FR3015484A1

FR3015484A1 - Proteines recombinantes possedant une activite de facteur h

Info

Publication number: FR3015484A1
Application number: FR1363351A
Authority: FR
Inventors: Toufik Abache
Original assignee: LFB SA
Current assignee: LFB SA
Priority date: 2013-12-20
Filing date: 2013-12-20
Publication date: 2015-06-26
Also published as: CA2934558A1; WO2015092335A2; JP2017500049A; JP2020014468A; EP3083664A2; US20170190753A1; WO2015092335A3

Abstract

L'invention concerne une protéine recombinante possédant une activité de facteur H.

Description

PROTEINES RECOMBINANTES POSSEDANT UNE ACTIVITE DE FACTEUR H L'invention concerne une protéine recombinante possédant une activité de facteur H. Arrière plan de l'invention: Le facteur H est une protéine plasmatique de 155 kDa dont la fonction principale est la régulation de l'activité du complément induite par la voie alterne. Le facteur H est constitué de 20 domaines répétés SCR (Short Consensus Repeats) (également appelés CCP ou SHUSHI) d'environ 60 acides aminés liés entre eux par une courte séquence linker de 3 à 8 acides aminés. Les domaines SCR1-4 portent l'activité d'accélération de la dissociation des C3 et C5 convertases et l'activité de régulation du facteur I qui permet l'inactivation de la protéine C3b. Ces domaines N-terminaux sont suffisants pour réguler l'activité de la C3 convertase en phase liquide, mais les domaines SCR19-20 sont nécessaires à l'activité du facteur H à la surface des cellules. Les autres domaines SCR du Facteur H peuvent également contribuer plus ou moins directement à l'activité du facteur H, certains contenants des sites de liaisons pour d'autres molécules telles que les héparanes sulfates et les glycosaminoglycannes, les pentraxines (CRP, PTX3), la fibromoduline ou le malondialdéhyde. Certains de ces domaines contiennent également des sites de glycosylations qui peuvent contribuer à la demi-vie de la molécule et à l'efficacité de sa production sous forme recombinante, d'autres pourraient avoir un rôle important pour la conformation tridimensionnelle du facteur H, comme par exemple les domaines SCR12, SCR13, SCR14 qui confèrent au facteur H un repliement particulier en forme d'épingle à cheveux (hairpin) (Schmidt et al, J Mol Biol. 2010 January 08; 395(1): 105-122). Le facteur H est un facteur thérapeutique prometteur pour le traitement de nombreuses maladies liées à des dépôts dense de C3 ou à une activation du complément ou une inflammation incontrôlée. Cependant, dans certaines indications telles que la DMLA (Dégénérescence Maculaire Liée à l'Age), la GNMP de type 2 (GloméruloNéphrite Membrano-Proliférative), le SHU atypique (Syndrome Hémorragique Urémique) ou certaines maladies auto-immunes, l'utilisation du facteur H pourrait être une molécule thérapeutique prometteuse. Cependant, la présence d'anticorps dirigés contre le FH, la capacité de, liaison du FH à des pathogènes permettant leur échappement immunitaire (S.pneumoniae, N.meningitidis,...) peuvent être limitant dans l'usage de cette molécule. Ces inconvénients peuvent être supprimés, tout en conservant les propriétés intrinsèques au FH, par la construction d'une protéine ayant perdu les domaines SCR impliqués dans ces activités immunogènes et/ou de protection des bactéries. Un dérivé du facteur H combinant les domaines SCR1 à SCR4 aux domaines SCR19 et SCR20 du facteur H (Hebecker et al, Journal of Immunology 2013, June 10, publié en ligne) a été proposé. Dans ce dérivé du facteur H construit pour diriger l'activité du facteur H à la surface des cellules, les deux domaines de régulation du complément et de reconnaissance de surfaces sont liés entre eux par les 6 acides aminés naturels trouvés entre la quatrième cystéine du domaine SCR4 et la première cystéine du domaine SCR19. Cependant d'autres domaines du facteur H pourraient être également nécessaire pour obtenir une efficacité thérapeutique supérieure à celle du facteur H, tel par exemple pour obtenir une meilleure liaison aux cellules, pour préserver ou augmenter la demi-vie du FH ou pour conserver ou favoriser le repliement caractéristique du FH en épingle à cheveu. Il existe donc un besoin de molécules dérivées du facteur H présentant un avantage par rapport au facteur H ou ne présentant pas les inconvénients du facteur H et dont l'activité serait améliorée. Résumé de l'invention: La demanderesse répond ici à ce besoin en proposant des protéines recombinantes dérivées du facteur H présentant un réarrangement du nombre et de l'organisation des domaines SCR du facteur H qui conservent une activité de facteur H. Les protéines recombinantes selon l'invention comprennent à minima les domaines SCR1-4 (SCR1, SCR2, SCR3 et SCR4, dans cet ordre), SCR19 et SCR20 du facteur H. Un objet de l'invention concerne donc une protéine recombinante possédant une activité de facteur H, comprenant, de l'extrémité N-terminale à l'extrémité C-terminale, une première séquence d'acides aminés comprenant au moins les domaines SCR1 à SCR4 du facteur H, et une deuxième séquence d'acides aminés comprenant au moins les domaines SCR19 et SCR20 du facteur H, ladite protéine recombinante n'étant pas un facteur H naturel, et sous réserve que si la première séquence est constituée des domaines SCR1 à SCR4 et la deuxième séquence est constituée des domaines SCR19 et SCR20, le linker soit un linker synthétique. L'invention a également pour objet un acide nucléique codant une protéine recombinante selon l'invention, un vecteur comprenant un tel acide nucléique, une cellule hôte comprenant un tel acide nucléique ou un tel vecteur et un animal transgénique dont le génome comprend un tel acide nucléique.

L'invention a également pour objet une protéine recombinante selon l'invention, pour le traitement de maladies dues à une inflammation incontrôlée ou un dépôt de C3 convertase incontrôlé. Plus généralement la protéine recombinante selon l'invention peut-être utile pour le traitement de toute maladie pour laquelle une activité anti-complément du facteur H est bénéfique. Description détaillée de l'invention: Dans un mode de réalisation, la présente invention concerne une protéine recombinante dérivée du facteur H présentant un réarrangement des domaines SCR, tant sur le plan de leur nombre que de leur organisation, ladite protéine recombinante comprenant, dans cet ordre, une première séquence en acides aminés comprenant les domaines SCR1-4 du facteur H et une deuxième séquence en acides aminés comprenant les domaines SCR19 et SCR20 du facteur H. La première et/ou la deuxième séquence en acides aminés peuvent en outre comprendre un ou plusieurs autres domaines SCR de facteur H réarrangés Dans un mode de réalisation, un ou plusieurs domaines SCR du facteur H peut être présent en plusieurs exemplaires. Par exemple, une protéine recombinante selon l'invention peut inclure un, deux, trois, ou plus de trois exemplaires d'un même SCR, par exemple un, deux, trois ou plus de trois exemplaires du domaine SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6, SCR7, SCR8, SCR9, SCR10, SCR11, SCR12, SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et/SCR20 du facteur H. Selon un mode particulier de réalisation, la protéine recombinante selon l'invention comprend un, deux, trois ou plus de trois exemplaires du domaine SCR7 du facteur H, en particulier du domaine SCR7 du variant Y402 du facteur H. Une autre variante inclut une protéine recombinante comprenant de multiples exemplaires d'un ensemble de domaines SCR. Par exemple, la protéine recombinante selon l'invention peut comprendre un, deux, trois ou plus de trois répétitions des domaines SCR1 à SCR4, c'est-à-dire que la protéine comprend le motif (SCR1-SCR4)', n étant un entier égal à 1, 2, 3 ou supérieur à 3, en particulier n étant égal à 1, 2 ou 3. Dans un autre mode de réalisation, le domaine ou l'ensemble de domaines présents en plusieurs exemplaires ne sont pas des répétitions des domaines ou ensemble de domaines, mais peuvent être présents dans la protéine recombinante séparés par d'autres domaines SCR. En d'autres termes, l'invention concerne notamment des protéines recombinantes comprenant, dans cet ordre, les domaines SCR1-SCR4, SCR7, SCR7 et SCR19-SCR20, ou encore les domaines SCR1-SCR4, SCR7, SCR1-SCR4, et SCR19-20, ou toute autre combinaison possible de ces domaines.

