultime. W096 / 29874 describes compositions containing strains YCED 9 and WYE 53 of Streptomyces, which can be used to reduce susceptibility to fungal infections in plants of agronomic interest. Strains YCED 9 and WYE 53 are capable of producing antimicrobial metabolites, including antifungal metabolites, with which it is possible to treat the root systems of plants or their seeds.

Un inconveniente della composizione descritta in W096/29874 consiste nel fatto che l’azione antifungina è svolta da ceppi batterici producenti metaboliti antimicrobici. A drawback of the composition described in W096 / 29874 consists in the fact that the antifungal action is carried out by bacterial strains producing antimicrobial metabolites.

Infatti, Γ immissione nel terreno dei suddetti metaboliti tende a ridurre in modo significativo la biodiversità in situ, eliminando specie microbiche potenzialmente utili o almeno non nocive alle piante. Pertanto, si rischia di impoverire microbiologicamente il terreno trattato, causando la summenzionata mancata interazione tra microrganismi endogeni del terreno e apparati radicali delle specie vegetali erbacee e rendendo queste ultime più facilmente esposte a infezioni virali, batteriche e fungine. In fact, the introduction of the aforementioned metabolites into the soil tends to significantly reduce in situ biodiversity, eliminating potentially useful microbial species or at least not harmful to plants. Therefore, there is a risk of microbiologically depleting the treated soil, causing the aforementioned lack of interaction between endogenous soil microorganisms and root systems of herbaceous plant species and making the latter more easily exposed to viral, bacterial and fungal infections.

Uno scopo dell’ invenzione è migliorare le composizioni e i metodi noti per prevenire l’ispessimento dello strato di feltro nei tappeti erbosi e per contenere le infezioni fungine in questi ultimi. An object of the invention is to improve the compositions and methods known to prevent the thickening of the felt layer in lawns and to contain fungal infections in the latter.

Un altro scopo è rendere disponibili una composizione e un metodo per promuovere la crescita di piante erbacee in tappeti erbosi, in particolare favorendo una benefica interazione tra i microrganismi endogeni del terreno e gli apparati radicali delle piante erbacee, e favorire un accumulo di sostanza organica nei suddetti tappeti erbosi. Another purpose is to make available a composition and a method for promoting the growth of herbaceous plants in lawns, in particular by favoring a beneficial interaction between the endogenous microorganisms of the soil and the root systems of herbaceous plants, and to favor an accumulation of organic substance in the aforesaid turf.

Un ulteriore scopo è rendere disponibili una composizione e un metodo per prevenire l’ispessimento dello strato di feltro nei tappeti erbosi, così da evitare, o almeno ridurre al minimo, l’intervento di personale specializzato e l’uso di specifiche attrezzature. A further purpose is to make available a composition and a method to prevent the thickening of the felt layer in lawns, so as to avoid, or at least minimize, the intervention of specialized personnel and the use of specific equipment.

Un altro ulteriore scopo è rendere disponibili una composizione e un metodo per contenere le infezioni fungine nei tappeti erbosi, che consentano di evitare l’uso di sostanze chimiche tossiche e/o di metaboliti microbici nocivi per la biodiversità. Another further purpose is to make available a composition and a method for containing fungal infections in lawns, which make it possible to avoid the use of toxic chemicals and / or microbial metabolites harmful to biodiversity.

In un primo aspetto dell’invenzione, è prevista una composizione per promuovere la crescita di piante erbacee in un terreno e favorire un accumulo di sostanza organica in detto terreno, come definita nella rivendicazione I . In a first aspect of the invention, a composition is provided for promoting the growth of herbaceous plants in a soil and promoting an accumulation of organic substance in said soil, as defined in claim I.

In un secondo aspetto dell’invenzione, è previsto un metodo per promuovere la crescita di piante erbacee in un terreno e favorire un accumulo di sostanza organica in detto terreno, come definito nella rivendicazione 9. In a second aspect of the invention, a method is provided for promoting the growth of herbaceous plants in a soil and promoting an accumulation of organic matter in said soil, as defined in claim 9.

Grazie a questi aspetti vengono resi disponibili una composizione e un metodo che, come evidenziato dalle prove sperimentali condotte (e descritte in dettaglio nel seguito), assicurano evidenti effetti sia sulle piante, sia sul substrato di crescita di queste ultime. Infatti, la composizione e il metodo secondo l’invenzione consentono di ottenere; Thanks to these aspects, a composition and a method are made available which, as evidenced by the experimental tests conducted (and described in detail below), ensure evident effects both on the plants and on the growth substrate of the latter. In fact, the composition and the method according to the invention allow to obtain;

1) una promozione di crescita della pianta, evidenziata da un miglior radicamento, una più intensa colorazione della porzione epigea e una maggiore tenacità e resistenza agli insulti meccanici; 1) a growth promotion of the plant, highlighted by a better rooting, a more intense coloring of the epigeal portion and a greater toughness and resistance to mechanical insults;

2) un maggiore accumulo di sostanza organica nel substrato di crescita, ossia nel terreno. 2) a greater accumulation of organic matter in the growth substrate, ie in the soil.

La composizione e il metodo secondo Γ invenzione possono essere agevolmente ed efficacemente utilizzati nella coltivazione sia di piante d’interesse agronomico, sia di piante ornamentali. In particolare, non essendo necessario Γ intervento di personale specializzato, la composizione e il metodo secondo l’invenzione possono essere utilizzati in quegli ambienti di crescita che generano significativi problemi tecnici e di manutenzione. The composition and method according to the invention can be easily and effectively used in the cultivation of both plants of agronomic interest and ornamental plants. In particular, since the intervention of specialized personnel is not necessary, the composition and method according to the invention can be used in those growth environments that generate significant technical and maintenance problems.

L’uso della composizione e del metodo secondo l’invenzione può essere ampiamente diffuso nei sistemi agricoli a basso input, quale ad esempio l’agricoltura biologica, data la natura organica della composizione. Infatti, la composizione secondo l’invenzione non contiene sostanze xenobiotiche, che sono nocive per l’ambiente e, in particolare, per il microbiota naturale della rizosfera. The use of the composition and method according to the invention can be widely used in low-input agricultural systems, such as organic farming, given the organic nature of the composition. In fact, the composition according to the invention does not contain xenobiotic substances, which are harmful to the environment and, in particular, to the natural microbiota of the rhizosphere.

Nel settore dei tappeti erbosi destinati all’uso sportivo e/o ricreativo, è possibile utilizzare la composizione e il metodo secondo l’invenzione nella gestione (particolarmente onerosa) dei campi da golf. In the field of turf for sports and / or recreational use, it is possible to use the composition and method according to the invention in the (particularly expensive) management of golf courses.

Infatti, ciò consente innanzi tutto di abbassare i costi di gestione, poiché viene sostanzialmente ridotto il numero di interventi sul putting green per ripristinare un fisiologico stato di areazione del substrato. Inoltre, è possibile ridurre l’uso di trattamenti fitosanitari a base di composti chimici di sintesi, riducendo così al minimo l’uso dei fungicidi solitamente usati per controllare i funghi patogeni. In fact, this allows first of all to lower management costs, since the number of interventions on the putting green is substantially reduced to restore a physiological state of aeration of the substrate. Furthermore, it is possible to reduce the use of phytosanitary treatments based on synthetic chemical compounds, thus minimizing the use of fungicides usually used to control pathogenic fungi.

