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IT201900000801A1 - Composizione comprendente batteri probiotici non vitali e suo uso in terapia - Google Patents

Composizione comprendente batteri probiotici non vitali e suo uso in terapia Download PDF

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IT201900000801A1
IT201900000801A1 IT102019000000801A IT201900000801A IT201900000801A1 IT 201900000801 A1 IT201900000801 A1 IT 201900000801A1 IT 102019000000801 A IT102019000000801 A IT 102019000000801A IT 201900000801 A IT201900000801 A IT 201900000801A IT 201900000801 A1 IT201900000801 A1 IT 201900000801A1
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water
bacterium
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Patrizia Malfa
Giancarla Dondi
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Proge Farm Srl
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Description

DESCRIZIONE dell’invenzione avente per titolo:
“Composizione comprendente batteri probiotici non vitali e suo uso in terapia”
RIASSUNTO
La presente invenzione riguarda delle composizioni, comprendenti batteri probiotici non vitali, e il loro uso in terapia, in particolare delle composizioni topiche, ma non solo, utili nel trattamento delle infezioni della pelle e delle mucose come pure delle allergie.
STATO DELL’ARTE
È stato recentemente osservato che le malattie provocate dalla proliferazione di microorganismi patogeni sulla cute e sulle mucose possono essere trattate tramite l’utilizzo topico, ovvero direttamente sulla parte interessata, di batteri non patogeni, quali ad esempio i batteri probiotici, i quali colonizzano la porzione di pelle o di mucosa su cui sono applicati ostacolando e spesso completamente risolvendo l’infezione in atto.
Il trattamento o la profilassi di dette malattie cutanee tramite l’utilizzo topico di batteri probiotici possiede alcuni vantaggi rispetto alla cura topica convenzionale con antimicrobici; ad esempio, tramite l’utilizzo di questi ultimi in determinate condizioni, si può verificare il ben noto fenomeno di resistenza agli antimicrobici.
Le composizioni topiche comprendenti batteri probiotici sono risultate utili non solo per le malattie cutanee causate da microorganismi patogeni, come la Malassezia o la Candida spp., bensì è stato osservato che permettono la prevenzione e il trattamento anche di diverse patologie cutanee e mucosali, come ad esempio la forfora, vari tipi di dermatite, la candidosi ed altre patologie correlate quali, ad esempio, l’endometriosi.
 
Si è anche osservato che alcuni batteri probiotici sono in grado di prevenire e trattare patologie cutanee di tipo allergico e di esercitare un’azione immunostimolante, come ad esempio descritto nel brevetto Europeo EP1915058B1, a nome della stessa Richiedente.
Alcuni regolamenti internazionali hanno recentemente disposto che il materiale biologico, inclusi i batteri probiotici, debba essere inattivato, cioè reso “non vitale”, prima della sua somministrazione all’uomo e agli animali.
La maggior parte dei batteri probiotici viene quindi ora comunemente sottoposta a trattamenti termici, quali ad esempio la “tindalizzazione”, detti trattamenti essendo in grado inattivare i batteri, rendendoli incapaci di riprodursi.
Pur essendo una tecnica abbastanza efficace al fine di inattivare i detti batteri, la tindalizzazione è un processo lungo e costoso che provoca lesioni alla parete del batterio e ne compromette le capacità adesive. Esistono altri trattamenti che possono inattivare i detti batteri quali, ad esempio, la lisi o il trattamento di spray-dried; in questi casi il risultato sono frammenti di batterio “non vitale” dove la parete viene completamente distrutta dal trattamento.
Esiste pertanto la necessità di ovviare agli inconvenienti di tali tecniche e quindi fornire nuovi procedimenti di inattivazione che permettano alle cellule batteriche di rimanere intatte in modo da presentare sulla superficie le adesine, proteine coinvolte nel meccanismo di adesione dei batteri probiotici adatti alla somministrazione all’uomo e agli animali.
SCOPI DELL’INVENZIONE
Scopo della presente invenzione è fornire una composizione che comprende batteri probiotici non vitali, da utilizzare essenzialmente per via topica.
Scopo della presente invenzione è anche fornire l’uso di detta composizione topica nella profilassi e nel trattamento di patologie della cute, delle mucose e del sistema immunitario. Un altro scopo dell’invenzione è fornire una composizione che comprende batteri probiotici
 