Le facteur H dont est dérivée la protéine selon l'invention peut être tout facteur H dont l'activité est celle du facteur H naturel. En particulier, par "facteur H" on entend ici toute protéine ayant la séquence en acides aminés du facteur H natif humain ou provenant d'une autre espèce (par exemple bovin, porcin, canin, murin). Préférentiellement, la protéine recombinante est dérivée du facteur H humain. Le terme comprend également tout recombinant, dérivé ou mutant ayant une séquence substantiellement homologue au facteur H natif. L'expression "séquence substantiellement homologue" comprend toute séquence soumise à une ou plusieurs substitutions, additions et/ou délétions, de préférence conservatives. Les expressions "substitutions, additions et/ou délétions conservatives" expriment tout remplacement, ajout ou suppression de résidu acide aminé par un autre, sans altération majeure de la conformation générale et/ou de l'activité biologique du facteur H. La substitution conservative inclut, sans s'y limiter, le remplacement par un acide aminé ayant des propriétés similaires (comme par exemple la forme, la polarité, le potentiel de liaison hydrogène, l'acidité, la basicité, l'hydrophobicité et autres). Les acides aminés ayant des propriétés similaires sont bien connus dans l'art. Le terme "facteur H" comprend en outre les variations alléliques naturelles et/ou les isoformes du facteur H trouvées naturellement chez les individus d'une même espèce, et toute forme ou degré de glycosylation ou autre modification post-traductionnelle. Sont aussi compris dans le terme "facteur H" les homologues ou dérivés du facteur H qui présentent la même activité, ou une activité biologique supérieure par rapport a l'activité de la forme sauvage et/ou qui présentent une identité de séquence d'au moins 80 %, de préférence au moins 85 %, de préférence encore d'au moins 90 %, de préférence encore au moins 95 %, de préférence encore au moins 98 %, de préférence encore au moins 99 %. Le variant du facteur H utilisé pour concevoir la protéine recombinante de la présente invention peut notamment être un variant mentionné dans le site internet http://www.uniprot. org/uniprot/P08603. L'activité anti-complément du facteur H se traduit par la régulation de la voie alterne du complément en maintenant un niveau basal de molécule C3b. Le facteur H compète avec le facteur B pour la liaison au C3b et accélère la dissociation de la C3 convertase (C3bBb) alterne déjà formée. Il agit comme cofacteur du Facteur I dans la protéolyse du C3b, libre ou lié à la surface des cellules, qui conduit à la forme inactive C3bi. Ainsi, les complexes immuns composés d'un complexe antigène-anticorps associé au composant du complément C3b ou les facteurs activateurs de la voie alterne du complément (surfaces bactériennes, cellules infectées, levures, parasites, lipopolysaccharides, endotoxines) ne peuvent plus activer la cascade subséquente du complément (composants C5-C9). Le terme "activité biologique" du facteur H inclut donc ici la capacité à inhiber la C3 convertase et/ou à servir de co-facteur du Facteur I, résultant en l'inhibition de l'activation de la cascade du complément. Dans un mode de réalisation particulier, la protéine recombinante conserve l'activité biologique d'un facteur H humain plasmatique. L'activité biologique du facteur H humain plasmatique comprend la régulation de l'activité du facteur I, l'inhibition de la formation de la C3 convertase alterne et l'accélération de la dissociation de la C3 convertase. Les méthodes pour déterminer les activités biologiques ci-dessus sont connues de l'homme du métier. Dans un mode de réalisation plus particulier, ladite protéine recombinante conserve l'activité biologique d'un facteur H humain plasmatique pour accélérer la dissociation de la C3 convertase. La quantité de C3 convertase dissociée peut être déterminée en fonction de la concentration de protéine recombinante ajoutée. L'IC50 est déterminée à partir de l'équation calculée pour une sigmoïde à pente variable. Dans un autre mode de réalisation plus particulier, ladite protéine recombinante conserve l'activité biologique d'un facteur H plasmatique pour réguler l'activité du facteur I. Par ailleurs, l'activité biologique de facteur H peut être évaluée en mesurant l'activité de protection des globules rouges contre la lyse par le complément selon des procédures bien connues dans l'état de la technique. La séquence SEQ ID NO:1 représente la séquence en acides aminés du variant Y402 du facteur H humain dans lequel l'acide aminé en position 402 est une tyrosine. Cette séquence ne comprend pas de peptide signal. La séquence SEQ ID NO:2 représente la séquence en acides aminés du variant H402 du facteur H humain dans lequel l'acide aminé en position 402 est une histidine. Cette séquence ne comprend pas de peptide signal. Dans un mode de réalisation, un ou plusieurs domaines SCR de la protéine recombinante selon l'invention sont dérivés de l'un ou l'autre de ces deux variants. Selon un mode particulier de réalisation, la protéine recombinante comprend le domaine SCR7 du variant Y402 du facteur H. Selon des variantes de ce mode de réalisation, la première séquence de la protéine recombinante comprend les domaines SCR1 à SCR7, les domaines SCR1 à SCR8 ou les domaines SCR1 à SCR9 du facteur H, le domaine SCR7 dans cette première séquence étant le domaine SCR7 du variant Y402 du facteur H. Dans ces variantes de réalisation, les autres domaines SCR peuvent être dérivés du variant Y402 du facteur H ou d'un autre variant du facteur H. Par ailleurs, la première séquence peut notamment être combinée à une deuxième séquence en acides aminés comprenant les domaines SCR19 et SCR20, SCR18 à SCR20, SCR17 à SCR20 ou SCR16 à SCR20 du facteur H, la seconde séquence en acides aminés étant en particulier dérivée du variant Y402 ou du variant H402 du facteur H. Ces protéines recombinantes incluent le polymorphisme Y402 présent dans le SCR7. Dans un mode de réalisation, la protéine recombinante selon l'invention comprend, dans cet ordre, les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR19 et SCR20 du facteur H. Dans ce mode de réalisation, les domaines SCR4 et SCR19 sont liés entre eux par un linker non naturel (ou synthétique) constitué d'une séquence comprenant entre 2 et 20 acides aminés. Par « linker non naturel (ou synthétique) » on désigne notamment un linker qui ne correspond pas à la séquence trouvée entre la quatrième cystéine du domaine SCR4 et la première cystéine du domaine SCR19. En particulier, la séquence en acide aminés du linker est choisie de telle manière qu'elle soit codée par un acide nucléique qui, lorsqu'il est introduit dans un vecteur de clonage et/ou d'expression, comprend un site unique de restriction (voir ci-dessous). Par exemple, le linker peut être de séquence GASG (SEQ ID NO:3). Selon un mode de réalisation, la première ou la deuxième séquence en acides aminés de la protéine recombinante selon l'invention comprend un ou plusieurs domaines SCR du facteur H supplémentaires choisi(s) parmi les domaines SCR5, SCR6, SCR7, SCR8, SCR9, SCR10, SCR11, SCR12, SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17 et SCR18. L'ordre de ces domaines dans la protéine recombinante peut correspondre à l'ordre des mêmes domaines dans le facteur H naturel. Alternativement, l'ordre des domaines peut être différent de celui du facteur H naturel. La séquence en acides aminés du domaine SCR1 (acides aminés 21 à 80) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 4 (CNELPPRRNTEILTGSW SDQTYPEGTQAIYKCRPGYRSLGNVIMVCRKGEWVALNPL RKC). La séquence du domaine SCR1 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:4. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR1 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 4. La séquence en acides aminés du domaine SCR2 (acides aminés 85 à 141) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 5 (C GHP GD TPF GTF TL TGGNVFEYGVKAVYTCNEGYQLL GEINYRECD TD GW TNDIPIC ). La séquence du domaine SCR2 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:5. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR2 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 5. La séquence en acides aminés du domaine SCR3 (acides aminés 146 à 205) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 6 (CLPVTAPENGKIVS SAMEPDREYHF GQAVRFVCNSGYKIEGDEEMHC SDDGFW SKE KPKC). La séquence du domaine SCR3 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:6. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR3 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 6. La séquence en acides aminés du domaine SCR4 (acides aminés 210 à 262) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 7 (CK SPDVINGSPI SQKIIYKENERF QYKCNMGYEYSERGDAVC TES GWRPLP SC). La séquence du domaine SCR4 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:7. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR4 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 7. La séquence en acides aminés du domaine SCR5 (acides aminés 266 à 320) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 8 (CDNPYIPNGDYSPLRIKHRTGDEITYQCRNGFYPATRGNTAKCT STGWIPAPRC). La séquence du domaine SCR5 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:8. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR5 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 8. La séquence en acides aminés du domaine SCR6 (acides aminés 325 à 385) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 9 (CDYPDIKHGGLYHENMRRPYFPVAVGKYYSYYCDEHFETP SGS YWDHIHC TQDGW SPAVPC). La séquence du domaine SCR6 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:9. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR6 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 9. La séquence en acides aminés du domaine SCR7 (acides aminés 389 à 442) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 10 (CYFPYLENGYNQNYGRKFVQGK SIDVACHPGYALPKAQTTVTCMENGWSPTPRC). La séquence du domaine SCR7 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:10. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR7 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 10. La séquence en acides aminés du domaine SCR8 (acides aminés 448 à 505) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 11 (CSKS SIDIENGFISESQYTYALKEKAKYQCKLGYVTADGET SGSITCGKDGWSAQPTC ). La séquence du domaine SCR8 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:11. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR8 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 11. La séquence en acides aminés du domaine SCR9 (acides aminés 509 à 564) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 12 (CDIPVFMNARTKNDFTWFKLNDTLDYECHDGYESNTGSTTGSIVCGYNGWSDLPIC) . La séquence du domaine SCR9 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:12. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR9 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 12. La séquence en acides aminés du domaine SCR10 (acides aminés 569 à 623) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 13 (CELPKIDVHLVPDRKKDQYKVGEVLKF SCKPGF TIVGPNSVQCYHFGL SPDLPIC). La séquence du domaine SCR10 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:13. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR10 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 13.

