[go: up one dir, main page]

HU216635B - Eljárás boronsav-konjugátum jelzőanyagok előállítására - Google Patents

Eljárás boronsav-konjugátum jelzőanyagok előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU216635B
HU216635B HU9301408A HU140893A HU216635B HU 216635 B HU216635 B HU 216635B HU 9301408 A HU9301408 A HU 9301408A HU 140893 A HU140893 A HU 140893A HU 216635 B HU216635 B HU 216635B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
boronic acid
group
formula
preparation
compounds
Prior art date
Application number
HU9301408A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT64353A (en
HU9301408D0 (en
Inventor
Frank Frantzen
Erling Sundrehagen
Original Assignee
Axis Biochemicals Asa
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Axis Biochemicals Asa filed Critical Axis Biochemicals Asa
Publication of HU9301408D0 publication Critical patent/HU9301408D0/hu
Publication of HUT64353A publication Critical patent/HUT64353A/hu
Publication of HU216635B publication Critical patent/HU216635B/hu

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • G01N33/587—Nanoparticles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Thermal Transfer Or Thermal Recording In General (AREA)
  • Inks, Pencil-Leads, Or Crayons (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Luminescent Compositions (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

A találmány értelmében nem-prőtein jellegű, V–W–B(OH)2 általánősképletű bőrőnsav kőnjűgátűmőkat állítanak elő, amelyek abszőrpciósmaximűma legalább 600 nm-nél van – a képletben V jelent se trifenil-metán, cianin, ftalőcianin vagy fenőxazin színezékből származókrőmőfór- és/vagy flűőrőfór-maradék és W jelentése fenilcsőpőrtőttartalmazó szerves csőpőrt –, őly módőn, hőgy a fenilcsőpő tőn adőttesetben megfelelően szűbsztitűált fenil-bőrőnsav-származékőt aszínezékkőmpőnenssel reagáltatják. Az így előállítőtt vegyületek cisz-diőlők, példáűl glükőzilezett hemőglőbin minőségi és mennyiségimeghatárőzására alkalmazhatók, mivel abszőrpciós spektrűműk nem, vagycsak kismértékb n fedi át a hemőglőbinét. ŕ

