FR2981349A1 - Sondes luminescentes pour le marquage biologique et l'imagerie, leur procede de preparation - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne des composés organiques, utilisables comme ligands pour la préparation de complexes de lanthanides ou de certains métaux de transition solubles dans l'eau, un procédé pour leur préparation, ainsi que leur utilisation à titre de sonde fluorescente.

Description

B10046FR 1 La présente invention concerne des composés organiques, utilisables comme ligands pour la préparation de complexes de lanthanides ou de certains métaux de transition solubles dans l'eau, un procédé pour leur préparation, ainsi que leur utilisation à titre de sonde fluorescente.

Les complexes d'ions lanthanides possèdent des propriétés spectroscopiques très particulières qui permettent des applications dans le domaine de la détection par luminescence. Ces complexes possèdent un très large déplacement de Stokes, des raies d'émission très fines, de l'ordre de quelques nm, qui sont caractéristiques de l'ion lanthanide utilisé. Ils peuvent émettre dans le domaine visible ou proche infrarouge, et ils ont un temps de vie de l'état excité extrêmement long, pouvant atteindre la milliseconde. Cette dernière caractéristique est un atout essentiel : elle permet une détection en temps résolu (ce qui permet d'éliminer les signaux de fluorescence parasite) et elle provoque une très forte augmentation de la sensibilité de détection des complexes en microscopie de luminescence ou dans les analyses fluoroimmunologiques. Les complexes luminescents d'ions lanthanides ont par conséquent des applications dans la plupart des domaines de la fluorescence conventionnelle. Cependant, les complexes d'ions lanthanides sont généralement difficiles à obtenir. De nombreuses propriétés du complexe dépendent de la structure du ligand et de l'ion lanthanide, notamment l'efficacité d'excitation du complexe, le degré de stabilité de la complexation des lanthanides en milieu chimique compétitif et en milieu sérique (qui doit être élevé pour éviter le relargage des cations), le rendement quantique de luminescence et la possibilité de former des liaisons covalentes avec le matériel à marquer pour les applications biologiques des complexes. Une excitation adéquate des complexes peut être obtenue lorsque le ligand du complexe comprend des groupements hétéroaromatiques qui ont pour but de capter la lumière et de la transférer à l'ion lanthanide qui va réémettre. Ce phénomène est appelé effet d'antenne. Le choix de ces groupements hétéroaromatiques définit de nombreuses propriétés spectroscopiques du complexe B10046FR 2 final, notamment la gamme spectrale d'excitation et le rendement quantique de luminescence. CN-1811429-A décrit un complexe de Tb3+ et d'un ligand qui a un squelette 2,6-dipyrazolylpyridine dans lequel chacun des groupes pyrazolyle porte un groupement -CH2-N(CH2CO2H)2. Ledit complexe est utile pour la détection de l'oxygène singulet. Il est obtenu par un procédé consistant à fixer le groupe anthracène sur une dibromo-aminopyridine, puis à modifier le groupe pyridyle par réaction des atomes de brome avec les réactifs appropriés pour remplacer chaque Br par un groupe pyrazolyle portant un groupe -CH2-N(CH2CO2H)2..

EP-0 770 610 décrit des complexes d'ion lanthanide dans lesquels le ligand est un squelette 2,6-dipyrazolylpyridine dans lequel chacun des groupes pyrazolyle porte un groupement -CH2-N(CH2CO2H)2. Le procédé de préparation consiste à préparer d'abord un composé 2,6-dipyrazolylpyridine di bromé, puis on le modifie pour obtenir les deux groupes terminaux -CH2-N(CHG2CO2H)2. Ce procédé ne permet pas d'obtenir des composés dans lesquels le groupe pyridyle porte des substituants choisis pour ajuster les propriétés du complexe de lanthanide dans lesquels lesdits composés constituent le ligand. FR-2 935 973 décrit des ligands dérivés de 2,6-dipyrazolylpyridine dans lesquels chacun des groupes pyrazolyle porte un groupement -CH2-N(CHG2CO2R)2 dans lequel chacun des R représente H ou un métal alcalin ou un groupe ammonium quaternaire, les groupes pyrazolyle pouvant en outre porter un ou deux substituants choisis parmi un groupe alkyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, ou bien ces deux substituants forment ensemble un biradical formant un cycle aromatique avec les deux atomes de carbone qui les portent. Ces ligands sont aptes à complexer les ions lanthanide et trouvent des applications pour le marquage et la microscopie biphotonique. Ils présentent cependant une faible solubilité dans l'eau et une grande instabilité en milieu purement aqueux, en milieu salin ou en milieu purement biologique. Le but de la présente invention est de fournir des composés utiles comme 30 ligands pour des complexes de lanthanide ou de métal de transition qui aient une B10046FR 3 solubilité améliorée dans l'eau et dans les milieux biologiques, ainsi qu'une excellente stabilité chimique, de très bonnes propriétés de luminescence et des temps de vie très longs. Ce but est atteint par les composés qui font l'objet de la présente invention et qui vont être décrits ci-après. Un composé selon la présente invention répond à la formule (I) suivante : z (I) dans laquelle : m est un nombre entier variant de 0 à 4 ; - Al représente une fonction -COOR1 dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un cation alcalin ; ou un groupement A2 ; A2 représente un groupement -P(0)0CH2CH3)(0R2) ou -P(0)(0R2) dans lesquels R2 représente un atome d'hydrogène ou cation alcalin ; W1 représente un atome d'hydrogène, un hétéroatome, un atome d'halogène, une fonction solubilisante non coordinante, une chaîne polyéthylèneglycol, ou une fonction apte à changer la délocalisation électronique de l'antenne collectrice de photons ; B10046FR 4 chacun des YI et Y2 représente un atome H, un groupement amino, thiol, ou bien YI et Y2 forment ensemble un biradical formant un ou plusieurs cycles aromatiques ou hétéroaromatiques avec les deux atomes de carbone qui les portent ; B représente un segment de liaison constitué par au moins un groupe choisi parmi -CO-NH-, les groupes peptide contenant de 1 à 4 acides aminés, les groupes alkylène qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée, et les groupes alkynyle qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée ; D représente un atome d'oxygène ou de soufre, une chaîne alkyle linéaire ayant de préférence de 1 à 4 atomes de carbone, un cycloalkane ayant de préférence de 2 à 3 sommets ou un aryle ; Z est : * NH2, un halogène, un phosphate, * un groupe COOR3 dans lequel R3 est H, un cation alcalin, un groupe ammonium quaternaire N(R4)4+ dans lequel R4 est H ou une chaîne alkyle linéaire ayant de préférence de 1 à 4 atomes de carbone, un groupe succinimide -N-(CO-CH2-CH2-CO)- ou un groupe pentafluorophényle -C6F5 ; * une fonction biotine (-00-(CH2)4-05H7N20S), un groupement polyhétéroaromatique ou un éther couronne, * un cluster organique ou inorganique silylé; * un support macroscopique tel que par exemple une bille de silice, une bille de nanolatex ou tout autre support susceptible d'être fonctionnalisé. Selon l'invention, on entend par fonction solubilisante, une fonction capable de solvater une molécule et de la rendre soluble dans l'eau. Parmi de telles fonctions solubilisantes, on peut en particulier citer les groupements carboxylate, phosphonate, sulfonate, N-(phosphonométhyl)glycine (également connu sous la dénomination glyphosate), phosphate, etc...