La séquence en acides aminés du domaine SCR11 (acides aminés 630 à 674) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 14 (C GPPPELLNGNVKEKTKEEYGH SEVVEYYCNPRFLMKGPNKIQ CVD GEW T TLPVC) . La séquence du domaine SCR11 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:14. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR11 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 14. La séquence en acides aminés du domaine SCR12 (acides aminés 691 à 744) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 15 (CGDIPELEHGWAQLS SPPYYYGDSVEFNCSESFTMIGHRSITCIHGVWTQLPQC). La séquence du domaine SCR12 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:15. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR12 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 15. La séquence en acides aminés du domaine SCR13 (acides aminés 753 à 803) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 16 (CK S SNLIILEEHLKNKKEFDHNSNIRYRCRGKEGWIHTVCINGRWDPEVNC). La séquence du domaine SCR13 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:16. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR13 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 16. La séquence en acides aminés du domaine SCR14 (acides aminés 811 à 864) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 17 (CPPPPQIPNSHNMTTTLNYRDGEKVSVLCQENYLIQEGEEITCKDGRWQ SIPLC). La séquence du domaine SCR14 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:17. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR14 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 17. La séquence en acides aminés du domaine SCR15 (acides aminés 869 à 926) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 18 (CSQPPQIEHGTINS SRS SQESYAHGTKL SYTCEGGFRISEENETTCYMGKW S SPPQC). La séquence du domaine SCR15 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:18. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR15 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 18. La séquence en acides aminés du domaine SCR16 (acides aminés 931 à 984) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 19 (CK SPPEI SHGVVAHM SD S YQYGEEVTYKCFEGF GIDGPAIAKCLGEKW SHPP SC). La séquence du domaine SCR16 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:19. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR16 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 19. La séquence en acides aminés du domaine SCR17 (acides aminés 989 à 1043) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 20 (CL SLP SFENAIPMGEKKDVYKAGEQVTYTCATYYKMDGASNVTCINSRWTGRPTC). La séquence du domaine SCR17 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:20. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR17 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 20. La séquence en acides aminés du domaine SCR18 (acides aminés 1048 à 1102) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 21 (CVNPPTVQNAYIVSRQMSKYP SGERVRYQCRSPYEMFGDEEVMCLNGNWTEPPQC) . La séquence du domaine SCR18 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:21. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR18 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 21. La séquence en acides aminés du domaine SCR19 (acides aminés 1109 à 1163) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 22 (CGPPPPIDNGDITSFPLSVYAPAS SVEYQCQNLYQLEGNKRITCRNGQWSEPPKC). La séquence du domaine SCR19 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:22. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR18 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 22. La séquence en acides aminés du domaine SCR20 (acides aminés 1167 à 1231) du variant Y402 du facteur H humain est représentée par la séquence SEQ ID NO: 23 (CVISREIMENYNIALRWTAKQKLY SRTGESVEFVCKRGYRL S SR SHTLRT TCWD GKL EYPTCAKR). La séquence du domaine SCR18 introduit dans la protéine selon l'invention a au moins 85 %, notamment au moins 90 %, notamment au moins 95 %, notamment au moins 99 % d'identité avec la séquence SEQ ID NO:23. Dans un mode de réalisation, la séquence du domaine SCR20 introduit dans la protéine selon l'invention est celle représentée dans la séquence SEQ ID NO: 23. Dans un mode de réalisation, la première ou la deuxième séquence en acides aminés comprend au moins les domaines SCR12, SCR13 et SCR14 du facteur H. Dans un autre mode de réalisation, aucun des domaines SCR12, SCR13 et SCR14 n'est présent dans la protéine recombinante selon l'invention. Une variante de réalisation de la présente invention concerne une protéine recombinante dont les domaines SCR sont constitués, dans cet ordre, des domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR12, SCR13, SCR14, SCR19 et SCR20. Une telle protéine est représentée dans la séquence SEQ ID NO : 142. Chaque domaine SCR inclus dans la première ou la deuxième séquence en acides aminés peut être lié au(x) SCR contigu(s) au moyen du linker naturel trouvé entre lesdits domaines SCR, le cas échéant. Alternativement, le linker entre chaque domaine SCR de la protéine recombinante peut être un linker non naturel. Le linker non naturel peut être constitué d'une séquence comprenant entre 2 et 20 acides aminés, notamment entre 3 et 8 acides aminés. Par ailleurs, la liaison entre la première et la deuxième séquence en acides aminés peut être réalisée au moyen d'un linker naturel ou synthétique présent en position C-terminale de la première séquence en acides aminées ou en position N-terminale de la deuxième séquence en acides aminés. Par exemple, le premier et le deuxième polypeptide peuvent être liés par un linker de séquence GASG (SEQ ID NO:3). Par ailleurs, la première et la deuxième séquences en acides aminés peuvent être liées entre elles par un linker combinant la séquence linker naturelle suivant le dernier domaine de la première séquence (i.e. le domaine en position C-terminale de la première séquence) et un linker synthétique tel que le linker GASG. Les linkers naturels trouvés en position C-terminale de chacun des domaines SCR du facteur H sont par exemple: QKRP (SEQ ID NO:143) pour le domaine SCR1; EVVK (SEQ ID NO:144) pour le domaine SCR2; VEIS (SEQ ID NO:145) pour le domaine SCR3; EEKS (SEQ ID NO:146) pour le domaine SCR4; TLKP (SEQ ID NO:147) pour le domaine SCR5; LRK pour le domaine SCR6; IRVKT (SEQ ID NO:148) pour le domaine SCR7; IKS pour le domaine SCR8; YERE (SEQ ID NO:149) pour le domaine SCR9; KEQVQS (SEQ ID NO:150) pour le domaine SCR10; IVEEST (SEQ ID NO:151) pour le domaine SCR11; VAIDKLKK (SEQ ID NO:152) pour le domaine SCR12; SMAQIQL (SEQ ID NO:153) pour le domaine SCR13; VEKIP (SEQ ID NO:154) pour le domaine SCR14; EGLP (SEQ ID NO:155) pour le domaine SCR15; IKTD (SEQ ID NO:156) pour le domaine SCR16; RDTS (SEQ ID NO:157) pour le domaine SCR17; KDSTGK (SEQ ID NO:158) pour le domaine SCR18; LHP pour le domaine SCR19. Selon un mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3 et SCR4 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4 et SCR5 du facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5 et SCR6 du facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6 et SCR7 du facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6, SCR7 et SCR8 du facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6, SCR7, SCR8 et SCR9 du facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6, SCR7, SCR8, SCR9 et SCR10 du facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6, SCR7, SCR8, SCR9, SCR10 et SCR11 facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6, SCR7, SCR8, SCR9, SCR10, SCR11 et SCR12 facteur H.

Selon un autre mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend les domaines SCR1, SCR2, SCR3, SCR4, SCR5, SCR6, SCR7, SCR8, SCR9, SCR10, SCR11, SCR12 et SCR13 facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR12, SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR11, SCR12, SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR10, SCR11, SCR12, SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR9, SCR10, SCR11, SCR12, SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la deuxième séquence en acides aminés comprend les domaines SCR8, SCR9, SCR10, SCR11, SCR12, SCR13, SCR14, SCR15, SCR16, SCR17, SCR18, SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un autre mode de réalisation, la protéine recombinante possédant une activité de facteur H comprend les première et deuxième séquences en acides aminés listées dans le tableau 1 ci- dessous, ces séquences étant séparées par un linker, notamment un linker artificiel, en particulier le linker GASG (SEQ ID NO:3). Tableau 1 Première séquence Deuxième séquence SCR1 à SCR4 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR16 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR15 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR14 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR13 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR12 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR11 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR10 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR9 à SCR20 SCR1 à SCR4 SCR8 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR16 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR15 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR14 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR13 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR12 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR11 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR10 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR9 à SCR20 SCR1 à SCR7 SCR8 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR16 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR15 à SCR20 Première séquence Deuxième séquence SCR1 à SCR8 SCR14 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR13 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR12 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR11 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR10 à SCR20 SCR1 à SCR8 SCR9 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR16 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR15 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR14 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR13 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR12 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR11 à SCR20 SCR1 à SCR9 SCR10 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR16 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR15 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR14 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR13 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR12 à SCR20 SCR1 à SCR10 SCR11 à SCR20 SCR1 à SCR11 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR11 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR11 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR11 SCR16 à SCR20 Première séquence Deuxième séquence SCR1 à SCR11 SCR15 à SCR20 SCR1 à SCR11 SCR14 à SCR20 SCR1 à SCR11 SCR13 à SCR20 SCR1 à SCR11 SCR12 à SCR20 SCR1 à SCR12 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR12 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR12 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR12 SCR16 à SCR20 SCR1 à SCR12 SCR15 à SCR20 Première séquence Deuxième séquence SCR1 à SCR12 SCR14 à SCR20 SCR1 à SCR12 SCR13 à SCR20 SCR1 à SCR13 SCR19 à SCR20 SCR1 à SCR13 SCR18 à SCR20 SCR1 à SCR13 SCR17 à SCR20 SCR1 à SCR13 SCR16 à SCR20 SCR1 à SCR13 SCR15 à SCR20 SCR1 à SCR13 SCR14 à SCR20 Selon un mode de réalisation, la première séquence en acides aminés comprend un peptide signal (PS) en position N-terminale. Le peptide signal peut être le peptide signal naturel du facteur H (MRLLAKIICLMLWAICVA - SEQ ID NO:24), le peptide signal d'une protéine différente du facteur H, ou un peptide signal décrit dans la demande PCT/2001/050544, notamment le peptide MRWSWIFLLLLSITSANA (SEQ ID NO: 25; ou autrement appelé PS-MB7 par la suite). Le peptide signal naturel d'une protéine différente du facteur H humain peut être un peptide signal choisi parmi les peptides signaux de toutes les protéines qui sont sécrétées chez les eucaryotes et notamment chez les mammifères et plus particulièrement chez l'homme comme ceux des immunoglobulines, des facteurs de croissance comme l'EPO, des hormones comme l'insuline, des enzymes comme le trypsinogène, des facteurs de la coagulation tel que la prothrombine. La présence d'un peptide signal permet de conférer une meilleure sécrétion de protéine recombinante dans le milieu de culture. Selon un mode de réalisation, l'invention concerne l'un des peptides du tableau 1 dans lequel la première séquence en acides aminés comprend en N-terminal un tel peptide signal, notamment le peptide naturel du facteur H de séquence SEQ ID NO:24 ou le peptide signal PS-MB7 de séquence SEQ ID NO:25. Selon un autre mode de réalisation, la protéine recombinante selon l'invention est choisie parmi l'une des protéines du tableau 1, les première et deuxième séquences étant séparées par un linker, notamment un linker GASG (SEQ ID NO:3). Selon un mode particulier de réalisation, la protéine recombinante selon l'invention est choisie parmi l'une des protéines listées dans le tableau 2 ci-dessous dans lesquelles la première séquence en acides aminés comprend un peptide signal de séquence SEQ ID NO: 25 et les première et seconde séquences sont séparées par un linker de séquence GASG (SEQ ID NO:3). Tableau 2 SEQ ID Première séquence linker Deuxième séquence NO: 26 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR19 à SCR20 27 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR16 à SCR20 28 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR15 à SCR20 29 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR14 à SCR20 30 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR13 à SCR20 31 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR12 à SCR20 32 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR11 à SCR20 33 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR10 à SCR20 34 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR9 à SCR20 35 PS-MB7 + SCR1 à SCR4 GASG SCR8 à SCR20 36 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR19 à SCR20 37 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR16 à SCR20 38 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR15 à SCR20 39 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR14 à SCR20 40 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR13 à SCR20 41 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR12 à SCR20 42 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR11 à SCR20 43 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR10 à SCR20 44 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR9 à SCR20 45 PS-MB7 + SCR1 à SCR7 GASG SCR8 à SCR20 46 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR19 à SCR20 47 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR16 à SCR20 48 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR15 à SCR20 49 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR14 à SCR20 50 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR13 à SCR20 51 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR12 à SCR20 52 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR11 à SCR20 53 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR10 à SCR20 54 PS-MB7 + SCR1 à SCR8 GASG SCR9 à SCR20 55 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR19 à SCR20 56 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR16 à SCR20 57 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR15 à SCR20 58 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR14 à SCR20 59 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR13 à SCR20 60 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR12 à SCR20 61 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR11 à SCR20 62 PS-MB7 + SCR1 à SCR9 GASG SCR10 à SCR20 63 PS-MB7 + SCR1 à SCR10 GASG SCR19 à SCR20 SEQ ID Première séquence linker Deuxième séquence NO: 64 PS-MB7 + SCR1 à SCR10 GASG SCR16 à SCR20 65 PS-MB7 + SCR1 à SCR10 GASG SCR15 à SCR20 66 PS-MB7 + SCR1 à SCR10 GASG SCR14 à SCR20 67 PS-MB7 + SCR1 à SCR10 GASG SCR13 à SCR20 68 PS-MB7 + SCR1 à SCR10 GASG SCR12 à SCR20 69 PS-MB7 + SCR1 à SCR10 GASG SCR11 à SCR20 70 PS-MB7 + SCR1 à SCR11 GASG SCR19 à SCR20 71 PS-MB7 + SCR1 à SCR11 GASG SCR16 à SCR20 72 PS-MB7 + SCR1 à SCR11 GASG SCR15 à SCR20 73 PS-MB7 + SCR1 à SCR11 GASG SCR14 à SCR20 74 PS-MB7 + SCR1 à SCR11 GASG SCR13 à SCR20 75 PS-MB7 + SCR1 à SCR11 GASG SCR12 à SCR20 76 PS-MB7 + SCR1 à SCR12 GASG SCR19 à SCR20 77 PS-MB7 + SCR1 à SCR12 GASG SCR16 à SCR20 78 PS-MB7 + SCR1 à SCR12 GASG SCR15 à SCR20 79 PS-MB7 + SCR1 à SCR12 GASG SCR14 à SCR20 80 PS-MB7 + SCR1 à SCR12 GASG SCR13 à SCR20 81 PS-MB7 + SCR1 à SCR13 GASG SCR19 à SCR20 82 PS-MB7 + SCR1 à SCR13 GASG SCR16 à SCR20 83 PS-MB7 + SCR1 à SCR13 GASG SCR15 à SCR20 84 PS-MB7 + SCR1 à SCR13 GASG SCR14 à SCR20 La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant une protéine recombinante selon l'invention. L'invention a également pour objet une construction d'acide nucléique codant une protéine recombinante ayant une activité de facteur H telle que décrite ci-dessus. Avantageusement, les acides nucléiques codant les protéines recombinantes selon l'invention ont fait l'objet d'une optimisation de codons. L'optimisation de codon a pour but de remplacer les codons naturels par des codons dont les ARN de transfert (ARNt) portant les acides aminés sont les plus fréquents dans le type cellulaire considéré. Le fait de mobiliser des ARNt fréquemment rencontrés a pour avantage majeur d'accroître la vitesse de traduction des ARN messagers (ARNm) et donc d'augmenter le titre final (Carton JM et al, Protein Expr Purif, 2007). L'optimisation de séquence joue aussi sur la prédiction des structures secondaires d'ARNm qui pourraient ralentir la lecture par le complexe ribosomal. L'optimisation de séquence a également un impact sur le pourcentage de G/C qui est directement lié à la demi-vie des ARNm et donc à leur potentiel d'être traduit (Chechetkin, J. of theoretical biology 242, 2006 922-934).

