FR3004180A1 - Nouveaux derives de chalcone presentant une activite anti-allergique - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne les composés de formule (I) : dans laquelle : - R2, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, chlore, brome, iode ou fluor, ou un groupe -OH ou -O-alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; - R2' et R4', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe -OH ou -O-alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; - n est égal à 1, 2, 3 ; - X = CH2, 0, S ou N(R7); et - R7 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; ainsi que leurs hydrates, solvats et sels pharmaceutiquement acceptables.

Description

04 180 La présente invention concerne de nouveaux dérivés de chalcone présentant une activité anti-allergique, ainsi que les compositions pharmaceutiques contenant de tels composés et de tels composés pour leur utilisation en tant que médicaments, et en particulier en tant que médicament anti-allergique. De nombreux travaux ont déjà été réalisés sur des dérivés de chalcone. A titre illustratif, on peut citer le brevet US 6,462,075 qui décrit des dérivés de chalcone présentant une activité d'inhibition de l'angiogénèse. Ces composés sont présentés comme pouvant être utilisés comme agents anti- tumoraux, anti-cancéreux, pour traiter les maladies angiogéniques de la peau et les maladies inflammatoires chroniques. La demande de brevet WO 2007/083060, quant à elle, décrit une famille de chalcone présentant une activité anti-mitotique, des résultats étant présentés sur un test de cycle correspondant à l'analyse du blocage en phase G2/M d'une lignée de cellules leucémiques humaines évalué par cytométrie de flux. Bien qu'il soit mentionné dans cette demande de brevet que les composés décrits pouvaient être utilisés pour le traitement de manifestations secondaires à une hypersensibilité, par exemple rhinite, conjonctive et asthme allergiques, eczéma, allergies médicamenteuses, les inventeurs de la présente demande de brevet ont testés plusieurs des composés décrits, sur la dégranulation de basophiles humains normaux et les composés testés n'ont pas montré d'activité. Ces résultats seront présentés ultérieurement dans les exemples. Selon la présente invention, les inventeurs ont développé une nouvelle série de chalcones présentant un intérêt dans le traitement des affections allergiques. Dans ce contexte, l'invention concerne les composés de formule (I) : X R2 R2. 0 (I) dans laquelle - R2, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, chlore, brome, iode ou fluor, ou un groupe -0H ou -0-alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; - R2' et R4', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe -0H ou -0-alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; - n est égal à 1, 2 ou 3 ; - X = CH2, 0, S ou N(R7); et - R7 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle comprenant de 1 10 à 6 atomes de carbone ; ainsi que leurs hydrates, solvats et sels pharmaceutiquement acceptables. Selon des aspects préférés de l'invention, les composés de formule (I), éventuellement sous forme d'hydrates, solvats ou sels pharmaceutiquement 15 acceptables, présentent l'une quelconque des caractéristiques ci-après ou une combinaison de plusieurs de ces caractéristiques, voire toutes ces caractéristiques - X=N(R7) ; en particulier, R7 représente un groupe méthyle ; n=2 ; 20 - R2' et/ou R4' est(sont) différent(s) de l'hydrogène ; en particulier R2' et/ou R4' représente(nt) un groupe méthoxy ; - au moins deux des groupes R2, R4 et R6, et notamment R2 et R6, sont différents de l'hydrogène ; - R2, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome 25 d'hydrogène, un atome de chlore ou un groupe méthoxy. Dans tous les composés de formule (I), la configuration autour de la double liaison a,,[3 est trans comme indiqué sur la formule développée (I). Par groupe alkyle, on entend une chaîne hydrocarbonée, saturée, linéaire ou ramifiée. A titre d'exemple de groupe alkyle comprenant de 1 à 6 30 atomes de carbone, on peut citer, notamment, les groupes méthyle (noté Me), éthyle, n-propyle, iso-propyle, n-butyle, test-butyle, sec-butyle, npentyle, n-hexyle.

