FR2997014A1

FR2997014A1 - Composition sterile dermo-injectable

Info

Publication number: FR2997014A1
Application number: FR1260146A
Authority: FR
Inventors: Francois Bourdon; Stephane Meunier
Original assignee: Teoxane SA
Current assignee: Teoxane SA
Priority date: 2012-10-24
Filing date: 2012-10-24
Publication date: 2014-04-25
Anticipated expiration: 2032-10-24
Also published as: PL2912074T3; FR2997014B1; TR201911149T4; HUE044362T2; ES2735017T5; SI2912074T1; KR102178252B1; EP2912074A1; US10307362B2; PT2912074T; US20180140530A1; BR112015009162A2; AU2013336274B2; DK2912074T4; CA2888616C; RU2015118969A; JP6521862B2; WO2014064632A1; BR112015009162B1; EP2912074B2

Abstract

La présente invention concerne un gel d'acide hyaluronique réticulé dérivant de la réticulation de l'acide hyaluronique ou de l'un de ses sels en présence d'au moins une quantité efficace en au moins une polyamine endogène à titre d'agent réticulant, ladite réticulation étant réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s).

Description

La présente invention concerne le domaine des compositions injectables et stériles à base d'acide hyaluronique ou de l'un de ses sels et destinées au traitement des défauts et imperfections de la peau. Naturellement présent dans la peau, l'acide hyaluronique est connu pour ses propriétés viscoélastiques ainsi que sa très grande propension à absorber l'eau. Ses propriétés contribuent en grande partie à l'élasticité de la peau. Compte-tenu de ses propriétés et de ses qualités de biocompatibilité, tolérance et défaut de toxicité, ce composé est ainsi mis à profit depuis désormais plus de 10 ans dans de nombreuses applications relevant des domaines médicaux et cosmétiques, et en particulier des procédures esthétiques. Ainsi, l'acide hyaluronique est utilisé pour le comblement des rides et pour amoindrir, voire effacer, un affaissement local de la structure du derme qu'est une ride ou dépression cutanée, généralement via une injection directe dans le derme, au niveau de la zone considérée.

L'acide hyaluronique non modifié est parfaitement biocompatible et identique à l'acide hyaluronique endogène. Toutefois, l'acide hyaluronique est mis en oeuvre pour l'essentiel sous la forme d'un gel à base d'acide hyaluronique réticulé, et donc sous une forme modifiée compte-tenu de la résistance accrue de cette forme particulière à la dégradation, à la chaleur, et donc à la stérilisation. Ces gels d'acide hyaluronique réticulé peuvent être obtenus par différents procédés de préparation. D'une manière générale, ces procédés requièrent deux étapes principales, la première consistant à hydrater l'acide hyaluronique pour le transformer en un gel aqueux et la seconde visant à réticuler ledit gel aqueux en présence d'un agent apte à induire sa réticulation (également appelé « agent réticulant »). Cet agent est habituellement choisi parmi l'époxyde, l'aldéhyde, le polyaziridyl ou divinyl sulphone (DVS) ou, le butanediol diglycidyl éther (BDDE), et est donc de nature synthétique. A titre illustratif de ces procédés, peuvent notamment être cités ceux décrits dans les documents US 2006/0105022, WO 2006/056204 et US 2007/0036745.

Les gels réticulés actuellement sur le marché et obtenus avec des agents réticulant classiques ont généralement des taux de modification supérieurs à 4 %, voire des taux de modification jusqu'à 10 %.

Par « taux de modification », on entend désigner, au sens de la présente invention, le rapport entre le nombre de moles d'agent réticulant fixé sur l'acide hyaluronique et le nombre de moles d'acide hyaluronique formant ledit gel réticulé. Cette grandeur peut notamment être mesurée par une analyse en RMN 1D du gel réticulé.

Par « nombre de moles d'acide hyaluronique », on entend le nombre de moles de motifs disaccharides répétitifs de l'acide hyaluronique, le motif disaccharide étant composé d'acide D-glucuronique et de D-N-acétylglucosamine liés entre eux par des liaisons glycosidiques alternées beta-1,4 et beta-1,3. Or, dans un souci de se rapprocher le plus possible de l'acide hyaluronique endogène, il serait souhaitable de disposer de gels d'acide hyaluronique réticulés dotés d'un taux de modification plus faible. Certes, des gels réticulés avec des taux de modification plus faibles (i.e. compris entre 1 et 2 %) ont déjà été proposés. Malheureusement, ils s'avèrent très peu cohésifs et possèdent une faible résistance à l'écrasement. Ces défauts se manifestent notamment en rhéologie oscillatoire par un domaine restreint de viscoélasticité (le domaine de viscoélasticité est figuré par l'intervalle de contrainte dans lequel G' reste constant, lors d'une mesure avec balayage en contrainte. L'étendue de ce domaine de viscoélasticité peut notamment être appréciée par la mesure de la contrainte au cross-over, c'est-à-dire la contrainte à laquelle la valeur du G' diminue et égale la valeur du G").

Ce comportement est donc à améliorer pour des applications dans le comblement des rides. Plus précisément, il demeure un besoin de gels d'acide hyaluronique réticulé avec des taux de modification les plus bas possible tout en demeurant satisfaisant sur le plan des propriétés mécaniques manifestées.

Contre toute attente, les inventeurs on constaté qu'un tel gel peut être obtenu lorsqu'on réalise l'étape de réticulation en présence d'un type de composé spécifique. Ainsi, selon un premier de ses aspects, l'invention a pour objet un gel d'acide hyaluronique réticulé dérivant de la réticulation de l'acide hyaluronique ou de l'un de ses sels en présence d'au moins une quantité efficace en au moins une polyamine endogène à titre d'agent réticulant, ladite réticulation étant réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s).

Certes, des polyamines, mais distinctes de celles considérées selon l'invention, ont déjà été proposées pour la formation d'hydrogels d'acide hyaluronique réticulé. Ainsi, les publications de Xiang Mei Yuan et al. (Journal of biomaterials Applications 0(0) 1-9 ; 27 February 2012) et de Junseok Yeom et al. (Bioconjugate Chem., 1991(2) 232-241), ainsi que la demande WO 2012/008722, proposent des hydrogels d'acide hyaluronique (HA) réticulés en présence d' hexaméthyldiamine (HMDA). Toutefois, la polyamine considérée, à savoir l'hexaméthylènediamine (HMDA), est une diamine synthétique et donc pas endogène. Qui plus est, les quantités d'agent réticulant (HMDA) utilisées dans cet art antérieur varient entre 25 % et 72 % et conduisent à des taux de modification très élevés compris entre 5 et 35 %. Par « quantité d'agent réticulant », on entend désigner le rapport entre le nombre de moles de polyamine(s) et le nombre de moles d'acide hyaluronique, utilisées pour la synthèse du gel. Enfin, comme il ressort des exemples ci-après, les gels HA-HMDA s'avèrent significativement moins performants en termes de propriétés mécaniques que ceux obtenus selon l'invention. En ce qui concerne les polyamines endogènes considérées selon l'invention, la demande WO 2008/015249 propose pour sa part de les mettre en oeuvre conjointement à des particules d'acide hyaluronique pour une utilisation topique en tant qu'actif anti-âge et qu'antioxydant. Pour des raisons évidentes, un tel mélange est très différent des gels considérés selon l'invention. La publication de Di Meo et al. (Biomacromolecules, 2006, 7 :1253-60) décrit la formation d'hydrogels par réaction de Ugi ou encore condensation de l'acide hyaluronique et la spermidine. Il s'agit donc d'un mécanisme différent de celui considéré dans la présente invention. Qui plus est, les hydrogels ainsi obtenus et non dédiés à un usage conforme à l'invention sont issus d'un procédé utilisant des quantités d'agent réticulant élevées (entre 5 et 25 %). Les inventeurs ont donc constaté qu'une polyamine endogène constitue un agent réticulant de choix pour accéder à un gel d'acide hyaluronique réticulé conforme aux attentes précitées, à savoir qui présente un taux de modification réduit par rapport à ceux observés avec des agents réticulant habituellement considérés et des propriétés mécaniques ainsi qu'une résistance à la stérilisation particulièrement satisfaisantes.