L’invenzione potrà essere meglio compresa e attuata con riferimento agli allegati disegni che ne illustrano una forma esemplificativa e non limitativa di attuazione, in cui: The invention can be better understood and implemented with reference to the attached drawings which illustrate an exemplary and non-limiting form of implementation, in which:

Figura 1 mostra due grafici, illustranti rispettivamente la produzione di biomassa fogliare fresca e la produzione di biomassa fogliare secca in parcelle di tappeto erboso trattate con la composizione secondo l’invenzione e in parcelle di tappeto erboso trattate con una composizione nota; Figure 1 shows two graphs, respectively illustrating the production of fresh foliar biomass and the production of dry foliar biomass in turf plots treated with the composition according to the invention and in turf plots treated with a known composition;

Figura 2 mostra due grafici, illustranti rispettivamente la produzione di biomassa fresca di feltro e radici e la produzione di biomassa secca di feltro e radici nelle parcelle di cui alla Figura 1 ; Figure 2 shows two graphs, respectively illustrating the production of fresh biomass of felt and roots and the production of dry biomass of felt and roots in the plots of Figure 1;

Figura 3 è un grafico illustrante la resistenza allo strappo nelle parcelle di cui alla Figura 1; Figure 3 is a graph illustrating the tear strength in the plots of Figure 1;

Figura 4 è un grafico illustrante il contenuto di carbonio organico nei primi 5 cm di suolo delle parcelle di cui alla Figura 1 ; Figure 4 is a graph illustrating the organic carbon content in the first 5 cm of soil of the plots of Figure 1;

Figura 5 mostra tre grafici, illustranti rispettivamente il contenuto percentuale di azoto, il contenuto percentuale di carbonio e il rapporto percentuale carbonio/azoto nel suolo delle parcelle di cui alla Figura 1; Figure 5 shows three graphs, respectively illustrating the percentage nitrogen content, the percentage carbon content and the percentage carbon / nitrogen ratio in the soil of the plots in Figure 1;

Figura 6 è un grafico illustrante il contenuto di umidità nei primi 5 cm di suolo delle parcelle di cui alla Figura 1; Figure 6 is a graph illustrating the moisture content in the first 5 cm of soil of the plots of Figure 1;

Figura 7 è un grafico illustrante un test di evapotraspirazione condotto su zolle erbose prelevate dalle parcelle di cui alla Figura 1 ; Figure 7 is a graph illustrating an evapotranspiration test conducted on turf taken from the plots of Figure 1;

Figura 8 mostra un grafico dello spazio colore RGB e una fotografia di una parcella di tappeto erboso trattata con la composizione secondo Γ invenzione, dopo due mesi di trattamento; Figure 8 shows a graph of the RGB color space and a photograph of a parcel of turf treated with the composition according to the invention, after two months of treatment;

Figura 9 mostra quattro grafici, illustranti rispettivamente il contenuto di clorofilla a, il contenuto di clorofilla b, il rapporto clorofilla a/ clorofilla b e il contenuto di clorofilla totale in foglie di erba ( Agrostis stolonifera) prelevate dalle parcelle di cui alla Figura 1; Figura 10 mostra una serie di fotografie, riassumenti i profili del suolo nelle parcelle di cui alla Figura 1; Figure 9 shows four graphs, respectively illustrating the chlorophyll a content, the chlorophyll b content, the chlorophyll a / chlorophyll b ratio and the total chlorophyll content in grass leaves (Agrostis stolonifera) taken from the plots in Figure 1; Figure 10 shows a series of photographs, summarizing the soil profiles in the plots in Figure 1;

Figura 11 è un grafico illustrante la riduzione dello spessore dello strato di feltro nelle parcelle di cui alla Figura 1. Figure 11 is a graph illustrating the reduction in the thickness of the felt layer in the plots shown in Figure 1.

La composizione secondo Γ invenzione comprende i seguenti componenti: The composition according to the invention comprises the following components:

a) Una miscela microbica, contenente ceppi microbici selezionati all<1>inter no della collezione del Dipartimento di Microbiologia del Dipartimento di Scienze Agrarie di Alma Mater Studiorum - Università di Bologna; a) A microbial mixture, containing microbial strains selected within the collection of the Department of Microbiology of the Department of Agricultural Sciences of Alma Mater Studiorum - University of Bologna;

b) Un fungo micorrizico, ossia un fungo il cui micelio è in grado di instaurare una simbiosi mutualistica con la radice di una pianta superiore (simbiosi micorrizica o micorriza); b) A mycorrhizal fungus, that is a fungus whose mycelium is able to establish a mutualistic symbiosis with the root of a superior plant (mycorrhizal symbiosis or mycorrhiza);

c) Una fonte di acidi umici (molecole organiche a catena lunga, di tipo colloidale). La miscela microbica è costituita da microorganismi appartenenti a: c) A source of humic acids (long-chain organic molecules, of the colloidal type). The microbial mixture consists of microorganisms belonging to:

Sei ceppi batterici ( Lactobacillus buchneri , Lactohacillus parafarraginis, Lactobacillus diolivorans, Lactobacillus plantarum , Stenotrophomonas maltophilia , Bacillus subtilìs ); Six bacterial strains (Lactobacillus buchneri, Lactohacillus parafarraginis, Lactobacillus diolivorans, Lactobacillus plantarum, Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus subtilìs);

Un ceppo di lievito ( Candida sp.). A strain of yeast (Candida sp.).

Con riferimento alla suddetta miscela microbica, nella seguente Tabella 1 sono riportati il nome di ciascun ceppo (come registrato nella collezione del summenzionato Dipartimento di Microbiologia), il nome del corrispondente microorganismo, Γ origine del ceppo e la probabile azione svolta da quest’ultimo: With reference to the aforementioned microbial mixture, the following Table 1 shows the name of each strain (as recorded in the collection of the aforementioned Department of Microbiology), the name of the corresponding microorganism, Γ origin of the strain and the likely action performed by the latter:

Tabella 1 Table 1

Ceppo Microorganismo Origine Azione probabile Strain Microorganism Origin Probable action

LB2 Lactobacillus Insilato di mais Azione antagonista-protettiva (competitore buchneri nei confronti di funghi e batteri patogeni) LB6 Lactobacillus Insilato di mais Azione antagonista -protettiva (competitore parafarraginis nei confronti di funghi e batteri patogeni) LB8 Lactobacillus Insilato di mais Azione antagonista-protettiva (competitore diolivorans nei confronti di funghi e batteri patogeni) LB9 Lactobacillus Insilato di mais Azione antagonista-protettiva (competitore pianta rum nei confronti di funghi e batteri patogeni) TS1 Stenotrophomon as Suolo forestale Azione degradatrice-demolitrice nei maltophilia confronti di materiale organico e feltro LB2 Lactobacillus Corn silage Antagonist-protective action (buchneri competitor against pathogenic fungi and bacteria) LB6 Lactobacillus Corn silage Antagonist-protective action (parafarraginis competitor against pathogenic fungi and bacteria) LB8 Lactobacillus Corn silage (antagonist-protective action diolivorans competitor against pathogenic fungi and bacteria) LB9 Lactobacillus Corn silage Antagonist-protective action (rum plant competitor against pathogenic fungi and bacteria) TS1 Stenotrophomon as Forest soil Degrading-demolishing action in maltophilia against organic material and felt

TS12 Bacillus subtilis Suolo forestale Azione degradatrice-demolitrice nei confronti di materiale organico e feltro; Azione anti -batterica e anti-fungina (nei confronti di specie patogene) SB 1 Candida sp. Suolo forestale Azione antagonista-protettiva (competitore nei confronti di funghi e batteri patogeni) Nella Tabella I l’azione svolta dai singoli ceppi (a l’intemo della composizione secondo l’invenzione) è definita come “probabile” in quanto non identificabile con certezza. Gli effetti benefici complessivi, e sperimentalmente verificati, ottenibili tramite la composizione secondo l’invenzione sono pertanto attribuibili a un’azione sinergica. Quest’ ultima è svolta dai vari ceppi della summenzionata miscela microbica, unitamente agli altri componenti della composizione (fungo micorrizico e fonte di acidi umici). TS12 Bacillus subtilis Forest soil Degrading-demolishing action against organic material and felt; Anti-bacterial and anti-fungal action (against pathogenic species) SB 1 Candida sp. Forest soil Antagonist-protective action (competitor against pathogenic fungi and bacteria) In Table I the action performed by the individual strains (within the composition according to the invention) is defined as "probable" as it cannot be identified with certainty . The overall beneficial effects, and experimentally verified, obtainable through the composition according to the invention are therefore attributable to a synergistic action. The latter is carried out by the various strains of the aforementioned microbial mixture, together with the other components of the composition (mycorrhizal fungus and source of humic acids).

Il ceppo LB2 (L. buchneri ) è stato depositato in data 13/07/2015 presso la collezione MSCL ( Microbial Strain Collection ofLatvia) con numero P1482. The LB2 strain (L. buchneri) was deposited on 13/07/2015 in the MSCL collection (Microbial Strain Collection of Latvia) with number P1482.

Il ceppo LB6 (L. parafarraginis) è stato depositato in data 13/07/2015 presso la collezione MSCL (Microbial Strain Collection ofLatvia) con numero PI 483. The LB6 strain (L. parafarraginis) was deposited on 13/07/2015 in the MSCL collection (Microbial Strain Collection of Latvia) with number PI 483.

Il ceppo LB8 (L, diolivorans) è stato depositato in data 13/07/2015 presso la collezione MSCL ( Microbial Strain Collection ofLatvia ) con numero P1484. The LB8 (L, diolivorans) strain was deposited on 13/07/2015 in the MSCL collection (Microbial Strain Collection of Latvia) with number P1484.

