FR3028955A1 - METHOD FOR PREDICTING THE SENSITIVITY OF A PATIENT TO INHIBITORY TREATMENT OF THE MTOR PATH - Google Patents
METHOD FOR PREDICTING THE SENSITIVITY OF A PATIENT TO INHIBITORY TREATMENT OF THE MTOR PATH Download PDFInfo
- Publication number
- FR3028955A1 FR3028955A1 FR1461510A FR1461510A FR3028955A1 FR 3028955 A1 FR3028955 A1 FR 3028955A1 FR 1461510 A FR1461510 A FR 1461510A FR 1461510 A FR1461510 A FR 1461510A FR 3028955 A1 FR3028955 A1 FR 3028955A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- tumor
- menin
- treatment
- expression
- patient
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 105
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 73
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 102100023085 Serine/threonine-protein kinase mTOR Human genes 0.000 title abstract description 4
- 101150097381 Mtor gene Proteins 0.000 title 1
- 108010065917 TOR Serine-Threonine Kinases Proteins 0.000 claims abstract description 85
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims abstract description 84
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 80
- 102100030550 Menin Human genes 0.000 claims abstract description 74
- 101710169972 Menin Proteins 0.000 claims abstract description 72
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 60
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 claims abstract description 10
- 102000013530 TOR Serine-Threonine Kinases Human genes 0.000 claims description 84
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 42
- 238000001794 hormone therapy Methods 0.000 claims description 31
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 21
- HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N Everolimus Chemical compound C1C[C@@H](OCCO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 HKVAMNSJSFKALM-GKUWKFKPSA-N 0.000 claims description 19
- 108010035196 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 1 Proteins 0.000 claims description 17
- 102000008135 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 1 Human genes 0.000 claims description 17
- 229960005167 everolimus Drugs 0.000 claims description 16
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 7
- 208000009849 Female Genital Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 102000009308 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 2 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010034057 Mechanistic Target of Rapamycin Complex 2 Proteins 0.000 claims description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 4
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 3
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 241001354782 Nitor Species 0.000 claims 1
- 239000012823 PI3K/mTOR inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 19
- 229940124302 mTOR inhibitor Drugs 0.000 abstract description 4
- 239000003628 mammalian target of rapamycin inhibitor Substances 0.000 abstract description 4
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 22
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 102100024908 Ribosomal protein S6 kinase beta-1 Human genes 0.000 description 18
- 101710108924 Ribosomal protein S6 kinase beta-1 Proteins 0.000 description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 14
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 14
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 11
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 11
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 10
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 8
- 206010073150 Multiple endocrine neoplasia Type 1 Diseases 0.000 description 7
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 230000002074 deregulated effect Effects 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 5
- 108090000430 Phosphatidylinositol 3-kinases Proteins 0.000 description 5
- 102000003993 Phosphatidylinositol 3-kinases Human genes 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 5
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 4
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 4
- 102220497176 Small vasohibin-binding protein_T47D_mutation Human genes 0.000 description 4
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 101000582631 Homo sapiens Menin Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 3
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 3
- YSGQGNQWBLYHPE-CFUSNLFHSA-N (7r,8r,9s,10r,13s,14s,17s)-17-hydroxy-7,13-dimethyl-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1C[C@]2(C)[C@@H](O)CC[C@H]2[C@@H]2[C@H](C)CC3=CC(=O)CC[C@@H]3[C@H]21 YSGQGNQWBLYHPE-CFUSNLFHSA-N 0.000 description 2
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 2
- 206010055113 Breast cancer metastatic Diseases 0.000 description 2
- 101150050678 MEN1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 101710142052 Serine/threonine-protein kinase mTOR Proteins 0.000 description 2
- CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N Temsirolimus Chemical compound C1C[C@@H](OC(=O)C(C)(CO)CO)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 CBPNZQVSJQDFBE-FUXHJELOSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 2
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 2
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 2
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 210000004216 mammary stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 206010051747 multiple endocrine neoplasia Diseases 0.000 description 2
- 210000004923 pancreatic tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000333 selective estrogen receptor modulator Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 2
- 229960000235 temsirolimus Drugs 0.000 description 2
- QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N temsirolimus Natural products C1CC(O)C(OC)CC1CC(C)C1OC(=O)C2CCCCN2C(=O)C(=O)C(O)(O2)C(C)CCC2CC(OC)C(C)=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C(OC)C(O)C(C)=CC(C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N Aromasine Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC(=C)C2=C1 BFYIZQONLCFLEV-DAELLWKTSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- VWUXBMIQPBEWFH-WCCTWKNTSA-N Fulvestrant Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3[C@H](CCCCCCCCCS(=O)CCCC(F)(F)C(F)(F)F)CC2=C1 VWUXBMIQPBEWFH-WCCTWKNTSA-N 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101100183471 Homo sapiens MEN1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001059454 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase MARK2 Proteins 0.000 description 1
- 101000623857 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase mTOR Proteins 0.000 description 1
- 101000819111 Homo sapiens Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102300055208 Menin isoform 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010027463 Metastases to pleura Diseases 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 101000809255 Mus musculus Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 4 Proteins 0.000 description 1
- 229910020700 Na3VO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 102000017343 Phosphatidylinositol kinases Human genes 0.000 description 1
- 108050005377 Phosphatidylinositol kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 102100024819 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012722 SDS sample buffer Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028904 Serine/threonine-protein kinase MARK2 Human genes 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 description 1
- 102100021386 Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Human genes 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960002932 anastrozole Drugs 0.000 description 1
- YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N anastrozole Chemical compound N#CC(C)(C)C1=CC(C(C)(C#N)C)=CC(CN2N=CN=C2)=C1 YBBLVLTVTVSKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000003886 aromatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940046844 aromatase inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 201000008274 breast adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000011072 cell harvest Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 229960000255 exemestane Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229960002258 fulvestrant Drugs 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 208000018819 hormone-resistant breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000047681 human MEN1 Human genes 0.000 description 1
- 102000044980 human MTOR Human genes 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000013388 immunohistochemistry analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 206010022498 insulinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000020082 intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 229960003881 letrozole Drugs 0.000 description 1
- HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N letrozole Chemical compound C1=CC(C#N)=CC=C1C(N1N=CN=C1)C1=CC=C(C#N)C=C1 HPJKCIUCZWXJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 235000021232 nutrient availability Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000000849 parathyroid Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 102000003998 progesterone receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000468 progesterone receptors Proteins 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008261 resistance mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 229940095743 selective estrogen receptor modulator Drugs 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005026 toremifene Drugs 0.000 description 1
- XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N toremifene Chemical compound C1=CC(OCCN(C)C)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\CCCl)C1=CC=CC=C1 XFCLJVABOIYOMF-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
La présente invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de ladite tumeur, un niveau d'expression inférieur de ménine dans l'échantillon test par rapport à l'échantillon de référence étant indicatif de la sensibilité du patient audit traitement. La présente invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR.The present invention relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a tumor patient to mTOR inhibitor treatment, said method comprising determining the level of menin expression in a test sample of said tumor, a lower level of menin expression in the test sample relative to the reference sample being indicative of the sensitivity of the patient to said treatment. The present invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the susceptibility of a tumor patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway.