non vitali, da utilizzare essenzialmente per via topica, detti batteri essendo stati resi non vitali attraverso tecniche che escludono il trattamento termico, quale la tindalizzazione.
BREVE DESCRIZIONE DELLE FIGURE
La Figura 1 mostra il risultato sulla vitalità batterica del trattamento di inattivazione con raggi gamma.
La Figura 2 mostra i risultati del test di adesività condotto su ceppi vitali e non vitali di Lactobacillus plantarum P17630. In ordinata è indicato il numero di batteri adesi per cellula VEC.
DESCRIZIONE DELL’INVENZIONE
Secondo uno dei suoi aspetti, l’invenzione ha per oggetto una composizione, preferibilmente una composizione topica, comprendente almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico inattivato, detto batterio avente la parete cellulare sostanzialmente integra.
In particolare, l’invenzione ha per oggetto una composizione topica comprendente almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico inattivato attraverso la compromissione della funzionalità del DNA, detto batterio avente la parete cellulare sostanzialmente integra.
Il termine “compromissione della funzionalità del DNA” intende qui indicare che il sopra menzionato batterio probiotico è stato sottoposto a un trattamento di inattivazione che ha danneggiato la struttura del DNA del detto batterio, in un qualsiasi modo possibile, ad esempio causando rotture nelle catene nucleotidiche, denaturando la doppia elica del DNA, ecc.. Tale danneggiamento non permette al batterio di effettuare trascrizione genica e formare le proteine necessarie alla vita del batterio stesso, rendendolo incapace di metabolizzare, crescere e riprodursi.
Secondo la presente invenzione, il termine “batterio probiotico inattivato” (o anche solo “batterio non vitale” o “batterio secondo l’invenzione” o “batterio dell’invenzione” o loro
 
varianti) intende pertanto indicare che detto batterio è stato reso “non vitale”, attraverso la compromissione del suo metabolismo, della sua crescita e della sua riproduzione, attraverso il danneggiamento del suo DNA.
Secondo la presente invenzione, l’espressione “parete cellulare sostanzialmente integra” intende indicare che la parete del batterio è integra o comunque danneggiata in modo marginale, e che è ancora in grado di aderire ai tessuti del soggetto a cui viene somministrata per via topica, come sarà discusso più in dettaglio di seguito.
Nella presente descrizione, il batterio probiotico non vitale secondo l’invenzione è anche denominato “denattivato”. Detto batterio denattivato non è un batterio sottoposto a trattamenti termici, quali la tindalizzazione.
Secondo una forma di realizzazione preferita, detto almeno un batterio probiotico è scelto tra i generi bifidobatteri, lattobacilli, streptococchi e le loro miscele.
Secondo una forma di realizzazione preferita, detto almeno un batterio probiotico è scelto tra Lattobacilli, vantaggiosamente tra L. acidophilus, L. amylovorus, L. brevis, L. bulgaricus, L. casei, L. crispatus, L.delbrueckii, L. fermentum, L. gasseri, L. ingluviei, L. iners, L. intestinalis, L. jensenii, L. johnsonii, L. kalixensis, L. kefiranofaciens, L. kefiri, L. kimchii, L. kitasatonis, L. kunkeei, L. lactis, L. leichmannii, L. lindneri, L. malefermentans, L. mali, L. manihotivorans, L. mindensis, L. mucosae, L. murinus, L. nagelii, L. namurensis, L. nantensis, L. oligofermentans, L. oris, L. panis, L. pantheris, L. parabrevis, L. parabuchneri, L. paracasei, L. paracollinoides, L. parafarraginis, L. parakefiri, L. paralimentarius, L. paraplantarum, L. pentosus, L. perolens, L. plantarum, L. pontis, L. psittaci, L. rennini, L. reuteri, L. rhamnosus, L. rimae, L. rogosae, L. rossiae, L. ruminis, L. saerimneri, L. sake, L. salivarius, L. sanfranciscensis, L. satsumensis, L. secaliphilus, L. sharpeae, L. siliginis, L. spicheri, L. suebicus, L. thailandensis, L. trichodes, L. uli, L. ultunensis, L. vaccinostercus, L. vaginalis, L.
 