Il ceppo LB9 (L. plantarum) è stato depositato in data 13/07/2015 presso la collezione MSCL ( Microbial Strain Collection of Latvia) con numero P1487. The LB9 strain (L. plantarum) was deposited on 13/07/2015 in the MSCL collection (Microbial Strain Collection of Latvia) with number P1487.

Il ceppo TS1 ( Stenotrophomonas maltophilia) è stato depositato in data 13/073Co /2015 presso la collezione MSCL ( Microbial Strain Collection of Latvia) con numero o PI 485. The TS1 strain (Stenotrophomonas maltophilia) was deposited on 13 / 073Co / 2015 in the MSCL (Microbial Strain Collection of Latvia) with number o PI 485.

II ceppo TS12 ( Bacillus subtilis) è stato depositato in data 13/07/2015 presso la collezione MSCL ( Microbial Strain Collection of Latvia) con numero P1488. The TS12 strain (Bacillus subtilis) was deposited on 13/07/2015 in the MSCL collection (Microbial Strain Collection of Latvia) with number P1488.

Il ceppo SB1 ( Candida sp.) è stato depositato in data 13/07/2015 presso la collezione MSCL ( Microbial Strain Collection of Latvia) con numero PI 486. The SB1 strain (Candida sp.) Was deposited on 13/07/2015 in the MSCL (Microbial Strain Collection of Latvia) with number PI 486.

Nella seguente Tabella 2 è riportata la concentrazione in UFC/ml di prodotto per ciascun ceppo nella composizione secondo Pinvenzione: The following Table 2 shows the concentration in UFC / ml of product for each strain in the composition according to the invention:

Tabella 2 Table 2

Ceppo Microorganismo Concentrazione (UFC/ml) LB2 Lactobacìllus buchneri 1Ó'-10<8>Strain Microorganism Concentration (CFU / ml) LB2 Lactobacìllus buchneri 1Ó'-10 <8>

LB6 Lactobacillus parafarraginìs 10<7>-10<κ>LB6 Lactobacillus parafarraginìs 10 <7> -10 <κ>

LB8 Lactobacìllus diolivorans 10<7>-10<M>LB8 Lactobacillus diolivorans 10 <7> -10 <M>

LB9 Lactobacìllus plantarum 10<7>-Ì0<K>LB9 Lactobacillus plantarum 10 <7> -Ì0 <K>

TS1 Stenotrophomonas maltophilia IO<7>- IO<8>TS1 Stenotrophomonas maltophilia I <7> - I <8>

TS12 Bacillus subtilis IO<7>- IO<8>TS12 Bacillus subtilis IO <7> - IO <8>

SBI Candida sp. SBI Candida sp.

Valori di concentrazione superiori a quelli riportati nella Tabella 2 sono comunque accettabili poiché non inibiscono Pefficacia della composizione secondo l’invenzione. Il fungo micorrizico della composizione secondo l’invenzione è di tipo arbuscolare -vescicolare e appartiene alla specie Glomus intraradices . Questo fungo micorrizico svolge una funzione protettiva, poiché riduce stress biotici e abiotici a cui sono soggette le piante erbacee. Inoltre, il suddetto fungo micorrizico svolge una funzione migliorativa, poiché, tramite le proprie strutture arbuscolari, aumenta la capacità delle piante di assorbire elementi nutritivi e la traslocazione interna di elementi minerali. Concentration values higher than those reported in Table 2 are however acceptable since they do not inhibit the effectiveness of the composition according to the invention. The mycorrhizal fungus of the composition according to the invention is of the arbuscular-vesicular type and belongs to the Glomus intraradices species. This mycorrhizal fungus performs a protective function, as it reduces biotic and abiotic stresses to which herbaceous plants are subject. Furthermore, the aforementioned mycorrhizal fungus performs an improving function, since, through its arbuscular structures, it increases the ability of plants to absorb nutrients and the internal translocation of mineral elements.

La composizione secondo l’invenzione contiene propaguli - ossia spore - di Glomus intraradices in una concentrazione pari a 1-2 propaguli /mi di prodotto. The composition according to the invention contains propagules - ie spores - of Glomus intraradices in a concentration equal to 1-2 propagules / ml of product.

Nel seguito - sia nella descrizione che nelle rivendicazioni - i termini “propagulo” e “spora” sono da considerarsi sinonimi e del tutto equivalenti. In the following - both in the description and in the claims - the terms "propagule" and "spore" are to be considered synonyms and completely equivalent.

La fonte di acidi umici è la leonardite, un humus fossile. La leonardite è utilizzata usualmente come ammendante organico ed è disponibile commercialmente in forma di polvere o granuli. The source of humic acids is leonardite, a fossil humus. Leonardite is usually used as an organic soil conditioner and is commercially available in the form of powder or granules.

La composizione secondo Γ invenzione contiene leonardite in una concentrazione compresa fra 1% in peso e 5% in peso. The composition according to the invention contains leonardite in a concentration ranging from 1% by weight to 5% by weight.

A scopo esemplificativo, ma non limitativo, è descritta nel seguito una procedura per la preparazione della composizione secondo Γ invenzione. By way of example, but not of limitation, a procedure for the preparation of the composition according to the invention is described below.

Esempio 1. Preparazione di una composizione secondo Γ invenzione Example 1. Preparation of a composition according to the invention

1.1) Preparazione della miscela microbica 1.1) Preparation of the microbial mixture

Per ciascun ceppo si prepara una beuta contenente 50 mi di terreno colturale liquido (brodo). I terreni utilizzati sono i seguenti: A flask containing 50 ml of liquid culture medium (broth) is prepared for each strain. The soils used are the following:

- Brodo MRS (Man Rogo sa Sharpe Broth, prodotto da Oxoid) per i ceppi di Lactobacillus buchneri , Lactobacillus parafarraiginis, Lactobacillus diolivorans e Lactobacillus plantarum; - MRS broth (Man Rogo sa Sharpe Broth, produced by Oxoid) for the strains of Lactobacillus buchneri, Lactobacillus parafarraiginis, Lactobacillus diolivorans and Lactobacillus plantarum;

- Brodo BHI (Brain Heart Infusion Broth, prodotto da Beckton Dickinson) per i ceppi di Stenotrophomonas maltophilia e Bacillus subtilis; - BHI broth (Brain Heart Infusion Broth, produced by Beckton Dickinson) for the strains of Stenotrophomonas maltophilia and Bacillus subtilis;

- Brodo SBD (Sabouraud Dextrose Broth, prodotto da Oxoid) per il ceppo di Candida sp. Ciascun terreno colturale è preparato e sterilizzato utilizzando metodi e apparati di laboratorio noti. - SBD broth (Sabouraud Dextrose Broth, produced by Oxoid) for the strain of Candida sp. Each culture medium is prepared and sterilized using known laboratory methods and equipment.

Ciascuna beuta è inoculata al 5 % (vol/vol) con una coltura liquida del corrispondente ceppo, cresciuta per una notte in brodo MRS alla temperatura di 37 °C (Lactobacillus buchneri , Lactobacillus parafarraginis, Lactobacillus diolivorans e Lactobacillus plantarum), in brodo BHI alla temperatura di 30 °C (Stenotrophomonas maltophilia e Bacillus subtilis) o in brodo SDB (Candida sp). Each flask is inoculated at 5% (vol / vol) with a liquid culture of the corresponding strain, grown overnight in MRS broth at a temperature of 37 ° C (Lactobacillus buchneri, Lactobacillus parafarraginis, Lactobacillus diolivorans and Lactobacillus plantarum), in BHI broth at a temperature of 30 ° C (Stenotrophomonas maltophilia and Bacillus subtilis) or in SDB broth (Candida sp).

Le (sette) beute sono incubate per 48 h, a 37 °C (ceppi di Lactobacillus buchneri, Lactobacillus parafarraginis, Lactobacillus diolivorans e Lactobacillus plantarum) e a 30 °C per gli altri microrganismi (ceppi di Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus subtilis, Candida sp.). The (seven) flasks are incubated for 48 h, at 37 ° C (strains of Lactobacillus buchneri, Lactobacillus parafarraginis, Lactobacillus diolivorans and Lactobacillus plantarum) and at 30 ° C for the other microorganisms (strains of Stenotrophomonas maltophilia, Candillida sptilomonas subtophilia. ).