Description
PROCEDE DE PREDICTION DE LA SENSIBILITE D'UN PATIENT A UN TRAITEMENT INHIBITEUR DE LA VOIE mTOR La présente invention se situe dans le domaine de la prédiction de la sensibilité de patients atteints d'une tumeur à une thérapie anti-tumorale comprenant l'administration d'un inhibiteur de la voie mTOR. L'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité de patients atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel le niveau d'expression de ménine est déterminé dans un échantillon test de ladite tumeur, un faible niveau d'expression de ménine dans ledit échantillon test étant indicateur de la sensibilité du patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Les inhibiteurs de mTOR, pour « mammalian target of rapamycin » constituent une 10 nouvelle classe de thérapie anti-tumorale ciblée. La protéine mTOR est une sérine/thréonine kinase appartenant à la famille des phosphoinositide 3-kinase (PI3K). Elle interagit avec plusieurs protéines pour former deux complexes protéiques distincts : mTORC1 et mTORC2 (Laplante et Sabatini, 2012). La protéine mTOR humaine ("Serine/threonine-protein kinase mTOR» ou « FK506-binding protein 12- 15 rapamycin complex-associated protein 1 » peut être trouvée dans la banque de données UniProtKB sous la référence P42345, révisée le 3 septembre 2014. mTOR joue un rôle de régulateur central de la croissance et de la prolifération cellulaires, de l'angiogenèse et du métabolisme cellulaire. La voie PI3K / AKT / mTOR, ou « voie mTOR» est fréquemment dérégulée dans les cellules cancéreuses, une dérégulation entrainant une suractivation de mTOR conduit à une plus grande 20 disponibilité en nutriments et permet ainsi la croissance et la survie de la tumeur. La rapamycine est un antibiotique, initialement développé pour ses propriétés immunosuppressives, et pour lequel des propriétés antitumorales, par son action inhibitrice sur mTOR, ont été montrées. Différents analogues de la rapamycine sont actuellement utilisées en cancérologie, notamment l'everolimus et le temsirolimus. Des essais cliniques, associant ou non les 25 inhibiteurs de mTOR à d'autres molécules de thérapie ciblée ou à des traitements tels que la chimiothérapie ou la radiothérapie ont été réalisés. Des essais de phase III ont obtenu des résultats cliniques très prometteurs chez des patients atteints de carcinome rénal. La protéine mTOR est donc une cible thérapeutique particulièrement intéressante et l'inhibition de la voie mTOR constitue l'une des approches thérapeutiques anti-tumorales prometteuse. 30 Par ailleurs, étant donné que l'activation de la voie mTOR est impliquée dans le cancer du sein hormono-résistant, l'association de deux molécules de thérapie ciblée aux mécanismes d'action différents, comme un inhibiteur de la voie mTOR et une molécule utilisée en hormonothérapie, 3028955 2 permet d'envisager un éventuel contournement d'un mécanisme de résistance impliquant l'une de ces voies. Afin d'optimiser les essais cliniques et les traitements thérapeutiques dans ce domaine, l'identification de biomarqueurs prédictifs de la sensibilité des patients à traitement comprenant 5 l'administration d'un agent inhibiteur de mTOR, utilisé seul ou en combinaison avec d'autres approches thérapeutiques, demeure un objectif important pour le développement futur de ces traitements (Laplante et Sabatini, 2012 ; Baselga et al., 2012). Il est donc nécessaire de disposer de procédés toujours plus efficaces pour prédire la sensibilité des patients à un tel type de traitement.The present invention is in the field of predicting the sensitivity of tumor patients to an antitumor therapy comprising the administration of a tumor to a tumor. an inhibitor of the mTOR pathway. The subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of patients suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, wherein the level of menin expression is determined in a test sample of said tumor, a low level of menin expression in said test sample being indicative of the patient's sensitivity to an inhibitory treatment of the mTOR pathway. The mTOR inhibitors for "mammalian target of rapamycin" constitute a new class of targeted anti-tumor therapy. The mTOR protein is a serine / threonine kinase belonging to the phosphoinositide 3-kinase (PI3K) family. It interacts with several proteins to form two distinct protein complexes: mTORC1 and mTORC2 (Laplante and Sabatini, 2012). The human mTOR protein ("Serine / threonine-protein kinase mTOR" or "FK506-binding protein 12-rapamycin complex-associated protein 1" can be found in the UniProtKB database under the reference P42345, revised September 3, 2014. mTOR acts as a central regulator of cellular growth and proliferation, angiogenesis and cellular metabolism.The PI3K / AKT / mTOR pathway, or "mTOR pathway", is frequently deregulated in cancer cells, with deregulation Overactivation of mTOR leads to greater nutrient availability and thus allows tumor growth and survival Rapamycin is an antibiotic, originally developed for its immunosuppressive properties, and for which antitumor properties, through its inhibitory action on mTOR. have been shown to have different rapamycin analogues currently used in oncology, including everolimus and temsirolimus Clinical trials, whether or not associating mTOR inhibitors with other targeted therapy molecules or with treatments such as chemotherapy or radiotherapy, have been performed. Phase III trials have shown very promising clinical results in patients with renal cell carcinoma. The mTOR protein is therefore a particularly interesting therapeutic target and inhibition of the mTOR pathway is one of the promising anti-tumor therapeutic approaches. Moreover, since activation of the mTOR pathway is involved in hormone-resistant breast cancer, the combination of two targeted therapy molecules with different mechanisms of action, such as an inhibitor of the mTOR pathway and molecule used in hormone therapy, 3028955 2 allows to consider a possible bypass of a resistance mechanism involving one of these routes. In order to optimize clinical trials and therapeutic treatments in this field, the identification of biomarkers predictive of the sensitivity of patients to treatment comprising the administration of an mTOR inhibitory agent, used alone or in combination with other therapeutic approaches, remains an important goal for the future development of these treatments (Laplante and Sabatini, 2012, Baselga et al., 2012). It is therefore necessary to have ever more efficient methods for predicting the sensitivity of patients to such a type of treatment.
La ménine est une protéine nucléaire ubiquitaire impliquée dans de multiples interactions protéine-protéine et décrite comme un suppresseur de tumeurs contrôlant directement la croissance cellulaire dans différents organes endocrines, comme les parathyroïdes, les ilots pancréatiques et la glande pituitaire. La ménine est codée par le gène MEN1 (pour Multiple Endocrine Neoplasia, type 1). Les mutations de MEN1 prédisposent les patients à une néoplasie endocrine multiple de type 1.Menin is a ubiquitous nuclear protein involved in multiple protein-protein interactions and described as a tumor suppressor that directly controls cell growth in various endocrine organs, such as parathyroid, pancreatic islet and pituitary gland. Menin is encoded by the MEN1 gene (for Multiple Endocrine Neoplasia, type 1). Mutations in MEN1 predispose patients to multiple endocrine neoplasia type 1.
La publication de Seigne et al. (2010) enseigne que l'inactivation du gène Menl pourrait jouer un rôle dans la tumorigenèse de la prostate. La publication de Seigne et al. (2013) enseigne que le gène Men] joue un rôle dans la prédisposition des souris aux lésions mammaires précancéreuses. Ce dernier document divulgue aussi qu'une diminution de l'expression de ménine est observée dans une grande proportion chez des patientes atteintes de cancer du sein, avec 95 tumeurs sur 121 (78,5%) présentant un faible niveau d'expression de ménine. Cependant, ces documents ne divulguent pas l'altération des voies mTOR et/ou ER suite à l'inactivation de la ménine. Les inventeurs ont maintenant mis au point un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité de patients atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Ce procédé comprend la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de tumeur du patient, un niveau d'expression inférieur de ménine dans l'échantillon test par rapport à un échantillon de référence étant indicateur de la sensibilité du patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Les inventeurs ont également montré que la diminution de l'expression de ménine constitue un nouveau biomarqueur de sensibilité d'un patient à un traitement par un inhibiteur de la voie mTOR et peut donc être utilisée en tant que marqueur de sélection des patients susceptibles de bénéficier d'un traitement inhibiteur de la voie mTOR, le cas échéant en association avec un autre traitement antitumoral, tel que notamment une hormonothérapie. L'invention sera maintenant décrite de manière détaillée à l'aide d'exemples destinés à l'illustrer sans la limiter.The publication of Seigne et al. (2010) teaches that the inactivation of the Menl gene could play a role in tumorigenesis of the prostate. The publication of Seigne et al. (2013) teaches that the gene Men] plays a role in the predisposition of mice to pre-cancerous breast lesions. The latter document also discloses that a decrease in the expression of menin is observed in a large proportion in breast cancer patients, with 95 out of 121 (78.5%) tumors having a low level of menin expression. . However, these documents do not disclose the alteration of the mTOR and / or ER pathways following the inactivation of menin. The inventors have now developed an in vitro method for predicting the susceptibility of tumor patients to inhibit the mTOR pathway. This method includes determining the level of menin expression in a patient's tumor test sample, a lower level of menin expression in the test sample relative to a reference sample being indicative of the patient's sensitivity to a test sample. inhibitory treatment of the mTOR pathway. The inventors have also shown that the decrease in menin expression is a new biomarker of sensitivity of a patient to treatment with an inhibitor of the mTOR pathway and can therefore be used as a selection marker for patients likely to benefit. an inhibitor treatment of the mTOR pathway, if necessary in combination with another antitumor treatment, such as in particular hormonal therapy. The invention will now be described in detail with the aid of examples intended to illustrate it without limiting it.
3028955 3 La présente invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) La détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de 5 ladite tumeur, b) La prédiction de la sensibilité dudit patient d'après le résultat de l'étape a), un faible niveau d'expression de ménine dans l'échantillon test étant indicatif de la sensibilité dudit patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR. Selon un mode particulier de réalisation, l'invention a pour objet un procédé in vitro de 10 prédiction de la sensibilité à un traitement inhibiteur de la voie mTOR d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ou suractivée, ledit procédé comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de ladite tumeur, un faible niveau d'expression de ménine dans l'échantillon test étant indicatif de la sensibilité dudit patient à un traitement inhibiteur de la voie mTOR.The present invention relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, said method comprising the following steps: a) determining the level of expression of menin in a test sample of said tumor; b) prediction of the sensitivity of said patient according to the result of step a), a low level of menin expression in the test sample being indicative of the sensitivity of said patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway. According to a particular embodiment, the subject of the invention is an in vitro method for predicting sensitivity to an inhibitory treatment of the mTOR pathway of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated or over-activated. said method comprising determining the level of menin expression in a test sample of said tumor, wherein a low level of menin expression in the test sample is indicative of the sensitivity of said patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway.
15 Par « sensibilité d'un patient à un traitement », on entend l'observation d'un effet thérapeutique tel que l'amélioration de la survie d'un patient ayant reçu ledit traitement thérapeutique. L'absence de réponse d'un patient, ou l'absence de sensibilité du patient à un traitement thérapeutique, est au contraire définie par le terme de « résistance » d'un patient audit traitement thérapeutique, dans laquelle aucun effet thérapeutique n'est observé. Un procédé in vitro 20 de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, selon l'invention, permet de sélectionner un patient susceptible de bénéficier d'un tel traitement. Par « traitement inhibiteur de la voie mTOR » on entend l'application d'un traitement destiné à inhiber la voie de transduction comprenant la sérine/théronine kinase mTOR (mammalian 25 target of rapamycin). Par « détermination du niveau d'expression de ménine » (ou « menin » en anglais), on entend la détermination du niveau d'expression de l'ARNm ou de la protéine ménine humaine codé(e) par le gène MEN], quelle que soit l'isoforme de ménine. La protéine ménine (Référence UniProtKB/SwissProt : 000255 révisée le 11 janvier 2011) 30 comprend trois isoformes : isoforme 1 (référence 000255-1, SEQ ID N°1, 615 acides aminés), isoforme 2 (référence 000255-2, 610 acides aminés, dans laquelle les acides aminés 149-153 de la séquence en acides aminés de l'isoforme 1 sont manquants) et isoforme 3 (référence 000255-3, 575 acides aminés, dans laquelle les acides aminés 149-153 et 189-223 de la séquence de l'isoforme 1 sont manquants).By "sensitivity of a patient to a treatment" is meant the observation of a therapeutic effect such as improving the survival of a patient having received said therapeutic treatment. The absence of a patient's response, or the patient's lack of sensitivity to a therapeutic treatment, is instead defined by the term "resistance" of a patient to said therapeutic treatment, in which no therapeutic effect is observed. An in vitro method for predicting the susceptibility of a tumor-affected patient to mTOR inhibitory treatment according to the invention makes it possible to select a patient likely to benefit from such treatment. By "inhibitory treatment of the mTOR pathway" is meant the application of a treatment to inhibit the transduction pathway including serine / theronin kinase mTOR (mammalian target of rapamycin). By "determination of the expression level of menin" (or "menin" in English) is meant the determination of the level of expression of the mRNA or the human menin protein encoded by the gene MEN], which that is the isoform of menin. The menin protein (UniProtKB reference / SwissProt: 000255 revised January 11, 2011) comprises three isoforms: isoform 1 (reference 000255-1, SEQ ID No. 1, 615 amino acids), isoform 2 (reference 000255-2, 610 acids). amines, in which amino acids 149-153 of the amino acid sequence of isoform 1 are missing) and isoform 3 (reference 000255-3, 575 amino acids, in which amino acids 149-153 and 189-223 of the sequence of isoform 1 are missing).
