FR3128373A1

FR3128373A1 - Composition pour son utilisation dans la synthese cutanee d’acide hyaluronique, dans la reponse immuno-cutanee et une amelioration de la peau

Info

Publication number: FR3128373A1
Application number: FR2111237A
Authority: FR
Inventors: Philippe Bernard
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2021-10-22
Filing date: 2021-10-22
Publication date: 2023-04-28
Also published as: CN118414141A; CA3235815A1; US20250268860A1; EP4419068A1; WO2023067251A1

Abstract

L’invention concerne une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci plus particulièrement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, ainsi que l’utilisation cosmétique d’une telle composition et ses applications médicales.

Description

COMPOSITION POUR SON UTILISATION DANS LA SYNTHESE CUTANEE D’ACIDE HYALURONIQUE, DANS LA REPONSE IMMUNO-CUTANEE ET UNE AMELIORATION DE LA PEAU

L’invention se rapporte à une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci optionnellement en combinaison avec l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, en particulier pour l’utilisation de cette composition dans la synthèse cutanée d’acide hyaluronique, pour son utilisation dans la réponse immuno-cutanée et enfin pour améliorer l’aspect général de la peau.

L’acide hyaluronique (AH) est un glycosaminoglycane, polyoside aminé non sulfaté composé d'unités répétitives de D-acide glucuronique et de N-acetyl-D-glucosamine, capable de fixer l’eau. Ainsi, les glycosaminoglycanes associés à une protéine porteuse forment des protéoglycanes. Ces protéoglycanes captent les molécules d’eau et constituent un gel, réservoir d’eau pour la peau. La teneur en AH de la peau est donc importante pour le maintien d’une bonne hydratation cutanée. Dans la peau normale, l’AH est synthétisé essentiellement par les fibroblastes dermiques et les kératinocytes épidermiques. Grâce à ses résidus portant une charge négative, l’AH joue le rôle d'une pompe à eau permettant de maintenir l'élasticité de la peau. L’AH a un rôle principal dans le contrôle de la diffusion des aliments, des hormones, des vitamines et des sels inorganiques du tissu conjonctif et dans le nettoyage des déchets métaboliques pouvant induire des réactions inflammatoires.

Des facteurs comme le soleil, le stress, la pollution ou encore l’âge induisent une perte en AH de la peau résultant en une diminution de la quantité d'eau retenue dans le tissu conjonctif. La peau subit alors un processus de vieillissement qui aboutit à une augmentation de la fibrose et à une baisse de la teneur en fibres élastiques. Dans la peau humaine normale, l’AH existe sous forme d'un polymère de haut poids moléculaire (600 000 - 1 000 000 Da). La dégradation physiologique du AH dans la peau se fait par (i) l'internalisation par les kératinocytes et (ii) la fragmentation intracellulaire en fragments de taille intermédiaire par les hyaluronidases (60 000-300 000 Da). L’AH fragmenté est relâché par les kératinocytes, passe la membrane basale et est libéré directement dans les vaisseaux lymphatiques. Ainsi, la perte en AH de la peau peut provoquer certaines pathologies cutanées à l’origine d’une peau sèche comme l’atopie, le psoriasis…

Augmenter la teneur en AH de la peau peut s’avérer être une bonne stratégie pour lutter contre le vieillissement cutané. Il existe plusieurs stratégies qui peuvent être complémentaires pour atteindre cet objectif.

Par exemple, l’injection d’implants sous la peau (injection sous cutanée ou intradermique) sous forme d’hydrogel monophasique comprenant un gel composé d’acide hyaluronique réticulé et d’un de ses sels physiologiquement acceptables, est une solution proposée (voir par exemple WO2008068297A1). Toutefois, ceci implique un mode d’administration peu pratique et nécessitant un personnel qualifié (injection sous cutanée ou intradermique) .

Ainsi pour surmonter cette difficulté d’administration, de nombreuses compositions topiques pour augmenter le taux d’AH dans la peau sont proposées.

Par exemple, EP2868313 divulgue une composition pour application topique cosmétique et/ou dermatologique comprenant l'association d'acide hyaluronique de faible poids moléculaire et d'acide ascorbique, et optionnellement d'un oligosaccharide.

US-2011/0003020 décrit une composition pour application topique permettant de traiter le vieillissement de la peau. Cette composition comprend une quantité pharmaceutiquement efficace d'estradiol (i.e. oestradiol), d'estriol (i.e. oestriol), d'acide hyaluronique et d'un extrait de thé vert, et optionnellement d'une quantité efficace d'acide ascorbique.

FR3084592 décrit une composition comprenant de l’AH pour lutter contre l'ensemble des signes de l'âge (rides, perte de fermeté, élasticité, perte d'éclat...) en stimulant la régénération cellulaire.

Toutefois, lorsque ces solutions passent par un enrichissement en AH par un apport direct de celui-ci, ces solutions ne permettent alors pas une stimulation de la synthèse naturelle d’AH. Ceci peut ainsi résulter en une augmentation de la dépendance vis-à-vis de ces compositions (topiques) pour compenser le manque d’AH, qui est de moins en moins synthétisé de manière naturelle.

Il manque ainsi, dans l’état de la technique, une variété de solutions permettant d’inhiber la dégradation de l’AH ou en stimulant sa synthèse, voire de combiner les deux approches pour amplifier l’effet.