B10046FR Selon l'invention, on entend par fonction apte à changer la délocalisation électronique de l'antenne collectrice de photons, toute fonction insaturée susceptible d'engendrer une délocalisation électronique importante. Parmi de telles fonctions, on peut en particulier citer les cycles aromatiques, les cycles comportant 5 des hétéroatomes, les liaisons insaturées portant un groupement aryle ou polyaryle, ou toute fonction insaturée. Selon une forme de réalisation préférée de l'invention W1 représente un atome d'hydrogène. Parmi les cations alcalins mentionnés pour RI et R2, on peut en particulier citer K+, Na+ et Li+. Les composés de formule (I) dans lesquels les groupes YI et Y2 représentent ensemble un cycle phényle fusionné, sont particulièrement préférés. Un composé de formule (I) selon la présente invention peut être préparé à partir d'un composé répondant à la formule (II) suivante : dans laquelle R6 est choisi parmi les groupements de formule R6-a ou R6-b suivants : N R' 0 N 0 r ),OR'2 2 r ) OR 2 C 2 ,P P PR1 ii OR' R'20 II ilOR'2 o 0 0 R6-a R6-b B10046FR 6 dans lesquels : - R'l représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en C,-C4 tel que par exemple un radical éthyle ou ter-butyle ; - R'2 représente un radical CI-C4 tel que par exemple un radical éthyle ; - YI et Y2 sont tels que définis pour les composés de formule (I) ci-dessus. Les composés de formule (II) dans lesquels les substituants YI et Y2 forment ensemble un cycle aromatique tel que par exemple un cycle phényle fusionné (désignés ci-après par composés de formule (II')) peuvent être préparés par un procédé comprenant les étapes suivantes : i) dans une première étape on fait réagir du 1,4-dibromonaphtalène (composé 1) avec une source d'acétylène telle que par exemple de l'alcool propargylique pour obtenir un composé 2, ii) dans une deuxième étape, on déprotège le composé 2 issu de l'étape i) en milieu basique à chaud en présence d'une base minérale telle que KOH ou NaOH, 15 pour obtenir un composé 3, iii) dans une troisième étape on effectue le couplage du composé 3 issu de l'étape ii) avec un composé 4 de formule (III) suivante : Br (III) HONIOH en présence d'un catalyseur au palladium, dans un solvant organique sous argon, et 20 d'une base organique soluble, pour obtenir un composé 5 de formule (IV) suivante : B10046FR 7 iv) dans une quatrième étape, on réalise la conversion du composé 5 en composé 6 dibromo en présence de PBr3 en milieu chloroforme en utilisant du bromosuccinimide en présence de triphényle phosphine - v) dans une cinquième étape, on réalise la substitution des deux atomes de brome du cycle pyridine du composé 7 dans un solvant anhydre tel que par exemple l'acétonitrile anhydre, en présence d'une base minérale choisie par exemple parmi K2CO3, Na2CO3 et Cs2CO3 et d'un composé choisi parmi les composés de formule (V) suivante [NH(CH2COOR'1)(CH2P(0)(OR'2)2] et les composés de formule (VI) suivante [NH{CH2P(0)(OR'2)2}2] dans lesquelles R'1 et R'2, indépendamment l'un de l'autre, représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié en C,-C4. Le procédé de préparation d'un composé de formule (II') peut être représenté par le schéma réactionnel 1 suivant, dans lequel les radicaux R'1, R'2, R5 et R6 ont les significations indiquées ci-dessus : B 10046FR [NH(CH2COOR.1)(CH2P(0)(0R.2)21 OU y) [NH{(CH2P(0)(0R.2)2}21 OH 4 6 8 (Iv) Les composés de formule (II) dans lesquels les radicaux YI et Y2 forment ensemble un cycle aromatique autre qu'un groupement phényle peuvent être préparés par un procédé analogue à celui utilisé ci-dessus pour les composés de formule (II'), comprenant les étapes i) à v) ci-dessus, mais en utilisant à la place du 1,4-dibromonaphtalène à l'étape i), un composé bromé correspondant, par exemple du 2,3 -diméthoxy- 1 ,4-dibromobenzène. Un composé de formule (II) dans lequel les substituants YI et Y2 sont des groupes séparés (désigné ci-après par composé de formule (II")) peut être préparé 10 par un procédé similaire à celui décrit ci-dessus pour les composés de formule (II'), B 10046FR 9 comprenant les étapes i) à v) ci-dessus, mais dans lequel on remplace le composé 1 à l'étape i) par un composé 1,4-dibromophényl portant sur le cycle phényle les substituants YI et Y2 souhaités, c'est-à-dire un atome d'hydrogène, ou un groupement amino ou thiol.