35 Selon un mode particulier de réalisation, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie 3028955 4 mTOR, dans lequel la détermination du niveau d'expression de ménine comprend la détermination du niveau d'expression de l'ensemble des isoformes de la protéine ménine. Plus particulièrement, dans un procédé de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention la détermination du 5 niveau d'expression de la protéine ménine est réalisée quantitativement ou semi-quantitativement par tout procédé connu par l'homme du métier permettant la détection spécifique et/ou la quantification d'une protéine particulière dans un échantillon. Un tel procédé est notamment choisi parmi les procédés utilisant des anticorps liant ménine, incluant en particulier l'immunohistochimie (IHC), une détection par immunofluorescence (IF), par immuno-précipitation, par une technique 10 ELISA ou par une méthode de type western-blot. Par « immunohistochimie », on entend d'une méthode de localisation de protéines dans les cellules d'une coupe de tissu, par la détection d'un antigène particulier au moyen d'anticorps polyclonaux ou monoclonaux liant cet antigène. Le couple anticorps-antigène peut être visualisé par exemple par la conjugaison à une enzyme qui peut catalyser une réaction de production de 15 couleur, par l'utilisation d'anticorps marqués, notamment par un fluorophore, ou par l'utilisation d'anticorps dits « secondaires » capables de lier les anticorps liant l'antigène. Dans une méthode d'immunohistochimie, le tissu est placé sur un support solide. Un anticorps primaire lié à un système de détection (ou un anticorps primaire suivi d'un anticorps secondaire) est ajouté. Le signal est observé par des techniques de microscopie.According to a particular embodiment, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, in which the determination of the level of Menin expression includes determining the level of expression of all the isoforms of the menin protein. More particularly, in a method for predicting the sensitivity of a patient with a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway according to the invention, the determination of the level of expression of the menin protein is carried out quantitatively or semi-quantitatively. quantitatively by any method known to those skilled in the art for the specific detection and / or quantification of a particular protein in a sample. Such a method is especially chosen from methods using menin-binding antibodies, including in particular immunohistochemistry (IHC), immunofluorescence (IF) detection, immunoprecipitation, an ELISA technique or a western-type method. -blot. By "immunohistochemistry" is meant a method of locating proteins in the cells of a tissue section, by detecting a particular antigen by means of polyclonal or monoclonal antibodies binding that antigen. The antibody-antigen pair can be visualized for example by conjugation to an enzyme which can catalyze a color production reaction, by the use of labeled antibodies, in particular by a fluorophore, or by the use of so-called antibodies. "Secondary" capable of binding antigen-binding antibodies. In an immunohistochemical method, the tissue is placed on a solid support. A primary antibody bound to a detection system (or a primary antibody followed by a secondary antibody) is added. The signal is observed by microscopy techniques.
20 Le niveau d'expression de ménine peut être défini à l'aide d'un score histologique prenant en compte, d'une part, l'intensité de marquage observée et, d'autre part, le pourcentage de cellules marquées, ou en combinant le pourcentage de cellules marquées et l'intensité de marquage. Selon ce procédé, des sections d'échantillon tumoral sont analysées par microscopie après avoir mis en présence lesdites sections avec un anticorps liant spécifiquement ménine.The level of menin expression can be defined by means of a histological score taking into account, on the one hand, the observed labeling intensity and, on the other hand, the percentage of labeled cells, or combining the percentage of labeled cells and the intensity of labeling. According to this method, tumor sample sections are analyzed by microscopy after bringing said sections into contact with a specifically menin-binding antibody.
25 Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel la détermination du niveau d'expression de ménine comprend la détermination du pourcentage de cellules tumorales marquées. Par «faible niveau d'expression » on entend un niveau d'expression dans un tissu dans lequel le pourcentage de cellules tumorales marquées est inférieur 30 ou égal à 80% des cellules tumorales présentes dans le tissu. Un niveau d'expression élevé correspond à un tissu dans lequel le pourcentage de cellules tumorales marquées est supérieur à 80% des cellules tumorales présentes dans le tissu. De façon avantageuse, dans un procédé selon l'invention, le niveau d'expression de la protéine ménine peut être déterminé par comparaison avec le niveau d'expression de la protéine 35 ménine dans un échantillon contrôle. L'échantillon contrôle peut notamment être choisi parmi : le niveau médian d'expression de ménine dans un tissu sain, le niveau médian d'expression de 3028955 5 ménine dans un échantillon de tumeur et le niveau médian d'expression de ménine dans un échantillon de tumeur hormonodépendante choisie parmi une tumeur mammaire, une tumeur gynécologique et une tumeur de la prostate. Selon un autre mode particulier de réalisation, l'invention a pour objet un procédé in vitro 5 de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel la détermination du niveau d'expression de ménine comprend la détermination du niveau d'expression d'un ARNm codant pour la protéine ménine. Plus particulièrement, un procédé selon l'invention comprend la détermination de la quantité d'un ARNm codant pour la protéine ménine. La détermination de la quantité de l'ARNm codant pour la protéine ménine est 10 réalisée par tout procédé connu par l'homme du métier permettant la détection spécifique d'un ARNm dans un tissu. Un tel procédé comprend notamment la détection spécifique d'un ARNm à l'aide de sondes d'acide nucléique complémentaires de la séquence dudit ARNm, notamment par RT-PCR, par un procédé de type Northern-Blot ou par hybridation sur une sonde immobilisée. La PCR quantitative permet de mesurer la quantité initiale d'acide nucléique. Les acides 15 nucléiques amplifiés, et notamment les ARNm, peuvent être détectés et quantifiés par tout procédé connu par un homme du métier, tel que notamment par spectrométrie à 260 nm ou par Northern blot en utilisant un procédé d'hybridation de sondes radioactives ou fluorescentes sur l'acide nucléique amplifié. Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la 20 sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon test de tumeur, dans lequel l'échantillon test de tumeur est choisi parmi : un tissu tumoral, une pièce opératoire et une biopsie. Selon un autre aspect particulier, dans un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité 25 d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'au moins un agent choisi parmi : les inhibiteurs de la voie mTORC1, les inhibiteurs de la voie mTORC2, les inhibiteurs de la voie mTORC1 et de la voie mTORC2, les inhibiteurs de la voie PI3K/mTOR (phosphatidylinositol 3- kinase/mTOR), les inhibiteurs de la voie mTOR de nouvelle génération, les analogues de la 30 rapamycine, l'évérolimus et le temsirolimus. Selon un aspect encore plus particulier, dans un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention, ledit traitement inhibiteur de la voie mTOR est un traitement inhibiteur de la voie PI3K/mTOR. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement inhibiteur 35 de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus.According to one particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, in which the determination of the level of menin expression. comprises determining the percentage of labeled tumor cells. By "low level of expression" is meant a level of expression in tissue in which the percentage of labeled tumor cells is less than or equal to 80% of the tumor cells present in the tissue. A high expression level corresponds to a tissue in which the percentage of labeled tumor cells is greater than 80% of the tumor cells present in the tissue. Advantageously, in a method according to the invention, the level of expression of the menin protein can be determined by comparison with the level of expression of the menin protein in a control sample. The control sample may be selected from: the median level of menin expression in healthy tissue, the median level of menin expression in a tumor sample and the median level of menin expression in a sample hormonally dependent tumor selected from a mammary tumor, a gynecological tumor and a prostate tumor. According to another particular embodiment, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, in which the determination of the level of Menin expression includes determining the level of expression of an mRNA encoding the menin protein. More particularly, a method according to the invention comprises determining the amount of an mRNA encoding the menin protein. The determination of the amount of the mRNA encoding the menin protein is accomplished by any method known to those skilled in the art for the specific detection of mRNA in tissue. Such a method notably comprises the specific detection of an mRNA using nucleic acid probes complementary to the sequence of said mRNA, in particular by RT-PCR, by a Northern-Blot type method or by hybridization on an immobilized probe. . Quantitative PCR is used to measure the initial amount of nucleic acid. The amplified nucleic acids, and in particular the mRNAs, can be detected and quantified by any method known to a person skilled in the art, such as in particular by 260 nm spectrometry or by Northern blotting using a method of hybridization of radioactive or fluorescent probes. on the amplified nucleic acid. In a particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the susceptibility of a tumor patient to mTOR inhibitory therapy, including determining the level of menin expression in the tumor. a tumor test sample, wherein the tumor test sample is selected from: tumor tissue, an operative specimen, and a biopsy. In another particular aspect, in an in vitro method of predicting the susceptibility of a tumor patient to mTOR inhibitory treatment, the mTOR inhibitory treatment consists of administration of least one agent selected from: inhibitors of the mTORC1 pathway, inhibitors of the mTORC2 pathway, inhibitors of the mTORC1 and mTORC2 pathway, inhibitors of the PI3K / mTOR (phosphatidylinositol-kinase / mTOR) pathway, Next-generation mTOR pathway inhibitors, rapamycin analogs, everolimus and temsirolimus. According to an even more particular aspect, in an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway according to the invention, said inhibitor treatment of the mTOR pathway is an inhibitory treatment. PI3K / mTOR track. More particularly, in a method according to the invention, said inhibitor treatment of the mTOR pathway consists in the administration of everolimus.