L'optimisation de codons peut être faite par substitution des codons naturels en utilisant des tables de fréquence des codons (codon Usage Table) pour mammifères et plus particulièrement pour Homo sapiens. Il existe des algorithmes présents sur internet et mis à disposition par les fournisseurs de gènes de synthèse (DNA2.0, GeneArt, MWG, Genscript) qui permettent de faire cette optimisation de séquence. A titre illustratif, une séquence, ayant fait l'objet d'une optimisation de codon, est représentée par la séquence SEQ ID NO : 85. Cette séquence comprend le peptide signal naturel du facteur H. Les acides nucléiques selon l'invention peuvent comprendre un site de restriction unique entre les deux séquences d'acide nucléique codant la première et la deuxième séquence en acides aminés de la protéine recombinante selon l'invention. Ce site unique de restriction peut notamment correspondre au site Nhe I présent dans la partie codant le linker GASG (séquence nucléique : GCCGCTAGCGCC (SEQ ID NO :86), la partie soulignée correspondant au site NheI qui correspond aux acides aminés AS mentionné ci-dessus. Ce site de restriction unique permet d'envisager une amélioration des protéines recombinantes produites, notamment par introduction facilitée d'un ou plusieurs domaines SCR supplémentaires au niveau de la séquence protéique correspondant au dit site de restriction, ou par introduction d'une séquence en acides aminés différente d'un domaine SCR. Il peut notamment s'agir d'un autre domaine protéique n'appartenant pas au facteur H naturel, ou d'un linker de taille et de séquence différente (notamment un linker plus long). Les acides nucléiques codant la protéine recombinante selon l'invention peuvent être construits selon toute méthode connue de l'homme du métier dans le domaine de la biologie moléculaire. Avantageusement toutefois, ledit acide nucléique est construit en deux temps selon un procédé propre à la présente invention. Par exemple, une banque d'acides nucléiques clonés dans des vecteurs de clonage ou d'expression peut être constituée. Chaque vecteur de la banque contient une séquence codant l'une des première ou deuxième séquences en acides aminés composant la protéine recombinante selon l'invention. Ainsi, on décrit un vecteur comprenant les séquences codant une première séquence en acides aminés comprenant à minima les séquences des domaines SCR1 à SCR4 du facteur H (ou vecteur N-Ter). De même, on décrit un vecteur comprenant les séquences codant une deuxième séquence en acides aminés comprenant à minima les séquences des domaines SCR19 et SCR20 du facteur H (ou vecteur C-Ter). Les vecteurs N-Ter et C-Ter sont conçus de manière à comprendre des sites uniques de restriction utiles pour l'excision puis l'assemblage des fragments d'acides nucléiques codant chacune des parties de la protéine recombinante dans un seul et même vecteur. Les constructions permettant l'expression des protéines du tableau 2 ci-dessus peuvent ainsi être produites à partir de 8 vecteurs N-Ter et 10 vecteurs C-Ter. Cette stratégie est décrite dans les exemples ci-dessous.

Les acides nucléiques selon l'invention peuvent également comprendre toute séquence utile, notamment toute séquence permettant une optimisation de l'expression ou la sécrétion de la protéine recombinante ou pour faciliter le clonage et le sous clonage des acides nucléiques de l'invention. Par exemple, l'acide nucléique pourra comprendre en 5' un site unique de restriction, une séquence codante et/ou une séquence codant un peptide signal. En 3', il pourra notamment être utile d'introduire une séquence codant un motif d'acides aminés utile pour le marquage ou la purification de la protéine recombinante, par exemple une étiquette histidine, et un ou plusieurs sites de restriction. Dans un mode de réalisation, la construction d'acide nucléique selon l'invention comprend une séquence codant un peptide signal choisi parmi: - un acide nucléique représenté par la séquence SEQ ID NO : 87 et codant le peptide signal naturel du facteur H, ou - un acide nucléique représenté par la séquence SEQ ID NO : 88 ou par une séquence ayant au moins 85%, notamment 90%, particulièrement 95% d'identité de séquence avec la séquence SEQ ID NO : 88, et codant le peptide signal du facteur H, (PS naturel optimisé) ou - un acide nucléique codant un peptide signal naturel d'une protéine différente du facteur H, ou - un acide nucléique codant le peptide signal codé par la séquence SEQ ID NO : 89 (décrit dans la demande PCT/FR2011/050544) ou par une séquence ayant au moins 85%, notamment 90%, particulièrement 95% d'identité de séquence avec la séquence SEQ ID NO : 89.

La séquence SEQ ID NO : 88 ou une séquence ayant au moins 85%, notamment 90%, particulièrement 95% d'identité de séquence avec la séquence SEQ ID NO : 88 est une séquence obtenue par l'optimisation de codons à partir de la séquence SEQ ID NO : 87. L'acide nucléique représenté par la séquence SEQ ID NO : 89 ou par une séquence ayant au moins 85%, notamment 90%, particulièrement 95% d'identité de séquence avec la séquence SEQ ID NO : 89 code le peptide signal artificiel PS-MB7 décrit ci-dessus. Dans un mode de réalisation, la construction d'acide nucléique codant la protéine recombinante selon l'invention comprend, ou est constitué par: - un acide nucléique codant un peptide signal, notamment un acide nucléique représenté par la séquence SEQ ID NO : 87 et codant le peptide signal naturel du facteur H, ou un acide nucléique représenté par la séquence SEQ ID NO : 88 ou par une séquence ayant au moins 85%, notamment 90%, particulièrement 95% d'identité de séquence avec la séquence SEQ ID NO : 88, et codant le peptide signal du facteur H, (PS naturel optimisé) ou un acide nucléique codant un peptide signal naturel d'une protéine différente du facteur H, ou un acide nucléique codant le peptide signal codé par la séquence SEQ ID NO : 89 (décrit dans la demande PCT/FR2011/050544) ou par une séquence ayant au moins 85%, notamment 90%, particulièrement 95% d'identité de séquence avec la séquence SEQ ID NO : 89; - un acide nucléique codant au moins les domaines SCR1, SCR2, SCR3 et SCR4 du facteur H; - un acide nucléique codant un linker, notamment un linker GASG (SEQ ID NO:3), ledit acide nucléique codant un linker comprenant un site unique de restriction, notamment un site NheI; - un acide nucléique codant au moins les domaines SCR19 et SCR20 du facteur H. Selon un mode de réalisation, la construction d'acide nucléique permet l'expression d'une protéine recombinante choisie parmi l'une des séquences SEQ ID NO:26 à SEQ ID NO:84. L'invention concerne également un vecteur d'expression comprenant la construction d'acide nucléique décrite ci-dessus, liée de manière fonctionnelle à des séquences de contrôle de l'expression dudit acide nucléique. Les séquences de contrôle peuvent notamment comprendre un promoteur (notamment un promoteur CMV), un enhancer, et toute séquence connue de l'homme du métier utile pour permettre l'expression de la protéine recombinante dans une cellule eucaryote, notamment une cellule de mammifère. A ce titre, l'invention concerne par ailleurs une cellule eucaryote recombinante, notamment une cellule de mammifère, plus particulièrement une cellule non-humaine (e.g. une cellule CHO) ou humaine, transformée au moyen de la construction d'acide nucléique ou du vecteur d'expression selon l'invention. Dans un mode de réalisation avantageux de la présente invention, la protéine recombinante telle que décrite ci-dessus est produite dans la lignée cellulaire PER.C6® ou une lignée cellulaire HEK, notamment la lignée cellulaire HEK 293F. La lignée cellulaire PER.C6® est issue de cellules rétinales primaires humaines dans lesquelles un fragment d'ADN adénoviral Ad5 qui contient à la fois le gène E1A et le gène E1B est inséré dans les cellules par un vecteur. Ce fragment d'ADN adénoviral permet de conférer l'immortalité aux cellules dans lesquelles il est inséré, par l'intermédiaire de la protéine E1B qui inhibe la protéine p53. La protéine E1A quant à elle a un tropisme pour le promoteur viral hCMV et permet sa transactivation et la potentialisation de la séquence génique qui sera insérée en 3' de ce dernier et qui pourra être la protéine recombinante selon l'invention. La présente invention concerne particulièrement l'utilisation de la lignée cellulaire PER.C6® pour la mise oeuvre d'un procédé de préparation d'une protéine recombinante ayant une activité de facteur H, notamment l'une des protéines de séquence SEQ ID NO: 26 à SEQ ID NO:84. La présente invention concerne aussi particulièrement l'utilisation de la lignée cellulaire HEK 293F pour la mise oeuvre d'un procédé de préparation d'une protéine recombinante selon l'invention, notamment l'une des protéines recombinantes représentées par l'une des séquences 10 SEQ ID NO: 26 à SEQ ID NO: 84. L'invention concerne également un procédé pour la production d'une protéine recombinante possédant une activité de facteur H. Le procédé selon l'invention, notamment l'une des protéines représentées par les séquences SEQ ID NO:26 à 84, ledit procédé comprenant la culture d'une cellule recombinante selon l'invention transformée par un vecteur comprenant la 15 construction d'acide nucléique selon l'invention codant ladite protéine recombinante. Le vecteur comprenant un tel acide nucléique peut être un quelconque vecteur d'expression pour les lignées cellulaires eucaryotes connues de l'homme du métier. La transformation de la lignée cellulaire peut être mise en oeuvre par des techniques d'électroporation, de nucléofection type AMAXA, un "pistolet à gène" (gène gun) ou encore à 20 l'aide d'un agent de transfection connu de l'homme de métier, tel que des agents cationiques, des liposomes ou des polymères tel que la fectine ou l'agent PEI. Dans un mode de réalisation particulier, le procédé selon la présente invention comprend les étapes suivantes : (i) la transfection d'une cellule eucaryote par un vecteur d'expression comprenant une 25 construction d'acide nucléique codant la protéine recombinante, pour obtenir une cellule transfectée, (ii) la culture de ladite cellule transfectée, pour obtenir l'expression de la protéine recombinante dans le milieu de culture. Ledit vecteur d'expression peut contenir un gène de résistance aux antibiotiques pour 30 permettre la sélection des cellules transfectées lors de l'établissement de cellules produisant de façon stable la protéine d'intérêt. Dans un mode de réalisation, la protéine recombinante selon l'invention est produite à une concentration supérieure ou égale à 10 mg/L telle que détectée par dosage ELISA de surnageant de culture, après 7 jours de production en mode batch.