L’objectif de la présente invention est de proposer une composition permettant de remédier à ce manque.

L’objet de la présente invention concerne donc une utilisation cosmétique de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, optionnellement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, dans la synthèse cellulaire d’acide hyaluronique, en particulier au niveau cutané.

L’objet de la présente invention concerne également une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, optionnellement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, pour son utilisation dans la synthèse cellulaire d’acide hyaluronique et/ou dans une réponse immuno-cutanée.

L’objet de la présente invention concerne ainsi une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci.

L’objet de la présente invention concerne en outre l’utilisation cosmétique d’une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, selon l’invention, pour améliorer l’aspect général de la peau.

L’objet de la présente invention concerne également une composition cosmétique comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci.

L’objet de la présente invention concerne également un complément alimentaire comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, plus particulièrement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci .

L’objet de la présente invention concerne en outre une composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci pour son utilisation comme médicament.

DEFINITIONS

La baïcaline est une molécule naturelle que l’on rencontre dans certaines plantes commeScutellaria baicalensisGeorgi. Sa structure est la suivante (I) :

(I)

Scutellaria baicalensisGeorgi est une plante chinoise utilisée traditionnellement depuis des siècles pour traiter les problèmes inflammatoires. L’extrait de racine deScutellaria baicalensisGeorgi est riche en dérivés flavonoïdes comme la baïcaline, la baicaléine et le wogonin. La baïcaline est déjà connue pour son activité cosmétique sur la peau (FR3075050).

Par « dérivés de la baïcaline », il est compris dans le contexte de la présente invention les mêmes dérivés que ceux décrits dans FR3075050 ou WO2005044281A1, à savoir des composés couverts par la formule (IA) suivante :

(IA)

dans laquelle :

- chaque X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X_a, X_b, X_c, X_d, X_eet X_f, indépendamment, désigne O ou S ;

- chaque Y₁, Y₂, Y₃, Y₄, Y₅, Y₆, indépendamment, désigne H ou un radical (C₁-C₁₀)alkyle, en particulier méthyle ;

- chaque R₄, R₅, R_a, Rb et Rc, indépendamment, désigne H, un radical (C₁-C₁₀)alkyle éventuellement substitué par 1 à 5 groupes R_y,ou un radical (C₁-C₁₀)alkyl-O-(C₁-C₁₀)alkyle, chaque radical (C₁-C₁₀)alkyle pouvant être substitué par 1 à 5 groupes R_y;

- chaque R_y, indépendamment, désigne R_qou un radical -(C₂-C₁₀)alcényle, -(C₂-C₁₀)alcynyle, -(C₃-C₁₀)cycloalkyle, -(C₈-C₁₄)bicycloalkyle, -(C₈-C₁₄)tricycloalkyle, -(C₅-C₁₀)cycloalcényle, -(C₈-C₁₄)tricycloalcényle, phényle, naphthyle, -(C₁₄)aryle, chacun pouvant être substitué par un ou plusieurs radicaux R_z;

- chaque R₁, R₂, R₃, indépendamment, désigne R_qou un radical -(C₂-C₁₀) alcényle, -(C₂-C₁₀)alcynyle, -(C₃-C₁₀)cycloalkyle, -(C₈-C₁₄)bicycloalkyle, -(C₈-C₁₄)tricycloalkyle, -(C₅-C₁₀)cycloalcényle, -(C₈-C₁₄)tricycloalcényle, phényle, naphthyle, -(C₁₄)aryle, chacun pouvant être substitué par un ou plusieurs radicaux R_z;

- R_fest H, (C₁-C₁₂)alkyle éventuellement substitué par 1 à 5 radicaux R_y, (C₁-C₁₂)alkyl-O-(C₁-C₁₂)alkyle, chaque radical (C₁-C₁₂)alkyle pouvant être substitué par 1 à 5 groupes R_y;

- chaque R_q, indépendamment, est CN, OH, halogène, N₃, NO₂, N(R_z)₂, =NR_z, CH=NR_z, NR_zOH, OR_z, COR_z, C(O)R_z, O(CO)OR_z, SR_z, S(O)R_zou S(O)₂R_z;

- chaque R_z, indépendamment, est -(C₁-C₆)alkyle, -(C₂-C₆)alcényle, -(C₃-C₈)cycloalkyle, -(C₃- C₈)cycloalcényle, phényle, un hétérocycle ayant 3 à 5 branches, CH(halo)₂ou C(halo)₃; et

- n vaut 0, 1, 2, 3, 4 ou 5 ;

ainsi que leurs sels, leurs isomères optiques et/ou leurs diastéréoisomères.

Certains composés de formule (IA) peuvent présenter des centres asymétriques et exister sous différentes formes énantiomères et diastéréoisomères. Un composé de formule (IA) peut être sous la forme d'un isomère optique ou d'un diastéréoisomères. Selon l'invention, les composés de formule (IA) comprennent également leurs formes isomères optiques, diastéréoisomères et leurs mélanges, incluant des mélanges racémiques.

