FR2916972A1

FR2916972A1 - Combination, useful e.g. in cosmetic/dermatological composition, which is useful in cosmetic care, comprises apple extract, biological apple vinegar, almond glycoproteins, silicon, and essential oil

Info

Publication number: FR2916972A1
Application number: FR0755550A
Authority: FR
Inventors: Yves Millou; Katia Fontes; Cecile Tourel
Original assignee: LOccitane SA
Current assignee: Laboratoires M&L SA
Priority date: 2007-06-07
Filing date: 2007-06-07
Publication date: 2008-12-12
Anticipated expiration: 2027-06-07
Also published as: FR2916972B1

Abstract

Combination (I) comprises an apple extract, biological apple vinegar, almond glycoproteins, silicon and at least one essential oil. An independent claim is included for cosmetic/dermatological composition comprising (I). ACTIVITY : Dermatological. MECHANISM OF ACTION : Matrix metalloproteinase inhibitor. The ability of (I) to inhibit matrix metalloproteinase on DQ-elastin degradation was tested in culture of human dermal fibroblast. The results showed that (I) exhibited the DQ-elastin degradation of 97.5%.

Description

COMPOSITION COSMETIQUE OU DERMATOLOGIQUE A BASE DE POMME ET SONCOSMETIC OR DERMATOLOGICAL COMPOSITION BASED ON APPLE AND SOUND

UTILISATIONUSE

La présente invention concerne une composition cosmétique ou dermatologique qui raffermit, protège, affine le grain de peau et resserre les pores. Tout particulièrement, l'invention concerne une composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un extrait aqueux biologique de pomme de Provence concentré en polyphénols, du vinaigre de pommes 1 o biologiques, des glyco-protéines d'amandes, du silicium et au moins une huile essentielle de préférence une huile essentielle de coriandre. Les conditions de vie actuelles font subir à l'organisme toutes sortes d'agressions permanentes qui sont mieux connues sous le nom de stress. Parce que la peau agit comme barrière physique, thermique, immunologique, 15 hydrique entre le corps et les éléments extérieurs, elle se trouve alors directement exposée à diverses agressions extérieures (UV, pollution, métaux lourds, variations de température). Un des stress les plus importants sur la peau résulte de l'action des radicaux libres qui du fait de leur réactivité chimique entraîne l'altération des 20 différents composants cellulaires de la peau avec le temps. Simultanément, le vieillissement ralentit le renouvellement cellulaire de la peau et celui de sa matrice extracellulaire, notamment le renouvellement du collagène de type I. Ce moindre renouvellement a pour conséquence d'augmenter encore la sensibilité de la peau aux agressions extérieures et sa 25 détérioration avec le temps. Si différentes compositions ont été mises au point dans l'art antérieur, aucune ne permet toutefois une action qui raffermit, protège, affine les grains de peau et resserre les pores. The present invention relates to a cosmetic or dermatological composition that firms, protects, refines the skin texture and tightens the pores. In particular, the invention relates to a cosmetic or dermatological composition comprising at least one organic aqueous extract of Provence apple concentrated in polyphenols, organic apple vinegar, almond glyco-proteins, silicon and at least one oil. essential preferably an essential oil of coriander. The current living conditions cause the body all kinds of permanent attacks that are better known as stress. Because the skin acts as a physical, thermal, immunological, water barrier between the body and the external elements, it is then directly exposed to various external aggressions (UV, pollution, heavy metals, temperature variations). One of the most important stresses on the skin results from the action of free radicals which, because of their chemical reactivity, causes the alteration of the various cellular components of the skin over time. At the same time, aging slows down the cellular renewal of the skin and that of its extracellular matrix, in particular the renewal of type I collagen. This lesser renewal has the effect of further increasing the sensitivity of the skin to external aggressions and its deterioration with the weather. Although different compositions have been developed in the prior art, none, however, allows an action that firms, protects, refines the skin grains and tightens the pores.

30 Il existe donc encore aujourd'hui un besoin pour l'identification de compositions présentant des propriétés anti-radicalaires et de restructuration qui raffermissent, protègent, affinent le grain de peau et resserrent les pores. Thus, there is still today a need for the identification of compositions with anti-radical and restructuring properties which firm, protect, refine skin texture and tighten pores.

Les fruits du pommier, les pommes contiennent des tanins, des acides maliques et citriques, de la vitamine C, A, B1, B2, PP, des enzymes, des polyphénols. Le pommier, Pyrus Malus, est un arbre fruitier de la famille des Rosacées, sous famille des Malacées, largement cultivé pour ses fruits, les pommes. Il en existe environ 5 000 variétés dont la moitié d'origine américaine et environ 2 000 d'origine anglaise. En Europe, on distingue deux espèces de pommiers : le pommier sauvage ou pommier des bois (Malus sylvestris Mill.) et le pommier cultivé (Malus domestica Borkh). Le pommier est un arbre autochtone en Europe et particulièrement en France où son existence est attestée depuis la plus haute antiquité. Le pommier cultivé est un arbre à feuilles caduques qui mesure de 4 à 10 mètres de haut et peut être soumis à la taille ou élevé en plein vent. Apple fruits, apples contain tannins, malic and citric acids, vitamin C, A, B1, B2, PP, enzymes, polyphenols. The apple tree, Pyrus Malus, is a fruit tree of the family Rosaceae, subfamily Malacea, widely grown for its fruit, apples. There are about 5,000 varieties, half of which are of American origin and about 2,000 of English origin. In Europe, there are two species of apple trees: the wild apple tree or the apple tree (Malus sylvestris Mill.) And the apple tree (Malus domestica Borkh). The apple tree is an indigenous tree in Europe and particularly in France where its existence is attested since the highest antiquity. The cultivated apple tree is a deciduous tree that is 4 to 10 meters tall and can be pruned or raised in the open.

Les feuilles du pommier sont simples, à limbe denté et à disposition alterne. Les fleurs hermaphrodites à symétrie radiaire ont cinq pétales blancs. Les pommes proviennent d'un ovaire infère et sont couronnées par les restes du calice et de l'androcée. La pomme est en partie vrai fruit pour le trognon, le véritable fruit étant les pépins, organes de reproduction, et faux fruit pour la chair qui dérive du réceptacle floral. La demanderesse s'est particulièrement intéressée à la pomme de Provence qui est la région la plus productrice de pomme (et non la Normandie). Avec une moyenne de 500 000 Tonnes par an, la région provençale représente le quart de la production française. La pomme de Provence est riche en vitamine C qui se localise dans la partie externe de la pulpe et plus encore dans la peau puisque celle-ci en renferme 4 à 5 fois plus que le reste du fruit. Elle contient d'autres vitamines comme la provitamine A (carotène), la vitamine B1 (10 à 100 mg pour 100 gr), la vitamine B2 ou riboflavine (0,05 mg pour 100 gr), la vitamine PP dans les parties externes du fruit (0,5 mg pour 100 gr), l'acide pantothénique (0,06 mg pour 100 gr), des enzymes, des polyphénols. The leaves of the apple tree are simple, with a toothed limb and alternate disposition. The hermaphrodite flowers with radial symmetry have five white petals. The apples come from an inferior ovary and are crowned by the remains of the chalice and androcea. The apple is partly true fruit for the core, the real fruit being the seeds, reproductive organs, and false fruit for the flesh that derives from the floral receptacle. The applicant was particularly interested in the apple of Provence which is the most productive region of apple (and not Normandy). With an average of 500,000 tons per year, the Provencal region accounts for a quarter of French production. The Provence apple is rich in vitamin C which is located in the outer part of the pulp and even more in the skin since it contains 4 to 5 times more than the rest of the fruit. It contains other vitamins such as provitamin A (carotene), vitamin B1 (10 to 100 mg per 100 grams), vitamin B2 or riboflavin (0.05 mg per 100 grams), vitamin PP in the outer parts of the body. fruit (0.5 mg per 100 g), pantothenic acid (0.06 mg per 100 g), enzymes, polyphenols.