Description

A találmány új vegyületek előállítására szolgáló eljárásra vonatkozik, amelyek jelzőanyagként alkalmazhatók, közelebbről olyan új festékek előállítására, amelyek abszorpciós maximuma a látható spektrum vörös határán vagy azon túl van.
A vérminták vizsgálatához gyakran szükségesek jelzőanyagok, például curkobetegeknél a glükozilezett hemoglobin meghatározáshoz a vércukortartalom-meghatározás részeként. Ilyen reagenseket ismertetnek például a 3 720 736 számon publikált német szabadalmi leírásban és a 4861 728 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban, ezek a reagensek boronsavszármazékok, amelyek a glükozil-maradék cisz-diol-csoportjával reagálnak, és egy fluoreszcens és/vagy színezőfestékhez - például egy diazo-konjugátumhoz vagy fluoreszceinhez, rodaminhoz vagy fikobiliproteinhez vannak kötve. A fluoreszcencia vagy abszorpció becslése vagy számszerű meghatározása például reflexiometriásan lehetővé teszi a vérmintákban a glükozilezett hemoglobin koncentrációjának meghatározását.
A boronsav-fikoprotein konjugátumok alkalmazásának hátránya, hogy a glükozilezett hemoglobinok többségében a glükozilmaradék - amely elvileg a β-lánc N-terminális valin aminosavjához kapcsolódik - a hemoglobinmolekula egy szűk „zsebében” lokalizálódik, ezért a nagy móltömegű reagensek számára nem könnyen hozzáférhető.
A többi, korábban javasolt színes jelzőanyag, például a fluoreszcein vagy rodamin hátránya, hogy abszorpciós spektrumuk jelentős átfedésben van a hemoglobin abszorpciós spektrumával; ez megakadályozza vagy jelentősen gátolja a jelzőanyag megbízható, számszerű spektroszkópiás meghatározását.
A találmány azon a felismerésen alapul, hogy olyan új jelzőanyagokat sikerült előállítanunk, amelyek abszorpciós maximuma legalább 600 nm, amely hullámhosszon a hemoglobin minimális abszorpciót mutat.
A találmány tárgya ennek megfelelően eljárás nemprotein jellegű, V-W-B(OH)2 általános képletű boronsav-konjugátumok, amelyek abszorpciós maximuma legalább 600 nm-nél van - a képletben V jelentése trifenilmetán, cianin, ftalo-cianin vagy fenoxazin színezékből származó kromofór- és/vagy fluorofór-maradék és W jelentése adott esetben szubsztituált fenilcsoportot tartalmazó szerves csoport - előállítására, oly módon, hogy a fenilcsoporton megfelelően szubsztituált fenil-boronsavszármazékot a színezékkomponenssel reagáltatjuk.
A dihidroxi-boril-maradék természetesen (a) általános képletű anionos formában is lehet, az alkalmazott reagenskészítmény pH-jától és elektrolittartalmától függően, és az ilyen vegyületek szintén a találmány tárgykörébe tartoznak.
A találmány szerinti boronsav-konjugátumok ciszdiolok, főleg proteinek glükozilezett maradékai spektroszkópiás becslésére vagy számszerű meghatározására vonatkozó vizsgálatokban alkalmazhatók hemoglobin jelenlétében, mivel láthatólag nincs átfedés a hemoglobin és a kromofór abszorpciós spektruma között.
A boronsav bóratomja egy fenilcsoporthoz, például egy amino-fenil-csoporthoz, például egy m-amino-fenilcsoporthoz kapcsolódik. A boronsav kívánt pKa-értékétől függően a fenilcsoport adott esetben egyéb szubsztituenseket is tartalmazhat, például egy vagy több olyan szubsztituenst, amely a pKa-értéket befolyásolja anélkül, hogy sztérikusan gátolná a boronsavmaradék és a célzott cisz-diol közötti kötődést. Az ionizáció mértékének fokozására, és így a boronsav célzott cisz-diolhoz, például glükozilezett maradékokhoz való kötődési állandójának növelésére alkalmazható elektronszívó szubsztituensekre példaként említjük a nitrocsoportot, a rövid szénláncú alkoxicsoportot, például metoxi- vagy etoxicsoportot és az acilcsoportokat, például formil- vagy rövid szénláncú alkanoilcsoportot. A fenti boronsavszármazékok közé tartozik például a 2-nitro-5-amino-boronsav és a megfelelő 3-nitro- és 4-nitro-izomerek. Általában a fenilcsoportok vagy szubsztituált fenilcsoportok közvetlenül kapcsolódhatnak a kromofór és/vagy fluorofór V maradékhoz, ekkor a fenilcsoport az (I) általános képletben a W csoport részét képezi, de kapcsolódhatnak egy, a szakirodalomban ismert összekötő vagy „spacer” csoporton keresztül is.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek egyik csoportját a (II) általános képletű vegyületek képezik, a képletben
Y- jelentése anion (például halogénion, így kloridvagy bromidion, vagy perhaloátion, például perklorátion) és
Rí-R]o jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy szerves csoport, vagy
R[ és R2 és/vagy R9 és Ri0 a hozzájuk kapcsolódó szénatommal együtt kondenzált mono- vagy policiklikus gyűrűrendszert alkotnak, azzal a megkötéssel, hogy R3 és R4, és R7 és R8 közül legalább az egyik jelentése hidrogénatomtól eltérő, és
R,-R10 közül legalább az egyik egy boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoportot jelent.
Az R,-Rl0 jelentésére megadott szerves csoport lehet például alkil-, alkenil- vagy alkinilcsoport, amelyek például 1 -6 szénatomot tartalmazhatnak, ilyen csoport például a metil-, etil-, η-propil-, izopropil-, n-butil-, szec-butil-, terc-butil-, vinil-, allil-, etinil-, vagy propanilcsoport; cikloalkil- vagy cikloalkenilcsoport, amelyek például 5-7 szénatomot tartalmazhatnak, mint például a ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptil-, ciklohexenil- vagy ciklopentadienil-csoport; arilcsoport, például 6-12 szénatomos arilcsoportok, mint például a fenil-, tolil- vagy naffilcsoport; heterociklusos csoportok, például az 5-7 tagú, telített vagy telítetlen, heteroatomként legalább egy oxigén-, nitrogén- vagy kénatomot tartalmazó heterociklusos csoportok, mint például furil-, tienil-, piridil-, pirimidil-, piridazil-, tiazolil-, tiazinil-, triazinil-, pirrolil-, imidazolil-, pirazolil-, pirrolidinil-, piperidinil-, piperazinil- vagy morfolinilcsoport; egy fent megadott cikloalkil-, cikloalkenil-, aril- vagy heterociklusos csoporttal szubsztituált rövid szénláncú alkilcsoport, például 1-4 szénatomos alkilcsoport; a fenti csoportok bármelyike, amely egy vagy több heteroatommal megszakított és/vagy szubsztituált, azaz egy vagy több éter-, tioéter-, amino-, amido-, karbonil- vagy
HU 216 635 Β tiokarbonil-csoportot tartalmaz; vagy a fenti csoportok bármelyike, amely egy vagy több szubsztituenst hordoz, a szubsztituens például hidroxil-, merkapto-, amino-, nitro-, azido-, karboxil-, ciano- vagy izotiocianáto-csoport vagy halogénatom, vagy bármely egyéb, a boronsavmaradékkal kompatíbilis szubsztituens.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületekben az alkil-, alkenil- és alkinilmaradékok - ha csak másként nem definiáljuk - általában legfeljebb 6 szénatomot tartalmaznak, és a ciklusos csoportok 5-7 tagú gyűrűt tartalmaznak.
Hidrofil tulajdonságaik következtében a (II) általános képletű vegyületeken belül előnyösen csoportot alkotnak a (III) általános képletű vegyületek, a képletben Y- jelentése a fent megadott,