versmoldensis, L. vini, L. vitulinus, L. zeae, L. zymae e le loro miscele.
Secondo una forma di realizzazione particolarmente preferita, detto almeno un batterio probiotico è scelto tra Lactobacillus salivarius I 1794, Lactobacillus paracasei I 1688, Lactobacillus paracasei I 1687, Lactobacillus fermentum I 3677, depositati presso CIP Istituto Pasteur di Parigi, Francia e Lactobacillus plantarum P 17630, Lactobacillus crispatus P 17631, Lactobacillus gasseri P 17632, Lactobacillus gasseri P 18137, Lactobacillus acidophilus P 18806, Lactobacillus delbrueckii P 18805, Streptococcus thermophilus P 18807, Lactobacillus brevis CV7Lac (P30019), Lactobacillus paracasei LC11 (P30020), Lactobacillus brevis Y1 (P30021), Lactobacillus brevis CV2Lac (P30022), Lactobacillus plantarum CVI15B (P30023), Lactobacillus paracasei LC18 (P30024), Lactobacillus plantarum LM2 (P30025) depositati presso BCCM-LMG Laboratorium vor Microbiologie, Università di Gent, Gent Belgio e Lactobacillus rhamnosus ATCC®53103™, depositato presso L’American Type Culture Collection di Manassas, VA, USA, e le loro miscele.
Secondo una forma di realizzazione preferita, detto almeno un batterio probiotico è scelto tra Lactobacillus plantarum P 17630, Lactobacillus crispatus P 17631, Lactobacillus paracasei I 1688 e loro miscele.
Secondo una forma di realizzazione preferita, detto almeno un batterio probiotico è scelto tra Lactobacillus crispatus P 17631 e Lactobacillus paracasei I 1688 e loro miscele.
Secondo una forma di realizzazione preferita, detto almeno un batterio probiotico è scelto tra Lactobacillus plantarum P 17630.
Per “composizione” si intende secondo la presente invenzione, qualsiasi composizione sia essa farmaceutica, dietetica, alimentare o nutraceutica, che comprende i batteri non vitali sopra descritti o le loro miscele.
Secondo una forma di realizzazione preferita, la composizione dell’invenzione è una
 
composizione topica.
Il termine “composizione topica” (o il suo plurale) intende qui indicare una composizione farmaceuticamente accettabile adatta all’applicazione sulla pelle e/o sulle mucose dell’essere umano o animale, quest’ultimo essendo preferibilmente mammifero.
L’espressione “batterio probiotico” è convenzionalmente utilizzata nella tecnica e non necessita di specifiche spiegazioni.
Come detto, il batterio probiotico non vitale dell’invenzione è inattivato attraverso uno o più trattamenti atti a compromettere il suo metabolismo, la sua crescita e la sua riproduzione, pur mantenendo la sua parete cellulare sostanzialmente integra.
Detti trattamenti escludono pertanto i trattamenti termici, quali ad esempio la tindalizzazione. Secondo una forma di realizzazione preferita, il batterio probiotico non vitale dell’invenzione è inattivato attraverso il trattamento con raggi gamma, che danneggiano il suo DNA e rendono il batterio non più in grado di metabolizzare, crescere e riprodursi, ma che non alterano la parete cellulare del detto batterio.
L’irradiazione con raggi gamma è una tecnica nota che prevede l’esposizione di un prodotto, o in questo caso di un almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico, a radiazioni elettromagnetiche, solitamente emesse da cobalto 60 (<60>Co) o, più raramente, cesio 137 (<137>Ce). Nella pratica, è possibile irradiare uno o più ceppi di batteri probiotici, preferibilmente in forma liofilizzata, con dei raggi gamma in dosaggi sufficienti per inattivare detti uno o più ceppi di batteri probiotici; a titolo di esempio può essere usato un dosaggio di 10-50 kilogrey (kgy), preferibilmente 20-40 kgy, fino all’inattivazione completa dei detti uno o più ceppi di batteri probiotici. L’esperto del ramo è perfettamente in grado di determinare i parametri e le condizioni necessarie alla detta inattivazione.
Inoltre, l’avvenuta completa inattivazione è facilmente verificabile mediante l’enumerazione in
 