En effet, les gels réticulés selon l'invention possèdent un taux de modification significativement réduit, à savoir inférieur ou égal à 1 %, tout en demeurant satisfaisant sur le plan des propriétés mécaniques. Un gel réticulé selon l'invention s'avère en outre avantageux en ce qu'il est constitué de composés naturellement présents chez la plupart des organismes vivants et l'homme en particulier. Au regard de ce caractère pseudo-naturel, il répond à une demande croissante des consommateurs en ce sens. Enfin, il est vraisemblable que les propriétés intrinsèques aux polyamines endogènes considérées selon l'invention soient préservées au sein du gel d'acide hyaluronique réticulé obtenu selon l'invention. Or, dans la mesure où ces propriétés relèvent d'un effet antioxydant, voire anti-âge, elles sont particulièrement appréciables dans le cadre de la présente invention. Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet une 15 composition dermatologique injectable et stérile comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un gel d'acide hyaluronique réticulé selon l'invention. Au sens de la présente invention, le terme « peau » englobe la peau du visage, du cou, du décolleté, des mains, du cuir chevelu, de l'abdomen et/ou des jambes mais 20 également les lèvres. Par « stérile », on entend qualifier un environnement apte à garantir aux composés considérés dans la composition selon l'invention et/ou à ladite composition qui les contient l'innocuité requise pour une administration dans ou à travers la peau, notamment intra-épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée. En particulier, il est 25 essentiel que la composition contenant lesdits composés et devant être administrée selon une technique d'injection, par exemple selon la technique de mésothérapie, soit dénuée de tout corps contaminant susceptible d'initier une réaction secondaire indésirable au niveau de l'organisme hôte. Par « injectable », on entend désigner, au sens de la présente invention, une 30 composition dont les propriétés mécaniques sont appropriées pour l'utilisation considérée, à savoir son administration dans ou à travers la peau pour, notamment, le comblement des rides.

Ainsi, une composition selon l'invention est injectable au travers d'une aiguille hypodermique fine (notamment de diamètre inférieur à 18G, voire inférieur à 27G), et présente avantageusement un module élastique (G') compris entre 20 et 1000 Pa, de préférence entre 40 Pa et 400 Pa, avec un angle de déphasage (Ô) inférieur à 450 .

Ce module élastique (G') et l'angle de déphasage (Ô) sont mesurés via le protocole défini ci-après. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet une composition dermatologique ou cosmétique comprenant au moins un gel d'acide hyaluronique réticulé selon l'invention.

Ce mode de réalisation, non limité en terme de voie d'administration, autorise par conséquent l'administration de ladite composition par voie topique. Selon un autre de ses aspects, la présente invention a pour objet un kit comportant : - un conditionnement contenant au moins une dose d'un gel d'acide hyaluronique réticulé selon l'invention ou d'une composition selon l'invention ; et - un dispositif d'injection dans ou à travers la peau ou un dispositif de micro-perforation de la peau, dédié à l'administration de ladite dose. Selon encore un autre de ses aspects, l'invention a pour objet l'utilisation d'un gel réticulé ou d'une composition selon l'invention pour le comblement des défauts du 20 volume de la peau et notamment le comblement des rides. Selon encore un autre de ses aspects, l'invention a pour objet l'utilisation d'un gel réticulé ou d'une composition selon l'invention pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement chronologique et/ou induits par des facteurs externes tels que le stress, la pollution atmosphérique, le tabac ou une exposition prolongée aux ultraviolets 25 (UV). Selon encore un autre de ses aspects, l'invention a pour objet l'utilisation d'un gel réticulé ou d'une composition selon l'invention, pour prévenir et/ou traiter une altération de l'aspect de surface de la peau. Selon encore un autre de ses aspects, l'invention a pour objet l'utilisation d'un 30 gel réticulé ou d'une composition selon l'invention, pour prévenir et/ou traiter une altération des propriétés viscoélastiques ou biomécaniques de la peau.

On entend par « prévention », au sens de la présente invention, le fait de diminuer le risque de survenue d'un phénomène. Selon un autre de ses aspects, l'invention a pour objet un procédé cosmétique de traitement de la peau, comprenant au moins une étape d'administration, dans ou à travers la peau, d'un gel réticulé ou d'une composition selon l'invention. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé de préparation d'un gel d'acide hyaluronique réticulé ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer d'un gel aqueux d'acide hyaluronique ou d'un de ses sels, à l'état non-10 réticulé, b) mettre au contact le gel obtenu en étape a) avec une quantité efficace d'au moins une polyamine endogène, c) réticuler ledit mélange formé en étape b), ladite réticulation étant réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites 15 polyamine(s) endogène(s), et d) récupérer ledit hydrogel réticulé. Selon un mode de réalisation particulier, le procédé comprend en outre une étape e) d'arrêt de la réticulation consistant à exposer le gel réticulé à des conditions propices à l'arrêt de sa réticulation, cette étape pouvant être réalisée antérieurement, 20 conjointement ou postérieurement à l'étape de récupération d). Gel d'acide hyaluronique réticulé Comme indiqué précédemment, un gel d'acide hyaluronique réticulé selon l'invention dérive de la réticulation d'au moins l'acide hyaluronique ou un de ses sels avec, 25 à titre d'agent réticulant, au moins une polyamine endogène, ladite réticulation étant réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s). Les acides hyaluroniques sont des polysaccharides linéaires avec une alternance des motifs d'acide D-glucuronique et de N-acétyl-D-glucosamine. 30 Ils sont présents naturellement dans plusieurs tissus et sont dégradés par des hyaluronidases, présentes dans tout le corps, ou via des mécanismes d'oxydation.

Par « polyamine endogène », au sens de la présente invention, on entend désigner une polyamine naturellement présente dans les organismes vivants et plus particulièrement le corps humain. Une polyamine selon l'invention se distingue par conséquent de l'hexaméthylènediamine (HMDA) qui est une polyamine d'origine synthétique.

A titre représentatif des polyamines endogènes, peuvent être tout particulièrement cités chez les eucaryotes animaux la putrescine (ou 1,4-diaminobutane), la spermidine (ou 1,8-diamino-5-azaoctane) et la spermine (1,12-diamino-5,9- diazadodecane). La spermine est une tétra-amine et est synthétisée à partir de la spermidine.

Spermidine Spermine Avantageusement, la polyamine endogène mise en oeuvre pour l'obtention d'un gel réticulé selon l'invention peut être choisie parmi la spermidine, la spermine, et leur mélange, et mieux la spermine. Cette sélection est d'autant plus avantageuse que la spermine et la spermidine sont impliquées dans de nombreux mécanismes cellulaires fondamentaux, tels que la synthèse de l'ADN et l'expression génique. Utilisées par voie topique, leurs effets bénéfiques sur l'amélioration de l'état de la peau et la diminution des signes du vieillissement ont déjà été décrits (voir notamment la demande W02006/048671). Ces composés sont également considérés comme des antioxydants et des actifs anti-âge de choix.