Le procédé de préparation des composés de formule (II') peut être représenté par le schéma réactionnel 2 suivant dans lequel les radicaux R'1, R'2, R5 et R6 ont les significations indiquées ci-dessus et YI et Y2 représentent un atome H, ou un groupement amino ou thiol : [NH(CH2COOK1)(CH2P(0)(0K2)21 ou y) [NH{(CH2P(0)(OR2)2}2] OH 4 1' 6' Br Br I) -11111,- ± HO B10046FR 10 Plus particulièrement, le procédé de préparation d'un composé de formule (I) selon l'invention comprend : - une première étape au cours de laquelle le brome d'un composé de formule (II) est remplacé par un groupe B-CH2(D-CH2),,CH2-Z dans lequel D a la même signification que celle indiquée ci-dessus relativement aux composés de formule (I), par réaction avec un réactif approprié, en présence d'un catalyseur organométallique, dans un solvant organique ; - une deuxième étape au cours de laquelle les groupes R'1 et R'2 des groupements R6-a ou R6-b sont respectivement remplacés par des groupes RI et R2, lesdits groupes étant H ou un cation alcalin pour RI ou un cation alcalin pour R2 tel que mentionné précédemment. Le remplacement des groupes R'1 et R'2 du type alkyle linéaire par un cation K+, Na+ ou Li+ peut être effectué avec KOH, NaOH ou LiOH respectivement dans un solvant polaire (par exemple un mélange CH3OH/H20), à une température entre 20 et 100°C, par exemple à 60°C, ou bien en utilisant du bromure de triméthylsilyle dans un solvant tel que le dichlorométhane à température ambiante suivi d'une hydrolyse basique. Le groupe COOK, COONa ou COOLi peut ensuite, si nécessaire, être modifié en groupe acide par réaction avec un acide tel que HC1 dans l'eau.

Le remplacement par H de groupes R'1 ou R'2 du type alkyle ramifié peut être effectué par réaction avec l'acide trifluoroacétique (TFA) dans un solvant organique aprotique. Dans les différentes étapes du procédé de préparation d'un composé de formule (II), le solvant organique peut être THF, Et20, Et3N, DMF, DMSO, le 25 toluène, CH2C12, ou un de leurs mélanges (par exemple un mélange THF/Et3N). Pour la mise en oeuvre de la 1 ère étape du procédé de préparation d'un composé de formule (I), l'atome de brome du composé de formule (II) peut être soumis à des réactions chimiques variées telles que des couplages de Stille, de Heck, de Sonogashira ou de Suzuki, des réactions de carboalkoxylation ou de 30 carboamidation.

B10046FR 11 Le catalyseur organométallique utilisé dans la gère étape est de préférence un complexe de Pd et de triphénylphosphine, par exemple [Pd(PPh3)2C12] ou [Pd(PPh3)4]. La température est comprise de préférence entre 20 et 120°C. Le réactif utilisé pour réagir avec le composé de formule (II) dépend de la nature du groupe B du composé de formule (I). Dans les réactions de carboamidation (respectivement de carboalkoxylation), B représente -CO-NH- (respectivement -CO-O-), le réactif utilisé est une amine de formule Z-CH2-(CH2-D),,-CH2-NH2 (respectivement un alcool de formule Z-CH2-(CH2-D),,-CH2-0H), formules dans lesquelles Z, D et m ont les significations indiquées ci-dessus pour les composés de formule (I), en présence de monoxyde de carbone. Dans les couplages de type Sonogashira, B représente -CC-, le réactif utilisé comprend un groupe acétylénique vrai, H-CC-. Selon une forme de réalisation particulière du procédé de préparation des composés de formule (I), et lorsque le groupe B du substituant B-CH2(D-CH2),,CH2-Z du composé de formule (I) est un groupe -CO-NH-, alors la première étape est de préférence réalisée sous un flux de monoxyde de carbone en présence d'un ester d'aminoalkylate (tel qu'un ester d'aminobutyrate comme l'aminobutyrate d'éthyle) à une température préférentielle de 70°C. Lorsque le groupe B du substituant B-CH2(D-CH2),,CH2-Z du composé de formule (I) est un groupe -CC-, la 1 ère étape du procédé consiste à faire réagir le composé de formule (II) avec un réactif correspondant qui a un groupe terminal HCC-, tel que par exemple l'heptynoate d'éthyle. Dans ce cas, la réaction est de préférence réalisée à une température d'environ 50°C. Le catalyseur organométallique est de préférence un complexe de palladium et de triphénylphosphine, en particulier Pd(PPh3)2C12 en présence de CuI ou [Pd(PPh3)4].

Quelques exemples de ligands, auxquels l'invention n'est cependant pas limitée, sont donnés ci-après à titre purement illustratif. Des ligands similaires peuvent être obtenus en remplaçant Na par l'un des autres groupes RI ou R2 tels que définis précédemment.

B10046FR 12 0 ONa Pzo NacI\ 0-- 1 \ 'r.s," \ 0 0 ONa L'INa 0 ONa r r H3C H3C Pz-0 Na l\ 0-- 1 \ \ 0 0 ONa L'INa 0 ONa r r H3C H3C ONa 0 ONa O NH n O=P 0=P P=0 P'.=0 1 ,1 Na0.. '0 Na0 '0 I \ONa I -ONa 0 0 rrrr H3C H3C H3C H3C O=P 0=P P=0 P=O 1 ,1 Na0.. '0 Na0 '0 I \ONa I -ONa 0 0 rrrr H3C H3C H3C H3C Un complexe de lanthanide ou d'un métal de transition selon l'invention comprend un ion lanthanide ou d'un métal de transition complexé par un ligand de 5 formule (I) tel que défini précédemment. L'ion lanthanide est choisi parmi les ions Gd3+, Lu3+, Eu3+, Tb3+, Dy3+, Sm3+, Er3+, Yb3+, Pr3+ et Nd3+. L'ion d'un métal de B10046FR 13 transition peut être choisi parmi les métaux suivants Cu(II), Co(II), Mn(II ou IV), Ni(II), Fe(III), Pd(II) et Pt(II). Un complexe de lanthanide ou de métal de transition peut être obtenu par mélange de quantités équimoléculaires d'un composé de formule (I) (de préférence sous forme de sel de sodium) avec un sel de lanthanide, respectivement un sel de métal de transition, chauffage du mélange, refroidissement et neutralisation à pH de 6 à 8, puis récupération du complexe à la température ambiante. Le sel de lanthanide peut être un nitrate, un chlorure, un perchlorate ou un triflate Ln(CF3S03)3.

Le sel de métal de transition peut par exemple être un chlorure, acétate, nitrate ou tout autre composé soluble dans l'eau ou les alcools. Dans un mode de réalisation particulier, le composé de formule (I) et le sel de lanthanide ou le sel de métal de transition sont mélangés en quantités équimolaires en solution dans l'eau ou dans un mélange Me0H/eau, la solution est chauffée pendant 2 à 3 heures à 60°C, refroidie à température ambiante puis neutralisée si nécessaire à pH 7 par addition de NaOH, d'un hydroxyde d'ammonium quaternaire ou de HC1 dilué dans l'eau. Les complexes formés sont ensuite isolés par concentration des eaux mères et précipitation dans un mélange H20/Me0H/THF/Et20.