Les composés de formule (I), ci-après, dans lesquels R7=méthyle, ainsi que leurs hydrates, solvats ou sels pharmaceutiquement acceptables, sont particulièrement préférés. En particulier, l'invention concerne les composés : 2'-Hydroxy-2,4,6,4',6'-penta rriéthoxy-5-(1-méthyl pi péridi n-4-yl)chalcone, composé (I.1) Me N OMe OH 0 2'-Hydroxy-2,6,4',6'-tetramétho -5-(1-méthylpipéridin-4-yl)chalcone, composé (I.2) Me OH 0 - 2,6-Dichloro-4',6'-di méthoxy-2'-hyd roxy-5-(1-méthyl pi péridi n-4-yl)chalcone, composé (I.3) OH 0 ainsi que leurs hydrates, solvats ou sels pharmaceutiquement acceptables.

Une étude de modélisation moléculaire a été réalisée et montrent notamment que la présence de l'hétérocycle azoté est déterminante pour l'activité anti-allergique. Me0 Me0 OMe OMe L'invention concerne également les composés définis dans le cadre de l'invention pour leur utilisation en tant que médicament, et en particulier pour leur utilisation en tant que médicament anti-allergique. Une telle utilisation est, de préférence, mise en oeuvre chez l'être humain.

Les sels des composés selon l'invention sont préparés selon des techniques bien connues de l'homme de l'art. Les sels des composés de formule (I) selon la présente invention comprennent ceux avec des acides minéraux ou organiques qui permettent une séparation ou une cristallisation convenable des composés de formule (I), ainsi que des sels pharmaceutiquement acceptables. En tant qu'acide approprié, on peut citer: l'acide picrique, l'acide oxalique ou un acide optiquement actif, par exemple un acide tartrique, un acide dibenzoyltartrique, un acide mandélique ou un acide camphosulfonique, et ceux qui forment des sels physiologiquement acceptables, tels que le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate, l'hydrogénosulfate, le dihydrogénophosphate, le maléate, le fumarate, le 2- naphtalènesulfonate, le paratoluènesulfonate. Comme composés sous forme hydratée, on peut citer, à titre d'exemple, les semi-hydrates, monohydrates et polyhydrates. Par solvat, on entend une forme du composé associé à une ou plusieurs molécules de solvant, notamment utilisé lors de sa synthèse ou lors de sa purification, sans pour autant être en solution dans ce dernier. Lorsqu'un composé selon l'invention présente un ou plusieurs carbones asymétriques, les isomères optiques de ce composé font partie intégrante de l'invention. La présente invention comprend les composés de formule (I) 25 sous forme d'isomères purs mais également sous forme de mélange d'isomères en proportion quelconque. Les composés (I) sont isolés sous forme d'isomères purs par les techniques classiques de séparation: on pourra utiliser, par exemple des recristallisations fractionnées d'un sel du racémique avec un acide ou une base optiquement active dont le principe est bien 30 connu ou les techniques classiques de chromatographies sur phase chirale ou non chirale. 3004 180 5 Les groupes fonctionnels éventuellement présents dans la molécule des composés de formule (I) et dans les intermédiaires réactionnels peuvent être protégés, soit sous forme permanente soit sous forme temporaire, par des groupes protecteurs qui assurent une synthèse univoque des composés 5 attendus. Les réactions de protection et déprotection sont effectuées selon des techniques bien connues de l'homme de l'art. Par groupe protecteur temporaire des amines, alcools ou des acides carboxyliques on entend les groupes protecteurs tels que ceux décrits dans Protective Groups in Organic Synthesis, Greene T.W. et Wuts P.G.M., ed John Wiley et Sons, 1991 et dans 10 Protecting Groups, Kocienski P.J., 1994, Georg Thieme Verlag. Les composés de formule (I) selon l'invention sont obtenus par condensation aldolique d'une acétophénone de formule (II) et d'un benzaldéhyde de formule (III) comme illustré dans les exemples. La présente invention a également pour objet l'utilisation des composés 15 définis dans le cadre de l'invention, pour la fabrication d'un médicament, et de préférence d'un médicament destiné au traitement des allergies. En particulier, de tels médicaments sont destinés au traitement