IT201900003325A1

IT201900003325A1 - Composizione per la prevenzione e trattamento della dermatite atopica

Info

Publication number: IT201900003325A1
Application number: IT102019000003325A
Authority: IT
Inventors: Marcella Massimini; Vedove Elena Dalle; Benedetta Bachetti; Cataldo Ribecco
Original assignee: C I A M S R L
Priority date: 2019-03-07
Filing date: 2019-03-07
Publication date: 2020-09-07

Description

"Composizione per la prevenzione e trattamento della dermatite atopica"

CAMPO DELL'INVENZIONE

La presente invenzione si riferisce ad una composizione comprendente Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina ed al suo uso nella prevenzione e trattamento del prurito, in particolare nella dermatite atopica negli animali domestici ed in particolare nei cani.

STATO DELL’ARTE

Il prurito nei cani è uno dei fastidi più diffusi e spiacevoli; ad oggi non esiste una vera e propria classificazione eziologica, esclusi parassiti ed acari. La ricerca della causa scatenante è spesso lunga e complessa; i motivi possono essere molteplici, anche se i più comuni sono quelli di natura allergica. Malattie come la dermatite atopica e l’allergia alimentare rappresentano le cause più frequenti del prurito (Olivry T et al. 2015). La dermatite atopica (DA) è un problema rilevante poiché affligge il 15% dell’intera popolazione canina ed il 58% dei cani affetti da patologie cutanee (Hill et al. 2006). La DA, nel cane, nonostante sia stata identificata come patologia di tipo allergico, ha una patofisiologia complessa e presenta sintomi clinici differenti rispetto all’uomo, dovuti anche al fatto che può essere o meno rilevata la presenza delle Ig(E) (Marsella et al. 2017). Data la diversità dei sintomi clinici, si rende necessario un approccio terapeutico che consideri il paziente, ed il suo proprietario a 360°, come il grado di severità della patologia, il quantitativo di farmaco necessario, le esigenze del proprietario e la qualità della vita (Santoro et al. 2019).

Ad oggi i farmaci in commercio più diffusi, in ambito veterinario, sono le creme per recuperare l’integrità e l’idratazione della cute, gli anti-infiammatori, locali e sistemici. I più utilizzati ed efficaci sono i glucocorticoidi di nuova generazione e gli inibitori della calcineurina, che agiscono sia sul blocco della cascata infiammatoria che sul prurito ma hanno sia importanti effetti collaterali che costi elevati. Buone alternative possono essere gli antistaminici e gli anestetici locali, che hanno però un’efficacia limitata (Santoro et al. 2019). Il farmaco d’élite per il trattamento del prurito, nonché il più venduto è l’Apoquel. L’Oclacitinib, principio attivo del farmaco risulta efficace sia sul processo infiammatorio che sullo stimolo del prurito grazie al suo meccanismo d’azione, inibente la via di segnalazione mediata dalle Janus Chinasi, centrale nella risposta cellulare alle interleuchine principalmente coinvolte nella patologia, IL4, IL13 ed IL31 (Gonzales et al. 2014). Nonostante l’elevata efficacia nel trattamento del prurito, alcuni studi riportano diversi effetti collaterali a lungo termine quali infezioni del tratto urinario, vomito, otiti, pioderma, diarrea e masse dermiche, epidermiche e sottocutanee di origine sconosciuta (Cosgrove et al. 2015).

Escludendo lokivetmab, farmaco iniettabile di ultimissima generazione, per i suoi costi elevati, diverse sono le terapie alternative in sviluppo, mirate sia alla prevenzione che al trattamento, in associazione ai farmaci più comuni. Negli ultimi anni la ricerca si è spostata verso i composti naturali, poiché presentano meno effetti collaterali rispetto ai farmaci, ma allo stesso tempo sono capaci di prevenire la malattia e ridurne i sintomi, nello stato dell’arte tuttavia non sono stati ancora identificate composizioni con ingredienti naturali efficaci.

Scopo della presente invenzione è quello di fornire una composizione per uso nella prevenzione e/o il trattamento del prurito negli animali, in particolare per uso nella prevenzione e/o il trattamento della dermatite atopica nei cani.

SOMMARIO DELL'INVENZIONE

La presente invenzione è basata sulla ricerca e sulla identificazione di una nuova combinazione di ingredienti attivi che esercitano effetti di prevenzione e trattamento del prurito negli animali, in particolare la miscela d’ingredienti attivi è usata nella prevenzione e trattamento della dermatite atopica nei cani. Come mostrato negli esempi, la miscela Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina permette di ottenere effetti antinfiammatori particolarmente utili nel trattamento di tali patologie.