Dopo Γ incubazione, dalla coltura liquida di ciascuna beuta viene prelevata una aliquota da 100 mi, che viene centrifugata a 6000 rpm per 10 minuti a 4 °C. Le cellule microbiche così raccolte sono risospese in un appropriato volume di soluzione fisiologica (0,9 g NaCl/L) fino a raggiungere la concentrazione desiderata (IO<7>- IO<8>UFC/ml), After Γ incubation, a 100 ml aliquot is taken from the liquid culture of each flask and centrifuged at 6000 rpm for 10 minutes at 4 ° C. The microbial cells thus collected are resuspended in an appropriate volume of physiological solution (0.9 g NaCl / L) until the desired concentration (IO <7> - IO <8> CFU / ml) is reached,

1.2) Preparazione e aggiunta del fungo micorrizico 1.2) Preparation and addition of the mycorrhizal fungus

Il fungo micorrizico viene preparato partendo da un prodotto disponibile commercialmente, ad esempio Endomic Clay - Altea<®>, che è una formulazione a base di spore di Glomus intraradìces. Il prodotto è in forma di polvere bagnabile, avente una concentrazione in spore pari al 10% (100 propaguli/g). The mycorrhizal fungus is prepared starting from a commercially available product, for example Endomic Clay - Altea <®>, which is a spore-based formulation of Glomus intraradìces. The product is in the form of a wettable powder, having a spore concentration equal to 10% (100 propagules / g).

1.5 g della suddetta formulazione (contenenti 150 propaguli) vengono prelevati e dispersi nella soluzione fisiologica ottenuta come descritto nel precedente punto 1.1. 1.5 g of the above formulation (containing 150 propagules) are taken and dispersed in the physiological solution obtained as described in the previous point 1.1.

1.3) Preparazione e aggiunta della fonte di acidi umici 1.3) Preparation and addition of the source of humic acids

Come fonte di acidi umici si usa leonardite in forma di polvere. Quest’ultima viene disciolta (1 % p/v) nella soluzione fisiologica contenente la miscela microbica e le spore di fungo micorrizico, ottenuta come descritto nel precedente punto 1.2. Leonardite in powder form is used as a source of humic acids. The latter is dissolved (1% w / v) in the physiological solution containing the microbial mixture and the mycorrhizal fungus spores, obtained as described in the previous point 1.2.

Mediante agitazione per 15 minuti a 25 °C, la miscela microbica, le spore di fungo micorrizico e la fonte di acidi umici vengono reciprocamente miscelati fino ad ottenere un prodotto finale, corrispondente alla composizione secondo Γ invenzione. By stirring for 15 minutes at 25 ° C, the microbial mixture, the spores of mycorrhizal fungus and the source of humic acids are mixed together until a final product is obtained, corresponding to the composition according to the invention.

La composizione secondo Γ invenzione può essere conservata per 24 h a 4°C in condizioni di semi-oscurità, fino al momento dell’uso (applicazione in campo). The composition according to the invention can be stored for 24 hours at 4 ° C in semi-dark conditions, until the moment of use (field application).

Sempre a scopo esemplificativo, è descritta di seguito una prova sperimentale condotta dagli Inventori (per conto di Alma Mater Studiorum - Università di Bologna) e attestante l’efficacia della composizione e del metodo secondo l’invenzione. Again by way of example, an experimental test conducted by the Inventors (on behalf of Alma Mater Studiorum - University of Bologna) and certifying the effectiveness of the composition and method according to the invention is described below.

Esempio 2, Trattamento di parcelle di tappeto erboso con una composizione secondo Γ invenzione Example 2, Treatment of turf plots with a composition according to the invention

La prova sperimentale è stata condotta su un tappeto erboso destinato a uso sportivo, ossia un putting green professionale all’interno di un golf club in provincia di Bologna (Emilia-Romagna, Italia), Il putting green era costituito interamente dalla specie vegetale erbacea Agrostis stolonifera e realizzato secondo le linee guida USGA ( United States Golf Association) del 1994. The experimental test was conducted on a turf intended for sports use, i.e. a professional putting green within a golf club in the province of Bologna (Emilia-Romagna, Italy). The putting green was made up entirely of the herbaceous plant species Agrostis stolonifera and made according to the USGA (United States Golf Association) guidelines of 1994.

Nella prova sperimentale sono state coinvolte in totale 9 parcelle di tappeto erboso, così suddivise: A total of 9 turf plots were involved in the experimental test, divided as follows:

- 3 parcelle trattate con la composizione secondo l’invenzione; - 3 plots treated with the composition according to the invention;

- 3 parcelle trattate con un prodotto commerciale; - 3 parcels treated with a commercial product;

- 3 parcelle non trattate e fungenti da controllo. - 3 parcels not treated and acting as control.

Ogni parcella aveva un’estensione pari a ca. 2 m<2>. Each parcel had an extension of approx. 2 m <2>.

Il prodotto commerciale, utilizzato come elemento di confronto nella prova sperimentale, è costituito da batteri lattici (1,2 x IO<6>UFC/ml), lieviti (9,5 x IO<4>UFC/ml) e batteri fotosintetici (1,8 x IO<5>UFC/ml). The commercial product, used as a comparison element in the experimental test, consists of lactic bacteria (1.2 x IO <6> CFU / ml), yeasts (9.5 x IO <4> CFU / ml) and photosynthetic bacteria ( 1.8 x IO <5> UFC / ml).

I trattamenti sono stati somministrati alle parcelle settimanalmente per un periodo di due mesi (dal IO Luglio 2012 alFll Settembre 2012) e sono stati eseguiti durante la chiusura settimanale del golf club (martedì pomeriggio), in modo da evitare eventuali dispersioni e/o contaminazioni indotte dal calpestio degli atleti. The treatments were administered to the plots weekly for a period of two months (from 10 July 2012 to 11 September 2012) and were performed during the weekly closure of the golf club (Tuesday afternoon), in order to avoid any induced dispersions and / or contaminations. from the trampling of athletes.

Nel corso della prova sperimentale, la composizione secondo P invenzione è stata denominata “DiSTA PLUS” e con questa denominazione è indicata nelle Figure 1-1 L Durante ciascun trattamento la composizione secondo P invenzione è stata spruzzata a livello fogliare tramite una pompa, funzionante con pressione pari a 3 bar, così da somministrare 1 litro di composizione a ogni parcella. During the experimental test, the composition according to the invention was called "DiSTA PLUS" and with this name it is indicated in Figures 1-1. pressure equal to 3 bar, so as to administer 1 liter of composition to each parcel.

Dopo la suddetta somministrazione è stato attivato P impianto d’irrigazione del putting green per 2 min., fornendo un apporto d’acqua di circa 10 mm/m<2>. In questo modo, la composizione è stata dilavata dalla superfice fogliare e trasferita all’interno del suolo e del feltro. After the aforementioned administration, the irrigation system of the putting green was activated for 2 min., Providing a water supply of about 10 mm / m <2>. In this way, the composition was washed away from the leaf surface and transferred into the soil and felt.

Un’uguale procedura è stata seguita per somministrare i trattamenti alle parcelle trattate con il prodotto commerciale. An equal procedure was followed to administer the treatments to the plots treated with the commercial product.

Parallelamente ai trattamenti, le parcelle trattate (e non trattate) sono state sottoposte ad analisi settimanali (dal 9 luglio 2012 al 12 settembre 2012) per determinare con la massima accuratezza possibile gli effetti della composizione secondo l’invenzione sulle componenti chimiche, fisiche e biologiche di un tappeto erboso destinato all’uso sportivo. In parallel with the treatments, the treated (and untreated) plots were subjected to weekly analyzes (from 9 July 2012 to 12 September 2012) to determine with the greatest possible accuracy the effects of the composition according to the invention on the chemical, physical and biological components. of a turf intended for sports use.

I rilievi effettuati in campo, così come il prelievo di campioni, sono sempre stati eseguiti tra le 9 e le 10 del mattino. The surveys carried out in the field, as well as the taking of samples, were always carried out between 9 and 10 in the morning.

Analisi successive, miranti a monitorare gli effetti prodotti dalla composizione secondo l’invenzione nel tempo anche a cessazione dei trattamenti, sono state eseguite con cadenza mensile tra il 17 settembre 2012 e il 17 dicembre 2012. Subsequent analyzes, aimed at monitoring the effects produced by the composition according to the invention over time, even upon termination of the treatments, were performed on a monthly basis between 17 September 2012 and 17 December 2012.