de l'être humain. Les composés selon l'invention sont plus particulièrement appropriés pour le traitement d'une pathologie d'origine allergique telles que les manifestations 20 pulmonaires, comme l'asthme allergique ; les manifestations cutanées d'allergie comme l'eczéma, l'allergie médicamenteuse, les réactions de contact à des produits de l'environnement ; les manifestations digestives y compris les allergies alimentaires ; les autres manifestations muqueuses telles que les rhinites et les conjonctivites ; les manifestations articulaires allergiques ; les manifestations locales et systémiques résultant d'un contact avec un produit alimentaire, cosmétique, hygiénique, du milieu professionnel, médicamenteux ou toxique, le microbiote ou des parasites ; les manifestations de maladies auto-immunes ; l'oedème de Quincke. L'activité anti-allergique des composés a été mise en évidence en étudiant la capacité des composés selon l'invention à inhiber la dégranulation de basophiles humains normaux en réalisant des études de marquage en cytométrie en flux. Les composés selon l'invention possèdent une activité importante de protection vis-à-vis de la dégranulation de basophiles humains normaux, telle qu'elle peut être évaluée par la surexpression de CD203c et de CD63 après exposition à un anticorps anti-IgE. En particulier, la concentration en composé selon l'invention permettant d'obtenir un effet protecteur de 50% (par rapport à une valeur de 100% correspondant au contrôle réalisé en l'absence de composé selon l'invention) appartient à la gamme allant de 1 à 100 micromolaires. Par contre, contrairement aux composés décrits dans la demande WO 2007/083060, les composés selon l'invention, lorsqu'ils sont testés seuls, ne présentent pas d'activité significative sur différents modèles cancérologiques étudiés. Les compositions pharmaceutiques comprenant un composé selon l'invention, en association avec au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable, font également partie intégrante de l'invention. Dans de telles compositions, le composé selon l'invention est présent en quantité thérapeutiquement efficace. Le terme « traitement » désigne toute mesure thérapeutique prophylactique ou suppressive d'une maladie ou désordre, conduisant à un effet clinique souhaitable ou à tout effet bénéfique, incluant notamment la suppression ou la diminution d'un ou plusieurs symptômes, la régression, le ralentissement ou la cessation de la progression de la maladie ou du désordre qui y est associé. Par « quantité thérapeutiquement efficace », on désigne toute quantité d'une composition qui améliore un ou plusieurs des paramètres caractéristiques de l'affection traitée. Les composés de formule (I), leurs sels, solvats et hydrates pharmaceutiquement acceptables ne sont pas cytotoxiques. De par leur activité, les composés de formule (I) précédemment décrits, ainsi que leurs sels, solvats et hydrates, peuvent être utilisés pour la fabrication d'un médicament destinés à traiter une affection allergique, et en particulier une pathologie d'origine allergique choisie parmi les manifestations pulmonaires, comme l'asthme allergique ; les manifestations cutanées d'allergie comme l'eczéma, l'allergie médicamenteuse, les réactions de contact à des produits de l'environnement ; les manifestations digestives y compris les allergies alimentaires ; les autres manifestations muqueuses telles que les rhinites et les conjonctivites ; les manifestations articulaires allergiques ; les manifestations locales et systémiques résultant d'un contact avec un produit alimentaire, cosmétique, hygiénique, du milieu professionnel, médicamenteux ou toxique, le microbiote ou des parasites ; les manifestations de maladies auto-immunes ; l'oedème de Quincke. La présente invention a également pour objet les compositions pharmaceutiques administrables aux animaux et, en particulier à l'homme, contenant une dose thérapeutiquement efficace d'un composé de formule (I), ou d'un sel, d'un solvat ou d'un hydrate pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, et un ou des excipients convenables