R,i jelentése egymástól függetlenül rövid szénláncú (például 1-6 szénatomos) alkilcsoport, mint metilvagy etilcsoport; és
Ri2 jelentése boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoport.
Magától értetődően a rezonanciastabilizált gyűrűrendszer szimmetriája szempontjából az 1-es, 2-es és
4-es helyzetű, R12 szubsztituensek egyenértékűek a megfelelő, 9-es, 8-as, illetve 6-os helyzetű szubsztituensekkel.
A (III) általános képletű vegyületek R,2 csoportja például egy (b), (c), (d), (e), (f), (g) vagy (h) általános képletű csoport lehet, ahol
Z egy boronsavmaradékot tartalmazó csoportot, például amino-fenil-boronsav-maradékot, azaz (i) képletű csoportot jelent.
A hidrofil (II) általános képletű vegyületek egy másik előnyös csoportját alkotják a (IV) általános képletű vegyületek, a képletben
Y és R, (jelentése a fent megadott, és
R13 jelentése egy boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoport, például egy fent megadott csoport. Ismét megjegyezzük, hogy a boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoport hatása azonos, akár a 3-as helyzetű aminocsoport, akár a 7-es helyzetű iminocsoport szubsztituenseként van jelen.
A boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoport a (IV) általános képletű vegyületekben például egy (k) vagy (1) általános képletű csoport is lehet, ahol Z jelentése a fent megadott.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek további hasznos csoportját képezik azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyekben a V szubsztituens egy trifenil-metán-színezékből származik, például az (V) általános képletű vegyületek, a képletben
R)4jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, szerves csoport (például egy, az R[-R10 jelentésére fent megadott szerves csoport) vagy egy - előnyösen - hidrofil szubsztituens, például hidroxil-, karboxil-, szulfo- vagy klór-szulfonilcsoport, és az
A szubsztituensek közül legalább kettő auxokróm csoportot jelent, míg a nem auxokróm A szubsztituens egy, az R14 jelentésére megadott csoportot jelent.
Az auxokróm csoport előnyösen egy amin/iminrendszert, például N(R)2/N+(R)2 és NHR/N+HR rendszert jelent (ahol R jelentése egymástól függetlenül szerves csoport, például egy, az R,-R10 jelentése a fent megadott csoport, előnyösen rövid szénláncú alkilcsoport, mint például a metil- vagy etilcsoport), önmagában, vagy O/OH-val kombinációban. A -W-B(0H)2 maradék például a fenilcsoportok egyikéhez kapcsolódhat, például egy karboxil- vagy szulfocsoporton keresztül, vagy az amin/imin auxokróm rendszerben lévő R csoportok egyikéhez kapcsolódhat. Természetesen az (V) általános képletű vegyületek körébe tartoznak a felrajzolható egyéb rezonanciaszerkezetek is.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek további hasznos csoportját képezik azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyekben a V szubsztituens egy ftalocianin színezékből származik, például a (VI) általános képletű vegyületek, a képletben
R15 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, szerves csoport (például egy, az R)-Rio jelentésére fent megadott szerves csoport) vagy - előnyösen vízben szolubilizálódó - szubsztituens csoport, (például karboxil-, szulfo-, klór-szulfonil-, hidroxil-, fenoxivagy aminocsoport) és
X2 jelentése két hidrogénatom vagy egy fémes elem (például alumínium, kadmium, króm, réz, gallium, germánium, magnézium, foszfor, szilícium, ón vagy cink) atomja, amely - ha megfelelő vegyértékű (>3) - egy vagy több axiális ligandumot (például hidroxilcsoportot vagy halogénatomot), mint például klóratomot is hordozhat.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek további hasznos csoportját képezik azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyekben a V szubsztituens egy cianinszínezékből származik, például a (VII) általános képletű vegyületek, és a megfelelő alternatív rezonanciaszerkezetek. A fenti képletekben
A’ és A” kvatemerizált heteroatomos bázisokat jelentenek,
R jelentése a fent megadott és m értéke egész szám, például 1-3, előnyösen 2 vagy 3.
A fenti típusú színezékek közé tartoznak például a (IX) általános képletű vegyületek, a képletben m és R jelentése a fent megadott,
X3 jelentése heteroatom, mint például oxigén- vagy kénatom, vagy adott esetben mono- vagy diszubsztituált metiléncsoport, és
R16 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, szerves csoport (például egy, az R]-R10 jelentésére fent megadott csoport) vagy - előnyösen vízben szolubilizálódó - szubsztituens csoport, vagy a szomszédos R,6 csoportok a hozzájuk kapcsolódó szénatommal együtt mono- vagy policiklusos kondenzált gyűrűrendszert alkothatnak.
Előnyösen jelen vannak vízben való szolubilizálhatóságot fokozó szubsztituensek, például egy vagy több, az R16 jelentésére fent megadott csoport, egy ilyen előnyös szubsztituens például a karboxi-metil-csoport, amely úgy kapcsolódik az amincsoportot tartalmazó molekulákhoz, például az m-amino-fenil-boronsavhoz, hogy csekély, vagy semmi változást nem okoz a cianin kromofór abszorpciós tulajdonságaiban.
HU 216 635 Β
A fenti boronsav-konjugátumokat a találmány értelmében úgy állítjuk elő, hogy a kívánt spektrumtulajdonságokkal rendelkező, megfelelően funkcionalizált színezéket egy reakcióképes fenil-boronsavval reagáltatjuk. A fenil-boronsavként célszerűen egy amino-fenil-boronsavat, előnyösen m-amino-fenil-boronsavat alkalmazunk, és a molekula fennmaradó részéhez például diazóniumion-kialakítással, szilánozással vagy a szakirodalomból ismert kapcsolószerek (például glutárdialdehid, karbodiimid, ciánhalogenid vagy szukcinimid) alkalmazásával kapcsoljuk. A találmány szerinti eljárás előnyös kiviteli módjai szerint (i) az m-amino-fenil-boronsavat egy karboxilcsoportot tartalmazó színezékkel reagáltatjuk, karbodiimid, például 1 -etil-3-[3-(dimetil-amino)-propíl]-karbodiimid (EDC) jelenlétében, a reakció termékeként amid-kötött fenil-boronsav-csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet kapunk;
(ii) egy karboxilcsoportot tartalmazó festéket vegyesanhidrid-módszerrel aktiválunk, például egy halogén-formiát-észterrel [például egy (rövid szénláncú) alkil-halogén-formiáttal, mint például izobutil-klórformiáttal] reagáltatva az m-amino-fenil-boronsawal való reakciót megelőzően, a reakció termékeként amid-kötött fenil-boronsav-csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet kapunk;
(iii) m-amino-fenil-boronsavat egy izotiocianát-csoportot tartalmazó prekurzorral reagáltatunk, a reakció termékeként tiokarbamid-kötött fenil-boronsav-csoportot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet kapunk; és (iv) egy szulfocsoportot tartalmazó színezéket például szulfonil-halogeniddé, mint például szulfonil-kloriddá alakítva aktiválunk, például egy halogénezőszerrel, mint például oxalil-kloriddal vagy foszforoxi-kloriddal reagáltatva az m-amino-fenil-boronsawal való reagáltatást megelőzően, a reakció termékeként szulfonamid-kötött boronsavmaradékot tartalmazó (I) általános képletű vegyületet kapunk. A (II)-(IV) általános képletű vegyületek előállítására alkalmas fenoxazin prekurzorokat például az A, B, C és D reakcióvázlat szerinti eljárással állíthatjuk elő. A C reakcióvázlat szerinti eljárást módosíthatjuk úgy, hogy az Rla és R’OOC csoportot felcseréljük, ekkor 1-karboxi-funkcionalizált fenoxazin prekurzort kapunk.