La réaction de couplage entre l'acide hyaluronique et la/les polyamine(s) endogène(s) se fait par réaction entre une fonction amine et l'acide carboxylique, donnant ainsi lieu à la formation d'une fonction amide. Contre toute attente, les gels réticulés ainsi obtenus, au vu des taux de 5 modification considérés très réduits, manifestent des propriétés mécaniques très satisfaisantes, voire inatteignables au moyen des procédés classiques tels que cités précédemment. Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, un gel réticulé selon l'invention présente avantageusement un taux de modification inférieur ou égal à 1 %, de préférence 10 compris entre 0,1 % et 1 %, et mieux entre 0,4 % et 0,8 %. Comme indiqué précédemment, le « taux de modification » correspond au rapport entre le nombre de moles de polyamine endogène fixées sur l'acide hyaluronique et le nombre de moles d'acide hyaluronique formant ledit gel réticulé. Cette grandeur peut notamment être mesurée par une analyse en RMN 1D du gel réticulé. 15 On rappelle que, par « nombre de moles d'acide hyaluronique », on entend le nombre de moles de motifs disaccharides répétitifs de l'acide hyaluronique, le motif disaccharide étant composé d'acide D-glucuronique et de D-N-acétylglucosamine liés entre eux par des liaisons glycosidiques alternées beta-1,4 et beta-1,3. Selon un mode de réalisation particulier, un gel réticulé selon l'invention est tel 20 qu'il peut comprendre de 0,5 à 40 % en poids d'acide hyaluronique non soumis à la réaction de réticulation, par rapport à la quantité d'acide hyaluronique totale. Selon un autre mode de réalisation particulier, un gel réticulé selon l'invention peut présenter une concentration en acide hyaluronique comprise entre 5 et 30 mg/g. Selon encore un autre mode de réalisation particulier, un gel réticulé selon 25 l'invention peut présenter un module élastique (G') compris entre 20 et 1000 Pa, de préférence entre 40 Pa et 400 Pa. Selon un mode de réalisation particulier, un gel réticulé selon l'invention peut se présenter sous la forme d'un hydrogel viscoélastique majoritairement élastique avec un angle de déphasage (Ô) inférieur à 450 . 30 Selon un mode de réalisation préféré, un gel réticulé selon l'invention peut présenter un module élastique (G') compris entre 20 et 1000 Pa, de préférence entre 40 Pa et 400 Pa, associé à un angle de déphasage (Ô) inférieur à 450 .

En particulier, un gel d'acide hyaluronique réticulé conforme à l'invention peut être injectable au travers d'une aiguille hypodermique de diamètre compris entre 34 G et 18G.

Selon encore un autre mode de réalisation particulier, un gel réticulé selon l'invention est hautement cohésif. Cette caractéristique se manifeste notamment par une contrainte au cross-over en balayage de contrainte élevée, supérieure à 100 Pa. Le module élastique (G', en Pa) et l'angle de déphasage (ô, en °) peuvent être mesurés selon le protocole suivant : Les mesures sont effectuées à 25°C à une fréquence de 1 Hz, avec balayage en contrainte à l'aide d'un rhéomètre Thermo Haake R53 000 avec une géométrie cône-plan 1 °/diamètre 35mm. G' et ô sont relevés à une contrainte de déformation appliquée de 5 Pa, c'est-à-dire dans le domaine de viscoélasticité où G' et ô restent stables. Puis la valeur de la contrainte au cross-over (lorsque G' décroit jusqu'à égaler le module visqueux G") est également relevée. Pour un gel cohésif selon l'invention, cette contrainte au cross-over est donc supérieure à 100 Pa. Enfin, selon un mode de réalisation particulier, un gel réticulé selon l'invention peut présenter une haute résistance à la stérilisation (la perte de G' engendrée par la stérilisation est inférieure à 50 %). La stérilisation peut être effectuée en autoclave (chaleur humide) à T° > 121°C, de manière à obtenir un F0> 15 (valeur stérilisatrice). Comme indiqué précédemment, la réaction de réticulation pour l'obtention d'un gel réticulé selon l'invention est réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s). Par « conditions propices », on entend, au sens de la présente invention, un élément déclenchant ledit couplage. Le choix de cet élément déclenchant relève clairement des compétences de 30 l'homme du métier. D'une manière générale, ce couplage est effectué via au moins un composé dit « activateur », le cas échéant associé à au moins un « auxiliaire de couplage ».

Par exemple, un tel activateur peut avoir pour fonction de rendre plus électrophile le carbone du groupement carboxyle de l'acide hyaluronique et donc de stimuler ainsi sa réactivité à l'égard d'un des groupements amines de la polyamine endogène.

L'activateur peut avantageusement être un agent de condensation, par exemple un sel de pyridinium comme le 2-chloro-1-méthylpyridinium tel que décrit dans le document Magnani, A. et al. (Polymers for Advanced Technologies 1 1, 488-495 (2000), une carbodiimide telle que décrite dans le document Bulpitt, P. & Aeschlimann (J. of Biomed. Materials Res. 47, 152-169 (1999), ou un dérivé de triazine tel que décrit dans le document Bergman et al. (Biomacromolecules 8, 2190- 2195 (2007). De manière préférée, un tel activateur peut être choisi parmi les carbodiimides hydrosolubles telles que le 1-éthy1-3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide (EDC), le 1-éthy1-3-(3- 25 triméthylaminopropyl) carbodiimide (ETC), le 1-cyclohexy1-3-(2- morphilinoéthyl) carbodiimide (CMC), ainsi que leurs sels, et leurs mélanges, de préférence est figuré par l'EDC. De manière préférée, un auxiliaire de couplage, lorsqu'il est présent, peut être choisi parmi le N-hydroxy succinimide (NHS), le N-hydroxy benzotriazole (HOBt), le 3 ,4-dihy dro-3 -hy droxy-4-oxo-1,2,3 -b enzotri azole (HO OBt), le 1-hydroxy-7- azabenzotriazole 2908415 7 (HAt) et le N-hydroxysylfosuccinimide (sulfo NHS), et leurs mélanges, de préférence est figuré par l'HOBt. De manière encore plus préférée, un tel activateur peut être choisi parmi L'EDC, le cas échéant en combinaison avec le HOBt à titre d'auxiliaire de couplage. L'EDC permet d'activer l'acide carboxylique en formant un intermédiaire avec le carboxylate. L'ajout au milieu réactionnel du HOBt permet notamment d'éviter toute épimérisation et de favoriser la réaction. Procédé de préparation d'un gel réticulé Comme indiqué ci-dessus, la présente invention concerne également un procédé de préparation d'un gel d'acide hyaluronique réticulé ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à: a) disposer d'un gel aqueux d'acide hyaluronique ou d'un de ses sels, à l'état non-réticulé, b) mettre au contact le gel obtenu en étape a) avec une quantité efficace d'au moins une polyamine endogène, c) réticuler ledit mélange formé en étape b), ladite réticulation étant réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s), et d) récupérer ledit hydrogel réticulé. Selon un mode de réalisation particulier, le procédé comprend en outre une étape e) d'arrêt de la réticulation consistant à exposer le gel réticulé à des conditions propices à l'arrêt de sa réticulation, cette étape pouvant être réalisée antérieurement, conjointement ou postérieurement à l'étape de récupération d). Selon un mode de réalisation particulier, l'étape de réticulation c) peut être effectuée en présence d'au moins un activateur, éventuellement associé à au moins un auxiliaire de couplage, c'est-à-dire des composés qui stimulent la réactivité d'au moins l'un des deux composés à coupler, de préférence choisis parmi ceux cités précédemment.