On entend par « -(C₁-C₁₀)alkyle », une chaîne hydrocarbonée non cyclique saturée, linéaire ou ramifiée ayant de 1 à 10 atomes de carbone. Comme exemples de radicaux -(C₁-C₁₀)alkyles linéaires saturés, on peut citer : méthyle, éthyle, n-propyle, n-butyle, -n-pentyle, n-hexyle, n-heptyle, n-octyle, n-nonyle et n-décyle. Comme exemples de radicaux -(C₁-C₁₀)alkyles ramifiés saturés, on peut citer isopropyle, sec-butyle, isobutyle, tert-butyle, isopentyle, 2-méthylbutyle, 3-méthylbutyle, 2,2-diméthylbutyle, 2,3-diméthylbutyle, 2-méthylpentyl, 3-méthylpentyle, 4-méthylpentyle, 2-méthylhexyle, 3-méthylhexyle, 4-méhylhexyle, 5-méthylhexyle, 2,3-diméthylbutyle, 2,3-diméthylpentyle, 2,4-diméthylpentyle, 2,3-diméthylhexyle, 2,4-diméthylhexyle, 2,5-diméthylhexyle, 2,2-diméthylpentyle, 2,2-diméthylhexyle, 3,3-diméthylpentyle, 3,3-diméthylhexyle, 4,4-diméthylhexyle, 2-éthylpentyle, 3-éthylpentyle, 2-éthylhexyle, 3-éthylhexyle, 4-éthylhexyle, 2-méthyl-2-éthylpentyle, 2-méthyl-3-éthylpentyle, 2-méthyl-4-éthylpentyle, 2-méthyl-2-éthylhexyle, 2-m éthyl-3-éthylhexyle, 2-méthyl-4-éthylhexyle, 2,2-diéthylpentyl, 3,3-diéhylhexyle, 2,2-diéthylhexyle, 3,3-diéthylhexyle.

On entend par « -(C₂-C₁₀) alcényle», une chaîne hydrocarbonée non cyclique insaturée, linéaire ou ramifiée ayant de 2 à 10 atomes de carbone et comprenant au moins une double liaison carbone-carbone. Comme exemples de radicaux (C₁-C₁₀)alcényles, on peut citer : 2-pentényle 3-méthyl-1-butényle, 2-méthyl-2-butényle, 2,3-diméthyl-2-butényle, 1-hexenyle, 2-hexényle, 3-hexényle, 1-heptényle, 2-heptényle, 3-heptényle, 1-octényle, 2-octényle, 3-octényle, 1-nonényle, 2-nonényle, 3-nonényle, 1-decényle, 2-decényle, 3-decényle.

On entend par « -(C₂-C₁₀) alcynyle », une chaîne hydrocarbonée non cyclique insaturée, linéaire ou ramifiée ayant de 2 à 10 atomes de carbone et comprenant au moins une triple liaison carbone-carbone. Comme exemples de radicaux (C₁-C₁₀)alcynyles, on peut citer : acétylényle, propynyle, 1-butynyle, 2-butynyle, 1-pentynyle, 2-pentynyle, 3-méthyl-l-butynyle, 4-pentynyle, 1-hexynyle, 2-hexynyle, 5-hexynyle, 1-heptynyle, 2-heptynyle, 6-heptynyle, 1-octynyle, 2-octynyle, 7-octynyle, 1-nonynyle, 2-nonynyle, 8-nonynyle, 1-décynyle, 2-décynyle, 9-décynyle.

On entend par « -(C₃-C₁₀)cycloalkyle », un cycle hydrocarboné saturé ayant de 3 à 10 atomes de carbone. Comme exemples de radicaux -(C₃-C₁₀)cycloalkyles, on peut citer : cyclopropyle, cyclobutyle, cyclopentyle, cyclohexyle, cycloheptyle, cyclooctyle, cyclononyle et cyclodécyle.

On entend par « -(C₈-C₁₄)bicycloalkyle », un bicycle hydrocarboné ayant de 8 à 14 atomes de carbone et au moins un cycle cycloalkyle saturé. Comme exemples de radicaux -(C₈-C₁₄)bicycloalkyles, on peut citer : indanyle, 1,2,3,4-tétrahydronaphthyle, 5,6,7,8-tétrahydronaphthyle, perhydronaphthyle.

On entend par « -(C₈-C₁₄)tricycloalkyle », un tricycle hydrocarboné ayant de 8 à 14 atomes de carbone et au moins un cycle cycloalkyle saturé. Comme exemples de radicaux -(C₈-C₁₄)tricycloalkyles, on peut citer : pyrényle, 1,2,3,4-tétrahydroanthracényle, perhydroanthracényle, acéanthrényle, 1,2,3,4-tétrahydrophénanthrényle, 5,6,7,8-tétrahydrophénanthrényle, perhydrophénanthrényle.

On entend par « -(C₅-C₁₀)cycloalcényle », un radical cyclique non aromatique hydrocarboné ayant au moins une double liaison carbone-carbone dans le système cyclique et de 5 à 10 atomes de carbone. Comme exemples de radicaux -(C₅-C₁₀)cycloalcényle, on peut citer : cyclopentadiényle, cyclohexényle, cyclohexadieényle, cycloheptényle, cycloheptadiényle, cycloheptatriényle, cyclooctényle, cyclooctadiényle, cyclooctatriényle, cyclooctatétraényle, cyclononényle, cyclononadiényle, cyclodécényle, cyclodécadiényle.