La presente invenzione si riferisce a composizioni comprendenti o consistenti in una miscela di Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina ed al loro uso come medicamento, in particolare per uso in un metodo di trattamento veterinario.

Altri vantaggi e caratteristiche della presente invenzione risulteranno evidenti dalla seguente descrizione dettagliata.

BREVE DESCRIZIONE DELLE FIGURE

Figure 1-2. La valutazione delle dosi massime utilizzabili in vitro è stata effettuata con un saggio sulla vitalità cellulare, l’MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) assay.

Figure 3-6. Le figure mostrano in forma di grafici la down regolazione dei geni ccl2, ccl5, ccl17 e tslp nei cheratinociti indotta dall’uso combinato di Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina.

Figure 7-9. Le figure mostrano in forma di grafici la down regolazione dei geni ccl2, ccl17 e il31r indotta dall’uso combinato di Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL’INVENZIONE

La presente invenzione descrive una composizione comprendente come principali ingredienti attivi: Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina.

Il cannabidiolo (CBD) è un metabolita della Cannabis sativa. Il piceatannolo è un derivato del resveratrolo avente la seguente formula:

La Luteolina è un flavonoide presente in diverse piante spesso è presente nelle foglie, ma è anche presente in scorze, corteccia, fiore di Trifoglio e polline di Ambrosia. È stata inoltre isolata dalle piante aromatiche, ad esempio Salvia tomentosa, la menta, la famiglia delle Lamiaceae.

Le composizioni secondo la presente invenzione potranno comprendere la Luteolina purificata dagli estratti sopra descritti o gli estratti stessi.

Gli estratti e i composti qui descritti potranno essere ottenuti con le tecniche convenzionali note al tecnico del settore o acquistati in quanto commercialmente disponibili.

Le composizioni avranno preferibilmente una concentrazione di Luteolina per unità di dosaggio da somministrare compresa tra 0.05 mg a 500 mg, più preferibilmente tra 0.10 e 200 mg.

Le composizioni avranno preferibilmente una concentrazione di piceatannolo per unità di dosaggio da somministrare compresa tra 0.05 mg a 500 mg, più preferibilmente tra 0.10 e 200 mg.

Le composizioni avranno preferibilmente una concentrazione di Cannabidiolo per unità di dosaggio da somministrare compresa tra 0.010 mg a 200 mg, più preferibilmente tra 0.030 e 100 mg.

Secondo una forma di realizzazione preferita il rapporto tra i tre ingredienti attivi Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina nella composizione sarà rispettivamente di 1:2,5;2,5, ad esempio la composizione comprenderà per ogni mg di Cannabidiolo 2,5 mg Piceatannolo e 2,5 mg Luteolina.

Le composizioni secondo la presente invenzione potranno essere formulate sotto qualsiasi forma idonea alla somministrazione indicata ed associate a qualsiasi altro componente idoneo, in una varietà di modi, ad esempio saranno formulate per la somministrazione orale come soluzioni, sospensioni, preparati solidi. Le composizioni potranno essere formulate con eccipienti e/o diluenti e/o altri ingredienti alimentari idonei.

Secondo una forma di realizzazione le composizioni saranno formulate per uso orale ad esempio come capsule, capsule molli, compresse, pillole, gelatine, polveri o granuli. Queste formulazioni possono anche contenere dolcificanti e aromi.

Le composizioni potranno essere ad esempio un integratore alimentare, una composizione nutraceutica, un prodotto alimentare, un nutraceutico, un medicamento.

Le composizioni saranno principalmente destinate ad essere utilizzati sugli animali, in particolare animali domestici, in particolare sui cani.

La combinazione degli ingredienti attivi sopra detti potrà essere usata formulata in un’unica composizione secondo le varie forme di realizzazione sopra descritte o in un kit che contiene i diversi ingredienti separati, ad esempio in composizioni singole come capsule, pillole pasticche per somministrazione sequenziale o contemporanea dei diversi ingredienti. Secondo una forma di realizzazione le composizioni secondo la presente invenzione saranno in forma di uso topico, ad esempio potranno essere in una forma qualsiasi scelta tra gel, unguento, crema, pomata, schiuma, polvere, spray, emulsione olio in acqua, emulsione acqua in olio, emulsione olio in gel, emulsione gel in olio, sospensione, paste.

Le composizioni secondo la presente invenzione saranno usate come medicamento, in particolare in un metodo di trattamento terapeutico veterinario, in particolare per la prevenzione e/o il trattamento della dermatite atopica, più in generale del prurito, in particolare in animali domestici, in particolare nei cani.