selon notamment la Pharmacopée Européenne 7ème édition. L'invention concerne donc les compositions pharmaceutiques comprenant un composé selon l'invention, avec au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Les excipients présents dans les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, intracartilage, topique, intratrachéale, intranasale, transdermique, rectale ou intraoculaire, les principes actifs de formule (I), en toute proportion, ou leurs sels, solvats et hydrates éventuels, peuvent être administrés sous formes unitaires d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour la prophylaxie ou le traitement des maladies ci-dessus. Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale, telles que les comprimés, les gélules, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intra trachéale, intra nasale, les formes d'administration sous- cutanée, intramusculaire, intra cartilage ou intraveineuse et les formes d'administration rectale. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, pommades, patches ou lotions. Afin d'obtenir l'effet souhaité, le composé selon l'invention sera présent dans la composition à une dose thérapeutiquement efficace. La dose de principe actif varie, par exemple, entre 0,1 et 100 mg par kg de poids du corps et par jour. Lorsqu'on prépare une composition solide sous forme de comprimés, on mélange l'ingrédient actif principal avec un véhicule pharmaceutique, tel que la gélatine, l'amidon, le lactose, le stéarate de magnésium, le talc, la gomme 10 arabique ou analogues. On peut enrober les comprimés de saccharose, d'un dérivé cellulosique, ou d'autres matières appropriées ou encore on peut les traiter de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retardée et qu'ils libèrent d'une façon continue une quantité prédéterminée de principe actif. On obtient une préparation en gélules en mélangeant l'ingrédient actif 15 avec un diluant et en versant le mélange obtenu dans des gélules molles ou dures. Les compositions pharmaceutiques contenant un composé de formule (I), ou d'un de ses sels, solvats ou hydrates, peuvent aussi se présenter sous forme liquide, par exemple, des solutions, des émulsions, des 20 suspensions ou des sirops. Les supports liquides appropriés peuvent être, par exemple, l'eau, les solvants organiques tels que le glycérol ou les glycols, de même que leurs mélanges, dans des proportions variées, dans l'eau. Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir ou pour l'administration sous forme de gouttes peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un 25 édulcorant, acalorique, un antiseptique, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié. Les poudres ou les granules dispersibles dans l'eau peuvent contenir l'ingrédient actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents de mise en suspension, comme la polyvinylpyrrolidone, de même qu'avec des édulcorants ou des correcteurs 30 de goût. 3004 180 9 D'une façon générale, les mêmes variantes que celles indiquées précédemment pour les composés (I) sont applicables mutatis mutandis aux médicaments, compositions et utilisations mettant en oeuvre ces composés. Les exemples ci-après, en référence aux Figures annexées, permettent 5 d'illustrer l'invention, mais n'ont aucun caractère limitatif. Les Figures 1 et 2 montrent les résultats obtenus à 100 iJM sur la dégranulation des basophiles par cytométrie en flux avec les marqueurs CD63 et CD203c pour des composés selon l'invention et d'autres composés de structure proche.

Les Figures 3 et 4 présentent les résultats d'une étude effet-dose menée avec les composés (I.1), (L2) et (1.3) sur un nombre de 4 donneurs, avec les marqueurs CD63 et CD203c. Les Figures 5 à 8 présentent des résultats obtenus avec le composé (I.1) dans un modèle d'asthme chez la souris.

La Figure 5 montre la réponse en plethysmographie non invasive à des doses croissantes de métacholine pour l'ensemble des groupes un jour après le dernier challenge OVA. La Figure 6 montre la concentration de l'infiltrat intra-bronchique de l'ensemble des groupes un jour après le dernier challenge OVA.