A fenti reakcióvázlatok képleteiben Ria-R10a jelentése azonos az R,-R10 jelentésére fent megadott csoportokkal, azzal az eltéréssel, hogy még nem tartalmazzák a (II) általános képletű vegyületekben megkívánt boronsavmaradékot.
Az így kapott fenoxazin prekurzorokat - amelyek képletében R3a és R4a vagy R7a és RSa közül az egyik hidrogénatomot jelent - például egy alkil-halogeniddel reagáltathatjuk egy N-kötött funkcionalizált csoport vagy egy funkcionalizált spacercsoport bevezetésére, például az E reakcióvázlat szerinti eljárással, majd ezt követő hidrolízissel olyan vegyületet kapunk, amelynek képletében R’ jelentése hidrogénatom.
Abban az esetben, ha R3a, R^, R7a és R8a mindegyike előnyösen hidrogénatomtól eltérő csoportot jelent, úgy is eljárhatunk, hogy egy funkcionalizált csoportot
- amely adott esetben egy spacercsoportot is tartalmaz
- Mannich-reakcióval kapcsolunk a fenazin-gyűrűrendszer szénatomjához, például az F reakcióvázlat szerinti eljárással.
Az ilyen karboxilcsoportot tartalmazó prekurzorokat egyszerűen reagáltathatjuk például m-amino-fenilboronsawal, például a fent ismertetett módon, a reakció termékeként olyan (II) általános képletű vegyületeket kapunk, amelyek amid-kötött fenil-boronsav-csoportot tartalmaznak.
A 2-amino-fenoxazin prekurzorokat - amelyeket például a B reakcióvázlat szerinti eljárással állítunk elő
- például diazotálhatjuk, majd egy alkálifém-tiocianáttal reagáltatva megfelelő, 2-izotiocianát-vegyületekké alakíthatjuk. A kapott terméket nukleofíl, amintartalmú molekulával - például m-amino-fenil-boronsavval reagáltathatjuk például a 2. reakcióvázlat szerinti eljárással, vagy egy funkcionalizált spacerrel reagáltathatjuk például a G reakcióvázlat szerinti eljárással, majd az R’ csoportot hidrolízissel eltávolítva R’ helyén hidrogénatomot tartalmazó vegyületet kapunk.
Az 1- vagy 4-karboxi-fenoxazin-származékokat amelyeket például a C reakcióvázlat szerinti eljárással állítunk elő - közvetlenül reagáltathatjuk például egy amino-fenil-boronsavval, oldható karbodiimid jelenlétében, vagy először egy funkcionalizált spacercsoport bevezetésével módosíthatjuk, például a H reakcióvázlat szerinti eljárással.
A 2-acetil-fenoxazin vagy -fenotiazin prekurzorokat
- amelyeket például a D reakcióvázlat szerinti eljárással állítunk elő - egy N-kötött spacercsoport bevezetésére, például Mannich-reakciónak vethetjük alá, a J reakcióvázlatnak megfelelően.
A fenoxazin prekurzorokat - például egy ismert módon előállított fenoxazin színezéket, mint például a 3-(dimetil-amino)-7-(dimetil-imino)-fenoxazóniumot
- hasonlóképpen Mannich-reakcióba vihetünk egy aminocsoportot tartalmazó funkcionalizált csoport gyűrűhöz kapcsolására, aminként például m-amino-fenilboronsavat alkalmazva, amint az a 3. reakcióvázlaton látható.
A találmány szerinti eljárással előállított boronsavkonjugátum vérvizsgálati eljárásokban, például a fent hivatkozott szakirodalmakban vagy a WO 90/13 818 számon publikált nemzetközi szabadalmi leírásban ismertetett eljárásokban alkalmazható.
A találmányt közelebbről - a korlátozás szándéka nélkül - az alábbi példákkal kívánjuk ismertetni.
1. példa
Fenoxazin-boronsav konjugátum
a) m-Formamido-fenol
100 g m-amino-fenol és 150 g hangyasav elegyét 1,5 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk, majd vákuumban szárazra pároljuk (90-95 °C, 1,29· 103-1,935 · 103 Pa). A szilárd anyagot 100 °Con, 1,29· 103 Pa nyomáson 1,5 órán keresztül szárítjuk. 117 g cím szerinti vegyületet kapunk, olvadáspontja 112 °C.
HU 216 635 Β
b) m-(N-metil-amino)-fenol
13,8 g fenti a) lépés szerint előállított anyagot részletekben, állandó keverés közben, 15-20 °C-on 1 óra alatt hozzáadunk 9,5 g lítium-alumínium-hidrid 180 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készült oldatához. A reakcióelegyet 0,5 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk, -5 °C-ra hűtjük és lassan hozzáadunk 385 ml 3 n sósavoldatot. A sűrű szuszpenzió térfogatát 60-70 °C-on rotációs bepárlóval 300 ml-re bepároljuk, hozzáadunk 400 ml vizet, és a sűrű szuszpenziót újból bepároljuk 400 ml végtérfogatra. A maradék szürke, sűrű szuszpenzióhoz 2 g aktívszenet és 10 g celitet adunk; a kapott elegyet szüljük és hozzáadunk 60 ml 40%-os nátrium-hidroxid-oldatot. Végül az oldatot kétszer 100 ml dietil-éterrel extraháljuk, és az extraktumot szárítjuk, majd a kapott viszkózus olajat desztilláljuk. 9,3 g cím szerinti vegyületet kapunk viszkózus olaj formájában, forráspontja 160 °C.
c) m-{N-[2-(Etoxi-karboml)-etil]-N-metil-amino}-fenol
9,3 g fenti b) lépés szerint előállított vegyület, 27,4 g etil-3-bróm-propionát, 12,6 g nátrium-hidrogén-karbonát és 120 ml aceton elegyét 43 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Ezután hozzáadunk újabb 27,4 g etil3- bróm-propionátot, és az oldatot további 72 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk. Végül az oldatot lehűtjük és szűrjük. A szűrletet szárazra pároljuk (1,29-103 Pa, 85-90 °C), és a maradékot 50 ml 9:1 térfogatarányú kloroform/etil-acetát elegyben szolubilizáljuk. Szilikagélen végzett kromatográfiás tisztítással, az eluálást 9:1 térfogatarányú kloroform/etil-acetát eleggyel végezve 3,8 g cím szerinti vegyületet kapunk.
d) 3-{N-[2-(Etoxi-karbonil)-etil]-N-metil-amino}-6[4-(N,N-dimetil-amino)-fenil-imino]-ciklohexa-2,4dienon-cink-klorid adduktum
6,6 g fenti c) lépés szerint előállított termék, 4,5 g
4- nitrozo-N,N-dimetil-anilin és 4,9 g cink-klorid elegyét 88 ml metanolban 3 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt forraljuk. A szilárd anyagot szűréssel elválasztjuk, kétszer 25 ml metanollal mossuk és 50 °C-on, 1,29 103 Pa nyomáson szárítjuk. 11,6 g cím szerinti vegyületet kapunk.
e) 3-(Dimetil-amino)-7-{N-metil-N-[2-(etoxikarbonilj-etilj-iminoj-fenoxazónium
1,0 g fenti d) lépés szerint előállított terméket 50 ml ecetsavban oldunk, 70 °C-ra melegítjük, majd hozzáadunk 180 mg nátrium-nitritet. Az oldatot állandó keverés közben 6 órán keresztül 70 °C-on tartjuk, majd lehűtjük, szüljük és szárazra pároljuk. A maradékot 40 ml vízben oldjuk és szüljük. Végül a szűrletet 60 °C-on, 1,29-103 Pa nyomáson szárazra pároljuk. 0,6 g cím szerinti vegyületet kapunk.
f) 3-(Dimetil-amino)-7-[N-metil-N-(2-karboxi-etil)imino]-fenoxazónium
A fenti e) lépés szerint előállított terméket ekvimoláris mennyiségű vizes nátrium-hidroxid-oldattal hidrolizáljuk 80%-os dioxánban. A cím szerinti vegyületet anioncserélős, kromatográfiás eljárással izoláljuk.
g) Konjugálás m-amino-fenil-boronsavval