piastra, ossia seminando i batteri così trattati su un opportuno mezzo di coltura, secondo le procedure ben note all’esperto del ramo, e controllando che non vi sia crescita batterica. A titolo di controllo, si può ad esempio seminare in piastra, nelle stesse condizioni, il corrispondente ceppo non irradiato, ad esempio in quantità di 1x 10<8>-10<12>, per esempio 1x 10<11 >UFC/g (Unità Formanti Colonie/grammo).
E’ universalmente riconosciuto che l'adesione batterica alla cute o alla mucosa epiteliale svolge un ruolo primario, a livello di qualsiasi distretto, nella fisiologia del naturale microbiota dell'uomo e nella patogenesi delle infezioni sostenute da batteri patogeni, anche se non sono ancora completamente chiariti né il meccanismo né i fattori che regolano l’adesività.
Alcuni autori sostengono che nel meccanismo di adesione giochino un ruolo importante i legami chimici tra superfici; altri riportano che gli strati di carboidrati, rivestendo le cellule batteriche, mediano la fissazione; altri ancora prevedono la presenza di particolari macromolecole complesse identificate generalmente come “adesine”.
E’ noto che i batteri probiotici hanno dimostrato una spiccata capacità adesiva a cellule epiteliali quali quelle che costituiscono la cute, la mucosa vaginale, la mucosa intestinale, ecc. In letteratura sono riportati studi che dimostrano come la diversa capacità di adesione è tipica di un singolo individuo e non dell’intera specie batterica in quanto, ai fini del meccanismo di adesione, è importante sia la natura della superficie sulla quale il microorganismo dovrà aderire ma soprattutto le caratteristiche intrinseche del microorganismo stesso.
Nel brevetto Europeo EP1046713B1, a nome della presente Richiedente, è descritto un metodo per selezionare ceppi di batteri lattici particolarmente dotati di capacità adesive alle cellule e ai tessuti umani. Nel detto brevetto è anche espressamente descritto il ceppo batterico Lactobacillus plantarum P 17630, che ha mostrato spiccate proprietà adesive che gli permettono di prevenire e addirittura di competere con i microrganismi patogeni grazie al
 