On entend par « -(C₈-C₁₄)bicycloalcényle », un bicycle hydrocarboné ayant au moins une double liaison carbone-carbone dans chaque cycle et de 8 à 14 atomes de carbone. Comme exemples de radicaux -(C₈-C₁₄)bicycloalcényles, on peut citer : indényle, pentalényle, naphthalényle, azulényle, heptalényle, 1,2,7,8-tétrahydronaphthalényle.

On entend par « -(C₈-C₁₄)tricycloalcényle », un tricycle hydrocarboné ayant au moins une double liaison carbone-carbone dans chaque cycle et de 8 à 14 atomes de carbone. Comme exemples de radicaux -(C₈-C₁₄)tricycloalcényles, on peut citer : anthracényle, phénalényle, acénaphthalényle, as-indacényle, s-indacényle.

On entend par « -( C₁₄)aryle », un carbocycle aromatique à 14 branches tel que anthryle et phénanthryle.

On entend par « hétérocycle ayant 3 à 5 branches », un hétéromonocycle saturé, insaturé, aromatique ou non aromatique ayant 3 à 5 branches ayant des atomes de carbone et des hétéroatomes. Un hétérocycle à 3 ou 4 branches peut comporter jusqu'à 3 hétéroatomes et un hétérocycle à 5 branches jusqu'à 4 hétéroatomes. Chaque hétéroatome est indépendamment choisi parmi un azote pouvant être quaternisé, oxygène et souffre incluant sulfoxyde et sulfone. L'hétérocycle peut être rattaché par tout hétéroatome ou atome de carbone. Comme exemples d'hétérocycles à 3-5 branches, on peut citer : furyle, thiophényle, pyrrolyle, oxazolyle, imidazolyle, thiazolyle, isoxazolyle, pyrazolyle, isothiazolyle, triazinyle, pyrrolidinonyle, pyrrolidinyle, hydantoinyle, oxiranyle, oxétanyle, tétrahydrofuranyle, tétrahydrothiophényle.

On entend par « halo », un atome halogène tel que F (Fluor), Cl (Chlore), Br (Brome) et I (Iode).

On entend par « -CH(halo)₂», un groupe méthyle dans lequel deux des hydrogènes sont remplacés par un atome d'halogène. On peut citer par exemple : -CHF₂, -CHCl₂, -CHBr₂, -CHBrCl, -CHClI et -CHI₂.

On entend par « -CH(halo)₃», un groupe méthyle dans lequel trois des hydrogènes sont remplacés par un atome d'halogène. On peut citer par exemple : -CF₃, -CF₂Cl, -CCl₃, -CBr₃, -CFBr₂et -CI₃.

On entend par « sels des composés de formule (I) », un sel formé par un acide inorganique ou organique ou bien une base inorganique ou organique. Comme exemples de sels d'acide, on peut citer les sels sulfate, citrate, acétate, oxalate, chlorure, bromure, iodure, nitrate, bisulfate, phosphate, isonicotinate, lactate, salicylate, citrate, tartrate, oléate, tannate, pantothénate, bitartrate, ascorbate, succinate, maléate, gentisinate, fumarate, gluconate, glucuronate, saccharate, formate, benzoate, glutamate, méthanesulfonate, éthanesulfonate, benzènesulfonate, p-toluènesulfonate et pamoate (c’est-à-dire 1,1' -méthylène-bis-(2-hydroxy-3-naphthoate).

Comme exemples de sels de base, on peut citer les hydroxydes de métal alcalin comme sodium, potassium et lithium ; les hydroxydes de métal alcalino-terreux comme calcium et magnésium ; les hydroxydes d'autres métaux, comme aluminium et zinc ; l'ammoniaque et les amines organiques telles que les mono-, di- ou tri-alkylamines non substituées ou hydroxy-substituées ; les dicyclohexylamines ; les tributyl amines ; pyridine ; N-méthyl-N-éthylamine ; diéthylamine ; triéthylamine ; mono-, bis- ou tris-(2-hydroxy-alkylamines) telles que mono-, bis- ou tris-(2-hydroxyéthyl)amine, 2-hydroxy-tert-butylamine, ortris-(hydroxyméthyl)méthylamine, les N,N-di-alkyl-N(hydroxyalkyl)-amines, telles que N,N-diméthyl-N-(2-hydroxyéthyl)amine ou tri-(2-hydroxyéthyl)amine ; N-méthyl-D-glucamine ; et les acides aminés tels que arginine et lysine.

Selon une forme préférée de l'invention, au moins un des radicaux X₁, X₂, X₃, X₄, X₅, X_a, X_b, X_c, X_d, X_eet X_fest O.

Selon une forme préférée de l'invention, au moins un des radicaux Y₁, Y₂, Y₃, Y₄, Y₅, Y₆, indépendamment, désigne H.

Selon une forme préférée de l'invention, au moins un des radicaux Y₁, Y₂, Y₃, Y₄, Y₆, indépendamment, désigne CH₃.

Selon une forme préférée de l'invention, R₁désigne H ou CH₃.

Selon une forme préférée de l'invention, n est égal à 5.

Selon une forme particulièrement préférée, la composition de l'invention comprend la baïcaline répondant à la formule générale (I) ci-dessus ou un extrait végétal la contenant.