La pomme biologique (ou Bio) de Provence contient des minéraux. Dans les cendres, on retrouve du potassium, sodium, silice, calcium, acide phosphorique, fer, magnésium, brome, soufre, manganèse... De par sa forte concentration en polyphénols, l'extrait de pomme Bio de Provence présente des activités anti-radicalaires qui ont été confirmées par des tests in vitro. La pomme contient entre 0,02 et 0,3 % de polyphénols en fonction de la saison, du moment de la récolte et du type de pomme. Trois grandes familles de polyphénols sont présentes entre 20 et 30 0/0 chacune : - Les procyanidines - les hydroxy chalcons avec la phloridzine majoritairement, - Les acides hydroxycinnamiques avec l'acide chlorogénique majoritairement. The organic apple (or Bio) of Provence contains minerals. In the ashes, one finds potassium, sodium, silica, calcium, phosphoric acid, iron, magnesium, bromine, sulfur, manganese ... By its high concentration in polyphenols, the extract of apple Bio de Provence presents activities anti -radicals that have been confirmed by in vitro tests. The apple contains between 0.02 and 0.3% polyphenols depending on the season, the time of harvest and the type of apple. Three large families of polyphenols are present between 20 and 30% each: - Procyanidines - Hydroxy-chalc with phloridzine mainly - Hydroxycinnamic acids with chlorogenic acid predominantly.

La phloridzine est le polyphénol caractéristique de la pomme et celui qui possède le pouvoir antioxydant le plus puissant. L'activité anti-radicalaire de l'extrait vis-à-vis du radical diphenylpicrylhydrazyle (DPPH) a été appréciée par la mesure du taux de réduction du radical DPPH en présence du produit. La concentration inhibitrice (Cl) nécessaire pour réduire de 50 % le DPPH a été calculée. L'extrait de pomme BIO de Provence a une Cl 50 de 26 mg/mi. Il présente donc un bon pouvoir inhibiteur du DPPH. Grâce à sa teneur en vitamine C, la pomme a une action stimulante. En effet, la vitamine C permet de stimuler les défenses de l'organisme et contribue à diminuer les réactions cutanées. Elle est indispensable à l'hydroxydation de la proline et donc à l'élaboration et au maintien de l'intégrité du collagène. Les acides organiques qui sont connus pour stimuler le renouvellement tissulaire confèrent à l'extrait de pomme une activité régénérante. Les acides organiques, et notamment l'acide citrique, accélèrent le processus de desquamation, affinent le grain de peau et resserrent les pores. Les pectines, grâce à leur pouvoir absorbant, ont une action hydratante et rafraîchissante. Phloridzine is the polyphenol characteristic of the apple and the one with the most powerful antioxidant power. The anti-radical activity of the extract vis-à-vis the diphenylpicrylhydrazyl radical (DPPH) was assessed by measuring the rate of reduction of the radical DPPH in the presence of the product. The inhibitory concentration (Cl) required to reduce the DPPH by 50% was calculated. BIO apple extract from Provence has a Cl 50 of 26 mg / mi. It therefore has a good inhibitory capacity of DPPH. Thanks to its vitamin C content, the apple has a stimulating action. Indeed, vitamin C helps stimulate the defenses of the body and helps reduce skin reactions. It is essential for the hydroxidation of proline and thus for the development and maintenance of the integrity of collagen. Organic acids that are known to stimulate tissue renewal give the apple extract a regenerating activity. Organic acids, including citric acid, accelerate the desquamation process, refine the skin texture and tighten the pores. Pectins, thanks to their absorbing power, have a hydrating and refreshing action.

L'élastine est synthétisée par les fibroblastes du derme. Plusieurs types d'enzymes hydrolysant l'élastine ont été décrits : L'élastase de neutrophiles et les élastases appartenant à la famille des métalloprotéases. Nous verrons dans une étude décrite plus loin que l'extrait de pomme Bio de Provence inhibe les enzymes hydrolisant l'élastine. A la suite d'importantes recherches la Demanderesse a mis en évidence qu'une association d'un extrait de pomme, de préférence de pomme Bio et/ou de Provence, de vinaigre de pommes, de préférence biologique et/ou de Provence, de glycoprotéines d'amande douce, de silicium, et d'au moins une 1 o huile essentielle, développe par un effet de synergie des propriétés raffermissantes, un resserrement, un lissage des ridules et du grain de peau. Ainsi, la présente invention se rapporte à une association comprenant les éléments suivants : - un extrait de pomme, de préférence de pomme biologique et/ou de 15 Provence, - du vinaigre pommes, de préférence biologique et/ou de Provence, - des glycoprotéines d'amande douce, - du silicium, et - au moins une huile essentielle, par exemple de coriandre. 20 On entend par association, un mélange qui comprend les éléments précités. Selon l'invention, avantageusement, l'huile essentielle ou les huiles essentielles peut (peuvent) être choisie(s) par exemple dans le groupe comprenant l'huile de romarin, de mirte, l'immortelle, de menthe, de pin, de pin 25 laricio, de coriandre, de camomille, de bouleau, de bois de rose, de basilic, d'arbre à thé, de cajeput, de carotte et de cannelle. De manière générale, il peut s'agir de toute huile essentielle ou mélange d'huiles essentielles connues de l'homme du métier, en particuliers celles utilisées dans les produits cosmétiques. 30 Selon l'invention, l'huile essentielle ou les huiles essentielles représente(nt) de 0,01 à 2 %, de préférence de 0,01 à 1 % en poids par rapport au poids total l'association. Elastin is synthesized by the dermis fibroblasts. Several types of elastin-hydrolyzing enzymes have been described: Neutrophil elastase and elastases belonging to the family of metalloproteases. We will see in a study described below that the apple extract Bio de Provence inhibits the enzymes that hydrolyze elastin. Following important research the Applicant has shown that a combination of an apple extract, preferably organic apple and / or Provence, apple vinegar, preferably organic and / or Provence, glycoproteins of sweet almond, of silicon, and of at least one o essential oil, develops by a synergetic effect of the firming properties, a tightening, a smoothing of the wrinkles and the grain of skin. Thus, the present invention relates to an association comprising the following elements: an extract of apple, preferably of organic apple and / or of Provence, apple vinegar, preferably organic and / or of Provence, glycoproteins sweet almond, - silicon, and - at least one essential oil, for example coriander. By association is meant a mixture which comprises the aforementioned elements. According to the invention, advantageously, the essential oil or essential oils may be chosen, for example, from the group comprising rosemary oil, mirte oil, immortelle oil, mint oil, pine oil, 25 laricio pine, coriander, chamomile, birch, rosewood, basil, tea tree, cajeput, carrot and cinnamon. In general, it may be any essential oil or mixture of essential oils known to those skilled in the art, in particular those used in cosmetics. According to the invention, the essential oil or essential oils represent (s) from 0.01 to 2%, preferably from 0.01 to 1% by weight relative to the total weight of the combination.

Selon l'invention, l'extrait de pomme, de préférence biologique et de préférence encore de Provence, peut représenter avantageusement de 0,5 à 10 %, de préférence de 0,5 à 5 % en poids par rapport au poids total de l'association. Cet extrait peut être obtenu par toute technique connue de l'homme du métier. II peut s'agir par exemple d'une technique par pression, par centrifugation et/ou par filtration. Selon l'invention, le vinaigre de pomme, de préférence biologique et de préférence encore de Provence, peut représenter de 0,1 à 5 %, de préférence de 0,1 à 2 % en poids par rapport au poids total de l'association. Le vinaigre utilisé peut être par exemple un vinaigre biologique de pomme commercialisé par la Société GREENTECH (France). Selon l'invention, les glycoprotéines d'amande peuvent représenter de 1 à 15 %, de préférence de 1 à 10 % en poids par rapport au poids total de l'association. Ces glycoprotéines se présentent par exemple sous la forme de concentré de glycoprotéines d'amende, commercialisé par exemple par les Laboratoires Sérobiologiques (France). Selon l'invention, le silicium peut représenter de 0,01 à 3 %, de préférence de 0,01 à 1 % en poids par rapport au poids total de l'association. Il peut s'agir d'un silicium tels que ceux couramment utilisés dans les produits cosmétiques, par exemple commercialisé par la Société EXSYMOL. Selon l'invention, l'association peut comprendre en outre au moins un agent actif choisi parmi des agents restructurants, hydratants, apaisants, régénérants. Ces agents peuvent être ceux couramment utilisés dans les produits cosmétiques, par exemple la glycérine, le bisabolol, la vitamine A, etc.. According to the invention, the apple extract, preferably biological and more preferably from Provence, may advantageously represent from 0.5 to 10%, preferably from 0.5 to 5% by weight relative to the total weight of the product. 'association. This extract can be obtained by any technique known to those skilled in the art. It may be for example a technique by pressure, by centrifugation and / or by filtration. According to the invention, the apple vinegar, preferably biological and preferably of Provence, may represent from 0.1 to 5%, preferably from 0.1 to 2% by weight relative to the total weight of the combination . The vinegar used may be, for example, an organic apple vinegar marketed by GREENTECH (France). According to the invention, the almond glycoproteins may represent from 1 to 15%, preferably from 1 to 10% by weight relative to the total weight of the combination. These glycoproteins are, for example, in the form of a fine glycoprotein concentrate, marketed for example by Laboratoires Sérobiologiques (France). According to the invention, the silicon may represent from 0.01 to 3%, preferably from 0.01 to 1% by weight relative to the total weight of the combination. It may be a silicon such as those commonly used in cosmetics, for example marketed by the company EXSYMOL. According to the invention, the combination may furthermore comprise at least one active agent chosen from restructuring, moisturizing, soothing and regenerating agents. These agents may be those commonly used in cosmetics, for example glycerine, bisabolol, vitamin A, etc.