Le analisi eseguite sono le seguenti: The analyzes performed are as follows:

- Produzione della biomassa fogliare; - Production of leaf biomass;

- Produzione della biomassa di radici e feltro; - Production of root and felt biomass;

- Resistenza allo strappo delle foglie; - Resistance to tearing of the leaves;

- Componente organica del suolo; - Organic component of the soil;

- Composizione chimica del suolo (carbonio e azoto); - Chemical composition of the soil (carbon and nitrogen);

- Umidità del suolo; - Soil humidity;

- Evapotraspirazione della superficie erbosa; - Evapotranspiration of the grass surface;

- Analisi del colore; - Color analysis;

- Contenuto di pigmenti fotosintetici nei tessuti fogliari; - Content of photosynthetic pigments in leaf tissues;

- Variazione del profilo degli orizzonti del suolo. - Variation of the profile of the soil horizons.

Α1Γ interno dell’area ( putting green ) coinvolta nella prova sperimentale, tutti i trattamenti chimici con fitosanitari e antiparassitari sono stati sospesi da aprile 2012 a dicembre 2012, in modo da non interferire con il metabolismo dei microrganismi presenti nella composizione secondo l’invenzione. Α1Γ inside the area (putting green) involved in the experimental test, all chemical treatments with phytosanitary and pesticides were suspended from April 2012 to December 2012, so as not to interfere with the metabolism of the microorganisms present in the composition according to the invention.

2.1) Metodi e risultati delle analisi 2.1) Methods and results of the analyzes

Produzione della biomassa fogliare Production of foliar biomass

L’analisi della biomassa fogliare è stata condotta prendendo in considerazione sia la biomassa fresca, sia la biomassa secca. Una volta alla settimana è stata prelevata una zolla di prato e da questa, in laboratorio, sono state tagliate e pesate foglie per ottenere il peso della biomassa fresca. Subito dopo, le foglie sono state poste in un essiccatore a 50°C per 4 giorni. Quando tutta l’umidità contenuta nei tessuti fogliari era evaporata, le foglie sono state pesate nuovamente per determinare il peso secco, ossia il peso della biomassa secca. Come mostrato nella Figura 1 (grafico a sinistra), i risultati analitici hanno evidenziato che, nelle parcelle trattate con la composizione secondo l’invenzione, la produzione di biomassa fresca è aumentata progressivamente nel corso dei 2 mesi di trattamenti, arrivando a un incremento del 26% rispetto all’inizio della prova. The foliar biomass analysis was conducted taking into consideration both fresh biomass and dry biomass. Once a week, a clod of grass was removed and leaves were cut and weighed in the laboratory to obtain the weight of the fresh biomass. Immediately thereafter, the leaves were placed in a dryer at 50 ° C for 4 days. When all the moisture contained in the leaf tissues had evaporated, the leaves were weighed again to determine the dry weight, i.e. the weight of the dry biomass. As shown in Figure 1 (graph on the left), the analytical results showed that, in the plots treated with the composition according to the invention, the production of fresh biomass increased progressively over the course of the 2 months of treatments, reaching an increase in 26% compared to the start of the test.

Al contrario, il prodotto commerciale ha causato una riduzione del 18% della biomassa fogliare fresca. Conversely, the commercial product caused an 18% reduction in fresh leaf biomass.

La produzione di biomassa secca (Figura 1, grafico a destra) non ha evidenziato differenze statisticamente significative in tutti i trattamenti eseguiti sebbene, mediante la composizione secondo l’invenzione, le medie sono risultate in crescita. The production of dry biomass (Figure 1, graph on the right) did not show statistically significant differences in all the treatments performed although, by means of the composition according to the invention, the averages were found to increase.

Produzione della biomassa di radici e feltro Root and felt biomass production

Dalla medesima zolla utilizzata per determinare il peso delle foglie è stato rimosso tramite lavaggio il terreno presente, lasciando solo radici, foglie e il materiale vegetale indecomposto che costituisce il feltro. Per non perdere materiale durante il lavaggio, le zolle sono state pulite all’ interno di un setaccio avente pori di 0,5 mm. Dopo aver determinato il peso fresco dei tessuti vegetali (biomassa fresca), questi sono stati messi in un essiccatore a 50°C per 4 giorni. Quando tutta P umidità contenuta nei tessuti vegetali era evaporata, questi sono stati ripesati al fine di determinare il peso secco (biomassa secca). Come mostrato nella Figura 2 (grafico a sinistra), nelle parcelle trattate con la composizione secondo l’invenzione è stata rilevata una riduzione statisticamente significativa, e pari al 15%, della biomassa fresca delle radici e del feltro. The soil present was removed from the same clod used to determine the weight of the leaves by washing, leaving only roots, leaves and the undecomposed plant material that constitutes the felt. In order not to lose material during washing, the clods were cleaned inside a sieve with pores of 0.5 mm. After determining the fresh weight of the plant tissues (fresh biomass), they were placed in a desiccator at 50 ° C for 4 days. When all the moisture contained in the plant tissues had evaporated, they were reweighed in order to determine the dry weight (dry biomass). As shown in Figure 2 (graph on the left), in the plots treated with the composition according to the invention, a statistically significant reduction, equal to 15%, of the fresh biomass of the roots and of the felt was found.

Al contrario, il prodotto commerciale e il controllo non hanno mostrato effetti significativi. L’effetto della composizione secondo l’invenzione è risultato essere ancora più determinante sulla diminuzione della biomassa secca (Figura 2, grafico a destra). In contrast, the commercial product and the control did not show significant effects. The effect of the composition according to the invention was found to be even more decisive on the decrease in dry biomass (Figure 2, graph on the right).

Resistenza allo strappo delle foglie Resistance to tearing of leaves

La resistenza allo strappo delle foglie è stata analizzata direttamente in campo, utilizzando un dinamometro meccanico. L’estremità del dinamometro, fornita di una pinzetta, è stata attaccata alla base del culmo di una pianta di Agrostis stolonifera. La resistenza fornita dal dinamometro, tirando in senso opposto al terreno, ha determinato lo strappo della piantina. Sia il prodotto commerciale che la composizione secondo l’invenzione hanno determinato un aumento della resistenza delle foglie di Agrostis stolonifera allo strappo rispetto al controllo. Come mostrato nella Figura 3, la composizione secondo l’invenzione ha mostrato un effetto leggermente superiore al prodotto commerciale. The tear resistance of the leaves was analyzed directly in the field, using a mechanical dynamometer. The end of the dynamometer, equipped with tweezers, was attached to the base of the stem of an Agrostis stolonifera plant. The resistance provided by the dynamometer, pulling in the opposite direction to the ground, caused the tearing of the seedling. Both the commercial product and the composition according to the invention resulted in an increase in the resistance of the leaves of Agrostis stolonifera to tearing compared to the control. As shown in Figure 3, the composition according to the invention showed a slightly higher effect than the commercial product.

Componente organica del suolo Organic component of the soil

La componente organica del suolo è stata analizzata su campioni (porzioni di suolo o zolle) corrispondenti ai primi 5 cm di suolo, partendo dalla base del culmo di piante di Agrostis stolonifera. I campioni sono stati prima pesati, poi essiccati a 50°C per 4 giorni, fino al completo disseccamento. E’ stato determinato il peso a umidità pari a zero. Successivamente, i campioni sono stati messi in una muffola a 550 °C per 3 ore, in modo da incenerire tutta la componente organica presente. Una volta rimossi dalla muffola, i campioni sono stati raffreddati in un contenitore in assenza di umidità e quindi pesati, per determinare la perdita di peso corrispondente alla quantità di carbonio organico incenerita. Come mostrato nella Figura 4, durante l’intera prova sperimentale la composizione secondo l’invenzione ha prodotto una graduale diminuzione del contenuto in carbonio organico nei primi 5 cm di suolo al di sotto dello strato di Agrostis stolonifera, mentre il trattamento con il prodotto commerciale non ha mostrato differenze statisticamente significative rispetto al controllo. The organic component of the soil was analyzed on samples (portions of soil or clods) corresponding to the first 5 cm of soil, starting from the base of the stem of Agrostis stolonifera plants. The samples were first weighed, then dried at 50 ° C for 4 days, until completely dry. The weight at zero humidity was determined. Subsequently, the samples were placed in a muffle at 550 ° C for 3 hours, in order to incinerate all the organic component present. Once removed from the flask, the samples were cooled in a moisture-free container and then weighed to determine the weight loss corresponding to the amount of organic carbon incinerated. As shown in Figure 4, during the entire experimental test the composition according to the invention produced a gradual decrease of the organic carbon content in the first 5 cm of soil below the Agrostis stolonifera layer, while the treatment with the commercial product showed no statistically significant differences from the control.