Ce composé est décrit notamment dans la demande WO 2008/140440 notamment sous forme de solution. La baïcaline peut être utilisée sous forme de solution comprenant un alkyl glycol ayant de 2 à 7 atomes de carbone, un éther de polyol et au moins un anti-oxydant. Un tel composé organique peut être obtenu comme décrit dans EP 1 400 579 (US 2004/0067894) relatif à la synthèse de tétrahydroxyflavones dont la formule générale comprend la baïcaline.

La baïcaline peut être utilisée sous forme d'extrait d'origine végétale. La baïcaline est un polyphénol (flavone) extrait notamment de racine de scutellaire, en particulier de Scutellaria Baïcalensis de nom INCI : Scutellaria Baïcalensis Root Extract. Il est issu de la médecine traditionnelle chinoise. Les différents modes de préparation des extraits sont décrits dans la demande WO 2005/044281.

Par « utilisation cosmétique », il est compris dans le contexte de la présente invention une utilisation impliquant des effets purement visuels, i.e. n’impliquant pas d’effet thérapeutique et ayant ainsi un effet sur l’éclat de la peau, un effet visuel anti-âge, une amélioration de la sensibilité de la peau, un traitement visuel de l’acné, etc.

Par « amélioration de la sensibilité de la peau », il est compris dans le contexte de la présente invention une amélioration des caractéristiques physiologiques de la peau, rendant celle-ci moins sensible aux agressions externes (lumière ou autres ondes électromagnétiques, pollution, froid, sécheresse, sources de radicaux libres, etc.) impliquant un vieillissement prématuré de la peau, favorisant l’apparition de rides, ridules ou encore des sécheresses cutanées bénignes. Il est à noter que selon la quantité de produit selon l’invention administrée et l’éventuel désordre traité, un effet thérapeutique peut également être atteint. Les quantités à administrer sont dépendantes de la nature du désordre, des caractéristiques du patient (âge, pathologies passées ou présentes de celui-ci, etc.) que le praticien sera apte à déterminer.

L’utilisation cosmétique peut être simplement obtenue en limitant les quantités administrées et/ou les modes d’administrations des compositions selon la présente invention. Par exemple, une administration topique quotidienne (i.e. une fois par jour) d’une quantité faible (par exemple inférieure ou égale à 0,01 g / dm³, voire inférieure ou égale à 0,001 g / dm³, de composition appliquée en une couche de 1mm maximum, telle que 0,1mm, sur la peau).

Par « produit cosmétique et/ou dermatologique », on entend ainsi tout produit qui permet de constituer une composition permettant une application cosmétique et/ou dermatologique, c'est-à-dire une composition pouvant par exemple être appliquée sur la peau ou permettant de traiter la peau du point de vue cosmétique et/ou dermatologique.

L'acide chlorogénique, ester formé entre l'acide caféique et l'acide L-quinique, est un composé phénolique très répandu que l’on trouve dans des aliments tels que le café, les pommes, les poires... Il existe plusieurs isomères et sels de l’acide chlorogénique (e.g. formes dites « trans » ou « cis », formes basiques ou sels de l’acide chlorogénique).

L’acide chlorogénique (AC) peut ainsi être représenté dans une forme trans selon la formule (II) :

(II)

Par « dérivés de l’acide chlorogénique », il est compris dans le contexte de la présente invention les mêmes dérivés que ceux décrits dans US2004097584A1, à savoir des composés couverts par la formule (IIA) suivante :

(IIA)

dans laquelle :

- "a" représente soit une simple liaison soit une double liaison et R_an'est présent que dans le cas où "a" représente une simple liaison, et dans lequel au moins un des groupes fonctionnels R_a, R_b, R_cet R_d, de préférence au moins R_d, représente un groupe fonctionnel représenté par la formule IIB ci-dessous (ci-après aussi dénommée subst.IIB) :

(IIB)

et le reste desdits groupes fonctionnels R_a, R_b, R_cet R_dsont choisis indépendamment dans le groupe formé par -OH, et d'autres substituants analogues à des fragments d'acide caféique - qui sont abondants dans une matière de nature végétale et peuvent être séparés par la flore intestinale. Il est à noter que le composé de formule IIA a la configuration 1α, 3α, 4α, 5β-hydroxy.

Les analogues fonctionnels préférés de l'acide chlorogénique dans une préparation selon l'invention sont l'acide 4-caféoylquinique, l'acide néochlorogénique (acide 3-caféoylquinique), les acides dicaffeéylquiniques dans lesquels les positions 1 et 5 sont substituées (acide 1,5-dicafféoylquinique), les acides isochlorogéniques (i.e., acides dicafféoylquiniques substitués en 3 et 4 positions, 3 et 5 positions ou 3, 4 et 5 positions (acide 3,4,5 tricafféoylquinique), acide kryptochlorogénique (acide 4-O-cafféoylquinique, cynarine (1,3 l'acide -O-caféoylquinique), l'acide 1,3,4,5-O-tétracafféoylquinique et les acides cafféoylshikimiques, en particulier l'acide 5-O-cafféoylshikimique.