Un autre objet de l'invention se rapporte à une composition cosmétique ou dermatologique comprenant une association selon l'invention. Selon une forme préférée de réalisation de la présente invention, la composition cosmétique ou dermatologique comprend une quantité d'association au sens de la présente invention qui représente de 0,05 à 30 % en poids, de préférence de 0,05 à 15 % en poids, par exemple de 1 à 20% en poids, de préférence de 0,05 à 10% en poids, de préférence encore de 1 à 10 % en poids de la composition cosmétique ou dermatologique. Les compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'invention peuvent comprendre en outre d'autres agents actifs généralement utilisés en35 cosmétique ou dermatologie, comme par exemple, à titre non limitatif : perhydrosqualène naturel, sucroesters, huile de bourrache, huile d'onagre, huile de pépins de raisins, vitamine A, vitamine E, allantoïne. Avantageusement, selon l'invention, de tels agents actifs peuvent représenter de 1 % à 20 % en poids de la composition, de préférence de 10/0 à 10 %. Les compositions cosmétiques et dermatologiques selon l'invention peuvent également comprendre un ou plusieurs agents de formulation, comme des agents conservateurs, des agents solubilisants, des agents gélifiants, des additifs d'origine végétale, des esters, du sorbitol, du glycérol, des bases de 1 o parfum, et de l'eau, par exemple en quantité suffisante pour 100. Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétique et de la dermatologie, comme par exemple, une crème, un lait, une lotion, un gel, un masque, sans aucune restriction galénique particulière autre que celles de la 15 compatibilité avec l'association des actifs de l'invention et pour l'application sur la peau. La présente invention se rapporte également à une méthode de soin cosmétique consistant à appliquer sur la peau une association ou une composition selon l'invention. L'application se fera de préférence en une 20 quantité efficace. L'application est réalisée par exemple quotidiennement, par exemple le matin, par exemple pendant quatre semaines. La méthode de soin selon l'invention permet de renforcer les structures membranaires et de resserrer les pores de la peau. La présente invention se rapporte également à l'utilisation d'une 25 association selon l'invention ou d'une composition selon l'invention pour fortifier la peau, stimuler le renouvellement cellulaire, dynamiser les cellules en relançant le processus d'hydratation et en resserrant les pores et en affinant le grain de peau D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention 30 apparaîtront à la lecture des exemples non limitatifs qui suivent. Another subject of the invention relates to a cosmetic or dermatological composition comprising an association according to the invention. According to a preferred embodiment of the present invention, the cosmetic or dermatological composition comprises an amount of combination within the meaning of the present invention which represents from 0.05 to 30% by weight, preferably from 0.05 to 15% by weight. weight, for example from 1 to 20% by weight, preferably from 0.05 to 10% by weight, more preferably from 1 to 10% by weight of the cosmetic or dermatological composition. The cosmetic and dermatological compositions according to the invention may furthermore comprise other active agents generally used in cosmetics or dermatology, such as, for example, without limitation: natural perhydrosqualene, sucroesters, borage oil, evening primrose oil, grape seed, vitamin A, vitamin E, allantoin. Advantageously, according to the invention, such active agents may represent from 1% to 20% by weight of the composition, preferably from 10% to 10%. The cosmetic and dermatological compositions according to the invention may also comprise one or more formulating agents, such as preserving agents, solubilizing agents, gelling agents, additives of plant origin, esters, sorbitol, glycerol, bases perfume, and water, for example in an amount sufficient for 100. The compositions according to the invention can be in a form known to those skilled in the field of cosmetics and dermatology, such as for example, a cream, a milk, a lotion, a gel, a mask, without any particular pharmaceutical restriction other than those of compatibility with the combination of the active ingredients of the invention and for application to the skin. The present invention also relates to a cosmetic care method consisting in applying to the skin an association or a composition according to the invention. The application will preferably be in an effective amount. The application is carried out for example daily, for example in the morning, for example for four weeks. The method of care according to the invention makes it possible to strengthen the membrane structures and to tighten the pores of the skin. The present invention also relates to the use of a combination according to the invention or a composition according to the invention for fortifying the skin, stimulating cell renewal, energizing the cells by restarting the hydration process and in Tightening the pores and refining the skin texture Other features and advantages of the present invention will be apparent from the following non-limiting examples.

EXEMPLESEXAMPLES

Sauf indications contraires, dans ces exemples, les % sont exprimés en % en poids/volume, en particulier en g/100 mL. Unless otherwise indicated, in these examples, the% is expressed in% by weight / volume, in particular in g / 100 ml.

Exemple 1 : Crème Velours Amande Pomme Stéarate de sucrose Distéarate de sucrose 1 o Triglycéride caprylique/caprique Tryglycéride caprylique/caprique/succinique Extrait de Pomme Bio de Provence Vinaigre Bio de Pomme de Provence Glycoprotéines d'amande 15 Silicium HE de Coriandre Acétate de Tocophéryle Urée Glycérine 20 Hyaluronate de sodium Gomme Xanthane Parfum Conservateurs Eau 25 qs : quantité suffisante. Pour le parfum, cela correspond 0,5 à 6 0/0 0,5 à 6 0/0 3à15% 3à15% 0,5 à 5% 0,1 à2% 0,5 à 5% 0,001 à 1 % 0,001 à 2 0/0 0,05 à 1 0/0 0,5 à 2 0/0 0,5 à 3% 0,5 à 3% 0,1 à 0,5 0/0 qs qs qs généralement à 0,1 à 2%, pour les conservateur, de 0,01 à 3%, et pour l'eau, en qsp 100 mL. Example 1: Velvet Cream Almond Apple Sucrose Stearate Sucrose Distearate 1 o Caprylic / Capric Triglyceride Caprylic / Capric / Succinic Tryglyceride Apple Extract Bio de Provence Organic Apple of Provence Vinegar Almond Glycoproteins 15 Coriander HE Silicon Tocopheryl Acetate Urea Glycerin 20 Sodium hyaluronate Xanthan gum Fragrance Preservatives Water 25 qs: sufficient quantity. For the perfume, this corresponds to 0.5 to 6 0/0 0.5 to 6 0/0 3 to 15% 3 to 15% 0.5 to 5% 0.1 to 2% 0.5 to 5% 0.001 to 1% 0.001 to 2 0/0 0.05 to 1 0/0 0.5 to 2 0/0 0.5 to 3% 0.5 to 3% 0.1 to 0.5 0/0 qs qs qs generally 0.1 to 2%, for preservatives, from 0.01 to 3%, and for water, in qs 100 ml.

Exemple 2: EVALUATION DU POUVOIR ANTIRADICALAIRE DE L'EXTRAIT AQUEUX DE POMME BIO DE PROVENCE PAR LA METHODE DES DIENES CONJUGUES 1) OBJECTIF DE L'ETUDE Le radical hydroxyle est une molécule très réactive dont la production est activée par les différents stress subis par la peau (pollution, UV, variation de température...). Il est responsable de nombreux dégâts dans la cellule et notamment de la dégradation des membranes par le phénomène de peroxydation lipidique. L'objectif de cette étude est d'apprécier le pouvoir antiradicalaire d'un actif cosmétique par la méthode in vitro des diènes conjugués. Cette méthode permet de tester l'action protectrice du produit sur des liposomes (analogues de membrane) soumis à une attaque de radicaux hydroxyles ('OH). 2) PRINCIPE L'action des radicaux libres sur les acides gras polyinsaturés des membranes est une péroxydation qui conduit à la formation de diènes conjugués absorbant à 233 nm. EXAMPLE 2 Evaluation of the Anti-Radical Potency of the Aqueous Extract of Botanical Apple of Provence by the Method of Conjugated Dienes 1) Objective of the Study The hydroxyl radical is a highly reactive molecule whose production is activated by the various stresses experienced by the patient. skin (pollution, UV, temperature variation ...). It is responsible for numerous cell damage including membrane degradation by lipid peroxidation. The objective of this study is to assess the antiradical power of a cosmetic active by the in vitro method of conjugated dienes. This method makes it possible to test the protective action of the product on liposomes (membrane analogues) subjected to attack by hydroxyl radicals ('OH). 2) PRINCIPLE The action of free radicals on the polyunsaturated fatty acids of the membranes is a peroxidation which leads to the formation of absorbent conjugated dienes at 233 nm.