Les Figures 7 et 8 montrent les cytologies obtenues par les analyses de cytométrie en flux dans les poumons et le LBA de l'ensemble des groupes un jour après le dernier challenge OVA. L Synthèse des chalcones Les chalcones ont été synthétisées selon le Schéma 1, ci-après dans lequel X, n, R2, R4 et R6, R2' et R4' sont tels que définis pour les composés de formule (I), par condensation aldolique entre un dérivé d'acétophénone (II) et un dérivé de benzaldéhyde (III). Le protocole expérimental est le suivant : A une solution 30 d'acétophénone (II) dans l'éthanol ou méthanol (10 mL/mmol d'acétophénone) est ajoutée successivement le dérivé de benzaldéhyde (III) et une solution d'hydroxyde de potassium (KOH, 50% dans H2O). La solution est agitée à reflux du solvant pendant 24 h. L'éthanol ou le méthanol est évaporé et de l'eau est ajoutée au résidu restant. La solution est filtrée sous pression réduite et le solide obtenu est lavé successivement à l'eau et à l'éther. La pureté du produit est analysée par CCM. La majorité des 5 chalcones ont été obtenues pures à ce stade. Si la CCM révèle la présence d'impuretés, une purification par colonne de chromatographie sur gel de silice éluée par l'acétate d'éthyle/cyclohexane (1/4 à 1/1, v/v) est réalisée. Le dérivé d'acétophénone requis pour la préparation des chalcones ont été synthétisées selon la méthode décrite dans : Liu et al. Bioorganic & 10 Medicinal Chemistry, 2007, 15, 7021-7034. Les dérivés de benzaldéhyde sont commerciaux. Schéma 1 OH O dérivé de racétophénone KOH Et0H:H 20 OH O dérivé du chalcone benzaldéhyde (I) (Pd) 15 Schéma 1. Schéma de synthèse des chalcones 20 25 Tableau 1. Structures des chalcones et des réactifs et les caractérisations des chalcones préparées. Chalcone Dérivé Dérivé de Données (I) d'acétophéno benzaldéhyde analytiques des ne (III) chalcones étudiées (II) 2'-Hydroxy- Me N MeO OMe 60%, 1H NMR: d 2,4,6,4',6'- 0 OMe 14.55 (s, 1H); 8.24 (d, J = 16 Hz, 1H); 8.20 pentaméthoxy-5-(1- méthyl pi périd i n-4- yl)chalcone, composé (1.1) MeO OH OMe (d, J = 16 Hz, 1H); O 6.14 (s, 2H); 5.98 (s, 1H); 3.95-3.86 (4s, 15 Me 1:1 H); 3.19-3.13 (m, 1H); ,- Me0, ,_,,',---, OMe 2.95-2.92 (m, 2H); 1 MeO, , ,OMe,--- J , OMe 2.49-2.40 (m, 2H); 0."-: g 2.30 (s, 3H); 2.10-2.0 (m, 2H); 1.52-1.49 (m, 2H). MS (ESI) miz 472 (M+II)'. 2'-Hydroxy-2,6,4',6'- Me N MeO 35%; 'H NMR: 8 tetraméthoxy-5-(1- méthyl pi péridi n-4- yl)chalcone, composé (1.2) MeO OMe 0 OMe 14.45 (s, 1H); 8.28 (AB system, J = 16 Hz, 2H); 7.24 (t, J = 7 Hz, 1H); Me OH 0 6.58 (d, J = 7 Hz, 2H), I Me0 5.99 (s, 1H) ; 3.99- Me0 OMe OMe 3.90 (4s, 12H) ; 3.25- 01-4 0 3.15 (m, 1H); 3.0-2.95 (m, 2H); 2.54-2.45 (m, 2H); 2.35 (s, 3H); 2.15-2.0 (m, 2H); 1.53-1.50 (m, 2H). MS (ESI) m/z 442 (M+H) . 3004 180 12 Chalcone Dérivé Dérivé de Données (I) d'acétophéno benzaldéhyde analytiques des ne (III) chalcones étudiées (II) 2,6-Dichloro-4',6'- Me CI 30%; 111 NMR: 8 N diméthoxy-2'- hydroxy-5-(1- méthylpipéridin-4- MeO OMe CI 14.11 (s, 1H); 8.01 (d, J = 16Hz, 1H); 7.85 O. Oo (d, J = 16 Hz, 1H); yl)chalcone, composé (1.3) OH 0 7.37 (d, J = 8 Hz, 2H); 7.17 (t, J = 8 Hz, 1H); Me 5.97 (s, 1H) ; 3.90 (s, L cl , 3H) ; 3.89 (s, 3H) ; Me0 OMe' 3.20-3.17 1H); CI %-Fi (m, 2.98-2.96 (m, 2H); 2.50-2.45 (m, 2H); 2.33 (s, 3H); 2.10-2.04 (m, 2H); 1.51-1.48 (m, 2H). MS (ESI) miz 450 (M+H)' . II. Activité biologique a) Activité sur la dégranulation de basophiles humains normaux CD203c 5 et CD 63 Ce test consiste à analyser par cytométrie en flux l'expression des marqueurs membranaires CD203c et CD63 sur des basophiles humains normaux. Pour cela du sang provenant de donneurs sains est exposé à un anticorps dirigé contre les immunoglobulines E (IgE) ce qui conduit à une 10 activation et une dégranulation des basophiles, provoquant une augmentation de l'expression de