En référence à la formule (IIA), ces analogues peuvent avoir les structures chimiques suivantes (Tableau 1) :

Composés	R _a	R _b	R _c	R _d
(-)-acide quinique	OH	OH	OH	OH
acide 1-O-caféoylquinique	subst.IIB	OH	OH	OH
acide chlorogénique (5-O-cafféoyl- acide quinique)	OH	OH	OH	subst.IIB
acide kryptochlorogénique	OH	OH	subst.IIB	OH
acide néochlorogénique	OH	subst.IIB	OH	OH
cynarine (acide 1,3-O-dicaffeoylquinic)	subst.IIB	subst.IIB	OH	OH
acide 1,5-O-dicafféoylquinique	subst.IIB	OH	OH	subst.IIB
acide 3,4-O-dicafféoylquinique	OH	subst.IIB	OH	OH
acide 3,5-O-dicafféoylquinique	OH	subst.IIB	OH	subst.IIB
acide 4,5-O-dicafféoylquinique	OH	OH	subst.IIB	subst.IIB
acide 1,2,3,4-O-tétracafféoylquinique	subst.IIB	subst.IIB	subst.IIB	subst.IIB

L'acide chlorogénique et ses dérivés peuvent être synthétisés en appliquant l'une des méthodes connues dans l'art, telle que la méthode décrite par Panizzi et al. (Gazz. Chim. Ital, 86, 913, (1956)). Des sources alternatives pour l'acide chlorogénique et ses dérivés sont entre autres les extraits de Vaccinium myrtillus, les extraits de pomme de terre (jus de pressage) et les extraits de tournesol.

Par « synthèse, préférentiellement cutanée, d’acide hyaluronique », il est compris dans le contexte de la présente invention une synthèse de l’acide hyaluronique par les voies naturelles, en particulier trouvées au niveau de la peau.

Par « réponse immuno-cutanée », il est compris dans le contexte de la présente invention la mise en œuvre des différents moyens de défense immunitaires au niveau de la peau, par exemple les cellules de Langerhans et les cellules T épidermiques (cf. Réf. N°19).

FIGURES

A titre d’exemples non limitatifs, les figures trouvées ci-dessous correspondent à :

représente un histogramme exposant la citotoxicité (viabilité cellulaire) en fonction de la concentration en acide chlorogénique ;

représente un histogramme exposant la citotoxicité (viabilité cellulaire) en fonction de la concentration en baïcaline;

représente un histogramme exposant la citotoxicité (viabilité cellulaire) en fonction de différents mélanges de baïcaline avec de l’acide chlorogénique.

représente un histogramme exposant l’effet d’un mélange de baïcaline avec de l’acide chlorogénique (M41) et vis-à-vis de l’acide chlorogénique (composé 7) et la baïcaline (composé 9) sur la synthèse cellulaire d’acide hyaluronique.

EXEMPLES

On décrira ci-après, à titre d’exemples non limitatifs, des formes d’exécution de la présente invention.

I. Matériel et Méthodes

1) Obtention et mise en culture des fibroblastes

Les fibroblastes de la peau saine (FS) sont mis en culture à partir de biopsies réalisées chez une patiente de 55 ans, sur un explant de peau issu d’une opération chirurgicale et considéré comme un déchet opératoire. La technique d’explantation classique est utilisée pour l’extraction des fibroblastes. Les explants sont mis en culture dans le milieu de "Dulbecco’s modified Eagle’s medium" complémenté avec 10% de sérum de veau foetal (SVF), 40 mg/l de gentamicine et 2 mg/l de fungizone (DMEMc) à 37°C, en atmosphère humide et en présence de 5 % de CO2. Progressivement (en une dizaine de jours), les fibroblastes migrent à l’extérieur des explants. Le milieu de culture est renouvelé deux fois par semaine. Lorsque les fibroblastes sont en quantité suffisante, ils sont décollés sous l’action de la trypsine-EDTA, repiqués et amplifiés dans les mêmes conditions de culture.

2) Étude de la cytotoxicité

A) Principe

L’étude de la viabilité cellulaire en présence des principes actifs à tester est réalisée grâce à un test au MTT. Le MTT est un sel de tétrazolium dont le cycle est transformé par des déshydrogénases mitochondriales. Le substrat jaune est transformé en un produit bleu foncé par les cellules vivantes, mais pas par les cellules mortes ou le milieu de culture. Ce test colorimétrique permet de lier l’intensité de la coloration au nombre de cellules vivantes. L’absorbance à 550 nm est directement proportionnelle au nombre de fibroblastes vivants. Il y a cytotoxicité dès lors que la viabilité cellulaire est inférieure à 80% par rapport au témoin.

B) Préparation des solution-mères des actifs

Les actifs en poudre ont été repris dans du DMSO à 100% afin d’obtenir les solution-mères. L’acide chlorogénique (GPCB07 de Masse molaire = 354,31 g/mol) et la baïcaline (GPCB09 de Masse molaire = 446,36 g/mol) ont été préparée à 100 µM.

C) Mode opératoire

Des plaques de 96 puits ont été ensemencées à raison de 5000 fibroblastes par puits. Après 24 heures de culture, les principes actifs à tester sont ajoutés. Douze concentrations de chaque principe actif sont testées (n=10/concentration). Les principes actifs sont dissous directement dans le milieu de culture à partir des solutions mères. Après 24 heures de culture en présence des principes actifs, un test MTT est réalisé.