L'activité des antioxydants est donc dosée par leur capacité à empêcher la peroxydation d'acides gras polyinsaturés contenus dans des liposomes (modèle in vitro se rapprochant le plus de la réalité in vivo). Cette peroxydation est caractérisée par un pic d'absorption à 233 nm. 3) MATERIELS ET METHODES Réactifs : - Tampon phosphate 0,05M pH 6.8 Na2HPO4 : 3.55 g KH2PO4 : 3.4 g H20 qsp 1000 ml - Solution de potassium thiocyanate 0,03 M KSCN : 0,3 g Tampon phosphate qsp 100 ml - Suspension de liposomes Natipides : 3 g Glydant (conservateur) : 0,3 g Eau distillée qsp 100 ml -Solution de FeCl2 à 2,3 x10-3 M - Solution de H202 à 110 volumes diluée au oème - Solution de CaCl2 à 0,5 M - Heptane Protocole : Une solution mère de l'extrait aqueux de Pomme Bio à 20 % dans le tampon phosphate est réalisée. 3 dilutions sont réalisées ce qui correspond, à l'issue du test, à l'évaluation de 3 concentrations finales : 0,01 %, 0,1 % et 1 %. Sont réalisés en parallèle un témoin non traité appelé Témoin Négatif ainsi qu'un contrôle appelé Témoin Positif. Solutions mères Témoin Actifs Liposomes 5 % 5 0/0 Conditions du test : 0/0 KSCN 5% 5% Actif à tester - 5 0/0 Tampon qsp 100 % qsp 100 Les solutions ainsi préparées sont ensuite oxydées par l'introduction de : 25 - 0,001 % de FeCl2 - 0,004 % de H202 Après homogénéisation, les solutions sont laissées dans une étuve à 45 C durant une nuit. 5 ml de chaque solution sont alors prélevés. Les lipides sont précipités par addition de 5 ml de CaCl2. Ce mélange est agité pendant 10 minutes à l'aide d'un barreau aimanté. The antioxidant activity is therefore measured by their ability to prevent the peroxidation of polyunsaturated fatty acids contained in liposomes (in vitro model closest to reality in vivo). This peroxidation is characterized by an absorption peak at 233 nm. 3) MATERIALS AND METHODS Reagents: - 0.05M phosphate buffer pH 6.8 Na2HPO4: 3.55 g KH2PO4: 3.4 g H20 qs 1000 ml - Thiocyanate potassium solution 0.03 M KSCN: 0.3 g Phosphate buffer qs 100 ml - suspension of Natipid liposomes: 3 g Glydant (preservative): 0.3 g Distilled water qs 100 ml -Solution of FeCl2 at 2.3 x10-3 M - Solution of H202 at 110 volumes diluted in the oem - Solution of CaCl2 at 0.5 M Heptane Protocol: A stock solution of the 20% organic apple aqueous extract in phosphate buffer is prepared. 3 dilutions are made, which corresponds to the evaluation of 3 final concentrations: 0.01%, 0.1% and 1%. In parallel are carried out an untreated control called Negative Witness and a control called Positive Control. Stock solutions Control Active Liposomes 5% 5 0/0 Test conditions: 0/0 KSCN 5% 5% Test active ingredient - 5% Buffer qs 100% qs 100 The solutions thus prepared are then oxidized by the introduction of: 0.001% FeCl 2 - 0.004% H 2 O 2 After homogenization, the solutions are left in an oven at 45 ° C. overnight. 5 ml of each solution are then taken. The lipids are precipitated by adding 5 ml of CaCl 2. This mixture is stirred for 10 minutes using a magnetic bar.

On extrait les lipides en ajoutant 10 ml d'heptane et en agitant pendant 15 minutes. Chaque solution est réalisée en double. The lipids are extracted by adding 10 ml of heptane and stirring for 15 minutes. Each solution is done in duplicate.

Mise en évidence : Le témoin négatif génère des radicaux libres, le pourcentage de diènes conjugués entre le produit peroxydé et le produit non peroxydé est maximum. Le témoin positif capte les radicaux libres, le pourcentage de formation de diènes conjugués entre le produit peroxydé et le produit non peroxydé est minimum. L'activité anti-radicalaire se mesure par la diminution du pourcentage de formation de diènes conjugués entre le produit peroxydé et le produit non peroxydé. Demonstration: The negative control generates free radicals, the percentage of conjugated dienes between the peroxide product and the non-peroxide product is maximum. The positive control captures free radicals, the percentage of formation of conjugated dienes between the peroxide product and the non-peroxide product is minimum. The anti-radical activity is measured by the decrease in the percentage of formation of conjugated dienes between the peroxide product and the non-peroxide product.

Cette méthode peut définir la dose active souhaitée. L'absorption (Abs) à 233 nm de chaque solution est ensuite mesurée contre de l'heptane, dans des cuves en quartz. L'absorption à 233 nm de la solution peroxydée, corrigée de l'absorption à la même longueur d'onde de la solution témoin non peroxydée traduit la présence de diènes conjugués et permet de quantifier ces derniers par rapport au témoin non traité (solvant seul). Le pourcentage d'inhibition se calcule comme suit : This method can define the desired active dose. The absorption (Abs) at 233 nm of each solution is then measured against heptane, in quartz tanks. The absorption at 233 nm of the peroxidized solution, corrected for the absorption at the same wavelength of the nonperoxidized control solution, reflects the presence of conjugated dienes and makes it possible to quantify these with respect to the untreated control (solvent alone ). The percentage of inhibition is calculated as follows:

(Abs témoin P û Abs témoin NP) û (Abs actif P- Abs actif NP) X 100 Abs témoin P û Abs témoin NP (Control Abs P - Control Abs NP) - (Active Abs P - Active Abs NP) X 100 Control Abs P - Abs Control NP

P : Peroxydé NP : Non PéroxydéP: Peroxide NP: Not Peroxidized

4) CONCLUSION Au terme de l'essai, dans les conditions expérimentales ainsi définies, il apparaît que l'Extrait Aqueux de Pomme Bio de Provence a un effet anti- radicalaire dès les premières concentrations avec un effet dose. A partir de 1% de l'Extrait Aqueux de Pomme Bio de Provence, l'effet de protection anti-radicalaire est identique au témoin positif. -L'extrait Aqueux de Pomme Bio de Provence, dilué à la concentration de 0,01 0/0 inhibe la péroxydation lipidique de 4 % 3 0/0 - L'extrait Aqueux de Pomme Bio de Provence, dilué à la concentration de 1 0/0 inhibe la péroxydation lipidique de 99,8 % + 0,9 0/0 4) CONCLUSION At the end of the test, under the experimental conditions thus defined, it appears that the aqueous Extract of Apple Bio de Provence has an anti-radical effect from the first concentrations with a dose effect. From 1% of the aqueous Extract of Apple Bio de Provence, the anti-free radical protection effect is identical to the positive control. The Aqueous Extract of Apple Bio de Provence, diluted to a concentration of 0.01%, inhibits the lipid peroxidation of 4% 3%. The aqueous extract of organic apple of Provence, diluted to the concentration of 1%. 0/0 inhibits lipid peroxidation of 99.8% + 0.9%