Cette étape d'ajout de l'activateur, et éventuellement de l'auxiliaire de couplage, peut donc avantageusement être réalisée conjointement à l'étape de réticulation c). Selon un mode de réalisation particulier, l'acide hyaluronique mis en oeuvre pour l'obtention d'un gel selon l'invention peut être sous forme de sel. De préférence, un sel d'acide hyaluronique peut être choisi parmi le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de zinc, le sel d'argent, et leur mélange, de préférence le sel de sodium. Avantageusement, l'acide hyaluronique mis en oeuvre pour l'obtention d'un gel selon l'invention peut présenter un poids moléculaire moyen allant de 50 000 à 10 000 000 Daltons, de préférence de 500 000 à 4 000 000 Daltons. L'ajustement de la quantité en acide hyaluronique pour la réalisation de la réaction de réticulation relève clairement des compétences de l'homme du métier. Avantageusement, l'acide hyaluronique ou un des ses sels peut être mis en oeuvre dans un procédé de préparation d'un gel réticulé selon l'invention dans une teneur comprise entre 0,5 % et 12 % en poids, de préférence entre 1 % et 4 % en poids, par rapport au poids total du mélange obtenu à l'issue de l'étape b), c'est-à-dire avant réalisation de l'étape c) de réticulation. L'ajustement de la quantité en polyamine(s) endogène(s) pour la réalisation de la réaction de réticulation relève clairement des compétences de l'homme du métier.

La quantité d'agent réticulant correspond au rapport entre le nombre de moles de polyamine(s) et le nombre de moles d'acide hyaluronique, utilisées pour la synthèse du gel. Avantageusement, une ou plusieurs polyamine(s) endogène(s) peut/peuvent être mise(s) en oeuvre dans un procédé de préparation d'un gel réticulé d'acide hyaluronique selon l'invention dans une teneur comprise entre 0,1 % et 3 %, de préférence entre 0,5 % et 1,5 % en nombre de moles de polyamine(s) par rapport au nombre de moles d'acide hyaluronique présentes dans le milieu réactionnel, c'est-à-dire le mélange de l'étape b). Avantageusement, l'/les activateurs(s), le cas échéant associé à un/des auxiliaire(s) de couplage, peut/peuvent être mis en oeuvre dans un procédé de préparation d'un gel réticulé d'acide hyaluronique selon l'invention dans une teneur telle que le nombre de moles d'activateur(s) et, le cas échéant d'auxiliaire(s) de couplage, par rapport au nombre de moles d'acide hyaluronique du milieu réactionnel (n activateur / n HA) soit comprise entre 0,1 et 2, de préférence entre 0,5 et 1,5.

Le gel d'acide hyaluronique réticulé est obtenu en considérant la présence d'au moins une polyamine endogène. En conséquence, la réticulation peut être réalisée en utilisant uniquement ce type de réticulant. Toutefois, cette réticulation peut également être réalisée en considérant la présence simultanée d'au moins un agent réticulant annexe, notamment conventionnel. Avantageusement, cet agent réticulant annexe peut alors être considéré en une quantité significativement réduite par rapport à celles classiquement retenues lorsqu'il est mis en oeuvre à titre d'unique agent réticulant. Cet agent réticulant annexe peut être choisi parmi l'époxyde, l'aldéhyde, le polyaziridyl, les polyamines distinctes des polyamines endogènes, les polyphosphates, le divinyl sulfone (DVS), et leurs mélanges, de préférence choisi parmi les agents réticulants epoxydiques, de préférence bi ou multi-fonctionnels.

De préférence, l'agent réticulant annexe peut être choisi parmi l'époxyde, plus particulièrement parmi le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE), le diépoxy-octane ou le 1,2-bis-(2,3-époxypropy1)-2,3-éthylène, le 1,4-bis(2,3-epoxypropoxy)butane, le 1,4- b i sgly ci dyl oxybutane, le 1,2-bis(2,3-epoxypropoxy)ethylene, le 1-(2,3 -ep oxypropy1)-2,3 - epoxycyclohexane, et leurs mélanges, et mieux le 1,4-butanediol diglycidyl éther (BDDE). Par ailleurs, la présence d'un sel inorganique d'halogénure alcalin peut également être considérée lors de la réaction de réticulation. En effet, de manière inattendue, les inventeurs ont constaté que la présence d'un sel inorganique d'halogénure alcalin lors de la réalisation de la réaction de réticulation permet d'améliorer encore les propriétés rhéologiques du gel réticulé pour un même taux de réticulation. Par « sel d'halogénure alcalin », on entend désigner, au sens de la présente invention, un composé formé d'un cation alcalin et d'un anion figurant nécessairement un atome d'halogène.

Avantageusement, l'atome d'halogène peut être choisi parmi le fluor, le chlore, le brome, l'iode et de préférence est figuré par le chlore. De manière préférée, un sel inorganique d'halogénure alcalin selon l'invention peut être choisi parmi les sels de sodium, les sels de potassium, les sels de cesium, et mieux est figuré par un sel de sodium.

De manière encore plus préférée, un sel inorganique d'halogénure alcalin selon l'invention peut être le NaCl. Le NaC1 a en effet l'avantage d'être physiologiquement acceptable et il s'agit d'un des constituants d'une des matières premières entrant dans la composition des gels d'acide hyaluronique réticulés.

Avantageusement, le/les sel(s) inorganique(s) d' halogénure alcalin peut/peuvent être mis en oeuvre dans un procédé selon l'invention dans une teneur comprise entre 0,5 % et 20 % en poids, de préférence entre 1 % et 10 % en poids, par rapport au poids total du mélange obtenu à l'issu de l'étape b).

Au vu de ce qui précède, un procédé de préparation d'un gel d'acide hyaluronique réticulé selon l'invention requiert, dans un premier temps, de disposer d'un gel aqueux comprenant au moins de l'acide hyaluronique sous une forme non réticulée associé à au moins une polyamine endogène, à titre d'agent réticulant. Par « non réticulé », au sens de la présente invention, on entend désigner un gel aqueux d'acide hyaluronique non réticulé ou non transformé, c'est-à-dire une solution d'acide hyaluronique dont les chaines du polymère ne sont pas connectées entre elles par des liaisons fortes ou covalentes. Plus précisément, le gel aqueux considéré en étape a) peut être au préalable obtenu par mise en présence, au sein d'un réceptacle approprié : (i) d'un milieu aqueux ; (ii) d'au moins l'acide hyaluronique, ou un de ses sels, sous une forme non réticulée ; et (iii) le cas échéant, d'au moins une polyamine endogène; et homogénéisation du mélange ainsi obtenu, l'ordre d'ajout dans le réceptacle desdits composés (i), (ii) et (iii) étant indifférent.

En d'autres termes, dans l'hypothèse où le gel aqueux de l'étape a) considère la présence d'au moins une polyamine endogène, les étapes a) et b) du procédé selon l'invention sont alors réalisées concomitamment. Selon une première variante de réalisation, ce gel aqueux peut être formé par introduction au sein du réceptacle, du milieu aqueux et de l'acide hyaluronique, avec homogénéisation simultanée et/ou consécutive du mélange ainsi formé puis, le cas échéant, ajout de l'agent réticulant avec homogénéisation simultanée et/ou consécutive. Selon une seconde variante de réalisation, ce gel aqueux peut être obtenu par introduction, au sein du réceptacle, du milieu aqueux, de l'acide hyaluronique et de l'agent réticulant, avec homogénéisation simultanée et/ou consécutive du mélange ainsi formé.

Cette seconde variante de réalisation est avantageuse en ce qu'une seule étape d'homogénéisation est mise en oeuvre. Avantageusement, cette étape de formation du gel aqueux peut être réalisée à une température inférieure à 35°C, de préférence à une température allant de 15 à 25°C, et mieux à une température ambiante.

Le gel aqueux considéré en étape a) est avantageusement homogène.