La differenza di valori indotta dalla composizione secondo Γ invenzione è imputabile alla degradazione del feltro prodotta dai microrganismi introdotti, i quali hanno mineralizzato e trasformato in metaboliti il carbonio costituente la cellulosa e la lignina del feltro. The difference in values induced by the composition according to the invention is attributable to the degradation of the felt produced by the microorganisms introduced, which have mineralized and transformed the carbon constituting the cellulose and the lignin of the felt into metabolites.

Composizione chimica del suolo (carbonio e azoto) Soil chemical composition (carbon and nitrogen)

Le analisi chimiche del contenuto di carbonio e azoto sono state eseguite su campioni (porzioni di suolo o zolle) corrispondenti ai primi 5 cm di suolo, partendo dalla base del culmo di piante di Agrostis stolonifera. I campioni sono stati essiccati e poi finemente tritati. Una volta pronti, i campioni sono stati analizzati tramite strumento CHN (analizzatore elementare). Chemical analyzes of the carbon and nitrogen content were performed on samples (portions of soil or clods) corresponding to the first 5 cm of soil, starting from the base of the Agrostis stolonifera culm. The samples were dried and then finely chopped. Once ready, the samples were analyzed by means of a CHN instrument (elemental analyzer).

Come mostrato nella Figura 5, durante i due mesi della prova sperimentale, entrambi i trattamenti applicati (composizione secondo Γ invenzione; prodotto commerciale) hanno determinato un aumento dei valori in azoto totale e carbonio totale all’ interno dei primi 5 centimetri di suolo. L’aumento di carbonio all’ interno del suolo è stato probabilmente causato dall’ utilizzo di prodotti di natura organica come microrganismi e acidi umici, composti a lunghe catene carboniose. As shown in Figure 5, during the two months of the experimental test, both treatments applied (composition according to the invention; commercial product) resulted in an increase in the values in total nitrogen and total carbon within the first 5 centimeters of soil. The increase in carbon inside the soil was probably caused by the use of organic products such as microorganisms and humic acids, compounds with long carbon chains.

Umidità del suolo Soil moisture

L’umidità del suolo è stata determinata prelevando campioni (carote) di suolo e determinandone il contenuto idrico tramite essiccamento dei campioni alla temperatura di 80 °C, fino al raggiungimento del peso secco stabile. The soil moisture was determined by taking soil samples (carrots) and determining the water content by drying the samples at a temperature of 80 ° C, until the stable dry weight was reached.

Come mostrato nella Figura 6, in due mesi di trattamenti la composizione secondo l’invenzione ha causato una diminuzione statisticamente significativa, e pari al 6%, del umidità nel suolo. As shown in Figure 6, in two months of treatments, the composition according to the invention caused a statistically significant decrease, equal to 6%, of soil moisture.

Al contrario, il prodotto commerciale non ha causato differenze di umidità rispetto al controllo. In contrast, the commercial product caused no differences in humidity from the control.

Evapotraspirazione della superficie erbosa Evapotranspiration of the grass surface

L’analisi dell 'evapotraspirazione è stata condotta utilizzando delle zolle di terreno di 2,5 x 10 cm di superficie e 8 cm di profondità. Queste zolle sono state portate in laboratorio, pesate e quindi innaffiate fino a raggiungere la capacità di campo (intesa come il contenuto di acqua in un terreno associato a un potenziale idrico uguale a -0.33 bar). La zolla è stata quasi completamente isolata con paraffini, lasciando libera solo la superficie superiore, in modo che la perdita d’acqua fosse dovuta esclusivamente all 'evapotraspirazione. Le zolle sono state messe in una camera di crescita con illuminazione artificiale. Il fotoperiodo e la temperatura sono stati regolati a; 16 ore di luce a 28 °C; 8 di buio a 20°C. La perdita di peso di ogni zolla, determinata dall’ evapotraspirazione di acqua, è stata misurata ogni giorno alle h. 17.00 fino al totale disseccamento del suolo. The evapotranspiration analysis was conducted using clods of soil of 2.5 x 10 cm in surface and 8 cm in depth. These clods were brought to the laboratory, weighed and then watered until they reached the field capacity (understood as the water content in a soil associated with a water potential equal to -0.33 bar). The clod was almost completely insulated with paraffins, leaving only the upper surface free, so that the loss of water was exclusively due to evapotranspiration. The sod was placed in a growing chamber with artificial lighting. The photoperiod and temperature were adjusted to; 16 hours of light at 28 ° C; 8 in the dark at 20 ° C. The weight loss of each clod, determined by the evapotranspiration of water, was measured every day at h. 17.00 until the total desiccation of the soil.

Come mostrato nella Figura 7, le zolle prelevate dalle parcelle trattate con la composizione secondo Γ invenzione hanno mostrato una capacità di evapotraspirare l’acqua (ivi contenuta) maggiore rispetto al controllo e al prodotto commerciale, arrivando a perdere metà del contenuto idrico in 10 giorni. As shown in Figure 7, the clods taken from the plots treated with the composition according to the invention showed a greater ability to evapotranspirate the water (contained therein) than the control and the commercial product, losing half of the water content in 10 days. .

Al contrario, le zolle trattate con il prodotto commerciale non hanno determinato una differenza statisticamente significativa rispetto al controllo. On the contrary, the clods treated with the commercial product did not cause a statistically significant difference with respect to the control.

Analisi del colore Color analysis

Il colore della superficie erbosa è stato misurato ogni settimana, catturando immagini a 2000 x 2000 pixel mediante una macchina fotografica reflex Canon EOS 350D. Si è cercato di garantire l’omogeneità di cattura delle fotografie, mantenendo le medesime impostazioni di apertura del diaframma e tempo di esposizione (velocità scatto = 1/800 sec; apertura diaframma F = 16; sensibilità = ISO 1600; lunghezza focale = 18 mm). Inoltre, le differenze di luce determinate dalle condizioni metereologiche sono state ridotte normalizzando le immagini con un programma fotografico professionale (Adobe Photoshop Lightroom 4). Le immagini digitali di ogni parcella (coinvolta nella prova sperimentale) sono state elaborate con il software APS ASSESS 2.0, con cui sono stati ottenuti i valori del colore nella scala RGB. The color of the turf was measured weekly, capturing 2000 x 2000 pixel images using a Canon EOS 350D SLR camera. An attempt was made to ensure homogeneous capture of the photographs, maintaining the same aperture and exposure time settings (shutter speed = 1/800 sec; aperture F = 16; sensitivity = ISO 1600; focal length = 18 mm ). Furthermore, the differences in light caused by the weather conditions have been reduced by normalizing the images with a professional photographic program (Adobe Photoshop Lightroom 4). The digital images of each plot (involved in the experimental test) were processed with the APS ASSESS 2.0 software, with which the color values in the RGB scale were obtained.

Come si evince daH’immagine scattata in campo (parte destra di Figura 8) e dal grafico dello spazio colore RGB (parte sinistra di Figura 8), dopo 2 mesi di trattamenti le parcelle trattate con la composizione secondo l’invenzione hanno mostrato un colore nettamente differente rispetto al controllo e al prodotto commerciale. As can be seen from the image taken in the field (right part of Figure 8) and the graph of the RGB color space (left part of Figure 8), after 2 months of treatments the plots treated with the composition according to the invention showed a color distinctly different from control and commercial product.

La grande differenza di colore è in minima parte determinata da un differente contenuto in pigmenti fotosintetici (come spiegato nel seguito), ma piuttosto da una quasi totale assenza di muschio nelle parcelle trattate con la composizione secondo l’invenzione. The large color difference is minimally determined by a different content in photosynthetic pigments (as explained below), but rather by an almost total absence of moss in the plots treated with the composition according to the invention.

Nelle parcelle del controllo e in quelle trattate con il prodotto commerciale la presenza di muschio ha raggiunto anche F80% della superficie a discapito di Agrostis stolonifera. Ciò ha causato un viraggio di colore verso valori più elevati nella scala RGB, in altre parole verso tonalità che sono proprie del muschio. In the control plots and in those treated with the commercial product, the presence of moss also reached 80% of the surface to the detriment of Agrostis stolonifera. This caused a color change towards higher values on the RGB scale, in other words towards shades that are typical of moss.