Di seguito sono riportati alcuni esempi non limitativi di alcune forme di realizzazione della presente invenzione

ESEMPI ESEMPIO 1

Composto Quantità per 1 g di composizione

Cannabidiolo 1 mg

Piceatannolo 2,5 mg

Luteolina 2,5 mg

Cellulosa microcristallina 992,4 mg

Silice Colloidale 2 mg

Magnesio stearato 5 mg

ESEMPIO 2

Composto Quantità per 1 g di composizione Cannabidiolo 0,5 mg

Piceatannolo 1,25 mg

Luteolina 1,25 mg

Amido pregelatinizzato 972 mg

Magnesio stearato 15 mg

Talco 5 mg

Silice Colloidale 5 mg

ESEMPIO 3

Composto Quantità per 100 g di composizione Cannabidiolo 5 mg

Piceatannolo 12,5 mg

Luteolina 12,5 mg

Carmellosa sodica 2,5 g

Glicerina 5 g

Metil-p-idrossibenzoato 0,105 g

Propil-p-idrossibenzoato 0,045 g

Acqua depurata q.b. a 100 g

ESEMPIO 4

Composto Quantità per 100 g di composizione

Cannabidiolo 10 mg

Piceatannolo 25 mg

Luteolina 25 mg

Alcol cetostearilico 18 g

Vaselina bianca 15 g

Paraffina liquida 10 g

Glicole propilenico 12 g

Sodio laurilsolfato 1 g

Acqua preservata q.b. a 100 g

Dati sperimentali

La consistente diffusione del problema ha spinto la comunità

scientifica verso la ricerca dei principali pathway coinvolti nella

patogenesi della DA canina al fine di trovare dei trattamenti efficaci sia nella prevenzione che nella cura della malattia; i risultati di un importante studio di Olivry e collaboratori del 2016, in cui è stato messo a punto un modello in vivo di prurito atopico nel cane, mostrano che questo è determinato dall’azione combinata di diversi tipi cellulari e geni diversi e che i trattamenti di successo richiedono l’utilizzo di principi attivi che abbiano uno spettro d’azione inibente diverse molecole e pathways. La forza della nostra mix risiede proprio nella capacità di modulare l’espressione di differenti molecole infiammatorie e pruritogene la cui espressione è indotta dalle interleuchine che dirigono la patologia in vivo, IL4, IL13 ed IL31 (Olivry et al. 2016). La mix ha la capacità infatti di diminuire l’espressione dei principali geni coinvolti nella patogenesi della dermatite atopica e del prurito del cane, ccl2 (C-C Motif Chemokine Ligand 2), ccl5 (C-C Motif Chemokine Ligand 5), ccl17 (C-C Motif Chemokine Ligand 17), e tslp (Thymic Stromal Lymphopoietin) nei cheratinociti e ccl2, ccl17 ed il31r (Interleukin-31 Receptor) nei monociti. Queste molecole sono estremamente coinvolte nel processo infiammatorio legato alla dermatite atopica poiché provocano, quando over-espresse, l’esacerbazione della sintomatologia richiamando le cellule infiammatorie in luogo. Ccl2 ha attività chemiotattica verso monociti e basofili ed è per questo implicata nelle infiammazioni cutanee determinate dall’infiltrazione dei monociti (Behfar et al.

2018). Ccl5 mostra la stessa attività verso monociti, cellule della memoria T-helper ed eosinofili, causando il rilascio di istamina dai basofili, ed attiva gli eosinofili (Qidwai et al. 2016). Ccl17 è il gene maggiormente up-regolato nel cane nel modello in vivo sopracitato di Olivry (Olivry et al. 2016); Ccl17 tra le varie funzioni, facilita l’interazione tra linfociti T e cellule dendritiche e determina la migrazione delle cellule di Langherans verso la cute (Globisch et al. 2014). Tslp è una citochina pleiotropica identificata principalmente come fattore di crescita linfocitario; essa contribuisce alla cronicità ed alla severità della dermatita atopica, sia nell’uomo che nel cane, ed insieme all’IL31 provoca lo stimolo del prurito direttamente sulle cellule nervose (Cianferoni et al. 2015). Il complesso IL-31/IL-31R è determinante nello sviluppo della patologia dato il consistente coinvolgimento dell’IL31 nella patogenesi atopica e nello stimolo al prurito sia nell’uomo che nel cane (Furue et al. 2017). Nei monociti, attiva diversi pathways di trasduzione che determinano la secrezione di diverse interleuchine infiammatorie quali IL-1β, IL-6 e IL-18 (Kasraie et al. 2010).