biofilm di batteri lattici che è in grado di formare. Questo biofilm costituisce una vera e propria barriera tra l’epitelio ed eventuali batteri patogeni, poiché impedisce l'aderenza dei patogeni alla superficie tissutale delle cellule epiteliali, prevenendo e/o contrastando in tal modo le infezioni tossigene.
Si è osservato che, ancorché non vitali, i batteri probiotici irradiati secondo l’invenzione mantengono le loro proprietà adesive, non essendo la parete cellulare influenzata dal trattamento. I detti batteri conservano così le molecole presenti sulla loro parete esterna, quali ad esempio le adesine”, e possono esercitare la loro azione benefica sulla pelle e sulle mucose. Il batterio non vitale dell’invenzione è preferibilmente un batterio che ha buone capacità adesive alle cellule e ai tessuti del soggetto a cui viene somministrato per via topica, detto soggetto essendo vantaggiosamente un mammifero, preferibilmente un essere umano.
Secondo una forma di realizzazione particolarmente preferita, batterio non vitale dell’invenzione è selezionato per le sue capacità adesive, vantaggiosamente secondo il metodo descritto nel brevetto EP1046713B1. Vantaggiosamente, detto batterio non vitale è il Lactobacillus plantarum P 17630.
Come già detto, le composizioni dell’invenzione sono utili per la prevenzione e/o per il trattamento di patologie cutanee in generale, ad esempio per vari tipi di dermatite, come la dermatite atopica, la dermatite allergica da contatto e la dermatite irritativa da contatto, l’orticaria, l’eritema, la forfora, il lichen planus, la psoriasi, ed altre.
Le composizioni dell’invenzione risultano inoltre particolarmente utili per la prevenzione e/o il trattamento di patologie causate dalla proliferazione di microorganismi patogeni, ad esempio batteri e funghi; tali patologie includono la pitiryasis versicolor, la dermatite seborroica, la forfora, causate dai funghi del genere Malassezia, la tricofitosi o piede d’atleta, la tinea nigra, la tricosporosi bianca, la tricosporosi nera, la follicolite pitirosporica, la dermatomicosi, la
 
candidosi, l’onicomicosi, l’impetigine, la leishmaniosi, la scabbia, ed altre ancora. Inoltre, grazie alle loro capacità adesive, le composizioni dell’invenzione possono essere utilizzate anche come immunostimolanti della pelle e delle mucose e sono in grado di esercitare un’azione benefica contro le allergie.
Secondo una delle forme di realizzazione preferite, la composizione dell’invenzione è particolarmente adatta alla somministrazione vaginale, per contrastare disturbi quali infezioni da microrganismi patogeni. In questo caso, la composizione dell’invenzione può essere convenientemente formulata in ovuli o capsule vaginali, ad esempio in capsule di gelatina dure o molli, o ancora in gel, candelette, crema e simili.
Secondo una forma di realizzazione, le composizioni topiche dell’invenzione comprendono almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico reso non vitale secondo l’invenzione, insieme ad eccipienti convenzionali, incluse l’acqua e le soluzioni fisiologiche e, se desiderato o necessario, insieme ad eventuali altri principi attivi. A titolo di esempio, possono essere aggiunti degli ossidi metallici o semimetallici farmaceuticamente accettabili alle dette composizioni. La composizione topica dell’invenzione può essere una qualsiasi composizione topica convenzionale, formulata e/o allestita tramite processi altrettanto noti. Ad esempio, la composizione topica dell’invenzione può essere scelta tra creme, emulsioni multiple come emulsioni olio e/o silicone in acqua, emulsioni acqua-in-olio e/o silicone, emulsioni acqua/olio/acqua o acqua/silicone/acqua ed emulsioni olio/acqua/olio o silicone/acqua/silicone, composizioni anidre, dispersioni acquose, oli, latte, balsami, schiume, lozioni, gel, gel crema, soluzioni idroalcoliche, soluzioni idroglicoliche, idrogel, linimenti, cere, saponi, shampoo, ammorbidenti, sieri, unguenti, mousse, pomate, polveri, paste, spray e altre. La composizione può essere altresì somministrata attraverso film polisaccaridici, cerotti adesivi, cerotti non adesivi, cerotti occlusivi e cerotti micro-elettrici.
 