Les complexes selon l'invention ont des applications variées, selon la nature des substituants du groupement pyridyle du ligand. Leurs propriétés optiques de luminescence, les temps de vie de luminescence et les propriétés de brillance sont exceptionnelles avec des rendements quantiques autour de 35% pour le Tb, 16% pour l'Eu et des temps de vie des états excités supérieurs à 3 millisecondes dans la plupart du temps. Dans une configuration préférée de l'invention plusieurs tests de stabilité montrent l'absence de dégradation de la sonde fluorescente. Il a été démontré en particulier qu'aucune perte de luminescence des complexes de terbium et d'europium n'a été observée sur plusieurs jours lorsque ces complexes sont dissous en milieu aqueux à pH neutre ou en milieu salin à des concentration de 10-4 à 10-6 M. Les coûts de production et la purification de ces composés en font des B10046FR 14 candidats potentiels très intéressants pour l'analyse biomédicale et biologique en temps résolu pour quantifier des traces d'analytes en excitant spécifiquement le ligand qui est considéré comme l'antenne collectrice de photons. Les composés conformes à l'invention permettent d'accommoder l'ensemble des lanthanides et les propriétés d'absorption des ligands sont modulables en fonction de la décoration apportée par ledit ligand. En particulier, les complexes de l'invention sont utiles pour le marquage de composés qui portent un groupe amine, alcool, thiol, acide carboxylique ou ester activé. Ces composés peuvent être des molécules monomères ou des polymères éventuellement sous forme de billes. Pour cette utilisation, le groupe Z du ligand du complexe est de préférence un groupe -COOH, un groupe COONa, un ester activé de type ester de N-Hydroxysuccinimide ou ester de pentafluorophénol, un Br, un I, ou une amine. Lorsque le ligand d'un complexe luminescent possède un site de reconnaissance électroniquement relié à la structure de complexation du ligand, les propriétés de luminescence du complexe peuvent être perturbées par la présence d'un analyte qui se fixe sur le site de reconnaissance. En couplant électroniquement le site de reconnaissance à la pyridine centrale par des liaisons acétyléniques, l'interaction du site de reconnaissance avec ses substrats induit des perturbations électroniques qui se traduisent par des changements de luminescence des complexes d'ion lanthanide. La spectroscopie et la microscopie d'absorption à deux photons sont des techniques relativement récentes et qui ont pour intérêt, notamment en microscopie, de permettre une amélioration significative de la résolution spatiale en utilisant des photons de basses énergies. La quasi-totalité des marqueurs luminescents étudiés en absorption à deux photons sont des composés organiques fluorescents de type Rhodamine®. Ces composés organiques présentent de très faibles déplacements de Stokes et des bandes d'émission larges (correspondant à une largeur à mi-hauteur supérieure à 50 nm). Les complexes luminescents d'ions lanthanides selon la présente invention présentent des déplacements de Stokes très élevés et des bandes B10046FR 15 d'émission étroites. Ils constituent par conséquent des composés particulièrement intéressants pour le marquage et la microscopie biphotonique et des travaux très récents ont démontrés cette possibilité sur des complexes d'Eu et de Tb. [Cf. notamment a) Law, G.L.; et al. I Ain. Chem. Soc. 2008, 130, 3714 ; b) Picot, A.; et al., I Ain. Chem. Soc. 2008, 130, 1532.]. Les complexes de l'invention dans lesquels le groupe B du ligand du complexe est une fonction amide ou un groupe CC, et le groupe Z terminal comporte une fonction acide terminale susceptible d'être transformée en ester activé peuvent être utilisés comme marqueur luminescent pour l'absorption à deux photons.

Les complexes de l'invention dans lesquels le groupe terminal Z du ligand est un groupe biotine sont utiles pour la reconnaissance de l'avidine, de la streptavidine et de la neuravidine. La présente invention est illustrée par les exemples suivants, auxquels elle n'est cependant pas limitée.

Exemple 1 Synthèse des composés de formule (I-1) et (I-2) 1) Première étape : Synthèse du composé 2 A une solution dégazée de 2,000 g de 1,4-dibromonaphtalène (composé 1 obtenu de source commerciale) (6,99 mmol) dans 60 mL de tetrahydrofuran (THF) contenant 10 mL de diisopropylamine, on a ajouté 0,588 g d'alcool propargylique (6,99 mmol), 0,490 g de [Pd(PPh3)2C12] (0,699 mmol), puis 0,133 g de CuI (0,699 mmol). La solution résultante a été chauffée sous agitation à 50°C durant 2 jours. Après traitement aqueux et extraction, le produit a été purifié par colonne de chromatographie sur silice flash en utilisant un gradient d'éther de pétrole dans du dichlorométhane de 50% à 0%. Le composé 2 attendu a été obtenu sous la forme d'un solide blanc avec un rendement de 27%. RMN lil (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,25 (m, 2 H) ; 7,72 (d, 3J = 7,7 Hz, 1 H) ; 7,64 (m, 2H) ; 7,47 (d, 3J = 7,7 Hz, 1 H) ;1,73 (s, 6 H). SM-ESI : 290,0 (98), 288,0 (100) B10046FR 16 Analyse élémentaire pour Cuil13BrO : C H Calculé 62,30 4,53 Trouvé 62,11 4,25 2) Deuxième étape : Synthèse du composé 3 A une solution de 0,500 g du composé 2 (1,73 mmol) dans 20 mL d'un mélange THF/H20 (15 mL/5mL), on a ajouté une solution aqueuse de KOH 5 (0,484 g, 8,64 mmol) dans 5 mL d'eau. Après une agitation pendant une heure, le composé a été extrait avec du dichlorométhane et la phase organique lavée avec une solution aqueuse de NH4C1 saturée. Le composé a été purifié par chromatographie sur silice flash en utilisant un gradient d'éther de pétrole dans du dichlorométhane de 50% à 0%. Le composé 3 attendu a été obtenu sous la forme 10 d'un solide blanc avec un rendement de 95%. RMN lil (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,27 (m, 2 H) ; 7,77 (d, 3J = 7,7 Hz, 1 H) ; 7,71 (m, 2H) ; 7,50 (d, 3J = 7,7 Hz, 1 H) ; 3,24 (s, 1 H). SM-ESI : 232,0 (98), 230,0 (100) Analyse élémentaire pour C12H7Br : C H Calculé 62,37 3,05 Trouvé 62,21 2,89 15 3) Troisième étape : Synthèse du composé 5 A une solution dégazée de 0,329 g du composé 4 (1,51 mmol) préparé selon le procédé décrit par A. M. Raitsimring et al (J. Am. Chem. Soc. 2007, 129, 14138) dans un mélange THF/triéthylamine (20 mL/7 mL), on a ajouté 0,349 g du composé 3 obtenu ci-dessus à l'étape 2) (1,51 mmol), ainsi que 0,174 g de 20 [Pd(PPh3)4] (0,151 mmol). Cette solution a été chauffée à 60°C pendant 20 heures. Le solvant a été évaporé avec un évaporateur et extrait avec du dichlorométhane. La purification a été réalisée par chromatographie flash sur silice en utilisant un B10046FR 17 gradient de méthanol dans du dichlorométhane de 2 à 20%. Le composé 5 attendu a été obtenu avec un rendement de 67%. RMN lil (300 MHz, CDC13) ô (ppm) : 8,36 (m, 2H) ; 7,71 (s, 2H) ; 7,66 (m, 2H) ; 7,43 (s, 2H) ; 4,84 (s, 4H) ; 1,68 (m, 2H).