L’azione della miscela (mix) comprendente Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina è stata valutata su un modello in vitro di infiammazione cutanea messo a punto considerando le cellule coinvolte ed i principali mediatori dell’infiammazione atopica. (Olivry et al.

2016, Bin et al. 2016, McCandless et al. 2014). Cheratinociti (CPEK) e monociti (DH82 ATCC® CRL-10389) di specie canina sono stati infiammati con cIFNγ 5ng/mL per 48h cIL4 25ng/mL cIL13 25ng/mL cIL31 25ng/mL per 4h ed 8h. (Hermann et al. 2018, Gonzales et al.

2014, Stott et al. 2013, Asashina et al. 2017) e trattate poi con la mix di nutraceutici contenente Cannabidiolo 10μM, Piceatannolo 25μM e Luteolina 25μM. Per la valutazione delle dosi massime utilizzabili in vitro è stato effettuato un saggio sulla vitalità cellulare, l’MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) assay. I grafici delle figure 1 e 2 successivi mostrano l’effetto sulla vitalità cellulare di 4 concentrazioni di mix differenti, 10μM, 25μM, 50μM, 100μM (ciascun componente è presente nella miscela alla stessa concentrazione) per 4h, 8h e 24h ed in particolare un decremento della vitalità alla dose 50μM.

I grafici delle figure 3,4,5 e 6 mostrano la down regolazione dei geni ccl2, ccl5, ccl17 e tslp indotta dalla mix di nutraceutici nei cheratinociti. Il grafico a barre mostra la media+SEM (n=3) dell’espressione relativa dei geni rispetto al controllo (cellule non infiammate non trattate con la mix) dopo normalizzazione con la β-actina usata come standard interno. Le differenze statistiche tra i gruppi sono state valutate con l’ANOVA (*p ≤ 0.05 **p ≤ 0.01, ***p≤ 0.001, **** p≤ 0.0001).

I grafici delle figure 7, 8 e 9 mostrano la down regolazione dei geni ccl2, ccl17 e il31r indotta dalla mix di nutraceutici nei monociti.

Per concludere, sottolineiamo che i principi attivi della mix, utilizzati nella proporzione 1:2.5:2.5, hanno la capacità di agire contemporaneamente su due dei tipi cellulari cardine delle infiammazioni cutanee, i cheratinociti ed i monociti, e l’inibizione dell’espressione delle molecole infiammatorie in entrambe le cellule blocca una via di amplificazione da esse determinata che richiama tutte le cellule infiammatorie coinvolte nella patologia, diminuendone la cronicità. I dati ottenuti nella sperimentazione indicano che i tre ingredienti attivi selezionati: Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina, possono essere efficacemente utilizzati nella prevenzione e nel trattamento, in particolare come coadiuvante, in associazione alla terapia farmacologica, o come mantenimento per diminuire l’insorgenza delle recidive della dermatite atopica negli animali, in particolare nei cani.

Traduzione legenda figure:

cell viability vitalità cellulare

inflamed infiammata

Relative Espressione

expression relativa

Claims

RIVENDICAZIONI 1.Composizione comprendente Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina.
2. Composizione secondo la rivendicazione 1 per uso orale o topico.
3. Composizione secondo la rivendicazione 1 o 2 comprendente per unità di dosaggio: - Cannabidiolo in una quantità compresa tra 0,010 mg e 200 mg; e/o - Piceatannolo in una quantità compresa tra 0,05 mg e 500 mg; e/o - Luteolina in una quantità compresa tra 0,05 mg e 500 mg.
4. Composizione per somministrazione orale secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3 in una forma scelta tra capsula, capsula molle, compressa, pillola, gelatina, polvere, granulo, emulsione, soluzione, sospensione.
5. Composizione per somministrazione topica secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3 in una forma scelta tra, sospensione, pomata, unguento, polvere, crema
6. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 4 in cui detta composizione è un integratore alimentare, un alimento, un nutraceutico, un medicamento.
7. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 6 per uso nella prevenzione e/o il trattamento della dermatite atopica e/o del prurito
8. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 6 per uso come medicamento in un metodo di trattamento veterinario.
9. Composizione secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 6 per uso nella prevenzione e/o il trattamento della dermatite atopica e/o del prurito di un cane o altro animale domestico.
10. Composizione per uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 7 a 9, in cui il rapporto Cannabidiolo, Piceatannolo e Luteolina sono in rapporto 1:2,5:2,5.