3028955 6 Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, combiné à un autre traitement anti-tumoral. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement anti-tumoral est choisi parmi : l'hormonothérapie, la chimiothérapie et 5 un traitement ciblant les récepteurs aux facteurs de croissance. L'hormonothérapie peut être utilisée dans le but de diminuer les risques de récidive du cancer après la chirurgie, et peut également être utilisée pour traiter les cancers récidivants après un premier traitement antitumoral. En effet, rcestrogène favorise la croissance des cellules tumorales positives pour les récepteurs à rcestrogène (ER+).According to another particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway, combined with another antitumor treatment. More particularly, in a method according to the invention, said anti-tumor treatment is chosen from: hormone therapy, chemotherapy and a treatment targeting the growth factor receptors. Hormone therapy can be used to reduce the risk of cancer recurrence after surgery, and can also be used to treat recurrent cancers after a first antitumor treatment. In fact, rcestrogen promotes the growth of tumor cells that are positive for receptors with rcestrogen (ER +).
10 Selon un aspect encore plus particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie. Selon un aspect encore plus particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie 15 mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, ladite tumeur étant une tumeur hormonodépendante. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ladite tumeur hormono-dépendante est choisie parmi les tumeurs mammaires, les tumeurs gynécologiques et les tumeurs de la prostate. Par tumeur gynécologique on entend notamment tumeur de l'ovaire ou de l'utérus.According to a still more particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with treatment with hormone therapy. According to an even more particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, said tumor being a hormone-dependent tumor. More particularly, in a method according to the invention, said hormone-dependent tumor is selected from mammary tumors, gynecological tumors and prostate tumors. By gynecological tumor is meant in particular tumor of the ovary or uterus.
20 Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur mammaire primaire à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant la détermination du niveau d'expression de ménine. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ladite tumeur mammaire est classée ER+/HER2-. ER et HER2 sont des marqueurs conventionnels de tumeurs mammaires désignant 25 respectivement la présence de récepteurs aux oestrogenes (ER) et la surexpression, ou pas, du « Human Epidermal Growth Factor 2 (HER2/ErbB-2). Selon un aspect encore plus particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur mammaire ayant fait l'objet d'une étape de chirurgie destinée à retirer ladite tumeur.According to a particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a primary mammary tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, said method comprising determining the level of menin's expression. More particularly, in a method according to the invention, said mammary tumor is classified ER + / HER2-. ER and HER2 are conventional markers of mammary tumors respectively denoting the presence of estrogen receptors (ER) and overexpression, or not, of the Human Epidermal Growth Factor 2 (HER2 / ErbB-2). According to a still more particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a mammary tumor having undergone a surgical step intended to remove said tumor.
30 Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, ledit patient n'ayant pas reçu de traitement par hormonothérapie préalablement au procédé selon l'invention. Selon un autre aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction 35 de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, ledit patient ayant reçu un traitement par 3028955 7 hormonothérapie préalablement au procédé selon l'invention. Plus particulièrement, ledit patient a reçu un traitement par hormonothérapie préalablement au procédé selon l'invention et présente une résistance audit traitement par hormonothérapie. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration d'un traitement choisi 5 parmi : au moins un agent anti-oestrogène, au moins un agent anti-aromatase, et au moins un agent anti-oestrogène et au moins un agent anti-aromatase. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration d'au moins un agent anti-oestrogène choisi parmi : les SERM (pour Selective Estrogen Receptor Modulators), les SERD (pour Selective Estrogen Receptor Degradation), le tamoxifène, le toremifène et le fulvestrant.According to another particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, said patient not being have not received treatment with hormone therapy prior to the method according to the invention. According to another particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, said patient having received treatment with hormone therapy prior to the process according to the invention. More particularly, said patient has received a hormone therapy treatment prior to the method according to the invention and has a resistance to said hormone therapy treatment. More particularly, in a method according to the invention, said hormone therapy treatment consists of the administration of a treatment chosen from: at least one anti-estrogen agent, at least one anti-aromatase agent, and at least one anti-anti-aromatase agent; estrogen and at least one anti-aromatase agent. More particularly, in a method according to the invention, said hormone therapy treatment consists of the administration of at least one anti-estrogen agent chosen from: SERMs (for Selective Estrogen Receptor Modulators), SERDs (for Selective Estrogen Receptor Degradation) ), tamoxifen, toremifene and fulvestrant.
10 Selon un aspect particulier, l'invention a pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène. Selon un autre aspect particulier, l'invention a également pour objet un procédé in vitro de 15 prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus et ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène. L'invention a également pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un 20 patient atteint d'une tumeur mammaire à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus et ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène. L'invention a également pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un 25 patient atteint d'une tumeur mammaire à un traitement inhibiteur de la voie mTOR, dans lequel le traitement inhibiteur de la voie mTOR consiste en l'administration d'évérolimus et ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration de tamoxifène, et caractérisé en ce que ledit patient présente une résistance à un premier traitement par hormonothérapie. L'invention a également pour objet un procédé in vitro de prédiction de la sensibilité d'un 30 patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, dans lequel ledit traitement par hormonothérapie consiste en l'administration d'au moins un agent anti-aromatase. Plus particulièrement, dans un procédé selon l'invention, ledit agent anti-aromatase est choisi parmi : le létrozole, l'anastrozole et l'exémestane. L'invention a également pour objet une composition comprenant un agent inhibiteur de la 35 voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur, ladite utilisation comprenant - 3028955 8 a) La sélection d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle l'expression de ménine est faible b) L'administration audit patient d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent inhibiteur de la voie mTOR.According to a particular aspect, the subject of the invention is an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a treatment with hormone therapy, wherein said treatment with Hormone therapy is the administration of tamoxifen. According to another particular aspect, the invention also relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with treatment with hormone therapy, in which the inhibitory treatment of the mTOR pathway is the administration of everolimus and said hormone therapy treatment is the administration of tamoxifen. The invention also relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient with a mammary tumor to an inhibitory treatment of the mTOR pathway combined with a hormone therapy treatment, wherein the inhibitor treatment of the pathway mTOR is the administration of everolimus and said hormone therapy is the administration of tamoxifen. The invention also relates to an in vitro method for predicting the sensitivity of a patient with a mammary tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway, wherein the mTOR inhibitor treatment consists of the administration of everolimus and said treatment with hormone therapy consists of the administration of tamoxifen, and characterized in that said patient has a resistance to a first treatment by hormone therapy. The invention also relates to an in vitro method for predicting the susceptibility of a tumor-affected patient to mTOR inhibitory therapy in combination with hormone therapy, wherein said hormone therapy treatment comprises administration of at least one anti-aromatase agent. More particularly, in a process according to the invention, said anti-aromatase agent is chosen from: letrozole, anastrozole and exemestane. The subject of the invention is also a composition comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient having a tumor, said use comprising: a) selection of a patient suffering from a tumor in which the expression of menin is weak b) The administration to said patient of a therapeutically effective amount of an inhibitor agent of the mTOR pathway.
5 Plus particulièrement, l'invention a également pour objet une composition comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR, pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ladite utilisation comprenant la sélection d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle l'expression de ménine est faible, et l'administration audit patient d'une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent inhibiteur de la voie mTOR.More particularly, the subject of the invention is also a composition comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway, for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said use comprising the selection a patient with a tumor in which menin expression is low, and administering to said patient a therapeutically effective amount of an inhibitor agent of the mTOR pathway.
10 Plus particulièrement encore, dans une composition comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur, selon l'invention, ladite tumeur est une tumeur mammaire ou une tumeur de la prostate, plus particulièrement une tumeur mammaire primaire, et encore plus particulièrement une tumeur mammaire définie comme ER+.Even more particularly, in a composition comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor, according to the invention, said tumor is a mammary tumor or a tumor of the prostate, more particularly a primary mammary tumor, and even more particularly a mammary tumor defined as ER +.
