HK1068151B - 氨基酸对映体拆分的酶方法 - Google Patents

Description

氨基酸对映体拆分的酶方法

本发明涉及一种新的酶方法，该方法能使呈外消旋混合物形式的氨基酸进行对映体拆分。

这些氨基酸可以用于各种各样的工业，例如常常作为生物活性化合物，或者作为制备主要是药物、化学或农用目的的化合物的合成中间体。因此，人们很快发现这样一个问题，即往往需要能够从这些氨基酸中获得一种或另一种旋光活性的对映体。于是，人们曾研制前-手性氨基酸对映体的分离方法。特别地，已公开许多使这些氨基酸对映体拆分的酶方法，这些方法对于非对称合成方法来说是一种有意义的可代替的办法。

这样，Soloshonok等人[四面体(Tetrahedron)：Assymetry，卷6(7)，1995年，第1601-1610页]提出了一种根据下述反应流程图的β-氨基酸对映体拆分的酶方法：

类似地，Topgi等人(Bioorg.& Med.Chem.，1999年，卷7，第2221-2229页)描述了一种呈纯对映体形式的(R)-和(S)-3-氨基4-戊炔酸乙酯对映体的拆分方法，其反应流程图如下：

通过苯乙酸的作用，通过酰化相应胺可得到起始苯基乙酰胺，或：

专利申请WO 98/50575更一般地描述了一种手性β-氨基酸的制备方法，该方法包括在适当的条件下，让所述氨基酸的外消旋混合物与酰基供体和青霉素G酰基转移酶(或酰胺水解酶)接触，以便立体选择性地将β-氨基酸外消旋混合物中的一种对映体酰化成其相应的N-酰化衍生物，同时得到β-氨基酸的相反对映体，呈富集对映体形式，其反应流程图如下：

上述的“酰基供体”具有下述通式：

式中R₃选自苯基、苯氧基、氨基、苯基和吡啶基的不同衍生物，R₄选自羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、卤代烷基、芳基(anyle)、芳基烷基、糖或甾族化合物。

专利申请WO 98/50575还描述了另一种制备手性β-氨基酸的可选择方法，该方法包括在适当的条件下，让呈外消旋形式的酰胺与青霉素G酰基转移酶接触，以便选择性地将呈外消旋形式酰胺的其中一种对映体去酰化成其相应的β-氨基酸，同时得到酰胺的相反对映体，呈富集对映体形式，其反应流程图如下：

但是，前面所讨论方法还存在较大缺陷，即在酶步骤之先或与酶步骤同时通过一个酰胺中间体，该酰胺的化学式可用如下方式概括：

芳环，优选苯基

这样一种酰胺因其结构中含有芳环而在含水介质中是不溶的，由此造成诸多不便。例如，人们知道，某些酶在含水介质中是可溶的，并且对存在的有机溶剂往往很敏感。然而，为了优化酶反应的产率，使底物的溶解度比酶好以使它们能够密切接触，这一点很重要。

这正是本发明要克服的主要缺陷。事实上，本发明首先涉及氨基酸对映体分离的新方法，该方法是先用戊二酸酐、后用戊二酰基7-ACA酰基转移酶处理所述氨基酸的外消旋混合物，以便回收所述氨基酸的一种对映体，而另一种对映体仍呈相应的戊二酰基酰胺衍生物的形式。

这种方法是特别有利的，因为使用戊二酸酐可以使该反应能够通过相应于起始氨基酸的戊二酰基酰胺衍生物中间体进行，戊二酰基官能团使该分于可以在含水介质中溶解。由此，本发明的方法可以在温和的反应条件下、在含水介质中实施，具体而言不需要使用有机助溶剂。

本发明方法还具有的优点是，能够应用于任何形态的氨基酸(α、β、γ等)。在本发明中，术语“氨基酸”不仅包括氨基酸本身(即具有氨基官能团和酸官能团-COOH的化合物)，而且还包括其相应的酯衍生物(即酸官能团被酯官能团COOR取代的化合物)。优选地，本发明的方法更确切地应用于下述通式(I)的氨基酸：