CD203c et de CD63. Afin de démontrer l'effet protecteur des dérivés d'intérêt, ceux-ci sont co-incubés avec les basophiles et l'anticorps anti-IgE et les échantillons sont analysés afin de démontrer un moindre niveau d'expression de CD203c et de CD63. Les 15 composés d'intérêt étant dissous dans du dimethylsulfoxide (DMSO) un 3004 180 13 contrôle est également réalisé en incubant les basophiles en présence de DMSO sans principe actif. L'activité des composés (I.1), (I.2) et (I.3) a été comparée avec des composés de l'art antérieur notamment décrits dans la demande de brevet W02007/083060, ainsi que des composés de structure proche synthétisés par les inventeurs, mais n'ayant pas fait l'objet de publications antérieures. Les différents exemples comparatifs testés sont présentés dans le Tableau 2. Tableau 2 Exemple comparatif Formule développée 1 meo,'', --,, OMe,-',-,,, ! --- la ' &Me OMe b 2 Me0 , Me0 ,,,,,...0Me 1....J ' r OMe OH 6 Me0, OH li OMe 0 ,OMe OMe 4 Me0 Me0 Me0, 7--,,,OMe O [ OMe OMe CF3 OMe O 6 Me0 OH Me0 OMe. OMe O Les résultats obtenus à 100 pM sur la dégranulation des basophiles par cytométrie en flux avec les marqueurs CD63 et CD203c sont présentés respectivement dans les Figures 1 et 2. L'étude réalisée montre, dans les deux cas, un effet inhibiteur des composés selon l'invention, contrairement aux autres composés testés. Une étude effet-dose a également été menée avec les composés (I.1), (1.2) et (1.3) sur un nombre de 4 donneurs. Les résultats avec les marqueurs CD63 et CD203c sont présentés respectivement Figures 3 et 4. On observe pour ces deux marqueurs un effet dose entre 1 et 100 micromolaires de composé (1.1), (1.2) ou (I.3), sans effet plateau, ni différence significative entre ces composés. L'effet est plus marqué sur CD63 (effet maximum de 80%) que sur CD203c (effet maximum de 40%). 10 b) Effet sur la fonction respiratoire dans un modèle d'asthme chez la souris Les composés selon l'invention ont également fait l'objet de tests in vivo. Le cromoglycate a été utilisé comme composé de référence car il est 15 actuellement le seul composé actuellement commercialisé ayant été décrit comme ayant un effet sur la dégranulation des basophiles. Rappel du protocole - Le modèle utilisé est un modèle ovalbumine (ova). Le protocole comporte 20 - 4 semaines de sensibilisation avec de l'ova solubilisé dans une solution contenant de I'alum et injecté en intra-péritonéal (I-P). - 1 semaine de challenge avec 3 challenges intra-nasals d'ova solubilisé dans du tampon phosphate PBS 3 jours de suite. - Les injections de PBS, de composé (I.1) ou, de Cromoglycate ont été 25 réalisées tout au long de la phase de challenge et poursuivies jusqu'à la date d'analyse à raison d'une injection par jours en I-P. - Les analyses ont été réalisées 1 et 5 jours après le dernier challenge intra-nasal Ces analyses comprennent 30 Un jour après le dernier challenge 3004 180 15 une analyse de la fonction respiratoire par plethysmographie non invasive sur 10 souris par groupes. La fonction respiratoire est analysée en réponse à une dose croissante de métacholine (broncho-constricteur). récupération et analyse du lavage broncho-alvéolaire (compte du nombre de cellules, et analyse cytologique) sur 5 souris. dissection des poumons pour analyses cytologiques (étude microscopique après coloration) sur les mêmes 5 souris. Cinq jours après le dernier challenge - une analyse de la résistance pulmonaire par la technique des 10 oscillations forcées (méthode invasive) sur les 5 souris restantes des différents groupes. La résistance pulmonaire est analysée en réponse à une dose croissante de métacholine (bronchoconstricteur). - récupération et analyse du lavage broncho-alvéolaire (compte du nombre de cellules, et dépôt sur lame par cytospin pour analyse cytologique) 