15 Selon un aspect particulier, dans une composition selon l'invention comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ladite tumeur a fait l'objet d'une première étape de chirurgie destinée à retirer ladite tumeur. Selon un aspect particulier, dans une composition selon l'invention comprenant un agent 20 inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée' ledit agent inhibiteur de la voie mTOR est l'évérolimus. Selon un autre aspect particulier, dans une composition selon l'invention comprenant un agent inhibiteur de la voie mTOR pour une utilisation dans le traitement d'un patient atteint d'une tumeur dans laquelle la voie mTOR est dérégulée, ledit agent inhibiteur de la voie mTOR est 25 administré en combinaison avec un traitement par hormonothérapie. La présente invention a également pour objet un procédé in vitro d'identification d'une tumeur susceptible de répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR, ledit procédé comprenant les étapes suivantes : a) La détermination du niveau d'expression de ménine dans un échantillon de tumeur 30 préalablement prélevé sur un patient, b) L'identification de ladite tumeur comme susceptible de répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR, si le niveau d'expression de ménine dans ladite tumeur est faible. Plus particulièrement, dans un procédé d'identification d'une tumeur susceptible de 35 répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention, ladite tumeur est une tumeur mammaire, plus particulièrement ladite tumeur est une 3028955 9 tumeur mammaire définie comme ER+. Encore plus particulièrement, dans un procédé d'identification d'une tumeur susceptible de répondre à un traitement comprenant l'administration d'un agent inhibiteur de la voie mTOR selon l'invention, ledit traitement comprend l'administration d'un traitement inhibiteur de la voie mTOR en combinaison avec un traitement par 5 hormonothérapie. L'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR.According to one particular aspect, in a composition according to the invention comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said tumor has made the subject of a first surgical step for removing said tumor. According to a particular aspect, in a composition according to the invention comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said pathway inhibiting agent mTOR is everolimus. According to another particular aspect, in a composition according to the invention comprising an inhibitor agent of the mTOR pathway for use in the treatment of a patient suffering from a tumor in which the mTOR pathway is deregulated, said pathway inhibiting agent mTOR is administered in combination with hormone therapy. The present invention also relates to an in vitro method for identifying a tumor capable of responding to a treatment comprising the administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway, said method comprising the following steps: a) the determination of the expression level of menin in a tumor sample previously taken from a patient; b) identification of said tumor as likely to respond to treatment comprising administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway, if the level of of menin expression in said tumor is low. More particularly, in a method of identifying a tumor capable of responding to a treatment comprising the administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway according to the invention, said tumor is a mammary tumor, more particularly said tumor is a mammary tumor defined as ER +. Even more particularly, in a method of identifying a tumor capable of responding to a treatment comprising the administration of an inhibitor agent of the mTOR pathway according to the invention, said treatment comprises the administration of an inhibitor treatment of the mTOR pathway in combination with hormone therapy. The subject of the invention is also the use of menin as a biomarker for predicting the susceptibility of a tumor patient to an inhibitory treatment of the mTOR pathway.
10 Selon un aspect particulier, l'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie. Selon un aspect particulier, l'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un 15 traitement inhibiteur de la voie /mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie. Selon un autre aspect particulier, l'invention a également pour objet l'utilisation de ménine en tant que biomarqueur pour la prédiction de la sensibilité d'un patient atteint d'une tumeur à un traitement inhibiteur de la voie mTOR combiné à un traitement par hormonothérapie, en combinaison avec l'utilisation d'au moins un autre biomarqueur choisi parmi les récepteurs aux 20 oestrogènes, le récepteur à la progestérone et le GATA3. Listage de séquences : SEQ ID N°1 : isoforme 1 de ménine, référence UniProtKB/SwissProt : 000255-1 révisée le 11 janvier 2011. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaissent dans les exemples et figures suivants : 25 BREVE DESCRIPTION DES FIGURES Figure 1 : La probabilité de survie des patients est représentée en fonction du temps (TTP, time to progression, en mois). La courbe en pointillés représente les patients ayant un faible taux de 30 ménine, la courbe continue représente les patients ayant un taux normal de ménine. Figures 2A et 2B : Activation de la S6K1 dans la ligné MCF7 stimulée par l'insuline et le sérum. Figure 2A : La forme phosphorylée de la S6K1 a été détectée par western blot à partir des d'échantillons extraits protéiques obtenus des cellules MCF7 à 5, 10, 30 minutes, et à 1, 2, 4, 6 et 24 heures après une stimulation à l'insuline 100nM. La migration de protéines a été effectuée sur un 35 gel de SDS-PAGE à 10%. Les anticorps primaires ont été utilisé aux concentrations suivantes : 1/50 000 pour l'actine et 1/ 1 000 pour S6K1 phosphorylée, et l'anticorps secondaire au 1/10 000.According to one particular aspect, the invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a treatment with hormone therapy. In a particular aspect, the invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the sensitivity of a tumor patient to an inhibitory treatment of the / mTOR pathway combined with a treatment. by hormone therapy. According to another particular aspect, the invention also relates to the use of menin as a biomarker for predicting the sensitivity of a patient suffering from a tumor to an inhibitor treatment of the mTOR pathway combined with a treatment with hormone therapy, in combination with the use of at least one other biomarker selected from estrogen receptors, progesterone receptor and GATA3. SEQ ID NO: 1: Menin isoform 1, reference UniProtKB / SwissProt: 000255-1 revised January 11, 2011. Other features and advantages of the invention appear in the following examples and figures: BRIEF DESCRIPTION FIGURES Figure 1: The probability of survival of patients is represented as a function of time (TTP, time to progression, in months). The dotted line represents patients with low menin, the continuous curve represents patients with normal menin. Figures 2A and 2B: Activation of S6K1 in MCF7 line stimulated by insulin and serum. Figure 2A: The phosphorylated form of S6K1 was detected by western blot from protein extract samples obtained from MCF7 cells at 5, 10, 30 minutes, and at 1, 2, 4, 6 and 24 hours after stimulation. with insulin 100nM. Protein migration was performed on a 10% SDS-PAGE gel. The primary antibodies were used at the following concentrations: 1: 50,000 for actin and 1: 1,000 for phosphorylated S6K1, and the secondary antibody at 1: 10,000.
3028955 10 Deux isoformes de la S6K1 phosphorylées, p75 et p85, ont été révélées. Figure 2B : La S6K1 phorphorylée a été détectée par western blot à partir des d'échantillons extraits protéiques obtenus des cellules MCF7 après une stimulation du sérum à 10% pendant 30 minutes. Figures 3A à 3C : Effets de l'expression réduite de ménine sur l'activation de la voie mTORC1.Two isoforms of phosphorylated S6K1, p75 and p85, were revealed. Figure 2B: Phorphorylated S6K1 was detected by western blot from protein extract samples obtained from MCF7 cells after 10% serum stimulation for 30 minutes. Figures 3A-3C: Effects of reduced menin expression on activation of the mTORC1 pathway.
5 Les formes phosphorylées de la S6K1 et de la S6RP ont été analysées par western blot à partir des extraits protéiques obtenus des cellules MCF7 (Fig.Phosphorylated forms of S6K1 and S6RP were analyzed by western blot from protein extracts obtained from MCF7 cells (Fig.
3A) et T47D (Fig.3A) and T47D (Fig.
3B) transfectées par Si-Contrôles ou Si-MEN1 et traitées ou non par l'insuline et par Rad 001. Fig.3B) transfected with Si-Controls or Si-MEN1 and treated or not with insulin and Rad 001. FIG.
3C. Les analyses des formes phosphorylées de la S6K1 ont été également effectuées dans les cellules MCF7 stimulées ou non par le sérum.3C. The phosphorylated forms of S6K1 were also assayed in MCF7 cells stimulated or not by serum.
10 Figure 4 : Analyse par immunohistochimie montrant l'augmentation de la phosphorylation de la S6K1 et S6RP dans les insulinomes déficients en Men] . Les images représentatives de l'IHC en utilisant les anticorps contre la S6K1 (en bas) et de la S6RP (en haut) sur les pancréas issus des souris contrôles (Men1F/FRipCre) et des souris mutantes PMen1 (Men1F/FRipCre+).Figure 4: Immunohistochemistry analysis showing increased phosphorylation of S6K1 and S6RP in Men1-deficient insulinomas. Representative images of IHC using antibodies against S6K1 (bottom) and S6RP (top) on pancreas from control mice (Men1F / FRipCre) and mutant mice MEN1 (Men1F / FRipCre +).