Cette qualité est garantie par une opération d'homogénéisation du gel aqueux qui peut constituer une étape préliminaire à l'étape a). Cette opération, réalisée ou non en présence de l'agent réticulant, a plus particulièrement pour but d'hydrater et d'homogénéiser parfaitement l'acide hyaluronique dans le milieu aqueux et, le cas échéant, l'agent réticulant, et ainsi de contribuer à l'optimisation des qualités du gel réticulé attendu. En effet, pour des raisons évidentes, l'homogénéité du gel réticulé est étroitement liée au caractère homogène du gel avant réticulation. L'homogénéisation est considérée comme satisfaisante lorsque la solution obtenue présente une coloration homogène, sans agglomérat, et une viscosité uniforme. Elle peut avantageusement être réalisée dans des conditions opératoires douces pour prévenir une dégradation des chaines de l'acide hyaluronique. Cette étape est d'autant plus importante lorsque l'acide hyaluronique présente un haut poids moléculaire. L'hydratation d'un tel composé a alors en effet tendance à engendrer la formation d'une solution de haute viscosité au sein de laquelle l'apparition d'agglomérats est couramment observée. Comme il ressort de ce qui précède, le mélange formé en étape b), voire, le cas échéant, le gel aqueux de l'étape a) lorsque celui-ci considère la présence de l'agent réticulant, est ensuite soumis à une réaction de réticulation, illustrée par l'étape c) du procédé de préparation d'un gel réticulé d'acide hyaluronique selon l'invention. Comme indiqué précédemment, cette réticulation est réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s).

Les conditions propices à retenir pour induire ce couplage, et donc la réaction de réticulation, peuvent dépendre du poids moléculaire de l'acide hyaluronique, du milieu aqueux et de la nature de l'agent réticulant, en l'occurrence formé en tout ou partie par une polyamine endogène. Ces conditions propices peuvent notamment se traduire par la présence d'au moins un activateur, le cas échéant associé à au moins un auxiliaire de couplage, comme indiqué ci-dessus.

Comme indiqué précédemment, l'étape d'ajout de l'activateur et, le cas échéant, de l'auxiliaire de couplage, peut de préférence être réalisée conjointement à l'étape de réticulation c). Cependant, selon un mode de réalisation particulier, l'activateur et, le cas échéant, l'auxiliaire de couplage, est/sont ajoutés antérieurement à l'étape de réticulation c), et plus particulièrement antérieurement à l'étape d'ajout d'au moins une polyamine endogène. Selon un autre mode de réalisation, cette étape d'ajout de l'activateur et, le cas échéant, de l'auxiliaire de couplage, est réalisée conjointement à l'étape b) auquel cas l'étape b) est alors réalisée conjointement à l'étape c) de réticulation. Par ailleurs, le degré de réticulation dépend également de la durée de l'étape de réticulation imposée au mélange obtenu à l'issu de l'étape b). Plus le temps sera long, plus il sera important, avec toutefois un optimum à ne pas dépasser, sous risque de dégrader l'acide hyaluronique.

Ainsi, lorsque la réticulation de l'acide hyaluronique est réalisée en présence d'EDC et de l'HOBt, l'étape c) de réticulation peut être réalisée sur une durée allant de 30 minutes à 72 heures, préférentiellement de 3 à 24 heures. Comme exposé précédemment, l'arrêt de la réticulation (étape e) peut intervenir antérieurement, conjointement ou postérieurement à l'étape de récupération du gel d). Une telle étape e) peut requérir d'exposer le gel réticulé ou en cours de réticulation, voire le réceptacle le contenant, à des conditions propices à l'arrêt de celle-ci, ou encore à des conditions capables de stopper la formation de liaisons entre les différentes chaines de polysaccharides.

Cette étape peut être déclenchée naturellement si l'ensemble des réactifs sont consommés lors de l'étape c), ou favorisée par une étape de purification qui ramène le gel à pH physiologique et élimine les réactifs résiduels non réagis. Selon une variante de réalisation préférée, l'étape e) est réalisée antérieurement à l'étape d).

Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le procédé selon l'invention met en oeuvre (i) du hyaluronate de sodium, (ii) de la spermine, à titre d'agent réticulant, et (iii) de l'EDC, à titre d'activateur, en combinaison avec le HOBt, à titre d'auxiliaire de couplage. Pour des raisons évidentes, le gel réticulé obtenu à l'issu du procédé de l'invention n'est généralement pas directement injectable en ce que la formulation aqueuse correspondante peut ne pas être compatible avec les conditions physiologiques ni dotée d'un pH convenable. Ainsi, une ou des étapes additionnelles, connues de l'homme du métier, sont susceptibles d'être mis en oeuvre.

Plus particulièrement, une étape de purification du gel selon l'invention permet de ramener ce dernier à pH physiologique et d'éliminer les réactifs résiduels non réagis. Cette étape de purification peut notamment être figurée par une étape de dialyse. Qui plus est, des étapes ultérieures d'homogénéisation, d'incorporation d'acide hyaluronique non réticulé, et éventuellement de fractionnement, sont également susceptibles d'être réalisées afin d'améliorer encore les qualités de l'implant, selon le savoir-faire de l'homme de l'art. Le gel doit être formulé physiologiquement grâce à la présence de sels en quantités équivalentes à celles du milieu injecté. Au final, l'hydrogel ainsi obtenu peut être rempli en seringues dans des conditions d'atmosphère contrôlées, lesdites seringues pouvant ensuite subir une étape de stérilisation, de préférence par voie thermique. Composition Selon un autre de ses aspects, comme indiqué ci-dessus, la présente invention concerne également une composition dermatologique injectable et stérile comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un gel d'acide hyaluronique réticulé tel que défini ci-dessus. De par son caractère injectable, une composition selon l'invention comprend donc nécessairement un milieu physiologiquement acceptable. Par « milieu physiologiquement acceptable », on entend un milieu dénué de toxicité et compatible avec l'injection et/ou l'application de la composition dans ou à travers les matières kératiniques.

La composition peut comporter un solvant ou un mélange de solvants physiologiquement acceptables. La composition peut comporter un milieu aqueux physiologiquement acceptable.

A titre de milieu aqueux convenant à l'invention, on peut par exemple mentionner l'eau. A titre d'agents isotoniques convenant à la préparation d'une composition convenant à l'invention, il peut être mentionné les sucres et le chlorure de sodium. Selon encore un autre de ses aspects, comme indiqué ci-dessus, la présente 10 invention concerne une composition dermatologique ou cosmétique comprenant au moins un gel d'acide hyaluronique réticulé selon l'invention. Ce mode de réalisation, non limité en termes de voie d'administration, autorise par conséquent l'administration de ladite composition par voie topique. 15 Actifs additionnels Une composition selon l'invention peut comporter en outre au moins un actif additionnel compatible avec une utilisation dans le domaine des compositions stériles et inj ectables. Parmi les actifs additionnels utilisables dans la présente invention, on peut 20 mentionner les antioxydants, les acides aminés, les vitamines, les minéraux, les acides nucléiques, les co-enzymes, les dérivés adrénalines, et leurs mélanges. A titre d'antioxydants, on peut notamment citer le glutathion, l'acide ellagique, la spermine, le resveratrol, le rétinol, la L-carnitine, les polyols, les polyphénols, les flavonols, les théaflavines, les catéchines, la caféine, l'ubiquinol, l'ubiquinone, et leur 25 mélange. A titre d'acides aminés, on peut notamment citer l'arginine, l'isoleucine, la leucine, la lysine, la glycine, la valine, la thréonine, la proline, la méthionine, l'histidine, la phénylalanine, le tryptophane, et leur mélange. A titre de vitamines ou leurs dérivés, on peut notamment citer les vitamines E, 30 A, C, B, plus particulièrement les vitamines B6, B8, B4, B5, B9, B7, B12, et mieux la pyridoxine.

A titre de minéraux, on peut citer notamment citer les sels de zinc, les sels de magnésium, les sels de calcium, les sels de potassium, les sels de manganèse, les sels de sodium, et leur mélange. A titre d'acides nucléiques, on peut citer notamment les dérivés de l'adénosine, de la cytidine, de la guanosine, de la thymidine, de la cytodine, et leur mélange. A titre de co-enzymes, on peut citer notamment la coenzyme Q10, CoA, NAD, NADP, et leur mélange. A titre de dérivés adrénalinés, on peut citer notamment l'adrénaline, la noradrénaline.