Exemple 3 : EVALUATION DU POUVOIR ANTIRADICALAIRE DU CONCENTRE VELOURS VISAGE AMANDE POMME PAR LA METHODE 15 DES DIENES CONJUGUES Selon les mêmes principes, matériels et méthodes que ceux décrits dans l'exemple 2 et dans le but d'évaluer le pouvoir antiradicalaire du produit final appelé Concentré Velours Visage Amande Pomme , les résultats suivants ont été obtenus. 20 Au terme de l'essai, dans les conditions expérimentales ainsi définies, il apparaît que le Concentré Velours Visage Amande Pomme a un effet antiradicalaire dès les premières concentrations avec un effet dose. A partir de 1 % de Concentré Velours Visage Amande Pomme l'effet de protection anti-radicalaire est supérieur à 95 %. 25 - Le Concentré Velours Visage Amande Pomme, dilué à la concentration de 0,001 % inhibe la péroxydation lipidique de 1,38 0/0 +5% - Le Concentré Velours Visage Amande Pomme, dilué à la concentration de 0,01 % inhibe la péroxydation lipidique de 12,9 % 30 0,3 0/0 - Le Concentré Velours Visage Amande Pomme, dilué à la concentration de 0,1 % inhibe la péroxydation lipidique de 79,4 % + 4,2 0/0 Le Concentré Velours Visage Amande Pomme, dilué à la concentration de 1 % inhibe la péroxydation lipidique de 95,4 % 0,5 0/0 EXAMPLE 3 EVALUATION OF THE ANTI-RADICAL POWER OF THE CONCENTRATE VELOURS FACE ALMOND APPLE BY THE METHOD OF CONJUGATED DIENES According to the same principles, materials and methods as those described in Example 2 and for the purpose of evaluating the antiradical power of the final product called Concentrated Velvet Apple Almond Face, the following results were obtained. At the end of the test, under the experimental conditions thus defined, it appears that the Velvet Face Almond Apple Concentrate has an antiradical effect from the first concentrations with a dose effect. From 1% of Velvet Face Almond Apple Concentrate the anti-radical protection effect is greater than 95%. 25 - Apple Almond Face Velvet Concentrate, diluted to a concentration of 0.001% inhibits lipid peroxidation of 1.38% or 5% - The Almond Face Velvet Concentrate Apple, diluted to the concentration of 0.01% inhibits peroxidation lipid 12.9% 0.30% - The Almond Face Velvet Concentrate Apple, diluted at a concentration of 0.1% inhibits the lipid peroxidation of 79.4% + 4.2%. The Concentrate Velvet Face Almond Apple, diluted at 1% concentration inhibits lipid peroxidation of 95.4% 0.5%

Exemple 4: EVALUATION IN VITRO DE L'EFFET INHIBITEUR D'UN PRODUIT À L'ESSAI SUR LA DEGRADATION METALLOPROTEASEDEPENDANTE DE L'ELASTINE EXAMPLE 4 INVITRO EVALUATION OF THE INHIBITOR EFFECT OF A TEST PRODUCT ON METALLOPROTEASEDEPENDANT DEGRADATION OF ELASTIN

1) Introduction 1 o L'élastine est synthétisée par les fibroblastes du derme sous la forme d'un précurseur insoluble : la tropoélastine. Les fibres élastiques matures sont des structures complexes composées d'élastine insoluble dans laquelle les chaînes polypeptidiques de tropoélastine sont reliées entre elles par des liaisons pyrimidiques. L'extrême hydrophobicité de cette molécule ainsi que la 15 présence de nombreuses liaisons intercaténaires sont responsables de l'insolubilité de l'élastine, de sa très faible vitesse de renouvellement dans l'organisme (en conditions physiologiques) et de sa résistance à la protéolyse (excepté à celle initiée par les élastases). Au niveau de la peau, plusieurs types d'enzymes hydrolysant l'élastine 20 ont été décrites : l'élastase de neutrophiles (famille des sérine-protéases) et les élastases appartenant à la famille des métalloprotéases. Ces métalloprotéases (MMPs) regroupent une famille de métalloendopeptidases zinc-dépendantes, regroupant au moins 24 membres. Collectivement, cette famille d'enzymes protéolytiques est capable de dégrader 25 l'ensemble des composants de la matrice extra-cellulaire. Dans cette famille d'enzymes, la MMP12 (ou métalloélastase) ainsi que les gélatinases MMP2-MMP9 et la MMP3 sont capables d'hydrolyser l'élastine. Au niveau du derme, les MMPs sont synthétisées par les fibroblastes. Lors des vieillissements (chronologique ou photo-induit), il existe un 30 déséquilibre de la balance entre la synthèse et la dégradation de la matrice extra-celullaire (induite par les MMPs) : dans les cellules sénescentes ou photo-irradiées, on observe, non seulement une augmentation de la synthèse de certaines MMPs, mais aussi une diminution de la synthèse des inhibiteurs endogènes de ces enzymes. Ce déséquilibre entre MMPs et inhibiteurs entraîne une dégradation exacerbée de la matrice extra-cellulaire. Pour rétablir cet équilibre, le contrôle de l'activité des MMPs peut s'effectuer à différents niveaux : transcription des gènes codant pour les MMPs, stabilité des ARNm, activation des pro-enzymes ou inhibition directe de leur activité protéolytique. On évalue les effets du produit sur la dégradation de l'élastine, dégradation catalysée par les MMPs présentes dans des surnageants de culture de fibroblastes stimulés par de l'interleukine 1 (cytokine pro- inflammatoire). Ces effets ont été évalués par la mesure de la fluorescence générée après hydrolyse de la DQ-élastine et libération de peptides fluorescents. En présence d'un inhibiteur de la synthèse et de l'activité de ces MMPs, l'hydrolyse des fibres d'élastine sera moindre, voire nulle. 2) Matériels et méthodes 1) Introduction 1 Elastin is synthesized by dermal fibroblasts in the form of an insoluble precursor: tropoelastin. Mature elastic fibers are complex structures composed of insoluble elastin in which the tropoelastin polypeptide chains are linked together by pyrimidine linkages. The extreme hydrophobicity of this molecule and the presence of numerous inter-chain bonds are responsible for the insolubility of elastin, its very low rate of renewal in the body (under physiological conditions) and its resistance to proteolysis. (except to that initiated by elastases). At the level of the skin, several types of elastin-hydrolyzing enzymes have been described: neutrophil elastase (family of serine proteases) and elastases belonging to the family of metalloproteases. These metalloproteases (MMPs) include a family of zinc-dependent metalloendopeptidases, containing at least 24 members. Collectively, this family of proteolytic enzymes is capable of degrading all the components of the extracellular matrix. In this family of enzymes, MMP12 (or metalloelastase) as well as MMP2-MMP9 gelatinases and MMP3 are capable of hydrolyzing elastin. In the dermis, MMPs are synthesized by fibroblasts. During aging (chronological or photoinduced), there is an imbalance of the balance between the synthesis and the degradation of the extracellular matrix (induced by the MMPs): in the senescent or photo-irradiated cells, one observes, not only an increase in the synthesis of certain MMPs, but also a decrease in the synthesis of endogenous inhibitors of these enzymes. This imbalance between MMPs and inhibitors causes an exacerbated degradation of the extracellular matrix. To restore this balance, the control of the activity of MMPs can be carried out at different levels: transcription of genes coding for MMPs, stability of mRNAs, activation of pro-enzymes or direct inhibition of their proteolytic activity. The effects of the product on elastin degradation, MMP-catalyzed degradation present in fibroblast culture supernatants stimulated with interleukin 1 (proinflammatory cytokine) are evaluated. These effects were evaluated by measuring the fluorescence generated after hydrolysis of DQ-elastin and release of fluorescent peptides. In the presence of an inhibitor of the synthesis and activity of these MMPs, the hydrolysis of elastin fibers will be less or even zero. 2) Materials and methods

2.1 Produits à l'essai - Produit A : hydrosoluble, à conserver à + 4 C (Silicium) - Produit C : huile essentielle (HE Coriandre) - Produit D : hydrosoluble, à conserver à ù 20 C (Glycoprotéines d'amande) 2.1 Products Tested - Product A: Water Soluble, Store at + 4 C (Silicon) - Product C: Essential Oil (HE Coriander) - Product D: Water Soluble, Store at ù 20 C (Almond Glycoproteins)

2.2 Réactifs - Interleukine 1b recombinante humaine : SIGMA , référence 19401 - Déxaméthasone : SIGMA, référence D 1756 - Sérum Albumine Bovine (BSA) : SIGMA , référence A 9647 - DQ-élastine marquée par la fluorescéine : MOLECULAR PROBES, référence E-12056 - APMA (Acetate Amino-Phényl-Mercurique) : SIGMA, référence A9563 ; activateur des MMPs -Milieux de culture : BIOPREDIC INTERNATIONAL. 2.3 Système d'essai Culture en monocouche de fibroblastes adultes humains (plaques 24 puits) à 37 C dans une atmosphère humide contenant 5% de CO2. Isolement des fibroblastes à partir d'un fragment de peau humaine collecté après une opération de plastie abdominale. Emploi des cellules au quatrième passage Culture jusqu'à confluence des monocouches dans le milieu MEM additionné de pénicilline (50 UI/ml), de streptomycine (50 mg/ml) et de SVF (10%,v/v). 2.2 Reagents - Human recombinant interleukin 1b: SIGMA, reference 19401 - Dexamethasone: SIGMA, reference D 1756 - Bovine serum albumin (BSA): SIGMA, reference A 9647 - fluorescein-labeled DQ-elastin: MOLECULAR PROBES, reference E-12056 - APMA (Amino-Phenyl-Mercuric Acetate): SIGMA, reference A9563; activator of MMPs -Culture media: BIOPREDIC INTERNATIONAL. 2.3 Test system Single-layer culture of human adult fibroblasts (24-well plates) at 37 ° C in a humid atmosphere containing 5% CO2. Isolation of fibroblasts from a fragment of human skin collected after an abdominoplasty operation. Use of cells in the fourth passage Culture until confluence of monolayers in MEM medium supplemented with penicillin (50 IU / ml), streptomycin (50 mg / ml) and FCS (10%, v / v).