15 EXEMPLES Exemple 1 : Etude TAMRAD L'étude TAMRAD (Bachelot et al., 2012) est une étude multicentrique de phase II randomisée évaluant la tolérance et l'efficacité du tamoxifène seul versus association tamoxifène20 rad001 (évérolimus), chez les patientes atteintes de cancer du sein métastatique résistant aux antiaromatases. Les patientes incluses étaient ménopausées, avec un adénocarcinome mammaire histologiquement prouvé, ayant reçu en lère ou 2ème ligne une hormonothérapie en situation métastatique et ayant reçu un traitement par anti-aromatase en situation adjuvante ou métastatique, 25 avec des récepteurs hormonaux positifs aux oestrogènes et/ou à la progestérone et ne surexprimant pas HER2 et n'ayant pas reçu de traitement antérieur par tamoxifène sauf en situation adjuvante et arrêté au moins un an avant la rechute métastatique Des patientes en première rechute métastatique après traitement par anti-aromatase ont été randomisées dans deux bras de traitement : Tamoxifène seul (20 mg/jour) versus Tamoxifène (20 30 mg/jour) + Evérolimus (Rad001) (10 mg/jour). Exemple 2 : Analyse par immuno-histochimie de l'expression de ménine sur tissu fixé L'expression de ménine a été analysée par IHC sur tissu fixé, en utilisant les anticorps antiménine (Cat Num A300-105A, BL342, Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA), selon le 35 protocole décrit dans Seigne et al., 2010. Ces anticorps polyclonaux ont été obtenus en utilisant un peptide synthétique représentant une portion de la protéine codée par l'exon 10 de Multiple 3028955 11 Endocrine Neoplasia humaine (Menl, Locus Link ID 4221) et après purification des anticorps sur un support solide sur laquelle le peptide a été immobilisé. Des sections de tumeurs primaires de patients inclus dans l'étude TAMRAD ont été récupérées. Les tumeurs du sein incluses dans la paraffine ont été sectionnées, avec une épaisseur 5 de 4 microns. Brièvement, après inactivation de la péroxydase endogène, le démasquage des antigènes (« antigen retrieval ») et la dilution des anticorps (DAKO, Capintaria, CA, USA), les sections ont été incubées pendant la nuit avec les anticorps primaires. Après l'incubation avec l'anticorps secondaire correspondant (Vector Lab, 1 :200), le signal a été amplifié à l'aide du kit ABC 10 Vectastain elite (Vector Lab) et révélé avec les DAB (Vector Lab). Dans toutes les analyses, le contrôle en absence d'anticorps primaire a été systématiquement inclus pour éliminer le marquage non spécifique dû aux anticorps secondaires. Les anticorps primaires utilisés sont les anticorps antiménine (Cat Num A300-1015A, BL342, anticorps polyclonal de lapin, Bethyl Laboratories, dilution 1 :2000). L'étape de démasquage des antigènes n'a pas été effectuée pour la détection de 15 l'hormone de croissance et la prolactine. Dans chaque cas, le pourcentage de cellules tumorales dont le noyau est marqué est déterminé, et les tumeurs ont été réparties en deux groupes : faible expression lorsque moins de 80%, ou 80%, des cellules sont marquées, et forte expression lorsque plus de 80% des cellules sont marquées.EXAMPLES Example 1: TAMRAD Study The TAMRAD study (Bachelot et al., 2012) is a randomized phase II multicenter study evaluating the safety and efficacy of tamoxifen alone versus the combination of tamoxifen20 rad001 (everolimus), in patients with metastatic breast cancer resistant to antiaromatases. The included patients were postmenopausal, with a histologically proven mammary adenocarcinoma, who received, in the first or second line, metastatic hormone therapy and received anti-aromatase treatment in an adjuvant or metastatic setting, with estrogen-positive hormone receptors and / or or with progesterone and not overexpressing HER2 and having not received previous treatment with tamoxifen except in adjuvant situation and stopped at least one year before metastatic relapse. Patients in first metastatic relapse after anti-aromatase treatment were randomized to two treatment arms: Tamoxifen alone (20 mg / day) versus Tamoxifen (20 mg / day) + Everolimus (Rad001) (10 mg / day). Example 2: Immunohistochemical Analysis of Menin Expression on Tissue Fixed Menin expression was analyzed by IHC on fixed tissue, using the anti-menin antibodies (Cat Nos. A300-105A, BL342, Bethyl Laboratories, Montgomery, TX, USA), according to the protocol described in Seigne et al., 2010. These polyclonal antibodies were obtained using a synthetic peptide representing a portion of the protein encoded by the exon 10 of Multiple Human Endocrine Neoplasia (Menl , Locus Link ID 4221) and after purification of the antibodies on a solid support on which the peptide has been immobilized. Primary tumor sections of patients included in the TAMRAD study were retrieved. Breast tumors included in the paraffin were sectioned, with a thickness of 4 microns. Briefly, after inactivation of endogenous peroxidase, antigen retrieval and antibody dilution (DAKO, Capintaria, CA, USA), the sections were incubated overnight with primary antibodies. After incubation with the corresponding secondary antibody (Vector Lab, 1: 200), the signal was amplified using the ABC 10 Vectastain elite kit (Vector Lab) and revealed with the DABs (Vector Lab). In all assays, control in the absence of primary antibody was systematically included to eliminate non-specific labeling due to secondary antibodies. The primary antibodies used are the anti-menin antibodies (Cat Num A300-1015A, BL342, rabbit polyclonal antibody, Bethyl Laboratories, dilution 1: 2000). The antigen unmasking step was not performed for the detection of growth hormone and prolactin. In each case, the percentage of tumor cells whose nucleus is labeled is determined, and the tumors were divided into two groups: low expression when less than 80%, or 80%, of the cells are labeled, and strong expression when more than 80% of the cells are labeled.
20 Analyse statistique La probabilité de survie (Time To Progression, ou TTP) a été définie à partir de la date de randomisation des patients jusqu'à la date de la première progression documentée ou du décès due au cancer, estimée selon la méthode de Kaplan-Meier. Les courbes de survie ont été comparées en utilisant le test log-rank. Les modèles de régression proportionnelle de hasards Cox ont été utilisés 25 pour estimer la proportion dûe au hasard (Hazard Ratios). Les analyses statistiques ont été réalisées en utilisant SAS 9.3 (SAS Institute, CaryNC). Conclusion Dans l'analyse des biomarqueurs associés à la restauration de l'hormonosensibilité, il est montré qu'un faible taux d'expression de ménine dans la tumeur mammaire est associé à une 30 meilleure survie sans rechute dans le bras Tamoxifène + Everolimus (traitement TamRad) (Figure 1, courbe en pointillés) indiquant une restauration de l'hormonosensibilité c'est-à-dire une meilleure réponse à l'addition d'Everolimus au Tamoxifène. Exemple 3 : Analyse de l'interaction fonctionnelle et physique entre ménine et mTORC1.Statistical Analysis The Time To Progression (TTP) was defined from the date of randomization of patients to the date of the first documented progression or death due to cancer, estimated using the Kaplan method. -Meier. Survival curves were compared using the log-rank test. Cox random proportional regression models were used to estimate the hazard ratio (Hazard Ratios). Statistical analyzes were performed using SAS 9.3 (SAS Institute, CaryNC). Conclusion In the analysis of biomarkers associated with the restoration of hormonosensitivity, it is shown that a low level of menin expression in the breast tumor is associated with a better relapse-free survival in the Tamoxifen + Everolimus arm (treatment TamRad) (Figure 1, dashed line) indicating a restoration of hormone sensitivity, that is, a better response to the addition of Everolimus to Tamoxifen. Example 3: Analysis of the functional and physical interaction between menin and mTORC1.
35 Les données décrites dans l'exemple 1 et l'exemple 2 suggèrent que la diminution de l'expression de ménine dans les cancers du sein favoriserait l'activation de la voie mTORC1. Pour 3028955 12 confirmer cette hypothèse et disséquer l'action de ménine sur la voie mTORC1, des analyses ont été effectuées afin de révéler les effets de la diminution de l'expression de ménine sur la voie mTORC1 dans des modèles cellulaires et murins. 3.1. Matériels et méthodes 5 Lignées cellulaires MCF7 (Michigan Cancer Fondation-7) et T47D, toutes deux dérivées de métastases pleurales de cancer du sein, sont des lignées humaines ayant des caractéristiques de l'épithélium mammaire luminal. Ces cellules ont été maintenues dans le milieu DMEM complet composé de milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM, Gibco) supplémenté avec 10% de sérum bovin 10 foetal (FBS) (de Biowhittaker) et de la pénicilline streptomycine (P / S) solution (100 unités / ml pénicilline, 100 lag / ml de streptomycine, Gibco), à 37 ° C, dans un incubateur avec 5% CO2. Stimulation des cellules par l'insuline et le sérum Les cellules ont été incubées tout d'abord dans un milieu sans sérum pendant 24h avant la stimulation, puis, traitées avec 100 nM d'insuline (Sigma) dans du milieu sans sérum avec des 15 durées différentes, respectivement pour 0 ', 5', 10 ', 30', lh, 2h, 4h, 6h et 12h. La stimulation par le sérum à 10% a été réalisée avec le même procédé. Traitement des cellules par Evérolimus (RAD001) Cellules ont été tout d'abord incubées dans un milieu sans sérum pendant 24h avant stimulation par l'insuline Les cellules ont été traitées, avec Evérolimus (RAD001, SIGMA- 20 ALDRICH, 20 nM) ou d'un véhicule (diméthylsulfoxyde, DMSO) dans du milieu sans sérum pendant une heure. Ensuite, les cellules ont été traitées avec 100 nM d'insuline et 20 nM Evérolimus (RAD001) pendant une heure dans du milieu sans sérum. Transfection par Si-RNA Des cellules ont été ensemencées à 500.000 cellules / puit dans des plaques à 6 puits et 25 cultivées dans du DMEM complet pendant 24 h. Les cellules ont été transfectées avec le Si-RNA contrôle à 100 nmol / 1 (contrôle négatif, de faible complexité de GC, INVITROGEN), ou avec le siRNA ciblant le transcrit du gène MEN1 humain (Si-MEN1 hsl 106 468, Invitrogen) à 100 nmol / 1, en utilisant les réactifs de transfection DharmaFECT (Thermo Scientific) dans le milieu sans sérum, sans P/S pendant 48h.The data described in Example 1 and Example 2 suggest that the decrease in menin expression in breast cancers would promote activation of the mTORC1 pathway. To confirm this hypothesis and dissect the meninic action on the mTORC1 pathway, assays were performed to reveal the effects of decreased menin expression on the mTORC1 pathway in mouse and murine models. 3.1. Materials and Methods MCF7 (Michigan Cancer Foundation-7) and T47D cell lines, both derived from breast cancer pleural metastases, are human lines with features of the luminal mammary epithelium. These cells were maintained in complete DMEM medium consisting of Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM, Gibco) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) (Biowhittaker) and penicillin streptomycin (P / S) solution (100 units / ml penicillin, 100 μg / ml streptomycin, Gibco), at 37 ° C, in an incubator with 5% CO2. Stimulation of cells with insulin and serum Cells were first incubated in serum-free medium for 24 hours prior to stimulation and then treated with 100 nM insulin (Sigma) in serum-free medium with 15 μl of insulin and serum. different durations, respectively for 0 ', 5', 10 ', 30', 1h, 2h, 4h, 6h and 12h. Stimulation with 10% serum was performed with the same method. Treatment of cells with Everolimus (RAD001) Cells were first incubated in serum free medium for 24 hours prior to insulin stimulation. The cells were treated with Everolimus (RAD001, SIGMA-ALDRICH, 20 nM) or a vehicle (dimethylsulfoxide, DMSO) in serum-free medium for one hour. Then the cells were treated with 100 nM insulin and 20 nM Everolimus (RAD001) for one hour in serum-free medium. Si-RNA transfection Cells were inoculated at 500,000 cells / well in 6-well plates and cultured in complete DMEM for 24 h. The cells were transfected with the Si-RNA control at 100 nmol / l (negative control, low complexity GC, INVITROGEN), or with the siRNA targeting the human MEN1 gene transcript (Si-MEN1 hsl 106 468, Invitrogen) at 100 nmol / l, using DharmaFECT transfection reagents (Thermo Scientific) in serum-free media, without P / S for 48h.