La purification de la protéine recombinante peut être mise en oeuvre par des techniques de chromatographie en une, deux ou plusieurs étapes. La purification en une étape peut-être une colonne échangeuse d'ions ou une colonne d'affinité (héparine, ligand du facteur H ou anticorps anti-facteur H). La purification en deux étapes peut-être une étape de chromatographie sur colonne échangeuse de cations suivi d'une étape de chromatographie sur colonne échangeuse d'anions ou une étape de chromatographie sur colonne échangeuse d'anions suivi d'une étape de chromatographie sur colonne échangeuse de cations ou une étape de chromatographie sur colonne échangeuse d'ions suivi d'une étape de chromatographie sur colonne d'affinité ou une étape de chromatographie sur colonne d'affinité suivi d'une étape de chromatographie sur colonne échangeuse d'ions. La purification en plus de deux étapes peut être réalisée par une combinaison de ces différentes chromatographies. Une étape de diafiltration, d'ultrafiltration ou de gel filtration peut-être réalisée en complément. La pureté d'un produit après une telle purification peut atteindre 99% de produit purifié.

Les protéines selon l'invention peuvent également être produites dans le lait d'animaux transgéniques non humains, tels qu'une chèvre, un lapin, la brebis, la vache ou un porc. Dans ce cas, la sécrétion des protéines par les glandes mammaires, permettant sa sécrétion dans le lait du mammifère transgénique, implique le contrôle de l'expression des protéines selon l'invention de manière tissu-dépendante. De telles méthodes de contrôle sont bien connues de l'homme du métier. Le contrôle de l'expression est effectué grâce à des séquences permettant l'expression de la protéine vers un tissu particulier de l'animal. Il s'agit notamment des séquences promotrices WAP, bêta-caséine, bêta-lactoglobuline et des séquences peptides signal. Le procédé d'extraction de protéines d'intérêt à partir du lait d'animaux transgéniques est décrit dans le brevet EP 0 264 166.

Un autre aspect de l'invention concerne également l'utilisation d'une protéine recombinante selon l'invention en tant que médicament. L'invention concerne également l'utilisation d'une protéine recombinante selon l'invention pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement d'une maladie impliquant une activité indésirable ou inappropriée du complément, notamment pour le traitement de maladies dues à une inflammation incontrôlée ou un dépôt de C3b incontrôlé. L'invention concerne aussi une méthode de traitement d'une maladie impliquant une activité indésirable ou inappropriée du complément, comprenant l'administration d'une protéine recombinante selon l'invention à un patient nécessitant un tel traitement. Le terme « traitement » comprend aussi bien un traitement curatif qu'un traitement prophylactique de la maladie. Un traitement curatif est défini par un traitement aboutissant à une guérison ou un traitement allégeant, améliorant et/ou éliminant, réduisant et/ou stabilisant les symptômes d'une maladie ou la souffrance qu'elle provoque. Un traitement prophylactique comprend aussi bien un traitement aboutissant à la prévention d'une maladie qu'un traitement réduisant et/ou retardant l'incidence d'une maladie ou le risque qu'elle survienne. L'invention vise notamment le traitement d'une maladie choisie dans le groupe constitué d'une dégénérescence maculaire liée à l'âge (DMLA), une périodontite, un lupus érythémateux, une néphrite lupique, une dermatomyosite, une myasthénie grave, une glomérulonéphrite membrano-proliférative (GNMP), un psoriasis, une sclérose en plaques et les lésions d'une ischémie/ reperfusion rénale. La présente invention est illustrée par les figures et les exemples ci-après. Ces figures et exemples ne visent en aucun cas la limitation de la portée de la présente invention. Figures: La figure 1 est un schéma représentant la stratégie de construction des fragments N-terminaux des protéines recombinantes selon l'invention. La figure 2 est un schéma représentant la stratégie de construction des fragments C-terminaux des protéines recombinantes selon l'invention.

Les figures 3A, 3B et 3C sont des graphes montrant l'activité d'accélération de la dissociation de la C3 convertase pour les fragments de facteur H ayant la plus forte productivité. Exemples: Exemple 1: construction des fragments N-ter et C-ter du Facteur H dans le plasmide pCEP4 Le but est de sous cloner sous différentes formes les fragments N-terminal et C-terminal du variant Y402 du facteur H dans une version optimisée dans le vecteur d'expression pCEP4.

Les fragments seront complétés tous deux en 5' d'un site NotI, de la séquence de kozak et d'un peptide signal, et en 3' d'un His-TAG suivi du site BamHI, la différence se fera par un site NheI situé en 3' pour les fragments N-ter et en 5' pour les fragments C-ter. Des schémas explicatifs seront décrits dans le protocole ci-dessous.