Milieu d'incubation des monocouches avec l'interleukine 1 : milieu MEM sans rouge de phénol et dans lequel le SVF est éliminé (le sérum contient des inhibiteurs naturels des métalloprotéases). Le SVF est remplacé par de l'albumine bovine à 2 mg/ml. 2.4 Préparation des produits à l'essai Le produit A hydrosoluble est stérilisé par filtration sur membrane 0,22 Mélange M1 v/v Mélange M2 v/v Mélange M3 v/v mm, juste avant l'utilisation. 0/0 ProduitA 0,5% 2.5% 5% ProduitD 2% 2% 2% Produit C 0, 001 % 0,001 % 0,001 Le produit C, correspondant à une huile essentielle, est préalablement dilué au 1/100e dans du DMSO avant ajout dans les différents mélanges à tester. Les 3 mélanges sont réalisés par dilution des différents produits dans le milieu MEM contenant 2 mg/ml de BSA. 2.5 Préparation du produit de référence La déxaméthasone, inhibiteur stéroïdien de la synthèse des MMPs, est préparée à 1 mm en DMSO puis dilué à 10-' M dans le milieu MEM contenant 2mg/ml de BSA. Incubation medium of the monolayers with interleukin 1: MEM medium without phenol red and in which the SVF is eliminated (the serum contains natural inhibitors of metalloproteases). The SVF is replaced by bovine albumin at 2 mg / ml. 2.4 Preparation of test products Water-soluble product A is sterilized by membrane filtration 0.22 Mix M1 v / v Mix M2 v / v Mix M3 v / v mm, just before use. 0/0 ProductA 0.5% 2.5% 5% ProductD 2% 2% 2% Product C 0.001% 0.001% 0.001 Product C, corresponding to an essential oil, is diluted 1: 100 in DMSO before addition in the different mixtures to be tested. The 3 mixtures are made by dilution of the different products in the MEM medium containing 2 mg / ml of BSA. 2.5 Preparation of the Reference Product Dexamethasone, a steroidal inhibitor of the synthesis of MMPs, is prepared at 1 mm in DMSO and then diluted to 10 -5 M in the MEM medium containing 2 mg / ml of BSA.

2.6 Protocole d'incubation Système réactionnel : culture monocouche en plaques 24 puits de fibroblastes humains. A confluence, les cellules sont incubées 18 heures dans du milieu sans SVF, supplémenté avec 2 mg/ml de BSA (volume final de 400 ml de milieu par puits de culture). Les fibroblastes sont ensuite pré-incubés 1 heure avec les mélanges à tester ou le produit de référence avant l'ajout d'interleukine 1 (concentration finale : 75 ng/ml). 2.7 Evaluation des effets A la fin de l'incubation, les surnageants de culture sont prélevés. L'effet des produits à l'essai sur la dégradation de l'élastine est évalué par la mesure de la fluorescence générée après hydrolyse de la DQ-élastine (dans laquelle la fluorescence est absorbée ( quenched en anglais) et libération de peptides fluorescents. Les métalloprotéases sont synthétisées sous forme de zymogènes inactifs ; in situ, ces zymogènes sont plus ou moins activés par des protéases endogènes. In vitro, une activation des MMPs par de dAPMA permet de détecter leur activité protéasique totale. 2.6 Incubation protocol Reaction system: monolayer culture in plates 24 wells of human fibroblasts. At confluence, the cells are incubated for 18 hours in medium without FCS, supplemented with 2 mg / ml of BSA (final volume of 400 ml of medium per culture well). The fibroblasts are then preincubated for 1 hour with the test mixtures or the reference product before the addition of interleukin 1 (final concentration: 75 ng / ml). 2.7 Evaluation of the effects At the end of the incubation, the culture supernatants are taken. The effect of the test products on the degradation of elastin is evaluated by measuring the fluorescence generated after hydrolysis of DQ-elastin (in which the fluorescence is absorbed (quenched in English) and release of fluorescent peptides. The metalloproteases are synthesized in the form of inactive zymogens, in situ these zymogens are more or less activated by endogenous proteases In vitro, activation of the MMPs by dAPMA makes it possible to detect their total protease activity.

Evaluation de l'activité élastolytique contenue dans les surnageants de culture de fibroblastes stimulés par l'interleukine 1 - Répartition de 50 ml de chacun des surnageants de culture dans 3 puits de microplaque 96 puits. Ainsi, chaque condition opératoire (culture Témoin, cultures + Interleukines, cultures + Interleukines + M1, cultures + Interleukine + M2, cultures + Interleukine +M3) a été incubé en triplicate, c'est à dire dans trois puis, pendant 48 heures. - Répartition de tampon concentré afin d'obtenir, en concentration finale, du Tris 50 mM pH 7,4-CaCl2 5mM-NaCI 0,15 M contenant 0,00125 % de Brij 35. - Ajout du substrat DQ-élastine (concentration finale : 20mg/ml) - Ajout d'APMA (concentration finale : 1 mM) dans un des triplicates ; cette condition permet d'évaluer l'activité élastolytique totale (MMP-dépendante et MMP-indépendante) du surnageant testé. - Ajout d'APMA (concentration finale : 1 mM) et d'EDTA (concentration finale : 30mM) dans un autre des triplicates ; cette condition permet d'évaluer l'activité élastolytique MMP-indépendante (I'EDTA est un inhibiteur de l'activité des MMPs). Evaluation of elastolytic activity contained in interleukin 1 stimulated fibroblast culture supernatants. Distribution of 50 ml of each culture supernatant in 3 wells of 96 well microplates. Thus, each operating condition (control culture, cultures + interleukins, cultures + interleukins + M1, cultures + interleukin + M2, cultures + interleukin + M3) was incubated in triplicate, ie in three and then for 48 hours. - Distribution of concentrated buffer in order to obtain, in final concentration, 50 mM Tris pH 7.4-CaCl2 5mM-0.15 M NaCl containing 0.00125% Brij 35. - Addition of DQ-elastin substrate (final concentration : 20mg / ml) - Addition of APMA (final concentration: 1 mM) in one of the triplicates; this condition makes it possible to evaluate the total elastolytic activity (MMP-dependent and MMP-independent) of the supernatant tested. - Addition of APMA (final concentration: 1 mM) and EDTA (final concentration: 30 mM) in another of the triplicates; this condition makes it possible to evaluate the MMP-independent elastolytic activity (EDTA is an inhibitor of the activity of MMPs).

Le troisième réplicate ne contient ni APMA ni EDTA ; cette condition permet d'évaluer l'activité élastolytique intrinsèque du surnageant testé (activité native). A la fin des 48 heures, le surnageant de chaque puits (volume = 400 microlitres) a été divisé en 3 parties de 50 microlitres chacune) qui ont servi à la 1 o détermination de l'activité élastolytique : • 50 microlitres ont été testés directement = activité dégradative directe (= native dans le rapport). • 50 microlitres ont été testés après ajout d'APMA (qui active les MMp secrétées sous forme latente inactive). Cette mesure correspond donc à 15 l'activité totale MMP (MMP déjà activée in situ lors de la culture + activité des MMp secrétées lors de la culture mais sous forme encore inactive) • 50 microlitres ont été testés après ajout d'APMA et d'EDTA : l'EDTA inhibe l'activité des MMP ; ceci sert à montrer que la DQ élastine n'est dégradée que par une activité MMP dépendante. 20 L'apparition de la fluorescence est détectée par un spectrofluorimètre à une longueur d'onde d'excitation de 485 nm et une longueur d'onde d'émission de 520 nm. La fluorescence est déterminée au temps TO (juste après ajout des réactifs) et après incubation de la microplaque 12 heures à 37 C. The third replicate contains neither APMA nor EDTA; this condition makes it possible to evaluate the intrinsic elastolytic activity of the supernatant tested (native activity). At the end of 48 hours, the supernatant of each well (volume = 400 microliters) was divided into 3 parts of 50 microliters each) which were used to determine the elastolytic activity: • 50 microliters were tested directly = direct degradative activity (= native in the report). • 50 microliters were tested after adding APMA (which activates the secret MMp in latent inactive form). This measurement therefore corresponds to the total MMP activity (MMP already activated in situ during the culture + activity of the MMp secreted during the culture but in still inactive form) • 50 microliters were tested after adding APMA and EDTA: EDTA inhibits the activity of MMPs; this serves to show that the elastin DQ is degraded only by a dependent MMP activity. The appearance of the fluorescence is detected by a spectrofluorimeter at an excitation wavelength of 485 nm and an emission wavelength of 520 nm. The fluorescence is determined at time TO (just after adding the reagents) and after incubation of the microplate for 12 hours at 37 C.