SM-ESI : 369,0 (98), 367,0 (100) Analyse élémentaire pour CI9E114NO2Br : C H N Calculé 61,97 3,83 3,80 Trouvé 61,69 3,64 3,51 4) Quatrième étape : Synthèse du composé 6 A une solution de 0,300 g du composé 5 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,815 mmol) dans 20 mL de chloroforme, on a ajouté 0,661 g de PBr3 (2,44 mmol) et on a agité la solution à température ambiante durant 1 heure. On a ensuite ajouté 0,330 g de PBr3 (1,22 mmol) et on a chauffé au reflux durant 1 heure. La conversion totale du composé 5 en composé 6 a été contrôlée par chromatographie en couche mince (CCM). Après refroidissement, le milieu réactionnel a été versé précautionneusement dans une solution aqueuse de NaC1 à 0°C. Le solvant a été évaporé avec un évaporateur et le résidu a été extrait avec du dichlorométhane. La purification a été réalisée par chromatographie flash sur silice en utilisant un gradient d'éther de pétrole dans du dichlorométhane de 70 à 50%. Le composé attendu 6 a été obtenu avec un rendement de 78%. RMN lil (300 MHz, CDC13) ô (ppm) : 8,35 (m, 2H) ; 7,72 (s, 2H) ; 7,67 (m, 2H) ; 7,57 (s, 2H) ; 4,57 (s, 4H). SM-ESI : 495,0 (98), 493,0 (100) Analyse élémentaire pour CI9H12NBr3 : C H N Calculé 46,19 2,45 2,84 Trouvé 45,83 2,24 2,63 B10046FR 18 5) Cinquième étape : Synthèse des composés 7 et 8 8 7 EtO0C-\ N (EtO)2(0)P-' /-P(0)(0Et)2 N \-P(0)(0a)2 (Et0)2(0)P-\N /-COOEt N (Et0)2(0)P-/ "-P(0)(OEt)2 Synthèse du composé 7 A une solution de 150,0 mg du composé 6 obtenu ci-dessus à l'étape 5 précédente (0,304 mmol) dans 20 mL d'acétonitrile anhydre, on a ajouté 192,5 mg (0,760 mmol) de dérivé de glyphosate de formule NH[{CH2PO(OEt)2}(CH2COOEt)] (préparé selon la référence S. Aime et al., Chem. Eur. J. 2006, 6, 2609-2617) et 209,8 mg de K2CO3 (1,520 mmol). La solution résultante a été chauffée sous agitation à 60°C pendant 36 heures sous 10 argon. Le produit a été purifié par colonne de chromatographie sur silice en utilisant un mélange de solvants (de 0/10 à 2/8 (v/v) Me0H/CH2C12). On a obtenu le composé 7 attendu sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 70%. RMN lil (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,38 (m, 2H) ; 7,74 (s, 2H) ; 7,69 (m, 2H) ; 7,60 (s, 2H) ; 4,20-4,09 (m, 12H), 4,00 (s, 4H) ; 3,60 (s, 4 H) ; 3,16 (s, 4 H) ; 15 1,34-1,16 (m, 18H). RMN 31P {'H} (CDC13, 161 MHz) : Ô 24,77. SM-ESI : 839,2 (98), 837,2 (100) Analyse élémentaire pour C37H501\13010P2Br : C H N Calculé 52,99 6,01 5,01 Trouvé 52,65 5,71 4,83 B10046FR 19 Synthèse du composé 8. A une solution de 150,0 mg du composé 6 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,304 mmol) dans 20 ml d'acétonitrile anhydre, on a ajouté 241,2 mg (0,760 mmol) de dérivé amino-di(méthylènediéthylphosphite) et 210 mg de K2CO3 anhydre (1,520 mmol). La suspension résultante a été chauffée à 60°C pendant 12 heures sous argon. Le composé a été purifié par chromatographie sur gel de silice en utilisant un mélange de solvants (de 0/10 à 4/6 (v/v) Me0H/CH2C12) et a donné le composé 8 attendu sous forme d'un solide blanc avec un rendement de 72%. RMN lil (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,32 (m, 2H) ; 7,69 (s, 2H) ; 7,65 (m, 2H) ; 7,59 (s, 2H) ; 4,11 - 4,07 (m, 16H) ; 4,02 (s, 4H), 3,16 (s, 4 H) ; 3,12 (s, 4 H) ; 1,25 (t, J = 7,0 Hz, 24 H). RMN 31P{11-1} (CDC13, 161 MHz) : Ô 24,62. SM-ESI 967,1 (98), 965,2 (100). Analyse élémentaire pour C39H6oN3012P4Br : C H N Calculé 48,46 6,26 4,35 Trouvé 48,24 5,87 4,11 6) Sixième étape : Synthèse des précurseurs des composés I-1 et I-2 dont deux exemples sont les composés 9 et 10. EtO0C-\ /-COOEt N N (Et0)2(0)P-/ "-P(0)(OEt)2 10 EtO0C-\ N (Et0)2(0)P-/ 9 0 2 9 8 1 3 4 9 B10046FR Synthèse du composé 9. A une solution de 100,0 mg (0,119 mmol) du composé 7 obtenu ci-dessus à l'étape précédente, dans un mélange toluène (10 ml) / triéthylamine (5 ml), on a ajouté 30,0 mg de chlorhydrate de 4-éthylaminobutyrate (0,179 mmol) et 8,3 mg de 5 Pd(PPh3C12) (0,012 mmol). La solution résultante a été chauffée à 70°C durant 12 heures sous un flux continu de CO à pression atmosphérique. Le composé 9 attendu a été obtenu sous forme d'un solide blanc après purification par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvants comme éluant (de 0/10 à 3/7 Me0H/CH2C12), avec un rendement de 64 %. 10 RMN lil (200 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,34 (m, 2H) ; 7,77 (s, 2H) ; 7,66 (m, 2H) ; 7,58 (s, 2H) ; 4,22 - 4,00 (m, 14H) ; 4,06 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4 H) ; 3,27 (t, J= 7,0 Hz, 2 H) ; 3,16 (s, 4 H) ; 2,31 (t, J= 7,0 Hz, 2 H) ; 1,96 (m, 2 H) ; 1,37 - 1,15 (m, 21 H). RMN 31P{1il} (CDC13, 161 MHz) Ô 24,74. 15 SM-ESI : 916,3 (100). Analyse élémentaire pour C44H62N4013P2 : C H N Calculé 57,63 6,82 6,11 Trouvé 57,45 6,49 5,88 Synthèse du composé 10. A une solution dégazée de 100,0 mg (0,119 mmol) du composé 7 tel que préparé ci-dessus à l'étape précédente dans un mélange de 6 ml de THF et de 2 ml 20 de triéthylamine, on a successivement ajouté 7,7 mg de Pd(PPh3C12) (0,011 mmol), 2,1 mg de CuI (0,011 mmol) ainsi que 27,6 mg d'éthyle-hept-6-ynoate (0,179 mmol). La solution obtenue a été chauffée à 50°C durant une nuit. Le produit a été purifié par chromatographie en utilisant un mélange variable de dichlorométhane/méthanol (de 0/10 à 3/7 v/v Me0H/CH2C12) et a fourni le composé 10 attendu sous forme d'un solide de couleur blanche avec un rendement chimique de 72 %.