In alternativa, la composizione dell’invenzione può essere incorporata in un accessorio solido, ad esempio scelto tra bende, fasce, garze, t-shirt, calze, calzemaglie, biancheria, cinture, guanti, pannolini, assorbenti, vestiti, copriletto, salviette, maschere facciali; l’incorporazione della composizione dell’invenzione in un accessorio solido permette la facilità di applicazione della composizione dell’invenzione, ed inoltre, in alcune forme di realizzazione, come ad esempio quando la composizione dell’invenzione è incorporata in t-shirt, consente alla stessa di aderire su una vasta superficie corporea, utile quando bisogna trattare ampie zone di cute, come la schiena, ad esempio per prevenire e/o trattare la pityriasis versicolor.
In alternativa, la composizione può essere in forma di prodotti cosmetici come prodotti solari, fondotinta, lozioni per rimozione del make-up, latte per rimozione del make-up, correttori di occhiaie, mascara, ombretti, rossetti, protettori per le labbra, lucidalabbra e simili. Detta incorporazione può essere eseguita tramite i metodi convenzionali, ben noti all’esperto del ramo.
La composizione dell’invenzione può essere compresa o incorporata in contenitori monodose o in contenitori multidose. Ad esempio, la composizione dell’invenzione può essere un unguento ripartito in contenitori monodose, ad esempio all’interno di capsule, vantaggiosamente di capsule spremibili (“squeezable”) monodose.
La quantità di composizione all’interno del contenitore monodose può variare in funzione della area da trattare. Di conseguenza, diversi contenitori monodose possono essere previsti contenenti differenti quantità di composizione.
A titolo di esempio, una composizione monodose rappresentativa dell’invenzione può contenere una quantità, di batteri probiotici sopra descritti nell’intervallo che va da 1x 10<1 >a 1x 10 <14 >di almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico, preferibilmente da 1x 10<1 >a 1 x 10<11 >batteri, più preferibilmente da 1x 10<1 >a 1 x 10<9 >batteri per grammo.
 
Salvo non diversamente indicato, si considera che, prima dell’inattivazione come descritta nella presente invenzione, 1 grammo di batteri contenga circa da 1x 10<1 >a 1x 10<14 >UFC/g (Unità Formanti Colonie/grammo), preferibilmente da 1x 10<3 >a 1x 10<11 >UFC/g, più preferibilmente 1x 10 <5 >a 1x 10 <9 >UFC/g. È evidente che, dopo l’inattivazione secondo l’invenzione, preferibilmente attraverso raggi gamma, il contenuto di batteri per grammo sarà sostanzialmente lo stesso, ma detti batteri non saranno in grado di formare colonie.
A titolo di esempio, le composizioni dell’invenzione contengono da 1 mg a 2000 mg, ad esempio da 10 a 500 mg, vantaggiosamente da 100 a 1000 mg di batteri non vitali, tale dosaggio essendo chiaramente funzione del numero di batteri per grammo.
I batteri non vitali secondo l’invenzione sono inclusi nelle composizioni dell’invenzione preferibilmente in forma liofilizzata.
Una composizione preferita comprende il ceppo non vitale di Lactobacillus plantarum P 17630, ad esempio in quantità di 10<8>-10<10 >UFC/g, dette UFC essendo state valutate prima del trattamento di inattivazione.
Secondo una forma di realizzazione preferita, la composizione dell’invenzione è una composizione per la somministrazione vaginale, vantaggiosamente comprendente il ceppo non vitale di Lactobacillus plantarum P 17630.
Degli esempi rappresentativi di composizioni secondo l’invenzione sono riportati nella sezione sperimentale che segue.
In generale, al fine di esercitare l’effetto benefico contro i microrganismi patogeni, la composizione viene applicata sulla cute e sulle mucose da 1 o più volte al giorno, meglio su pelle umida, essendo preferibilmente applicata su una parte più ampia della parte visivamente affetta, per garantire la copertura di tutta la parte interessata dalla patologia. Il trattamento può durare da 1 a 30 giorni, ad esempio da 3 a 15 giorni o da 6 a 10 giorni. Se necessario, il
 