Par ailleurs, une composition selon l'invention peut en outre comprendre tout excipient habituellement utilisé dans le domaine technique considéré, tel que par exemple le sodium dihydrogénophosphate mono- et/ou di-hydraté, et le chlorure de sodium, et ce, dans des teneurs physiologiquement adaptées.

Les quantités d'actifs additionnels et/ou excipients dépendent bien évidemment de la nature du composé considéré, de l'effet recherché, et de la destination de la composition selon l'invention. Ces paramètres relèvent des compétences générales de l'homme de l'art. Avantageusement, une composition selon l'invention peut comprendre de 20 2 ppm à 10 000 ppm, de préférence de 5 à 1000 ppm, et mieux de 50 à 500 ppm d'actifs additionnels et/ou excipients par rapport au poids total de ladite composition. Par ailleurs, il est connu que l'injection d'une composition dédiée au comblement des rides génère souvent une sensation douloureuse pour le patient. 25 Ainsi, selon un mode de réalisation particulier, une composition selon l'invention peut en outre comprendre au moins un agent anesthésique. Un agent anesthésique a précisément pour avantage d'atténuer, voire de supprimer, la sensation douloureuse ressentie par le patient au moment de et/ou consécutivement à l'administration d'une composition conforme à l'invention. 30 Qui plus est, les inventeurs ont constaté que la présence d'un tel composé ne soulève pas de risque d'incompatibilité avec les autres composés mis en oeuvre dans une composition selon l'invention, et notamment avec l'acide hyaluronique.

Un anesthésique utilisable dans la présente invention peut être choisi parmi l'ambucaïne, l'amolanone, l'amylocaïne, l'articaïne, la benoxinate, la benzocaïne, la betoxycaïne, le biphénamine, la bupivacaïne, la butacaïne, le butamben, la butanilicaïne, le butéthamine, la butoxycaïne, la carticaïne, la chloroprocaïne, le cocaéthylène, la cocaïne, la cyclométhycaïne, la dibucaïne, la diméthysoquine, la diméthocaïne, le dipérodone, la dycyclonine, l'ecgonidine, l'ecgonine, le chlorure d'éthyle, la étidocaïne, la beta-eucaïne, l'euprocine, la fénalcomine, la formocaïne, l'hexylcaïne, l'hydroxytétracaïne, l'isobutyl paminobenzoate, la leucinocaïne mésylate, le lévoxadrol, la lidocaïne, la mépivacaïne, la méprylcaïne, la métabutoxycaïne, le chlorure de méthyle, la myrtécaïne, la naépaïne, l'octacaïne, l'orthocaïne, l'oxéthazaïne, la paréthoxycaïne, la phénacaïne, le phénol, la pipérocaïne, la piridocaïne, le polidocanol, la pramoxine, la prilocaïne, la procaïne, la propanocaïne, la proparacaïne, la propipocaïne, la propoxycaïne, la pseudococaïne, la pyrrocaïne, la ropivacaïne, l'alcool salicylique, la tétracaïne, la tolycaïne, la trimécaïne, la zolamine, ou un de leurs sels.

Plus particulièrement, un anesthésique utilisable dans la présente invention peut être choisi parmi l'articaïne, la benzocaïne, la bupivacaïne, la chloroprocaïne, la lidocaïne, la mépivacaïne, la prilocaïne, la procaïne, la ropivacaïne, et la tétracaïne. De préférence, l'anesthésique peut être la lidocaïne, et mieux le chlorhydrate de lidocaïne.

Une composition selon l'invention peut avantageusement comprendre de 0,01 % à 1 % en poids, de préférence de 0,1 % à 0,5 % en poids d'anesthésique(s), par rapport au poids total de ladite composition. Selon un mode de réalisation particulier, un gel ou une composition selon l'invention, outre l'acide hyaluronique sous une forme réticulée, peut également comprendre de l'acide hyaluronique sous une forme non réticulée. Une telle association d'acide hyaluronique sous forme libre et réticulée a pour conséquence l'hydratation et le maintien du volume de la peau, de façon immédiate. De plus, elle induit une relance fibroblastique du derme, principalement due à la présence de l'acide hyaluronique libre, et cette relance fibroblastique est prolongée dans le temps au fur et à mesure de la dégradation in vivo de l'acide hyaluronique réticulé. D'un point de vue fonctionnel, la présence d'acide hyaluronique non réticulé permet d'améliorer significativement les forces d'extrusion du gel à travers une aiguille, facilitant ainsi la force à appliquer par le praticien pour injecter le produit. Administration du gel d'acide hvaluronique réticulé ou de la composition dermatologique injectable et stérile Un gel d'acide hyaluronique réticulé ou une composition selon l'invention peut être injecté(e) en utilisant un quelconque des modes connus de l'homme du métier. Notamment, un gel ou une composition selon l'invention peut être administré(e) au moyen d'un dispositif d'injection adapté à une injection intra épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée. Le dispositif d'injection peut être choisi parmi une seringue, un ensemble de micro seringués, un dispositif laser, hydraulique, un pistolet d'injection, un dispositif d'injection sans aiguille, ou un rouleau à micro-aiguilles. De préférence, le dispositif d'injection peut être choisi parmi une seringue ou un ensemble de micro seringués. De préférence, un tel moyen peut être une aiguille hypodermique ou une canule. Une aiguille ou canule selon l'invention peut présenter un diamètre variant de 18 à 34 G, de préférence entre 25 et 32 G, et une longueur variant de 4 à 70 mm, et de 20 préférence de 4 à 25 mm. L'aiguille ou canule est avantageusement à usage unique. Avantageusement, l'aiguille ou canule est associée à une seringue ou tout autre dispositif permettant de délivrer à travers l'aiguille ou la canule ladite composition injectable. Selon une variante de réalisation, un cathéter peut être intercalé entre 25 l'aiguille/la canule et la seringue. De façon connue, la seringue peut être actionnée manuellement par le praticien ou bien par un support de seringue comme les pistolets. Kit 30 Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne un kit comportant : - un conditionnement contenant au moins une dose d'un gel d'acide hyaluronique réticulé ou d'une composition selon l'invention ; et - un dispositif d'injection dans ou à travers la peau ou un dispositif de micro perforation de la peau, dédié à l'administration de ladite dose.

Le conditionnement est approprié au stockage d'au moins une dose du gel ou de la composition selon l'invention. Le conditionnement peut être agencé pour permettre par ailleurs le prélèvement dudit gel ou de ladite composition. Ainsi, selon un premier mode de réalisation, ledit conditionnement est sécable pour permettre le prélèvement dudit gel ou de ladite composition. Par exemple, il peut se présenter sous la forme d'une ampoule, d'un flacon ou d'une capsule, en particulier une capsule molle. De préférence, le conditionnement peut être monodose et/ou disposer d'une extrémité sécable.

Selon un deuxième mode de réalisation, ledit conditionnement dispose d'un opercule permettant une fermeture hermétique lors du stockage et transperçable par une aiguille ou canule au moment de l'utilisation. Concernant le dispositif d'injection, il peut être tel que défini précédemment et être de préférence dédié à un usage unique.

De préférence, le dispositif d'injection est adapté à une injection intra épidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée. De manière préférentielle, ledit dispositif est adapté à la technique de la mésothérapie.

Utilisation Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'un gel d'acide hyaluronique réticulé ou d'une composition selon l'invention, pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement chronologique et/ou induits par des facteurs externes tels que le stress, la tabac et/ou une exposition prolongée aux UV.