Suite aux résultats de la cytotoxicité des 2 actifs seuls, un second test de cytotoxicité a été réalisé avec le mélange. Pour chaque mélange, 3 concentrations ont été testées (n=10/concentration) :

- C1 : concentration la plus forte

- C2 : dilution au 1/2

- C3 : dilution au 3/4

Le mélange codé M41 correspond au mélange des produits GPCB07 et GPCB09.

3) Culture et traitement des fibroblastes

A) Culture cellulaire

A confluence, les fibroblastes sont trypsinés et ensemencés dans des plaques 6 puits à raison de 0,08.106 cellules par puits dans du DMEMc 10% SVF. Après 24 heures de culture, le milieu est remplacé par du DMEMc 1% SVF.

B) Traitement des monocouches

Après 24 heures de culture, 2 ml de milieu avec ou sans actif sont ajoutés. Les actifs sont dilués aux concentrations choisies suite aux tests de cytotoxicité dans du milieu de culture DMEMc 1% SVF.

C) Prélèvements

Après 48 heures de culture en présence des actifs, le surnageant est prélevé sur antiprotéase (10%). Les aliquots sont conservés à -80°C jusqu'aux dosages. Les monocouches cellulaires sont lavées avec du PBS et 500 μl de NaOH 0,1N sont ajoutés. Le lysat cellulaire est conservé à -20°C jusqu'au dosage des protéines.

4) Dosage de l'acide hyaluronique

A) Principe

La quantité d'acide hyaluronique des différents échantillons est déterminée par dosage ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) à l'aide d'un kit TECO®. Ce kit est un dosage sandwich sensible qui utilise d’une part des microplaques recouvertes par la protéine de liaison de l’acide hyaluronique (HABP) et d’autre part la protéine de liaison HABP conjuguée à HRP pour la détection. La protéine de liaison HABP conjuguée à HRP se lie à l’acide hyaluronique contenu dans l’échantillon, puis réagit avec le substrat. L’intensité de la couleur est proportionnelle au taux d’AH contenu dans les échantillons

B) Mode opératoire

100 μl de standard ou 100 μl d'échantillons dilués au 1/50ème sont déposés dans chaque puits. La plaque est incubée 2 heures à température ambiante, sous agitation. Après lavage de la plaque, 100 μl de conjugué HRBP-HRP sont déposés dans chaque puits. La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, sous agitation. Après lavage des puits, 100 μl de substrat TMB sont ajoutés. La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, à l'obscurité et sous agitation. La réaction est stoppée par l'ajout de 100 μl de solution stop par puits. La lecture des densités optiques est immédiatement effectuée à 450 nm.

C) Calculs

La droite d'étalonnage est tracée en représentant la DO en fonction de la concentration d'acide hyaluronique. Une droite de régression est ensuite tracée et les quantités d'acide hyaluronique contenues dans les échantillons sont déterminées grâce à l'équation de cette droite de régression. Les concentrations d'acide hyaluronique sont exprimées en ng/mg de protéines.

5) Dosage des protéines par la méthode de Pierce

A) Principe

L'acide bicinchoninique (BCA) sous forme de sel de sodium soluble en milieu aqueux réagit de façon stable, sensible et hautement spécifique avec les ions cuivreux. Les protéines réagissent avec les ions cuivriques en milieu alcalin pour produire des ions cuivreux. Deux molécules de BCA réagissent avec un ion cuivreux pour former un complexe violet qui montre un pic d'absorption à 562 nm.

B) Mode opératoire

Une gamme d'étalonnage (0-2 mg/ml) est réalisée à partir d'une solution de sérum albumine bovine. 20 μl de chaque point de la gamme d'étalonnage ou d'échantillon sont placés dans des puits d'une plaque de 96 puits, en duplicat. 200 μl de réactif de Pierce sont ajoutés et la plaque est incubée pendant 30 minutes à 37°C. L'absorbance est lue immédiatement à 550 nm (spectrophotomètre MultiSkan FC, Thermo).

C) Calculs

La gamme permet de tracer une droite d'étalonnage à partir de laquelle la concentration en protéines des échantillons est déterminée. Les résultats sont exprimés en mg de protéines/ml.

6) Calculs et analyses statistiques

Les valeurs sont exprimées en pourcentage par rapport au témoin plus ou moins l’erreur-type de la distribution des moyennes (sem). Une analyse de variance à un facteur est réalisée, suivie si nécessaire d'un test de Fisher. Les significativités ne sont retenues que lorsque p<0,05.

II. Résultats

1) Cytotoxicité actifs seuls

L’actif 7 (acide cholorogénique) n’entraîne aucune modification de la viabilité cellulaire par rapport au témoin, quelle que soit la concentration.

L’actif 9 (baïcaline) entraîne une diminution significative de la viabilité cellulaire à partir de 50 μM par rapport au témoin, notamment pour les concentrations de 75 et 100 μM où la diminution est très importante.