B10046FR 21 RMN lil (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,37 (m, 2H) ; 7,75 (s, 2H) ; 7,71 (m, 2H) ; 7,59 (s, 2H) ; 4,18-4,11 (m, 14H) ; 4,05 (s, 4H) ; 3,55 (s, 4 H) ; 3,17 (s, 4 H) ; 2,15 (m, 4H) ; 1,56 (m, 4H), 1,32-1,11 (m, 21H). RMN 31P{11-1} (CDC13, 161 MHz) : Ô 24,89.

SM-ESI 911,3 (100). Analyse élémentaire pour C46H63N3012P2 C H N Calculé 60,58 6,96 4,61 Trouvé 60,41 6,61 4,43 7) Septième étape : Synthèse des composés I-1 et I-2. Synthèse du composé I-1. A une solution de 0,050 g du composé 9 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,055 mmol) dans un mélange de THF (5 ml) et de méthanol (10 ml) on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (11,3 mg, 0,284 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit. L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé I-1 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une solution concentrée de méthanol. On a obtenu le composé de formule I-1 attendu avec un rendement de 60%. RMN lil (200 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,33 (m, 2H) ; 7,75 (s, 2H) ; 7,66 (m, 2H) ; 7,56 (s, 2H) ; 4,17 (q J = 7,0 Hz, 4 H) ; 4,06 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4 H) ; 3,27 (t, J = 7,0 Hz, 2 H) ; 3,16 (s, 4 H) ; 2,31 (t, J = 7,0 Hz, 2 H) ; 1,96 (m, 2 H) ; 1.18 (t, J = 7,0 Hz, 6 H). RMN 31P{1il} (CDC13, 161 MHz) : Ô 28,56 SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 777,2 (100), 389,1 (35, doublement chargé) B10046FR 22 Analyse élémentaire pour C34H37N4013P2Na5 + H2O C H N Calculé 45,14 4,35 6,19 Trouvé 44,93 4,08 5,76 Synthèse du composé I-2. A une solution de 0,050 g du composé 10 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,055 mmol) dans un mélange de tétrahydrofurane (4 ml) et de 5 méthanol (8 ml) on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (11,3 mg , 0,283 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit. L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé I-2 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une 10 solution concentrée de méthanol. On a obtenu le compose I-2 attendu avec un rendement de 64%. RMN 1H (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,34 (m, 2H) ; 7,73 (s, 2H) ; 7,68 (m, 2H) ; 7,57 (s, 2H) ; 4,14 (q, J = 7,0 Hz, 4 H) ; 4,07 (s, 4H) ; 3,57 (s, 4 H) ; 3,19 (s, 4 H) ; 2,19 (m, 4H) ; 1,58 (m, 4H), 1,17 (m, 6H). 15 RMN 31P {1H} (CDC13, 161 MHz) : Ô 28,73 SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 772,2 (100), 386,6 (20, doublement chargé) Analyse élémentaire pour C36H38N3012P2Na5 + H2O C H N Calculé 48,06 4,48 4,67 Trouvé 47,81 4,23 4,43 B10046FR 23 Exemple 2 Synthèse de composés de formule I-3 et I-4 1) Première étape : Synthèse des précurseurs des composés I-3 et I-4 dont deux exemples sont les composés 11 et 12. 0 tO NH (EtO)2(0)P-\ N (Et0)2(0)P-/ (EtO)2(0)P-\ N (EtO)2(0)P-1 ,-P(0)(OEt)2 N N "-P(0)(OEt)2 Synthèse du composé 11. A une solution de 100,0 mg (0,103 mmol) de composé 8 obtenu ci-dessus à l'étape 5 de l'exemple 1, dans un mélange toluène (10 ml) / triéthylamine (5 ml), on a ajouté 26,0 mg de chlorhydrate de 4-éthylaminobutyrate (0,155 mmol) et 7,2 mg de Pd(PPh3C12) (0,010 mmol). La solution résultante a été chauffée à 70°C durant 12 heures sous un flux continu de CO à pression atmosphérique. Le composé 11 attendu a été obtenu avec un rendement de 74 % sous forme d'un solide blanc après purification par chromatographie sur gel de silice avec un mélange de solvants comme éluant (de 0/10 à 3/7 Me0H/CH2C12).