Un gel d'acide hyaluronique réticulé ou une composition selon l'invention sont également avantageux en ce qu'ils peuvent être mise en oeuvre pour prévenir et/ou traiter une altération de l'aspect de surface de la peau, une altération des propriétés viscoélastiques ou biomécaniques de la peau, une diminution du métabolisme énergétique cellulaire, une déshydratation de la peau. Un gel d'acide hyaluronique réticulé ou une composition selon l'invention sont encore avantageux en ce qu'ils peuvent être mis en oeuvre pour le comblement des défauts de volume de la peau, notamment des rides, et/ou restaurer l'éclat de la peau. Procédé de traitement Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne un procédé cosmétique de traitement de la peau, comprenant au moins une étape d'administration, dans ou à travers la peau, d'un gel d'acide hyaluronique réticulé ou d'une composition selon l'invention. Selon un mode de réalisation particulier, l'étape d'administration peut être réitérée sur tout ou partie de la surface à traiter. La répétition des injections permet de créer un nappage de sorte que la composition selon l'invention est distribuée de manière homogène dans la région cutanée à traiter. Selon un mode particulier de réalisation, les régions cutanées avantageusement traitées par un procédé de l'invention peuvent être la peau et les lèvres, et en particulier la peau du visage, du cou, du décolleté, des mains, du cuir chevelu, de l'abdomen et/ou des j amb es.

Un gel ou une composition selon l'invention peut avantageusement être injectée au niveau des rides et des ridules. Il y a plusieurs techniques d'injection. A titre de techniques utilisables, peut être fait mention de la technique dite « multi-bolus » qui consiste à réaliser des injections dans le derme superficiel en moyenne de 0,05m1 d'une composition selon l'invention appelée bolus, lesdits bolus étant espacés d'environ 1 cm chacune. Cette technique est notamment recommandée pour le visage et le décolleté. Peut également être fait mention de la technique dite « retrotraçante » qui consiste à réaliser des injections linéaires traçantes dans le derme superficiel, à introduire l'aiguille avec un angle de 45° le long de la dépression cutanée puis déposer la composition selon l'invention dans le derme superficiel tout en retirant l'aiguille doucement.

Enfin, il peut être fait mention de la technique dite « multi-poncture » qui consiste à réaliser de multiples injections en rafale de faibles quantités de composition selon l'invention dans l'épiderme. Les points d'injection sont très rapprochés, par exemple tous les 3 mm environ, et répartis uniformément sur la surface à traiter ou en formant une ligne le long de la ride. Cette technique est notamment recommandée pour unifier le teint. Le procédé de traitement conforme à la présente invention s'avère également avantageux pour prévenir et/ou traiter les signes cutanés du vieillissement ou du photo-vieillissement, notamment choisis parmi la peau ridée, la peau présentant une altération de ses propriétés viscoélastiques ou biomécaniques, la peau présentant une altération dans la cohésion de ses tissus, la peau amincie, la peau présentant une altération de son aspect de surface le relâchement de la peau. Le procédé de traitement conforme à la présente invention s'avère en outre avantageux pour prévenir et/ou traiter une diminution du métabolisme énergétique cellulaire ou une déshydratation de la peau.

Le procédé de traitement conforme à la présente invention s'avère également avantageux pour le comblement des défauts de volume de la peau, notamment des rides, et/ou restaurer l'éclat de la peau. Le procédé de traitement conforme à la présente invention peut de préférence être effectué dans une région épidermique, dermo-épidermique et/ou dermique, voire sous-20 cutané. Dans toute la présente demande, l'expression « comportant un » est synonyme de « comportant au moins un » et « compris entre ... et... » et « allant de ... à... » doivent s'entendre bornes incluses. 25 Les exemples suivants sont donnés à titre illustratif et non limitatif de la présente invention. EXEMPLES Exemple 1 : Protocole de préparation d'un gel d'acide hyaluronique réticulé 30 avec de la spermine à titre d'agent réticulant De l'acide hyaluronique est dissout à une concentration de 3 % (en poids) dans de l'eau. Après obtention d'une solution homogène, une solution contenant la spermine (celle > 96 % commercialisée par la Société Sigma-Aldrich sous la dénomination Sigma), de l'EDC à titre d'activateur (N-(3-Diméthylaminopropy1)-N'-éthylcarbodiimide chlorhydrate > 98,0 % commercialisée par la Société Sigma-Aldrich sous la dénomination Fluka) et de l'HOBt à titre d'auxiliaire de couplage (1-Hydroxybenzotriazole hydrate , > 97 % commercialisée par la Société Sigma-Aldrich sous la dénomination Aldrich) est ajoutée à la solution de l'acide hyaluronique. Le volume de cette solution est défini de façon à obtenir un mélange global à 2,3 % en acide hyaluronique. Le pH de cette solution est ajusté de façon à obtenir un pH du mélange global compris entre 5,5 et 6,5 avant réaction, par utilisation de solution diluée de HC1 ou de 10 NaOH. Les quantités de réactifs sont ajustées selon le taux de modification désiré. Elles varient entre 5.101 et 2.10-2 mol./mol. d'unités répétitives d'acide hyaluronique pour la polyamine, et entre 0,5 et 1 mol./mol. d'unités répétitives d'acide hyaluronique pour l'activateur et l'auxiliaire de couplage impliqués dans la réaction de 15 couplage. Les stoechiométries utilisées sont indiquées dans les exemples donnés. Pour la réticulation, le gel aqueux est exposé de 7 à 24H à 25°C. Après réticulation, le gel obtenu est purifié par plusieurs bains de dialyse sur une durée de 2 à 3 jours et, si nécessaire, ajusté à pH physiologique. Le gel aqueux obtenu après lavage comporte une concentration proche de 20 20 mg/g en acide hyaluronique. Afin de faciliter les forces d'extrusion pour le passage du gel à travers une aiguille, de l'acide hyaluronique non réticulé est alors incorporé et homogénéisé au gel obtenu ci-dessus. La stérilisation est effectuée en autoclave (chaleur humide) à T° > 121°C, de 25 manière à obtenir un F0> 15 (valeur stérilisatrice). Exemple 2 : Préparation de gels d'acide hyaluronique réticulés conformes à l'invention (avec spermine) et comparatif (avec HMDA) Trois gels réticulés d'acide hyaluronique sont préparés sur la base du protocole 30 défini en exemple 1 ci-dessus. Pour ces trois gels, n HOBt = n EDC = n HA.

Ces trois gels diffèrent entre eux par la nature de la polyamine considérée et/ou le rapport « polyamine/acide hyaluronique », comme illustré dans le tableau 1 ci-après. La dernière colonne [HA] indique la concentration en acide hyaluronique des gels obtenus.

Tableau 1 : Gel réticulé Agent réticulant Stoechiométrie : [HA], mg/g n polyamine / n HA A (Comparatif) HMDA* 0,100 21 B Spermine 0,020 21 C Spermine 0,010 21 * HMDA=HexaMethylène DiAmine n HOBt = n EDC = n HA 1) Caractérisation du taux de modification des gels A, B et C Protocole de préparation des échantillons Les gels A, B et C sont lavés/précipités à l'aide d'isopropanol. Les solides obtenus sont séchés puis solubilisés dans D20, et traités en présence de hyaluronidase (type VI-S, Sigma, 3kU) dans 1 ml de D20 pour dégradation du gel, afin d'obtenir une matrice liquide pour analyse.

Le mélange homogène obtenu est alors analysé en RMN 1H. Mesure du taux de modification La caractérisation des taux de modification respectifs aux gels A, B et C se fait par spectroscopie par RMN.