trattamento può essere ulteriormente prolungato o ripetuto periodicamente.
È un ulteriore oggetto dell’invenzione un metodo per la prevenzione e/o il trattamento delle malattie cutanee e mucosali sopra menzionate che comprende somministrare topicamente a un soggetto che lo necessita una quantità efficace della composizione dell’invenzione come sopra illustrato.
Secondo un altro dei suoi aspetti, l’invenzione ha per oggetto una composizione farmaceutica, dietetica, alimentare o nutraceutica, che comprende almeno un batterio probiotico non vitale scelto tra Lactobacillus plantarum P 17630, Lactobacillus crispatus P 17631, Lactobacillus paracasei I 1688 e loro miscele, detto almeno un batterio avente la parete sostanzialmente integra.
Secondo un altro dei suoi aspetti, l’invenzione ha per oggetto una composizione farmaceutica, dietetica, alimentare o nutraceutica, che comprende almeno un batterio probiotico non vitale scelto tra Lactobacillus plantarum P 17630, Lactobacillus crispatus P 17631, Lactobacillus paracasei I 1688 e loro miscele, detto almeno un batterio avente la parete sostanzialmente integra ed essendo stato reso non vitale attraverso tecniche che escludono i trattamenti termici, quali la tindalizzazione, preferibilmente attraverso la tecnica di esposizione ai raggi gamma. Gli aspetti preferiti e vantaggiosi dell’invenzione sopra riportati con riferimento alla composizione si considerano applicabili anche alla composizione ed al metodo di trattamento secondo l’invenzione.
La sezione sperimentale che segue è riportata a scopo unicamente illustrativo dell’invenzione e in nessun modo limitativo.
SEZIONE SPERIMENTALE
Esempio 1
Si prepara una capsula di gelatina molle avente la composizione quali-quantitativa seguente:
 
Esempio 2
Si prepara una capsula di gelatina dura avente la composizione quali-quantitativa seguente:
Esempio 3
Si prepara una capsula spremibile avente la composizione quali-quantitativa seguente:
 
Esempio 4
Si prepara una capsula di gelatina molle avente la composizione quali-quantitativa seguente:
Esempio 5
Procedimento di gammatura
Si è effettuato un trattamento di inattivazione di un liofilizzato batterico di 1x10<11 >UFC/g mediante irradiazione con raggi gamma nelle condizioni seguenti:
Fonte: cobalto 60 (<60>Co)
Dose nominale: 25 KGy
Il procedimento è condotto a temperatura ambiente. La durata del trattamento è stata calcolata in funzione dell’attività della fonte energetica impiegata in modo da somministrare la dose nominale prefissata.
Il risultato della riduzione della vitalità batterica ai diversi trattamenti è riportato nella Figura 1. Esempio 6
Test di adesività
E’ stata allestita una prova di confronto, in duplice, tra il ceppo vivo e quello inattivato secondo la presente invenzione, per valutare, in vitro, la capacità adesiva alle cellule epiteliali vaginali del Lactobacillus plantarum P17630.
Le analisi sono state condotte nelle stesse condizioni per le due prove, partendo da cellule epiteliali vaginali (VEC) di donatori diversi. All’interno della stessa prova i campioni, costituiti da ceppi batterici vivi (viable) e ceppi batterici non vitali (inactivated), sono stati preparati ricostituendo 1 grammo di liofilizzato in 40 ml di terreno Eagle Minimal Essential Medium, corretto a pH 5,50 (MEM). La sospensione batterica è stata omogeneizzata per 180 secondi, quindi lavata con MEM. Per un’omogeneità di valutazione la preparazione del ceppo vivo e quella del ceppo inattivato avevano la stessa concentrazione iniziale.
Contemporaneamente sono state preparate anche le cellule epiteliali vaginali (VEC) risospendendo un tampone in 5 ml di MEM e centrifugandolo a 1000 rpm per eliminare eventuali microorganismi endogeni.
 