30 Préparation des extraits protéiques Pour préparer des extraits totaux de protéines, les cellules ont été lavées avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) et lysées dans un tampon contenant du PBS sans Ca2 + et Mg2 +, deoxychlorate de sodium à 0,5%, 1% NP40, 0,1% de SDS et du cocktail des inhibiteurs de protéases et phosphatases (100 nM Na3VO4, 500 nM NaF, 100 nM Na pyropohosphate, 10 nM 35 PiC). Les échantillons ont été bouillis dans un tampon SDS-échantillon (lameli) pendant 5 min à 95 ° C avant l'analyse sur l'immunoblot.Preparation of Protein Extracts To prepare total protein extracts, the cells were washed with phosphate buffered saline (PBS) and lysed in a buffer containing PBS without Ca2 + and Mg2 +, 0.5 sodium deoxychlorate %, 1% NP40, 0.1% SDS and the cocktail of protease inhibitors and phosphatases (100 nM Na3VO4, 500 nM NaF, 100 nM Na pyropohosphate, 10 nM 35 PiC). Samples were boiled in SDS-sample buffer (lameli) for 5 min at 95 ° C prior to immunoblot analysis.
3028955 13 Immunoblotting Les extraits protéiques ont été séparés sur des gels SDS-PAGE à 8%, et transférés sur des membranes PVDF (Polyvinylidene fluoride). Les membranes ont été saturées avec l'albumine bovine de sérum à 5% dilué dans du PBS avec 0,3 % de Tween 20 pendant 1 heure, et ensuite 5 lavées trois fois (10 minutes chacun) avec de la PBS + 0,3 % de Tween 20. Membranes ont été incubées avec les anticorps primaires suivants pendant une nuit à 4°C : anti-ménine (1 : 8000, lapin Acm, Bethyl), anti-phospho-S6K1 (1:4000, Thr389, 108D2, CellSignaling), anti-phospho-AKT (1:4000, Ser473, CellSignaling), anti-phospho-S6-protéine ribosomique (1:2000, Ser2351236, D57.2.2E, CellSignaling) , anticorps polyclonaux anti-topoisomérase 1 (1:1000, BD Pharmingen).Immunoblotting Protein extracts were separated on 8% SDS-PAGE gels, and transferred to PVDF (Polyvinylidene fluoride) membranes. The membranes were saturated with 5% serum bovine serum albumin diluted in PBS with 0.3% Tween 20 for 1 hour, and then washed three times (10 minutes each) with PBS + 0.3. Tween 20. Membranes were incubated with the following primary antibodies overnight at 4 ° C: anti-menin (1: 8000, rabbit Acm, Bethyl), antiphospho-S6K1 (1: 4000, Thr389, 108D2, CellSignaling), anti-phospho-AKT (1: 4000, Ser473, CellSignaling), anti-phospho-S6-ribosomal protein (1: 2000, Ser2351236, D57.2.2E, CellSignaling), polyclonal anti-topoisomerase 1 antibodies (1: 1000, BD Pharmingen).
10 Les membranes ont été ensuite lavées trois fois avec une solution saline tamponnée au Tris (TBS) avec 0,3 % de Tween 20 (10 minutes chacun), et incubés avec des anticorps secondaires conjugués à la peroxydase (CellSignaling) pendant 1 h à température ambiante. Les protéines ont été visualisées selon le protocole du fabricant. 3.2. Résultats expérimentaux 15 1.1 Activation de la voie mTORC1 dans les cellules mammaires par l'insuline et le sérum Pour mieux comprendre l'activation de la voie mTORC1, il est nécessaire de déterminer la cinétique de cette activation par différents stimuli dans les cellules à étudier. La cinétique de l'activation de la voie mTORC1 par l'insuline, dans les cellules MCF7 a été évaluée en analysant les formes phosphorylées de S6K1, une des cibles les plus connues de la 20 voie mTORC1, par western blot. Par rapport au contrôle des dépôts protéiques, une augmentation de l'intensité des bandes correspondant aux iso-formes de la S6k1 a été observée dès 5 minutes (5'). Cette augmentation s'est poursuivie pour atteindre un plateau à 2 heures (2h) (Fig.The membranes were then washed three times with Tris-buffered saline (TBS) with 0.3% Tween 20 (10 minutes each), and incubated with peroxidase-conjugated secondary antibodies (CellSignaling) for 1 hr. ambient temperature. Proteins were visualized according to the manufacturer's protocol. 3.2. Experimental Results 1.1 Activation of the mTORC1 pathway in mammary cells by insulin and serum To better understand the activation of the mTORC1 pathway, it is necessary to determine the kinetics of this activation by different stimuli in the cells to be studied. The kinetics of activation of the mTORC1 pathway by insulin in MCF7 cells was assessed by analyzing the phosphorylated forms of S6K1, one of the most well-known targets of the mTORC1 pathway, by western blotting. In comparison with the control of protein deposits, an increase in the intensity of the bands corresponding to the iso-forms of S6k1 was observed as early as 5 minutes (5 '). This increase continued to reach a plateau at 2 o'clock (2h) (Fig.
2A). Un résultat similaire a été obtenu dans les cellules T47D (Figure 3B). L'activation de la voie mTORC1 par le sérum à 10% dans les cellules MCF7 a été également déterminée (Fig.2A). A similar result was obtained in T47D cells (Figure 3B). Activation of the mTORC1 pathway by 10% serum in MCF7 cells was also determined (Fig.
2B). 25 1.2 Effet de ménine sur l'activation de la voie mTORC1 dans les cellules mammaires Inhibition de l'expression de ménine par l'interférence d'ARN Les cellules ont été transfectées soit par Si-Contrôles, soit par Si-MEN1 , puis stimulées à l'insuline 100 nM pendant 40 minutes avant la récolte de cellules. Les analyses en western blot ont montré qu'une diminution de ménine en présence de Si MENT a été détectée, avec et sans 30 stimulation à l'insuline, avec une efficacité satisfaisante (Fig.2B). 1.2 Effect of menin on the activation of the mTORC1 pathway in mammary cells Inhibition of menin expression by RNA interference The cells were transfected either by Si-Controls or by Si-MEN1 and then stimulated to insulin 100 nM for 40 minutes before cell harvest. Western blot analyzes showed that a reduction of menin in the presence of Si MENT was detected, with and without insulin stimulation, with satisfactory efficacy (Fig.
3A à 3C). Augmentation de la phosphorylation de S6K1 et de S6RP après l'inactivation de ménine Les mêmes expériences ont permis d'analyser, dans les cellules MCF7 (Fig.3A to 3C). Increased phosphorylation of S6K1 and S6RP after menin inactivation The same experiments were used to analyze in MCF7 cells (Fig.
3A) et T47D (Fig.3A) and T47D (Fig.
3B), la phosphorylation de la S6K1 et celle de sa cible S6RP sous les influences, d'une part de l'expression de ménine, et d'autre part de la stimulation par l'insuline ou par le sérum. Il a été 35 démontré qu'en présence de la stimulation de l'insuline, une nette augmentation de l'intensité de deux isoformes phosphorylées de la S6K1 peut être observée dans les cellules traitées par Si MENT 3028955 14 par rapport aux celles traitées par Si-contrôles. Parallèlement, il a été observé que les cellules MCF7 transférées par Si MENT présentent une expression plus importante des formes phosphorylées de la S6K1 après une stimulation par le sérum à 10% (Fig.3B), the phosphorylation of S6K1 and that of its target S6RP under the influences, on the one hand, of the expression of menin, and on the other hand of stimulation by insulin or serum. It has been demonstrated that in the presence of insulin stimulation, a marked increase in the intensity of two phosphorylated isoforms of S6K1 can be observed in cells treated with Si MENT compared to those treated with Si -Controls. At the same time, it was observed that the Si MENT-transferred MCF7 cells showed greater expression of phosphorylated forms of S6K1 after 10% serum stimulation (Fig.