9,0 mg (2,29-10-5 mól) fenti f) lépés szerint előállított terméket adunk 1000 μΐ vízmentes dimetil-formamidhoz, és az oldatot -10 °C-ra hűtjük. 2,78 mg (2,75-10-5 mól) N-metil-morfolint és 3,76 mg (2,75 10-5 mól) izobutil-klór-formiátot adunk hozzá -10 °C-on, és az elegyet jeges hűtés közben 0,5 órán keresztül inkubáljuk. Hozzáadunk 14,2 g (9,17-10-5 mól) m-amino-fenil-boronsavat és újabb 2,78 mg (2,75-10-5 mól) N-metil-morfolint, és a reakcióelegyet 4 °C-on 2 órán keresztül, majd szobahőmérsékleten 4 órán keresztül inkubáljuk. Fordított fázisú kromatográfiás eljárással 4 mg fenil-boronsav-fenoxazin konjugátumot izolálunk. A tennék abszorpciós maximuma (Ámax) a spektrum látható részében 642 nm-en mérhető, moláris extinkciós koefficiense (ε) >70 000 1/mol-cm.
2. példa
Trifenil-metán szinezék-boronsav konjugátum
a) 75 mg (80% tisztaságú, 1,1110-4 mól) xilolcianolt [(1) képletű vegyületet] egy éjszakán keresztül 100 °C-on szárítunk. Hozzáadunk 205 μΐ (2,24-10-3 mól) foszfor-oxi-kloridot, és az elegyet szobahőmérsékleten, nedvesség kizárása mellett 24 órán keresztül inkubáljuk. Az elegyet ezután n-hexánnal néhányszor átmosva extraháljuk a nemkívánatos, sárga színű mellékterméket és a reagálatlan foszfor-oxi-kloridot. Miután a hexános extraktum színtelen lett, az extraktumból kloroformmal extraháljuk a xilol-cianol-szulfonil-kloridot. Végül a 15 ml kloroformos extraktumot ötször mossuk 1-1 ml hideg vízzel, majd vákuumban, a nedvesség kizárása mellett szárazra pároljuk.
A szilárd anyagot azonnal szolubilizáljuk 200 μΐ Ν,Ν-dimetil-formamidban, majd az oldathoz 17 mg (1,10-10-4 mól) 3-amino-fenil-boronsav-monohidrátot adunk 100 μΐ dimetil-formamidban. Az elegyet 5 percen keresztül állni hagyjuk, majd állandó keverés közben hozzáadunk 2 ml 0,75 mol/1 koncentrációjú nátrium-karbonát/nátrium-hidrogén-karbonát puffért (pH 10,0), és az oldatot szobahőmérsékleten 3-12 órán keresztül inkubáljuk. Az oldat pH-ját állandóan ellenőrizzük, és 8 és 9,5 közötti értéken tartjuk.
A boronsav-konjugátumokat fordított fázisú kromatográfiás eljárással izoláljuk, főleg mono(fenil-boronsav)-funkcionalizált színezék formájában, Xmax=612 nm (ε > 70000).
b) A 2. példa a) lépésében leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy 3-amino-fenil-boronsav helyett 22 mg (1,1 · 10-4 mól) 2-nitro-5-amino-fenil-boronsavat alkalmazunk. Főleg mono(fenil-boronsav)-funkcionalizált színezékkonjugátumot kapunk, amelynek spektroszkópiás tulajdonságai hasonlóak az a) lépés termékéhez.
3. példa
Ftalocianin szinezék-boronsav konjugátum
100 mg (1,12-10-4 mól) klór-alumínium-ftalocianin-tetraszulfonátot 100 °C-on egy éjszakán keresztül szárítunk. Hozzáadunk 410 μΐ (4,48-10-3 mól) foszforoxi-kloridot, és az elegyet szobahőmérsékleten, nedvesség kizárása mellett 24 órán keresztül inkubáljuk. A szilárd anyagot ezután összesen 10 ml n-hexánnal néhány5
HU 216 635 Β szór mossuk, ezzel eltávolítjuk a reagálatlan foszfor-oxikloridot.
A visszamaradó, szilárd ftalocianin-szulfonil-kloridot nedvesség kizárása mellett vákuumban szárítjuk, majd azonnal szolubilizáljuk 500 μΐ dimetil-formamidban. A kapott oldathoz 20 mg (1,29-10-4 mól) 3-amino-fenil-boronsav-monohidrátot adunk 100 μΐ dimetilformamidban. Az elegyet 5 percen keresztül állni hagyjuk, majd hozzáadunk 2 ml 0,75 mol/1 koncentrációjú nátrium-karbonát/nátrium-hidrogén-karbonát puffért (pH 10,0), és az oldatot állandó keverés közben szobahőmérsékleten 3-12 órán keresztül inkubáljuk. Az oldat pH-ját állandóan ellenőrizzük, és 8 és 9,5 közötti értéken tartjuk.
A boronsav-konjugátumokat fordított fázisú kromatográfiás eljárással izoláljuk, főleg mono(fenil-boronsav)-funkcionalizált színezék formájában, Ámax=676 nm (8=160000).
4. példa
Cianin színezék-boronsav konjugátum
100 mg (1,29-10-4 mól) cianin színezékhez (2-{7[l,3-dihidro-l,l-dimetil-3-(4-szulfo-butil)-2H-benz[e]indol-2-ilidén]-l,3,5-heptatrienil}-l,l-dimetil-3-(4szulfo-butil)-1 H-benz[e]indólium-hidroxid, belső só, nátriumsó, amely kereskedelmi forgalomban IR 125 vagy indocianin zöld néven ismert) 470 μΐ (5,13-10 3 * mól) foszfor-oxi-kloridot adunk, és a kapott elegyet szobahőmérsékleten, nedvesség kizárása mellett 24 órán keresztül inkubáljuk. A sötétbarna oldatot ezután tört jégre öntjük, és 5 percen keresztül állni hagyjuk. Az IR 125-szulfonil-kloridot kloroformmal extraháljuk, az extraktumot ötször 1 -1 ml hideg vízzel mossuk, majd nedvesség kizárása mellett vákuumban szárítjuk.
A kapott szilárd anyagot azonnal szolubilizáljuk 500 μΐ dimetil-formamidban. A kapott oldathoz 17 mg (1,10 -10 4 mól) 3-amino-fenil-boronsav-monohidrátot adunk 100 μΐ dimetil-formamidban. Az elegyet 5 percen keresztül állni hagyjuk, majd állandó keverés közben hozzáadunk 2 ml 0,75 mol/1 koncentrációjú nátrium-karbonát/nátrium-hidrogén-karbonát puffért (pH 10,0), és az oldatot szobahőmérsékleten 3-12 órán keresztül inkubáljuk. Az oldat pH-ját állandóan ellenőrizzük, és 8 és 9,5 közötti értéken tartjuk.
A boronsav-konjugátumokat fordított fázisú kromatográfiás eljárással izoláljuk, főleg mono(fenil-boronsav)-íunkcionalizált színezék formájában, λπυιχ=799 nm (8=200000).
5. példa
Cianin színezék-boronsav konjugátum
1,3-10-7 mól reakcióképes szukcinimidil-észtercianin színezékhez (Cy5.18) 2 mg 3-amino-fenil-boronsavat adunk 0,5 ml 0,1 mol/1 koncentrációjú nátrium-karbonát/nátrium-hidrogén-karbonát pufferben (pH 9,3), majd alaposan összekeverjük. Az elegyet állandó keverés közben szobahőmérsékleten 4 órán keresztül inkubáljuk, majd a fenil-boronsav konjugátumot fordított fázisú kromatográfiás eljárással izoláljuk, Ámax=652 nm (8=200000).
6. példa
Glükozilezett hemoglobin meghatározása vérben, ftalocianin színezék-boronsav konjugátum alkalmazásával
A teljes vérmintát hemolizáló reakciópufferrel (pH 9,4) elegyítjük, amely 160 mmol/1 piperazint, 0,07% Triton Χ-100-at, 9,4 térfogat% etanolt, 9,4 térfogat% butanolt és 2,1 · 10~5 mol/1 végkoncentrációban 3. példa szerint előállított ftalocianin-boronsav konjugátumot tartalmaz. A hemoglobin végkoncentrációja közelítőleg 2 mg/1. A teljes vér hemolizálódik, és csapadék képződik. A kicsapódott hemoglobint szűréssel elkülönítjük, és reflexióját 685 és 470 nm-en mérjük Schimadzu Dual Wavelenght Flying Spot Scanner CS 9000 segítségével. A 685 és 470 nm-en mért reflexiók arányát kiszámítjuk, és meghatározzuk a glükozilezett hemoglobin %-os mennyiségét az összes hemoglobinhoz viszonyítva egy kalibrációs görbéből, amelyet hemoglobint és glükozilezett hemoglobint ismert koncentrációban tartalmazó, standard oldatokat alkalmazva kaptunk.
7. példa
Glükozilezett hemoglobin meghatározása vérben, xilol-cianol színezék-boronsav konjugátum alkalmazásával
A 6. példában leírtak szerint járunk el, azzal az eltéréssel, hogy ftalocianin színezék konjugátum helyett a 2. példa szerint előállított xilol-cianol-boronsav konjugátumot alkalmazzuk, 2,1-10-5 mol/1 végkoncentrációban, és a reflexiót 635 és 470 nm-en mérjük.