15 sur ces 5 souris. Les souris ont été réparties en 3 groupes : Un groupe composé (I.1) (n=10), un groupe i-cm (cromoglycate, n=10) et un groupe i-PBS (n=10). Mode d'administration 20 Le composé (1.1) est dissous dans une solution de DMSO. Cette solution stock est ensuite diluée dans une solution vol:vol d'éthanol:PBS avant administration intra-péritonéale. Le composé (1.1) se solubilise mal ce qui peut expliquer la variabilité constatée dans certaines des expériences. La Figure 5 montre la réponse en plethysmographie non invasive à des 25 doses croissantes de métacholine pour l'ensemble des groupes un jour après le dernier challenge OVA. Les valeurs de Penh (enhanced Pause), calculées à partir des mesures de pléthysmographie, traduisent l'allongement du temps de pause expiratoire observé chez les sujets présentant une réduction du calibre bronchique et sont corrélées avec la résistance respiratoire. Une 30 diminution des valeurs de Penh correspond donc à un effet protecteur vis-à-vis de la bronchoconstriction induite par l'OVA.

La Figure 6 montre la concentration de l'infiltrat intra-bronchique de l'ensemble des groupes un jour après le dernier challenge OVA. Les Figures 7 et 8 montrent les cytologies obtenues par les analyses de cytométrie en flux dans les poumons et le LBA de l'ensemble des groupes un jour après le dernier challenge OVA. Le groupe contrôle sensibilisé et challengé avec de l'OVA et injecté avec du PBS montre tous les signes d'un asthme allergique à l'OVA avec une Penh élevée, et ce d'autant plus que la dose de métacholine est importante, un fort infiltrat intrabronchique et une forte éosinophilie. Ce groupe a servi de référence pour l'ensemble des résultats. L'analyse de la fonction respiratoire un jour après le dernier challenge ova montre que le cromoglycate et le composé (I.1) conduisent à des réponses différentes. Ainsi les souris traitées par du cromoglycate présentent les mêmes augmentations de Penh en réponse à des doses croissantes de métacholine que les souris contrôles traitées avec du PBS. En revanche la différence est significative dès la dose 20 si on compare avec le composé (1.1). Si l'on compare au groupe contrôle injecté avec du PBS la différence n'est significative que pour la dose à 40 mg/ml. Première conclusion, il semble donc qu'un jour après le dernier challenge OVA le composé (1.1) améliore la fonction respiratoire des souris. En ce qui concerne l'inflammation intra bronchique, les souris injectées avec du PBS montrent un infiltrat inflammatoire important. Le groupe cromoglycate ne montre pas de différence significative avec le groupe traité par du tampon. En revanche, le groupe traité avec du composé (1.1) montre 25 une diminution significative de l'infiltrat intra-bronchique comparé aux groupes PBS et cromoglycate. Si on regarde au niveau de la composition de cet infiltrat (Figure 7), on a une composition tout à fait en adéquation avec un modèle OVA avec une forte éosinophilie et peu d'augmentation des autres types cellulaires. 30 Si l'on regarde au niveau de l'inflammation intra bronchique, les souris injectées avec du cromoglycate ont un infiltrat intra bronchique plus important par rapport au groupe du composé (I.1) qui montre une diminution significative de l'infiltrat intra-bronchique comparé au groupe PBS et cromoglycate. Si on regarde au niveau de la composition de cet infiltrat (Figure 7), on a une composition tout à fait en adéquation avec un modèle OVA avec une forte éosinophilie et peu d'augmentation des autres types cellulaires. Plusieurs points sont intéressants : Tout d'abord, l'infiltrat du groupe PBS est en adéquation entre les différents paramètres regardés. L'hyperéosinophilie corrèle bien avec l'augmentation de l'infiltrat intra bronchique et l'hyper réactivité bronchique.