Contenuto di pigmenti fotosintetici nei tessuti fogliari Content of photosynthetic pigments in leaf tissues

L’analisi condotta per determinare il contenuto di pigmenti fogliari all’ interno dei tessuti vegetali è consistita in una determinazione quantitativa di clorofilla a, clorofilla b e carotenoidi mediante uno spettrofotometro a UV, The analysis conducted to determine the content of foliar pigments within the plant tissues consisted of a quantitative determination of chlorophyll a, chlorophyll b and carotenoids using a UV spectrophotometer,

Le foglie sono state campionate dalle parcelle e subito congelate in azoto liquido per poter essere successivamente analizzate in laboratorio. The leaves were sampled from the plots and immediately frozen in liquid nitrogen to be subsequently analyzed in the laboratory.

Al momento dell’analisi 50mg di foglie sono state tritate in un mortaio, aggiungendo 10 mg di MgC03per neutralizzare l’acidità dei soluti ed evitare la conversione della clorofilla a in feofitina. Al materiale tritato nel mortaio sono stati aggiunti 10 mL di acetone al 100%. Il tutto è stato trasferito in provette (per centrifuga) falcon da 15 mL, che sono state collocate al buio per 12 ore. At the time of analysis, 50mg of leaves were chopped in a mortar, adding 10 mg of MgC03 to neutralize the acidity of the solutes and avoid the conversion of chlorophyll a into phaeophytin. 10 mL of 100% acetone was added to the minced material in the mortar. The whole was transferred into 15 mL falcon tubes (centrifuge), which were placed in the dark for 12 hours.

Il giorno successivo, le provette falcon sono state centrifugate a 10°C per 10 minuti a 1000 rpm. Aliquote del sopranatante di estratto fogliare sono state prelevate con pipette da I mL e inserite in cuvette con un cammino ottico da I cm per la lettura allo spettrofotometro. The next day, the falcon tubes were centrifuged at 10 ° C for 10 minutes at 1000 rpm. Aliquots of the foliar extract supernatant were collected with 1 mL pipettes and inserted into cuvettes with an optical path of 1 cm for reading on the spectrophotometer.

Le letture sono state eseguite alle seguenti lunghezze d’onda: The readings were performed at the following wavelengths:

661,6 nm = massimo picco di assorbimento della clorofilla a, con acetone al 100%; 644,8 nm = massimo picco di assorbimento della clorofilla b, con acetone al 100%; 470 nm = massimo picco di assorbimento dei carotenoidi, con acetone al 100%. II coefficiente di estinzione utilizzato per calcolare la concentrazione dei pigmenti fogliari è stato descritto da Lichtenthaler ( Lichtenthaler , H.K., 1981. Adaptation of leaves and chloroplasts to high quanta fluence rates. Photosynthesis VI. Ed. G. Akoyunoglou, Balahan Internai. Science Service, Philadelphia, pp. 273-287.): 661.6 nm = maximum absorption peak of chlorophyll a, with 100% acetone; 644.8 nm = maximum absorption peak of chlorophyll b, with 100% acetone; 470 nm = maximum absorption peak of carotenoids, with 100% acetone. The extinction coefficient used to calculate the concentration of foliar pigments was described by Lichtenthaler (Lichtenthaler, H.K., 1981. Adaptation of leaves and chloroplasts to high quanta fluence rates. Photosynthesis VI. Ed. G. Akoyunoglou, Balahan Internai. Science Service, Philadelphia, pp. 273-287.):

ca (pg/mL) = 11,24 * A661,6 - 2,04 * A644,8 ca (pg / mL) = 11.24 * A661.6 - 2.04 * A644.8

cb (pg/mL) = 20,13 * A644,8 -4,19 * A661,6 cb (pg / mL) = 20.13 * A644.8 -4.19 * A661.6

c(c+x) (pg/mL) = (1000 * A470 - 1,90 * ca - 63,14 * cb) I 214. c (c + x) (pg / mL) = (1000 * A470 - 1.90 * ca - 63.14 * cb) I 214.

I dati analitici relativi al contenuto di clorofilla a e clorofilla b hanno evidenziato una concentrazione di pigmenti fogliari tendenzialmente bassi rispetto ai valori di piante eliofile, in tutti i trattamenti applicati e nel controllo. Questo dato è comunque in accordo con quanto dimostrato da Larkindale ( Jane Larkindale, Bingru Huang Changes, 2004. Changes oflipid composition and saturatìon level in leaves and roots far heat-stressed and heat-acclimated creeping bentgrass (Agrostis stolonifera). Environmental and Experimental Botany Voi 51 pp 57-67) poiché le analisi sono state condotte durante un periodo in cui le temperature, superando più volte il valore di 30°C, hanno indotto uno stress termico alle foglie, che è una delle principali cause della riduzione dei pigmenti fotosintetici. The analytical data relating to the content of chlorophyll a and chlorophyll b showed a concentration of foliar pigments that tended to be low compared to the values of heliophilic plants, in all the treatments applied and in the control. However, this data is in agreement with what Larkindale demonstrated (Jane Larkindale, Bingru Huang Changes, 2004. Changes oflipid composition and saturated level in leaves and roots far heat-stressed and heat-acclimated creeping bentgrass (Agrostis stolonifera). Environmental and Experimental Botany You 51 pp 57-67) since the analyzes were carried out during a period in which temperatures, exceeding the value of 30 ° C several times, induced thermal stress on the leaves, which is one of the main causes of the reduction of photosynthetic pigments .

Come mostrato nella Figura 9 (grafico in alto a sinistra), il trattamento con il prodotto commerciale ha determinato un aumento del 69% del contenuto di clorofilla a dopo un mese dall’ inizio dei trattamenti e questo dato non è variato nel mese successivo. As shown in Figure 9 (top left graph), treatment with the commercial product resulted in a 69% increase in the chlorophyll content one month after the start of treatments and this figure did not change in the following month.

Il trattamento con la composizione secondo Γ invenzione ha determinato un aumento della concentrazione di clorofilla a del 76% nel primo mese, diminuendo a 48% alla fine della prova. The treatment with the composition according to the invention determined an increase in the concentration of chlorophyll a by 76% in the first month, decreasing to 48% at the end of the test.

Un andamento simile (Figura 9, grafico in alto a destra) è stato ottenuto anche per la clorofilla b, sia per le piante trattate con il prodotto commerciale, sia per le piante trattate con la composizione secondo l’invenzione. A similar trend (Figure 9, top right graph) was also obtained for chlorophyll b, both for the plants treated with the commercial product, and for the plants treated with the composition according to the invention.

Il rapporto tra la concentrazione di clorofilla a e la concentrazione di clorofilla b è un tipico parametro per descrivere lo stato fisiologico di una pianta. Generalmente questo rapporto è 3, 5-4, 5 per piante cresciute in pieno sole e 2, 5-3, 5 per piante in parziale ombra {Lichtenthaler, H.K., 1981. Adaptation of leaves and chloroplasts to high quanta fluence rates. Photosynthesis VI. Ed. G. Akoyunoglou, Balaban Internai. Science Service, Philadelphia, pp. 273-287). Tutte le analisi effettuate hanno rilevato un rapporto tra clorofilla a e clorofilla b pari a circa 1,5 -2, il che indica una condizione di stress generale del tappeto erboso. The relationship between the concentration of chlorophyll a and the concentration of chlorophyll b is a typical parameter to describe the physiological state of a plant. Generally this ratio is 3.5-4.5 for plants grown in full sun and 2.5-3.5 for plants in partial shade {Lichtenthaler, H.K., 1981. Adaptation of leaves and chloroplasts to high quanta fluence rates. Photosynthesis VI. Ed. G. Akoyunoglou, Balaban Internai. Science Service, Philadelphia, pp. 273-287). All the analyzes carried out revealed a ratio of chlorophyll a to chlorophyll b of approximately 1.5-2, which indicates a general stress condition of the turf.

Come mostrato nella Figura 9 (grafico in basso a sinistra), durante l’intera prova sperimentale nel controllo e nelle parcelle trattate con il prodotto commerciale il rapporto è diminuito del 20-30%, mentre nelle parcelle trattate con la composizione secondo l’invenzione il rapporto è rimasto pressoché invariato. As shown in Figure 9 (bottom left graph), during the entire experimental test in the control and in the plots treated with the commercial product the ratio decreased by 20-30%, while in the plots treated with the composition according to the invention the ratio remained virtually unchanged.