Claims (7)

1. Eljárás nem-protein jellegű, V-W-B(OH)2 általános képletű boronsav-konjugátumok, amelyek abszorpciós maximuma legalább 600 nm-nél van - a képletben V jelentése trifenil-metán, cianin, ftalocianin vagy fenoxazin színezékből származó kromofór- és/vagy fluorofór-maradék és W jelentése adott esetben szubsztituált fenilcsoportot tartalmazó szerves csoport - előállítására, azzal jellemezve, hogy a fenilcsoporton adott esetben megfelelően szubsztituált fenil-boronsav-származékot a színezékkomponenssel reagáltatjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan boronsavkonjugátumok előállítására, amelyekben a bóratom egy amino-fenil-csoporthoz kapcsolódik, amelyben a fenilcsoport adott esetben nitrocsoporttal, 1 - 6 szénatomos alkoxicsoporttal vagy formilcsoporttal lehet egyszeresen vagy többszörösen szubsztituálva, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
3. A 2. igénypont szerinti eljárás olyan boronsavkonjugátumok előállítására, amelyekben a bóratom egy m-amino-fenil-csoporthoz kapcsolódik, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás a boronsav-konjugátumok szűkebb körét képező (II) általános képletű vegyületek - a képletben
Y- jelentése anion,
HU 216 635 Β
R[-R10 jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom vagy szerves csoport, vagy
Rí és R2 és/vagy R9 és Ri0 a hozzájuk kapcsolódó szénatommal együtt kondenzált mono- vagy policiklikus gyűrűrendszert alkotnak, azzal a megkötéssel, hogy R3 és R,, és R7 és R8 közül legalább az egyik jelentése hidrogénatomtól eltérő, és
R,-R10 közül legalább az egyik egy boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoportot jelent — előállítására, azzaljellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás olyan (II) általános képletű vegyületek előállítására, amelyek képletében az R,-Rl0 jelentésére megadott szerves csoport4 jelentése legfeljebb 6 szénatomos alkil-, alkenil- vagy alkinilcsoport; 5-7 szénatomos cikloalkil- vagy cikloalkenilcsoport; 6-12 szénatomos arilcsoport; 5-7 tagú, telített vagy telítetlen, heteroatomként legalább egy oxigén-, nitrogén- vagy kénatomot tartalmazó heterociklusos csoport; egy fent megadott cikloalkil-, cikloalkenil-, arilvagy heterociklusos csoporttal szubsztituált 1 -4 szénatomos alkilcsoport; vagy egy, egy vagy több heteroatommal megszakított és/vagy szubsztituált fenti csoport; vagy a fenti csoportok bármelyike, amely egy vagy több hidroxil-, merkapto-, amino-, nitro-, azido-, karboxil-, ciano- vagy izotiocianátocsoport vagy halogénatom szubsztituenst tartalmaz, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
6. A 4. igénypont szerinti eljárás a (II) általános képletű vegyületek szűkebb körét képező (III) általános képletű vegyületek - a képletben
Y- jelentése a 4. igénypontban megadott,
R,[ jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomos alkilcsoport, és
R12 jelentése boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoport előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
7. A 4. igénypont szerinti eljárás a (II) általános képletű vegyületek szűkebb körét képező (IV) általános képletű vegyületek - a képletben
Y jelentése a 4. igénypontban megadott,
Rn jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomos alkilcsoport, és
R13 jelentése boronsavmaradékot tartalmazó szerves csoport előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
HU9301408A 1990-11-14 1991-11-13 Eljárás boronsav-konjugátum jelzőanyagok előállítására HU216635B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB909024775A GB9024775D0 (en) 1990-11-14 1990-11-14 Chemical compounds