式中：

-n是选自0、1、2、3、4、5和6的整数，

-R代表氢原子、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、缩合多环烃基，或杂环基，所有这些基团可任选地被取代，

-和R′代表烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、缩合多环烃基、杂环基，或被烷基、芳基、环烷基或杂环取代的氧基、硫代、亚砜或磺酰基，所有这些基团还任选地被取代。

因此，在这些氨基酸是通式(I)的情况下，本发明的方法可以用图1的反应流程图表示。这个流程图表示了用戊二酸酐处理的第一个步骤与用戊二酰基7-ACA酰基转移酶处理的第二个步骤。每个所得产物的构型，即一方面是氨基酸，另一方面是戊二酰基酰胺衍生物，取决于R′基的性质。

在本发明中，烷基、烯基和炔基一般为含有1-30个碳原子的直链或支链，但这并非是限制性的。这同样适合于这些基是其它基团的取代基的情况。优选地，这些基团为含有1-20个碳原子的直链或支链，更优选地，为含有1-10个碳原子的直链或支链。这些烷基例如可以选自：甲基、乙基、正-丙基、正-丁基、正-戊基、正-己基、正-庚基、正-辛基、正-壬基、正-癸基、正-十一烷基、正-十二烷基、正-十三烷基、正-十五烷基、正-十六烷基、正-十七烷基、正-十八烷基、异丙基、异丁基、异戊基、异己基、3-甲基戊基、新戊基、辛己基、2，3，5-三甲基己基、仲-丁基、叔-丁基、叔-戊基。优选的烷基例如是甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、仲-丁基、叔-丁基、正-戊基、异戊基、正-己基和异己基。烯基例如可以选自乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基和3-甲基-2-丁烯基。炔基例如可以选自乙炔基、1-丙炔基和炔丙基。

在本发明中，环烷基一般含有3-12个碳原子。优选地，环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基和环十二烷基。根据本发明的另一个方面，环烷基可以是多环的。优选地，这些基团选自双环烷基和三环烷基。

根据本发明，“芳基”是指单价芳族烃基。在这些芳基中，优选任选取代的苯基。

在本发明中，术语“缩合多环烃”是指优选选自下列的基团：并环戊二烯、茚、萘、甘菊环、庚搭烯、联苯撑、不对称indacéne、对称indacéne、苊烯、芴、苯嵌萘、菲、蒽、荧蒽、醋菲(acephenanthrylene)、醋蒽烯(aceanthrylene)、三亚苯、芘、、萘并萘、pleiadene、二萘品苯、二萘嵌苯、戊芬、戊省、亚四苯基、己芬、己省、玉红省、六苯并苯、联三萘、庚芬、庚省、皮蒽或卵苯。

在本发明中，术语“杂环”表示单环或稠合多环化合物，它们含有一个或多个杂原子，每个环由3-10个链节构成。优选地，本发明的杂环在由3-10个链节构成的环中含有1-3个选自氧、硫和氮的杂原子。本发明的杂环优选地选自噻吩、苯并[b]噻吩、萘并[2，3-b]噻吩、噻蒽、呋喃、2H-吡喃、异苯并呋喃、2H-色烯、氧杂蒽、phenoxathiine、2H-吡咯、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、中氮茚、异吲哚、3H-吲哚、吲哚、1H-吲唑、嘌呤、4H-喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、1，8-二氮杂萘、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、4a H-咔唑、咔唑、β-咔啉、菲啶、吖啶、萘嵌间二氮杂苯、1，7-菲咯啉、吩嗪、吩砒嗪、异噻唑、吩噻嗪、异噁唑、呋咱、吩噁嗪、异色满、吡咯烷、Δ2-吡咯啉、咪唑啉、Δ2-咪唑啉、吡唑烷、Δ3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、2，3-二氢化吲哚、异2，3-二氢化吲哚、奎宁环和吗啉。