25 2.8 Traitement des données - Calcul du delta de variation de la fluorescence entre le temps 12 heures et le temps 0, - Détermination du pourcentage d'inhibition de la dégradation de l'élastine. - Tests statistiques effectués sur les valeurs delta de fluorescence . 30 Test de la différence entre les moyennes des différents groupes par analyse de la variance à un facteur (ANOVA 1 ; a < 0,05) ; groupe témoin versus groupes traités . - Comparaison de la moyenne des groupes traités à celle du groupe témoin correspondant (test de Dunett ; a < 0,1). 2.8 Data Processing - Calculation of the fluorescence variation delta between time 12 hours and time 0, - Determination of percentage inhibition of elastin degradation. - Statistical tests carried out on the fluorescence delta values. Test the difference between the means of the different groups by one-way analysis of variance (ANOVA 1, a <0.05); control group versus treated groups. Comparison of the average of the treated groups with that of the corresponding control group (Dunett's test, a <0.1).

3) Résultats Les surnageants de culture de fibroblastes dermiques humains contiennent très peu d'activité élastolytique métallo-dépendante. L'ajoutd'interleukine 1 (cytokine pro-inflammatoire) augmente de 9,6 fois cette activité élastolytique (dont 94 % sont secrétés sous forme latente inactive). Cette augmentation valide l'étape de stimulation des fibroblastes par l'interleukine 1. 3) Results The culture supernatants of human dermal fibroblasts contain very little metallo-dependent elastolytic activity. The addition of interleukin 1 (proinflammatory cytokine) increases this elastolytic activity by 9.6 times (of which 94% is secreted in latent inactive form). This increase validates the fibroblast stimulation step with interleukin 1.

Testée à 10' M, la dexaméthasone, inhibiteur stéroïdien de la synthèse des MMPs, inhibe de 97.5 % (p<0,01) la dégradation de la DQ-élastine, ce qui valide l'expérimentation. Le produit à l'essai M1 (constitué de 0,5 % de A + 2% de D + 0,001 % de C) inhibe de 30,8 % (p<0,05) la dégradation de la DQ-élastine . Tested at 10 'M, dexamethasone, a steroid inhibitor of MMP synthesis, inhibits the degradation of DQ-elastin by 97.5% (p <0.01), which validates the experiment. The test product M1 (consisting of 0.5% A + 2% D + 0.001% C) inhibits the degradation of DQ-elastin by 30.8% (p <0.05).

Le produit à l'essai M2 (constitué de 2.5 % de A + 2 % de D + 0,001 0/0 de C) inhibe de 25.6 % (p<0,1) la dégradation de la DQ-élastine. Le produit à l'essai M3 (constitué de 5 % de A + 2% de D + 0,001 % de C) inhibe de 50,4 % (p<0,01) la dégradation de la DQ-élastine. Les MMPs sont faiblement exprimées dans les tissus adultes humains normaux. Par contre, leur expression est augmentée lors du vieillissement chronologique et du vieillissement photo-induit. Exprimées et secrétées en plus grande quantité, les MMPs vont alors dégrader les constituants de la matrice extra-cellulaire et y induire des lésions importantes conduisant à la destruction de l'architecture du derme. Ceci se traduit par une perte d'élasticité et de tonicité de la peau résultant en l'apparition de rides. Les produits à l'essai diminue l'expression et/ou l'activité des MMPs possédant une activité élastolytique dans un modèle cellulaire de fibroblastes dermiques adultes humains en culture monocouche (fibroblastes activés pendant 48 Heures par l'IL 1, cytokine pro-inflammatoire qui augmente l'activité élastolytique). Test product M2 (consisting of 2.5% A + 2% D + 0.001% C) inhibits the degradation of DQ-elastin by 25.6% (p <0.1). The test product M3 (consisting of 5% A + 2% D + 0.001% C) inhibits the degradation of DQ-elastin by 50.4% (p <0.01). MMPs are poorly expressed in normal human adult tissues. On the other hand, their expression is increased during chronological aging and photoinduced aging. Expressed and secreted in greater quantities, the MMPs will then degrade the constituents of the extracellular matrix and induce major lesions leading to the destruction of the architecture of the dermis. This results in a loss of elasticity and tone of the skin resulting in the appearance of wrinkles. The products under test decreased the expression and / or the activity of MMPs having elastolytic activity in a human adult dermal fibroblast cell model in monolayer culture (fibroblasts activated for 48 hours by IL-1, pro-inflammatory cytokine which increases the elastolytic activity).

Les résultats obtenus laissent penser que les produits à l'essai permettraient de retarder la formation des rides et par conséquent le vieillissement de la peau. The results suggest that the products under test would delay the formation of wrinkles and consequently the aging of the skin.