I/ Construction des vecteurs pCEP4-N-ter 1/ Construction des fragments N-ter Les fragments N-ter sont construits par PCR à partir du vecteur pCDNA2001neo-MD3Y. Ce vecteur correspond au vecteur pCDNA2001neo contenant l'acide nucléique représenté par la séquence SEQ ID NO:90 qui est une séquence optimisée codant le variant Y402 du facteur H comprenant un peptide signal artificiel PS-MB7. La stratégie de construction est représentée sur la figure 1. Les amorces utilisées sont les suivantes: amorce sens: P1-NT-FCTH 5'-CTCTAGCGGCCGCGCGCCACC-3' (SEQ ID NO:91) (les nucléotides 6 à 13 de cette séquence définissent un site de restriction NotI) amorces antisens (ou amorces P2-NT-X): Chacune de ces amorces contient, dans cet ordre de 5' vers 3': un site BamHI, 2 codons stop, une étiquette hexahistidine, un linker (GS), un site NheI et une séquence spécifique au facteur H. Ces éléments sont représentés sur la figure 1. P2-NT-4 (SEQ ID NO:92) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCAGATT TTTCCTCGCAGGAAGGCAG 75pb P2-NT-7 (SEQ ID NO:93) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCAGTTTT CACGCGGATGCACCTTG 74pb P2-NT-8 (SEQ ID NO:94) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCAGACT TGATGCAGGTAGGCTGG 73pb P2-NT-9 (SEQ ID NO:95) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCTTCCC GCTCATAGCAGATGGGCAG 75pb P2-NT-10 (SEQ ID NO:96) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCGCTCT GCACCTGCTCCTTGCAAATAG 77pb P2-NT-11 (SEQ ID NO:97) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCGGTGG ATTCCTCGACGATGCAC 73pb P2-NT-12 (SEQ ID NO:98) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCTTTCTT CAGTTTGTCAATGGCGAC 75pb P2-NT-13 (SEQ ID NO:99) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGCGCCCAGCT GGATCTGTGCCATAGAGCAG 76pb Cette série d'amorce P2-NT-X (X, variable) est obtenue par PCR d'assemblage. - PCR d'assemblage entre l'amorce P2NT et les amorces P2-X (X, variable) ci- dessous : Elle est réalisée au moyen des amorces suivantes: 1-P2NT (SEQ ID NO:100) CTCTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCTGCCGCTAGC 2-P2-4 (SEQ ID NO:101) CTGCCTTCCTGCGAGGAAAAATCTGGCGCTAGCGGCAGCCAC 2-P2-7 (SEQ ID NO:102) CAAGGTGCATCCGCGTGAAAACTGGCGCTAGCGGCAGCCAC 2-P2-8 (SEQ ID NO:103) CCAGCCTACCTGCATCAAGTCTGGCGCTAGCGGCAGCCAC 2-P2-9 (SEQ ID NO:104) CTGCCCATCTGCTATGAGCGGGAAGGCGCTAGCGGCAGCCAC 2-P2-10 (SEQ ID NO:105) TATTTGCAAGGAGCAGGTGCAGAGCGGCGCTAGCGGCAGCCAC 2-P2-11 (SEQ ID NO:106) GTGCATCGTCGAGGAATCCACCGGCGCTAGCGGCAGCCAC 2-P2-12 (SEQ ID NO:107) GTCGCCATTGACAAACTGAAGAAAGGCGCTAGCGGCAGCCAC 2-P2-13 (SEQ ID NO:108) CTGCTCTATGGCACAGATCCAGCTGGGCGCTAGCGGCAGCCAC Amplification des fragments d'intérêt : Amorce Amorce fragment matrice Taille de sens anti-sens d'intérêt l'amplicon(pb) P1-NT-FCTH P2-NT-4 Nter 1 -4 pCDNA2001neo-MD3Y 865 P1-NT-FCTH P2-NT-7 Nter 1-7 pCDNA2001neo-MD3Y 1408 P1-NT-FCTH P2-NT-8 Nter 1-8 pCDNA2001neo-MD3Y 1567 P1-NT-FCTH P2-NT-9 Nter 1-9 pCDNA2001neo-MD3Y 1747 P1-NT-FCTH P2-NT-10 Nter 1-10 pCDNA2001neo-MD3Y 1930 Pl-NT-FCTH P2-NT-11 Nter 1-11 pCDNA2001neo-MD3Y 2113 P1-NT-FCTH P2-NT-12 Nter 1-12 pCDNA2001neo-MD3Y 2299 P1-NT-FCTH P2-NT-13 Nter 1-13 pCDNA2001neo-MD3Y 2473 2/ Construction des vecteurs - Digestion NotI/BamHI des Inserts : Inserts Taille (pb) Nter 1-4 850 Nter 1-7 1393 Nter 1-8 1552 Nter 1-9 1732 Nter 1-10 1915 Nter 1-11 2098 Nter 1-12 2284 Nter 1-13 2458 - Digestion NotI/BamHI du vecteur pCEP4 : -> Obtention de 2 fragments 24 et 10162pb Nucléospin extract II (Clontech) - Ligation et transformation de bactéries TOP10 - Screening par PCR : CMV1/MD2-1Rev -> Obtention d'un amplicon de 594pb amorces CMV1 - SEQ ID NO : 109: 5'-CCATTGACGTCAATGGGAGTTTG-3' MD2-lrev - SEQ ID NO : 110: 5'-tgtcacactcgcggtagttg-3' 10 15 3/ Séquençage On utilise les amorces CMV1 et SV40-3'UTR pour le séquençage de tous les vecteurs. Seul les vecteurs pCEP4-1NTer11, pCEP4-1NTer12 et pCEP4-1NTer13 ont un séquençage supplémentaire avec l'amorce MD2-3 Amorce SV40-3'UTR - SEQ ID NO : 111: 5'-TTCACTGCATTCTAGTTGTGGT-3' II/ Construction des vecteurs pCEP4-C-ter 1/ Construction des fragments C-ter Les fragments C-ter sont construits par PCR à partir du vecteur pCDNA2001neo-MD3Y. Ce vecteur correspond au vecteur pCDNA2001neo contenant l'acide nucléique représenté par la séquence SEQ ID NO:90. La stratégie de construction est représentée sur la figure 2. Les amorces utilisées sont les suivantes: amorces sens (ou amorces P1-CT-X): Chacune de ces amorces contient, dans cet ordre de 5' vers 3': un site NotI, une séquence de Kozack (SK), un peptide signal (PS), un site NheI et une séquence spécifique au facteur H. Ces éléments sont représentés sur la figure 2. P1-CT-19 (SEQ ID NO:112) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTGGACCCCCTCCACCCATC P1-CT-16 (SEQ ID NO:113) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTAAGAGTCCTCCAGAGATTTCACA 25 P1-CT-15 (SEQ ID NO:114) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTAGCCAGCCCCCTCAGATC P1-CT-14 (SEQ ID NO:115) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC 30 TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGCCCACCACCTCCACAGATTC P1-CT-13 (SEQ ID NO:116) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGCAAGTCCTCTAATCTGATCATTC P1-CT-12 (SEQ ID NO:117) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTGGCGATATTCCAGAACTGG P1-CT-11 (SEQ ID NO:118) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC 5 TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTGGACCACCTCCAGAACTGC P1-CT-10 (SEQ ID NO:119) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTGAGCTGCCAAAAATTGATG P1-CT-9 (SEQ ID NO:120) 10 CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTGACATTCCAGTGTTTATGAACG P1-CT-8 (SEQ ID NO:121) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACGCTGCTAGCGGCTGTTCTAAGAGCAGCATCGACATTG 15 amorce antisens (P2-CT-FCTH) Cette amorce contient, dans l'orientation 5' vers 3': un site BamHI, 2 codons stop, une étiquette hexahistidine, un linker (GGSG) et une séquence spécifique du Facteur H P2-CT-FCTH (SEQ ID NO:122) GAGTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCCGCTTCCGCCTCTCTTAG 20 CACAAGTAGGGTATTCCAG 74pb La série d'amorce P1-CT-X (X, variable) et l'amorce P2-CT-FCTH sont obtenues par PCR d'assemblage. 25 - PCR d'assemblage pour l'obtention des amorces: amorces utilisées pour l'obtention de l'amorce P2-CT-FCTH 1-P2-CT-FCTH-for (SEQ ID NO:123) GAGTAGGATCCTTATCAATGGTGGTGATGGTGGTGGCCGCTTCCG 2-P2-CT-FCTH-rev (SEQ ID NO:124) 30 CTGGAATACCCTACTTGTGCTAAGAGAGGCGGAAGCGGCCACCAC amorces utilisées pour l'obtention des amorces P1-CT-X PCR1 : 1-P1-CT-FCTH1 (SEQ ID NO:125) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTG 1-P1-CT-FCTH2 (SEQ ID NO:126) CGTTAGCAGAAGTGATAGACAGCAGCAGCAGAAAAATCCAAGACCATCGCATG Fragment PCR1: P1-CT-FCTH-PCR1 (SEQ ID NO:127) CTCTAGCGGCCGCGCGCCACCATGCGATGGTCTTGGATTTTTCTGCTGCTGCTGTC TATCACTTCTGCTAACG 73PB amorce amorce Dimère crée Taille des dimères sens anti-sens (pb) 1-P1-CT-FCTH1 1-P1-CT-FCTH2 P1-CT-FCTH-Pcr 1 73 PCR2 : 2-P1-CT-19 (SEQ ID NO:128) GATGGGTGGAGGGGGTCCACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-16 (SEQ ID NO:129) TGTGAAATCTCTGGAGGACTCTTACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-15 (SEQ ID NO:130) GATCTGAGGGGGCTGGCTACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-14 (SEQ ID NO:131) GAATCTGTGGAGGTGGTGGGCAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-13 (SEQ ID NO:132) GAATGATCAGATTAGAGGACTTGCAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-12 (SEQ ID NO:133) CCAGTTCTGGAATATCGCCACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-11 (SEQ ID NO:134) GCAGTTCTGGAGGTGGTCCACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-10 (SEQ ID NO:135) CATCAATTTTTGGCAGCTCACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-9 (SEQ ID NO:136) CGTTCATAAACACTGGAATGTCACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA 2-P1-CT-8 (SEQ ID NO:137) 30 CAATGTCGATGCTGCTCTTAGAACAGCCGCTAGCAGCGTTAGCAGAAGTGA fragment Amorce Dimère crée Taille des anti-sens dimères (pb) Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-19 P1-CT-19 106 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-16 P1-CT-16 111 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-15 P1-CT-15 106 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-14 P1-CT-14 107 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-13 P1-CT-13 110 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-12 P1-CT-12 107 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-11 P1-CT-11 107 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-10 P1-CT-10 107 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-9 P1-CT-9 110 Pl-CT-FCTH-Pcrl 2-P1-CT-8 P1-CT-8 110 - Amplification des fragments d'intérêt : Primers Primers fragment matrice Taille de sens anti-sens d'intérêt l'amplicon(pb) P1-CT-19 P2-CT-FCTH Cter 19-20 pCDNA2001neo-MD3Y 500 P1-CT-16 P2-CT-FCTH Cter 16-20 pCDNA2001neo-MD3Y 1034 P1-CT-15 P2-CT-FCTH Cter 15-20 pCDNA2001neo-MD3Y 1217 P1-CT-14 P2-CT-FCTH Cter 14-20 pCDNA2001neo-MD3Y 1394 P1-CT-13 P2-CT-FCTH Cter 13-20 pCDNA2001neo-MD3Y 1568 P1-CT-12 P2-CT-FCTH Cter 12-20 pCDNA2001neo-MD3Y 1754 P1-CT-11 P2-CT-FCTH Cter 11-20 pCDNA2001neo-MD3Y 1937 P1-CT-10 P2-CT-FCTH Cter 10-20 pCDNA2001neo-MD3Y 2120 P1-CT-9 P2-CT-FCTH Cter 9-20 pCDNA2001neo-MD3Y 2300 P1-CT-8 P2-CT-FCTH Cter 8-20 pCDNA2001neo-MD3Y 2483 2/ Construction des vecteurs - Digestion NotI/BamHI des Inserts : Inserts Taille (pb) Cter 19-20 483 Cter 16-20 1017 Cter 15-20 1200 Cter 14-20 1377 Cter 13-20 1551 Cter 12-20 1737 Cter 11-20 1920 Cter 10-20 2110 Cter 9-20 2283 Cter 8-20 2466 - Digestion NotI/BamHI du vecteur pCEP4 : -> Obtention de 2 fragments 24 et 10162pb Nucléospin extract II - Ligation et transformation de bactéries TOP10 - Screening par PCR : CMV1/P2-MB7 -> Obtention d'un amplicon de 259pb Seq P2-MB7 - SEQ ID NO :138 : 5'- TGGTGATGCTCAGCAGCAGCAGGAAGATCCAGCTCCATCG-3' 3/ Séquençage On utilise les amorces CMV1 et SV40-3'UTR pour le séquençage de tous les vecteurs. Seul les vecteurs pCEP4-9Cter20 et pCEP4-8Cter20 auront un séquençage supplémentaire avec 15 l'amorce MD2-5. Seq MD2-5 - SEQ ID NO : 139: 5'- GGATTCACACCGTGTGCATTAATG-3' Exemple 2: Construction des vecteurs Facteur H combinant les domaines N-ter et C-ter 20 A partir des 8 vecteurs pCEP4-1NTX et des 10 vecteurs pCEP4-XCT2O nous réalisons la construction de 59 vecteurs combinant les fragments N-ter et C-ter, contenant à minima obligatoirement les domaines SCR1-4 N-terminaux et les domaines SCR19-20 C-terminaux auxquels sont ajoutés un nombre variable des domaines SCRs dans la partie centrale de la molécule. 25 Dans un premier temps, nous introduisons les fragments 1NTX, présent dans le plasmide pCEP4 dans le vecteur pCDNA2001neo (par digestion NotI/BamHI). Dans un second temps, nous introduisons dans les vecteurs pCDNA2001neo-1NTX les fragments XCT20 (par digestion NheI/BamHI). 10 Nous obtenons ainsi 59 constructions plasmidiques qui correspondent aux 59 combinaisons 1NTX-XCT20 des fragments FH. Ces séquences sont présentes dans le vecteur pCDNA2001neo qui permet une expression stable de ces molécules dans la lignée cellulaire PERC6. Pour faciliter le travail de criblage et de production, les 59 fragments FH 1NTX- XCT20 sont extraits du vecteur pCDNA2001neo par digestion NotI/BamHI et clonés dans le vecteur pCEP4 qui permet une expression transitoire dans les cellules HEK293F. I/ Construction des vecteurs pCDNA2001neo-N-Ter à partir des vecteurs pCEP4-N-ter : - Digestion des vecteurs pCEP4-1NT X par Not I/BamHI : Purification sur gel du fragment d'intérêt suivi d'un Nucléospin extract II. - Digestion du vecteur pCDNA2001neo par Not I/BamHI. Nucléospin extract II. - Ligation et transformation TOP10. - Criblage par PCR : CMV1/1VD2-1REV Obtention d'un fragment à 706 pb. - Contrôle par digestion NotI/BamHI : vérification de la présence de l'insert. II/ Construction des vecteurs pCDNA2001neo-1NTX / XCT20 pour une production dans la lignée cellulaire PERC6: Fragment Fragment Nter Cter 19CT20 16CT20 15CT20 14CT20 13 CT20 1NT4 12CT20 11CT20 lOCT20 9CT20 8CT20 Fragment Fragment Nter Cter 1NT9 19CT20 16CT20 15CT20 14CT20 13CT20 12CT20 11CT20 lOCT20 1NT10 19CT20 16CT20 10 15 20 15CT20 14CT20 13CT20 12CT20 11CT20 1NT11 19CT20 16CT20 15CT20 14CT20 13CT20 12CT20 1NT12 19CT20 16CT20 15CT20 14CT20 13CT20 1NT13 19CT20 16CT20 15CT20 14CT20 19CT20 16CT20 15CT20 14CT20 13CT20 1NT7 12CT20 11CT20 lOCT20 9CT20 8CT20 19CT20 16CT20 15CT20 14CT20 13CT20 1NT8 12CT20 11CT20 lOCT20 9CT20 - Digestion des vecteurs pCEP4-XCT20 par NheI / BamHI : - pCEP4-19CT20 - pCEP4-16CT20 - pCEP4-15CT20 25 - pCEP4-14CT20 - pCEP4-13CT20 - pCEP4-12CT20 - pCEP4-11CT20 - pCEP4-10CT20 30 - pCEP4-9CT20 - pCEP4-8CT20 414 pb 948 pb 1131 pb 1308 pb 1482 pb 1668 pb 1851 pb 2034 pb 2214 pb 2397 pb Purification sur gel du fragment d'intérêt suivi d'un Nucléospin extract II. - Digestion du vecteur pCDNA2001neo-1NTX par Nhe I/BamHI. Nucléospin extract II. - Ligation et transformation TOP10. - Criblage par PCR : MD2-6 / 2BGHPA Obtention d'un fragment à 373 pb. Digestion de contrôle NotI/BamHI et NheI/BamHI. Seq MD2-6 - SEQ ID NO :140 : 5'-AGGGAAACAAGCGCATCACCT-3' Seq 2BGHPA - SEQ ID NO :141: 5'-CAGATGGCTGGCAACTAGAA-3' Les fragments 1NTX/XCT20 sont ensuite extraits par digestion NotI / BamHI et réintroduits dans le vecteur pCEP4. III/ Construction des vecteurs pCEP4-1NTX / XCT20 pour une production dans la lignée cellulaire HEK 293 Freestyle : - Digestion du vecteur pCEP4 par NotI / BamHI (10162 et 24pb) Nucléospin extract II. - Digestion des vecteurs pCDNA2001neo-1NTX/XCT20 par NotI / BamHI (Taille des fragments dans le tableau ci-dessous.) Purification sur gel Nucléospin extract II.