Variazione del profilo degli orizzonti del suolo Variation of the profile of the soil horizons

L’analisi della variazione del profilo degli orizzonti del suolo è stata eseguita direttamente in campo. Una volta alla settimana, da ogni parcella (coinvolta nella prova sperimentale) è stato prelevato un campione di suolo mediante una carotatrice, in grado di estrarre porzioni di suolo fino a 20 cm di profondità. Ogni campione estratto è stato riposto orizzontalmente sul terreno e sono stati misurati gli spessori dei diversi orizzonti che costituiscono il profilo di un suolo di un putting green. I profili del suolo ottenuti durante l’intera prova sperimentale, nelle parcelle trattate (composizione secondo l’invenzione; prodotto commerciale) e non trattate (controllo) sono riassunti nella Figura 10, The analysis of the variation in the profile of the soil horizons was performed directly in the field. Once a week, a soil sample was taken from each parcel (involved in the experimental test) by means of a core drill, capable of extracting portions of soil up to 20 cm deep. Each extracted sample was placed horizontally on the ground and the thicknesses of the different horizons that make up the profile of a putting green ground were measured. The soil profiles obtained during the entire experimental test, in the treated plots (composition according to the invention; commercial product) and untreated (control) are summarized in Figure 10,

Come mostrato nella Figura 11, durante i due mesi di trattamento, la composizione secondo l’invenzione ha causato una costante riduzione dello spessore dello strato di feltro, arrivando a ridurre quest’ultimo oltre il 26 % rispetto all’inizio della prova sperimentale. Anche il prodotto commerciale ha causato una riduzione del feltro, ma solo del 6% rispetto ai valori d’inizio prova e comunque senza produrre un effetto statisticamente significativo rispetto al controllo. As shown in Figure 11, during the two months of treatment, the composition according to the invention caused a constant reduction in the thickness of the felt layer, reducing the latter by more than 26% compared to the start of the experimental test. The commercial product also caused a reduction in the felt, but only by 6% compared to the starting test values and in any case without producing a statistically significant effect compared to the control.

Un ulteriore cambiamento del profilo del suolo indotto dalla composizione secondo l’invenzione è consistito in un aumento di humus, ossia lo strato marrone scuro sottostante al feltro e composto da materia organica in decomposizione. A further change in the soil profile induced by the composition according to the invention consisted of an increase in humus, i.e. the dark brown layer underlying the felt and composed of decaying organic matter.

In conclusione, i risultati della prova sperimentale sopra descritti dimostrano che la composizione e il metodo secondo l’invenzione consentono di ottenere contemporaneamente i seguenti effetti: In conclusion, the results of the experimental test described above show that the composition and the method according to the invention allow the following effects to be obtained simultaneously:

- Aumento della biomassa fogliare e nuovi bilanci di fertirrigazione; - Increase of foliar biomass and new fertigation budgets;

- Diminuzione della biomassa del feltro, aumento dell ’evapotraspir azione e diminuzione del muschio. - Decrease in the biomass of the felt, increase in evapotranspiration and decrease in moss.

E’ stato dimostrato che la composizione secondo l’invenzione ha prodotto un aumento della produzione di biomassa fogliare. Pur non essendo del tutto conforme ai parametri richiesti per il putting green di un campo da golf (in cui si cerca di ridurre al minimo la crescita per abbassare la frequenza, e quindi i costi, degli interventi di taglio dell’erba), questo dato sperimentale è tuttavia interpretabile positivamente. It has been shown that the composition according to the invention has produced an increase in the production of leaf biomass. Although not fully compliant with the parameters required for the putting green of a golf course (in which we try to minimize growth in order to lower the frequency, and therefore the costs, of cutting grass), this data however, it can be positively interpreted.

Infatti, la spinta d’accrescimento indotta dalla composizione secondo l’invenzione è attribuibile a una maggior disponibilità di nutrienti per le piante, maggior disponibilità che è ottenuta grazie alla degradazione del feltro. Conseguentemente, un nuovo bilancio di fertilizzazioni - rese meno frequenti durante l’anno tenendo conto del riciclo della biomassa indotto dalla composizione secondo l’invenzione - può ridurre la produzione di biomassa fogliare e consentire di ridurre il numero, e quindi il costo, degli interventi di manutenzione sui tappeti erbosi. In fact, the growth thrust induced by the composition according to the invention is attributable to a greater availability of nutrients for plants, greater availability which is obtained thanks to the degradation of the felt. Consequently, a new fertilization balance - made less frequent during the year taking into account the biomass recycling induced by the composition according to the invention - can reduce the production of foliar biomass and allow to reduce the number, and therefore the cost, of interventions. maintenance on lawns.

Inoltre, il trattamento con la composizione secondo l’invenzione ha prodotto un chiaro effetto positivo sulla capacità respirativa del prato. Questo effetto è fortemente correlato con la riduzione dello strato di feltro, riduzione prodotta dall’azione metabolica e sinergica dei microrganismi, delle micorrize (formate grazie alla presenza del fungo micorrizico nella composizione secondo l’invenzione) e degli acidi umici. La riduzione dello strato di feltro ha ridotto l’effetto isolante che quest’ultimo causa tra suolo e superfìcie, facilitando gli scambi gassosi, l’infiltrazione dell’acqua e di conseguenza migliorando lo stato fisiologico dell’intera superficie erbosa. Furthermore, the treatment with the composition according to the invention produced a clear positive effect on the respiratory capacity of the lawn. This effect is strongly correlated with the reduction of the felt layer, a reduction produced by the metabolic and synergistic action of microorganisms, mycorrhizae (formed thanks to the presence of the mycorrhizal fungus in the composition according to the invention) and humic acids. The reduction of the felt layer has reduced the insulating effect that the latter causes between soil and surface, facilitating gas exchange, water infiltration and consequently improving the physiological state of the entire grassy surface.

Inoltre, sebbene non siano stati applicati altri interventi manutentivi durante la prova sperimentale, un minore contenuto di umidità nelle parcelle trattate con la composizione secondo l’invenzione ha evitato quasi completamente la colonizzazione da parte di specie igrofde. Furthermore, although no other maintenance interventions were applied during the experimental test, a lower moisture content in the plots treated with the composition according to the invention almost completely avoided colonization by hygrophid species.

Claims

CLAIMS 1. A composition for promoting the growth of herbaceous plants in a soil and promoting an accumulation of organic matter in said soil, comprising a mixture of microorganisms, mycorrhizal fungus spores and a source of humic acids, wherein said mixture of microorganisms comprises at least one microorganism belonging to the genus Lactobacillus, at least one microorganism belonging to the genus Bacillus, at least one microorganism belonging to the genus Stenotrophomonas and at least one microorganism belonging to the genus Candida.

2. Composition according to claim 1, wherein said mixture of microorganisms comprises Lactobacillus buchneri, Lactobacillus parafarraginis, Lactobacillus diolivorans, Lactobacillus plantarum, Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus subtilis and Candida sp.

3. Composition according to claim 2, wherein said mixture of microorganisms comprises the following strains: Lactobacìllus buchneri LB2, registered under number P1482; Lactobacillus parafarraginis LB6, registered with number PI 483; Lactobacillus diolivorans LB8, registered under number P1484; Lactobacillus plantarum LB9, registered under number P1487; - Stenotrophomonas maltophilia TS1, registered under number P1485; - Bacillus subtilis TS12, registered with number P1488; - Candida sp. SB1, filed under number P1486.

4. Composition according to claim 3, wherein each of said strains has a concentration equal to 10 <7> - 10 <8> UFC / ml.

5. Composition according to one of the preceding claims, wherein said mycorrhizal fungus belongs to the Glomus intraradices species,

6. Composition according to one of the preceding claims, wherein said humic acid source comprises leonardite.

7. Composition according to one of the preceding claims, in which said mycorrhizal fungus spores are contained in a concentration equal to 1-2 propagules / ml.

8. Composition according to one of the preceding claims, in which said source of humic acids is contained in a percentage by weight of between 1% and 5%.

9. A method for promoting the growth of herbaceous plants in a soil and promoting an accumulation of organic matter in said soil, comprising administering to said plants and / or said soil a composition comprising a mixture of microorganisms, mycorrhizal fungus spores and a source of humic acids, said mixture of microorganisms comprising at least one microorganism belonging to the genus Lactobacillus, at least one microorganism belonging to the genus Bacillus, at least one microorganism belonging to the genus Stenotrophomonas and at least one microorganism belonging to the genus Candida.

Method according to claim 9, wherein said composition is the composition according to one of claims 2 to 8.

The method according to claim 9 or 10, wherein said administering comprises spraying said composition on a leaf surface of said plants.

Method according to one of claims 9 to 11, comprising, after said spraying, irrigating said plants with water, so as to wash off said composition from said leaf surface and transfer said composition inside said soil.