在本发明中，当前面定义的这些不同的基团被取代时，根据这些基团的性质，所述的一种或多种取代基一般可选自卤素原子、芳基、杂环基、羟基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、烷基亚砜、芳基亚砜、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氰基、硝基、磺酰氨基、烷基磺酰氨基和芳基磺酰氨基基团。优选地，前面定义的这些基团被取代1、2或3次。根据优选的方面，所述卤素原子可选自氯、氟、溴和碘。在这些烷基被卤素取代的情况下，优选所述卤素原子为氟原子。优选地，氟取代基的数目是1、2、3、4、5、6或7。例如，三氟甲基。

优选地，本发明的氨基酸选自通式(I)化合物，其中n是选自0、1、2和3的整数，R代表氢原子、烷基或芳基，R′如前面所定义。

更优选地，本发明的氨基酸选自通式(I)化合物，其中n是选自0、1和2的整数，R代表氢原子或烷基，R′选自任选取代的芳基或杂环。在后一种情况下，这些芳基和/或杂环优选地被取代1、2或3次。

在许多工业方法中，特别是在水解β-内酰胺例如N-戊二酰基7-氨基乙酸基头孢菌素)时，戊二酰基7-ACA酰化转移酶已经用作催化剂。根据本技术领域的技术人员，即酶领域专家熟知的技术，所述酶可以由许多微生物得到，例如不动杆菌(Acinetobacter)、节杆菌(Arthrobacter)、杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、寡养单胞菌(Stenotrophomonas)或黄单胞杆菌(Xanthomonas)属。戊二酰基7-ACA酰化转移酶也可以从市场上获得，例如Roche Diagnostic GmbH(Roche Molecular Biochemicals，Standhofer Strasse 116，D-68305 Mannheim)或Recordati S.p.A.(Stabilimento di opera，Via Lambro 38，1-20090 Opera(MI))。

可以使用不同形式的戊二酰基7-ACA酰化转移酶，但这不会改变立体特异性和立体选择性。例如，可以使用可溶形式或固定形式的戊二酰基7-ACA酰化转移酶。在第二种情况下，一般是通过根据本技术领域的技术人员熟知的技术固定这种酶。例如，这种酶可以嵌入聚合物凝胶中，或通过共价键、交联作用、吸附作用或包封将其固定在固体载体上。通常使用的合适载体例如是多孔玻璃、多孔陶瓷、合成聚合物(例如聚苯乙烯、聚乙烯醇、聚乙烯、聚酰胺或聚丙烯酰胺)，或天然来源的聚合物(例如纤维素)。

通过使用戊二酰基7-ACA酰化转移酶，有可能得到高对映体过量(ee)的对映体，特别地高于或等于90％，甚至高于或等于95％，优选地高于或等于99％。在本发明中，“对映体过量”是指以外消旋混合物计，以％表示的其中一种对映体的过量。更确切地，对映体过量按照下式计算：

[R]和[S]分别表示(R)-对映体和(S)-对映体的浓度

一般地，以起始氨基酸(底物)总量计，使用的酶量是每毫摩尔底物为1-100单位(U)，优选每毫摩尔底物为10-40单位(U)。1单位酶为在本技术领域的技术人员已知的标准pH和温度条件下，每分钟水解1微摩尔N-戊二酰基7-氨基乙酸基头孢菌素酸所需要的酶量。

根据本发明，在任选缓冲的含水介质中进行该反应。在这种情况下，浓度为10-200mM的含水缓冲液可以选自在pH 5-6.5下可使用的乙酸盐缓冲液，或在pH6.5-8下可使用的磷酸盐缓冲液，或在pH 8-9下可使用的焦磷酸盐缓冲液。

因此，本发明的方法可以在pH能控制并调节到6-9的介质中实施。优选地，反应介质的pH可精确地控制并调节到7.5-8.5，更优选地，8-8.5。使用pH-调节器，通过添加酸(例如像盐酸、硫酸或磷酸)与添加碱(例如像氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化铵)，可以控制pH稳态。

在温度20-40℃、优选25-35℃下，用戊二酸酐处理本发明的氨基酸。另外，在温度10-50℃、优选25-35℃下进行第二个步骤，该步骤使用戊二酰基7ACA酰基转移酶进行。