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9301408D0 HU9301408D0 (en) 1993-09-28
HUT64353A HUT64353A (en) 1993-12-28
HU216635B true HU216635B (hu) 1999-07-28

Family

ID=10685377

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9301408A HU216635B (hu) 1990-11-14 1991-11-13 Eljárás boronsav-konjugátum jelzőanyagok előállítására

Country Status (16)

Country Link
US (1) US5739318A (hu)
EP (1) EP0557357B1 (hu)
JP (1) JP2761494B2 (hu)
AT (1) ATE120195T1 (hu)
AU (1) AU666294B2 (hu)
CA (1) CA2096251C (hu)
DE (1) DE69108403T2 (hu)
DK (1) DK0557357T3 (hu)
ES (1) ES2069914T3 (hu)
FI (1) FI105549B (hu)
GB (1) GB9024775D0 (hu)
HU (1) HU216635B (hu)
NO (1) NO304691B1 (hu)
PL (1) PL176747B1 (hu)
RU (1) RU2076127C1 (hu)
WO (1) WO1992008722A1 (hu)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0596700A1 (en) * 1992-11-03 1994-05-11 Hewlett-Packard Company Cis-diol detection method and solid supports
EP0617288B1 (en) * 1993-03-19 2002-05-02 Novartis AG Long emission wavelength chemiluminescent compounds and their use in test assays
US5395752A (en) * 1993-03-19 1995-03-07 Ciba Corning Diagnostics Corp. Long emission wavelength chemiluminescent compounds and their use in test assays
US5623055A (en) * 1994-01-28 1997-04-22 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexes derived from aminosalicylic acid for bioconjugate preparation
US5852178A (en) * 1994-01-28 1998-12-22 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexing reagents for conjugating biologically active molecules
US5594151A (en) * 1994-01-28 1997-01-14 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexing reagents derived from aminosalicylic acid
US5594111A (en) * 1994-01-28 1997-01-14 Prolinx, Inc. Phenylboronic acid complexes for bioconjugate preparation
US5847192A (en) * 1994-01-28 1998-12-08 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and complexes
CA2181252A1 (en) * 1994-01-28 1995-08-03 Mark L. Stolowitz Phenylboronic acid complexes
US5777148A (en) * 1994-01-28 1998-07-07 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and highly stable complexes
US5744627A (en) * 1994-01-28 1998-04-28 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and complexes
US5837878A (en) * 1994-01-28 1998-11-17 Prolinx, Inc. Boronic compound complexing reagents and highly stable complexes
US5880279A (en) * 1995-07-31 1999-03-09 Chevron U.S.A. Inc. Cobalt dihalodihydroxydisulfophthalocyanines
US6075126A (en) 1996-08-05 2000-06-13 Prolinx, Inc. Phenyldiboronic acid reagents and complexes
US6156884A (en) 1996-08-05 2000-12-05 Prolinx, Inc. Bifunctional boronic compound complexing reagents and complexes
DE19721399A1 (de) * 1997-05-22 1998-11-26 Basf Ag Phthalocyanine und ihre Verwendung als Markierungsmittel
DE19843094A1 (de) * 1998-09-21 2000-03-23 Roche Diagnostics Gmbh Verfahren zur Bestimmung von glykiertem Hämoglobin
AU4024500A (en) * 1999-03-24 2000-10-09 Princeton Separations Chemically reactive plane-rigidized cyanine dyes and their derivatives
RU2183635C2 (ru) * 1999-11-26 2002-06-20 Федеральное государственное унитарное предприятие Государственный научный центр "Научно-исследовательский институт органических полупродуктов и красителей" Сульфозамещенные фталоцианины как фотосенсибилизаторы для фотодинамической терапии
CA2419238A1 (en) * 2000-08-16 2002-02-21 University Of Alberta Non-pressurized methods for the preparation of conjugated solid supports for boronic acids
ATE287430T1 (de) * 2000-09-06 2005-02-15 Evotec Ag Oxazinderivate
EP1213328A1 (de) * 2000-12-08 2002-06-12 Evotec OAI AG Oxazinderivate
US7470420B2 (en) 2000-12-05 2008-12-30 The Regents Of The University Of California Optical determination of glucose utilizing boronic acid adducts
US6627177B2 (en) * 2000-12-05 2003-09-30 The Regents Of The University Of California Polyhydroxyl-substituted organic molecule sensing optical in vivo method utilizing a boronic acid adduct and the device thereof
US6653141B2 (en) 2000-12-05 2003-11-25 The Regents Of The University Of California Polyhydroxyl-substituted organic molecule sensing method and device
US7195923B2 (en) * 2001-01-31 2007-03-27 Scripps Laboratories, Inc. Ratiometric determination of glycated protein
GB0110053D0 (en) * 2001-04-24 2001-06-13 Axis Shield Asa Assay
WO2002099077A2 (en) * 2001-06-06 2002-12-12 Proteologics, Inc. Methods and compositions related to tagging of membrane surface proteins
US6858592B2 (en) * 2001-06-29 2005-02-22 Genzyme Corporation Aryl boronic acids for treating obesity
US7041280B2 (en) * 2001-06-29 2006-05-09 Genzyme Corporation Aryl boronate functionalized polymers for treating obesity
US7390670B2 (en) * 2003-02-20 2008-06-24 Lumigen, Inc. Signalling compounds and methods for detecting hydrogen peroxide
US7427129B2 (en) * 2004-02-04 2008-09-23 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Boronic acid containing dyes to improve permanence of images
EP2099807B1 (en) * 2006-11-30 2014-01-01 Senseonics, Incorporated Oxidation resistant indicator molecules
GB0903348D0 (en) * 2009-02-27 2009-04-08 Pharmalucia Ltd Compounds and methods relating thereto
CN107421796B (zh) 2011-06-17 2021-05-04 罗氏血液诊断股份有限公司 用于生物样品的组织加工的溶液
GB201215571D0 (en) 2012-08-31 2012-10-17 Axis Shield Asa Assay method
EP3375777A1 (en) * 2017-03-15 2018-09-19 MIKROCHEM spol. s.r.o. Method for preparation of 3,7-bis-(dimethylamino)-phenothiazin-5-ium chloride or bromide