En ce qui concerne le groupe du composé (I.1), on observe une diminution des éosinophiles et des lymphocytes T par comparaison au groupe PBS, ce qui corrèle bien avec la diminution d'hyper réactivité bronchique. Le groupe cromoglycate, quant à lui, ne montre pas de diminution significative de l'infiltrat à éosinophiles par rapport au groupe PBS.

En conclusion, le composé (I.1) semble jouer sur l'éosinophilie. L'inflammation intra-pulmonaire ne montre pas de grosses variations comparées à l'infiltrat intra bronchique. On a une hyperéosinophilie pour tous les groupes, mais celle-ci est beaucoup moins importante dans le groupe du composé (I.1) y compris pour le groupe cromoglycate avec une diminution de ces éosinophiles dans le groupe du composé (1.1). L'ensemble de ces résultats montre que le composé (1.1) induit une protection des souris vis-à-vis de la bronchoconstriction dans ce modèle d'asthme induit par l'OVA et que cette protection s'accompagne d'une réduction des signes biologiques d'inflammation, à la fois au niveau du parenchyme pulmonaire et du liquide de lavage bronchiolo-alvéolaire. De façon remarquable, le composé (I.1) réduit de façon très significative l'infiltrat éosinophile provoqué par l'OVA dans ce modèle. dans laquelle - R2, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, chlore, brome, iode ou fluor, ou un groupe -0H ou -0-alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; - R2' et R4', identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, ou un groupe -0H ou -0-alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; - n est égal à 1, 2, 3 ; - X = CH2, 0, S, ou N(R7) ; et - R7 représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle comprenant de 1 à 6 atomes de carbone ; ainsi que leurs hydrates, solvats et sels pharmaceutiquement acceptables. 2 - Composés selon la revendication 1, caractérisés en ce que X=N(R7). 3 - Composés selon la revendication 2, caractérisés en ce que R7 représente un groupe méthyle. 4 - Composés selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce que n=2. 5 - Composés selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce que R2' et/ou R4' représente(nt) un groupe méthoxy. 6 - Composés selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce que R2, R4 et R6, identiques ou différents, représentent un atome d'hydrogène, un atome de chlore ou un groupe méthoxy. 7 - Composés selon la revendication 1 choisis parmi - 2'-Hydroxy-2,4,6,4',6'-pentaméthoxy-5-(1-méthylpipéridin-4-yl)chalcone, composé (I.1)

Claims (2)

1. REVENDICATIONS1.
2. 2`-Hydroxy-2,6,4',6'-tetrarnéthoxy-5-(1-méthylpipéridin-4-yl)chalcone, composé (I.2) OH 0 - 2,6-Dichloro-4',6'-diméthoxy-2'-hydroxy-5-(1-méthylpipéridin-4-yl) chalcone, composé (1.3) OH 0 ainsi que leurs hydrates, solvats et sels pharmaceutiquement acceptables. 8 - Composés selon l'une des revendications précédentes pour leur 10 utilisation en tant que médicament. 9 - Composés selon l'une des revendications précédentes pour leur utilisation en tant que médicament anti-allergique. 10 - Composés selon l'une des revendications précédentes pour leur utilisation en tant que médicament pour le traitement d'une pathologie 15 d'origine allergique choisie parmi les manifestations pulmonaires, comme l'asthme allergique ; les manifestations cutanées d'allergie comme l'eczéma, l'allergie médicamenteuse, les réactions de contact à des produits del'environnement ; les manifestations digestives y compris les allergies alimentaires ; les autres manifestations muqueuses telles que les rhinites et les conjonctivites ; les manifestations articulaires allergiques ; les manifestations locales et systémiques résultant d'un contact avec un produit alimentaire, cosmétique, hygiénique, du milieu professionnel, médicamenteux ou toxique, le microbiote ou des parasites ; les manifestations de maladies auto-immunes ; l'oedème de Quincke.