最后，反应时间变化很大，可以是1-100小时，主要取决于所涉及的氨基酸和酶的浓度。一般地讲，该反应进行的时间是得到希望的对映体，并具有令人满意的对映体过量所需要的时间。通过采用本技术领域的技术人员已知的经典技术，可以控制所得到的手性氨基酸的量和对映体过量。最好采用HPLC(高效液相色谱)进行控制。

根据本发明，由于采用前述方法得到的(R)-对映体和(S)-对映体中的一种在含水介质中呈可溶性胺形式，而另一种呈固体酰胺形式，所以它们能很容易分离。因此，本发明的另一个目的涉及前面公开的方法，该方法还包括将(R)-对映体和(S)-对映体分离的步骤。

借助于本技术领域的技术人员已知的经典技术，可以很容易进行所述的(R)-对映体和(S)-对映体的分离。例如采用过滤、提取、色谱或结晶方法操作。

在希望分离的另一种对映体呈氨基酸形式而不是呈戊二酰基酰胺衍生物形式的情况下，可以将根据前述方法已分离的戊二酰基酰胺衍生物对映体进行水解，以便回收呈对映体形式的相应氨基酸。应该指出，这种方法是有利的，因为这种水解能够保持使用化合物的立体化学，不会导致手性戊二酰基酰胺衍生物的外消旋作用。在氨基酸是通式(I)的情况下，这个补充步骤可用图2的反应流程图表示。

可以根据本技术领域的技术人员已知的经典技术进行水解。本发明特别地涉及酸性或碱性水解。在后一种情况下，例如在像氢氧化钠的碱存在下，在温度50-90℃与大气压下操作。然而，也可以使用本技术领域的技术人员已知的其他适合的操作条件。

本发明的方法可以用于分离呈外消旋形式氨的基酸，这样能够获得所述氨基酸的一种或另一种对映体，所述的对映体特别可用作合成中间体。

例如，本发明例如能够获得(S)型的3-氨基3-苯基丙酸，它是合成下述通式化合物的中间体：

它是哮喘病中特别涉及的VLA4受体的拮抗剂。

除了前述的内容外，本发明还包括可以由下面实施例得出的本发明的特征与优点，这些实施例应该认为是说明本发明的，不限制其保护范围。

附图说明

图1：图解表示使用戊二酸酐处理本发明通式(I)氨基酸的第一个步骤，与使用戊二酰基7-CAC酰基转移酶处理的第二个步骤。每个得到的产物构型，即一方面是氨基酸，另一方面是戊二酰基酰胺衍生物，取决于R′的性质。

图2：图解表示通过水解将手性戊二酰基酰胺衍生物转化成其相应手性氨基酸的步骤。

实施例

实施例1：呈外消旋混合物形式的3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸的拆分

a)外消旋3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸的酰化作用

将40.6克外消旋3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸溶于200毫升蒸馏水和55毫升三乙胺中。再分小份添加29.4克戊二酸酐，将该反应混合物搅拌1小时。然后，用8.2毫升95％(重量/体积)硫酸化该反应混合物。这样得到的沉淀经过滤后，每次用15毫升蒸馏水洗涤3次，然后在55℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到52.84克外消旋的3-(戊二酰基酰胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸。

采用HPLC(高效液相色谱)测定所得到产物的性质。

b)使用呈悬浮液状的结晶戊二酰基7-CAC酰基转移酶的酶脱酰基作用(100 毫升反应器)

将20克在前面步骤得到的酸溶于75毫升蒸馏水中。添加11.2毫升30％(重量/体积)氢氧化钠溶液，把悬浮液的pH调节到8.2。往这种溶液添加826毫克(626单位)结晶戊二酰基7-CAC酰基转移酶悬浮液。该反应混合物在35℃与控制和调节pH为7.9-8.1的条件下搅拌51小时。反应结束后，反应混合物冷却到20℃，添加5N盐酸，把pH调节到7.0。这时添加20毫升乙醇。这样得到(R)-3-氨基-(4′-硝基苯基)丙酸沉淀，该沉淀经过滤后每次用30毫升乙醇洗涤三次，然后在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到5.65克(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸，对映体过量高于99％。