3C). II. Activation de la voie mTORC1 dans les cellules beta pancréatiques murines déficientes en 5 Men] Les tissus pancréatiques issus de 2 souris contrôles (Men1F/FCre) et 3 souris mutantes ont été analysés pour le gène Men] spécifique des cellules beta pancréatiques (Men1F/F Cre+ , ou /Ment) âgées de 12 mois. Les résultats ont montré une très faible expression de S6K1 phosphorylée dans des ilots issus de souris contrôles, le marquage étant cytoplasmique et diffus de 10 façon homogène dans les ilots. Par contre, il a été observé un marquage largement plus fort de la S6K1 phosphorylée dans les ilots pancréatiques issus de souris /Ment du même âge (Figure 3, rangée du bas). On peut observer un marquage essentiellement cytoplasmique, avec une répartition peu homogène. La forme phosphorylée de la protéine S6RP, la protéine cible principale de la S6K1, a 15 également été analysée dans les tissus pancréatiques issus de 3 souris contrôles Men1F/FCre- et 6 souris f3Menl, âgées de 12 mois. Les analyses des immunohistochimies (IHC) obtenues ont montré une très faible expression, majoritairement cytoplasmique de la S6RP phosphorylée dans les ilots issus des souris contrôles. Par contre, dans les îlots issus de souris mutantes, il a été observé une augmentation importante de l'expression de S6RP phosphorylée (Fig. 2, rangée en haut), le 20 marquage étant essentiellement cytoplasmique et diffus. III. Conclusions Ces études expérimentales ont pu mettre en évidence que la diminution d'expression de ménine dans les cellules humaines cancéreuses mammaires conduit à une augmentation considérable du niveau de phosphorylation de la protéine S6K1 et de sa cible S6RP, connue pour 25 être parmi les principaux effecteurs de la voie mTORC1. REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 30 - Bachelot et al., "Randomized Phase II trial of Everolimus in combination with taoxifen in patients with hormone-receptor positive, HER2 negative metastatic breast cancer with prion exprosure to aromatase inhibitors: a GINECO study", J. Clin. Oncol., May 7. - Baselga et al., (2012), « Everolimus in postmenopausal hormone-receptor-positive advanced breast cancer », N. Engl. J. Med., 366, 520-529. 35 - Laplante M. Sabatini DM. (2012), « mTOR signaling in growth control and disease » Cell, 49(2) :274-93. 3028955 15 - Seigne C. et al. (2010), "Characterization of prostate cancer lesions in heterozygous Men] mutant mice" BMC Cancer, 10 : 395. - Seigne C. et al. (2013), "High incidence of mammary intraepithelial neoplasia development in Men] -disrupted mucine mammary glands", J. Pathol., 229: 546-558.3C). II. Activation of the mTORC1 pathway in pancreatic beta cells deficient in 5 Men] Pancreatic tissues from 2 control mice (Men1F / FCre) and 3 mutant mice were analyzed for the gene Men] specific for pancreatic beta cells (Men1F / F Cre +, or / Ment) 12 months old. The results showed a very weak expression of phosphorylated S6K1 in islets from control mice, the labeling being cytoplasmic and homogeneously diffused in the islets. In contrast, much stronger labeling of phosphorylated S6K1 in pancreatic islets from mice / mice of the same age was observed (Figure 3, bottom row). It is possible to observe an essentially cytoplasmic marking with a poor homogeneous distribution. The phosphorylated form of the S6RP protein, the main target protein of S6K1, was also analyzed in pancreatic tissues from 3 control mice Men1F / FCre- and 6 mouse f3Men1, 12 months old. Immunohistochemistry (IHC) analyzes obtained showed a very weak expression, predominantly cytoplasmic of phosphorylated S6RP in the islets from the control mice. On the other hand, in the islets from mutant mice, there was a significant increase in phosphorylated S6RP expression (Fig. 2, top row), the labeling being essentially cytoplasmic and diffuse. III. Conclusions These experimental studies have been able to demonstrate that the reduction of menin expression in human breast cancer cells leads to a considerable increase in the level of phosphorylation of the S6K1 protein and its target S6RP, known to be among the main effectors. of the mTORC1 pathway. BIBLIOGRAPHIC REFERENCES 30 - Bachelot et al., "Randomized Phase II trial of Everolimus in combination with taoxifen in patients with hormone-receptor positive, HER2 negative metastatic breast cancer with prion exprosure to aromatase inhibitors: a GINECO study", J. Clin. Oncol., May 7. - Baselga et al., (2012), "Everolimus in postmenopausal hormone-receptor-positive advanced breast cancer," N. Engl. J. Med., 366, 520-529. 35 - Laplante M. Sabatini DM. (2012), "mTOR signaling in growth control and disease" Cell, 49 (2): 274-93. Seigne C. et al. (2010), "Characterization of prostate cancer lesions in heterozygous men" mutant mice "BMC Cancer, 10: 395. - Seigne C. et al. (2013), "High incidence of mammary intraepithelial neoplasia development in Men] -disrupted mucin mammary tassels", J. Pathol., 229: 546-558.
Claims (2)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1461510A FR3028955B1 (en) | 2014-11-26 | 2014-11-26 | METHOD FOR PREDICTING THE SENSITIVITY OF A PATIENT TO INHIBITORY TREATMENT OF THE MTOR PATH |
| PCT/FR2015/053217 WO2016083741A1 (en) | 2014-11-26 | 2015-11-26 | Method for predicting the sensitivity of a patient to treatment using mtor pathway inhibitors |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1461510A FR3028955B1 (en) | 2014-11-26 | 2014-11-26 | METHOD FOR PREDICTING THE SENSITIVITY OF A PATIENT TO INHIBITORY TREATMENT OF THE MTOR PATH |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR3028955A1 true FR3028955A1 (en) | 2016-05-27 |
| FR3028955B1 FR3028955B1 (en) | 2016-12-16 |
Family
ID=52824329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR1461510A Expired - Fee Related FR3028955B1 (en) | 2014-11-26 | 2014-11-26 | METHOD FOR PREDICTING THE SENSITIVITY OF A PATIENT TO INHIBITORY TREATMENT OF THE MTOR PATH |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR3028955B1 (en) |
| WO (1) | WO2016083741A1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006122053A2 (en) * | 2005-05-09 | 2006-11-16 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Biomarkers for evaluating likelihood of tumor sensitivity to an mtor inhibitor |
| WO2007130590A2 (en) * | 2006-05-04 | 2007-11-15 | The Regents Of The University Of California | Men1 is a marker and therapeutic target for breast and prostate cancer |
| WO2012094401A2 (en) * | 2011-01-04 | 2012-07-12 | The Johns Hopkins University | Genes frequently altered in pancreatic neuroendocrine tumors |
-
2014
- 2014-11-26 FR FR1461510A patent/FR3028955B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2015
- 2015-11-26 WO PCT/FR2015/053217 patent/WO2016083741A1/en not_active Ceased
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006122053A2 (en) * | 2005-05-09 | 2006-11-16 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Biomarkers for evaluating likelihood of tumor sensitivity to an mtor inhibitor |
| WO2007130590A2 (en) * | 2006-05-04 | 2007-11-15 | The Regents Of The University Of California | Men1 is a marker and therapeutic target for breast and prostate cancer |
| WO2012094401A2 (en) * | 2011-01-04 | 2012-07-12 | The Johns Hopkins University | Genes frequently altered in pancreatic neuroendocrine tumors |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR3028955B1 (en) | 2016-12-16 |
| WO2016083741A1 (en) | 2016-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Le Page et al. | BMP-2 signaling in ovarian cancer and its association with poor prognosis | |
| Kikuchi et al. | Minichromosome maintenance (MCM) protein 4 as a marker for proliferation and its clinical and clinicopathological significance in non-small cell lung cancer | |
| JP2010536367A5 (en) | ||
| Ambrosio et al. | Glucose impairs tamoxifen responsiveness modulating connective tissue growth factor in breast cancer cells | |
| US20130324617A1 (en) | Crown-like structures as a biomarker for cancer risk and cancer prognosis | |
| Miyashita et al. | Investigation of FOXM1 as a potential new target for melanoma | |
| JP2006500946A (en) | Diagnostic method of testicular seminoma | |
| Box et al. | High alpha-methylacyl-CoA racemase (AMACR) is associated with ERG expression and with adverse clinical outcome in patients with localized prostate cancer | |
| Wu et al. | mTOR activation initiates renal cell carcinoma development by coordinating ERK and p38MAPK | |
| US20180207234A1 (en) | Inhibition of cancer growth and metastasis | |
| Bai et al. | Exo-miR-1290-induced by COX-2 overexpression promotes cancer-associated fibroblasts activation and tumor progression by CUL3-Nrf2 pathway in lung adenocarcinoma | |
| JP2017006117A (en) | Bard1 isoform and the use thereof in pulmonary cancer and colorectal cancer | |
| Yin et al. | Association of PKCζ expression with clinicopathological characteristics of breast cancer | |
| Li et al. | Energy stress-activated AMPK phosphorylates Snail1 and suppresses its stability and oncogenic function | |
| US10203330B2 (en) | Methods and materials for identifying and treating mammals having lung adenocarcinoma characterized by neuroendocrine differentiation | |
| FR3028955A1 (en) | METHOD FOR PREDICTING THE SENSITIVITY OF A PATIENT TO INHIBITORY TREATMENT OF THE MTOR PATH | |
| Krishna et al. | Expression pattern and clinical significance of beta 2-adrenergic receptor in oral squamous cell carcinoma: an emerging prognostic indicator and future therapeutic target | |
| KR102006999B1 (en) | A composition for diagnosing colon cancer metastasis or predicting the same, and use thereof | |
| Lin et al. | Phosphorylation determines the glucose metabolism reprogramming and tumor-promoting activity of sine oculis homeobox 1 | |
| WO2009033293A1 (en) | Protein tyrosine phosphatase 1b and cancer | |
| Matsushita et al. | The level of RECQL1 expression is a prognostic factor for epithelial ovarian cancer | |
| Lin et al. | Differential expression of Wnt pathway genes in sporadic hepatocellular carcinomas infected with hepatitis B virus identified with OligoGE arrays | |
| JP5798916B2 (en) | Treatment prediction related to HMGCR protein | |
| WO2016042237A1 (en) | Combined use of a trka inhibitor and an epha2 inhibitor for using in the treatment of solid cancers, and method for the prognosis of survival of a patient who has a solid cancer | |
| WO2015110759A1 (en) | Novel method for screening for prostate cancer |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 2 |
|
| PLSC | Publication of the preliminary search report |
Effective date: 20160527 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 3 |
|
| ST | Notification of lapse |
Effective date: 20180731 |