Vecteur digéré (NotI/BamHI) Taille insert (pb) pCDNA2001neo-1NT4/19CT20 1216 pCDNA2001neo-1NT4/16CT20 1762 pCDNA2001neo-1NT4/15CT20 1945 pCDNA20O1neo-1NT4/14CT20 2122 pCDNA2O01neo-1NT4/13CT20 2296 pCDNA2001neo-1NT4/12CT20 2482 pCDNA2001neo-1NT4/11CT20 2665 pCDNA2001neo-1NT4/1OCT2O 2848 pCDNA2001neo-1NT4/ 9CT20 3028 pCDNA2001neo-1NT4/ 8CT20 3211 pCDNA2001neo-1NT7/19CT20 1771 pCDNA2001neo-1NT7/16CT20 2305 pCDNA2001neo-1NT7/15CT20 2488 pCDNA2001neo-1NT7/14CT20 2665 pCDNA2001neo-1NT7/13CT20 2839 pCDNA2001neo-1NT7/12CT20 3025 pCDNA2001neo-1NT7/11CT20 3208 pCDNA2001neo-1NT7/10CT20 3391 pCDNA2001neo-1NT7/ 9CT20 3571 pCDNA2001neo-1NT7/ 8CT20 3754 pCDNA2001neo-1NT8/19CT20 1954 pCDNA2OO1neo-1NT8/16CT2O 2488 pCDNA2001neo-1NT8/15CT20 2671 pCDNA2001neo-1NT8/14CT20 2848 pCDNA2001neo-1NT8/13CT2O 3022 pCDNA2O01neo-1NT8/12CT20 3208 pCDNA2OO1neo-1NT8/11CT20 3391 pCDNA2001neo-1NT8/10CT20 3574 pCDNA2001neo-1NT8/ 9CT20 3754 Vecteur digéré (NotI/BamHI) Taille insert (pb) pCDNA20O1neo-1NT9/19CT20 2134 pCDNA2001neo-1NT9/16CT2O 2668 pCDNA2001neo-1NT9/15CT2O 2851 pCDNA2001neo-1NT9/14CT20 3028 pCDNA2001neo-1NT9/13CT20 3202 pCDNA2001neo-1NT9/12CT20 3388 pCDNA2001neo-1NT9/11CT20 3571 pCDNA2001neo-1NT9/10CT20 3754 pCDNA2001neo-1NT10/19CT20 2317 pCDNA2001neo-1NT10/16CT20 2851 pCDNA2001neo-1NT10/15CT20 3034 pCDNA2001neo-1NT10/14CT20 3211 pCDNA2001neo-1NT10/13CT20 3385 pCDNA2001neo-1NT10/12CT20 3571 pCDNA2001neo-1NT10/11CT20 3754 pCDNA2001neo-1NT11/19CT20 2500 pCDNA2001neo-1NT11/16CT20 3034 pCDNA2OO1neo-1NT11/15CT20 3217 pCDNA2001neo-1NT11/14CT20 3394 pCDNA2001neo-1NT11/13CT20 3568 pCDNA2001neo-1NT11/12CT20 3754 pCDNA2001neo-1NT12/19CT20 2686 pCDNA20O1neo-1NT12/16CT20 3220 pCDNA20O1neo-1NT12/15CT2O 3403 pCDNA2001neo-1NT12/14CT20 3580 pCDNA2001neo-1NT12/13CT20 3754 pCDNA2001neo-1NT13/19CT20 2860 pCDNA2001neo-1NT13/16CT20 3394 pCDNA2001neo-1NT13/15CT20 3577 pCDNA2001neo-1NT13/14CT20 3754 - Ligation et transformation TOP10. - Criblage par PCR : CMV1 / MD2-1REV Obtention d'un fragment à 594 pb. - Séquençage des jonctions par CMV1 et SV40-3'UTR.