母液用17.5毫升5N盐酸酸化。生成的沉淀经过滤后每次用10毫升蒸馏水洗涤2次。得到的滤饼在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到8.25克(S)-3-(戊二酰基酰胺)-(4′-硝基苯基)丙酸和(R)-3-(戊二酰基酰胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸，其比为91∶9。

采用HPLC测定所得到产物的性质。

c) 使用从Roche Diagnostic GmbH得到的固定化戊二酰基7-CAC酰基转移 酶的酶脱酰基作用(100毫升反应器)

将20.5克在步骤a)得到的酸溶于75毫升蒸馏水中。添加11.9毫升30％(重量/体积)氢氧化钠溶液，把悬浮液的pH调节到8.2。往这种溶液添加6.2克(632.4单位)湿的固定化戊二酰基7-CAC酰基转移酶(Roche Diagnostic GmbH)。该反应混合物在35℃与控制和调节pH为7.9-8.1的条件下搅拌18小时。反应结束后，添加30％(重量/体积)氢氧化钠溶液，调节反应混合物的pH，并且把反应混合物的体积调节到200毫升，以便溶解生成的(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸。过滤除去固定酶，添加5N盐酸，把母液的pH调节到7.0。这时往反应混合物添加50毫升乙醇。过滤(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸沉淀，用10毫升乙醇洗涤，然后在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到5.375克(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸，对映体过量等于98％。

母液用20毫升5N盐酸酸化。生成的沉淀经过滤后每次用15毫升蒸馏水洗涤2次。滤饼在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到6克(S)-3-(戊二酰基酰胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸，其比为94∶6。

采用HPLC测定所得到产物的性质。

d) 使用呈悬浮液状的结晶戊二酰基7-CAC酰基转移酶的酶脱酰基作用(500 毫升反应器)

将100克如步骤a)得到的外消旋3-(戊二酰基酰胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸溶于400毫升蒸馏水中。添加60毫升30％(重量/体积)氢氧化钠溶液，把悬浮液的pH调节到8.2。往这种溶液添加6.4克(4653单位)结晶戊二酰基7-CAC酰基转移酶悬浮液。该反应混合物在35℃与控制和调节pH为7.9-8.1的条件下搅拌30小时。反应结束后，反应混合物冷却到20℃，添加25毫升30％(重量/体积)氢氧化钠溶液，把pH调节到13，以便溶解生成的(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸。过滤不溶的颗粒，添加27毫升36％盐酸，把母液的pH调节到7.0。这时往反应混合物添加100毫升乙醇。得到(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸沉淀，该沉淀经过滤后每次用100毫升乙醇洗涤2次，然后在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到28.87克(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸，对映体过量等于97％。

采用HPLC测定所得到产物的性质。

实施例2：呈外消旋混合物形式的3-氨基-3-苯基丙酸的拆分

a)外消旋3-氨基-3-苯基丙酸的酰化作用

将488克外消旋3-氨基-3-苯基丙酸溶于2升蒸馏水中，其中含有236克片状氢氧化钠。在20℃，在搅拌下一小时内分小份往反应混合物添加437.5克戊二酸酐。1小时后，用236毫升95％(重量/体积)硫酸酸化该反应混合物，并冷却到10℃。这样生成的沉淀经过滤后，每次用600毫升蒸馏水洗涤3次。这样得到的1610克湿滤饼含有602克外消旋的3-戊二酰基酰胺-3-苯基丙酸。采用HPLC测定所得到产物的性质。

b)使用呈悬浮液状的结晶戊二酰基7-CAC酰基转移酶的酶脱酰基作用(5升 反应器)

将1575克在前面步骤得到的湿滤饼，其中含有589克外消旋的3-戊二酰基酰胺-3-苯基丙酸，溶于1610毫升蒸馏水中。添加440毫升30％(重量/体积)氢氧化钠溶液，把悬浮液的pH调节到8.0。往这种溶液添加52.6毫克(3200单位)结晶戊二酰基7-CAC酰基转移酶悬浮液。该反应混合物在35℃与控制和调节pH为7.9-8.1的条件下搅拌41小时。反应结束后，反应混合物冷却到20℃，添加25毫升30％(重量/体积)氢氧化钠溶液，将pH调节到13，以便溶解生成的(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸。过滤不溶颗粒，添加27毫升36％盐酸溶液调节母液的pH为7.0。