Tableau 2 :

Acide Chlorogénique
Concentration (μM)	Viabilité (%/Tém)	Sem
Tem	100	3,23
0,5	95,14	3,70
0,75	98,62	2,66
1,0	94,89	3,27
2,5	100,93	4,43
5,0	101,75	3,35
7,5	92,30	2,57
10,0	89,63	2,33
25,0	100,28	3,06
50,0	99,64	2,57
75,0	103,28	3,47
100,00	100,41	2,95

Tableau 3 :

Baïcaline
Concentration (μM)	Viabilité (%/Tém)	Sem
Tem	100	1,80
0,5	99,82	1,09
0,75	103,65	2,93
1,0	98,27	2,35
2,5	101,73	2,50
5,0	101,92	1,84
7,5	99,55	1,39
10,0	100,76	2,24
25,0	104,77	5,54
50,0	86,65	3,05
75,0	21,41	0,19
100,00	21,80	0,18

Les concentrations maximales non cytotoxiques retenues pour les actifs 7 et 9 sont respectivement de 100µM et 25 µM.

2) Cytotoxicité des actifs en mélanges

Le mélange 41 entraîne une augmentation significative de la viabilité cellulaire à C3 par rapport au témoin. Il n’y a pas de modification de la viabilité cellulaire à C1 et C2 par rapport au témoin.

Tableau 4 :

Mélange Acide Chlorogénique (100 µM) et Baïcaline (25 µM)
Concentration (µM)	Viabilité %
Acide Chlorogénique	Baïcaline	Moyenne	Sem
0	0	100,00	2,32
25	6,25	100,37	1,03
50	12,5	98,22	1,10
100	25	111,46	2,37

Les concentrations maximales non cytotoxiques retenues pour le mélange sont donc de 100 µM et 25 µM pour les actifs 7 et 9, respectivement.

3) Synthèse d’Acide Hyaluronique

Nous avons montré que le mélange M41 constitué de 100 µM d’acide chlorogénique et de 25 µM de baïcaline n’induisait pas de cytotoxicité sur les cellules. Nous avons donc utilisé ce ratio pour tester l’effet sur la synthèse d’acide hyaluronique. Nous avons également comparé les effets des produits seuls versus le mélange.

Le produit 7 testé seul montre un effet légèrement délétère sur la synthèse d’acide hyaluronique avec une baisse d’environ 20 % à un seuil de significativité moyen.

Le produit 9 testé seul montre un effet légèrement stimulant sur la synthèse d’acide hyaluronique avec une augmentation d’environ 30 % à un seuil de significativité faible.

En revanche, l’association des deux produits montre un effet synergique très significatif sur la synthèse d’acide hyaluronique avec une augmentation d’environ 140 %.

: Effet du mélange M41 des composés 7 et 9 sur la synthèse d’acide hyaluronique et comparaison avec l’effet des produits séparément.

Ainsi nous enregistrons une synergie significative pour une concentration d’un ratio de 4 sur test cellulaire avec des concentrations suivantes : Composé 7 : 0,004 % et Composé 9 : 0,001 %.

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Claims

Utilisation cosmétique de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, optionnellement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, dans la synthèse cellulaire d’acide hyaluronique, en particulier au niveau cutané.
Composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci, optionnellement en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci, pour son utilisation dans la synthèse cellulaire d’acide hyaluronique et/ou dans une réponse immuno-cutanée.
Composition comprenant de la baïcaline ou dérivé de celle-ci en combinaison avec de l’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci.
Composition selon la revendication 2 ou 3 caractérisée en ce que, le cas échéant, le ratio entre la quantité massique sèche de baïcaline ou dérivé de celle-ci et la quantité massique sèche d’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci est compris entre 1 : 1 et 1 : 10 respectivement, préférentiellement compris entre 1 : 3 et 1 : 5 respectivement.
Composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 4 caractérisée en ce qu’il s’agit d’une composition liquide préférentiellement aqueuse, ou solide telle qu’une poudre.
Composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 5 caractérisée en ce que la concentration de baïcaline ou dérivé de celle-ci dans la composition est inférieure à 50 micromoles, préférentiellement inférieure ou égale à 25 micromoles, de baïcaline ou dérivé de celle-ci par dm³de composition et, le cas échéant, en ce que la concentration d’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci dans la composition est inférieure à 200 micromoles, préférentiellement inférieure ou égale à 100 micromoles, d’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci par dm³de composition.
Composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 6 caractérisée en ce que ladite composition comprend au moins l’un des composés choisis dans la liste suivante : du hyaluronate de sodium, du hyaluronate de sodium hydrolysé, du carboxyméthyl béta-glucane de sodium, de l’inuline, un alpha glucane-oligosaccharide, de l’arginine et du pentylène glycole.
Composition selon l’une quelconque des revendications 2 à 7 caractérisée en ce que ladite composition comprend :
entre 0,0001% et 1% en masse de baïcaline ou dérivé de celle-ci ;

entre 0,0004% et 4% en masse d’acide chlorogénique ou dérivé de celui-ci ;

entre 0,0004% et 0,8% en masse de carboxyméthyl béta-glucane de sodium ;

entre 0,0008% et 8% en masse d’inuline ; et/ou

entre 0,00002% et 2% en masse d’alpha glucane oligosaccharide.
Composition selon l’une quelconque des revendications 3 à 8 pour son utilisation comme médicament.
Composition selon l’une quelconque des revendications 3 à 9 caractérisée en ce que la composition est un complément alimentaire ou une composition cosmétique, le cas échéant.