Per il test di adesione, in una piastra Petri sono stati co-incubati 500 µl di sospensione di VEC con 500 µl di sospensione batterica, ottenuta come precedentemente descritto. La piastra è stata incubata a 37°C per 30 minuti. La sospensione è stata filtrata e le cellule VEC sono state recuperate, fissate su vetrino, quindi colorate.
L’adesione è stata valutata come numero di cellule batteriche adese, per singola cellula VEC, valutando almeno 10 VEC/campione.
I risultati sono riportati nel grafico della Figura 2.
 

Claims (10)

  1. RIVENDICAZIONI 1. Composizione topica che comprende almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico non vitale, eventualmente insieme a eccipienti e/o veicoli convenzionali, detto batterio avente la parete cellulare sostanzialmente integra.
  2. 2. Composizione secondo la rivendicazione 1, caratterizzata dal fatto che detto almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico è reso non vitale attraverso la compromissione del DNA.
  3. 3. Composizione secondo la rivendicazione 1 o 2, caratterizzata dal fatto che detto almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico è scelto tra i generi bifidobatteri, lattobacilli, streptococchi e le loro miscele.
  4. 4. Composizione secondo la rivendicazione 3, caratterizzata dal fatto che detto almeno un ceppo di almeno un batterio probiotico è scelto tra Lactobacillus salivarius I 1794, Lactobacillus paracasei I 1688, Lactobacillus paracasei I 1687, Lactobacillus fermentum I 3677, depositati presso CIP Istituto Pasteur di Parigi, Francia e Lactobacillus plantarum P 17630, Lactobacillus crispatus P 17631, Lactobacillus gasseri P 17632, Lactobacillus gasseri P 18137, Lactobacillus acidophilus P 18806, Lactobacillus delbrueckii P 18805, Streptococcus thermophilus P 18807, Lactobacillus brevis CV7Lac (P30019), Lactobacillus paracasei LC11 (P30020), Lactobacillus brevis Y1 (P30021), Lactobacillus brevis CV2Lac (P30022), Lactobacillus plantarum CVI15B (P30023), Lactobacillus paracasei LC18 (P30024), Lactobacillus plantarum LM2 (P30025) depositati presso BCCM-LMG Laboratorium vor Microbiologie, Università di Gent, Gent Belgio e Lactobacillus rhamnosus ATCC®53103™, depositato presso L’American Type Culture Collection di Manassas, VA, USA e le loro miscele.  
  5. 5. Composizione secondo la rivendicazione 4, caratterizzata dal fatto che detto almeno un batterio probiotico è il Lactobacillus plantarum P 17630.
  6. 6. Composizione secondo la rivendicazione 4, caratterizzata dal fatto che detto almeno un batterio probiotico è scelto tra Lactobacillus plantarum P 17630, Lactobacillus paracasei I 1688, Lactobacillus salivarius I 1794 e loro miscele.
  7. 7. Composizione topica secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 6, caratterizzata dal fatto che è scelta tra: capsule, ovuli, creme, emulsioni multiple come emulsioni olio e/o silicone in acqua, emulsioni acqua-in-olio e/o silicone, emulsioni acqua/olio/acqua o acqua/silicone/acqua ed emulsioni olio/acqua/olio o silicone/acqua/silicone, composizioni anidre, dispersioni acquose, oli, latte, balsami, schiume, lozioni, gel, gel crema, soluzioni idroalcoliche, soluzioni idroglicoliche, idrogel, linimenti, cere, saponi, shampoo, ammorbidenti, sieri, film polisaccaridici, unguenti, mousse, pomate, polveri, cerotti adesivi, cerotti non adesivi, cerotti occlusivi, cerotti micro-elettrici, paste e spray.
  8. 8. Composizione topica secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 7 per il suo uso in terapia.
  9. 9. Composizione topica secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 8 per il suo uso nella prevenzione e/o nel trattamento delle malattie cutanee, delle malattie mucosali, delle patologie causate da funghi, nel trattamento della pytiriasis versicolor e/o della forfora.
  10. 10. Composizione secondo la rivendicazione 9, per il suo uso nella prevenzione e/o nel trattamento delle patologie vaginali.  
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