如此得到的(R)-3-氨基-3-苯基丙酸沉淀，经过滤后用150毫升蒸馏水洗涤，然后在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到96.9克(R)-3-氨基-3-苯基丙酸，对映体过量等于98％。

母液用180毫升95％(重量/体积)硫酸酸化。如此生成的沉淀经过滤后每次用400毫升冷蒸馏水洗涤2次。其滤饼在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到314.6克(S)-3-(戊二酰基酰胺)-3-苯基丙酸和(R)-3-(戊二酰基酰胺)-3-苯基丙酸，其比为90∶10。

采用HPLC测定所得到产物的性质。

c)采用碱性水解使(S)-3-戊二酰基酰胺-3-苯基丙酸脱酰基

将557.2克在前面步骤b)得到的(S)-3-(戊二酰基酰胺)-3-苯基丙酸和(R)-3-(戊二酰基酰胺)-3-苯基丙酸混合物(其比为90∶10)溶于3.91升蒸馏水和1.65升30％(重量/体积)氢氧化钠中。该反应混合物在70℃搅拌4天。

然后，该反应混合物冷却到15℃。添加3.21升37％(重量/体积)盐酸，沉淀所得到的产物，过滤，并在45℃真空下干燥直至达到恒重。这样得到202.4克(S)-3-氨基-3-苯基丙酸和(R)-3-氨基-3-苯基丙酸，其对映体过量高于98％。

采用HPLC测定所得到产物的性质。

Claims (16)

1、分离氨基酸对映体的方法，该方法包括先用戊二酸酐、后用戊二酰基7-ACA酰基转移酶处理所述氨基酸的外消旋混合物，以便回收所述氨基酸的一种对映体，另一种对映体仍呈相应的戊二酰基酰胺衍生物的形式。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的氨基酸具有下述通式(I)：

式中：

-n是选自0、1、2、3、4、5和6的整数，

-R代表氢原子、烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、缩合多环烃或杂环，所有这些基团可任选地被取代，且

-R′代表烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、缩合多环烃、杂环，或被烷基、芳基、环烷基或杂环取代的氧基、硫代、亚砜或磺酰基，所有这些基团还任选地被取代。

3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的氨基酸选自下述通式(I)化合物：

式中n是选自0、1、2和3的整数，R代表氢原子、烷基或芳基，R′代表烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、缩合多环烃、杂环，或被烷基、芳基、环烷基或杂环取代的氧基、硫代、亚砜或磺酰基，所有这些基团还任选地被取代。

4、根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述的氨基酸选自下述通式(I)化合物：

式中n是选自0、1和2的整数，R代表氢原子或烷基，R′选自任选取代的芳基或杂环。

5、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于使用呈可溶或固定形式的戊二酰基7-ACA酰基转移酶。

6、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于以起始氨基酸总量计，使用的酶量是每毫摩尔底物为1-100单位。

7、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于在缓冲含水介质中进行该反应。

8、根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述含水缓冲液的浓度是10-200mM，所述含水缓冲液选自pH5-6.5的乙酸盐缓冲液、pH6.5-8的磷酸盐缓冲液和pH8-9的焦磷酸盐缓冲液。

9、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于控制pH并调节到6-9。

10、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于在温度20-40℃下用戊二酸酐处理氨基酸。

11、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于在温度10-50℃下使用戊二酰基7ACA酰基转移酶进行处理。

12、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于反应时间是1-100小时。

13、根据上述权利要求1-3中任一项权利要求所述的方法，其特征在于还分离(R)-对映体和(S)-对映体。

14、根据权利要求13所述的方法，其特征在于采用过滤、提取、色谱或结晶方法进行所述(R)-对映体和(S)-对映体的分离。

15、根据权利要求13所述的方法，其特征在于对分离的戊二酰基酰胺衍生的对映体还进行水解，以便回收呈对映体形式的相应氨基酸。

16、根据权利要求14所述的方法，其特征在于对分离的戊二酰基酰胺衍生的对映体还进行水解，以便回收呈对映体形式的相应氨基酸。