RMN lil (200 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,30 (m, 2H) ; 7,74 (s, 2H) ; 7,60 (m, 2H) ; 7,54 (s, 2H) ; 4,22 - 4,00 (m, 18H) ; 4,05 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4 H) ; 3,27 (t, J = 7,0 Hz, 2 H) ; 3,16 (s, 4 H) ; 2,31 (t, J = 7,0 Hz, 2 H) ; 1,96 (m, 2 H) ; 1,37 - 1,15 (m, 27 H).

B10046FR 24 RMN 31P {1H} (CDC13, 161 MHz) Ô 24,56. SM-ESI : 1045,0 (100). Analyse élémentaire pour C46H72N4015P4 : C H N Calculé 52,87 6,94 5,36 Trouvé 52,72 6,71 5,09 Synthèse du composé 12.

A une solution dégazée de 100,0 mg (0,119 mmol) du composé 8 tel que préparé ci-dessus à l'étape 5) de l'exemple 1, dans un mélange de 6 ml de tetrahydrofurane et de 2 ml de triéthylamine, on a successivement ajouté 7,7 mg de Pd(PPh3C12) (0,011 mmol), 2,1 mg de CuI (0,011 mmol) ainsi que 27,6 mg d'éthyle-hept-6-ynoate (0,179 mmol). La solution obtenue a été chauffée à 50°C durant une nuit. Le produit a été purifié par chromatographie en utilisant un mélange variable de dichlorométhane/méthanol (de 0/10 à 3/7 v/v Me0H/CH2C12) et a fourni le composé 12 attendu sous forme d'un solide de couleur blanche avec un rendement chimique de 78 %. RMN 1H (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,33 (m, 2H) ; 7,73 (s, 2H) ; 7,64 (m, 2H) ; 7,60 (s, 2H) ; 4,11 - 4,07 (m, 18H) ; 4,02 (s, 4H), 3,16 (s, 4 H) ; 3,12 (s, 4 H) ; 2,15 (m, 4H) ; 1,55 (m, 4H), 1,25 (m, 27 H). RMN 31P {1H} (CDC13, 161 MHz) : Ô 24,75. SM-ESI 1039,3 (100). Analyse élémentaire pour C48H73N3014P4: C H N Calculé 55,43 7,07 4,04 Trouvé 55,29 6,72 3,82 2) Deuxième étape : Synthèse des composés I-3 et I-4. Synthèse du composé I-3. A une solution de 0,060 g du composé 11 (0,057 mmol) tel que préparé ci- dessus à l'étape précédente, dans un mélange de tetrahydrofurane (5 ml) et de méthanol (10 ml), on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (11,9 mg, B10046FR 25 0,298 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit. L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé I-3 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une solution concentrée de méthanol. On a obtenu le composé I-3 attendu avec un rendement de 66 %. 7,72 (s, 2H) ; 7,64 (m, RMN lil (200 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,30 (m, 2H) ; 2H) ; 7,54 (s, 2H) ; 4,14 (q, J = 7,0 Hz, 8 H) ; 4,06 (s, 4H) ; 3,66 (s, 4 H) ; 3,27 (t, J= 7,0 Hz, 2 H) ; 3,16 (s, 4 H) ; 2,31 (t, J= 7,0 Hz, 2 H) ; 1,96 (m, 2 H) ; 1,18 (t, J = 7,0 Hz, 12 H). RMN 31P {'H} (CDC13, 161 MHz) : Ô 28,54 SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 905,2 (100), 453,1 (25, doublement chargé) Analyse élémentaire pour C36H47N4015P4Na5 + 2H20 C H N Calculé 41,15 4,89 5,33 Trouvé 40,81 4,62 5,03 Synthèse du composé I-4. A une solution de 0,060 g du composé 12 obtenu ci-dessus à l'étape précédente (0,058 mmol), dans un mélange de tetrahydrofurane (4 ml) et de méthanol (8 ml), on a ajouté 1 ml d'une solution aqueuse de soude (12,0 mg, 0,300 mmol). La solution a été agitée à température ambiante durant une nuit.

L'addition lente de diéthyléther a provoqué la précipitation du composé I-4 désiré. Ce précipité blanc a été centrifugé à 6000 tours par minute, lavé avec de l'éther. Le composé résultant a été recristallisé deux fois par diffusion d'éther dans une solution concentrée de méthanol. On a obtenu le composé I-4 attendu avec un rendement de 64 %.

RMN lil (300 MHz, CDC13) Ô (ppm) : 8,38 (m, 2H) ; 7,77 (s, 2H) ; 7,72 (m, 2H) ; 7,62 (s, 2H) ; 4,10 (q J = 7,0 Hz, 8 H) ; 4,04 (s, 4H) ; 3,64 (s, 4 H) ; 3,21 (s, 4 H) ; 2,21 (m, 4H) ; 1,62 (m, 4H), 1,21 (m, 12 H).

B10046FR 26 RMN 31P {1H} (CDC13, 161 MHz) : Ô 28,48 SM-ESI (eau + acide trifluorométhanesulfonique 1%) : 900,2 (100), 450,5 (30, doublement chargé). Analyse élémentaire pour C38H48N3O14P4Na5 + 2H20 C H N Calculé 43,65 5,01 4,02 Trouvé 43,43 4,76 3,875

Claims (16)