Pour les polyamines, les pics des protons 1H de l'HMDA à 1,34 ppm et de la spermine à 1,73 ppm sont retenus comme références. HMDA = 1 ,34 ppnn Spermine = 1,73 ppm H H H NH2 H H2 H H H2 N Le taux de modification de chacun des trois gels réticulés d'acide hyaluronique est ensuite caractérisé à partir de l'intégrale de ces pics de références selon la formule suivante : Intégrale 6H _référence) Taux de Modification - X X : nombre de protons du pic retenu pour la mesure, soit 4 pour la spermine et l'HMDA. Ô-Acétamide : déplacement correspondant au pic acétamide de l'HA, donc comportant 3 protons. 10 L'analyse RMN est réalisée sur spectromètre Bruker Avance 1 opérant à 400 MHz (111). Les différents résultats et observations sont résumés dans le tableau 2 suivant : Tableau 2 GEL SII-ref (ppm) X Taux de modification (%) A (Témoin HMDA) 1,34 4 5,0 B 1,73 4 0,7 C 1,73 4 1,0 15 Du tableau 2 ci-dessus, il ressort que les taux de modifications des gels réticulés B et C conformes à l'invention sont, comparativement à ceux du gel A témoin, significativement réduits. L'acide hyaluronique réticulé avec la spermine est donc moins modifié que celui résultant de la réticulation avec l'HMDA. 20 2) Caractérisation des propriétés mécaniques a) Les propriétés viscoélastiques des gels A, B et C sont caractérisées via la mesure de leur module élastique G' (en Pa) et de leur angle de déphasage ("), mesurés à 1Hz pour une contrainte de 5 Pa. 25 Le tableau 3 ci-après représente les valeurs mesurées. (Intégrale 6Acétamide ) 3 Tableau 3 Gel Balayage Amplitude (Cône/Plan) G' (Pa) mesuré à -c = Ô (°) mesuré à -c (Pa) Pa -c = 5 Pa mesuré au cross-over A (Témoin HMDA) 64 48,2 90 B 318 10,8 510 C 227 18,1 590 Le gel A témoin, bien que réticulé avec une polyamine (HMDA), n'est pas 5 satisfaisant car, bien que le taux de modification de l'acide hyaluronique soit important, ses propriétés mécaniques sont faibles. Malgré un taux de modification réduit, les gels B et C présentent en revanche un comportement rhéologique significativement amélioré comparativement au gel A comparatif b) La résistance à la stérilisation des gels A, B et C est déterminée via la caractérisation de la perte de module élastique G' (en Pa) de ces gels après exposition à une stérilisation effectuée en autoclave (chaleur humide) à T° > 121°C, de manière à obtenir un F0> 15 (valeur stérilisatrice).

Le tableau 4 ci-après représente les valeurs mesurées. Tableau 4 Gel Balayage Amplitude (Cône/Plan) mesures à t = 5 Pa Perte G' (%) A (Témoin 60 % HMDA) B 23% C 24% Le gel A témoin n'est là encore pas satisfaisant dans la mesure où il présente une mauvaise résistance à la stérilisation comparativement aux gels B et C.

Claims

REVENDICATIONS1. Gel d'acide hyaluronique réticulé dérivant de la réticulation de l'acide hyaluronique ou de l'un de ses sels en présence d'au moins une quantité efficace en au moins une polyamine endogène à titre d'agent réticulant, ladite réticulation étant réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s).
2. Gel selon la revendication 1, caractérisé en ce que la polyamine endogène est choisie parmi la spermidine, la spermine, et leur mélange, et mieux la spermine.
3. Gel selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le couplage est effectué en présence d'au moins un activateur, et le cas échéant associé à au moins un auxiliaire de couplage.
4. Gel selon la revendication précédente, caractérisé en ce que ledit activateur est choisi parmi les carbodiimides hydrosolubles telles que le 1-éthy1-3-(3- diméthylaminopropyl) carbodiimide (EDC), le 1-éthy1-3-(3- 25 triméthylaminopropyl) carbodiimide (ETC), le 1-cyclohexy1-3-(2-morphilinoéthyl) carbodiimide (CMC), ainsi que leurs sels, et leurs mélanges, de préférence est figuré par l'EDC.
5. Gel selon la revendication 4, caractérisé en ce que l'auxiliaire de couplage, lorsqu'il est présent, est choisi parmi le N-hydroxy succinimide (NHS), le N- hydroxy benzotriazole (HOBt), le 3,4-dihydro-3-hydroxy-4-oxo-1,2,3-benzotriazole (HOOBt), le 1-hydroxy-7-azabenzotriazole 2908415 7 (HAt) et le Nhydroxysylfosuccinimide (sulfo NHS), et leurs mélanges, de préférence est figuré par l'HOBt.
6. Gel selon les revendications 3 à 5, caractérisé en ce que le couplage est effectué en présence d'au moins l'EDC et l'HOBt.
7. Gel selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit gel présente un taux de modification inférieur ou égal à 1 %, de préférence compris entre 0,1 % et 1 %, et mieux entre 0,4 % et 0,8 %.
8. Gel selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit gel présente un module élastique (G') compris entre 20 et 1000 Pa, de préférence entre 40 Pa et 400 Pa, associé à un angle de déphasage (Ô) inférieur à 450 .
9. Gel selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit gel présente une contrainte au cross-over en balayage de contrainte supérieure à 100 Pa.
10. Procédé de préparation d'un gel d'acide hyaluronique réticulé ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à: a) disposer d'un gel aqueux d'acide hyaluronique ou d'un de ses sels, à l'état non-réticulé, b) mettre au contact le gel obtenu en étape a) avec une quantité efficace d'au moins une polyamine endogène, c) réticuler ledit mélange formé en étape b), ladite réticulation étant réalisée dans des conditions propices au couplage dudit acide hyaluronique et de ladite/desdites polyamine(s) endogène(s), et d) récupérer ledit hydrogel réticulé.
11. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que ledit procédé comprend en outre une étape e) d'arrêt de la réticulation consistant à exposer le gel réticulé à des conditions propices à l'arrêt de sa réticulation, cette étape pouvant être réalisée antérieurement, conjointement ou postérieurement à l'étape de récupération d).
12. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 11, caractérisé en ce que la/les polyamine(s) endogène(s) est/sont choisie(s) parmi la spermidine, la spermine, et leur mélange, et mieux la spermine.
13. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisé en ce que la/les polyamine(s) endogène(s) est/sont mise(s) en oeuvre dans une teneur comprise entre 0,1 % et 3 %, de préférence entre 0,5 % et 1,5 %, en nombre de moles de polyamine(s) par rapport au nombre de moles d'acide hyaluronique présentes dans le mélange de l'étape b).
14. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 13, caractérisé en ce que l'acide hyaluronique ou un de ses sels est mis en oeuvre dans une teneur comprise entre 0,5 % et 12 % en poids, de préférence entre 1 % et 4 % en poids, par rapport au poids total du mélange obtenu à l'issue de l'étape b).
15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 14, caractérisé en ce que la réticulation est réalisée en présence d'un agent réticulant annexe.
16. Procédé selon l'une quelconque des revendications 10 à 15, caractérisé en ce qu'il met en oeuvre (i) du hyaluronate de sodium, (ii) de la spermine, à titre d'agent réticulant, et (iii) de l'EDC en combinaison avec le HOBt, à titre respectivement d'activateur et d'auxiliaire de couplage.
17. Composition dermatologique injectable et stérile comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un gel d'acide hyaluronique réticulé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 9.
18. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un gel d'acide hyaluronique réticulé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 9
19. Kit comportant : - un conditionnement contenant au moins une dose d'un gel d'acide hyaluronique réticulé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou d'une composition telle que définie en revendication 17 ; et - un dispositif d'injection dans ou à travers la peau ou un dispositif de micro-perforation de la peau, dédié à l'administration de ladite dose.
20. Utilisation d'un gel d'acide hyaluronique réticulé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou d'une composition telle que définie en revendications 17 pour le comblement des défauts du volume de la peau et notamment le comblement des rides.
21. Procédé cosmétique de traitement de la peau, comprenant au moins une étape d'administration, dans ou à travers la peau, d'un gel d'acide hyaluronique réticulé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 ou d'une composition telle que définie en revendication 17.25