Exemple 3: Détermination de la concentration et de la masse moléculaire des fragments F11 présents dans les surnageants des cellules HEK 293F après 7 jours de production en mode batch. 3.1: Transfection transitoire dans les cellules HEK 293F pour production transitoire des fragments F11 recombinant. 1-Transfection transitoire : La veille de la transfection transitoire, les cellules HEK 293F sont repiquées à une concentration cellulaire de 7E5 vc/ml. La densité cellulaire et la viabilité des cellules HEK 293F sont déterminées le jour de la transfection. Le volume de culture correspondant à 30E6 cv/ml est centrifugé. Le surnageant est éliminé et le culot de cellules est repris dans 28 ml de milieu de culture F17 (Invitrogen), transféré dans un erlen de 250 ml et incubé à 37 °C. 2-Formation du complexe agent de transfection / ADN en rapport 2:1: L'agent de transfection et l'ADN correspondant au vecteur pCEP4 contenant une des 20 séquences des fragments FH sont préparés dans du milieu OptiMEM (Invitrogen) de la façon suivante: - Ajout de 301.1g d'ADN dans 1 ml d'OptiMEM - Ajout de 60 pl de Fectine ou 60 pl de PEI dans 1 ml d'OptiMEM. Ces deux préparations sont incubées séparément pendant 5 minutes à température ambiante 25 puis la solution contenant l'agent de transfection est ajoutée délicatement à celle contenant l'ADN. Le mélange est incubé pendant 25 minutes à température ambiante avant d'être ajouté au 28 ml de cellules HEK 293F préalablement préparées. Les cellules sont alors incubées à 37°C sous agitation à 125 rpm. 30 3-Production transitoire de facteur H: Les cellules sont maintenues en culture durant 7 jours sans ajout ou renouvellement de milieu de culture. Le 7ème jour, les cellules sont centrifugées à 3000g pendant 15 minutes. Les culots cellulaires sont éliminés et les surnageant cellulaires contenant les fragments FH recombinants sont filtrés en 0.22 i.tm puis congelés à -20°C. 3.2 : Dosage des fragments Fil humain dans le milieu de culture par ELISA Anticorps de coating : immunoglobuline de mouton anti-Facteur H humain (The Binding Site) diluée extemporanément dans un tampon PBS pH 7,4 pour obtenir une concentration comprise entre 3,5 et 5,5 pg/ml. Tampon de saturation: PBS - BSA 1 % (p/vol) Tampon de lavage: PBS - Tween-20 0,1 % (vol/vol) Tampon de dilution: Tampon PBS - Tween-20 0,1 % (vol/vol) - BSA 0,1 % (p/vol) Solution standard: Calibrateur Facteur H humain NL (The Binding Site) Echantillons : les échantillons sont prédilués de façon à obtenir une concentration proche de celle du premier point de gamme. Puis diluer de 1/2 en 1/2. Anticorps monoclonal anti Facteur H: Immunoglobulines monoclonales de souris purifiées anti-Facteur H humain (SEROTEC) Anticorps de révélation: Immunoglobulines de chèvre anti-IgG de souris marquées à la peroxydase (Jackson Immuno Research Laboratories). Solution de révélation: TMB Kit (Pierce)Solution d'arrêt: Acide sulfurique 4 N ou 2 M (Fisher Scientific). MODE OPERATOIRE Sensibilisation de la phase solide : Dans une plaque de microtitration, on distribue 100 pl par puits d'anticorps de coating dilué. La plaque est ensuite recouverte d'une feuille adhésive puis incubée une nuit à + 4° C. La plaque est ensuite vidée par retournement.

Saturation de la phase solide : On distribue 120 pl par puits de solution de saturation. La plaque est ensuite recouverte d'une feuille adhésive puis incubée 1 heure à 20° C. On procède ensuite à 3 lavages avec du tampon de lavage.

Capture de l'antigène : On distribue 100 pl par puits de tampon de dilution (blanc), de chaque dilution du standard et des échantillons. La plaque est ensuite recouverte d'une feuille adhésive puis incubée 1 heure 30 minutes à 20° C. On lave ensuite 5 fois en tampon de lavage.

Reconnaissance de l'antigène par l'anticorps monoclonal : 100 1.1,1 de l'anticorps monoclonal sont distribués dans chaque puits. La plaque est recouverte d'une feuille adhésive puis incubée incubée 1 heure 30 minutes à 20° C. On lave ensuite 5 fois en tampon de lavage. Marquage par le conjugué HRP (HorseRadish Peroxidase en anglais, ou peroxydase de raifort) : 100 tl de l'anticorps de révélation sont distribués, la plaque est recouverte d'une feuille adhésive, puis incubée 1 heure à 20°C. Les puits sont lavés 5 fois en tampon de lavage. Réaction enzymatique : On distribue 100 tl par puits de TMB contenant le substrat à intervalle de temps régulier et loin de toute lumière intense. Puis on incube à température ambiante entre 5 - 15 minutes. Ce temps doit être identique pour tous les points de dosage. Arrêt de la réaction : On distribue 1000 d'H2SO4 4N par puits à intervalle de temps régulier. Les résultats sont rapportés dans le tableau suivant. Fragment FH Dosage ELISA Masse (mode batch 7 moléculaire jours) (Dallons) mg/L 1NT4- 19CT20 67 43442.8 1NT4- 16CT20 46 63288.2 1NT4- 15CT20 29 69983.5 1NT4- 14CT20 15 76680.1 1NT4- 11CT20 10 97371.7 1NT4- 10CT20 22 104213.6 1NT4- 9CT20 13 111090.2 1NT4- 8CT20 15 117650.5 1NT7- 19CT20 10 64198.2 1NT7- 16CT20 76 84043.6 1NT7- 15CT20 132 90738.9 1NT7- 14CT20 177 97435.5 1NT7- 13CT20 27 104274.3 1NT7- 12CT20 42 111244.2 1NT7- 11CT20 154 118127.1 1NT7- 1OCT20 157 124969.1 1NT7- 9CT20 161 131845.6 1NT7- 8CT20 224 138405.9 1NT8- 19CT20 7 70758.5 1NT8- 16CT20 47 90603.9 1NT8- 15CT20 124 97299.2 1NT8- 14 CT20 339 103969.8 1NT8- 13 CT20 48 110808.6 1NT8- 12 CT20 13 117804.6 1NT8- 11 CT20 115 124687.4 1NT8- 10 CT20 128 131529.4 1NT8- 9 CT20 80 138405.9 1NT9-19 CT20 5 77635.1 1NT9-16 CT20 8 97480.4 1NT9-15 CT20 43 104175.7 1NT9-14 CT20 91 110872.3 1NT9-13 CT20 25 117711.2 1NT9-12 CT20 25 124655.0 1NT9-11 CT20 45 131537.9 1NT9-10 CT20 156 138405.9 1NT10- 19CT20 5 84451.0 1NT10- 15CT20 13 110991.7 1NT10- 14CT20 21 117688.3 1NT10- 11CT20 128 138379.9 1NT11- 19CT20 9 91333.8 1NT11- 16CT20 22 111179.2 1NT11- 15CT20 16 117874.5 1NT11- 14CT20 36 124571.1 1NT13- 14CT20 13 138379.9 Exemple 4 : Caractérisation par SDS-PAGE des fragments F1-1 recombinants présents dans le surnageant de culture (figures 6A, 6B et 7). A partir de la valeur de la concentration des fragments FH recombinants déterminée par ELISA, un volume correspondant à li.tg de facteur H recombinant est dilué au 1/2 dans du tampon Laemmli 2x, chauffé à 95°C pendant 5 minutes puis déposé sur un gel linéaire de 10% polyacrylamide. Après migration, les protéines contenues dans le gel sont colorées au bleu de Coomassie.

L'analyse des gels de polyacrylamide montrent que les fragments FH recombinants migrent selon les masses moléculaires apparentes attendues. Exemple 5: Détermination de l'activité d'accélération de la dissociation de la C3 convertase des fragments F1-1 recombinants présents dans le surnageant de culture et ayant la plus forte productivité : A partir de la concentration de facteur H recombinant déterminée par ELISA, les fragments FH recombinants sont dilués à une concentration finale de 20 µg/ml. A partir de ce tube une gamme est réalisée par les dilutions successives suivantes: 1/2; 1/10; 1/4; 1/4; 1/4; 1/4; 1/40.

Cette gamme de concentration décroissante de fragments FH est ajoutée au complexe C3 convertase formé dans les puits d'une plaque 96 puits qui est alors incubée 32 à 34 minutes à +34°C. Après plusieurs lavages, le facteur B restant complexé avec la molécule C3 immobilisée au fond du puits est alors dosé par une réaction immuno-enzymatique de type ELISA. Les valeurs d'absorbances obtenues en fonction de la concentration de fragments FH ajoutée sont alors traitées dans un système modélisé non linéaire (sigmoïde à pente variable) afin de déterminer la valeur de l'IC50 de chaque échantillon. L'équation de calcul de ce modèle est la suivante : Y : Bottom + ( Top -Bottom)/(1+10^((Log IC50-X)* Hillslope) X est le logarithme de la concentration (µg/m1).

Y est la réponse (D.0). Y débute à la ligne de base (Bottom) et va au sommet (Top) selon une forme sigmoïdale. Hillslope est la pente. L'activité déterminée dans le surnageant cellulaire est montré dans les figures 3A, 3B et 3C pour les fragments ayant la plus forte productivité.25

Claims

REVENDICATIONS1. Protéine recombinante possédant une activité de facteur H, comprenant, de l'extrémité N- terminale à l'extrémité C-terminale, une première séquence d'acides aminés comprenant au moins les domaines SCR1 à SCR4 du facteur H, et une deuxième séquence d'acides aminés comprenant au moins les domaines SCR19 et SCR20 du facteur H, ladite protéine recombinante n'étant pas un facteur H naturel, et sous réserve que si la première séquence est constituée des domaines SCR1 à SCR4 et la deuxième séquence est constituée des domaines SCR19 et SCR20, le linker soit un linker synthétique.
2. Protéine recombinante selon la revendication 1, première et/ou la deuxième séquence en acides aminés comprenant en outre un ou plusieurs autres domaines SCR de facteur H réarrangés.
3. Protéine recombinante selon la revendication 1 ou 2, la première et la deuxième séquence en acides aminés étant liées entre elles par un linker non naturel, notamment un linker G-A-SG.
4. Protéine recombinante selon l'une quelconque des revendications précédentes, la première ou la deuxième séquence en acides aminés comprenant au moins les domaines SCR12, SCR13 et SCR14 du facteur H, ou la première et la second séquence en acides aminés ne comprenant aucun des domaines SCR12, SCR13 et SCR14.
5. Protéine recombinante selon l'une quelconque des revendications précédentes, la première séquence en acides aminés comprenant un peptide signal en position N-terminale, notamment le peptide signal naturel du facteur H (SEQ ID NO:24), le peptide signal d'une protéine différente du facteur H, ou le peptide signal PS-MB7 représenté dans la séquence SEQ ID NO: 25.
6. Protéine recombinante selon l'une quelconque des revendications précédentes, de séquence choisie parmi les séquences représentées dans SEQ ID NO:26 à 84.
7. Construction d'acide nucléique codant une protéine recombinante selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.
8. Construction d'acide nucléique selon la revendication 7, comprenant un site de restriction unique entre les deux séquences d'acide nucléique codant la première et la deuxième séquence en acides aminés de la protéine recombinante, notamment un site Nhe I présent dans la partie codant un linker G-A-S-G.
9. Vecteur comprenant une construction d'acide nucléique selon la revendication 7 ou 8.
10. Cellule hôte comprenant la construction d'acide nucléique selon la revendication 7 ou 8, ou le vecteur selon la revendication 9.
11. Animal transgénique non humain comprenant la construction d'acide nucléique selon la revendication 7 ou 8, ou le vecteur selon la revendication 9.