1. REVENDICATIONS1. Composé de formule (I) suivante : z dans laquelle : m est un nombre entier variant de 0 à 4 ; Al représente une fonction -COOR1 dans laquelle R1 est un atome d'hydrogène ou un cation alcalin ; ou un groupement A2 ; A2 représente un groupement -P(0)0CH2CH3)(0R2) ou -P(0)(0R2) dans lesquels R2 représente un atome d'hydrogène ou cation alcalin ; - W1 représente un atome d'hydrogène, un hétéroatome, un atome d'halogène, une fonction solubilisante non coordinante, une chaîne polyéthylèneglycol, ou une fonction apte à changer la délocalisation électronique de l'antenne collectrice de photons ; chacun des Y1 et Y2 représente un atome H, un groupement amino, thiol, ou bien Y1 et Y2 forment ensemble un biradical formant un ou plusieurs cycles aromatiques ou hétéroaromatiques avec les deux atomes de carbone qui les portent ;B10046FR 28 B représente un segment de liaison constitué par au moins un groupe choisi parmi -CO-NH-, les groupes peptide contenant de 1 à 4 acides aminés, les groupes alkylène qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée, et les groupes alkynyle qui ont de 2 à 10 atomes de carbone et qui comprennent éventuellement au moins un hétéroatome dans la chaîne carbonée ; D représente un atome d'oxygène ou de soufre, une chaîne alkyle linéaire, un cycloalkane ou un aryle ; Z est : 10 * NH2, un halogène, un phosphate, * un groupe COOR3 dans lequel R3 est H, un cation alcalin, un groupe ammonium quaternaire N(R4)4+ dans lequel R4 est H ou une chaîne alkyle linéaire, un groupe succinimide -N-(CO-CH2-CH2-00)- ou un groupe pentafluorophényle -C6F5 ; 15 * une fonction biotine (-00-(CH2)4-05H7N20S), un groupement polyhétéroaromatique ou un éther couronne, * un cluster organique ou inorganique silylé; * un support macroscopique.
2. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que W1 20 représente un atome d'hydrogène.
3. 3. Composé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que RI et R2 sont choisis parmi K+, Na+ et Li+.
4. 4. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les groupes YI et Y2 représentent ensemble un cycle phényle 25 fusionné.
5. 5. Composé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il répond à l'une des formules (I-1) à (I-4) suivantes : ^ ^ ^B10046FR 29 0 ONa O NH Pzo Pz-0 NacI\ 0-- 1 \ 'r.s," \ Na l\ 0-- 1 \ \ 0 0 ONa L'INa 0 ONa 0 0 ONa L'INa 0 ONa r r r r H3C H3C H3C H3C ONa 0 ONa O NH n O=P 0=P P=0 P'.=0 1 ,1 Na0.. '0 Na0 '0 I \ONa I -ONa 0 0 rrrr H3C H3C H3C H3C 0=P 0=P P=0 P=0 1 ,1 Na0.. '0 Na0 '0 I \ONa I -ONa 0 0 rrrr H3C H3C H3C H3C
6. 6. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) tel que défini à l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes : - une première étape au cours de laquelle le brome d'un composé de formule (II) suivante :B10046FR 30 dans laquelle R6 est choisi parmi les groupements de formule R6-a ou R6-b suivants : N N r ) oR.2 2 ,....0 P.,.... 2 R' 0 r ) () \0R1 oll OR' OR 2 R6-a =) P R'20-) 101 II0OR'2 R6-b dans lesquels : - R'l représente un radical alkyle linéaire ou ramifié en CI-C4 ; - R'2 représente un radical CI-C4 ; - YI et Y2 sont tels que définis à la revendication 1 pour les composés de formule (I) ; est remplacé par un groupe B-CH2(D-CH2),,CH2-Z dans lequel D a la même signification que celle indiquée ci-dessus relativement aux composés de formule (I), par réaction avec un réactif approprié, en présence d'un catalyseur organométallique, dans un solvant organique ; - une deuxième étape au cours de laquelle les groupes R'1 et R'2 sont 15 respectivement remplacés par des groupes RI et R2, lesdits groupes étant H ou un cation alcalin pour RI ou un cation alcalin pour R2.
7. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le remplacement des groupes R'l et R'2 du type alkyle linéaire par un cation K+, Na+B10046FR 31 ou Li+ est effectué avec KOH, NaOH ou LiOH respectivement dans un solvant polaire, à une température entre 20 et 100°C, ou bien en utilisant du bromure de triméthylsilyle dans un solvant à température ambiante suivi d'une hydrolyse basique.
8. 8. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le remplacement par H de groupes R'1 ou R'2 du type alkyle ramifié est effectué par réaction avec l'acide trifluoroacétique dans un solvant organique aprotique.
9. 9. Procédé selon la revendication 6, pour la préparation d'un composé de formule (I) dans lequel B représente -CO-NH- ou -CO-O-, caractérisé en ce que le réactif utilisé lors de la première étape est une amine de formule Z-CH2-(CH2-D),,-CH2-NH2 ou un alcool de formule Z-CH2-(CH2-D),,-CH2-0H, formules dans lesquelles Z, D et m ont les significations indiquées à la revendication 1 pour les composés de formule (I), en présence de monoxyde de carbone.
10. 10. Procédé selon la revendication 6, pour la préparation d'un composé de formule (I) dans lequel B représente -CC-, caractérisé en ce que le réactif utilisé pour la réaction avec le composé de formule (II) porte un groupe terminal HCC-, et la réaction est réalisée à une température de 50°C en présence d'un complexe de palladium et de triphénylphosphine
11. 11. Complexe de lanthanide ou d'un métal de transition, caractérisé en ce qu'il comprend un ion lanthanide ou d'un métal de transition complexé par un ligand de formule (I) tel que défini à l'une quelconque des revendications 1 à 5.
12. 12. Complexe selon la revendication 11, caractérisé en ce que l'ion lanthanide est choisi parmi les ions Gd3+, Lu3+, Eu3+, Tb3+, Dy3+, Sm3+, Er3+, Yb3+, Pr3+ et Nd3+.
13. 13. Complexe selon la revendication 11, caractérisé en ce que l'ion d'un métal de transition est choisi parmi Cu(II), Co(II), Mn(II ou IV), Ni(II), Fe(III), Pd(II) et Pt(II).
14. 14. Utilisation d'un complexe tel que défini à l'une quelconque des 30 revendications 11 à 13 dans lequel le groupe Z du ligand du complexe est unB10046FR 32 groupe -COOH, un groupe COONa, un ester activé de type ester de N-hydroxysuccinimide ou ester de pentafluorophénol, un Br, un I, ou une amine, pour le marquage de composés qui portent un groupe amine, alcool, thiol, acide carboxylique ou ester activé.
15. 15. Utilisation d'un complexe tel que défini à l'une quelconque des revendications 11 à 13 dans lequel le groupe B du ligand du complexe est une fonction amide ou un groupe CC, et le groupe terminal Z comporte une fonction acide terminale susceptible d'être transformée en ester activé, comme marqueur luminescent pour l'absorption à deux photons.
16. 16. Utilisation d'un complexe tel que défini à l'une quelconque des revendications 11 à 13 dans lequel le groupe terminal Z du ligand est un groupe biotine, pour la reconnaissance de l'avidine, de la streptavidine et de la neuravidine.