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4496722A (en) * 1981-05-01 1985-01-29 The Children's Medical Center Corporation Reporter compounds
EP0319620A1 (en) * 1987-12-10 1989-06-14 Viomedics Inc. Novel oxazines-ureas and thiazine urea chromophors
US4830786A (en) * 1986-02-27 1989-05-16 Syntex (U.S.A.) Inc. Squaraine dyes
DE3720736A1 (de) * 1987-06-23 1989-01-05 Erwin Dr Schleicher Verfahren, reagenzien und ausruestung zur einfachen bestimmung von nicht-enzymatisch glykosylierten proteinen in koerperfluessigkeiten
US4861728A (en) * 1987-07-24 1989-08-29 Becton, Dickinson And Company Immunoassay of glycosylated hemoglobin using a labeled boron reagent
EP0310361A3 (en) * 1987-09-30 1989-05-24 Beckman Instruments, Inc. Tridentate conjugate and method of use thereof
DE3827340A1 (de) * 1988-08-12 1990-02-15 Hoechst Ag Verwendung von (alpha)-aminoboronsaeure-derivaten zur prophylaxe und behandlung von viruserkrankungen
DE3840452A1 (de) * 1988-12-01 1990-06-07 Hoechst Ag (beta)-amino-boronsaeure-derivate
DE3843605A1 (de) * 1988-12-23 1990-06-28 Hoechst Ag Wasserloesliche faserreaktive farbstoffe, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
NO890029D0 (no) * 1989-01-04 1989-01-04 Axis Research Nye modifiserte peptider og proteiner for in vitro diagnoser (diabetes).
JPH02226070A (ja) * 1989-02-27 1990-09-07 Fuji Photo Film Co Ltd 糖タンパク質の定量方法
US5071531A (en) * 1989-05-01 1991-12-10 Soane Technologies, Inc. Casting of gradient gels
WO1990013604A1 (de) * 1989-05-10 1990-11-15 Hoechst Aktiengesellschaft Wasserlösliche faserreaktive farbstoffe, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
DE69108439T2 (de) * 1990-05-01 1995-07-27 Nacalai Tesque Inc Verfahren zur Bestimmung des Glykationsprozentsatzes eines bestimmten Proteins.

Also Published As

Publication number Publication date
US5739318A (en) 1998-04-14
AU8909291A (en) 1992-06-11
PL176747B1 (pl) 1999-07-30
EP0557357A1 (en) 1993-09-01
CA2096251A1 (en) 1992-05-15
FI105549B (fi) 2000-09-15
NO931746D0 (no) 1993-05-13
GB9024775D0 (en) 1991-01-02
CA2096251C (en) 1999-08-17
AU666294B2 (en) 1996-02-08
JPH06502170A (ja) 1994-03-10
FI932149A0 (fi) 1993-05-12
HUT64353A (en) 1993-12-28
EP0557357B1 (en) 1995-03-22
NO931746L (no) 1993-07-13
ATE120195T1 (de) 1995-04-15
HU9301408D0 (en) 1993-09-28
ES2069914T3 (es) 1995-05-16
RU2076127C1 (ru) 1997-03-27
DE69108403T2 (de) 1995-08-17
DE69108403D1 (de) 1995-04-27
WO1992008722A1 (en) 1992-05-29
FI932149L (fi) 1993-06-10
DK0557357T3 (da) 1995-06-12
JP2761494B2 (ja) 1998-06-04
NO304691B1 (no) 1999-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU216635B (hu) Eljárás boronsav-konjugátum jelzőanyagok előállítására
US5631364A (en) Labelled boronic acid derivatives
US7750163B2 (en) Cyanine dye labelling reagents
US6995274B2 (en) Cyanine dyes
US5274113A (en) Long wavelength chemically reactive dipyrrometheneboron difluoride dyes and conjugates
US6828116B1 (en) Energy transfer assay method and reagent
US6207464B1 (en) Rigidized monomethine cyanines
US9273059B2 (en) Macrocyclic HOPO chelators
WO1989005813A1 (fr) Cryptates de terres rares, procedes d'obtention, intermediaires de synthese et application a titre de marqueurs fluorescents
US5756740A (en) Process for the preparation of binary sensitizing dyes
JP4098839B2 (ja) インドシアニン化合物
US6828159B1 (en) Carbopyronine fluorescent dyes
JPH093343A (ja) 新規なオキサジン染料およびその染料の蛍光マーカーとしての使用
JP2698730B2 (ja) 標識色素とその前駆体、その合成方法および標識色素を用いたメタンフェタミンの検出方法
WO2002050547A2 (en) Fluorescent dye complexes
HK1093520B (en) Cyanine dye labelling reagents