Exemple 5 : CONCENTRE VELOURS AMANDE-POMME - tests d'usage L'investigateur a réalisé une évaluation clinique des points indiqués ci-dessous - Aspect des pores : Selon une échelle analogique en 6 points, de 0 à 5. 1 o Plus l'état du paramètre est considéré comme bon, plus la note se rapproche de 0 et inversement. L'analyse statistique porte sur 25 sujets. Le résultat observé est une réduction moyenne des pores de 28 %. QUESTIONNAIRE 3748-27-DE2 15 Qualités cosmétiques et efficacité du produit : Question : Comment trouvez-vous le produit testé, le Concentré Velours Amande-Pomme ? Réponse : (10) Très agréable 40 % 20 Agréable 48 % (12) Pas très agréable 12 % (3) Désagréable 0 0/0 88 % des sujets trouvent le Concentré Velours Amande-Pomme très 25 agréable ou agréable . Le produit convient-t-il à votre type de peau : OUI = 76 % ; NON = 24 %. 30 Pourcentage de satisfaction (effectifs) 96 % (24) Pendant l'utilisation La texture est veloutée et fondante L'application est facile 96 % (24) Le produit pénètre rapidement 76 % (19) Le parfum est agréable 92 % (23) Le parfum est frais 88 % (22) Le parfum est naturel 96 %(24) Le parfum est bien dosé 92 % (23) Le produit laisse un fini non gras sur la peau 68 % (17) Après utilisation 100 %(25) La peau est plus douce La peau est veloutée 96 %(24) 1 o La peau est souple 100 %(25) La peau est élastique 88 % (22) La peau est hydratée 96 %(24) La peau est nourrie 100 %(25) La peau est confortable 92 %(23) 15 Le grain de peau est plus fin 92 %(23) Le grain de peau est plus lisse 92 % (23) Après 4 semaines d'utilisation 88 %(22) Le grain de peau est plus fin Le grain de peau est plus lisse 92 %(23) 20 Les pores sont resserrés 84 %(21) La peau est raffermie 84 %(21) L'élasticité de la peau est améliorée 92 %(23) La peau est protégée 88 %(22) Les ridules sont lissées 64 %(16) 25 La beauté de la peau est préservée 100 %(25) La peau est visiblement plus belle 92 % (23) Exemple 6 : Etude de la tolérance cutanée, du potentiel comédogène et acnéigène du concentré velours amande pomme 30 Tolérance clinique Un examen clinique a été effectué par l'investigateur à To du temps initial et du temps final. Critère d'évaluation Signes objectifs : examen dermatologique du visage, comptage des comédons et des microkystes, comptage des papules et des pustules. Siqnes subjectifs Les sujets ont noté les signes ressentis pendant l'étude. Ces 5 observations ont été analysées par l'investigateur afin de compléter la recherche des signes fonctionnels apparus durant le test. Le tableau suivant présente l'évolution des signes observés au début de l'étude. 0/0 de cas Signe Nombre de Augmenté Diminué Inchangé cas Sensation 5 0 100 0 d'inconfort Sensation de 5 0 100 0 tiraillement Erythème 6 0 33,3 66,7 Sécheresse 4 0 75 25 Rugosité 4 0 100 0 10 Commentaires Sécurité Aucune manifestation clinique significative d'intolérance ou d'allergie n'a entrainé de sortie prématurée d'essai. 15 Signes fonctionnels Les signes fonctionnels d'irritation regroupent les signes suivants : picotements cutanés, prurit et sensation de cuisson d'intensité et/ou durée traduisant une irritation. Le produit n'a induit aucun signe fonctionnel d'irritation. 20 Signes physiques Le produit n'a induit aucun signe physique d'irritation. Example 5: VELVET ALMOND-APPLE CONCENTRATE - use tests The investigator has performed a clinical evaluation of the points indicated below. Pore Aspect: According to a 6 point analog scale, from 0 to 5. 1 o Plus l ' The state of the parameter is considered good, the closer the note is to 0 and vice versa. The statistical analysis covers 25 subjects. The result observed is an average pore reduction of 28%. QUESTIONNAIRE 3748-27-DE2 15 Cosmetic Qualities and Product Efficiency: Question: How do you find the product tested, Almond-Apple Velvet Concentrate? Answer: (10) Very pleasant 40% 20 Pleasant 48% (12) Not very pleasant 12% (3) Unpleasant 0 0/0 88% of subjects find Almond-Apple Velvet Concentrate very pleasant or pleasant. Is the product suitable for your skin type: YES = 76%; NO = 24%. 30 Percentage of satisfaction (actual) 96% (24) During use The texture is velvety and melting The application is easy 96% (24) The product penetrates quickly 76% (19) The fragrance is pleasant 92% (23) The scent is fresh 88% (22) The scent is natural 96% (24) The scent is well dosed 92% (23) The product leaves a non-greasy finish on the skin 68% (17) After use 100% (25) The skin is softer The skin is velvety 96% (24) 1 o The skin is supple 100% (25) The skin is elastic 88% (22) The skin is hydrated 96% (24) The skin is nourished 100% ( 25) Skin is comfortable 92% (23) 15 Skin texture is thinner 92% (23) Skin texture is smoother 92% (23) After 4 weeks of use 88% (22) Skin is thinner Skin texture is smoother 92% (23) 20 Pores are tightened 84% (21) Skin is firmed 84% (21) Skin elasticity is improved 92% (23) Skin is protected 88% (22) Fine lines are smoothed 64% (16 ) The beauty of the skin is preserved 100% (25) The skin is visibly more beautiful 92% (23) Example 6: Study of cutaneous tolerance, of the comedogenic and acneigenic potential of apple almond velvet concentrate 30 Clinical tolerance A clinical examination was performed by the investigator at To initial time and final time. Evaluation criteria Objective signs: dermatological examination of the face, counting of comedones and microcysts, counting of papules and pustules. Subjective subjects The subjects noted the signs felt during the study. These 5 observations were analyzed by the investigator to complete the search for functional signs that appeared during the test. The following table shows the evolution of the signs observed at the beginning of the study. 0/0 of cases Sign Number of Augmented Decreased Unchanged Case Sensation 5 0 100 0 of discomfort Sensation of 5 0 100 0 tightness Erythema 6 0 33.3 66.7 Drought 4 0 75 25 Roughness 4 0 100 0 10 Comments Safety None Significant clinical manifestation of intolerance or allergy resulted in premature release of test. Functional signs The functional signs of irritation include the following signs: skin tingling, pruritus and burning sensation of intensity and / or duration reflecting irritation. The product did not induce any signs of irritation. Physical Signs The product did not induce any physical signs of irritation.

Conclusion Compte tenu de ces observations, le produit présente une très bonne sécurité d'utilisation et un potentiel irritant cutané pratiquement nul en application sur le visage dans les conditions de cette étude. Conclusion Given these observations, the product has a very good safety of use and virtually no skin irritation potential applied to the face under the conditions of this study.

Siqnes fonctionnels Evolution des signes présents au début de l'étude. 100 % des sensations d'inconfort et de tiraillement présentent en début d'étude ont diminué pendant la période d'observation. Functional signs Evolution of the signs present at the beginning of the study. 100% of the feelings of discomfort and tightness at the beginning of the study decreased during the observation period.

Siqnes physiques Evolution des signes présents au début de l'étude. 100 % des cas d'érythème et de sécheresse présents en début d'étude ont diminué ou sont rester inchangés pendant la période d'observation. 100 % des cas de rugosité présents en début d'étude ont diminué pendant la période d'observation. Physical signs Evolution of the signs present at the beginning of the study. 100% of cases of erythema and dryness present at the start of the study decreased or remained unchanged during the observation period. 100% of the cases of roughness present at the beginning of the study decreased during the observation period.

Commentaires Aucun sujet n'a présenté de signe physique traduisant une modification de l'état cutané, ce qui est très bien pour ce type de produit chez ce type de sujets présentant tous types de peau. Comments No subject presented a physical sign reflecting a change in the skin condition, which is very good for this type of product in this type of subjects with all skin types.

Conclusion Par conséquent, le produit est considéré comme confortable en application sur le visage dans les conditions de cette étude. Conclusion Therefore, the product is considered comfortable in application on the face under the conditions of this study.

Potentiel comédoqène du produit Le potentiel comédogène du produit est le suivant : -14,58 Microkystes. Ti 1,27 0,67 / Tf 1,27+ 0,67 = P = 1= Pas de diminution ou d'augmentation. Comedogenic potential of the product The comedogenic potential of the product is the following: -14.58 Microkysts. Ti 1.27 0.67 / Tf 1.27+ 0.67 = P = 1 = No decrease or increase.

Compte tenu de ces résultats, le produit ne présente pas de potentiel comédogène dans les conditions de cette étude. Potentiel acnéigène. Ti 6,88 66,45 /Tf 2,77 33,89 = P = 2,3x10-4 = Diminution significative. Given these results, the product has no potential comedogenic under the conditions of this study. Acneogenic potential. Ti 6.88 66.45 / Tm 2.77 33.89 = P = 2.3x10-4 = Significant decrease.

Le nombre de papules et de pustules a significativement diminué entre le Temps initial et le Temps final. Par conséquent, le produit ne présente pas de potentiel acnéigène dans les conditions de cette étude. The number of papules and pustules decreased significantly between the initial time and the final time. Therefore, the product does not have any acneigenic potential under the conditions of this study.

Conclusion Dans les conditions de cette étude, le produit Concentré velours amandes pomme ^ Présente une bonne tolérance cutanée au niveau du visage chez des sujets présentant tous types de peau. • Peut soutenir la revendication non-comédogène • Peut soutenir la revendication non-acnéigène Conclusion Under the conditions of this study, the product Concentrated velvet apple almonds ^ Has good skin tolerance in the face in subjects with all skin types. • Can support non-comedogenic claim • Can support non-acneigenic claim

Claims

1) Association characterized in that it comprises an apple extract, organic apple vinegar, almond glycoproteins, silicon, and at least one essential oil.

2) Association according to claim 1, comprising coriander essential oil.

3) Association according to claim 1 or 2, wherein the apple extract, preferably biological, represents from 0.5 to 10%, preferably from 0.5 to 5% by weight relative to the total weight of the association.

4) Association according to any one of the preceding claims wherein the apple vinegar, preferably biological, represents from 0.1 to 5%, preferably from 0.1 to 2% by weight relative to the total weight of the association.

5) Association according to any one of the preceding claims wherein the almond glycoproteins represent from 1 to 15%, preferably from 1 to 10% by weight relative to the total weight of the combination.

6) Association according to any one of the preceding claims wherein the silicon is from 0.01 to 3%, preferably from 0.01 to 1% by weight relative to the total weight of the combination.

7) Association according to any one of the preceding claims wherein the at least one essential oil is from 0.01 to 2%, preferably from 0.01 to 1% by weight relative to the total weight of the combination.

8) Association according to any one of the preceding claims further comprising at least one active agent selected from restructuring agents, moisturizing, soothing, regenerating.

9) Cosmetic or dermatological composition comprising an association according to any one of Claims 1 to 8.

10) Composition according to claim 9, wherein the combination represents from 0.05 to 30%, preferably from 0.05 to 10% by weight relative to 1 o total weight of the composition.

11) Composition according to claim 9, wherein the combination represents from 1 to 20%, preferably from 1 to 10% by weight relative to the total weight of the composition.

12) A method of cosmetic care consisting in applying to the skin an association according to claim 1 to 8 or a composition according to claim 9 to 11.

13) Use of an association according to any one of claims 1 to 8 or a composition according to any one of claims 9 to 11 to strengthen the skin, stimulate cell renewal, energize the cells by restarting the process of hydration, tightening the pores and refining the skin texture. 15